JPH05503206A - ノカルディオプシス株由来の溶菌力のある酵素、その調製および使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ノカルディオプシス株由来の溶菌力のある酵素、その調製および使用 技術分野 本発明は、溶菌力のある酵素調製品、該調製品の製法、該製法に使用するための 微生物培養株、該酵素調製品を含んでなる洗剤および防臭剤並びに該酵素調製品 の使用に関する。

背景技術 特に「体臭」と呼ばれている、成人のヒトの明確な臭いは、微生物がアボクリン の汗と相互作用し合う場合に発生することが見出されている（Ｊ、Ｊ、リーデジ 等、Ｊ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　ＤｅｒｍａｔｏＩｏｇｙ＋　１９８Ｌ７７：４１３ 〜４１６）。多くの出版物において、通常の皮膚の微生物相はミクロコツカス科 、好気性ジフテロイドおよびプロピオン酸細菌の混合物であると提案されている （Ｊ、Ｊ、レージラン等、１９８１およびＪ、　Ｎ、　ラボース等、Ｊ、　Ｓａ ｃ、　Ｃｏ５Ｉｌｅｔ、　Ｃｈｅｗ、１９Ｂ２．３４：１９３−２０２）。類ジ フテリアは、明確な刺激性臭いを選択的に発生させる原因であり、一方ミクロコ ンカス科は汗の酸の臭いの発生の原因である。衣類における体臭の問題は、その 関心が増大している。何故なら、幾つかの合成樹脂から造られた衣類は臭いを保 持するからであり、更に人気が増大している運動により、汗がしみ通った多くの 衣類がもたらされるからである。

洗剤産業は、衣類を新鮮な香りに保つため更に布地の不愉快な臭を隠すため香料 を用いてきた。また「デオパフユーム（ｄ　ｅ　ｏ　ｐ　ｅｒｆｕｍｅｓ）：脱 香料」が、臭いと反応し次いで臭いが蒸発し鼻に達するのを防止するため、（例 えば、サーフ（Ｓｕｒｆ）（登録商標）に）導入されている。しかし、臭い発生 の原因、すなわち衣類の中の微生物は除去されていない。

上記の臭い発生の微生物に加えて、洗剤製造者はまた、洗たく場で見出される微 生物、例えばブソイ　′モ　ス　オイルギノザ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｕ ｒｕ　１ｎｏｓａ　および久叉工王旦ユ・カス　アウレウス　Ｓｔａ　ｈ　１ｏ ｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｌＬにも関心がある。

洗たく場を消毒することにおける、体臭の微生物源を破壊することは、衣類中の 体臭の発生を減少させるのに秀れた方法であると信しられている。この結果は、 洗たく中、洗剤と共に溶菌作用の酵素を用いることにより達成されるであろう。

洗剤添加剤として、洗たくの際有用な酵素に対し、酵素はアルカリｐＨレベルで 活性でなければならず、更に洗剤処方中の主要成分により、顕著には界面活性、 ビルダー塩、および存在する場合キレート化剤（例えばＥＤＴＡ）により阻害さ れてはならない。更に、このような酵素は関係する微生物に対し活性でなければ ならない。

溶菌作用の酵素は、また食料又は水中の有害な微生物を破壊するため、又は細菌 細胞塊を加工するため、プロトプラスト形成のため、又は細胞内製品の回収のた め使用することもできる。

溶菌作用の酵素は、ベブチターゼ（例えばアラニン　アミダーゼ）、グリコシダ ーゼ（例えばムラミナーゼ又はラインザイム）および（多数の桿菌および細菌種 からの）自己融解（これは、微生物細胞壁のベブナドグリカンを脱型合しろる） を含めて公知である。多くの公知の溶菌作用の酵素、例えばムタノリシン（ス　 レブ　マイセス　グロビスポラス　５ｔｒｅ　ｔｏｍ　ｃｅｓ　ｌｏｂｉｓｒｅ ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｒｕｔｇｅｒｓｅｎｓｉｓ）由来）は、至適ｐＨ６〜７を有 し、更に洗剤成分の存在中および／又はアルカＩ）ｐｌＪレベルで比較的に不活 性である。他のものは、幾つかの関連した微生物に対し殆ど又は全く活性を有し ない。

洗剤成分の存在下、アルカリｐＨレベル（８〜１０）で高い溶解作用を有する溶 菌作用の酵素は、これまで文献で知られていない。本発明の目的は、このような 酵素を提供することにある。

発明の要約 今や以下の内容が見出された。すなわち、成る種のノカルディオプシス（Ｎｏｃ ａｒｄｉｏｐｓ　ｉｓ）株は、例えばマイクロコキー（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃ＋） 、プソイドモナス　アルギノザ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕ　１ｎｏｓ ａ　およびスタフィフロコツ力ス　アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ 　ａｕｒｅｕＳ）を含めて、家庭の洗たく場に存在する微生物の細胞壁を加水分 解し得る細胞外酵素を産生ずる。これらの酵素は、洗たく条件下、すなわち洗剤 成分の存在下、アルカリｐＨレベルで活性である。洗たく又はすすぎ中のそれら の使用は、通常の皮膚微生物相による衣服の汚れの減少をもたらし、これにより 汚れた衣類の臭いを除去できる。

従って、本発明はノカルディオプシス　Ｎｏｃａｒｄｉｏ　ｓｉｍ株、好ましく はＮ、ダソンビレー（Ｎ、ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅ）株由来であり、かつミクロ コツカス　セブン　リウス　Ｍｉｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　の細菌細胞壁を加水分 解する能力を有する溶国力のある酵素調製品を提供する０本発明はまた、溶菌力 のある酵素調製品の製法を提供するものであり、この方法は炭素および窒素源の 存在下、液内条件のもと、溶菌作用の酵素生産性のノカルディオプシス（Ｎｏｃ ａｒｄｉｏｐｓｉｓンを好気的に培養し、しかる後培養ブロスから酵素を回収す ることを含んでなる。

本発明の第三の面は、溶菌力のある酵素生産性のノカルディオプシス　Ｎｏｃａ ｒｄｉｏ　ｓｉｓ　株の微生物的に純粋な培養株を提供する。

本発明は、更に該溶菌力のある酵素調製品を含んでなる洗剤組成物およびホディ ーデオドラントを提供する。最後に、本発明は細菌細胞壁を加水分解するための 該酵素の使用を提供する。

図面の簡単な説明 本発明を更に理解するため、添付の図面を参照されたい。ここにおいて、図１は 、ｐＨの関数としてのスタフィロコッカス　アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ ｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）細胞に対する、株Ｇｌ　０２−３由来の粗酵素ブロス の溶解作用をブラフ的に示す。

図２は、ｐＨの関数として、プソイドモナス　エルギノザ　Ｐｓｅ発明の詳細 鐵ユ璽 本発明の溶菌作用を有する酵素は、細胞溶解酵素を生産する不規則なノカルディ オプシス　ダソンビレー（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ　ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅ ｉ）株により細胞外に生産される。数類の細胞熔解酵素複合体生産性のノカルデ ィオプシス　ダソンビレ−（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ　ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌ ｅｉ）株が３２１８およびノカルディオプシス　ムタビリシス（Ｎｏｃａｒｄｉ ｏｐｓｉｓ　ｍｕｔａｂｉｌｉｓ）型の株ＡＴＣＣ３１５２０は、溶解酵素複合 体は生産しない。

本発明の好ましいＢ様は、好気性の、溶解酵素生産性のノカルディオプシス　ダ ソンビレエー（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ　ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｊ）の放線 菌の単離物である。

３種のこれらの株が、本発明者らにより特許保護の目的でブダプヘト条約のもと て次の如くアクυカルチュラル　リサーチ　力ルチュア　コレクション（ＮＲＲ Ｌ）（ペオリア、ｒＬ、アメリカ合衆国）に寄託された。

寄託番号　ＮＲＲＬ１８３４９　ＮＲＲＬ１８３５０　ＮＲＲＬ１８３６４寄託 日　１９８８年３月２４日　１９８８年３月２４日　１９８８年４月２０日前記 の株の増殖温度は、２５〜３５°Ｃであり、３５″又はそれ以上では増殖は悪い 。株Ｇ１０２−３の増殖のための最適ｐＨは７であり、株Ｇ１１９−６およびＤ ３８−３に対しては８．５〜９である。

株１１９−６およびＤ３８−３に対しｐｎ７．ｏ又はそれ以下では増殖は起こら ない。

養養寒天斜面上で、株０１１９−６の成熟コロニーは、淡いクリーム色−黄色の 色合いを有する粉状菌糸体を示す；株Ｄ３８−３に関しては、成熟コロニーは桃 色−ベージュ色の色調を示す。ベネンこれらの株の細胞溶解酵素生産突然変異株 および変異株も又、発明の範囲内である。何故なら、（当業者に公知の組換えＤ ＮＡ技術により形質変転した）他の微生物種の形質転換宿主細胞からこれらの株 由来の細胞溶解酵素が生産されるからである。

泊”　、の 本発明のノカルディオプシス　Ｎｏｒｃａｒｄｉｏ　ｓｉｓ　株は、他の必須の 栄養源と共に同化性炭素および窒素を含有する栄養培地中、好気性条件で培養す ることができ、培地は公知技術の原則に従って構成される。液内発酵が好ましい 。

適当な炭素源は、炭水化物、例えばスクロース、グルコースおよびアルドース、 又は例えば穀物粒、麦芽、光およびモロコシの如き材料を含有する炭水化物であ る。培地に配合される炭水化物の濃度は、広範囲に、例えば１〜１５％に変化で きるが、通常８〜１０％が適当であり、パーセントはグルコースの当量として計 算される。

栄養培地中の窒素源は、有機もしくは無機性のものであってよい。

有機窒素源の内、全く全ての源が放線菌類の培養を含む発酵プロセスにおいて正 当に用いられる。例として、大豆ミル、綿実ミル、ピーナツルミル、コーンステ イープリカーおよび酵母エキスが挙げられる。加えて、栄養培地は又、通常の微 量物質をも含有すべきである。

本発明の株Ｇ１１９−６およびＤ３８−３は、好アルカリ性であり、培養は好ま しくはアルカリ性ｐＨ（８，５〜９．０）で行なわれる。

アルカリはｐＨは、（増殖培地を殺菌後）適当な緩衝液、例えば炭酸ナトリウム 、又は炭酸ナトリウムおよび炭酸水素ナトリウムの混合物を添加することによっ て得られる。タンク発酵槽内での菌株の好気性液内培養に対し、人工の通気を用 いる必要がある。通気速度は、通常のタンク発酵において用いられる速度である 。

発酵後、液体の酵素製品は、発酵ブロスから、ブロスの粗い物質を除去すること により生産でき、更に所望により、常法、例えば低温での蒸発により又は限外濾 過によりブロスの濃縮により生産できる。最後に、保存剤が濃縮物に添加できる 。

指摘した如く、本発明の溶菌作用の酵素調製品は又、形質転換さンビレー（Ｎｏ ｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ　ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ）、例えば本明細書で記載し た株の一種由来の細胞溶解酵素をコードし更に発現する遺伝子を含有せしめるよ うに造られている。従って、培養すべき微生物は、細胞溶解酵素生産性の株ツカ ルー゛イオブシス１ソンビレエー　Ｎｏｃａｒｄｉｏ　ｓｉｓ　ｄａｓｓｏｎｖ ｉ±上±上Ｌ（ここにおいて、酵素は天然の酵素である）（細胞溶解酵素複合体 を生産する野生株の突然変異株および変異株を含む）であるか、又は形質転換宿 主生物（この中に、細胞溶解酵素に対する遺伝子が組換えＤＮＡ技術により挿入 されている）である。このような技術は当業者に公知であり、一般に次工程を含 む：ａ）遺伝子表現を促進する機能をコードするＤＮＡ配列およびノカルディオ プシス　ダソンビレ−（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ　ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ ）細胞溶解酵素をコードするＤＮＡ配列を含んでなる適当な組換えＤＮＡクロー ニングベクターを提供し；ｂ）工程ａ）からのクローニングベクターを用いて適 当な宿主生物を形質転換し；次いで Ｃ）形質転換された宿主を適当な培養培地中で培養し、培養培地から細胞溶解酵 素を回収する。

好ましい宿主生物は、ノカルディオプシス（Ｎｏｒｃａｒｄｉ。

ｐｓｉｓ）、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、酵母、アスペ ルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）およびバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の株 である。宿主として、ＥＰ２３８，０２３（ノボ）中に教示に従ってＡ　Ｉ　″ 　ｅ　を用いるのが特に好ましい。

′・”　、の Ｇ　１０２−３由来の酵素複合体の最適ｐＨは、０．０５　Ｍのクエン酸塩、Ｍ ＯＰＳ又はＴＲｌ５緩衝液中、基質としてのスタフィロコッカス　アウレウス（ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）に関し、３０°Ｃで約５．５（ ５〜６の範囲内）である。

Ｇ１０２−３由来の酵素複合体の最適ｐＨは、スタフィロコッカスアウレウスに 対し、０．０５　Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液中ｐＨ７で測定し約５０°Ｃ（４ ０〜６０″Ｃの範囲内）である。

Ｄ３８−３由来の酵素調製品の最適ｐＨは、基質としてプソイドモス　エルギノ ザ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｕｒｕ　１ｎｏｓ土りに関し、０．０５　Ｍの ホスフェート又はＭＯＰＳ中、３０°Ｃで約７．５（７〜８範囲内）である、ｐ Ｈ７，５で少なくとも８０％の活性（０，０５Ｍのホスフェート中）が、気質と してプソイドモナス　エルギノザ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕ　１ｎｏ ｓａ　に関し、ｐＨ９でみられる（０．０５ＭのＴＲｌ５又はボレートｉ衝液中 ）。

Ｉｆとしてプソイドモナス　エルギノザに関し、Ｄ３８−３由来の酵素調製品の 最適温度は、０．０５　Ｍのリン酸ナトリウム中ｐＨ７で６０℃であり、５０℃ で８０％の活性が認められる（７０’Ｃでは試験しなかった。何故ならこの基質 は不安定だからである。）従って、本発明の酵素は、ｐＨ５〜８（３０’Ｃで） 、すなわちわずかに酸性ないしわずかにアルカリ性で最適ｐｌ（を有し、更にｐ Ｈ６，３〜８．２で少なくとも５０％の細胞溶解作用を有する。該調製品は、（ ０，０５Ｍのホスフェート緩衝液中ｐＨ７で測定して）４０〜６０℃の範囲内に 最適温度を有する。

表■に示すように、以下に示されるツカルー゛イオブシス　゛ソンビレー　Ｎｏ ｃａｒｄｉｏ　ｓｉｓ　ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ株Ｇ１０２−３　（ＮＲＲＬ １８３４９）由来の細胞溶解酵素は、ｐｔ＋７．０の緩衝液中およびｐＨ９，５ の緩衝液中の双方で目標生物に対し秀れた活性を示す。好都合には、株Ｇ１０２ −３由来の細胞溶解酵素複合体は、１５Ｇ”Ｃのより低温度および４０℃で目標 生物に対して活性であり、このことは低温の洗たく通用、又は室温のすすぎ水の 適用に対し本発明の酵素複合体を好都合ならしめる。

表■から、株０１０２−３由来の細胞溶解酵素複合体が、洗剤成分の存在下、５ 質に対し良好な細胞溶解作用を示すことが分かる。

一方、株Ｄ３８〜３から細胞溶解酵素は、洗剤成分の存在下、プソイドモス　エ ルギノザ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕ　ｉユニｆｆｌに対し、秀れた活 性を示す。更に特異的には、本発明の酵素調製品は、同ｐＨの緩衝液中の活性に 少なくとも等しい、１．５ｇ／２洗剤溶液中での細菌溶解作用を有する。

表■中のデータおよび表■と共に表■中のデータと比較した表１中のデータは、 細胞懸濁液の濁度の減少は、緩衝液および洗剤溶液中の双方において真の細菌の 生残数と大ざっばに相互関係があることを実証している。

表■中に存在するデータは、洗剤成分の存在下、アルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓ ｅ）（登録商標）のみが、ある程度の細胞溶解作用を有し、更に本発明の細胞熔 解酵素の複合体の添加は、細胞溶解率を７５〜９３％に増大せしめることを示し ている。

表■中のデータによって実証される如く、本発明の酵素調製品は、個人的ケア又 は食品衛生に対して除去が望ましい多くの細菌、例え工とを含む、広範囲の細ｌ に対して活性である。ミクロコ、カスクリスチネ（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｋ ｒｉｓｔｉｎａｅ）およびストレプトコッカス　フェシウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ ｏｃｃｕｓｆｕｅｃｉｕｍ）の如き細菌は、Ｇ１０２−３由来の酵素複合体によ って細胞溶解される。

Ｍ皇■ｌ益 固体酵素調製品は、精製および／又はａ縮ブロスから、Ｎａｚ　ＳＯ４の如き塩 を用い、又は水混和性溶剤、例えばエタノールもしくはアセトンを用いて沈殿せ しめることによ、て調製できる。適当な乾燥方法、例えばスプレー乾燥、真空下 での蒸発又は凍結乾燥によって発酵ブロス中の水の除去も又、用いることができ る。このようにして限られた細胞溶解酵素調製品の加水分解作用は、通常粉末１ ｇ当たり２００〜５０００ユニツトの範囲内にある。この粗製生成物は、もしよ り大きな単位活性の酵素濃度が市場で望まれる場合、（部分的に）精製できる。

本発明の細胞熔解酵素を含有する洗剤添加剤の適当な活性範囲は、添加剤（固体 形又は液体形）Ｉｇ当たり５０．０００ないし１ミリオン単位である。

当業者に公知の典型的洗剤用添加剤の形態を用いることができ、特に無粉塵性粒 質物、安定化液体もしくは保護された酵素である。

無粉塵性粒質物は、例えば米国特許４，１０６，９９１又は米国特許４，６６１ ，４５２に従って製造することができ、更に粒質物は、当業者に公知の手法に従 って被覆できる。

液体形態の細胞熔解酵素調製品は、プロピレンゲｌ／コール、他のポリオール、 糖、糖アルコールおよびホウ酸の添加により、又は当業者に公知の他の酵素安定 化剤により安定化できる。

本発明の特に好都合な特徴は、細胞溶解酵素がアルカリ性バ之ｉス　Ｂａｃｉｌ ｌｕｓ　プロテイナーゼと両立でき更にこれと組合せると最も有効であり、更に 特に石けん製造業者に商業的に提供されかつ用いられている、商業的に入手可能 なアルカリ性ｄ（Ｂａａ　ｉ　ｌ　Ｉｕｓ）プロテアーゼ、例えばアルカラーゼ （Ａｌｃａｌａｓｅ）（登録商標）、エスペラーゼ（Ｅｓｐｅｒａｓｅ）（登録 商標）、サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）、マキサターゼ（Ｍａｘａｔａｓｅ） と両立できる。プロテアーゼと細胞溶解酵素を併用すると、組合わさった、恐ら く相乗作用の細菌溶解作用を生ぜしめる。アルカリ性バシース　Ｂａｃｉｌｌｕ ｓ　プロテアーゼおよび細胞溶解酵素複合体の組合せを用い、数種の標的微生物 に関する洗たく試験で、９０％以上の段列レベルが得られた。プロテアーゼ／細 胞溶解酵素混合物を含んでなる洗剤添加剤は、本発明の好ましい製品Ｂ様である 。

底分算！ Ｎ　′ソンビレー　Ｎ、ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ　株Ｇ１０２−３は、少なく とも２種の細胞溶解酵素の複合体を生成する。Ｇ１０２−３によって産生される 酵素複合体は、ＣＭ−セファデックスイオン交換クロマトグラフィーにより、２ 種の主成分の細胞熔解酵素（酵素Ａおよび酵素Ｂと命名）に分離できる。酵素Ａ は、分子量Ｎ−アセチルへキソサミダーゼ活性を表示するス　フィロコツカスア ウレウス　Ｓｔａ　ｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　のペプチドグリカン からの還元末端を生ぜしめる。

迭ｍえ糎 本発明で特に用いられる洗剤組成物は、公知の界面活性剤を含んでなり、これは アニオン、非イオン、カチオン又は両性イオンタイプ、又はこれらの混合物であ ってもよい、アニオン界面活性剤の典型的例は、直鎖アルキルベンゼンスルホネ ート（ＬＡＳ）、α−オレフィンスルホネート（ＡＯ５）、アルコールエトキシ スルフェート（ＡＥＳ）およびアルカリ金属の天然石けんである。

本発明の実施において用いられる洗剤組成物は、当業者に公知の他の洗剤成分、 例えばビルグー、漂白剤、漂白活性化剤、凝固防止剤、金属イオン封止剤、土壌 再沈澱防止剤、香料、酵素に対する安定化剤等を含有することができる。

洗剤組成物は、任意の好都合な形態、例えば粉末、液体等に製剤化できる。細胞 溶解酵素は、例えば前述の如く、製剤中に酵素安定化を含ましめることにより液 体の洗剤中に安定化できる。

最良の洗剤組成物は、溶液中ｐ）１８〜１０．５を示す。その広い最適ｐＨのた め、本発明の細胞熔解酵素は、図１および図２で示すように、この全範囲におい て高度に活性である。

本発明の実施において用いられる洗剤の製剤は、本発明の細胞熔解酵素に加えて １種以上の他の洗剤用酵素を含むことができる。その例は、プロテアーゼ、リパ ーゼ、アミラーゼおよびセルラーゼである。もちろん、１０テアーゼの存在は好 ましい。

本発明の細胞溶解酵素（および同様にアルカリ性ハシラスプロテアーゼ）は、大 抵の商業的に入手できる洗剤組成物の製剤と両立する。但し、ある程度の漂白剤 および洗浄液のｐＨをｐＨ１１を超えるようにする物を含有する洗剤の製剤にお いてそれらを用いるのは実際的でないであろう。酵素添加剤の量は、一般に洗剤 の製剤の０．５〜５重量％である。

従って、本発明の細胞熔解酵素の洗剤用添加剤の形態は、すなわち、１２の洗浄 本当たり、約１００〜２０，０００単位、好ましくは２０００〜１０，０００単 位の細胞溶解の酵素濃度を生ぜしめるため、その０．５〜５容貴重量％として、 （石けん製造業者の）洗剤の製剤に導入するため１ｇ当たり約５０，０００〜１ ミリオン単位のコンセントレートとして当業者に良好に定められた場所に適合す る。洗浄水を含有する洗剤に又は洗剤を有しないすすぎ水に同等に直接添加する ことに対し、添加剤が消費者に提供され、最大の所望の濃度、すなわち２０００ 〜１０，０００単位／２が得られる。

本発明の好ましい態様において、添加剤１ｇ当たり０．５〜３．０アンソン単位 の濃度のアルカリ性バシラス　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　プロテアーゼ（又はそれによ りもしより好都合に測定されるならば、活添加するため消費者に供給される細胞 溶解酵素混合物添加剖中に含まれ得る。プロテアーゼ含有添加剤も、勿論、細胞 溶解酵素添加剤から別個に洗浄水又はすすぎ水に添加できる。いずれにしても、 洗浄水又はすすぎ水中、細胞溶解酵素１２当たり２０００〜１０，０００単位お よびプロテアーゼ１１当たりｏ、ｏｉ〜０．１５アンソン単位の濃度が好ましく 、更に最も好ましくは０．０２〜０．１５ＡＩＩ／ｆである。酵素混合物は、体 臭発生微生物相の段列割合に関し、相加もしくは相乗効果をもたらす。

の　” 本発明の酵素調製品は、好ましくない細面の数を減少させるのに有効である。従 って、該調製品は、リステリア　Ｌｉ５ｔｅｒｉａ　。

±上土二上土工との如き生物を制御するため、（食品保存剤として又は食品加工 中消毒のため）食品の通用において使用できる。また、該調製品は水処理、例え ば病院および工業的冷却水塔において、レギオネラを制御するため使用すること もできる。他のそのような使用は、病院の器具、特に殺菌温度に耐えることので きない器具の消毒であり、ここではスタフィロコッカス　アウレウス（Ｓ　ｔ　 ａ　ｐ　ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）、プソイドモナス　エルギノザ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）およびカムプリロバフタ− （Ｃａｍｐｙ！ｏｂａｃｔｏｒ）の制御が重大であ更に、本発明の酵素調製品は 、実験室又は工業的環境における細菌の細胞を溶解するために用いられる。従っ て、該調製品は、活性化スラッジの処理のため、又はスラッジに対する脱水助剤 として作用させるため用いることができる。該調製品は又、プロトプラスト形成 に対する研究用酵素としても使用できる。更に該調製品は、細菌内で細胞内的に 生産された生産物、例えば酵素の如きクローン化生産物を回収するため細胞開口 助剤として使用できる。

実施例 本発明の更により良き理解のため、以下に特定の実施例を示す。

”′　に、る 実施例において、株Ｇ１０２−３および株Ｇ１１９−６および株Ｄ３８〜３培養 物の加水分解活性を、濁り度減少法（Ｈ，ハヤシ等、Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、 　Ｃｈｅｗ、　１９８１．４５（１０）：２２８９−２３００）により測定した 。生存又は凍結乾燥した標的生物、ミクロコンカス　クリスチネ　Ｍｉｄｅｎｔ ａｒｉｕｓ　（ＡＴＣＣ１４３９２）、７’７（）’−Ｅ　Ｘで０．８のＯＤま で懸濁させた。このような細胞懸濁液２ｄに、適当に希釈した酵素ブロス０．５ 　ｄを添加し、反応混合物を１５℃又は４０°Ｃで１５分間インキュベートする 。インキュベーション時間の終Ｏｎ＋ｗで、毎分、該温度で０．００１に減少せ しめる細胞溶解酵素の量乱を避けるため、細胞壁加水分解活性に対して以下に与 えられる数生物が指定される場合は除く）。本発明者等は、報告される単位値は 、幾分人為的であることを認識しており、更に本発明で例示しなを確認するため 多くの標的微生物に対して試験されるべきであることに注目している。

細胞数の実験により、６６０ｎ＋ｍでの細胞懸濁液中の濁り度の減少は、標的微 生物の現実の段列と良好に関連していることが確認され、これは本発明者に満足 できるものである。手順は、上記のに、　／＼ヤシ等により記載される手順と同 じである。但し、細胞懸濁液を除いた全溶液はオートクレーブ処理され更に細胞 溶解溶液は濾過滅菌される。インキュベーションの終了時に、反応混合物を連続 的に希釈し次いで生存細菌数に対し栄養寒天プレート上にプレートする。

細胞壁加水解活性を、又化学的、酵素的分析により測定した。

（ａ）基質としてス　フィロコンカス　アウレウス　ＳＬａ　ｈ、Ｌ−−１０旦 ｏ　、ｃ　ｃ　１１−ａ　ｕ　ＬＬ±」Ｄ−の細胞壁を用い、次いで細胞壁から 放出されるＮ−アセチルへキソサミンの形成を測定することにより、Ｎ−アセチ ルムラミダーゼ活性を測定する。５０■門のＥＭＳ１！１衝液（ｐ）１６．０） 中で作成された１ｄのスタフィロコッカス　アウレウス　Ｓｔａ　ｈ　１ｏｃｏ ｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　細胞壁懸濁液（これは、１．６−ｇの細胞壁を含有す る）に、０．２　ｄの酵素溶液を添加し次いで反応混合物を、振とうしなから３ ７゛Ｃで３０分間インキュベートする。インキュベージジン時間の終了時に、未 使用細胞壁を遠心分離により除去し次いで上澄みを用いｐ−ジメチルアミノベン ゾアルデヒド（ＤＭＡＢ）法（Ｊ、Ｌ、ライシンヒ等、Ｂｉｏ＋、　Ｃｈｅｔａ 、　１９５５，２１７：９５９〜９６６）により放出されたＮ−アセチルへキソ サミンの濃度を測定する。１単位は、３７°Ｃで毎分細胞壁から１＋１モルのＮ −アセチルへキソサミンを放出する酵素の量である。

ｂ）基質としてキチンを用い次いで溶液中のＮ−アセチル−グルコサミンの形成 を追跡してキチナーゼ活性を測定する。０．５−の酵素溶液を０．５ｄのキチン 懸濁液（これは、０．１Ｍのクエン酸１０．２Ｍ　Ｎ　ａ　ｚ　ＨＰ　Ｏａ緩衝 液（ｐＨ６，５）中、４尼１ｇキチン／ｄから構成される）と混合する。次いで 、反応混合物を、激しく振とうしなから３７°Ｃで９０分間インキュベートする 。インキュベーションの終了時に、未使用のキチンを遠心分離により除去し、次 いで上澄みをＤＭＡＢ法によりＮ−アセチルグルコサミン濃度に対し分析する。

Ｃ）基質としてラミナリンを用い、次いで還元糖の濃度の増加を追跡することに より、ラミナリナーゼ活性を分析する０反応混合物は、０．１　ｄのラミナリン （０，１Ｍクエン酸１０．２Ｍ　Ｎａ、ＨＰＯ。

緩衝液（ｐＨ６，０）中に１．５ｍｇ／ｄ）　、０．４−の緩衝液および０．２ ｄの酵素溶液から成る。混合物を３７℃で１０分間インキュベートする。次いで 、０．３　ＩＩｌの冷水を添加して反応を終了させ、冷水中室温に冷却する。次 いで溶液のアリコー１−（２００μｐ、）を用い、ミクロネルラン法（Ｒ，Ｇ、 　スピロ法、Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　１９６６、　Ｖｏｌ、８：ｐ、３）によ り還元糖の濃度を測定する。

例■ ノカルディオプシス　ダソンビレー　Ｎａｃａｒｄｉｏ　５ｉｓｄａｓｓｏｎｖ ｊｌｌｅｉ　株Ｇ１０２−３　（ＮＲＲＬ１８３４９）を、下記の組成の培地５ ０ｊｌｉ！を含有する２５０ｄのトリプルーブフルド　エルシンマイヤー中の回 転振とうテーブル（２５０ｒｐｍ＋）上で３０°Ｃで培養した。

培地の組成（ｇ／ｌ）　： マルトデキストリン　Ｍ−１００２０ 大豆ミル　２０ 酵母エキス　５ Ｎａ　Ｃ１２ 滅菌前、少数滴の０．１ＭのＮａＯＨを添加して培地のｐ［Ｉを７．０に調節し た。インキュベーションの２〜４日後、ブロスの細胞溶解酵素活性を、上記の濁 り度減少法を用いて測定した。Ｇ１０２−３の細胞溶解活性は、７２時間インキ エベーシヲン後基質としてのスタフィロコッカス　アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌ ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）に関し１６．２単位／−であった。

ノカルディオプシス　ダソンビレ−（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓｄａｓｓｏｎｖ ｉｌｌｅｉ）株０１１９−６　（ＮＲＲＬ１８３５０）および株Ｄ３８−３　（ ＮＲＲＬ１８３６４）を又、以下の相違を除き、上記の如（３０°Ｃで培養した 。

培地の組成（ｇ／／り： マルトデキストリン　Ｍ−１００２０ 大豆粉　２０ 酵母エキス　２ に、ＨＰＯ４１ Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ　・７Ｈ２ＯＬ 滅菌後、５ｄのＩＭの炭酸ナトリウム／炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，２ ）を添加して培地のｐ）ｌを８．５〜９．０に調節した。１１４時間インキュベ ーション後、株Ｇ１１９−６のブロスは、基質として生存スタフィロコッカス　 アウレウス　Ｓｔａ　ｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　に関し１７．８ユ ニット／単位の細胞溶解作用を有していた。１４２時間インキュベーション後、 株Ｄ３Ｂ−３のブロスは、ｉｔとして生存プソイドモナス　エルギノザ（Ｐｓｅ ｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に関し４７．５単位／２の細胞溶解 作用を有していた。

例■ 基質として異なる微生物を用いて例Ｉからの株Ｇ−１０２−３の細胞溶解酵素の 細胞熔解活性を、表１に示す。目標生物、ミクロコンカス　クリスチネ　Ｍｉｃ ｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｋｒｉｓｔｉｎａカス　アウレウス　Ｓｔａ　ｈ　Ｉｏｃｏ ｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓを、６２．５曽りのホスフェート緩衝液（ｐＨ７，０） および５０５Ｍのボレート緩衝液（ｐＨ９，５）に懸濁させ、６６０ｎｓ＋で初 期ＯＤ　０．８を得た。

細胞溶解反応を１５°Ｃおよび４０°Ｃで１０分インキュヘーソａンし、反応混 合物１１ｄ当たり３単位で行った。インキュベーションの終りに、細胞懸濁液の 濁り度の減少を、分光光度計を用い６６０ｎ■で測定した。

紅 例■ 基質として異なる微生物を用いた場合、洗剤の存在下、株Ｃｌ０２−３細胞溶解 酵素およびＤ３８−３細胞溶解酵素（例１から）の細胞溶解活性を表Ｈに示す。

目標生物、主久旦ユ１互困−又ユス±２　Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｋｒｉｓｔ ｉｎａｅ　、、５久ユユヱカス　セデジタリウス　Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　５ ｅｄｅｎｔａに懸濁させたがこの溶液は１尼の脱イオン水に１．５ｇの粉末を添 加して作成され、次いでＣａ　ＣＩ！　ｚおよびＭ　ｇ　Ｃ！２　ｚを添加した ドイツ硬度９°ｄＨに調節された。試験で用いた洗剤溶液はチデ（Ｔ　ｉ　ｄｅ ）（登録商標）であり、ホスフェートは添加されていなかった。

細胞溶解反応を、細胞溶解酵素複合体１ｄ当たり３単位で、１５°Ｃおよび４０ ’Ｃで１０分間のインキュベーションにより行った。インキュベーションの終り に、細胞！Ａ濁液の濁り度の減少を、分光光度計を用い６６０ｎ−で測定した。

ｌユ Ｙ売悟話　０．２１８　０．１８８　０　０ブソイドモ、エルギノザ　０．２３ ３　０．１６６　０．３２４　０．４９５ＰＳｅｕｄ、憇ユ「赳且 Ｍ面ζＭ円恒　０．３７２　０．２５２　Ｑ、０６９　０．２３１例■ 株０１０２−３から産生された細胞溶解酵素によって細胞溶解された実際の微生 物の数を評価するため、以下の生存細胞実験を行い、結果を表■に示す。−夜増 殖せしめられた基質生物、ミクロコツカス　クリスチネ（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕ ｓ　ｋｒｉｓｔｉｎａｅ）およびスタフィロコッカス　アウレウス（Ｓｔａｐｈ ｙＩｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）を、５０ｗＭのポレート緩衝液（ｐＨ９， ５）中、１０　’　ＣＦＵ／ｄまで懸濁させた。２ｄの細胞懸濁液に、（反応混 合物１ｄ当たり３単位まで）はぼ希釈した酵素溶液を添加し、次いで１５°Ｃ又 は４０°Ｃで１０分間定期的に混合しながらインキュベートした。酵素を含む全 ての溶液を滅菌し、反応混合物を連続的に希釈し次いで生残細菌数に対し栄養寒 天プレート上でプレートした。

表１ 例Ｖ 洗剤成分（１，５ｇ／ｆ）の存在下、反応混合物１ｄ当たり３単位で株Ｇ１０２ −３由来の細胞溶解酵素によって細胞溶解された微生物の実際の数を、例■の実 験と同様の実験により測定した。但し、ミクロコンカス　クリス２　Ｍｉｃｒｏ ｃｏｃｃｕｓ　ｋｒｉｓｔｉユ旦」Ｄ−およびス　フィロコー力ス　アウレウス 　ｓＬａ　ｈｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　を、例■に記載された数１０’ ＣＦＵ／ｄまで洗剤溶液中に懸濁させた。結果を表■に示す。

ｌヱ 緩衝液中又は洗剤溶液中、株１０２−３由来の細胞溶解酵素が３５〜６４％の生 存微生物を変ることなく溶解することは明らかである。細胞熔解酵素は、洗剤溶 液中量も有効である。

例■ 洗剤成分の存在下、目標微生物に対し、目標微生物に対し、株１０２−３由来の 細胞溶解酵素、ムタノリシンおよびストレプトマイセス　ルトゲルセンシス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｒｕｔｇｅｒｓｅｎｓｉｓ）（ＡＴＣＣ３３５０）の 比較細胞溶解作用を表Ｖに示す。−クトバシース　ブランクラム　Ｌａｃｔｏｂ ａｃｉｌｌｕｓ　Ｉａｎｔａｒｕｍ　（ＡＴＣＣ８０１４）は、株Ｇ１０２−３ 細胞溶解酵素およびムタノリシンに対する基質生物であり、−ｆａｅｃｉｕｍ　 （ＡＴＣＣ８０４３）は、Ｇ１０２−３ＩＩＩＩ胞溶解酵素およびストレプトマ イセス　ルトゲルセンシス　Ｓｔ　ｒｅｔｏｍ　ｃｅｓ　ｒｕｔ　ｅｒｓｅｎｓ ｉｓ　（ＡＴＣＣ３３５０）酵素に対する基質であった。ラクトバシラス　ブラ ンクラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ）およびストレプ トコッカス　フェシウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃｉｕ、　ｍ　 ）は、それぞれムタノシシおよびストレプトマイセス　ルトゲルセンソス　５ｔ ｒｅ　ｔｏｍ　ｃｅｓ　ｒｕｔ　ｅｒｓｅｎｓｉ互り由来のＮ−アセチルムラミ ダーゼに対する最も良い漂白生物であることは公知である。洗剤溶液は、例■に 記載した溶液と同じであり、同じ酵素活性３単位／ｄが実験中、用いられたが全 反応は１５℃で行なわれた。

株Ｇ１０２−３由来　０．２１９　０．１２１例■ 生存微生物に関するアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）（登録商標）および株Ｇ １０２−３由来の細胞溶解酵素の組合せ効果を、次の実験で実証した。

ミクロコツカス　クリスチネ（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｋｒｉｓｔｉｎａｅ） およびス　フィロコンカス　アウレウス　５ｔａｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒ ｅｕｓ　を、例■に記載の如く洗剤溶液中に懸濁させた場合、０．０５ＡＵ／ｆ ｆｉのアルカラーゼ（Ａ　Ｉ　ｃ　ａＩａｓｅ）（登録商標）を投入し、洗剤溶 液中のアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）（登録商標）の付加的細胞溶解効果を 調べた。表■に示す如く、洗剤中のアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）（登録商 標）のみは幾分の細胞溶解効果を有している。しかし、Ｇ１０２−３によって産 生された細胞溶解酵素を、０．０５Ａυ／２のアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ ）（登録商標）と組合せて３単位／Ｗｌ（３０００単位／ｌ）で添加した場合、 平均７５〜９３％の細胞溶解率が得られた。

ｌ豆 洗剤中でのアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）（登録商標）の増加用量（０，２ ＡＩＪ＃！まで）は、Ｍ、クリスチネ　Ｍ、ｋｒｉｓｔｉユｉおよびＳ、アウレ ウス　Ｓ、ａｕｒｅｕｓ　の細胞溶解作用の著るしい増加はもたらさなかった。

例■ 液体洗剤中、ス　フィロコツカス　アウレウス　Ｓｔａ　ｈ　１ｏ　ｃ　ｏ　ｃ 　ｃ　ｕｓ　ａ　ｕ　ｒ　ｅ　ｕ　ｓ　に対する、株Ｇ１０２−３由来の細胞溶 解酵素とサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）（登録商標）又は工スベラーゼ（Ｅｓ ｐｅｒａｓｅ）（登録商標）の相乗効果を、次の実験において実証した。

液体洗剤、ヴイスク（Ｗｉｓｋ）（登録商［）　（アルカリ性ｐＨ溶液）を、商 業的レベルに作成した。標的生物ス　フ　ロコ・カスアウレウス　Ｓｔａ　ｈ　 １ｏｃｏｃｃｕ　ａｕｒｅｕｓ　を、初期００．、。−８まで洗浄溶液中直接懸 濁させた。サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）（登録商標）又はエスペラーゼ（Ｅ ｓｐｅｒａｓｅ）（登録商標）を、例■における如く、商業的レベル（０，０６ ＫＮＰυ／β）で投入した６　３単位／ｄでの細胞溶解反応を、６６０ｎｍで濁 り度の減少によって監視した。表■に示すように、液体中のサビナーゼ（Ｓａｖ ｉｎａｓｅ）（登録商標）又はエスペラーゼ（Ｅｓｐｅｒａｓｅ）（登録商標） 単独は、生物に対し細胞溶解作用を示さない。また、Ｇ１０１３細胞溶解酵素が 、粉末洗剤（例■）および液体洗浄中で良好な細胞溶解活性を示すことは明白で ある。スタフィＯ’：Ｊ　７カス　アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ　 ａｕｒｅｕｓ）の細胞溶解に対するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）（登録商標 ）又はエスペラーゼ（Ｅｓｐｅｒａｓｅ）（登録商標）をＧ１０２−３由来の細 胞溶解酵素の相乗効果は、ヴイスク（Ｗｉｓｋｌ）（登録商標）において得られ たようである。

ノいｌ 洗剤単独　００ 例■ 病原菌として知られている微性物、オボチュニスト、通常の皮膚および／又は衣 類汚染菌および／又は卵白リゾチームによって洗浄されるのが困難なものを株Ｇ １２−３細胞溶解酵素および株Ｄ３日−３細胞溶解酵素に対し基質生物として試 験した０通常の皮膚および／′又は衣類汚染菌を出願人の研究室において単離し 、Ｎ０ＶＯＬ、８，１２．１３と名曲した。　１ｍｇ／ｄの卵白リゾチ一ム（シ グマ社製）の効果と、反応混合物１ｄ当たり粗発酵ブロス由来のｌｏｎｇのリオ フィル（Ｉｙｐｏｐｈｉｌ）の効果を比較した０表■に示すように、Ｇ１０２− ３によって産生される細胞溶解酵素は大抵の場合、明らかに卵白リゾチームより もはるかに有効であり、一方Ｄ３８−３細胞溶解酵素は、プソイドモナス　エル ギノザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）細胞に対して極めて 強力であることが実証される。

ｌ■ 例Ｘ 株Ｇ１０２−３により産生される細胞溶解酵素は、酵素の混合物として、すなわ ち、Ｎ−アセチルムラミダーゼ、キチナーゼおよびラミナリナーゼの混合物とし て同定され、一方株Ｄ３８−３により産生された細胞溶解酵素はキチナーゼおよ びラミナリナーゼを含有していた。

例Ｔの発酵ブロスからそれらの個々の酵素活性を表■に示す。

Ｔｈｅ　１ｙｔｉｃ　ｅｎｚｙｍｅ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　５ｔｒａｉｎ　 Ｇ１０２−３　ｗａｓｌｏ　１ｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　ａ　ｍ１ｘｔｕｒｅ 　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅｓ、　ｎａｍｅｌｙ　Ｎ−ａｃｅｔｙ１ｍｕｒａ蒙１ｄａ ｓｅ、　ｃｈｉｔｉｎａｓｅ　ａｎｄ　ｌａｍｉｎａｒｉｎａｓｅ、　ｗｈｅｒ ｅｓａ　ｔｈｅｌｙｔｉｃ　ｅｎｚｙｍｅ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　５ｔｒａ ｉｎ　０３８−３　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ｃｈｉｔｉｎａｓｅａｎｄ　ｌａｍｉ ｎａｒｉｎａｓｅ。

Ｔｈｅｉｒ　１ｎｄｉｖｉｄｕａｌ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｆｒｏ ｍ　ｆｅｒ＋ｗｅｎｔａｔｉｏｎ１５　ｂｒｏｔｈ　ｏｆ　Ｅｘａｍｐｌｅ　Ｉ 　ａｒｅ　ｔａｂｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　ＩＸ。

■ Ｎ−アセチルムラミナーゼ　１２　ＮＯキチナーゼ　５．０　０．３３ ラミナリナーゼ　８０７０ 国際出願番号ＰＣＴ／　／ 国際出願番号ｐｃＴ／　／ 国際出願番号ＰＣＴ／　／ 活性（％） Ｈ ＦＩＧ、１ 活性（％） Ｈ 国際調査報告 ｂ１１ｎ’ｎｌｌａｍｌＡｍｉｃＩｌ１ＭＮ＠、　ＰＣＴ／ＤＫ　９０１０００ ０９国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．溶菌力のある酵素調製品であって、ノカルデイオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉｏ ｐｓｉｓ）株、好ましくはＮ．タソンビレー（Ｎ．ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅ）株 由来であり、かつミクロコッカスセデンタリウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｓ ｅｄｅｎｔａｒｉｕｓ）、プソイドモナスエルギノザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ 　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）およびスタフイロコッカスアウレウス（Ｓｔａｐｈｙ ｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）の細菌細胞壁を加水分解する能力を有する溶 菌力のある酵素を含んでなる、前記酵素調製品。 ２．株ＮＲＲＬ１８３５０又はＮＲＲＬ１８３６４由来の細胞溶解酵素を１種又 はそれ以上含んでなる、請求の範囲第１項記載の酵素調製品。 ３．更に、ミクロコッカスクリスチネ（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｋｒｉｓｔｉｎ ａｅ）の細菌細胞壁を加水分解する能力を特徴とする、請求の範囲第１項記載の 酵素調製品。 ４．株ＮＲＲＬ１８３４９由来の細胞溶解酵素を１種又はそれ以上含んでなる、 請求の範囲第３項記載の酵素調製品。 ５．前記酵素が、分子量２４，０００又は２６，０００および等電点８．３又は 少なくとも９．５をそれぞれ有する、請求の範囲第４項記載の酵素調製品。 ６．更に、アルカリ性バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）プロテアーゼを製剤の形態 で含有する、請求の範囲第１〜５項のいずれかに記載の酵素調製品。 ７．添加剤１ｇ当たり、５０，０００〜１ミリオン単位の溶菌力のある酵素およ び添加剤１ｇ当たり０．５〜約３．０アンソン単位を含んでなる、請求の範囲第 ６項記載の混合酵素調製品。 ８．洗剤用添加剤の形態、好ましくは無粉麈性粒質物又は安定化液体の形態にあ る、請求の範囲第１〜７項のいずれかに記載の酵素調製品。 ９．溶菌力のある酵素調製品の製造方法であって、炭素窒素およびリンの同化性 源を含有する栄養培地中、溶菌力のある酸素生産性のノカルディオプシス（Ｎｏ ｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ）株を好気的条件下で培養し、しかる後培養ブロスから酵 素を回収することを含んでなる、前記方法。 １０．前記株が、Ｎ．ダソンビレ（Ｎ．ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ）に属する、 請求の範囲第７項記載の方法。 １１．前記株が、ＮＲＲＬ１８３４９，ＮＲＲＬ１８３５０又はそれらの突然変 異株又は変異株である、請求の範囲第１０項記載の方法。 １２．溶菌力のある酵素生産性のノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉ ｓ）株の生物学的に純粋な培養液。 １３．前記株が、Ｎ．ダソンビレ（Ｎ．ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ）に属する、 請求の範囲第１２項記載の培養液。 １４．株ＮＲＲＬ１８３４９，ＮＲＲＬ１８３５０，ＮＲＲＬ１８３６４又はそ れらの突然変異株又は変異株の請求の範囲第１３項記載の培養液。 １５．請求の範囲第１〜８項のいずれかに記載の溶菌力のある酵素調製品を含有 する洗剤組成物。 １６．１ｇの洗剤当たり、１０００〜２０，０００単位の溶菌力のある酵素を含 んでなる、請求の範囲第１５項記載の洗剤組成物。 １７．洗剤１ｇ当たり、０．００１〜０．５アンソン単位のアルカリ性バシラス （Ｂａｃｉｌｌｕｓ）プロテアーゼを更に含んでなる、請求の範囲第１５項又は １６項記載の洗剤組成物。 １８．細菌細胞壁を加水分解するための請求の範囲第１〜８項のいずれかに記載 の酵素調製品の使用。 １９．有害細菌の数を減少するための請求の範囲第１８項記載の使用。 ２０．食品加工中の食品保存剤として、水処理、病院の器具の消毒に対し、又は 衣類の体臭の減少のため、請求の範囲第１９項記載の使用。 ２１．酵素調製品を含有する洗剤含有洗浄水又は洗剤を有しないすすぎ水で衣類 を洗たく又はすすぐことにより、衣類の体臭を減少するために請求の範囲第２０ 項記載の使用。 ２２．洗たく又はすすぎ水が１ｌ当たり１０００〜２０，０００単位の溶菌力の ある酵素を含有する、請求の範囲第１９項記載の使用。 ２１．更に洗たく又はすすぎ水が、好ましくは１ｌ当たり０．０２〜０．１５ア ンソン単位の活性レベルでアルカリ性バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）プロテアー ゼを含んでなる、請求の範囲第２１項又は２２項記載の使用。 ２４．細菌細胞塊を処理する際における、請求の範囲第１８項記載の使用。 ２５．活性化スラッジの処理において、プロトプラスト形成において又は細胞内 的に分泌された化合物の回収において、請求の範囲第２４項記載の使用。 ２６．請求の範囲第１〜８項のいずれかに記載の溶菌力のある酵素調製品を含ん でなるボディーデオドラント。