JPH04299994A - 光学活性１，４−ジヒドロピリジン化合物の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、光学活性１，４−ジヒ
ドロピリジン化合物の製造法に関し、さらに詳しくは医
薬として極めて有用な光学活性１，４−ジヒドロピリジ
ン化合物の製造法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】１，４−ジヒドロピリジン系化合物のジ
ヒドロピリジン環の３位と５位に結合した２つのカルボ
ン酸エステルが互いに異なるものはその４位に不斉炭素
を持っており、２種の光学異性体が存在する。最近、こ
の系統の化合物の生物学的性質が詳細に検討された結果
、それぞれの光学異性体間に薬理活性、体内動態、安全
性などに差のあることが報告されてきている。このよう
な不斉炭素を有する化合物を医薬品として使用する場合
、生体に対して余計な負荷を与えないという意味から、
医薬品として好ましい一方の異性体のみを生体に与える
という考え方が一般的になりつつある。

【０００３】従来、様々な光学活性１，４−ジヒドロピ
リジン化合物の製造法が報告されているが、これらは次
の２種の方法に大別される。すなわち、光学活性な化合
物と塩を形成させたのち分別結晶化により光学分割する
方法、および不斉炭素を持つ化合物を結合させてジアス
テレオマーに誘導しこれを分離するという方法である。 しかしながら、分別結晶化による光学分割は、シンコニ
ジン、シンコニンなどの高価な分割剤を使用しなければ
ならず、加えて数回の結晶化を要するなど操作が頻雑な
ため、目的物の収率低下を招くなどの欠点を有している
［特開昭６３−１８５９６０号公報、特開昭６４−５２
７５７号公報、特開平１−２５４６６１号公報、Ｃｈｅ
ｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，第２８巻，第２８０９頁
（１９８０年）など］。また、ジアステレオマーに誘導
して分離するという方法は、高価な光学活性化合物を原
料としたり、反応行程が長く複雑であったりするなどの
欠点を有している（特開昭６１−４３１８７号公報、特
開平２−１１５９２号公報など）。いずれの方法を採る
にしても、頻雑な操作を経て、しかも所望の光学異性体
は最大で５０％の収率でしか得られない。

【０００４】２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェ
ニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボ
ン酸　　３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステ
ル　　５−（３−ニトロオキシプロピル）エステル（以
下、化合物Ａと称することがある。）およびその塩は、
特開平２−２２３５８０号公報にそのラセミ体の製造法
とカルシウム拮抗剤としての薬理作用が開示されている
。化合物Ａは、選択的冠血管拡張作用があり、かつ薬効
の持続性において優れ、さらにｃ−ＧＭＰ増加作用を併
せ持つことから、虚血性心疾患や高血圧症などの予防お
よび治療薬として期待されている。また、その構造上、
化合物Ａに光学異性体が存在し、その一方の異性体のみ
が医薬品として好ましいことは予想されることである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、化合
物Ａの医薬品として好ましい光学異性体のみを特異的に
製造する方法を提供することにある。

【０００６】

【問題を解決するための手段】本発明者らは、光学活性
な化合物Ａの製造に際し、酵素を用いる方法を鋭意研究
した。その結果、その製造過程において、容易に製造で
きる化合物を原料とし、アスペルギルス属に属する微生
物が産生する酵素が好ましい旋光度を示す化合物Ａを高
収率で、しかも高い光学純度で与えることを見いだし本
発明を完成した。

【０００７】すなわち、本発明は、２，６−ジメチル−
４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジ
ン−３，５−ジカルボン酸　　ビス（２−ニコチノイル
アミノエチル）エステルまたはその塩に、３−ニトロオ
キシプロピルアルコール存在下、２，６−ジメチル−４
−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロビリジン
−３，５−ジカルボン酸　　ビス（２−ニコチノイルア
ミノエチル）エステルまたはその塩の３位および５位に
結合したカルボン酸エステルの一方を不斉エステル交換
する能力を有する酵素を作用させ、（−）−２，６−ジ
メチル−４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒド
ロピリジン−３，５−ジカルボン酸　　３−（２−ニコ
チノイルアミノエチル）エステル　　５−（３−ニトロ
オキシプロピル）エステルを回収することを特徴とする
光学活性（−）−２，６−ギメツル−４−（３−ニトロ
フェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカ
ルボン酸３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステ
ル　　５−（３−ニトロオキシプロピル）エステルの製
造法である。

【０００８】本発明において塩とは、塩酸塩、硫酸塩、
硝酸塩などの鉱酸のほか、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、
酪酸、パラトルエンスルホン酸などの有機酸である。ま
た、本発明で使用される酵素とは、アスペルギルス属に
属する微生物の生産する酵素で本発明の目的を達し得る
ものであればどのようなものでもよく、特に限定される
ものではない。

【０００９】これらの微生物起源の酵素の中には市販の
ものがあり、容易に入手することができる。市販の酵素
の具体例としては、たとえば、アスペルギルス属（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｍｅｌｌｅｕｓ）由来の酵素；
プロテアーゼＰ「アマノ」、セアプローゼ「アマノ」、
アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐ．）由
来の酵素；アシラーゼ「アマノ１５０００、デアミザイ
ム（登録商標）「アマノ」（以上、天野製薬社製）など
が挙げられる。

【００１０】次に、本発明の酵素反応を説明するが、基
本的には用いる酵素の至適条件にあわせてそれぞれ設定
するものであり、ここでは一般的な反応条件について説
明する。本発明の製造法は、上記微生物を培養した培養
液、培養液から分離した菌体、酵素を含有する培養濾液
または各種酵素分離法によって菌体もしくは培養濾液か
ら分離した粗製酵素あるいはさらに精製した精製酵素と
２，６−ジメチル−４−−（３−ニトロフェニル）−１
，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸ビス（
２−ニコチノイルアミノエチル）エステルまたはその塩
を３−ニトロオキシプロピルアルコールを含む水溶液中
で、攪拌または振とうすることにより行われる。

【００１１】本発明の製造法では、３−ニトロオキシプ
ロピルアルコールの反応液中の濃度が目的物の生成量に
最も大きな影響を与える。すなわち、３−ニトロオキシ
プロピルアルコールの反応液中の濃度が低い場合には、
不斉加水分解された（−）−，６−ジメチル−４−（３
−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，
５−ジカルボン酸　　３−（２−ニコチノイルアミノエ
チル）エステルの生成量が多い。３−ニトロオキシプロ
ピルアルコールの濃度を高くするに従い、不斉エステル
交換反応が主として進行するが、高すぎる場合には、不
斉エステル交換反応、加水分解反応とも阻害される。従
って、最も高い収率で目的物を得るための３−ニトロオ
キシプロピルアルコールの濃度を設定する必要がある。 最も好ましい３−ニトロオキシプロピルアルコールの反
応液中の濃度は２〜８％である。

【００１２】反応液としては、リン酸緩衝液、トリス−
塩酸緩衝液などの緩衝液の使用が、反応液のｐＨを一定
に保つ上で好ましい。緩衝液の濃度は、緩衝液の種類に
よっても異なるが、２Ｍ以下が好ましい。また、緩衝液
を使用せずに反応を行うこともでき、この際は水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウムなどの水溶液を用いて、ｐＨ
スタットにより反応液のｐＨをコントロールするのが好
ましい。反応条件は、使用する酵素にあわせて設定すれ
ばよい。たとえばプロテアーゼＰを使用したときの各種
条件は、ｐＨが６．０〜８．０であり、最も好まくはｐ
Ｈ７．０〜７．５である。反応温度は２５〜５０℃で反
応させるが、最も好ましくは３０〜３５℃である。反応
液中の基質の濃度は、反応液に対し、０．０５〜２５重
量％である。使用する酵素の量は、酵素の力価および基
質の量に応じて適宜決定すればよい。反応時間は、ＴＬ
Ｃ分析またはＨＰＬＣ分析などにより反応の進行状況を
確かめながら設定すればよい。反応終了後、反応液を１
規定リン酸の添加でｐＨ５．０に合わせ、酢酸エチルな
どの有機溶媒で抽出し、必要に応じてカラムクロマトグ
ラフィーなどで精製し目的物を単離することができる。

【００１３】

【発明の効果】本発明により、簡便で高収率、しかも高
い光学純度で光学活性（左旋性）な化合物Ａを供給する
ことができる。特に、本発明方法では使用する原料（プ
ロキラルな化合物）と生成物が１：１の収支関係にあり
、従来の光学分割法の様に所望の光学異性体の収率が最
大で５０％という欠点を有しないことが特長である。 さらに、本発明方法は穏和な条件で反応が進行すること
から特別な反応装置を要しないこと、また高価な分割剤
を必要としないこと、また反応後の廃液の処理が容易な
ことなど従来法に較べて極めて有利な利点を有する。こ
こで得られる光学活性な化合物Ａは、医薬品として好ま
しい異性体（左旋性）である。左旋性の化合物Ａはラセ
ミ体および右旋性の化合物Ａに比べ、カルシウムチャン
ネル結合能、冠血流増加作用、心拍数抑制作用、および
降圧作用の試験において格段にその作用が優れている。 従って、本発明によって製造される左旋性の化合物Ａは
、強心症、高血圧等の予防および治療薬として極めて有
用である。

【００１４】

【実施例】以下、本発明を実施例によって説明するが、
本発明は実施例のみによって限定されるものではない。

【００１５】なお、反応生成物の確認は、以下に示すＴ
ＬＣ法、およびＨＰＬＣ法により行った。 ＴＬＣ　　；プレート　　シリカゲル６０Ｆ２５４（メ
ルク社製） 展開溶媒；クロロホルム／メタノール／アンモニア水＝
９／１／０．１ ＨＰＬＣ；カラム　　ＯＤＳ　　Ｃ１８（４．６φ×１
５０ｍｍ） 溶離液　　メタノール／水＝１／１ 流速　　　　１ｍｌ／ｍｉｎ 温度　　　　５０℃ 検出　　　　ＵＶ　　２４０ｎｍ

【００１６】また、光学純度は、旋光度の測定、あるい
はキラルカラムを使用するＨＰＬＣ法により決定した。 ＨＰＬＣ分析は以下の条件で行った。 分析条件；カラム　　キラルセルＯＪ（４．６φ×２５
０ｍｍ） （ダイセル化学社製） 溶離液　　ｎ−ヘキサン／エタノール＝８５／１５流速
　　　　０．６ｍｌ／ｍｉｎ 温度　　　　４０℃ 検出　　　　ＵＶ　　３５５ｎｍ

【００１７】実施例 プロテアーゼＰ「アマノ」２．０ｇ、３−ニトロオキシ
プロピルアルコール２・５ｍｌを水４５ｍｌに溶解し、
水５ｍｌに溶解した２，６−ジメチル−４−（３−ニト
ロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジ
カルボン酸ビス（２−ニコチノイルアミノエチル）エス
テル・２塩酸塩２００ｍｇを加えた。この溶液を１規定
水酸化ナトリウム溶液の添加でｐＨ７．５に調整し、３
０℃にて２４時間攪拌した。反応液に１規定燐酸を添加
し、ｐＨを５．０に調整した後、酢酸エチル５０ｍｌで
３回抽出した。有機層を水５０ｍｌで洗浄した後、無水
硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮して得られた残
さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー［シリカゲル
：ワコ−ゲルＣ−２００（和光純薬社製）、溶出液：ク
ロロホルム／メタノール／濃アンモニア水＝５０／１／
０．１］で精製し、（−）−２，６−ジメチル−４−（
３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３
，５−ジカルボン酸　　３−（２−ニコチノイルアミノ
エチル）エステル５−（３−ニトロオキシプロピル）エ
ステル１１８ｍｇ（収率：７１％）を淡黄色泡状物質と
して得た。 ［α］Ｄ２５　　　　−３８．７゜（ｃ＝１．０，エタ
ノール） ＨＰＬＣ法により測定した光学収率は１００％ｅ．ｅ．
であった。

【００１８】実施例２ セアプローゼ「アマノ」５００ｍｇ、３−ニトロオキシ
プロピルアルコール１．２５ｍｌを水２１．２５ｍｌに
溶解し、水２．５ｍｌに溶解した２，６−ジメチル−４
−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン
−３，５−ジカルボン酸　　ビス（２−ニコチノイルア
ミノエチル）エステル・２塩酸塩１００ｍｇを加えた。 この溶液を１規定水酸化ナトリウム水溶液の添加でｐＨ
７．５に調製し３０℃にて２４時間攪拌した。反応液に
１規定燐酸を添加し、ｐＨを５．０に調整した後、酢酸
エチル２０ｍｌで３回抽出した。有機層を水２０ｍｌで
洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃
縮して得られた残さを実施例１と同様の操作により精製
し、（−）−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェ
ニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボ
ン酸　　３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステ
ル　　５−（３−ニトロオキシプロピル）エステル５２
ｍｇ（収率：６３％）を淡黄色泡状物質として得た。 ［α］Ｄ２６　　　　−３８．９゜（ｃ＝１．０，エタ
ノール） ＨＰＬＣ法により測定した光学収率は１００％ｅ．ｅ．
であった。

【００１９】実施例３ アシラーゼ「アマノ」１５０００　　１ｇ、３−ニトロ
オキシプロピルアルコール１．２５ｍｌを水２１．２５
ｍｌに溶解し、水２．５ｍｌに溶解した２，６−ジメチ
ル−４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピ
リジン−３，５−ジカルボン酸　　ビス（２−ニコチノ
イルアミノエチル）エステル・２塩酸塩１００ｍｇを加
えた。この溶液を１規定水酸化ナトリウム溶液の添加で
ｐＨ７．５に調製し、３０℃にて４８時間攪拌した。反
応液を実施例２と同様の操作により精製し、（−）−２
，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−１，４
−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸　　３−（
２−ニコチノイルアミノエチル）エステル５−（３−ニ
トロオキシプロピル）エステル２８ｍｇ（収率：３４％
）を淡黄色泡状物質として得た。 ［α］Ｄ２６　　−３８．０゜（ｃ＝１．０，エタノー
ル） ＨＰＬＣ法により測定した光学収率は１００％ｅ．ｅ．
であった。

【００２０】実施例４ デアミザイム「アマノ」１ｇを用い実施例３と同様に反
応し、（−）−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフ
ェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカル
ボン酸　　３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エス
テル５−（３−ニトロオキシプロピル）エステル１５ｍ
ｇ（収率：１８％）を淡黄色泡状物質として得た。 ［α］Ｄ２６　　−３７．８°（ｃ＝１．０，エタノー
ル） ＨＰＬＣ法により測定した光学収率は１００％ｅ．ｅ．
であった。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　２，６−ジメチル−４−（３−ニトロ
   フェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカ
   ルボン酸　　ビス（２−ニコチノイルアミノエチル）エ
   ステルまたはその塩に、３−ニトロオキシプロピルアル
   コール存在下、２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフ
   ェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカル
   ボン酸　　ビス（２−ニコチノイルアミノエチル）エス
   テルまたはその塩の３位および５位に結合したカルボン
   酸エステルの一方を不斉エステル交換する能力を有する
   酵素を作用させ、（−）−２，６−ジメチル−４−（３
   −ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，
   ５−ジカルボン酸　　３−（２−ニコチノイルアミノエ
   チル）エステル　　５−（３−ニトロオキシプロピル）
   エステルを回収することを特徴とする光学活性（−）−
   ２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−１，
   ４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸　　３−
   （２−ニコチノイルアミノエチル）エステル　　５−（
   ３−ニトロオキシプロピル）エステルの製造法。
2. 【請求項２】　　塩が塩酸塩、硫酸塩または硝酸塩であ
   る請求項１記載の製造法。
3. 【請求項３】　　酵素がアスペルギルス属に属する微生
   物から得られる酵素である請求項１記載の製造法。
4. 【請求項４】　　酵素がアスペルギルス　　メレウスか
   ら得られる酵素である請求項１記載の製造法。