JPH05310778A - 非ヌクレオチド基を有する３′−誘導されたオリゴヌクレオチド類似体、その製法および使用 - Google Patents
非ヌクレオチド基を有する３′−誘導されたオリゴヌクレオチド類似体、その製法および使用Info
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- JPH05310778A JPH05310778A JP5008256A JP825693A JPH05310778A JP H05310778 A JPH05310778 A JP H05310778A JP 5008256 A JP5008256 A JP 5008256A JP 825693 A JP825693 A JP 825693A JP H05310778 A JPH05310778 A JP H05310778A
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61P31/12—Antivirals
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】
〔式中、Ｒ１は水素、アルキルなど、Ｒ２は水素、ヒド
ロキシルなど、Ｂはヌクレオチド化学における慣用の塩
基、ａはオキシ又はメチレン、ｄ，ｅは０〜５０，ｉは
１〜１０，Ｗはオキソ、セレンオキソ又はチオキソ、Ｖ
はオキシ、チオ又はイミノ、Ｙはオキシ、チオ、イミノ
又はメチレン、Ｙ′はオキシ、チオ、イミノなど、Ｘは
ヒドロキシル又はメルカプト、Ｚはヒドロキシル、メル
カプト、ＳｅＨなど、Ｑは、 を示す〕等の化合物、その製造方法。 【効果】上記類似体は、一本鎖および二本鎖の核酸に対
する特異的なハイブリッド形成性質、増大された血清中
での安定性、良好な溶解性および比活性を有し、ウイル
ス感染症または癌の治療または予防並びにＤＮＡ診断検
査用としても有用である。
ロキシルなど、Ｂはヌクレオチド化学における慣用の塩
基、ａはオキシ又はメチレン、ｄ，ｅは０〜５０，ｉは
１〜１０，Ｗはオキソ、セレンオキソ又はチオキソ、Ｖ
はオキシ、チオ又はイミノ、Ｙはオキシ、チオ、イミノ
又はメチレン、Ｙ′はオキシ、チオ、イミノなど、Ｘは
ヒドロキシル又はメルカプト、Ｚはヒドロキシル、メル
カプト、ＳｅＨなど、Ｑは、 を示す〕等の化合物、その製造方法。 【効果】上記類似体は、一本鎖および二本鎖の核酸に対
する特異的なハイブリッド形成性質、増大された血清中
での安定性、良好な溶解性および比活性を有し、ウイル
ス感染症または癌の治療または予防並びにＤＮＡ診断検
査用としても有用である。
Description
【０００１】本発明は物理学、生物学および薬理学上の
有用な性質を有する新規オリゴヌクレオチド類似体およ
びその製造方法に関する。それらの適用は遺伝子発現の
阻止剤（アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイ
ム、センスオリゴヌクレオチドおよびトリプレックス形
成オリゴヌクレオチド）として、核酸検出用プローブと
しておよび分子生物学での補助剤としてのそれらの使用
に関する。オリゴヌクレオチドは現在ますます、遺伝子
発現阻止剤として使用されている（G. Zon, Pharmaceut
ical Research 5, 539 (1988); J. S. Cohen, Topics i
n Molecular andStructural Biology 12 (1989) Macmil
lan Press; C. Helene and J.J. Toulme,Biochimica et
Biophysica Acta 1049, 99 (1990); E. Uhlmann and
A. Peyman, Chemical Reviews 90, 543 (1990)参照）。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは核酸フラグメントで
あって、その塩基配列は、阻止されるべきｍＲＮＡに対
して相補的である。これらの標的ｍＲＮＡは細胞、ウイ
ルスまたはその他の病原性由来からなることができる。
適当な細胞標的配列は例えば受容体、酵素、免疫調整
剤、イオンチャンネルまたは腫瘍遺伝子の配列である。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いたウイルス複製
の阻止は例えばＲＳＶ（Rous sarcomaウイルス）、ＨＳ
Ｖ−１および−２（ヘルペスシンプレックスウイルス型
ＩおよびII）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）および
インフルエンザウイルスについて記載されている。これ
に関してはウイルス性核酸に対して相補的であるオリゴ
ヌクレオチドが用いられている。逆に、センスオリゴヌ
クレオチドの配列は該オリゴヌクレオチドが、核酸結合
タンパク質または核酸プロセシング酵素を結合（“捕
獲”）しそしてそれ故にそれらの生物活性を阻止するよ
うに設計されている（Helene, 1990）。ここで例として
挙げることができるウイルス性標的は逆転写酵素、ＤＮ
Ａポリメラーゼおよびトランスアクチベータタンパク質
である。トリプレックス形成オリゴヌクレオチドは一般
にそれらの標的としてＤＮＡを有していて、該ＤＮＡに
結合した後にトリプルヘリックス構造を形成する。一般
にｍＲＮＡのプロセシング（切り継ぎ等）およびそのタ
ンパク質への翻訳はアンチセンスオリゴヌクレオチドを
用いて阻止されるが、トリプレックス形成オリゴヌクレ
オチドはＤＮＡの転写または複製を阻止する（Helene e
t al., 1990, Uhlmann and Peyman, 1990）。しかしま
た第１ハイブリッド形成においてアンチセンスオリゴヌ
クレオチドを用いて各一本鎖核酸を結合させて二本鎖に
し、次いでそれを第２ハイブリッド形成においてトリプ
レックス形成オリゴヌクレオチドを用いてトリプレック
ス構造にすることも可能である。この場合には、アンチ
センスおよびトリプレックス結合領域が２種の別個のオ
リゴヌクレオチド中にまたは１種のオリゴヌクレオチド
中のいずれかに含有されうる。リボヌクレアーゼ活性に
よって標的ＲＮＡを分解する、いわゆるリボザイム（J.
J. Rossi and N. Sarver, TIBTECH 8,179 (1990)）は合
成オリゴヌクレオチドのさらに別の適用を示す。
有用な性質を有する新規オリゴヌクレオチド類似体およ
びその製造方法に関する。それらの適用は遺伝子発現の
阻止剤（アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイ
ム、センスオリゴヌクレオチドおよびトリプレックス形
成オリゴヌクレオチド）として、核酸検出用プローブと
しておよび分子生物学での補助剤としてのそれらの使用
に関する。オリゴヌクレオチドは現在ますます、遺伝子
発現阻止剤として使用されている（G. Zon, Pharmaceut
ical Research 5, 539 (1988); J. S. Cohen, Topics i
n Molecular andStructural Biology 12 (1989) Macmil
lan Press; C. Helene and J.J. Toulme,Biochimica et
Biophysica Acta 1049, 99 (1990); E. Uhlmann and
A. Peyman, Chemical Reviews 90, 543 (1990)参照）。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは核酸フラグメントで
あって、その塩基配列は、阻止されるべきｍＲＮＡに対
して相補的である。これらの標的ｍＲＮＡは細胞、ウイ
ルスまたはその他の病原性由来からなることができる。
適当な細胞標的配列は例えば受容体、酵素、免疫調整
剤、イオンチャンネルまたは腫瘍遺伝子の配列である。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いたウイルス複製
の阻止は例えばＲＳＶ（Rous sarcomaウイルス）、ＨＳ
Ｖ−１および−２（ヘルペスシンプレックスウイルス型
ＩおよびII）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）および
インフルエンザウイルスについて記載されている。これ
に関してはウイルス性核酸に対して相補的であるオリゴ
ヌクレオチドが用いられている。逆に、センスオリゴヌ
クレオチドの配列は該オリゴヌクレオチドが、核酸結合
タンパク質または核酸プロセシング酵素を結合（“捕
獲”）しそしてそれ故にそれらの生物活性を阻止するよ
うに設計されている（Helene, 1990）。ここで例として
挙げることができるウイルス性標的は逆転写酵素、ＤＮ
Ａポリメラーゼおよびトランスアクチベータタンパク質
である。トリプレックス形成オリゴヌクレオチドは一般
にそれらの標的としてＤＮＡを有していて、該ＤＮＡに
結合した後にトリプルヘリックス構造を形成する。一般
にｍＲＮＡのプロセシング（切り継ぎ等）およびそのタ
ンパク質への翻訳はアンチセンスオリゴヌクレオチドを
用いて阻止されるが、トリプレックス形成オリゴヌクレ
オチドはＤＮＡの転写または複製を阻止する（Helene e
t al., 1990, Uhlmann and Peyman, 1990）。しかしま
た第１ハイブリッド形成においてアンチセンスオリゴヌ
クレオチドを用いて各一本鎖核酸を結合させて二本鎖に
し、次いでそれを第２ハイブリッド形成においてトリプ
レックス形成オリゴヌクレオチドを用いてトリプレック
ス構造にすることも可能である。この場合には、アンチ
センスおよびトリプレックス結合領域が２種の別個のオ
リゴヌクレオチド中にまたは１種のオリゴヌクレオチド
中のいずれかに含有されうる。リボヌクレアーゼ活性に
よって標的ＲＮＡを分解する、いわゆるリボザイム（J.
J. Rossi and N. Sarver, TIBTECH 8,179 (1990)）は合
成オリゴヌクレオチドのさらに別の適用を示す。
【０００２】適当に標識された核酸フラグメントはＤＮ
Ａ診断検査において、検出すべき核酸に対する特異的ハ
イブリッド形成のためのいわゆるＤＮＡプローブとして
用いられる。ここでは好ましくは放射性でない標識を用
いて、新しい二本鎖の特異的形成が行われる。このよう
にして遺伝的ないし悪性疾患、およびウイルスまたはそ
の他の病原体によって惹起される疾患を発見することが
できる。
Ａ診断検査において、検出すべき核酸に対する特異的ハ
イブリッド形成のためのいわゆるＤＮＡプローブとして
用いられる。ここでは好ましくは放射性でない標識を用
いて、新しい二本鎖の特異的形成が行われる。このよう
にして遺伝的ないし悪性疾患、およびウイルスまたはそ
の他の病原体によって惹起される疾患を発見することが
できる。
【０００３】天然産の形態でのオリゴヌクレオチドは、
多くの前記適用に関してほとんどまたは全く適していな
い。それらはその特異的要件に適するように化学的に修
飾されなければならない。オリゴヌクレオチドが生物系
で例えばウイルス複製阻止のために用いられることがで
きるには、それらは下記の前提条件をみたさなければな
らない。
多くの前記適用に関してほとんどまたは全く適していな
い。それらはその特異的要件に適するように化学的に修
飾されなければならない。オリゴヌクレオチドが生物系
で例えばウイルス複製阻止のために用いられることがで
きるには、それらは下記の前提条件をみたさなければな
らない。
【０００４】１． それらはインビボ条件下で、すなわ
ち血清中で並びに細胞内で十分に高度の安定性を有して
いなければならない。 ２． それらは細胞膜および核膜を通過することができ
なければならない。 ３． それらは阻止効果を発揮させるために生理学的条
件下において塩基特異的手法で標的核酸に結合しなけれ
ばならない。
ち血清中で並びに細胞内で十分に高度の安定性を有して
いなければならない。 ２． それらは細胞膜および核膜を通過することができ
なければならない。 ３． それらは阻止効果を発揮させるために生理学的条
件下において塩基特異的手法で標的核酸に結合しなけれ
ばならない。
【０００５】上記の前提条件はＤＮＡプローブの場合に
は必須ではないが、しかしこれらのオリゴヌクレオチド
は例えば蛍光、化学ルミネッセンス、比色定量法または
特異的染色によって検出可能な手法で誘導されなければ
ならない（Beck and Koester, Anal. Chem. 62, 2258
(1990)）。
は必須ではないが、しかしこれらのオリゴヌクレオチド
は例えば蛍光、化学ルミネッセンス、比色定量法または
特異的染色によって検出可能な手法で誘導されなければ
ならない（Beck and Koester, Anal. Chem. 62, 2258
(1990)）。
【０００６】オリゴヌクレオチドの化学変化（chemical
alteration）は通常、ホスフェートバックボーン、リ
ボース単位またはヌクレオチド塩基を適当な手法で変え
ることによって行われる（Cohen, 1989; Uhlmann and P
eyman, 1990）。頻繁に用いられるさらに別の手法は、
５′−ヒドロキシル基を適当なホスホリル化試薬と反応
させることによるオリゴヌクレオチド５′−複合体の製
造方法である。単に５′−末端で修飾されるオリゴヌク
レオチドは、血清中で分解されるという点で不利であ
る。他方、インターヌクレオチドホスフェート基の全て
が変更される場合には、該オリゴヌクレオチドの性質が
著しく変わることがよくある。例えば、メチルホスフェ
ートオリゴヌクレオチドの水性媒体中における溶解度が
減少し、それに伴ってそれらのハイブリッド形成能力も
減少する。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは非
特異的作用を有し、そのために例えばホモオリゴマーは
またウイルスに対して活性でもある。
alteration）は通常、ホスフェートバックボーン、リ
ボース単位またはヌクレオチド塩基を適当な手法で変え
ることによって行われる（Cohen, 1989; Uhlmann and P
eyman, 1990）。頻繁に用いられるさらに別の手法は、
５′−ヒドロキシル基を適当なホスホリル化試薬と反応
させることによるオリゴヌクレオチド５′−複合体の製
造方法である。単に５′−末端で修飾されるオリゴヌク
レオチドは、血清中で分解されるという点で不利であ
る。他方、インターヌクレオチドホスフェート基の全て
が変更される場合には、該オリゴヌクレオチドの性質が
著しく変わることがよくある。例えば、メチルホスフェ
ートオリゴヌクレオチドの水性媒体中における溶解度が
減少し、それに伴ってそれらのハイブリッド形成能力も
減少する。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは非
特異的作用を有し、そのために例えばホモオリゴマーは
またウイルスに対して活性でもある。
【０００７】アンチセンスオリゴヌクレオチドは一般に
単一極性を有し、通常それはＲＮＡへのハイブリッド形
成中にアンチパラレル性を示す（表１；Ａ参照）。ある
場合例えばα−ヌクレオシド単位から成るオリゴヌクレ
オチドでは、極性がパラレルであることも可能である
（表１；Ｂ）。一般には配列によるが、トリプレックス
形成オリゴヌクレオチドはプリンに富んだ核酸の鎖に関
してパラレル（表１；Ｃ）またはアンチパラレル配向
で、二本鎖核酸に対してハイブリッド形成が可能であ
る。このためには塩基対合モティーフＴ・ＡＴ、Ｇ・Ｇ
Ｃ、Ｃ+・ＧＣ、Ｇ・ＴＡ、ＣMe・ＧＣ、Ａ・ＡＴおよ
びＣPi・ＧＣが主として用いられる。ここでＣ +はプロ
トン化されたシトシン残基であり、ＣMeは５−メチルシ
トシン残基であり、ＣPiはプソイドイソシトシン残基で
ありそして“・”はフーグスティーン（Hoogsteen）型
または逆フーグスティーン（reverse-Hoogsteen）型塩
基対合である。しかし、これらのフーグスティーン型塩
基対合の使用は二本鎖核酸のプリンに富んだ領域に限ら
れている。
単一極性を有し、通常それはＲＮＡへのハイブリッド形
成中にアンチパラレル性を示す（表１；Ａ参照）。ある
場合例えばα−ヌクレオシド単位から成るオリゴヌクレ
オチドでは、極性がパラレルであることも可能である
（表１；Ｂ）。一般には配列によるが、トリプレックス
形成オリゴヌクレオチドはプリンに富んだ核酸の鎖に関
してパラレル（表１；Ｃ）またはアンチパラレル配向
で、二本鎖核酸に対してハイブリッド形成が可能であ
る。このためには塩基対合モティーフＴ・ＡＴ、Ｇ・Ｇ
Ｃ、Ｃ+・ＧＣ、Ｇ・ＴＡ、ＣMe・ＧＣ、Ａ・ＡＴおよ
びＣPi・ＧＣが主として用いられる。ここでＣ +はプロ
トン化されたシトシン残基であり、ＣMeは５−メチルシ
トシン残基であり、ＣPiはプソイドイソシトシン残基で
ありそして“・”はフーグスティーン（Hoogsteen）型
または逆フーグスティーン（reverse-Hoogsteen）型塩
基対合である。しかし、これらのフーグスティーン型塩
基対合の使用は二本鎖核酸のプリンに富んだ領域に限ら
れている。
【０００８】プリンに富んだ標的配列に関するトリプレ
ックス形成オリゴヌクレオチドの可変性を増大させるた
めに、可変極性を有するオリゴヌクレオチドが製造され
た。該オリゴヌクレオチドは（５′５′）−鎖の変化
（表１；Ｅ）または(３′３′)−鎖の変化（これらの変
化は場合により互い違いであることができる（表１；
Ｆ））のために、各場合において反対の鎖のプリンに富
んだ領域を結合させることができる（Ono et al., Bioc
hemistry (1991) 30, 9914）。（３′５′）−スペーサ
ーが組み込まれる場合には極性保持下での鎖の変化が可
能である。
ックス形成オリゴヌクレオチドの可変性を増大させるた
めに、可変極性を有するオリゴヌクレオチドが製造され
た。該オリゴヌクレオチドは（５′５′）−鎖の変化
（表１；Ｅ）または(３′３′)−鎖の変化（これらの変
化は場合により互い違いであることができる（表１；
Ｆ））のために、各場合において反対の鎖のプリンに富
んだ領域を結合させることができる（Ono et al., Bioc
hemistry (1991) 30, 9914）。（３′５′）−スペーサ
ーが組み込まれる場合には極性保持下での鎖の変化が可
能である。
【０００９】さらに、（５′５′）−ループ（表１；
Ｇ）または（３′５′）−もしくは（２′５′）−ルー
プを用いると特殊アンチセンスオリゴヌクレオチドを製
造することが可能であり、そこでは１つの領域がワトソ
ン−クリック（Watson-Crick）型塩基対合によって核酸
の一本鎖を認識しそして第２領域がフーグスティーン型
塩基対合によって、ワトソン−クリック型塩基対合から
生ずる核酸の二本鎖を認識する。従って、このようなア
ンチセンス／トリプレックスオリゴヌクレオチド類似体
を用いると一本鎖核酸上でのトリプレックス形成が可能
である。同様にして、ＤＮＡ結合タンパク質を配列特異
的手法で結合させる二本鎖センスオリゴヌクレオチドが
分子内ワトソン−クリック型塩基対合により製造されう
る（表１；Ｉ）。
Ｇ）または（３′５′）−もしくは（２′５′）−ルー
プを用いると特殊アンチセンスオリゴヌクレオチドを製
造することが可能であり、そこでは１つの領域がワトソ
ン−クリック（Watson-Crick）型塩基対合によって核酸
の一本鎖を認識しそして第２領域がフーグスティーン型
塩基対合によって、ワトソン−クリック型塩基対合から
生ずる核酸の二本鎖を認識する。従って、このようなア
ンチセンス／トリプレックスオリゴヌクレオチド類似体
を用いると一本鎖核酸上でのトリプレックス形成が可能
である。同様にして、ＤＮＡ結合タンパク質を配列特異
的手法で結合させる二本鎖センスオリゴヌクレオチドが
分子内ワトソン−クリック型塩基対合により製造されう
る（表１；Ｉ）。
【００１０】最後に、５′−末端に５′５′−スペーサ
ーを含有するオリゴヌクレオチドが製造されうる。これ
らのオリゴヌクレオチド類似体中において、両方の３′
(２′)−末端は有利なことにホスホリル基を含有するこ
とができる。
ーを含有するオリゴヌクレオチドが製造されうる。これ
らのオリゴヌクレオチド類似体中において、両方の３′
(２′)−末端は有利なことにホスホリル基を含有するこ
とができる。
【００１１】
【表１】
【００１２】
【表２】
【００１３】今まで知られておりかつ表１のＣ〜Ｉに示
された操作原則に従うオリゴヌクレオチド類似体は一般
に３′−末端にヒドロキシル基を有し、そのためにそれ
らは血清中で分解され、大部分は膜を容易に通過せず、
単に５′−末端で容易に誘導されるだけである。
された操作原則に従うオリゴヌクレオチド類似体は一般
に３′−末端にヒドロキシル基を有し、そのためにそれ
らは血清中で分解され、大部分は膜を容易に通過せず、
単に５′−末端で容易に誘導されるだけである。
【００１４】従って、本発明の目的は一本鎖および二本
鎖の核酸に対する特異的ハイブリッド形成性質、増大さ
れた血清安定性、良好な溶解性および比活性を有するオ
リゴヌクレオチド類似体を製造することである。
鎖の核酸に対する特異的ハイブリッド形成性質、増大さ
れた血清安定性、良好な溶解性および比活性を有するオ
リゴヌクレオチド類似体を製造することである。
【００１５】本発明は下記の式ＩＡおよび式ＩＢ
【化７】
【００１６】
【化８】 で表されるオリゴヌクレオチド類似体およびその生理学
的に許容しうる塩に関する。
的に許容しうる塩に関する。
【００１７】上記式中、Ｒ1は水素、Ｃ1〜Ｃ18−アルキ
ル、好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ2〜Ｃ1 8−アル
ケニル、Ｃ2〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ2〜Ｃ18−アルキル
カルボニル、Ｃ3〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ3〜
Ｃ19−アルキニルカルボニル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、
（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルま
たは式II
ル、好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ2〜Ｃ1 8−アル
ケニル、Ｃ2〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ2〜Ｃ18−アルキル
カルボニル、Ｃ3〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ3〜
Ｃ19−アルキニルカルボニル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、
（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルま
たは式II
【化９】 で表される基であり；Ｒ2は水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜
Ｃ18−アルコキシ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ2であ
り；
Ｃ18−アルコキシ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ2であ
り；
【００１８】Ｂはヌクレオチド化学における慣用の塩基
例えば天然塩基例えばアデニン、シトシン、グアニンお
よびチミンまたは非天然塩基例えばプリン、２,６−ジ
アミノプリン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニ
ン、Ｎ4Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6Ｎ6−エタノ−２,６
−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、プソイドイソ
シトシンであり；ａはオキシまたはメチレンであり；
ｄ、ｅ、ｆは互いに独立していて、０〜５０好ましくは
５〜１５の整数であり；ｉは１〜１０好ましくは１〜３
の整数であり；ｒは０または１の整数であり（但しｒが
０である場合にはＶはＹ′でありそしてｉが１より大き
い場合にはｒは１である）；Ｗはオキソ、セレンオキソ
またはチオキソであり；Ｖはオキシ、チオまたはイミノ
であり；Ｙはオキシ、チオ、イミノまたはメチレンであ
り；Ｙ′はオキシ、チオ、イミノ、(ＣＨ2)mまたはＶ
(ＣＨ2)mであり、ここでｍは１〜１８好ましくは１〜６
の整数であり；
例えば天然塩基例えばアデニン、シトシン、グアニンお
よびチミンまたは非天然塩基例えばプリン、２,６−ジ
アミノプリン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニ
ン、Ｎ4Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6Ｎ6−エタノ−２,６
−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、プソイドイソ
シトシンであり；ａはオキシまたはメチレンであり；
ｄ、ｅ、ｆは互いに独立していて、０〜５０好ましくは
５〜１５の整数であり；ｉは１〜１０好ましくは１〜３
の整数であり；ｒは０または１の整数であり（但しｒが
０である場合にはＶはＹ′でありそしてｉが１より大き
い場合にはｒは１である）；Ｗはオキソ、セレンオキソ
またはチオキソであり；Ｖはオキシ、チオまたはイミノ
であり；Ｙはオキシ、チオ、イミノまたはメチレンであ
り；Ｙ′はオキシ、チオ、イミノ、(ＣＨ2)mまたはＶ
(ＣＨ2)mであり、ここでｍは１〜１８好ましくは１〜６
の整数であり；
【００１９】Ｘはヒドロキシルまたはメルカプトであ
り；Ｕはヒドロキシル、メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ1〜Ｃ
18−アルコキシ好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1
〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6
〜Ｃ20−アリール、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜
Ｃ8）−アルキル、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4または式(ＯＣＨ2
ＣＨ2)pＯ(ＣＨ2)qＣＨ2Ｒ11の基であり、ここでＲ3は
Ｃ1〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、
Ｃ6〜Ｃ20−アリール、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ
1〜Ｃ8）−アルキル、−(ＣＨ2)c−〔ＮＨ（ＣＨ2)c〕d
−ＮＲ12Ｒ12（ここでｃは２〜６の整数であり、ｄは０
〜６の整数でありそしてそれぞれのＲ12は独立してい
て、水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルまたはＣ1〜Ｃ4−アルコ
キシ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル好ましくはメトキシエチルで
ある）であり、
り；Ｕはヒドロキシル、メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ1〜Ｃ
18−アルコキシ好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1
〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6
〜Ｃ20−アリール、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜
Ｃ8）−アルキル、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4または式(ＯＣＨ2
ＣＨ2)pＯ(ＣＨ2)qＣＨ2Ｒ11の基であり、ここでＲ3は
Ｃ1〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、
Ｃ6〜Ｃ20−アリール、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ
1〜Ｃ8）−アルキル、−(ＣＨ2)c−〔ＮＨ（ＣＨ2)c〕d
−ＮＲ12Ｒ12（ここでｃは２〜６の整数であり、ｄは０
〜６の整数でありそしてそれぞれのＲ12は独立してい
て、水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルまたはＣ1〜Ｃ4−アルコ
キシ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル好ましくはメトキシエチルで
ある）であり、
【００２０】Ｒ4はＣ1〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1
〜Ｃ8−アルキル特に好ましくはＣ1〜Ｃ4−アルキル、
Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたは（Ｃ6〜Ｃ10）−アリール−
（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルであり、またはＮＲ3Ｒ4の場合
にはＲ3およびそれらを担持している窒素原子と一緒に
なって５〜６−員の複素環式環を示し、該環はさらに
Ｏ、Ｓ、Ｎから成る群より選択される別のヘテロ原子を
含有することができ、ｐは１〜１００好ましくは３〜２
０特に好ましくは３〜８の整数であり、ｑは０〜１８好
ましくは０〜１５の整数であり，Ｒ11は水素または官能
基例えばヒドロキシル、アミノ、ＮＨＲ13、ＣＯＯＨ、
ＣＯＮＨ2、ＣＯＯＲ12（ここでＲ12はＣ1〜Ｃ4−アル
キル好ましくはメチルである）またはハロゲンであり；
〜Ｃ8−アルキル特に好ましくはＣ1〜Ｃ4−アルキル、
Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたは（Ｃ6〜Ｃ10）−アリール−
（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルであり、またはＮＲ3Ｒ4の場合
にはＲ3およびそれらを担持している窒素原子と一緒に
なって５〜６−員の複素環式環を示し、該環はさらに
Ｏ、Ｓ、Ｎから成る群より選択される別のヘテロ原子を
含有することができ、ｐは１〜１００好ましくは３〜２
０特に好ましくは３〜８の整数であり、ｑは０〜１８好
ましくは０〜１５の整数であり，Ｒ11は水素または官能
基例えばヒドロキシル、アミノ、ＮＨＲ13、ＣＯＯＨ、
ＣＯＮＨ2、ＣＯＯＲ12（ここでＲ12はＣ1〜Ｃ4−アル
キル好ましくはメチルである）またはハロゲンであり；
【００２１】Ｓは式III
【化１０】 で表される基であり、ここでｇおよびｇ′は０または１
の整数であり、ｈは０〜１０の整数であり、
の整数であり、ｈは０〜１０の整数であり、
【００２２】ＧはＣ1〜Ｃ12−アルキレン特にＣ2〜Ｃ4
−アルキレン（ここでアルキレンは場合によりハロゲ
ン、アミノ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1
〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルカルボニル
オキシ、Ｃ6〜Ｃ14−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−
Ｃ1〜Ｃ18−アルキルまたはＣ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1
〜Ｃ8−アルコキシにより置換されうる）、Ｃ6〜Ｃ14−
アリール−ジ−Ｃ1〜Ｃ8−アルキレン、Ｃ6〜Ｃ18−ア
リーレン、式（ＣＨ2ＣＨ2Ｖ)αＣＨ2ＣＨ2もしくは
(ＣＨ2Ｖ)αＣＨ2(ここでαは１〜１１好ましくは１
〜５の整数である）の基、式
−アルキレン（ここでアルキレンは場合によりハロゲ
ン、アミノ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1
〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルカルボニル
オキシ、Ｃ6〜Ｃ14−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−
Ｃ1〜Ｃ18−アルキルまたはＣ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1
〜Ｃ8−アルコキシにより置換されうる）、Ｃ6〜Ｃ14−
アリール−ジ−Ｃ1〜Ｃ8−アルキレン、Ｃ6〜Ｃ18−ア
リーレン、式（ＣＨ2ＣＨ2Ｖ)αＣＨ2ＣＨ2もしくは
(ＣＨ2Ｖ)αＣＨ2(ここでαは１〜１１好ましくは１
〜５の整数である）の基、式
【化１１】 （ここでβは１〜６の整数である）の単位または式
【化１２】 の基であり；
【００２３】Ｚ＝Ｚ′はヒドロキシル、メルカプト、Ｓ
ｅＨ、Ｃ1〜Ｃ22−アルコキシ好ましくはＣ6〜Ｃ18−ア
ルコキシ、−Ｏ−(ＣＨ2)b−ＮＲ12Ｒ13（ここでｂは１
〜６の整数であり、そしてＲ13はＣ1〜Ｃ6−アルキルで
あるか、またはＲ12およびＲ13はそれらを担持している
窒素原子と一緒になって３〜６員環を形成する）、Ｃ1
〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6
〜Ｃ20−アリール、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜
Ｃ8）−アルキル好ましくは（Ｃ6〜Ｃ10）−アリール−
（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキル、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−
（Ｃ1〜Ｃ8）−アルコキシ好ましくは（Ｃ6〜Ｃ10）−
アリール−（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ（ここでアリール
はヘテロアリールを包含し、アリールはカルボキシル、
アミノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキルアミノ、ヒドロキ
シル、ハロゲンおよびシアノから成る群より選択される
１、２または３個の同一または相異なる基によって場合
により置換されている）、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルメルカ
プト、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4、式IIIの基または分子内吸収
を好むかまたはＤＮＡプローブ用ラベルとして役立つか
またはオリゴヌクレオチド類似体の標的核酸へのハイブ
リッド形成中に該標的核酸を結合、架橋または分裂によ
り攻撃する基であり；
ｅＨ、Ｃ1〜Ｃ22−アルコキシ好ましくはＣ6〜Ｃ18−ア
ルコキシ、−Ｏ−(ＣＨ2)b−ＮＲ12Ｒ13（ここでｂは１
〜６の整数であり、そしてＲ13はＣ1〜Ｃ6−アルキルで
あるか、またはＲ12およびＲ13はそれらを担持している
窒素原子と一緒になって３〜６員環を形成する）、Ｃ1
〜Ｃ18−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6
〜Ｃ20−アリール、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜
Ｃ8）−アルキル好ましくは（Ｃ6〜Ｃ10）−アリール−
（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキル、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−
（Ｃ1〜Ｃ8）−アルコキシ好ましくは（Ｃ6〜Ｃ10）−
アリール−（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ（ここでアリール
はヘテロアリールを包含し、アリールはカルボキシル、
アミノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキルアミノ、ヒドロキ
シル、ハロゲンおよびシアノから成る群より選択される
１、２または３個の同一または相異なる基によって場合
により置換されている）、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルメルカ
プト、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4、式IIIの基または分子内吸収
を好むかまたはＤＮＡプローブ用ラベルとして役立つか
またはオリゴヌクレオチド類似体の標的核酸へのハイブ
リッド形成中に該標的核酸を結合、架橋または分裂によ
り攻撃する基であり；
【００２４】２′−および３′−位の曲線括弧はＲ2お
よび隣接ホスホリル残基が３′−および２′−位で反対
方向に位置することも可能であることを示しており、そ
して各ヌクレオチドはＤ−またはＬ−配置で存在するこ
とができ、塩基Ｂはα−またはβ−位にあることができ
る。
よび隣接ホスホリル残基が３′−および２′−位で反対
方向に位置することも可能であることを示しており、そ
して各ヌクレオチドはＤ−またはＬ−配置で存在するこ
とができ、塩基Ｂはα−またはβ−位にあることができ
る。
【００２５】好ましいのは式ＩＡおよびＩＢにおいて、
塩基Ｂがβ−位にあり、ヌクレオチドがＤ−配置で存在
し、Ｒ2が２′−位にありそしてａがオキシであるオリ
ゴヌクレオチド類似体である。
塩基Ｂがβ−位にあり、ヌクレオチドがＤ−配置で存在
し、Ｒ2が２′−位にありそしてａがオキシであるオリ
ゴヌクレオチド類似体である。
【００２６】特に好ましいのは式ＩＡおよびＩＢにおい
て、Ｒ1が水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル特にメチル、また
は式IIの基であり；Ｒ2が水素またはヒドロキシル特に
水素であり；ｄ、ｅおよびｆが５〜１５の整数であり；
ｉが１〜３の整数であり；ｍが１〜６の整数特に１であ
り；Ｕがヒドロキシル、メルカプト、Ｃ1〜Ｃ6−アルコ
キシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、ＮＲ3Ｒ4またはＮＨＲ3、
特にヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ6−アルキルであり、こ
こでＲ3がＣ1〜Ｃ8−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ4−ア
ルキルまたはメトキシエチルでありそしてＢ、Ｗ、Ｖ、
Ｙ、Ｙ′、ＸおよびＺが前述の意味を有するオリゴヌク
レオチド類似体である。
て、Ｒ1が水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル特にメチル、また
は式IIの基であり；Ｒ2が水素またはヒドロキシル特に
水素であり；ｄ、ｅおよびｆが５〜１５の整数であり；
ｉが１〜３の整数であり；ｍが１〜６の整数特に１であ
り；Ｕがヒドロキシル、メルカプト、Ｃ1〜Ｃ6−アルコ
キシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、ＮＲ3Ｒ4またはＮＨＲ3、
特にヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ6−アルキルであり、こ
こでＲ3がＣ1〜Ｃ8−アルキル好ましくはＣ1〜Ｃ4−ア
ルキルまたはメトキシエチルでありそしてＢ、Ｗ、Ｖ、
Ｙ、Ｙ′、ＸおよびＺが前述の意味を有するオリゴヌク
レオチド類似体である。
【００２７】式ＩＡおよびＩＢにおいてＶ、Ｙ′および
Ｙがオキシの意味を有するオリゴヌクレオチド類似体が
特に好ましい。さらに特に好ましいのは、式ＩＡおよび
ＩＢにおいてＶ、Ｙ、Ｙ′およびＷがオキシまたはオキ
ソの意味を有するオリゴヌクレオチド類似体である。極
めて特に好ましいのは式ＩＡおよびＩＢにおいてＶ、
Ｙ、Ｙ′、ＷおよびＵがオキシ、オキソまたはヒドロキ
シルの意味を有するオリゴヌクレオチド類似体である。
さらに、式ＩＡおよびＩＢにおいてＲ1が水素であるオ
リゴヌクレオチド類似体も好ましい。特に好ましいのは
式ＩＡおよびＩＢにおいてＵ、Ｖ，Ｗ、Ｘ、Ｙ′および
Ｙがオキシ、オキソまたはヒドロキシルの意味を有しそ
してＲ1が水素であるオリゴヌクレオチド類似体であ
る。極めて特に好ましいのはｒが０であり、ＶがＹ′と
同じでありそしてＲ1が式IIの意味を有する式ＩＡのオ
リゴヌクレオチドである。
Ｙがオキシの意味を有するオリゴヌクレオチド類似体が
特に好ましい。さらに特に好ましいのは、式ＩＡおよび
ＩＢにおいてＶ、Ｙ、Ｙ′およびＷがオキシまたはオキ
ソの意味を有するオリゴヌクレオチド類似体である。極
めて特に好ましいのは式ＩＡおよびＩＢにおいてＶ、
Ｙ、Ｙ′、ＷおよびＵがオキシ、オキソまたはヒドロキ
シルの意味を有するオリゴヌクレオチド類似体である。
さらに、式ＩＡおよびＩＢにおいてＲ1が水素であるオ
リゴヌクレオチド類似体も好ましい。特に好ましいのは
式ＩＡおよびＩＢにおいてＵ、Ｖ，Ｗ、Ｘ、Ｙ′および
Ｙがオキシ、オキソまたはヒドロキシルの意味を有しそ
してＲ1が水素であるオリゴヌクレオチド類似体であ
る。極めて特に好ましいのはｒが０であり、ＶがＹ′と
同じでありそしてＲ1が式IIの意味を有する式ＩＡのオ
リゴヌクレオチドである。
【００２８】繰返し生ずる残基例えばＲ2、Ｂ、ａ、
ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｇ′、ｈ、Ｗ、Ｖ、Ｙ、Ｙ′、Ｕ、Ｒ
3、Ｒ4、ｐ、ｑ、ＧおよびＺは互いに独立していて、同
一または相異なる意味を有する。すなわち、例えばそれ
ぞれのＶは互いに独立していて、オキシ、チオまたはイ
ミノである。ハロゲンはフッ素、塩素または臭素である
のが好ましい。ヘテロアリールは環系に１個または２個
のＮ原子および／または１個のＳまたはＯ原子を含有す
る単環式または二環式（Ｃ3〜Ｃ9）−ヘテロ芳香族の基
を意味するものと解される。
ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｇ′、ｈ、Ｗ、Ｖ、Ｙ、Ｙ′、Ｕ、Ｒ
3、Ｒ4、ｐ、ｑ、ＧおよびＺは互いに独立していて、同
一または相異なる意味を有する。すなわち、例えばそれ
ぞれのＶは互いに独立していて、オキシ、チオまたはイ
ミノである。ハロゲンはフッ素、塩素または臭素である
のが好ましい。ヘテロアリールは環系に１個または２個
のＮ原子および／または１個のＳまたはＯ原子を含有す
る単環式または二環式（Ｃ3〜Ｃ9）−ヘテロ芳香族の基
を意味するものと解される。
【００２９】細胞内吸収を促進させる基の例としては種
々の脂肪親和性基例えば−Ｏ−(ＣＨ2)x−ＣＨ3（ここ
でｘは６〜１８の整数である）、−Ｏ−(ＣＨ2)n−ＣＨ
＝ＣＨ−(ＣＨ2)m−ＣＨ3（ここでｎおよびｍは互いに
独立していて３〜１２の整数である）、−Ｏ−(ＣＨ2Ｃ
Ｈ2Ｏ)4−(ＣＨ2)9−ＣＨ3、−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)8−
(ＣＨ2)13−ＣＨ3および−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)7−(ＣＨ
2)15−ＣＨ3およびまたステロイド残基例えばコレステ
リル、天然担体系例えば胆汁酸、葉酸、２−（Ｎ−アル
キル，Ｎ−アルコキシ）−アミノアントラキノンを利用
する複合体および対応する受容体のペプチドとマンノー
スとの複合体がある。ここで該ペプチドは受容体仲介に
よってオリゴヌクレオチドのエンドサイト−シスを行
い、その例としてはＥＧＦ（表皮成長因子）、ブラジキ
ニンおよびＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）がある。標
識基は例えばダンシル（＝Ｎ−ジメチル−１−アミノナ
フチル−５−スルホニル）誘導体、フルオレセイン誘導
体またはクマリン誘導体の蛍光基または例えばアクリジ
ン誘導体の化学ルミネセンス基並びにＥＬＩＳＡにより
検出可能なジゴキシゲニン系、ビオチン／アビジン系に
より検出可能なビオチン基または検出可能レポーター基
を用いてその後に誘導体を合成させる官能基含有リンカ
ーアーム例えばアクリジニウム活性エステルと反応して
化学ルミネセンスプローブを形成させるアミノアルキル
リンカーを意味するものと解される。代表的な標識基は
下記のとおりである。
々の脂肪親和性基例えば−Ｏ−(ＣＨ2)x−ＣＨ3（ここ
でｘは６〜１８の整数である）、−Ｏ−(ＣＨ2)n−ＣＨ
＝ＣＨ−(ＣＨ2)m−ＣＨ3（ここでｎおよびｍは互いに
独立していて３〜１２の整数である）、−Ｏ−(ＣＨ2Ｃ
Ｈ2Ｏ)4−(ＣＨ2)9−ＣＨ3、−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)8−
(ＣＨ2)13−ＣＨ3および−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)7−(ＣＨ
2)15−ＣＨ3およびまたステロイド残基例えばコレステ
リル、天然担体系例えば胆汁酸、葉酸、２−（Ｎ−アル
キル，Ｎ−アルコキシ）−アミノアントラキノンを利用
する複合体および対応する受容体のペプチドとマンノー
スとの複合体がある。ここで該ペプチドは受容体仲介に
よってオリゴヌクレオチドのエンドサイト−シスを行
い、その例としてはＥＧＦ（表皮成長因子）、ブラジキ
ニンおよびＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）がある。標
識基は例えばダンシル（＝Ｎ−ジメチル−１−アミノナ
フチル−５−スルホニル）誘導体、フルオレセイン誘導
体またはクマリン誘導体の蛍光基または例えばアクリジ
ン誘導体の化学ルミネセンス基並びにＥＬＩＳＡにより
検出可能なジゴキシゲニン系、ビオチン／アビジン系に
より検出可能なビオチン基または検出可能レポーター基
を用いてその後に誘導体を合成させる官能基含有リンカ
ーアーム例えばアクリジニウム活性エステルと反応して
化学ルミネセンスプローブを形成させるアミノアルキル
リンカーを意味するものと解される。代表的な標識基は
下記のとおりである。
【００３０】
【化１３】
【００３１】核酸に結合するか、または挿入および／ま
たは分裂または架橋を行うオリゴヌクレオチド類似体は
例えばアクリジン、プソラレン、フェナンスリジン、ナ
フトキノン、ダウノマイシンまたはクロロエチルアミノ
アリール複合体を含有する。代表的な挿入ないし架橋を
行う残基は下記のとおりである。
たは分裂または架橋を行うオリゴヌクレオチド類似体は
例えばアクリジン、プソラレン、フェナンスリジン、ナ
フトキノン、ダウノマイシンまたはクロロエチルアミノ
アリール複合体を含有する。代表的な挿入ないし架橋を
行う残基は下記のとおりである。
【００３２】
【化１４】
【００３３】
【化１５】
【００３４】モルホリニルおよびイミダゾリジニル基は
ＮＲ3Ｒ4基の例として挙げることができる。ここでＲ3
およびＲ4はそれらを担持している窒素原子と一緒にな
って５〜６員の複素環式環を形成し、それはさらに別の
ヘテロ原子を含有する。
ＮＲ3Ｒ4基の例として挙げることができる。ここでＲ3
およびＲ4はそれらを担持している窒素原子と一緒にな
って５〜６員の複素環式環を形成し、それはさらに別の
ヘテロ原子を含有する。
【００３５】本発明はα−およびβ−Ｄ−またはＬ−リ
ボフラノシド、α−およびβ−Ｄ−またはＬ−デオキシ
リボフラノシドおよび対応する炭素環式５員環類似体に
限定されるのではなくて、その他の糖成分例えば環の拡
張したおよび環の縮小した糖、非環状糖誘導体または別
の型の適当な糖誘導体から成るオリゴヌクレオチド類似
体についてもまた有効である。さらに本発明は例として
式ＩＡおよびＩＢに記載されているホスフェート基の誘
導体に限定されるのではなくて、さらにまた知られてい
るジホスホ誘導体にも関する。
ボフラノシド、α−およびβ−Ｄ−またはＬ−デオキシ
リボフラノシドおよび対応する炭素環式５員環類似体に
限定されるのではなくて、その他の糖成分例えば環の拡
張したおよび環の縮小した糖、非環状糖誘導体または別
の型の適当な糖誘導体から成るオリゴヌクレオチド類似
体についてもまた有効である。さらに本発明は例として
式ＩＡおよびＩＢに記載されているホスフェート基の誘
導体に限定されるのではなくて、さらにまた知られてい
るジホスホ誘導体にも関する。
【００３６】式ＩＡのオリゴヌクレオチド類似体は１個
以上の５′５′−スペーサー（５′５′Ｓ）および場合
によりさらに１個以上の３′３′−スペーサー(３′
３′Ｓ)または２′２′−スペーサーを有し、それぞれ
は極性の変化をもたらす。式ＩＢのオリゴヌクレオチド
類似体は３′５′−スペーサー（３′５′Ｓ）または
（２′５′Ｓ）を有し、それは極性に影響を及ぼさない
が、しかしオリゴヌクレオチド類似体の逆折りたたみ
（backfolding）または鎖の変化を可能にする。
以上の５′５′−スペーサー（５′５′Ｓ）および場合
によりさらに１個以上の３′３′−スペーサー(３′
３′Ｓ)または２′２′−スペーサーを有し、それぞれ
は極性の変化をもたらす。式ＩＢのオリゴヌクレオチド
類似体は３′５′−スペーサー（３′５′Ｓ）または
（２′５′Ｓ）を有し、それは極性に影響を及ぼさない
が、しかしオリゴヌクレオチド類似体の逆折りたたみ
（backfolding）または鎖の変化を可能にする。
【００３７】Ｓの例としてはプロパン−１,３−ジオー
ルホスフェート、２−ベンジル−および２−オクタデシ
ル−オキシプロパン−１,３−ジオールホスフェート、
トリエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコー
ルホスフェートがあり、それらは場合によりさらに反復
されうる。複素環式塩基およびフェニレンジアルキレン
基を有していないヌクレオチド類似体はＳ特に（３′
３′Ｓ）のさらに別の好ましい態様である。位相数学的
理由のために、一般的には（５′５′Ｓ）が（３′３′
Ｓ）より長い。すなわち、（５′５′Ｓ）は多くて２０
〜４５好ましくは２４〜３６個の非分枝状連鎖を有する
が、一方（３′３′Ｓ）は単に５〜１５好ましくは６〜
１０個の非分子状連鎖を有するだけであって、鎖の変化
がなされるものと想定される。他方、例えば核酸の一本
鎖上にトリプレックスを形成させるにはＳを利用してオ
リゴヌクレオチド類似体を逆折りたたみ処理する。Ｓの
長さは２〜８好ましくは４〜５個のヌクレオチド単位に
相当するのが有利である。ここでは例としてペンタ（２
−ベンジルオキシ−１,３−プロパンジオール）ヘキサ
ホスフェートおよびヘキサ（プロパン−１,３−ジオー
ル）ペンタホスフェートを挙げることができ、それぞれ
は（５′５′Ｓ）または（３′５′Ｓ）連鎖をもたらす
ことができる。
ルホスフェート、２−ベンジル−および２−オクタデシ
ル−オキシプロパン−１,３−ジオールホスフェート、
トリエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコー
ルホスフェートがあり、それらは場合によりさらに反復
されうる。複素環式塩基およびフェニレンジアルキレン
基を有していないヌクレオチド類似体はＳ特に（３′
３′Ｓ）のさらに別の好ましい態様である。位相数学的
理由のために、一般的には（５′５′Ｓ）が（３′３′
Ｓ）より長い。すなわち、（５′５′Ｓ）は多くて２０
〜４５好ましくは２４〜３６個の非分枝状連鎖を有する
が、一方（３′３′Ｓ）は単に５〜１５好ましくは６〜
１０個の非分子状連鎖を有するだけであって、鎖の変化
がなされるものと想定される。他方、例えば核酸の一本
鎖上にトリプレックスを形成させるにはＳを利用してオ
リゴヌクレオチド類似体を逆折りたたみ処理する。Ｓの
長さは２〜８好ましくは４〜５個のヌクレオチド単位に
相当するのが有利である。ここでは例としてペンタ（２
−ベンジルオキシ−１,３−プロパンジオール）ヘキサ
ホスフェートおよびヘキサ（プロパン−１,３−ジオー
ル）ペンタホスフェートを挙げることができ、それぞれ
は（５′５′Ｓ）または（３′５′Ｓ）連鎖をもたらす
ことができる。
【００３８】生物学的オリゴヌクレオチドの合成に関し
て、式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド類似体の製
造は、場合により自動合成装置を用いて溶液中または好
ましくは固相で実施される。
て、式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド類似体の製
造は、場合により自動合成装置を用いて溶液中または好
ましくは固相で実施される。
【００３９】３′−末端にホスフェートまたはホスフェ
ートエステル基を有するオリゴヌクレオチドの固相合成
は、カルテルス（M.D. Matteucci and M.H. Caruthers,
J.Am. Chem. Soc. 103, 3185 (1981)）の標準的なホス
ホルアミダイト化学によっては可能ではない。その理由
は第１ヌクレオチド単位が３′−ヒドロキシル基を介し
て固形支持体に結合され、そのために該合成からは３′
−ヒドロキシル基を有するオリゴヌクレオチドが常に生
成するからである。固形法に基づく種々の手法が今まで
に記載されているが、しかしそれらの手法は全て面倒で
あって、例えばホスフェートエステルまたはアルキルホ
スホネートのような誘導体を製造するのに用いることが
できない場合が多い（R. Eritja et al., Tetrahedron
Lett.32, 1511 (1991); P. Kumar et al., Tetrahedron
Lett. 32, 967 (1991)；W.T.Markiewicz and T.K. Wyr
zykiewicz, Phosphorus, Sulfur and Silicon 51/52,37
4 (1990); E. Felder et al., Tetrahedron Lett. 25,
3967 (1984); R. Lohrmann and J. Ruth, DNA 3, 122
(1984)）。
ートエステル基を有するオリゴヌクレオチドの固相合成
は、カルテルス（M.D. Matteucci and M.H. Caruthers,
J.Am. Chem. Soc. 103, 3185 (1981)）の標準的なホス
ホルアミダイト化学によっては可能ではない。その理由
は第１ヌクレオチド単位が３′−ヒドロキシル基を介し
て固形支持体に結合され、そのために該合成からは３′
−ヒドロキシル基を有するオリゴヌクレオチドが常に生
成するからである。固形法に基づく種々の手法が今まで
に記載されているが、しかしそれらの手法は全て面倒で
あって、例えばホスフェートエステルまたはアルキルホ
スホネートのような誘導体を製造するのに用いることが
できない場合が多い（R. Eritja et al., Tetrahedron
Lett.32, 1511 (1991); P. Kumar et al., Tetrahedron
Lett. 32, 967 (1991)；W.T.Markiewicz and T.K. Wyr
zykiewicz, Phosphorus, Sulfur and Silicon 51/52,37
4 (1990); E. Felder et al., Tetrahedron Lett. 25,
3967 (1984); R. Lohrmann and J. Ruth, DNA 3, 122
(1984)）。
【００４０】本発明は式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレ
オチド類似体の製造方法に関する。それは ａ） 第１反応サイクルにおいて３′(２′)−末端リン
（Ｖ）基および遊離５′−ヒドロキシルまたはメルカプ
ト基を有するヌクレオチド単位を、３′(２′)位にリン
（III）またはリン（Ｖ）基またはその活性誘導体を有
するさらに別のヌクレオチド単位と反応させるか、また
はスペーサー基の導入を可能にする試薬と反応させ、次
のサイクルにおいて３′(２′)−または５′−末端リン
（III）またはリン（Ｖ）基またはその活性誘導体を有
するヌクレオチド単位を、５′−または３′(２′)−末
端遊離ヒドロキシルまたはメルカプト基を有するさらに
別のヌクレオチド単位と反応させるか、または ｂ） 同様の手法で各フラグメントを用いてオリゴヌク
レオチド類似体を構成し、そして上記（ａ）または
（ｂ）によって得られたオリゴヌクレオチド中に他の官
能基保護のために一時的に導入された保護基を除去し、
こうして得られた式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチ
ド類似体を、適切な場合にはその生理学的に許容しうる
塩に変換することからなる。
オチド類似体の製造方法に関する。それは ａ） 第１反応サイクルにおいて３′(２′)−末端リン
（Ｖ）基および遊離５′−ヒドロキシルまたはメルカプ
ト基を有するヌクレオチド単位を、３′(２′)位にリン
（III）またはリン（Ｖ）基またはその活性誘導体を有
するさらに別のヌクレオチド単位と反応させるか、また
はスペーサー基の導入を可能にする試薬と反応させ、次
のサイクルにおいて３′(２′)−または５′−末端リン
（III）またはリン（Ｖ）基またはその活性誘導体を有
するヌクレオチド単位を、５′−または３′(２′)−末
端遊離ヒドロキシルまたはメルカプト基を有するさらに
別のヌクレオチド単位と反応させるか、または ｂ） 同様の手法で各フラグメントを用いてオリゴヌク
レオチド類似体を構成し、そして上記（ａ）または
（ｂ）によって得られたオリゴヌクレオチド中に他の官
能基保護のために一時的に導入された保護基を除去し、
こうして得られた式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチ
ド類似体を、適切な場合にはその生理学的に許容しうる
塩に変換することからなる。
【００４１】固相合成での出発成分としては式IV Ｄ−Ｘ′−ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ(Ｏ)x−ＣＨ2ＣＨ2−Ａ−Ｔ (IV) で表される固形支持体が用いられる。上記式中、Ａはリ
ンカーアームであって、それは例えばジカルボン酸、ジ
オール、アルキルアミン、ジカルボン酸モノアルキルア
ミド、酸アミドまたは式 −Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＲ)Ｏ− (ここでＲは水素であるか、または場合により−ＣＮに
よって置換されているＣ1〜Ｃ6−アルキル好ましくはメ
チルまたは２−シアノエチルである）を有するホスフェ
ートの残基であり、Ｔは固体支持体であって、例えばＣ
ＰＧ(controlledpore glass）、シリカゲルまたは有機
樹脂例えばポリスチレン（ＰＳ）またはＰＳとポリエチ
レングリコール（ＰＯＥ）とのグラフトコポリマーのよ
うな物質から成り、側鎖が官能基例えばヒドロキシル、
アミノ、ハロゲンまたはＣＯＯＨによって修飾されてお
り、ＤはリンカーアームＡおよびＸ′−ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ
(Ｏ) x−ＣＨ2ＣＨ2−基（ここでｘは０、１または２で
ありそしてＸ′はオキシまたはチオである）を分解せず
に除去されうる保護基（Bioorg, Chem. 14 (1986) 274
〜325参照）例えば４−メトキシテトラヒドロピラニル
およびジメトキシトリチル好ましくはジメトキシトリチ
ルである。
ンカーアームであって、それは例えばジカルボン酸、ジ
オール、アルキルアミン、ジカルボン酸モノアルキルア
ミド、酸アミドまたは式 −Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＲ)Ｏ− (ここでＲは水素であるか、または場合により−ＣＮに
よって置換されているＣ1〜Ｃ6−アルキル好ましくはメ
チルまたは２−シアノエチルである）を有するホスフェ
ートの残基であり、Ｔは固体支持体であって、例えばＣ
ＰＧ(controlledpore glass）、シリカゲルまたは有機
樹脂例えばポリスチレン（ＰＳ）またはＰＳとポリエチ
レングリコール（ＰＯＥ）とのグラフトコポリマーのよ
うな物質から成り、側鎖が官能基例えばヒドロキシル、
アミノ、ハロゲンまたはＣＯＯＨによって修飾されてお
り、ＤはリンカーアームＡおよびＸ′−ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ
(Ｏ) x−ＣＨ2ＣＨ2−基（ここでｘは０、１または２で
ありそしてＸ′はオキシまたはチオである）を分解せず
に除去されうる保護基（Bioorg, Chem. 14 (1986) 274
〜325参照）例えば４−メトキシテトラヒドロピラニル
およびジメトキシトリチル好ましくはジメトキシトリチ
ルである。
【００４２】固形支持体Ｔを化学結合（アミド、とりわ
けエステル）により硫黄含有基に結合させるリンカーア
ームＡ（Damka et al., Nucleic Acids Res. 18, 3813
(1990)参照）はコハク酸残基（Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ2ＣＨ2
−Ｃ(Ｏ)−)、シュウ酸残基（Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ(Ｏ)−)、
アルキルアミン好ましくはＬＣＡＡ（長鎖アルキルアミ
ン）またはポリエチレングリコールが好ましい。コハク
酸残基が特に好ましい。特別な場合には、例えばアンモ
ニアによる長い処理に耐えない置換基との組合せではよ
り不安定なリンカー例えばオキサリルリンカーが有利で
ある。式IVa- cの固形支持体の製造は実施例１に記載さ
れている。
けエステル）により硫黄含有基に結合させるリンカーア
ームＡ（Damka et al., Nucleic Acids Res. 18, 3813
(1990)参照）はコハク酸残基（Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ2ＣＨ2
−Ｃ(Ｏ)−)、シュウ酸残基（Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ(Ｏ)−)、
アルキルアミン好ましくはＬＣＡＡ（長鎖アルキルアミ
ン）またはポリエチレングリコールが好ましい。コハク
酸残基が特に好ましい。特別な場合には、例えばアンモ
ニアによる長い処理に耐えない置換基との組合せではよ
り不安定なリンカー例えばオキサリルリンカーが有利で
ある。式IVa- cの固形支持体の製造は実施例１に記載さ
れている。
【００４３】
【表３】
【００４４】固相合成はホスフェートトリエステル法、
Ｈ−ホスホネート法またはホスホルアミダイト法好まし
くはホスホルアミダイト法によって実施することができ
る（E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14, 274 (1986)参
照）。保護基Ｄは常にまず最初にメチレンクロリド中の
酸例えばトリフルオロ酢酸によって式IVの支持体から除
去される。ホスホルアミダイト法の場合には、こうして
得られた式IV′ ＨＸ′−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ(Ｏ)x−ＣＨ2ＣＨ2−Ａ−Ｔ (IV′) （式中、ｘ、Ｘ′、ＡおよびＴは前述の意味を有する）
の支持体を弱酸例えばテトラゾールの存在下において式
Ｖ
Ｈ−ホスホネート法またはホスホルアミダイト法好まし
くはホスホルアミダイト法によって実施することができ
る（E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14, 274 (1986)参
照）。保護基Ｄは常にまず最初にメチレンクロリド中の
酸例えばトリフルオロ酢酸によって式IVの支持体から除
去される。ホスホルアミダイト法の場合には、こうして
得られた式IV′ ＨＸ′−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ(Ｏ)x−ＣＨ2ＣＨ2−Ａ−Ｔ (IV′) （式中、ｘ、Ｘ′、ＡおよびＴは前述の意味を有する）
の支持体を弱酸例えばテトラゾールの存在下において式
Ｖ
【化１６】 （式中、Ｂ′はＢであって、Ｂに存在するいずれものＮ
Ｈ2基は保護されることが可能であり；Ｒは穏和な条件
下で除去されうる保護基例えば４−メトキシテトラヒド
ロピラニルまたはジメトキシトリチルであり；Ｒ2は水
素、アルコキシ、ハロゲンまたは保護されたヒドロキシ
ルもしくはアミノ基でありそしてＲ5およびＲ6は互いに
独立してＣ1〜Ｃ12−アルキルであるか、または両残基
が一緒になって５〜６員環を形成し；Ｙ″はオキシ、チ
オまたは(ＣＨ2)mでありそしてａ、ｍ、ＶおよびＺは前
述の意味を有する）のヌクレオシドホスホルアミダイト
と縮合させる。
Ｈ2基は保護されることが可能であり；Ｒは穏和な条件
下で除去されうる保護基例えば４−メトキシテトラヒド
ロピラニルまたはジメトキシトリチルであり；Ｒ2は水
素、アルコキシ、ハロゲンまたは保護されたヒドロキシ
ルもしくはアミノ基でありそしてＲ5およびＲ6は互いに
独立してＣ1〜Ｃ12−アルキルであるか、または両残基
が一緒になって５〜６員環を形成し；Ｙ″はオキシ、チ
オまたは(ＣＨ2)mでありそしてａ、ｍ、ＶおよびＺは前
述の意味を有する）のヌクレオシドホスホルアミダイト
と縮合させる。
【００４５】引続き、こうして得られた支持体をそれ自
体知られた手法でヨウ素水(Ｗ＝Ｏ)またはＴＥＴＤ（テ
トラエチルチウラムジスルフィド）または元素状硫黄
（Ｗ＝Ｓ）またはセレン（Ｗ＝Ｓｅ）を用いて酸化して
式VII
体知られた手法でヨウ素水(Ｗ＝Ｏ)またはＴＥＴＤ（テ
トラエチルチウラムジスルフィド）または元素状硫黄
（Ｗ＝Ｓ）またはセレン（Ｗ＝Ｓｅ）を用いて酸化して
式VII
【化１７】 （式中、Ｒ、Ｖ、Ｂ′、Ｒ2′、Ｚ、Ｘ′、Ｗ、Ｙ″、
ＡおよびＴは前述の意味を有する）の誘導された支持体
にする。式VIIa
ＡおよびＴは前述の意味を有する）の誘導された支持体
にする。式VIIa
【化１８】 の支持体を製造するのが好ましい。
【００４６】式Ｖのホスホルアミダイトは例えば、式VI
【化１９】 （式中、Ｒ7およびＲ8はＲ5およびＲ6に等しく、ａ、
Ｒ、Ｖ、Ｂ′、Ｒ2′、Ｙ″、Ｒ5およびＲ6は前述の意
味を有する）のビスアミダイトから、Ｚがアルコキシま
たはアルキルメルカプトである場合には、テトラゾール
触媒作用を利用して対応するアルコールまたはチオアル
コールとの反応（実施例２、方法Ａ）により得ることが
できる（J.E. Marugg et al., Tetrahedron Lett. 127,
2271 (1986)参照）。好ましいビスアミダイトは式VIa
Ｒ、Ｖ、Ｂ′、Ｒ2′、Ｙ″、Ｒ5およびＲ6は前述の意
味を有する）のビスアミダイトから、Ｚがアルコキシま
たはアルキルメルカプトである場合には、テトラゾール
触媒作用を利用して対応するアルコールまたはチオアル
コールとの反応（実施例２、方法Ａ）により得ることが
できる（J.E. Marugg et al., Tetrahedron Lett. 127,
2271 (1986)参照）。好ましいビスアミダイトは式VIa
【化２０】 で表されるものである。
【００４７】このようにして例えば下記の式VIIIa-mの
アミダイトが製造された。
アミダイトが製造された。
【化２１】 〔式中、Ｒ5およびＲ6は前述の意味を有し、Ｚは下記
ａ）〜ｍ） ａ） Ｏ−ＣＨ2ＣＨ3、 ｂ） Ｏ−ｉ−Ｃ3Ｈ7、 ｃ） Ｏ−ｎ−Ｃ6Ｈ13、 ｄ） Ｏ−ｎ−Ｃ18Ｈ37、
ａ）〜ｍ） ａ） Ｏ−ＣＨ2ＣＨ3、 ｂ） Ｏ−ｉ−Ｃ3Ｈ7、 ｃ） Ｏ−ｎ−Ｃ6Ｈ13、 ｄ） Ｏ−ｎ−Ｃ18Ｈ37、
【００４８】
【化２２】 ｇ〜ｋ） 式IIIの残基であって、その際 ｇ）の場合はｐ＝３およびｑ＝０、 ｈ）の場合はｐ＝４およびｑ＝９、 ｉ）の場合はｐ＝５およびｑ＝４そして ｋ）の場合はｐ＝８およびｑ＝１３、 ｌ） ＣＨ3
【化２３】 の意味を有しそしてＢ′はａ）、ｃ）およびｄ）の場合
にはＣｙｔi-Buであり、ｂ）およびｌ）の場合にはＴｈ
ｙでありそしてｅ）〜ｋ）およびｍ）の場合にはＣｙｔ
Bzである〕。
にはＣｙｔi-Buであり、ｂ）およびｌ）の場合にはＴｈ
ｙでありそしてｅ）〜ｋ）およびｍ）の場合にはＣｙｔ
Bzである〕。
【００４９】支持体を取り込ませるための別法は式IX
【化２４】 〔式中、Ｒ9およびＲ10は互いに独立していて、Ｃｌ、
ＮＲ5Ｒ6、ＮＲ7Ｒ8、Ｚ″またはＵ′であり、Ｕ′はＣ
1〜Ｃ4−アルキルまたは保護基として存在するヒドロキ
シル基であり、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は前述の意味を
有し、Ｚ″＝Ｚであるが、但しヒドロキシル、メルカプ
トおよびＳｅＨは保護された誘導体例えばＹ″−Ｇ′−
Ｘ′−ＤＭＴｒ（ここでＤＭＴｒはジメトキシトリチル
であり、Ｘ′−Ｙ′′′＝オキシまたはチオでありそし
てＧ′は（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)αＣＨ2ＣＨ2またはＣＨ2Ｃ
Ｈ(ＯＲ′)ＣＨ2であって、ここでのＲ′はＣ1〜Ｃ18−
アルキル、Ｃ6〜Ｃ14−アリールまたはＣ6〜Ｃ14−アリ
ール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルでありそしてαは１〜１１の
整数である）としてまたはＯ−ＣＨ2ＣＨ2−ＣＮ、Ｏ−
ＣＨ3、Ｓ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2Ｓ−ＣＨ2
ＣＨ2−Ｏ−Ｄまたは
ＮＲ5Ｒ6、ＮＲ7Ｒ8、Ｚ″またはＵ′であり、Ｕ′はＣ
1〜Ｃ4−アルキルまたは保護基として存在するヒドロキ
シル基であり、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は前述の意味を
有し、Ｚ″＝Ｚであるが、但しヒドロキシル、メルカプ
トおよびＳｅＨは保護された誘導体例えばＹ″−Ｇ′−
Ｘ′−ＤＭＴｒ（ここでＤＭＴｒはジメトキシトリチル
であり、Ｘ′−Ｙ′′′＝オキシまたはチオでありそし
てＧ′は（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)αＣＨ2ＣＨ2またはＣＨ2Ｃ
Ｈ(ＯＲ′)ＣＨ2であって、ここでのＲ′はＣ1〜Ｃ18−
アルキル、Ｃ6〜Ｃ14−アリールまたはＣ6〜Ｃ14−アリ
ール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルでありそしてαは１〜１１の
整数である）としてまたはＯ−ＣＨ2ＣＨ2−ＣＮ、Ｏ−
ＣＨ3、Ｓ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2Ｓ−ＣＨ2
ＣＨ2−Ｏ−Ｄまたは
【００５０】
【化２５】 として存在しなければならない〕のホスフィチル化試薬
を式Ｘ
を式Ｘ
【化２６】 （式中、Ｖ、Ｂ′、Ｒ2′およびＲは前述の意味を有し
そしてＹ′′′はオキシまたはチオである）で表される
遊離３′(２′)−基を有するヌクレオシドと反応させ、
次いで得られた化合物を縮合剤例えばテトラゾール（Ｒ
9、Ｒ10＝ＮＲ5Ｒ 6またはＮＲ7Ｒ8の場合）またはジイ
ソプロピルアミン(Ｒ9、Ｒ10＝Ｃｌの場合)の存在下で
式IV′の支持体上に縮合させることからなる。その後ヨ
ウ素水または硫黄またはセレンで酸化すると式VIIaの化
合物になる。ここで保護基Ｒを除去することができそし
てオリゴヌクレオチド合成が知られた手法で続けられ
る。合成の終りには各保護基が、得られた支持体結合の
オリゴヌクレオチド類似体から知られた手法で除去さ
れ、次いで本発明による式ＩＡまたはＩＢのオリゴヌク
レオチド類似体が支持体から分裂される。
そしてＹ′′′はオキシまたはチオである）で表される
遊離３′(２′)−基を有するヌクレオシドと反応させ、
次いで得られた化合物を縮合剤例えばテトラゾール（Ｒ
9、Ｒ10＝ＮＲ5Ｒ 6またはＮＲ7Ｒ8の場合）またはジイ
ソプロピルアミン(Ｒ9、Ｒ10＝Ｃｌの場合)の存在下で
式IV′の支持体上に縮合させることからなる。その後ヨ
ウ素水または硫黄またはセレンで酸化すると式VIIaの化
合物になる。ここで保護基Ｒを除去することができそし
てオリゴヌクレオチド合成が知られた手法で続けられ
る。合成の終りには各保護基が、得られた支持体結合の
オリゴヌクレオチド類似体から知られた手法で除去さ
れ、次いで本発明による式ＩＡまたはＩＢのオリゴヌク
レオチド類似体が支持体から分裂される。
【００５１】合成が最終サイクルにおいて式Ｖの単位を
用いて終結された場合には、５′−ヒドロキシル基およ
び３′(２′)−末端にリン含有共役を有する式ＩＡまた
はＩＢ（Ｒ1＝Ｈ）のオリゴヌクレオチド類似体が得ら
れる。他方、例えば式IX（ここでＲ9＝Ｚ″）で表され
るホスホリル化試薬が最後の縮合工程で用いられる場合
には、３′(２′)−および５′−末端の両方においてリ
ン含有置換分を有する、Ｒ1＝式IIである式ＩＡまたは
ＩＢのオリゴヌクレオチド類似体が該合成から得られ
る。
用いて終結された場合には、５′−ヒドロキシル基およ
び３′(２′)−末端にリン含有共役を有する式ＩＡまた
はＩＢ（Ｒ1＝Ｈ）のオリゴヌクレオチド類似体が得ら
れる。他方、例えば式IX（ここでＲ9＝Ｚ″）で表され
るホスホリル化試薬が最後の縮合工程で用いられる場合
には、３′(２′)−および５′−末端の両方においてリ
ン含有置換分を有する、Ｒ1＝式IIである式ＩＡまたは
ＩＢのオリゴヌクレオチド類似体が該合成から得られ
る。
【００５２】例えば、３′(２′)−末端ホスホルアミデ
ート基を有するオリゴヌクレオチドの製造は、酸化がJa
eger et al., Biochemistry 27, 7237 (1988)に記載の
ようにヨウ素／Ｈ2ＮＲ3またはＨＮＲ3Ｒ4（ここでＲ3
およびＲ4は前述の意味を有する）を用いて遂行される
場合には、テトラゾールの存在下において式IV′の支持
体をモノマーのメトキシホスホルアミダイトと反応させ
ることによって可能である。
ート基を有するオリゴヌクレオチドの製造は、酸化がJa
eger et al., Biochemistry 27, 7237 (1988)に記載の
ようにヨウ素／Ｈ2ＮＲ3またはＨＮＲ3Ｒ4（ここでＲ3
およびＲ4は前述の意味を有する）を用いて遂行される
場合には、テトラゾールの存在下において式IV′の支持
体をモノマーのメトキシホスホルアミダイトと反応させ
ることによって可能である。
【００５３】ある場合（Ｚ＝ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4、Ｏ、
ＳまたはＳｅ）には、基Ｚの導入もまたＨ−ホスホネー
ト法によって遂行される。そこでは式XI
ＳまたはＳｅ）には、基Ｚの導入もまたＨ−ホスホネー
ト法によって遂行される。そこでは式XI
【化２７】 （式中、Ｒ、Ｖ、ａ、Ｂ′、Ｙ′、Ｘ′およびＷは前述
の意味を有する）のヌクレオシドホスフェートを式IV′
の支持体と反応させることによって最初に生成される式
VII′
の意味を有する）のヌクレオシドホスフェートを式IV′
の支持体と反応させることによって最初に生成される式
VII′
【化２８】 のＨ−ホスホネートジエステルを酸化的ホスホルアミド
化に付す(B. Froehler,Tetrahedron Lett. 27, 5575 (1
986)参照）。こうして３′−末端コレステリル基を有す
るオリゴヌクレオチドが例えば、四塩化炭素の存在下に
おいてコレステリルオキシカルボニルアミノアルキルア
ミンを用いて製造されうる。
化に付す(B. Froehler,Tetrahedron Lett. 27, 5575 (1
986)参照）。こうして３′−末端コレステリル基を有す
るオリゴヌクレオチドが例えば、四塩化炭素の存在下に
おいてコレステリルオキシカルボニルアミノアルキルア
ミンを用いて製造されうる。
【００５４】また、式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオ
チド類似体の製造はトリエステル法を用いても可能であ
り、そこでは式IV′を有する支持体の基ＨＸ′が縮合剤
例えばアリールスルホニルクロリドおよび求核触媒例え
ばテトラゾールの存在下で式XII
チド類似体の製造はトリエステル法を用いても可能であ
り、そこでは式IV′を有する支持体の基ＨＸ′が縮合剤
例えばアリールスルホニルクロリドおよび求核触媒例え
ばテトラゾールの存在下で式XII
【化２９】 （式中、Ｒ、Ｖ、ａ、Ｂ′、Ｒ2′、Ｙ′、Ｚ、Ｗ、
Ｘ′および曲線状括弧は前述の意味を有する）の保護さ
れたホスフェートジエステルと反応する。３′５′
(２′５′)方向に成長するオリゴヌクレオチド鎖の極性
を逆転させる一つの可能性は、該成長鎖の遊離５′−ヒ
ドロキシルまたは５′−チオール基を式IIIの単位例え
ば式IIIa
Ｘ′および曲線状括弧は前述の意味を有する）の保護さ
れたホスフェートジエステルと反応する。３′５′
(２′５′)方向に成長するオリゴヌクレオチド鎖の極性
を逆転させる一つの可能性は、該成長鎖の遊離５′−ヒ
ドロキシルまたは５′−チオール基を式IIIの単位例え
ば式IIIa
【化３０】 （XIIIa）:Ｕ″＝ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、Ｂ″＝Ｂ′（XIII
b）：Ｕ′＝ＣＨ3、Ｂ＝Ｈの３′−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌク
レオシド ５′−ホスホルアミダイトと反応させること
による。
b）：Ｕ′＝ＣＨ3、Ｂ＝Ｈの３′−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌク
レオシド ５′−ホスホルアミダイトと反応させること
による。
【００５５】酸化が引続きヨウ素水または硫黄を用いて
遂行される場合には、(５′５′Ｓ)はそれぞれホスフェ
ート（ＰＯ4 -）またはホスホロチオエート（ＰＯ3Ｓ-）
基の意味を有する。３′(２′)−末端で保護基を除去し
た後に、オリゴヌクレオチド鎖は必要により、式XIII
遂行される場合には、(５′５′Ｓ)はそれぞれホスフェ
ート（ＰＯ4 -）またはホスホロチオエート（ＰＯ3Ｓ-）
基の意味を有する。３′(２′)−末端で保護基を除去し
た後に、オリゴヌクレオチド鎖は必要により、式XIII
【化３１】 〔式中、Ｕ′はＵの意味を有するが、但しＵ′はＮＨＲ
3またはＮＲ3Ｒ4ではなく、ヒドロキシル、メルカプト
およびＳｅＨは保護された誘導体（例えば前記誘導体、
Ｚ″を参照されたい）として存在しそしてＲ5、Ｒ6、
Ｙ′′′、Ｖ、Ｒ、ａ、Ｒ2′およびＢ′は前述の意味
を有する〕の単位との連続結合によって５′３′−方向
に拡大されうる。単位XIIIの合成は例えばSeliger et a
l. (Nucleosides, Nucleotides 10 (1991), 469）に記
載のようにして遂行される。それ以上の反転が遂行され
ない場合には、式ＩＡ（ここでｒは０である）のオリゴ
ヌクレオチド類似体が得られる。
3またはＮＲ3Ｒ4ではなく、ヒドロキシル、メルカプト
およびＳｅＨは保護された誘導体（例えば前記誘導体、
Ｚ″を参照されたい）として存在しそしてＲ5、Ｒ6、
Ｙ′′′、Ｖ、Ｒ、ａ、Ｒ2′およびＢ′は前述の意味
を有する〕の単位との連続結合によって５′３′−方向
に拡大されうる。単位XIIIの合成は例えばSeliger et a
l. (Nucleosides, Nucleotides 10 (1991), 469）に記
載のようにして遂行される。それ以上の反転が遂行され
ない場合には、式ＩＡ（ここでｒは０である）のオリゴ
ヌクレオチド類似体が得られる。
【００５６】極性は変化していないが、それにもかかわ
らず（３′５′Ｓ）が鎖の逆折りたたみを促進する式Ｉ
Ｂのオリゴヌクレオチド類似体を製造するには、オリゴ
ヌクレオチド鎖の合成が、２官能価のために多数回、縮
合されることも可能な下記式XIVの単位を用いて必要な
個所で延長される。
らず（３′５′Ｓ）が鎖の逆折りたたみを促進する式Ｉ
Ｂのオリゴヌクレオチド類似体を製造するには、オリゴ
ヌクレオチド鎖の合成が、２官能価のために多数回、縮
合されることも可能な下記式XIVの単位を用いて必要な
個所で延長される。
【００５７】
【化３２】
【００５８】
【表４】
【００５９】例えば、（３′５′Ｓ）−ループは式XIVb
の単位との反復好ましくは４〜５回の連続結合によって
導入されうる。次いで該合成は前記のように３′５′−
方向で継続される。
の単位との反復好ましくは４〜５回の連続結合によって
導入されうる。次いで該合成は前記のように３′５′−
方向で継続される。
【００６０】二本鎖の核酸好ましくはＤＮＡに対するオ
リゴヌクレオチド類似体のハイブリッド形成に関連して
一本鎖の変化が求められる場合には、５′５′−スペー
サーはより大きな長さでなければならない。例えば、ト
リエチレングルコールジホスフェートは鎖上の所望位置
に混入されることができ、それは式XIVaの単位との２回
反復結合によって３′５′−方向に１回以上好ましくは
２回集められている。極性を変えるためには、該合成を
式XIIIのヌクレオチド単位を用いて５′３′方向に引続
き継続させる。再生された、極性の逆転が必要とされる
場合には、３′３′−スペーサーが意図する個所に導入
され、引続き３′５′−方向での鎖の合成がヌクレオシ
ド３′−ホスホルアミダイトによる縮合によって継続さ
れる。３′３′−スペーサーの１つの例はプロパン−
１,３−ジオールジホスフェート基の導入であって、該
基は式XIVdの単位との結合によって導入されうる。
リゴヌクレオチド類似体のハイブリッド形成に関連して
一本鎖の変化が求められる場合には、５′５′−スペー
サーはより大きな長さでなければならない。例えば、ト
リエチレングルコールジホスフェートは鎖上の所望位置
に混入されることができ、それは式XIVaの単位との２回
反復結合によって３′５′−方向に１回以上好ましくは
２回集められている。極性を変えるためには、該合成を
式XIIIのヌクレオチド単位を用いて５′３′方向に引続
き継続させる。再生された、極性の逆転が必要とされる
場合には、３′３′−スペーサーが意図する個所に導入
され、引続き３′５′−方向での鎖の合成がヌクレオシ
ド３′−ホスホルアミダイトによる縮合によって継続さ
れる。３′３′−スペーサーの１つの例はプロパン−
１,３−ジオールジホスフェート基の導入であって、該
基は式XIVdの単位との結合によって導入されうる。
【００６１】オリゴヌクレオチド合成がスルフィド（ｘ
＝０）またはスルフィニル(ｘ＝１)支持体を用いて遂行
される場合には、これらの基は終りにそれ自体知られて
いる手法で〔Funakoshi et al., Proc. Natl. Acad. Sc
i. 88 (1991), 6982〕酸化されてスルホニル基になり、
塩基好ましくはアンモニアで容易に分解されうる。
＝０）またはスルフィニル(ｘ＝１)支持体を用いて遂行
される場合には、これらの基は終りにそれ自体知られて
いる手法で〔Funakoshi et al., Proc. Natl. Acad. Sc
i. 88 (1991), 6982〕酸化されてスルホニル基になり、
塩基好ましくはアンモニアで容易に分解されうる。
【００６２】塩基Ｂ′のアミノ保護基の性質およびリン
カーアームＡの構成はそれぞれの場合、置換基Ｚの性質
による。その理由は該置換基Ｚは合成が一旦完了した
ら、容易に除去可能でなければならないからである。例
えば、オリゴヌクレオチド３′−ホスフェートイソプロ
ピルエステル（Ｚ＝Ｏ−ｉ−Ｃ3Ｈ7）を製造するには、
Ｂ＝ＡｄｅおよびＣｙｔの場合にはベンゾイル（Ｂｚ）
保護基を使用することができそしてＢ＝Ｇｕａの場合に
はイソブチリル（ｉ−Ｂｕ）保護基を使用することがで
きる。他方、オリゴヌクレオチド３′−メチルホスホネ
ートエステル（Ｚ＝ＣＨ3）またはエチルエステル（Ｚ
＝Ｏ−Ｃ2Ｈ5）を合成するには、Ｂ＝ＡｄｅおよびＧｕ
ａの場合およびＢ＝Ｃｙｔの場合のそれぞれについて比
較的不安定なフェノキシアセチル（ＰＡＣ）およびイソ
ブチリル保護基が使用される。
カーアームＡの構成はそれぞれの場合、置換基Ｚの性質
による。その理由は該置換基Ｚは合成が一旦完了した
ら、容易に除去可能でなければならないからである。例
えば、オリゴヌクレオチド３′−ホスフェートイソプロ
ピルエステル（Ｚ＝Ｏ−ｉ−Ｃ3Ｈ7）を製造するには、
Ｂ＝ＡｄｅおよびＣｙｔの場合にはベンゾイル（Ｂｚ）
保護基を使用することができそしてＢ＝Ｇｕａの場合に
はイソブチリル（ｉ−Ｂｕ）保護基を使用することがで
きる。他方、オリゴヌクレオチド３′−メチルホスホネ
ートエステル（Ｚ＝ＣＨ3）またはエチルエステル（Ｚ
＝Ｏ−Ｃ2Ｈ5）を合成するには、Ｂ＝ＡｄｅおよびＧｕ
ａの場合およびＢ＝Ｃｙｔの場合のそれぞれについて比
較的不安定なフェノキシアセチル（ＰＡＣ）およびイソ
ブチリル保護基が使用される。
【００６３】多くの複合体はさらに別の官能基を有する
が、それらは式ＶおよびXIIIのモノマー単位中への混入
前に適当な手法で保護されなければならない。例えば、
フルロレセインのカルボキシル基はアルキルエステルと
して保護されなければならない。プソラレンでは、アミ
ド基がＮ−Ｆｍｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニ
ル）−保護された化合物として存在しうる。ヒドロキシ
ル基はアシル化またはシリル化（ｔ−ブチルジメチルシ
リル）によって副反応から保護されうる。またアミノ基
はトリフルオロアセチル保護された形態で存在しうる。
異例な場合だが、複合体が極めて不安定であるためにオ
リゴヌクレオチド合成中の保護基除去の条件下で分解し
てしまうこともある。このような場合には１つの官能基
を有するリンカーアーム例えばＺ＝ＨＮ−(ＣＨ2)x−Ｎ
Ｈ−Ｆｍｏｃ（ここでｘは２〜１２好ましくは４〜６の
整数である）を１つだけ式Ｖのモノマー中に混入させる
のが好都合である。オリゴヌクレオチド中へ混入しそし
て好ましくはアンモニアで保護基を除去した後に、遊離
アミノ基は活性エステルに結合されうる。該手法で例え
ば、塩基不安定性アクリジニウムエステルが製造され
た。
が、それらは式ＶおよびXIIIのモノマー単位中への混入
前に適当な手法で保護されなければならない。例えば、
フルロレセインのカルボキシル基はアルキルエステルと
して保護されなければならない。プソラレンでは、アミ
ド基がＮ−Ｆｍｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニ
ル）−保護された化合物として存在しうる。ヒドロキシ
ル基はアシル化またはシリル化（ｔ−ブチルジメチルシ
リル）によって副反応から保護されうる。またアミノ基
はトリフルオロアセチル保護された形態で存在しうる。
異例な場合だが、複合体が極めて不安定であるためにオ
リゴヌクレオチド合成中の保護基除去の条件下で分解し
てしまうこともある。このような場合には１つの官能基
を有するリンカーアーム例えばＺ＝ＨＮ−(ＣＨ2)x−Ｎ
Ｈ−Ｆｍｏｃ（ここでｘは２〜１２好ましくは４〜６の
整数である）を１つだけ式Ｖのモノマー中に混入させる
のが好都合である。オリゴヌクレオチド中へ混入しそし
て好ましくはアンモニアで保護基を除去した後に、遊離
アミノ基は活性エステルに結合されうる。該手法で例え
ば、塩基不安定性アクリジニウムエステルが製造され
た。
【００６４】合成されたオリゴヌクレオチド誘導体の特
性化は電気噴霧イオン化質量分光測定（electro-spray
ionization mass spectrometry）によってなされる(Stu
ltsand Masters, Rapid Commun. Mass. Spectr. 5 (199
1) 350参照）。
性化は電気噴霧イオン化質量分光測定（electro-spray
ionization mass spectrometry）によってなされる(Stu
ltsand Masters, Rapid Commun. Mass. Spectr. 5 (199
1) 350参照）。
【００６５】本発明による式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌ
クレオチド類似体は血清中での安定性および知られてい
るエキソヌクレアーゼに対する安定性について試験し
た。意外なことに、本発明により未修飾オリゴヌクレオ
チドと比較して式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド
類似体は全て、それらのハイブリッド形成作用が僅かだ
け影響されるけれども、血清ヌクレアーゼに対して顕著
に増大された安定性を有するということが見出された。
クレオチド類似体は血清中での安定性および知られてい
るエキソヌクレアーゼに対する安定性について試験し
た。意外なことに、本発明により未修飾オリゴヌクレオ
チドと比較して式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド
類似体は全て、それらのハイブリッド形成作用が僅かだ
け影響されるけれども、血清ヌクレアーゼに対して顕著
に増大された安定性を有するということが見出された。
【００６６】未修飾オリゴヌクレオチドは胎児牛血清
中、約２時間の半減期を有するが、式ＩＡおよびＩＢの
オリゴヌクレオチド類似体の全ては約１６時間十分に安
定である。さらに、式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体は
ヘビ毒液ホスホジエステラーゼに対して安定である。未
修飾オリゴヌクレオチドはヘビ毒液ホスホジエステラー
ゼによって３′−末端からおよび脾臓ホスホジエステラ
ーゼによって５′−末端からエキソヌクレオ分解的に
（exonucleolytically）分解される。
中、約２時間の半減期を有するが、式ＩＡおよびＩＢの
オリゴヌクレオチド類似体の全ては約１６時間十分に安
定である。さらに、式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体は
ヘビ毒液ホスホジエステラーゼに対して安定である。未
修飾オリゴヌクレオチドはヘビ毒液ホスホジエステラー
ゼによって３′−末端からおよび脾臓ホスホジエステラ
ーゼによって５′−末端からエキソヌクレオ分解的に
（exonucleolytically）分解される。
【００６７】相補的一本鎖ヌクレオチド配列で、式ＩＡ
およびＩＢのオリゴヌクレオチド類似体はワトソン−ク
リック型塩基対によって安定な二本鎖ハイブリッドを形
成しそしてワトソン−クリック型およびフーグスティー
ン型塩基対によって安定なトリプレックス構造を形成す
るが、一方それらはフーグスティーン塩基対によって二
本鎖核酸を有する三重らせんを形成し、その場合にはス
ペーサー(５′５′Ｓ)および（３′３′Ｓ）が鎖の変化
を可能にしている。このようにして、本発明のオリゴヌ
クレオチド類似体を用いると核酸の生物学的機能の調節
または抑圧例えば細胞遺伝子並びに腫瘍遺伝子またはウ
イルス性ゲノム機能の発現の抑圧が可能である。従っ
て、式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド類似体はウ
イルス感染症または癌の治療または予防に用いることが
できる。
およびＩＢのオリゴヌクレオチド類似体はワトソン−ク
リック型塩基対によって安定な二本鎖ハイブリッドを形
成しそしてワトソン−クリック型およびフーグスティー
ン型塩基対によって安定なトリプレックス構造を形成す
るが、一方それらはフーグスティーン塩基対によって二
本鎖核酸を有する三重らせんを形成し、その場合にはス
ペーサー(５′５′Ｓ)および（３′３′Ｓ）が鎖の変化
を可能にしている。このようにして、本発明のオリゴヌ
クレオチド類似体を用いると核酸の生物学的機能の調節
または抑圧例えば細胞遺伝子並びに腫瘍遺伝子またはウ
イルス性ゲノム機能の発現の抑圧が可能である。従っ
て、式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド類似体はウ
イルス感染症または癌の治療または予防に用いることが
できる。
【００６８】本発明によるオリゴヌクレオチドの活性を
ＨＳＶ−１ウイルス複製の阻止に基づいて調べた。
ＨＳＶ−１ウイルス複製の阻止に基づいて調べた。
【００６９】
【化３３】
【００７０】
【化３４】
【００７１】自然配列すなわち３′−誘導化および５′
５′−スペーサーを有してしない配列形態では、選択配
列Ｉは血清中で迅速に分解し易いために細胞培養中にお
いてＨＳＶ−１に対して不活性である。他方、式ＩＡの
３′−誘導されたオリゴヌクレオチド類似体例えば配列
ＩＡ−２（実施例４ｂ）はＨＳＶ−１複製を阻止する。
該配列Ｉは原則を説明するために任意の１つの例を示し
ているにすぎない。該配列ＩはＨＳＶ−１のトランスア
クチベータ（transactivator）タンパク質Ｖｍｗ６５の
ｍＲＮＡに対して割り当てられる。配列IIおよびIIIは
ＨＳＶ−１のＩＥ ４／５プレカーサーｍＲＮＡ（ＩＥ
＝immediate early；即時型）のスプライス−アクセプ
ター領域に対して割り当てられそしてまたＨＳＶ−１複
製を特異的に阻止する。配列IVで表される、両３′−末
端がプソラレンで修飾された式ＩＡ−４のオリゴヌクレ
オチド（実施例４ｅ）は、ＨＳＶ−１のゲノムの複製の
由来(oriL)を認識し、それの複製をトリプレックス形成
によって阻止する。プソラレン複合体の抗ウイルス活性
はＵＶ線での照射によって有意に増大されうる。ＨＳＶ
−１ゲノムは１６０,０００の塩基を有していて、当
然、ウイルス複製阻止のために種々の効力を有する無数
の選択可能な標的配列を提供する。該ヌクレオチド配列
を変えることによって、いずれかその他のウイルス、バ
クテリアまたは他の病原体に対して治療原則が適用され
うる。他の病原体に適用させるための唯一の先行必要要
件は、これらの病原体の生活環に必須である遺伝子が知
られていることである。該遺伝子の配列は極めて多様に
わたり、いわゆる遺伝子データベースに寄託されてい
る。また、その機能が抑圧されるべきである腫瘍遺伝子
および他の細胞遺伝子の場合にも同様のことが云える。
その他の細胞遺伝子の例としては酵素、受容体、イオン
チャンネル、免疫調整剤、成長因子およびその他の調節
タンパク質をコード化する遺伝子を挙げることができ
る。配列Ｖは例えば、アルツハイマー病における斑形成
アミロイドタンパク質の前駆体タンパク質の発現に原因
すると考えられているＡＰＰ７７０遺伝子プロモータに
対して割り当てられる。センスオリゴヌクレオチドとし
て、配列VIはアデノウイルスＥ１ｂのＳＰ１結合領域を
擬似しそして、式ＩＢ−２で表される３′５′−スペー
サー含有の３′−修飾オリゴヌクレオチド類似体がＥ１
ｂの転写を阻止する。腫瘍遺伝子の例としてはａｂｌ、
ｎｅｕ、ｍｙｃ、ｍｙｂ、ｒａｓ、ｆｏｓ、ｍｏｓ、ｅ
ｒｂＢ、ｅｔｓ、ｊｕｎ、ｐ５３，ｓｒｃおよびｒｅｌ
がある。
５′−スペーサーを有してしない配列形態では、選択配
列Ｉは血清中で迅速に分解し易いために細胞培養中にお
いてＨＳＶ−１に対して不活性である。他方、式ＩＡの
３′−誘導されたオリゴヌクレオチド類似体例えば配列
ＩＡ−２（実施例４ｂ）はＨＳＶ−１複製を阻止する。
該配列Ｉは原則を説明するために任意の１つの例を示し
ているにすぎない。該配列ＩはＨＳＶ−１のトランスア
クチベータ（transactivator）タンパク質Ｖｍｗ６５の
ｍＲＮＡに対して割り当てられる。配列IIおよびIIIは
ＨＳＶ−１のＩＥ ４／５プレカーサーｍＲＮＡ（ＩＥ
＝immediate early；即時型）のスプライス−アクセプ
ター領域に対して割り当てられそしてまたＨＳＶ−１複
製を特異的に阻止する。配列IVで表される、両３′−末
端がプソラレンで修飾された式ＩＡ−４のオリゴヌクレ
オチド（実施例４ｅ）は、ＨＳＶ−１のゲノムの複製の
由来(oriL)を認識し、それの複製をトリプレックス形成
によって阻止する。プソラレン複合体の抗ウイルス活性
はＵＶ線での照射によって有意に増大されうる。ＨＳＶ
−１ゲノムは１６０,０００の塩基を有していて、当
然、ウイルス複製阻止のために種々の効力を有する無数
の選択可能な標的配列を提供する。該ヌクレオチド配列
を変えることによって、いずれかその他のウイルス、バ
クテリアまたは他の病原体に対して治療原則が適用され
うる。他の病原体に適用させるための唯一の先行必要要
件は、これらの病原体の生活環に必須である遺伝子が知
られていることである。該遺伝子の配列は極めて多様に
わたり、いわゆる遺伝子データベースに寄託されてい
る。また、その機能が抑圧されるべきである腫瘍遺伝子
および他の細胞遺伝子の場合にも同様のことが云える。
その他の細胞遺伝子の例としては酵素、受容体、イオン
チャンネル、免疫調整剤、成長因子およびその他の調節
タンパク質をコード化する遺伝子を挙げることができ
る。配列Ｖは例えば、アルツハイマー病における斑形成
アミロイドタンパク質の前駆体タンパク質の発現に原因
すると考えられているＡＰＰ７７０遺伝子プロモータに
対して割り当てられる。センスオリゴヌクレオチドとし
て、配列VIはアデノウイルスＥ１ｂのＳＰ１結合領域を
擬似しそして、式ＩＢ−２で表される３′５′−スペー
サー含有の３′−修飾オリゴヌクレオチド類似体がＥ１
ｂの転写を阻止する。腫瘍遺伝子の例としてはａｂｌ、
ｎｅｕ、ｍｙｃ、ｍｙｂ、ｒａｓ、ｆｏｓ、ｍｏｓ、ｅ
ｒｂＢ、ｅｔｓ、ｊｕｎ、ｐ５３，ｓｒｃおよびｒｅｌ
がある。
【００７２】文献で知られている、３′−ヒドロキシル
基を有するオリゴヌクレオチド誘導体と比較すると、式
ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド類似体からなる、
核酸特にＤＮＡ用プローブは一方ではヌクレアーゼ安定
性が増大されるという利点を有し、他方ではオリゴヌク
レオチドの両末端で同一または相異なるマーカーを受容
することが可能である。相異なるマーカー基が１つのオ
リゴヌクレオチド内で選択的に活性化されうることは
（二重標識）有利である。また２官能性誘導化を用いて
一方の末端に１つの標識をそして他方の末端に別の官能
（例えばアフィニティー標識）を導入することもでき
る。このためには例えば、アビジンまたはストレプトア
ビジンを認識するビオチンをオリゴヌクレオチドの一方
の３′−末端に混入させ、一方アクリジニウムエステル
化学ルミネセンス標識をアルキルアミノリンカーを介し
て他方の３′−末端に結合させることができる。
基を有するオリゴヌクレオチド誘導体と比較すると、式
ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド類似体からなる、
核酸特にＤＮＡ用プローブは一方ではヌクレアーゼ安定
性が増大されるという利点を有し、他方ではオリゴヌク
レオチドの両末端で同一または相異なるマーカーを受容
することが可能である。相異なるマーカー基が１つのオ
リゴヌクレオチド内で選択的に活性化されうることは
（二重標識）有利である。また２官能性誘導化を用いて
一方の末端に１つの標識をそして他方の末端に別の官能
（例えばアフィニティー標識）を導入することもでき
る。このためには例えば、アビジンまたはストレプトア
ビジンを認識するビオチンをオリゴヌクレオチドの一方
の３′−末端に混入させ、一方アクリジニウムエステル
化学ルミネセンス標識をアルキルアミノリンカーを介し
て他方の３′−末端に結合させることができる。
【００７３】さらに、本発明によるオリゴヌクレオチド
類似体の浸透作用は多くの場合、特に脂肪親和性基が導
入される際には未修飾オリゴヌクレオチドの場合よりも
有利である。本発明による式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌ
クレオチド類似体の増大した血清安定性、それらの改善
された細胞浸透性、それらの改善された結合アフィニテ
ィー、修飾(アルキル化、架橋)によって標的配列を選択
的に破壊することができるそれらの能力およびＤＮＡ診
断検査でのそれらの改善された検出能力は、未修飾オリ
ゴヌクレオチドと比較した場合により高い生物活性の形
態で表される。
類似体の浸透作用は多くの場合、特に脂肪親和性基が導
入される際には未修飾オリゴヌクレオチドの場合よりも
有利である。本発明による式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌ
クレオチド類似体の増大した血清安定性、それらの改善
された細胞浸透性、それらの改善された結合アフィニテ
ィー、修飾(アルキル化、架橋)によって標的配列を選択
的に破壊することができるそれらの能力およびＤＮＡ診
断検査でのそれらの改善された検出能力は、未修飾オリ
ゴヌクレオチドと比較した場合により高い生物活性の形
態で表される。
【００７４】本発明によるオリゴヌクレオチド類似体の
前述した診断、予防および治療上の適用は代表例の単な
る１つの選択であり、それ故に該類似体の使用はそれら
に限定されるものではない。さらに、本発明のオリゴヌ
クレオチド類似体は例えばバイオテクノロジーおよび分
子生物学の補助剤として用いてもよい。
前述した診断、予防および治療上の適用は代表例の単な
る１つの選択であり、それ故に該類似体の使用はそれら
に限定されるものではない。さらに、本発明のオリゴヌ
クレオチド類似体は例えばバイオテクノロジーおよび分
子生物学の補助剤として用いてもよい。
【００７５】さらに本発明は式ＩＡおよび／またはＩＢ
の化合物またはそれらの生理学的に許容しうる塩の１種
以上の有効量を、適切な場合には生理学的に許容しうる
補助剤および／または賦形剤および／またはその他の知
られている活性物質を含有する製剤並びに、活性物質が
賦形剤および可能な場合にはさらに別の補助剤、添加剤
または活性物質と一緒になって適当な剤形に変換される
該製剤の製造方法に関する。投与は静脈内、局所または
鼻腔内投与が好ましい。
の化合物またはそれらの生理学的に許容しうる塩の１種
以上の有効量を、適切な場合には生理学的に許容しうる
補助剤および／または賦形剤および／またはその他の知
られている活性物質を含有する製剤並びに、活性物質が
賦形剤および可能な場合にはさらに別の補助剤、添加剤
または活性物質と一緒になって適当な剤形に変換される
該製剤の製造方法に関する。投与は静脈内、局所または
鼻腔内投与が好ましい。
【００７６】
実施例１：式IVの支持体の製造 ａ） アミノプロピル−ＣＰＧをビスヒドロキシエチル
スルホンジメトキシトリチルエーテルのスクシネートと
反応させることによる式IVaの支持体の製造 ビス−（２−ヒドロキシエチル）スルホンのジメトキシ
トリチル（ＤＭＴｒ）モノエーテル４.５６ｇ（１０mmo
l）を２回にわたって無水ピリジン中に取り入れ次いで
濃縮することによって乾燥し、無水ピリジン２５ml中に
溶解し、次にＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン）１.
７８ｇ（１４mmol）および無水コハク酸１.４ｇ（１４m
mol）を加え、この混合物を室温で３時間撹拌する。反
応の完了後に混合物を濃縮し、残留物を３回にわたって
トルエン中に取り入れ次いで濃縮してピリジンを除去
し、次にメチレンクロリド２２０ml中に取り入れる。有
機相を１０％クエン酸（１１０ml）で洗浄し次に３回水
１１０mlで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し次いで濃縮
する。得られた固形残留物を真空乾燥する（５.６４
ｇ）。このスクシネート１.６７ｇ（３mmol）を２回に
わたって無水ピリジン中に取り入れ次いで濃縮し、無水
ピリジン０.６５mlとテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）６m
lとの混合物中に溶解する。次に無水ＴＨＦ ２.１ml中
に溶解したｐ−ニトロフェノール４２０mg（３mmol）お
よびＤＣＣ ６８７mg（ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド、３.３mmol）の溶液を加え、混合物を室温で２時間
撹拌する。反応が完了したら、沈殿したジシクロヘキシ
ル尿素を遠心分離により除去する。沈殿物を無水エーテ
ル１ml中に懸濁し、再び遠心分離にかける。Fluka社製
のアミノプロピル−ＣＰＧ支持体（５００Å、アミノ基
のｇ当たり１００μmol）１.５ｇを無水ＤＭＦ １.８ml
とトリエチルアミン３５０μｌとの混合物中に懸濁し、
前記沈殿物から傾瀉させたニトロフェニルスクシネート
エステルの合一溶液を加え、混合物を室温で１６時間振
とうする。固形支持体を完全に分離し、遮断試薬（無水
酢酸／２,６−ルチジン／ＤＭＡＰ；それぞれＴＨＦ中
で０.２５Ｍ）３mlとともに室温で１時間振とうして反
応性基を遮断する。誘導化されたＣＰＧ支持体を吸引濾
去し、メタノール、ＴＨＦ、メチレンクロリドおよびエ
ーテルで洗浄し次いで４０℃で真空乾燥する。ジメトキ
シトリチル含有成分を有する式IVaの支持体のローディ
ング（loading）は３８μmol／ｇである。
スルホンジメトキシトリチルエーテルのスクシネートと
反応させることによる式IVaの支持体の製造 ビス−（２−ヒドロキシエチル）スルホンのジメトキシ
トリチル（ＤＭＴｒ）モノエーテル４.５６ｇ（１０mmo
l）を２回にわたって無水ピリジン中に取り入れ次いで
濃縮することによって乾燥し、無水ピリジン２５ml中に
溶解し、次にＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン）１.
７８ｇ（１４mmol）および無水コハク酸１.４ｇ（１４m
mol）を加え、この混合物を室温で３時間撹拌する。反
応の完了後に混合物を濃縮し、残留物を３回にわたって
トルエン中に取り入れ次いで濃縮してピリジンを除去
し、次にメチレンクロリド２２０ml中に取り入れる。有
機相を１０％クエン酸（１１０ml）で洗浄し次に３回水
１１０mlで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し次いで濃縮
する。得られた固形残留物を真空乾燥する（５.６４
ｇ）。このスクシネート１.６７ｇ（３mmol）を２回に
わたって無水ピリジン中に取り入れ次いで濃縮し、無水
ピリジン０.６５mlとテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）６m
lとの混合物中に溶解する。次に無水ＴＨＦ ２.１ml中
に溶解したｐ−ニトロフェノール４２０mg（３mmol）お
よびＤＣＣ ６８７mg（ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド、３.３mmol）の溶液を加え、混合物を室温で２時間
撹拌する。反応が完了したら、沈殿したジシクロヘキシ
ル尿素を遠心分離により除去する。沈殿物を無水エーテ
ル１ml中に懸濁し、再び遠心分離にかける。Fluka社製
のアミノプロピル−ＣＰＧ支持体（５００Å、アミノ基
のｇ当たり１００μmol）１.５ｇを無水ＤＭＦ １.８ml
とトリエチルアミン３５０μｌとの混合物中に懸濁し、
前記沈殿物から傾瀉させたニトロフェニルスクシネート
エステルの合一溶液を加え、混合物を室温で１６時間振
とうする。固形支持体を完全に分離し、遮断試薬（無水
酢酸／２,６−ルチジン／ＤＭＡＰ；それぞれＴＨＦ中
で０.２５Ｍ）３mlとともに室温で１時間振とうして反
応性基を遮断する。誘導化されたＣＰＧ支持体を吸引濾
去し、メタノール、ＴＨＦ、メチレンクロリドおよびエ
ーテルで洗浄し次いで４０℃で真空乾燥する。ジメトキ
シトリチル含有成分を有する式IVaの支持体のローディ
ング（loading）は３８μmol／ｇである。
【００７７】ｂ） TentaGelR（R＝Rapp社(Tuebingen）
の登録商標）をビスヒドロキシエチルスルホンジメトキ
シトリチルエーテルのスクシネートと反応させることに
よる式IVbの支持体の製造 ２５μmol／ｇのアミノ基を有するＰＳ／ＰＯＥコポリ
マーであるアミノ型TentaGel樹脂１００mgをＤＭＦ ３
６０μｌとトリエチルアミン７０μｌとの混合物中に懸
濁し、ｐ−ニトロフェニルスクシネートエステル(製造
は実施例１ａ参照)４００μmolを加え、混合物を室温で
１６時間振とうする。次いで実施例１ａ）に記載のよう
に後処理する。ジメトキシトリチル含有成分を有する式
IVbのTentaGel樹脂の取り込み（loading）は９８μmol
／ｇである。
の登録商標）をビスヒドロキシエチルスルホンジメトキ
シトリチルエーテルのスクシネートと反応させることに
よる式IVbの支持体の製造 ２５μmol／ｇのアミノ基を有するＰＳ／ＰＯＥコポリ
マーであるアミノ型TentaGel樹脂１００mgをＤＭＦ ３
６０μｌとトリエチルアミン７０μｌとの混合物中に懸
濁し、ｐ−ニトロフェニルスクシネートエステル(製造
は実施例１ａ参照)４００μmolを加え、混合物を室温で
１６時間振とうする。次いで実施例１ａ）に記載のよう
に後処理する。ジメトキシトリチル含有成分を有する式
IVbのTentaGel樹脂の取り込み（loading）は９８μmol
／ｇである。
【００７８】ｃ） TentaGel（ヒドロキシ型）を式IX
（Z″＝DMTr-O-CH2CH2-S-CH2CH2-O-；R9＝N(i-C3H7)2;
R10＝O-CH2CH2CN）のホスフィチル化試薬と反応させる
ことによる支持体IVcの製造 TentaGel樹脂５０mgをアセトニトリル中２２℃において
テトラゾール２５当量の存在下で式IX（Z″＝DMTr-O-CH
2CH2-S-CH2CH2-O; R9＝N(i-C3H7)2; R10＝O-CH 2CH2CN）
のホスフィチル化試薬１０当量と反応させる。ヨウ素水
（ＴＨＦ／水／ピリジン；７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖ
中のヨウ素１.３ｇ）で酸化した後に、実施例１ａに記
載のようにして後処理を行う。ジメトキシトリチル含有
成分を有する式IVcの支持体のローディングは２４７μm
ol／ｇである。
（Z″＝DMTr-O-CH2CH2-S-CH2CH2-O-；R9＝N(i-C3H7)2;
R10＝O-CH2CH2CN）のホスフィチル化試薬と反応させる
ことによる支持体IVcの製造 TentaGel樹脂５０mgをアセトニトリル中２２℃において
テトラゾール２５当量の存在下で式IX（Z″＝DMTr-O-CH
2CH2-S-CH2CH2-O; R9＝N(i-C3H7)2; R10＝O-CH 2CH2CN）
のホスフィチル化試薬１０当量と反応させる。ヨウ素水
（ＴＨＦ／水／ピリジン；７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖ
中のヨウ素１.３ｇ）で酸化した後に、実施例１ａに記
載のようにして後処理を行う。ジメトキシトリチル含有
成分を有する式IVcの支持体のローディングは２４７μm
ol／ｇである。
【００７９】実施例２：式VIIIで表される、保護された
ヌクレオシド３′−ホスホルアミダイ トの製造ａ） VIIIa（B′＝CytiBu、 Ｚ＝O-CH2CH3、R5
＝R6＝i-C3H7）の製造 式VI（B′＝CytiBu、 R5＝R6＝R7＝R8＝i-C3H7）で表さ
れるヌクレオシド３′−ホスホロビスアミダイトを２回
にわたって無水アセトニトリル２０ml中に取り入れ次い
で濃縮し、次に無水アセトニトリル２０ml中に溶解す
る。無水アセトニトリル５ml中に溶解したエタノール
２.４mmolおよび昇華されたテトラゾール１.２mmolの溶
液を１５分で滴加する。さらに２.５時間撹拌した後
に、混合物をメチレンクロリド７５mlで希釈し、有機相
を５％炭酸水素ナトリウム溶液５０mlで抽出する。水溶
液をメチレンクロリド５０mlで２回洗浄し、合一した有
機相を硫酸ナトリウムで乾燥し次いで真空中で濃縮す
る。残留物をシリカゲル上でメチレンクロリド／ｎ−ヘ
プタン／トリエチルアミン（４５：４５：１０；ｖ：
ｖ：ｖ）を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製
する。目的のジアステレオマー物質０.７ｇが、薄層ク
ロマトグラフィーによれば純粋である化合物（31Ｐ−Ｎ
ＭＲ σ＝１４６.７、１４７.５ppm）として得られる。
痕跡量の対応するビス−エチルホスファイトが副生成物
として単離される(31Ｐ−ＮＭＲ σ＝１３９.３ppm）。
ヌクレオシド３′−ホスホルアミダイ トの製造ａ） VIIIa（B′＝CytiBu、 Ｚ＝O-CH2CH3、R5
＝R6＝i-C3H7）の製造 式VI（B′＝CytiBu、 R5＝R6＝R7＝R8＝i-C3H7）で表さ
れるヌクレオシド３′−ホスホロビスアミダイトを２回
にわたって無水アセトニトリル２０ml中に取り入れ次い
で濃縮し、次に無水アセトニトリル２０ml中に溶解す
る。無水アセトニトリル５ml中に溶解したエタノール
２.４mmolおよび昇華されたテトラゾール１.２mmolの溶
液を１５分で滴加する。さらに２.５時間撹拌した後
に、混合物をメチレンクロリド７５mlで希釈し、有機相
を５％炭酸水素ナトリウム溶液５０mlで抽出する。水溶
液をメチレンクロリド５０mlで２回洗浄し、合一した有
機相を硫酸ナトリウムで乾燥し次いで真空中で濃縮す
る。残留物をシリカゲル上でメチレンクロリド／ｎ−ヘ
プタン／トリエチルアミン（４５：４５：１０；ｖ：
ｖ：ｖ）を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製
する。目的のジアステレオマー物質０.７ｇが、薄層ク
ロマトグラフィーによれば純粋である化合物（31Ｐ−Ｎ
ＭＲ σ＝１４６.７、１４７.５ppm）として得られる。
痕跡量の対応するビス−エチルホスファイトが副生成物
として単離される(31Ｐ−ＮＭＲ σ＝１３９.３ppm）。
【００８０】ｂ） VIIIb（B′＝Thy、 Ｚ＝O-i-C3H7、 R
5＝R6＝i-C3H7）の製造 この製造は、無水メチレンクロリド１０ml中でテトラゾ
ール（０.５mmol）の存在下において式Ｘ(B′＝Thy(β
−位)；Ｒ＝DMTr、 Ｖ＝Ｏ、ａ＝Ｏ、 Y″＝Ｏ;２mmol）
の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジンを式IX(Z″＝
O-i-C3H7、 R9＝R10＝N(i-C3H7)2；４mmol）のビスアミ
ダイトでホスフィチル化することによって遂行される。
混合物は実施例２ａに記載のようにして後処理する（31
Ｐ−ＮＭＲ σ＝１４５.０４ppm、 １４５.６６ppm）。
5＝R6＝i-C3H7）の製造 この製造は、無水メチレンクロリド１０ml中でテトラゾ
ール（０.５mmol）の存在下において式Ｘ(B′＝Thy(β
−位)；Ｒ＝DMTr、 Ｖ＝Ｏ、ａ＝Ｏ、 Y″＝Ｏ;２mmol）
の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジンを式IX(Z″＝
O-i-C3H7、 R9＝R10＝N(i-C3H7)2；４mmol）のビスアミ
ダイトでホスフィチル化することによって遂行される。
混合物は実施例２ａに記載のようにして後処理する（31
Ｐ−ＮＭＲ σ＝１４５.０４ppm、 １４５.６６ppm）。
【００８１】ｃ） VIIIc（B′＝CytiBu、 Ｚ＝O-n-C6H
13、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytiBu、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でｎ−ヘキサノール１当量と反応させること
によって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ １４８.１ppm、 １４
８.５ppm）。
13、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytiBu、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でｎ−ヘキサノール１当量と反応させること
によって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ １４８.１ppm、 １４
８.５ppm）。
【００８２】ｄ） VIIId（B′＝CytiBu、 Ｚ＝O-n-C18H
37、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytiBu、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのｎ−オクタデカノール１当量との反応に
よって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ １４７.２ppm、 １４７.
９ppm）。
37、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytiBu、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのｎ−オクタデカノール１当量との反応に
よって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ １４７.２ppm、 １４７.
９ppm）。
【００８３】ｅ） VIIIe(B′＝CytBz、 Ｚ＝３−ピリジ
ルプロパン−３−オキシ、R5＝R6＝R7＝R8＝i-C3H7）の
製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7、 R2′＝Ｈ)のビスアミダイトから、
テトラゾール触媒作用での３−ピリジン（プロパン−３
−オール）１当量との反応によって得られる。この場合
にはカラムクロマトグラフィーによりジアステレオマー
２種を分離することが可能であった（31Ｐ−ＮＭＲジア
ステレオマー１：１４７.７ppm、 ジアステレオマー２：
１４８.２ppm）。
ルプロパン−３−オキシ、R5＝R6＝R7＝R8＝i-C3H7）の
製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7、 R2′＝Ｈ)のビスアミダイトから、
テトラゾール触媒作用での３−ピリジン（プロパン−３
−オール）１当量との反応によって得られる。この場合
にはカラムクロマトグラフィーによりジアステレオマー
２種を分離することが可能であった（31Ｐ−ＮＭＲジア
ステレオマー１：１４７.７ppm、 ジアステレオマー２：
１４８.２ppm）。
【００８４】ｆ） VIIIf(B′＝CytBz、 Ｚ＝ｐ−ニトロ
フェニルエチル−２−オキシ、R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのｐ−ニトロフェニルエタン−２−オール
１当量との反応によって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ １４
８.１ppm、 １４８.６ppm）。 ｇ） VIIIg（B′＝CytBz、 Ｚ＝-(OCH2CH2)3OCH3、 R5＝
R6＝i-C3H7）の製造実施例２ａと類似の方法で式VIa
（B′＝CytBz、 R5＝R6＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダ
イトから、テトラゾール触媒作用でのトリエチレングリ
コールモノメチルエーテル１当量との反応によって得ら
れる（31Ｐ−ＮＭＲ １４８.５ppm、１４８.９ppm）。
フェニルエチル−２−オキシ、R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのｐ−ニトロフェニルエタン−２−オール
１当量との反応によって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ １４
８.１ppm、 １４８.６ppm）。 ｇ） VIIIg（B′＝CytBz、 Ｚ＝-(OCH2CH2)3OCH3、 R5＝
R6＝i-C3H7）の製造実施例２ａと類似の方法で式VIa
（B′＝CytBz、 R5＝R6＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダ
イトから、テトラゾール触媒作用でのトリエチレングリ
コールモノメチルエーテル１当量との反応によって得ら
れる（31Ｐ−ＮＭＲ １４８.５ppm、１４８.９ppm）。
【００８５】ｈ） VIIIh（B′＝CytBz、 Ｚ＝-(OCH2C
H2)4O(CH2)9CH3、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのテトラエチレングリコールモノデシルエ
ーテル１当量との反応によって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ
１４８.４ppm、１４８.８ppm）。
H2)4O(CH2)9CH3、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのテトラエチレングリコールモノデシルエ
ーテル１当量との反応によって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ
１４８.４ppm、１４８.８ppm）。
【００８６】ｉ） VIIIｉ（B′＝CytBz、 Ｚ＝-(OCH2CH
2)5O(CH2)4CH3、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのペンタエチレングリコールモノペンチル
エーテル１当量との反応によって得られる（31Ｐ−ＮＭ
Ｒ １４８.４ppm、 １４８.９ppm）。
2)5O(CH2)4CH3、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのペンタエチレングリコールモノペンチル
エーテル１当量との反応によって得られる（31Ｐ−ＮＭ
Ｒ １４８.４ppm、 １４８.９ppm）。
【００８７】ｋ） VIIIk（B′＝CytBz、 Ｚ＝-(OCH2C
H2)8O(CH2)13CH3、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのオクタエチレングリコールモノテトラデ
シルエーテル１当量との反応によって得られる（31Ｐ−
ＮＭＲ １４８.４ppm、１４８.８ppm）。
H2)8O(CH2)13CH3、 R5＝R6＝i-C3H7）の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用でのオクタエチレングリコールモノテトラデ
シルエーテル１当量との反応によって得られる（31Ｐ−
ＮＭＲ １４８.４ppm、１４８.８ppm）。
【００８８】ｌ） VIIIp（B′＝Thy、 Ｚ＝CH3、 R5＝R6
＝i-C3H7）の製造 実施例２ｂと類似の方法で５′−Ｏ−ジメトキシトルチ
ルチミジンから式IX（Z″＝CH3、 R9＝Cl、 R10＝N(i-C3H
7)2）の試薬ホスフィチル化で得られ、この場合にはテ
トラゾールの代りにジイソプロピルエチルアミン２当量
を用いて触媒作用がもたらされる（31Ｐ−ＮＭＲ １２
０.６ppm、 １２１.０ppm）。
＝i-C3H7）の製造 実施例２ｂと類似の方法で５′−Ｏ−ジメトキシトルチ
ルチミジンから式IX（Z″＝CH3、 R9＝Cl、 R10＝N(i-C3H
7)2）の試薬ホスフィチル化で得られ、この場合にはテ
トラゾールの代りにジイソプロピルエチルアミン２当量
を用いて触媒作用がもたらされる（31Ｐ−ＮＭＲ １２
０.６ppm、 １２１.０ppm）。
【００８９】ｍ） VIIIm（B′＝CytBz、 Ｚ＝アクリジ
ン−９−（ブチル−４−オキシ）−、R5＝R6＝i-C3H7）
の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用での９−（４−ヒドロキシブチル）アクリジ
ン１当量との反応によって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ １
４６.７ppm、 １４７.４ppm）。
ン−９−（ブチル−４−オキシ）−、R5＝R6＝i-C3H7）
の製造 実施例２ａと類似の方法で式VIa（B′＝CytBz、 R5＝R6
＝R7＝R8＝i-C3H7）のビスアミダイトから、テトラゾー
ル触媒作用での９−（４−ヒドロキシブチル）アクリジ
ン１当量との反応によって得られる（31Ｐ−ＮＭＲ １
４６.７ppm、 １４７.４ppm）。
【００９０】実施例３：式VIIで表される支持体結合ヌ
クレオチドの製造 ａ） 方法Ａ：式VIIIbのヌクレオシド３′−ホスホル
アミダイトを結合させることによる式VIIa−１の支持体
の製造 ビスヒドロキシエチルスルホンジメトキシトリチルエー
テル０.２μmolを結合させた実施例１ａからの支持体
７.５mgを３％トリクロロ酢酸で処理してＤＭＴｒ保護
基を除去し、アセトニトリルで洗浄し、次いでアセトニ
トリル中でテトラゾール（１０μmol）の存在下におい
て式VIIIb（B′＝Thy、 Ｚ＝O-i-C3H7、 R5＝R6＝i-C
3H7）のヌクレオシド３′−ホスホルアミダイト２μmol
と反応させる。反応時間は２.５分である。次にヨウ素
（Ｗ＝Ｏの場合；ＴＨＦ／水／ピリジン；７０：２０：
５＝ｖ：ｖ：ｖ中におけるヨウ素１.３ｇ）での酸化を
行う。
クレオチドの製造 ａ） 方法Ａ：式VIIIbのヌクレオシド３′−ホスホル
アミダイトを結合させることによる式VIIa−１の支持体
の製造 ビスヒドロキシエチルスルホンジメトキシトリチルエー
テル０.２μmolを結合させた実施例１ａからの支持体
７.５mgを３％トリクロロ酢酸で処理してＤＭＴｒ保護
基を除去し、アセトニトリルで洗浄し、次いでアセトニ
トリル中でテトラゾール（１０μmol）の存在下におい
て式VIIIb（B′＝Thy、 Ｚ＝O-i-C3H7、 R5＝R6＝i-C
3H7）のヌクレオシド３′−ホスホルアミダイト２μmol
と反応させる。反応時間は２.５分である。次にヨウ素
（Ｗ＝Ｏの場合；ＴＨＦ／水／ピリジン；７０：２０：
５＝ｖ：ｖ：ｖ中におけるヨウ素１.３ｇ）での酸化を
行う。
【００９１】ｂ） 方法Ｂ：式IXのホスフィチル化試薬
を介した反応による式VIIIa−２の支持体の製造 式IX（Z″＝ｎ−オクチル、R9＝R10＝Cl；１当量）のホ
スフィチル化試薬を無水アセトニトリルまたはメチレン
クロリド中でジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥ
Ａ）１.２当量の存在下において−７８℃で式Ｘのヌク
レオシド（５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン１当
量、B″＝β−位、Ｙ′′′＝Ｏ）と反応させて対応す
るヌクレオシド−３′−Ｏ−ｎ−オクチルホスホンモノ
クロリドを得る。保護基Ｄ＝ＤＭＴｒを除去するため
に、式IVaの支持体を方法Ａに記載のように処理し、ア
セトニトリルで洗浄し次にＤＩＰＥＡの存在下において
反応系中で製造されたヌクレオシド−３′−Ｏ−ｎ−オ
クチルホスホンモノクロリドの過剰量と反応させる。ヨ
ウ素水で酸化後に式VIIa−２で表される支持体結合ヌク
レオチドが得られ、それはその後のオリゴヌクレオチド
合成に利用されうる。
を介した反応による式VIIIa−２の支持体の製造 式IX（Z″＝ｎ−オクチル、R9＝R10＝Cl；１当量）のホ
スフィチル化試薬を無水アセトニトリルまたはメチレン
クロリド中でジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥ
Ａ）１.２当量の存在下において−７８℃で式Ｘのヌク
レオシド（５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン１当
量、B″＝β−位、Ｙ′′′＝Ｏ）と反応させて対応す
るヌクレオシド−３′−Ｏ−ｎ−オクチルホスホンモノ
クロリドを得る。保護基Ｄ＝ＤＭＴｒを除去するため
に、式IVaの支持体を方法Ａに記載のように処理し、ア
セトニトリルで洗浄し次にＤＩＰＥＡの存在下において
反応系中で製造されたヌクレオシド−３′−Ｏ−ｎ−オ
クチルホスホンモノクロリドの過剰量と反応させる。ヨ
ウ素水で酸化後に式VIIa−２で表される支持体結合ヌク
レオチドが得られ、それはその後のオリゴヌクレオチド
合成に利用されうる。
【００９２】実施例４：式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌク
レオチド（モノマーはそれぞれの場合においてβ−Ｄ−
デオキシリボヌクレオシドである）の製造 ａ） 式ＩＡ−１（R1＝R2＝H、 Ｚ＝O-i-C3H7、 ａ＝Ｕ
＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、 Ｂ＝Thy、 ｅ＝８、 ｆ＝ｒ
＝０、 ｉ＝１）のオリゴヌクレオチドの製造 T(5′5′p)TpTpTpTpTpTpTpTpTp-(O-i-C3H7) 実施例３ａから得られた支持体VIIa−１（B′＝Thy、 Ｗ
＝Ｏ、 Ｚ＝O-i-C3H7）０.２μmolを下記の試薬で順次処
理する。 １． 無水アセトニトリル、 ２． ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸、 ３． 無水アセトニトリル、 ４． 無水アセトニトリル０.１５ml中におけるβ−シ
アノエチル５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン−
３′−ホスファイト−ジイソプロピルアミダイト４μmo
lおよびテトラゾール２５μmol、 ５． アセトニトリル、 ６． ４０％ルチジンおよび１０％ジメチルアミノピリ
ジンを有するＴＨＦ中の２０％無水酢酸、 ７． アセトニトリル、 ８． ヨウ素（ＴＨＦ／水／ピリジン；７０：２０：５
＝ｖ：ｖ：ｖ中の１.３ｇ）。
レオチド（モノマーはそれぞれの場合においてβ−Ｄ−
デオキシリボヌクレオシドである）の製造 ａ） 式ＩＡ−１（R1＝R2＝H、 Ｚ＝O-i-C3H7、 ａ＝Ｕ
＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、 Ｂ＝Thy、 ｅ＝８、 ｆ＝ｒ
＝０、 ｉ＝１）のオリゴヌクレオチドの製造 T(5′5′p)TpTpTpTpTpTpTpTpTp-(O-i-C3H7) 実施例３ａから得られた支持体VIIa−１（B′＝Thy、 Ｗ
＝Ｏ、 Ｚ＝O-i-C3H7）０.２μmolを下記の試薬で順次処
理する。 １． 無水アセトニトリル、 ２． ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸、 ３． 無水アセトニトリル、 ４． 無水アセトニトリル０.１５ml中におけるβ−シ
アノエチル５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン−
３′−ホスファイト−ジイソプロピルアミダイト４μmo
lおよびテトラゾール２５μmol、 ５． アセトニトリル、 ６． ４０％ルチジンおよび１０％ジメチルアミノピリ
ジンを有するＴＨＦ中の２０％無水酢酸、 ７． アセトニトリル、 ８． ヨウ素（ＴＨＦ／水／ピリジン；７０：２０：５
＝ｖ：ｖ：ｖ中の１.３ｇ）。
【００９３】以下、１反応サイクルと称する前記工程１
〜８を７回繰り返してデカチミジレート誘導体を合成す
る。次の第９反応サイクルにおいては工程４での縮合の
ために５′−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌクレオシド３′−ホスホ
ルアミダイトの代りに式XIIIa（Ｂ′＝Ｔｈｙ)の逆３′
−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌクレオシド５′−ホスホルアミダイ
トが用いられる。合成完了後に、ジメトキシトリチル基
の除去を工程１〜３に記載のようにして行う。オリゴヌ
クレオチドを支持体から分裂し、同時にβ−シアノエチ
ル基をアンモニアでの１.５時間の処理によって除去す
る。該オリゴヌクレオチドはアミノ保護基を含有してい
ないので、アンモニアによるこれ以上の処理は全く必要
ない。５′−末端に（５′５′）−インターヌクレオチ
ド結合を含有するイソプロピルデカチミジレート３′−
ホスフェートの得られた粗生成物をポリアクリルアミド
ゲル電気泳動またはＨＰＬＣにより精製する。
〜８を７回繰り返してデカチミジレート誘導体を合成す
る。次の第９反応サイクルにおいては工程４での縮合の
ために５′−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌクレオシド３′−ホスホ
ルアミダイトの代りに式XIIIa（Ｂ′＝Ｔｈｙ)の逆３′
−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌクレオシド５′−ホスホルアミダイ
トが用いられる。合成完了後に、ジメトキシトリチル基
の除去を工程１〜３に記載のようにして行う。オリゴヌ
クレオチドを支持体から分裂し、同時にβ−シアノエチ
ル基をアンモニアでの１.５時間の処理によって除去す
る。該オリゴヌクレオチドはアミノ保護基を含有してい
ないので、アンモニアによるこれ以上の処理は全く必要
ない。５′−末端に（５′５′）−インターヌクレオチ
ド結合を含有するイソプロピルデカチミジレート３′−
ホスフェートの得られた粗生成物をポリアクリルアミド
ゲル電気泳動またはＨＰＬＣにより精製する。
【００９４】ｂ） 式ＩＡ−２（R2＝Ｈ、 Ｚ＝O-i-C
3H7、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ；ｅ＝19、 ｆ＝
ｒ＝０、 ｉ＝１；R1＝式II、 ここでＺ＝ｐ−ニトロフェ
ニルエチル−２−オキシおよびZ′＝OH)のオリゴヌクレ
オチドの製造 ｄ(ｐ−ニトロフェニルエチル−２−オキシ−pC(5′5′
p)GpTpCpCpApTpGpTpCpGpGpCpApApApCpApGpCpTp-O-i-C3H
7) 実施例４ａと類似の方法で、モノマー中に種々のヌクレ
オシド塩基を用いて合成を行う。合成工程１〜８におい
て、モノマーは一般にβ−シアノエチル５′−Ｏ−ジメ
トキシトリチル−ヌクレオシド−３′−ホスファイト−
ジアルキルアミドとして用いられ、その際アデニン（Ａ
ｄｅ）、シトシン（Ｃｙｔ）またはグアニン（Ｇｕａ）
のアミノ基は適当な保護基で保護されている。本実施例
ではＮ6−ベンゾイル−Ａｄｅ（ＡｄｅBz）、Ｎ4−ベン
ゾイル−Ｃｙｔ（ＣｙｔBz）およびＮ2−イソブチリル
−Ｇｕａ（ＧｕａiBu）が用いられる。鎖の構築は実施
例４ａに記載のようにして、式VIIa−１（B′＝Thy、 Ｗ
＝Ｏ、 Ｚ＝O-i-C3H7）の支持体から出発しそして前記配
列に従って対応する各モノマー上で縮合することにより
行われる。第２０反応サイクルでは式XIIIa（B′＝Ｃｙ
ｔBz）のモノマーが縮合のために用いられる。３′−Ｏ
−ＤＭＴｒ基を除去後に、遊離３′−ヒドロキシル基を
式IX（R9＝N(i-C3H7)2、 R10＝Z″＝ｐ−ニトロフェニル
エチル−２−オキシ)のビス−（ｐ−ニトロフェニルエ
チル−２−オキシ）−ホスホロジイソプロピルアミドで
ホスフィチル化し、引続きヨウ素水で酸化する。しか
し、各アミノ保護基および２つのｐ−ニトロフェニルエ
チル基のうちの１つを除去するために、さらにアンモニ
アによる処理（５０℃で１６時間）を行う。
3H7、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ；ｅ＝19、 ｆ＝
ｒ＝０、 ｉ＝１；R1＝式II、 ここでＺ＝ｐ−ニトロフェ
ニルエチル−２−オキシおよびZ′＝OH)のオリゴヌクレ
オチドの製造 ｄ(ｐ−ニトロフェニルエチル−２−オキシ−pC(5′5′
p)GpTpCpCpApTpGpTpCpGpGpCpApApApCpApGpCpTp-O-i-C3H
7) 実施例４ａと類似の方法で、モノマー中に種々のヌクレ
オシド塩基を用いて合成を行う。合成工程１〜８におい
て、モノマーは一般にβ−シアノエチル５′−Ｏ−ジメ
トキシトリチル−ヌクレオシド−３′−ホスファイト−
ジアルキルアミドとして用いられ、その際アデニン（Ａ
ｄｅ）、シトシン（Ｃｙｔ）またはグアニン（Ｇｕａ）
のアミノ基は適当な保護基で保護されている。本実施例
ではＮ6−ベンゾイル−Ａｄｅ（ＡｄｅBz）、Ｎ4−ベン
ゾイル−Ｃｙｔ（ＣｙｔBz）およびＮ2−イソブチリル
−Ｇｕａ（ＧｕａiBu）が用いられる。鎖の構築は実施
例４ａに記載のようにして、式VIIa−１（B′＝Thy、 Ｗ
＝Ｏ、 Ｚ＝O-i-C3H7）の支持体から出発しそして前記配
列に従って対応する各モノマー上で縮合することにより
行われる。第２０反応サイクルでは式XIIIa（B′＝Ｃｙ
ｔBz）のモノマーが縮合のために用いられる。３′−Ｏ
−ＤＭＴｒ基を除去後に、遊離３′−ヒドロキシル基を
式IX（R9＝N(i-C3H7)2、 R10＝Z″＝ｐ−ニトロフェニル
エチル−２−オキシ)のビス−（ｐ−ニトロフェニルエ
チル−２−オキシ）−ホスホロジイソプロピルアミドで
ホスフィチル化し、引続きヨウ素水で酸化する。しか
し、各アミノ保護基および２つのｐ−ニトロフェニルエ
チル基のうちの１つを除去するために、さらにアンモニ
アによる処理（５０℃で１６時間）を行う。
【００９５】ｃ） 式ＩＢ−１（R1＝R2＝Ｈ、 Ｚ＝n-C8
H17、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、 ｉ＝１、 ｄ＝
９、 ｅ＝16）のオリゴヌクレオチドの製造
H17、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、 ｉ＝１、 ｄ＝
９、 ｅ＝16）のオリゴヌクレオチドの製造
【化３５】 d(GpGpTpGpGpTpGpGpTpT(3′5′S)TpTpCpCpTpCpCpTpGpCp
GpGpGpApApGpGp-n-C8H 17 実施例３Ｂに記載のと類似の方法で製造される式VIIa−
２(B′＝GuaPAC、 Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝n-C8H17）の支持体から
出発して、鎖の構築を実施例４ｂのようにして実施す
る。しかし、合成の終りに分裂するのがより容易である
比較的不安定なアミノ保護基Ｎ6−フェノキシアセチル
−Ａｄｅ（ＡｄｅPAC）、Ｎ4−イソブチリル−Ｃｙｔ
（ＣｙｔiBu）、Ｎ2−フェノキシアセチル−Ｇｕａ（Ｇ
ｕａPAC）は、塩基不安定である置換分（ここではZ=n-C
8H17の場合）を製造するのに使用するのが有利である。
第１６反応サイクル後に式XIVbの試薬を用いて５つのサ
イクルを実施して必要とされる（３′５′）−スペーサ
ーを導入する。次に実施例４ａに記載のようにして残り
の１０個のヌクレオチド単位を混入させる。濃アンモニ
アを用いて支持体からの分裂を行い（室温で１.５時
間）、次にエチレンジアミン／エタノール／水（５：
４：１；ｖ：ｖ：ｖ）で６時間処理して塩基のアミノ基
を遊離させる。
GpGpGpApApGpGp-n-C8H 17 実施例３Ｂに記載のと類似の方法で製造される式VIIa−
２(B′＝GuaPAC、 Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝n-C8H17）の支持体から
出発して、鎖の構築を実施例４ｂのようにして実施す
る。しかし、合成の終りに分裂するのがより容易である
比較的不安定なアミノ保護基Ｎ6−フェノキシアセチル
−Ａｄｅ（ＡｄｅPAC）、Ｎ4−イソブチリル−Ｃｙｔ
（ＣｙｔiBu）、Ｎ2−フェノキシアセチル−Ｇｕａ（Ｇ
ｕａPAC）は、塩基不安定である置換分（ここではZ=n-C
8H17の場合）を製造するのに使用するのが有利である。
第１６反応サイクル後に式XIVbの試薬を用いて５つのサ
イクルを実施して必要とされる（３′５′）−スペーサ
ーを導入する。次に実施例４ａに記載のようにして残り
の１０個のヌクレオチド単位を混入させる。濃アンモニ
アを用いて支持体からの分裂を行い（室温で１.５時
間）、次にエチレンジアミン／エタノール／水（５：
４：１；ｖ：ｖ：ｖ）で６時間処理して塩基のアミノ基
を遊離させる。
【００９６】ｄ） 式ＩＡ−３(R1＝式II、 R2＝Ｈ、 Ｚ
＝O-i-C3H7、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Z′＝Ｏ、
ｅ＝16、ｆ＝９、 ｉ＝１、 ｒ＝０）のオリゴヌクレオチ
ドの製造 (5′5′S)=p〔(CH2CH2O)2CH2CH2p〕2 d(i-C3H7-O-pGGTGGTGGTT(5′5′S)TTCCTCCTGCGGGAAGGp-
O-i-C3H7) 合成は最初は実施例４ｂに記載のようにして、支持体VI
Ia−３（B′＝GuaiBu、Ｗ＝Ｏ、 Ｚ＝O-i-C3H7）から出発
して行う。第１６反応サイクルの後に、式XIVaの試薬を
用いて２つのサイクルを実施して５′５′−スペーサー
を導入する。その後の１０個のサイクル中に、縮合のた
めに式XIIIaのモノマー部分を用いる。添加すべき最後
のＧヌクレオチドの３′−Ｏ−ＤＭＴｒ保護基を除去し
た後に、遊離３′−ヒドロキシル基を式IX（R9＝N(i-C3
H7)2、 R10＝OCH2CH2CN、 Z″＝O-i-C3H7）のシアノエチ
ルオキシ−ｉ−プロピルオキシホスホルアミダイトでホ
スフィチル化し次にヨウ素水で酸化する。
＝O-i-C3H7、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Z′＝Ｏ、
ｅ＝16、ｆ＝９、 ｉ＝１、 ｒ＝０）のオリゴヌクレオチ
ドの製造 (5′5′S)=p〔(CH2CH2O)2CH2CH2p〕2 d(i-C3H7-O-pGGTGGTGGTT(5′5′S)TTCCTCCTGCGGGAAGGp-
O-i-C3H7) 合成は最初は実施例４ｂに記載のようにして、支持体VI
Ia−３（B′＝GuaiBu、Ｗ＝Ｏ、 Ｚ＝O-i-C3H7）から出発
して行う。第１６反応サイクルの後に、式XIVaの試薬を
用いて２つのサイクルを実施して５′５′−スペーサー
を導入する。その後の１０個のサイクル中に、縮合のた
めに式XIIIaのモノマー部分を用いる。添加すべき最後
のＧヌクレオチドの３′−Ｏ−ＤＭＴｒ保護基を除去し
た後に、遊離３′−ヒドロキシル基を式IX（R9＝N(i-C3
H7)2、 R10＝OCH2CH2CN、 Z″＝O-i-C3H7）のシアノエチ
ルオキシ−ｉ−プロピルオキシホスホルアミダイトでホ
スフィチル化し次にヨウ素水で酸化する。
【００９７】ｅ） 式ＩＡ−４(R2＝Ｈ、 Ｚ＝“プソラ
レン”、 ａ＝Ｕ−Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、 ｅ＝13、
ｆ＝15、 ｉ＝１、 ｒ＝０、 R1＝式II、 ここでZ′＝Ｏ）
のオリゴヌクレオチドの製造 d(3′−“プソラレン−pGpGpTpGpTpTpTpGpGpGpGpGpTpTp
GpG(5′5′S)GpTpTpGpGpGpGpT2pTpGpTpGpTpGp−“プソ
ラレン”） (5′5′S)＝p3′(G)5′-pMe-(CH2)3-pMe-5′(G)3′p
レン”、 ａ＝Ｕ−Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、 ｅ＝13、
ｆ＝15、 ｉ＝１、 ｒ＝０、 R1＝式II、 ここでZ′＝Ｏ）
のオリゴヌクレオチドの製造 d(3′−“プソラレン−pGpGpTpGpTpTpTpGpGpGpGpGpTpTp
GpG(5′5′S)GpTpTpGpGpGpGpT2pTpGpTpGpTpGp−“プソ
ラレン”） (5′5′S)＝p3′(G)5′-pMe-(CH2)3-pMe-5′(G)3′p
【化３６】 合成は実施例４ｃに記載のようにして、式IIa−４（B′
＝GuaPAC、 Ｚ＝“プソラレン”、Ｗ＝Ｏ）の支持体から
出発して行う。該支持体はあらかじめ実施例２ａと類似
の方法でビスアミダイトVIa−３（B′＝GuaPAC、 R5＝R8
＝i-C3H7）から“プソラレン”−Ｈとの反応によって得
た式VIII（B′＝GuaPAC、 Ｚ＝“プソラレン”、R5＝R6
＝i-C3H7）のモノマーから、実施例３ａと類似の方法で
製造された（U. Pieles and U. Englich, Nucleic Acid
s Research (1989) 17, 285参照）。第１３反応サイク
ルの後に、第１４サイクルでは結合用に式XVのモノマー
を用い、第１５サイクルでは式XIVcのモノマーをそして
第１６サイクルでは式XIIIbのモノマーを用いる。次の
１６個のサイクルでは式XIIIaの単位を縮合用に再び用
いる。３′−Ｏ−ＤＭＴｒ基を除去した後に、遊離３′
−ヒドロキシル基を式IX（R9＝N(i-C3H7)2、 R10＝OCH2C
H2CN、 Z″＝“プソラレン”）のプソラレンホスホルア
ミダイトでホスフィチル化し次いでヨウ素水で酸化す
る。保護基をアンモニアで除去した後に、式ＩＡ−４の
オリゴヌクレオチドが得られる。
＝GuaPAC、 Ｚ＝“プソラレン”、Ｗ＝Ｏ）の支持体から
出発して行う。該支持体はあらかじめ実施例２ａと類似
の方法でビスアミダイトVIa−３（B′＝GuaPAC、 R5＝R8
＝i-C3H7）から“プソラレン”−Ｈとの反応によって得
た式VIII（B′＝GuaPAC、 Ｚ＝“プソラレン”、R5＝R6
＝i-C3H7）のモノマーから、実施例３ａと類似の方法で
製造された（U. Pieles and U. Englich, Nucleic Acid
s Research (1989) 17, 285参照）。第１３反応サイク
ルの後に、第１４サイクルでは結合用に式XVのモノマー
を用い、第１５サイクルでは式XIVcのモノマーをそして
第１６サイクルでは式XIIIbのモノマーを用いる。次の
１６個のサイクルでは式XIIIaの単位を縮合用に再び用
いる。３′−Ｏ−ＤＭＴｒ基を除去した後に、遊離３′
−ヒドロキシル基を式IX（R9＝N(i-C3H7)2、 R10＝OCH2C
H2CN、 Z″＝“プソラレン”）のプソラレンホスホルア
ミダイトでホスフィチル化し次いでヨウ素水で酸化す
る。保護基をアンモニアで除去した後に、式ＩＡ−４の
オリゴヌクレオチドが得られる。
【００９８】ｆ） 式ＩＡ−５（R1＝R2＝Ｈ、 Ｚ＝n-C8
H17、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、 ｄ＝12、 ｅ＝ｆ＝
７、 ｉ＝ｒ＝１)のオリゴヌクレオチドの製造 d(TpTpGpTpGpTpTpTpGpTpGpTpT(3′3′S)TpGpTpTpTpTpGp
G(5′5′S)GpGpTpGpGpGpGpGp-n-C8H17) (3′3′S)＝p(CH2CH2CH2)p (5′5′S)＝実施例４ｅ
の場合と同じ 製造は実施例４ｃと類似の方法で行われるが、しかし第
７反応サイクルの後に１つのサイクルを式XV、XIVcおよ
びXIIIbの単位のそれぞれを記載された配列で順次に用
いて実施することにより（５′５′Ｓ）を導入する。次
の８個のサイクルでは式IIIaのヌクレオシド５′−ホス
ホルアミダイトを用いる。次のサイクルにおいて（３′
３′Ｓ）の混入が、結合工程で式XIVdのモノマーを用い
て行われる。残りの１３個のサイクルが最初の７個のサ
イクルの場合のようにヌクレオシド３′−ホスホルアミ
ダイトを用いて実施される。その後の操作は実施例４ｃ
に記載のとおりである。
H17、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、 ｄ＝12、 ｅ＝ｆ＝
７、 ｉ＝ｒ＝１)のオリゴヌクレオチドの製造 d(TpTpGpTpGpTpTpTpGpTpGpTpT(3′3′S)TpGpTpTpTpTpGp
G(5′5′S)GpGpTpGpGpGpGpGp-n-C8H17) (3′3′S)＝p(CH2CH2CH2)p (5′5′S)＝実施例４ｅ
の場合と同じ 製造は実施例４ｃと類似の方法で行われるが、しかし第
７反応サイクルの後に１つのサイクルを式XV、XIVcおよ
びXIIIbの単位のそれぞれを記載された配列で順次に用
いて実施することにより（５′５′Ｓ）を導入する。次
の８個のサイクルでは式IIIaのヌクレオシド５′−ホス
ホルアミダイトを用いる。次のサイクルにおいて（３′
３′Ｓ）の混入が、結合工程で式XIVdのモノマーを用い
て行われる。残りの１３個のサイクルが最初の７個のサ
イクルの場合のようにヌクレオシド３′−ホスホルアミ
ダイトを用いて実施される。その後の操作は実施例４ｃ
に記載のとおりである。
【００９９】ｇ） 式ＩＡ−６(R1＝式II、R2＝Ｈ、 Ｚ
＝“フルオレセイン"、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝
Z′＝Ｏ、 ｅ＝13、 ｆ＝15、 ｉ＝１、 ｒ＝０）のオリゴ
ヌクレオチドの製造 d(3′−“フルオレセイン"−pGpGpTpGpTpTpTpGpGpGpGpG
pTpTpGpG(5′5′S)GpTpTpGpGpGpGpTpTpGpTpGpTpGp−
“フルオレセイン”) 合成は実施例４ｅと類似の方法で、式VIIa−５（B′＝G
uaPAC、 Ｚ＝“フルオレセイン"、 Ｗ＝Ｏ）の支持体から
出発して行われる。該支持体は、あらかじめ実施例２ａ
と類似の方法でビスアミダイト(VIa)(B′＝GuaPAC、 R5
＝R8＝i-C3H7）から“フルオレセイン”−Ｈとの反応に
よって得られた式VIII（B′＝GuaPAC、Ｚ＝“フルオレセ
イン"、 R5＝R6＝i-C3H7）のモノマーから、実施例３ａ
と類似の方法で製造された（Schubert et al., Nucleic
Acids Research (1991) 18, 3427参照）。３′−Ｏ−
ＤＭＴｒ基を除去した後に遊離３′−ヒドロキシル基を
式IX（R9＝N(i-C3H7)2、R10＝OCH2CH2CN、 Z″＝“フル
オレセイン"）のフルオレセインホスホルアミダイトで
ホスフィチル化し次にヨウ素水で酸化する。保護基をア
ンモニアで除去した後に、式ＩＡ−６のオリゴヌクレオ
チドが得られる。
＝“フルオレセイン"、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝
Z′＝Ｏ、 ｅ＝13、 ｆ＝15、 ｉ＝１、 ｒ＝０）のオリゴ
ヌクレオチドの製造 d(3′−“フルオレセイン"−pGpGpTpGpTpTpTpGpGpGpGpG
pTpTpGpG(5′5′S)GpTpTpGpGpGpGpTpTpGpTpGpTpGp−
“フルオレセイン”) 合成は実施例４ｅと類似の方法で、式VIIa−５（B′＝G
uaPAC、 Ｚ＝“フルオレセイン"、 Ｗ＝Ｏ）の支持体から
出発して行われる。該支持体は、あらかじめ実施例２ａ
と類似の方法でビスアミダイト(VIa)(B′＝GuaPAC、 R5
＝R8＝i-C3H7）から“フルオレセイン”−Ｈとの反応に
よって得られた式VIII（B′＝GuaPAC、Ｚ＝“フルオレセ
イン"、 R5＝R6＝i-C3H7）のモノマーから、実施例３ａ
と類似の方法で製造された（Schubert et al., Nucleic
Acids Research (1991) 18, 3427参照）。３′−Ｏ−
ＤＭＴｒ基を除去した後に遊離３′−ヒドロキシル基を
式IX（R9＝N(i-C3H7)2、R10＝OCH2CH2CN、 Z″＝“フル
オレセイン"）のフルオレセインホスホルアミダイトで
ホスフィチル化し次にヨウ素水で酸化する。保護基をア
ンモニアで除去した後に、式ＩＡ−６のオリゴヌクレオ
チドが得られる。
【０１００】ｈ） 式ＩＢ−２（R1＝R2＝Ｈ、 Ｚ＝O-(C
H2CH2O)8(CH2)3、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、
ｄ＝ｅ＝15、 ｉ＝１）のオリゴヌクレオチドの製造 (3′5′S)＝p(CH2CH2CH2p)4 d(GpGpGpCpGpGpGpGpCpTpTpApApApGpG(3′5′S)CpCpTpTp
TpApApGpCpCpCpCpGpCpCpCp-O-(CH2CH2O)8(CH2)13CH3) 実施例３ａに記載のようにして、式VIIIkのアミダイト
を用いて製造した式VIIa−６（B′＝CytBz、 Ｗ＝Ｏ、 Ｚ
＝-O-(CH2CH2O)8(CH2)13CH3)の支持体から出発して、オ
リゴヌクレオチド合成は最初に実施例４ｂと類似の方法
で行われる。第１５反応サイクルの後に、式XIVdの単位
を用いて４個のサイクルを実施する。残りの１６個のヌ
クレオチドは、５′−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌクレオシド３′
−ホスホルアミダイトを用いて実施例４ｂのように混入
する。
H2CH2O)8(CH2)3、 ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Y′＝Ｏ、
ｄ＝ｅ＝15、 ｉ＝１）のオリゴヌクレオチドの製造 (3′5′S)＝p(CH2CH2CH2p)4 d(GpGpGpCpGpGpGpGpCpTpTpApApApGpG(3′5′S)CpCpTpTp
TpApApGpCpCpCpCpGpCpCpCp-O-(CH2CH2O)8(CH2)13CH3) 実施例３ａに記載のようにして、式VIIIkのアミダイト
を用いて製造した式VIIa−６（B′＝CytBz、 Ｗ＝Ｏ、 Ｚ
＝-O-(CH2CH2O)8(CH2)13CH3)の支持体から出発して、オ
リゴヌクレオチド合成は最初に実施例４ｂと類似の方法
で行われる。第１５反応サイクルの後に、式XIVdの単位
を用いて４個のサイクルを実施する。残りの１６個のヌ
クレオチドは、５′−Ｏ−ＤＭＴｒ−ヌクレオシド３′
−ホスホルアミダイトを用いて実施例４ｂのように混入
する。
【０１０１】実施例５：ヌクレアーゼ安定性の試験 検査するオリゴヌクレオチド１０mmolをＲＰＭＩ培地中
の２０％胎児牛血清４５０μｌおよび２回蒸留した水５
０ml中に溶解し、３７℃でインキュベートする。次にゲ
ル電気泳動用の１０μｌ試料およびＨＰＬＣ用の２０μ
ｌ試料を、直後並びに１、２、４、７および２４時間後
に取り出し、各場合にそれぞれホルムアミド５μｌまた
は１０μｌと混合して反応を停止させ次いで９５℃で５
分間加熱する。ゲル電気泳動の場合には試料を１５％ポ
リアクリルアミドゲル(２％ビス)上に取り込み、約３,
０００ボルト時間流す。バンドを銀染色によって視覚化
する。ＨＰＬＣ分析の場合には試料をＧｅｎ−Ｐａｋ
Ｆａｘ ＨＰＬＣカラム（Waters／Millipore社製）上に
注入し、バッファーＢ中の５〜５０％バッファーＡ（バ
ッファーＡ：１０mAリン酸二水素ナトリウム、アセトニ
トリル／水 １：４（ｖ：ｖ）中の０.１Ｍ ＮａＣｌ pH
６.８；バッファーＢ：１.５Ｍ ＮａＣｌ以外はＡと同
じ）を用いて毎分１mlでクロマトグラフィー処理する。
の２０％胎児牛血清４５０μｌおよび２回蒸留した水５
０ml中に溶解し、３７℃でインキュベートする。次にゲ
ル電気泳動用の１０μｌ試料およびＨＰＬＣ用の２０μ
ｌ試料を、直後並びに１、２、４、７および２４時間後
に取り出し、各場合にそれぞれホルムアミド５μｌまた
は１０μｌと混合して反応を停止させ次いで９５℃で５
分間加熱する。ゲル電気泳動の場合には試料を１５％ポ
リアクリルアミドゲル(２％ビス)上に取り込み、約３,
０００ボルト時間流す。バンドを銀染色によって視覚化
する。ＨＰＬＣ分析の場合には試料をＧｅｎ−Ｐａｋ
Ｆａｘ ＨＰＬＣカラム（Waters／Millipore社製）上に
注入し、バッファーＢ中の５〜５０％バッファーＡ（バ
ッファーＡ：１０mAリン酸二水素ナトリウム、アセトニ
トリル／水 １：４（ｖ：ｖ）中の０.１Ｍ ＮａＣｌ pH
６.８；バッファーＢ：１.５Ｍ ＮａＣｌ以外はＡと同
じ）を用いて毎分１mlでクロマトグラフィー処理する。
【０１０２】実施例６：抗ウイルス活性 本発明化合物の抗ウイルス活性をインビトロ実験で試験
する。このためには、本発明化合物をマイクロタイター
プレート中のヘラ（HeLa）細胞およびベロ（Vero）細胞
の細胞培養に種々の希釈度で加える。３時間後に、これ
らの培養物にヒトの病原体である種々のウイルス（例え
ばヘルペスウイルスＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、オルソミ
クソウイルスインフルエンザＡ２、ピコルナウイルスラ
イノウイルス２）を感染させる。感染後４８〜７２時間
後に治療成功を細胞変性作用に基づいて、顕微鏡でおよ
びニュートラルレッド吸収の光学的測定（フィンターカ
ラーテスト）で決定する（Finter, N.B. in “Interfer
ons", N.B. Finter et al., North Holland Publishing
Co., Amsterdam, 1966）。感染細胞の半分が細胞変性
作用を全く示さない最小濃度を最小阻止濃度（ＭＩＣ）
であるとみなす。
する。このためには、本発明化合物をマイクロタイター
プレート中のヘラ（HeLa）細胞およびベロ（Vero）細胞
の細胞培養に種々の希釈度で加える。３時間後に、これ
らの培養物にヒトの病原体である種々のウイルス（例え
ばヘルペスウイルスＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、オルソミ
クソウイルスインフルエンザＡ２、ピコルナウイルスラ
イノウイルス２）を感染させる。感染後４８〜７２時間
後に治療成功を細胞変性作用に基づいて、顕微鏡でおよ
びニュートラルレッド吸収の光学的測定（フィンターカ
ラーテスト）で決定する（Finter, N.B. in “Interfer
ons", N.B. Finter et al., North Holland Publishing
Co., Amsterdam, 1966）。感染細胞の半分が細胞変性
作用を全く示さない最小濃度を最小阻止濃度（ＭＩＣ）
であるとみなす。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｆ 9/44 7731−4Ｈ Ｃ０７Ｈ 21/00 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 8114−4Ｂ (72)発明者 ジエラード・オマリー アメリカ合衆国ペンシルベニア州18940. ニユータウン．イーストペンストリート 523 (72)発明者 マテイーアス・ヘルスベルク ドイツ連邦共和国デー−6233ケルクハイム ／タウヌス．アム・ローゼンガルテン３ (72)発明者 イルヴイン・ヴインクラー ドイツ連邦共和国デー−6237リーダーバ ハ．インデンアイヒエン40
Claims (12)
- 【請求項１】 式ＩＡまたはＩＢ 【化１】 で表されるオリゴヌクレオチド類似体およびその生理学
的に許容しうる塩。上記式中、 Ｒ1は水素、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ2〜Ｃ18−アルケ
ニル、Ｃ2〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ2〜Ｃ18−アルキルカ
ルボニル、Ｃ3〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ3〜Ｃ
19−アルキニルカルボニル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、
（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルま
たは式II 【化２】 で表される基であり；Ｒ2は水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜
Ｃ18−アルコキシ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ2であ
り；Ｂはヌクレオチド化学における慣用の塩基であり；
ａはオキシまたはメチレンであり；ｄ、ｅ、ｆは互いに
独立していて、０〜５０の整数であり；ｉは１〜１０の
整数であり；ｒは０または１の整数であり（但しｒが０
である場合にはＶはＹ′でありそしてｉが１より大きい
場合にはｒは１である）；Ｗはオキソ、セレンオキソま
たはチオキソであり；Ｖはオキシ、チオまたはイミノで
あり；Ｙはオキシ、チオ、イミノまたはメチレンであ
り；Ｙ′はオキシ、チオ、イミノ、(ＣＨ2)mまたはＶ
(ＣＨ2)mであり、ここでｍは１〜１８の整数であり；Ｘ
はヒドロキシルまたはメルカプトであり；Ｕはヒドロキ
シル、メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、
Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、（Ｃ6〜
Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキル、ＮＨ
Ｒ3、ＮＲ3Ｒ4または式(ＯＣＨ2ＣＨ2)pＯ(ＣＨ2)qＣＨ
2Ｒ11の基であり、ここでＲ3はＣ1〜Ｃ18−アルキル好
ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、
（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキル、
−(ＣＨ2)c−〔ＮＨ（ＣＨ2)c〕d−ＮＲ12Ｒ12（ここで
ｃは２〜６の整数であり、ｄは０〜６の整数でありそし
てそれぞれのＲ12は独立していて、水素、Ｃ1〜Ｃ6−ア
ルキルまたはＣ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキ
ルである）であり、 Ｒ4はＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまた
は（Ｃ6〜Ｃ10）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキル
であり、またはＮＲ3Ｒ4の場合にはＲ3およびそれらを
担持している窒素原子と一緒になって５〜６−員の複素
環式環を示し、該環はさらにＯ、Ｓ、Ｎから成る群より
選択される別のヘテロ原子を含有することができ、 ｐは１〜１００の整数であり、 ｑは０〜１８の整数であり，Ｒ11は水素または官能基で
あり；Ｓは式III 【化３】 で表される基であり、ここでｇおよびｇ′は０または１
の整数であり、 ｈは０〜１０の整数であり、 ＧはＣ1〜Ｃ12−アルキレン（ここでアルキレンは場合
によりハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ18−
アルキル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ18−アルキ
ルカルボニルオキシ、Ｃ6〜Ｃ14−アリール、Ｃ6〜Ｃ14
−アリール−Ｃ 1〜Ｃ18−アルキルまたはＣ6〜Ｃ14−ア
リール−Ｃ1〜Ｃ8−アルコキシにより置換されうる）、
Ｃ6〜Ｃ14−アリール−ジ−Ｃ1〜Ｃ8−アルキレン、Ｃ6
〜Ｃ18−アリーレン、式（ＣＨ2ＣＨ2Ｖ)αＣＨ2ＣＨ
2もしくは(ＣＨ2Ｖ)αＣＨ2（ここでαは１〜１１好
ましくは１〜５の整数である）の基、式 【化４】 （ここでβは１〜６の整数である）の単位または式 【化５】 の基であり；Ｚ＝Ｚ′はヒドロキシル、メルカプト、Ｓ
ｅＨ、Ｃ1〜Ｃ22−アルコキシ、−Ｏ−(ＣＨ2)b−ＮＲ
12Ｒ13（ここでｂは１〜６の整数であり、そしてＲ13は
Ｃ1〜Ｃ6−アルキルであるか、またはＲ12およびＲ13は
それらを担持している窒素原子と一緒になって３〜６員
環を形成する）、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−ア
リール、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−ア
ルキル、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ8）−ア
ルコキシ（ここでアリールはヘテロアリールを包含し、
アリールはカルボキシル、アミノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4−
アルキルアミノ、ヒドロキシル、ハロゲンおよびシアノ
から成る群より選択される１、２または３個の同一また
は相異なる基によって場合により置換されている）、Ｃ
1〜Ｃ18−アルキルメルカプト、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4、式
IIIの基または分子内吸収を促進するかまたはＤＮＡプ
ローブ用標識として役立つかまたはオリゴヌクレオチド
類似体の標的核酸へのハイブリッド形成中に該標的核酸
を結合、架橋または分裂により攻撃する基であり；２′
−および３′−位の曲線括弧はＲ2および隣接ホスホリ
ル残基が３′−および２′−位で反対方向に位置するこ
とも可能であることを示しており、そして各ヌクレオチ
ドはＤ−またはＬ−配置で存在することができ、塩基Ｂ
はα−またはβ−位にあることができる。 - 【請求項２】 塩基Ｂがβ−位にあり、ヌクレオチドが
Ｄ−配置で存在し、Ｒ2が２′−位にありそしてａがオ
キシである請求項１記載のオリゴヌクレオチド類似体。 - 【請求項３】 Ｒ1が水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル特にメ
チルまたは式IIの基であり；Ｒ2が水素またはヒドロキ
シル、特に水素であり；ｄ、ｅおよびｆが５〜１５の整
数であり；ｉが１〜３の整数であり；ｍが１〜６の整数
特に１であり；Ｕがヒドロキシル、メルカプト、Ｃ1〜
Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、ＮＲ3Ｒ4また
はＮＨＲ3、特にヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ6−アルキ
ルであり、ここでＲ3がＣ1〜Ｃ8−アルキル好ましくは
Ｃ1〜Ｃ4−アルキルまたはメトキシエチルでありそして
Ｂ、Ｗ、Ｖ、Ｙ、Ｙ′、ＸおよびＺが前述の意味を有す
る、請求項１または２記載のオリゴヌクレオチド類似
体。 - 【請求項４】 Ｖ、ＹおよびＹ′がオキシの意味を有す
る請求項１、２または３のいずれか１項に記載のオリゴ
ヌクレオチド類似体。 - 【請求項５】 Ｗがオキソの意味を有する請求項１〜３
または４のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド類
似体。 - 【請求項６】 Ｕがヒドロキシルの意味を有する請求項
１〜４または５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオ
チド類似体。 - 【請求項７】 Ｒ1が水素である請求項１〜４または５
のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド類似体。 - 【請求項８】 請求項１記載の式ＩＡまたはＩＢのオリ
ゴヌクレオチド類似体の製造において、 ａ） 第１反応サイクルにおいて３′(２′)−末端リン
（Ｖ）基および遊離５′−ヒドロキシルまたはメルカプ
ト基を有するヌクレオチド単位を、３′(２′)位にリン
（III）またはリン（Ｖ）基またはその活性誘導体を有
するさらに別のヌクレオチド単位と反応させるか、また
はスペーサー基の導入を可能にする試薬と反応させ、次
のサイクルにおいて３′(２′)−または５′−末端リン
（III）またはリン（Ｖ）基またはその活性誘導体を有
するヌクレオチド単位を、５′−または３′(２′)−末
端遊離ヒドロキシルまたはメルカプト基を有するさらに
別のヌクレオチド単位と反応させるか、または ｂ） 同様の手法で各フラグメントを用いてオリゴヌク
レオチド類似体を構成し、そして上記（ａ）または
（ｂ）によって得られたオリゴヌクレオチド中に他の官
能基保護のために一時的に導入した保護基を除去し、こ
うして得られた式ＩＡおよびＩＢのオリゴヌクレオチド
類似体を、適切な場合にはその生理学的に許容しうる塩
に変換することからなる前記の製造方法。 - 【請求項９】 式 【化６】 〔式中、Ｒ5およびＲ6は互いに独立していて、Ｃ1〜Ｃ
12−アルキルであるかまたはこれら２つの基は一緒にな
って５〜６員環を形成し、ＤＭＴｒはジメトキシトリチ
ルであり、Ｘ′＝Ｙ′′′＝オキシまたはチオであり、
Ｕ′はＣ1〜Ｃ4−アルキルまたは保護された誘導体とし
て存在するヒドロキシル基でありそしてＧ′は(ＣＨ2Ｃ
Ｈ2Ｏ)αＣＨ2ＣＨ2またはＣＨ2ＣＨ(ＯＲ′)ＣＨ
2（ここでＲ′はＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ14−ア
リールまたはＣ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキ
ルでありそしてαは１〜１１の整数である）である〕で
表されるホスフィチル化試薬。 - 【請求項１０】 遺伝子発現の阻止剤としての、請求項
１〜６または７のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオ
チド類似体の使用。 - 【請求項１１】 核酸検出用プローブとしてまたは分子
生物学における補助剤としての、請求項１〜６または７
のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド類似体の使
用。 - 【請求項１２】 請求項１〜６または７のいずれか１項
に記載の式ＩＡおよび／またはＩＢのオリゴヌクレオチ
ド類似体１種以上を、適切な場合には生理学的に許容し
うる補助剤および／または賦形剤と一緒におよび／また
はその他の知られている活性物質と一緒に含有する製
剤。
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