JPH05244944A - 新規なβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移酵素、その製造法及びＮ−アセチルグルコサミニル転移生成物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ブタ血清から得られ、作用ｐＨ領域幅の広
く、安定なβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移
酵素、ブタ血清からこの転移酵素を製造する方法及び少
糖類あるいは糖脂質、糖タンパク質及び糖誘導体にウリ
ジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコサミンの存在下で
この転移酵素を作用させて、Ｎ−アセチルグルコサミン
残基を、前記糖の非還元末端のガラクトース残基の３位
にβ結合で転移させて、β１→３−Ｎ−アセチルグルコ
サミニル転移生成物を製造する方法。 【効果】 この発明の酵素は、大量に安価に生産するこ
とができ、作用ｐＨの領域が広く安定であるので、従来
困難とされていた糖の非還元末端のガラクトース残基の
３位にＮ−アセチルグルコサミン残基を位置特異的に導
入することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、β１→３−Ｎ−アセチ
ルグルコサミニル転移酵素、この転移酵素の製造法に関
する。さらにまた本発明は、該転移酵素を用いて糖類あ
るいは糖鎖の非還元末端のガラクトース残基にウリジン
ジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコサミンのＮ−アセチル
グルコサミンをβ（１→３）結合になるように導入する
Ｎ−アセチルグルコサミニル転移生成物の製造法に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】ガラクトース残基の３位にＮ−アセチル
グルコサミン残基がβ（１→３）結合した、いわゆる
“ＧｌｃＮＡｃβ（１→３）Ｇａｌ”構造（ＧｌｃＮａ
ｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を、Ｇａｌはガラク
トース残基をそれぞれ示す。以下、同じ）は、天然に存
在する種々の少糖類、糖脂質、糖タンパク質などに共通
に見いだされている。この構造は、Ｉｉ抗原と密接に関
係しており、更にＡＢＨ型、ルイス型等の血液型物質の
前駆体となっている。これらの抗原あるいはその前駆体
は、癌化に伴いその発現が変化することが知られてお
り、近年盛んに研究がなされているがいまだ詳細に解明
されるに至っていない。生体内におけるこの構造の合成
にはβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移酵素が
関与していると考えられている。

【０００３】従来、β１→３−Ｎ−アセチルグルコサミ
ニル転移酵素についての報告は、ヒト血清についてＰｉ
ｌｌｅｒら〔Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５８，１２２
９３−１２２９９（１９８３）〕、ヒト尿についてＴａ
ｋｅｙａら〔Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｂｉｏ
ｌ．３８，１−８（１９８５）〕、ヒト初乳、ウシ血
清、ウシ肝臓及びウシ腎臓についてＨｏｓｏｍｉら〔Ｊ
ｐｎ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．５１，１−６（１９８
８）〕、ラット腫瘍細胞についてＥｉｊｎｄｅｎら
〔Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５８，３４３５−３４３
７（１９８３）〕によって行なわれている。しかし、こ
れらの発表ではいずれの酵素においても原料に制約があ
り、いずれの酵素も安価に大量に入手することができ
ず、酵素も充分単離精製されておらず、そのため酵素学
的性質が詳細に調べられているものはない。また、酵素
の安定性が低いため簡便に非還元末端にガラクトース残
基を持つ少糖類あるいは糖鎖に位置特異的にＮ−アセチ
ルグルコサミン残基を導入することはできなかった。

【０００４】また、少糖類及び糖鎖を有する糖脂質、糖
タンパク質及び糖誘導体などに更に糖類を導入する方法
については多くの研究がなされているが、その方法は、
有機合成法や、加水分解酵素を用いた転移法が主であっ
た。有機合成法では、例えば、乳糖のガラクトース残基
の３位にＮ−アセチルグルコサミン残基を導入する場
合、乳糖の水酸基をアセチル化などして保護し、還元末
端をハロゲン化後、ベンジル化などを行い保護する。次
いで、脱アセチル化した後、ガラクトース残基の３位の
水酸基のみをメトキシベンジル化などで保護する。その
他の水酸基を再びアセチル化などで保護し、ガラクトー
ス残基の３位の水酸基の保護基をはずし、ガラクトース
残基の３位の水酸基のみ保護されていない乳糖誘導体を
得る。導入するＮ−アセチルグルコサミンは、アセチル
化などで水酸基を保護した後、ＦｅＣｌ₃ などのルイス
酸を用いてオキサゾリン誘導体に導き、前述のガラクト
ース残基の３位の水酸基のみ保護されていない乳糖誘導
体と適当な試薬を用いて縮合する。

【０００５】この後、水酸基及び還元末端の保護基をは
ずし、乳糖のガラクトース残基の３位にＮ−アセチルグ
ルコサミン残基を導入した化合物が得られる。この場
合、乳糖はジサッカライド（二糖）であるが、より重合
度の高い少糖類及び糖鎖を有する糖脂質、糖タンパク質
及び糖誘導体などにＮ−アセチルグルコサミン残基を導
入する場合は、より複雑な合成経路となる。このよう
に、有機合成法では工程数が多く、しかもその操作が非
常に煩雑で時間がかかり、目的物質の収量が低く、試薬
が高価であるという多数の欠点がある。一方、加水分解
酵素を用いた転移法では、位置特異的な転移反応が難し
く、特にＮ−アセチルグルコサミン残基の転移に関して
は、受容体分子が大きな物質では転移反応が進行せず、
実質的には、少糖類及び糖鎖を有する糖脂質、糖タンパ
ク質及び糖誘導体などにＮ−アセチルグルコサミン残基
を位置特異的に転移する事は不可能である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】以上のように、公知の
β１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移酵素は安価
に大量に入手することができず、そのため酵素学的性質
が詳細に調べられているものはなく、また、安定性が低
いため簡便に非還元末端にガラクトース残基を持つ少糖
類あるいは糖鎖に位置特異的にＮ−アセチルグルコサミ
ン残基を導入することはできなかった。また、有機合成
法では工程数が多く操作が非常に煩雑で時間がかかり、
目的物質の収量が低く、試薬が高価であるという多数の
欠点があり、加水分解酵素を用いた転移法では、位置特
異的な転移反応が難しく、Ｎ−アセチルグルコサミン残
基の転移に関しては、実質的には、位置特異的に転移す
る事は不可能であった。

【０００７】したがって本発明者らは、少糖類あるいは
糖鎖の非還元末端のガラクトース残基に位置特異的にＮ
−アセチルグルコサミン残基を、簡便に安価で効率よく
導入する方法を提供しようとして、β１→３−Ｎ−アセ
チルグルコサミニル転移酵素の検索に着手した。本発明
におけるβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移酵
素は、前述の観点からいくつかの基準を満たすことを必
要とした。すなわち、（ｉ）安価に大量に入手できる生
物材料中に存在すること、望ましくは、従来あまり有効
に利用されていない生物材料中に存在すること、(ii)可
溶性で取扱いが容易であること、(iii) 広いｐＨ範囲で
作用すること、(iv)安定性が高いこと等が必要とされ
た。すなわち、本発明の課題は、原料的にみて大量に安
価に存在する原料から得られ、安定で取り扱い易いβ１
→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移酵素を提供しよ
うとすることにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、このよう
な酵素の検索を行った結果、ブタ血清中に可溶性で安定
性が高く、取扱いが容易なβ１→３−Ｎ−アセチルグル
コサミニル転移酵素が存在することを見いだした。この
ようにブタ血清中にβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミ
ニル転移酵素を見いだしことは、現在、そのほとんどが
廃棄されている屠畜血液の利用範囲を拡大するという観
点においても有用なことである。したがって、本発明
は、上記知見に基づいてなされたものであって、公知の
β１→３−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素といくつ
かの重要な点において劇的に相違し、安価で大量に入手
でき、広いｐＨ範囲で良好な活性を示し、また安定であ
り、簡便に少糖類あるいは糖鎖の非還元末端のガラクト
ース残基に位置特異的にＮ−アセチルグルコサミン残基
を導入する新規なβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ル転移酵素にある。また本発明は、ブタ血清からこのよ
うな性質をもつβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル
転移酵素を製造する方法にある。さらに、本発明は、こ
のような新規なβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル
転移酵素を用いて簡便で安価に効率良くＮ−アセチルグ
ルコサミニル転移生成物の製造方法にある。

【０００９】以下に、本発明の内容を具体的に説明す
る。本発明のＮ−アセチルグルコサミニル転移酵素は、
次の方法で製造される。まず屠殺されたブタの血液から
血清を採取する。これは従来血清の採取に行なわれてい
る通常の方法が行なわれる。次にこの血清を硫酸アンモ
ニウムによる塩析法により処理して酵素タンパク質を濃
縮し、得られた濃縮液を陰イオン交換クロマトグラフィ
ーを用いて処理して本発明のβ１→３−Ｎ−アセチルグ
ルコサミニル転移酵素を得ることができる。

【００１０】本発明のβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサ
ミン転移酵素の性質を示す。 （１）作用 ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコサミンのＮ−
アセチルグルコサミン残基を、少糖類あるいは糖鎖の該
非還元末端ガラクトース残基の３位にβ結合で転移さ
せ、Ｎ−アセチルグルコサミニル転移生成物を生成す
る。この転移反応について、受容体が乳糖の場合を例に
具体的に説明すると、ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチ
ルグルコサミンを糖供与体として乳糖の存在下本発明の
転移酵素を作用させると、トリサッカライド（三糖）が
生成する。すなわち、転移生成物を酸加水分解による構
成糖分析、メチル化分析及び酵素逐次分解などの構造解
析を行った結果、乳糖のガラクトース残基の３位にＮ−
アセチルグルコサミン残基がβ位で結合したＯ−β−Ｄ
−Ｎ−アセチルグルコサミニル−（１→３）−Ｏ−β−
Ｄ−ガラクトシル−（１→４）−Ｄ−グルコースの構造
を持つトリサッカライド（三糖）であった。

【００１１】（２）基質特異性 糖供与体はウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコサ
ミンであり、糖受容体は非還元末端にガラクトース残基
を持つ少糖類あるいは非還元末端にガラクトース残基を
持つ糖鎖を有する糖脂質、糖タンパク質及び糖誘導体で
ある。ガラクトース単糖は、糖受容体として適していな
い。

【００１２】（３）至適ｐＨ及び安定ｐＨ 本発明の酵素を、ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグ
ルコサミンを糖供与体、乳糖を糖受容体として３７℃で
４時間作用させた場合、図１に示したように作用ｐＨは
５．５から９．５であり、至適ｐＨは８．５付近に認め
られた。また、種々のｐＨの緩衝液中で、４℃において
２０時間放置したときの本発明の酵素の安定ｐＨ範囲
は、図２に示したように、５．５から９．５である。

【００１３】（４）作用適温の範囲 本発明の酵素を、ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグ
ルコサミンを糖供与体、乳糖を糖受容体としてｐＨ８．
５で４時間作用させた場合、４０℃付近に作用適温が認
められた。

【００１４】（５）ｐＨ、温度などによる失活の条件 本発明の酵素を、２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．２）中において、各温度で１５分間加熱処理したと
きの残存活性は、図３に示したように、４０℃まではほ
とんど失活せず、４０℃以上で急激に失活がはじまり、
４５℃で約６５％、５５℃でほとんどの活性を失い、６
０℃で完全に失活した。

【００１５】（６）阻害及び活性化 本発明の酵素を、各種金属塩化物及びキレート剤の存在
下で、ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコサミン
を糖供与体、乳糖を糖受容体として、ｐＨ８．５で３７
℃において４時間作用させて活性を測定すると、表１に
示したように、キレート剤であるエチレンジアミン四酢
酸で阻害され、また、Ｚｎ²⁺、Ｆｅ²⁺、Ｎｉ²⁺などの金
属によっても阻害された。一方、Ｃｄ²⁺、Ｍｇ²⁺及びＭ
ｎ²⁺などの金属により２〜３０倍活性化された。

【００１６】

【表１】

【００１７】（７）活性測定法 通常、本発明の酵素は、ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセ
チルグルコサミンのＮ−アセチルグルコサミン残基を、
非還元末端にガラクトース残基を持つ少糖類あるいは糖
鎖の該非還元末端ガラクトース残基の３位にβ結合で転
移し、Ｎ−アセチルグルコサミニル転移生成物を生成す
ることから、ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコ
サミンを糖供与体、非還元末端にガラクトース残基を持
つ少糖類のなかでその構造が簡単であり入手し易い乳糖
を糖受容体として、活性を測定する。５ｎｍｏｌのウリ
ジンジフォスホ−Ｎ−アセチル〔¹⁴Ｃ〕グルコサミン
（５μＣｉ／μｍｏｌ）、１０μｍｏｌの乳糖、０．５
μｍｏｌの塩化マンガン、５μｍｏｌのトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８．５）と、適量の酵素を含む総量５０μｌ
を、３７℃で４時間保温して反応を行い、０．５ｍｌの
冷水を加えて反応を停止した後、陰イオン交換樹脂を充
填したカートリッジカラム（ウォーターズ社製、セプ−
パックＱＭＡなど）を用いてＮ−アセチルグルコサミニ
ル転移生成物を分離して、これに含まれる¹⁴Ｃの放射活
性を測定し活性を求めた。この条件で、１時間に１ｎｍ
ｏｌのＮ−アセチルグルコサミン残基を転移する酵素量
を１単位とした。

【００１８】以上の性質からみて、本発明のβ１→３−
Ｎ−アセチルグルコサミニル転移酵素は安定性や金属イ
オンによる活性化の点で、従来のβ１→３−Ｎ−アセチ
ルグルコサミニル転移酵素と相違し、新規な酵素であ
る。

【００１９】

【発明の効果】本発明のβ１→３−Ｎ−アセチルグルコ
サミニル転移酵素は、公知のβ１→３−Ｎ−アセチルグ
ルコサミニル転移酵素といくつかの重要な点において明
確に区別され、新規酵素である。そして、この酵素は、
安価で大量に入手でき、広いｐＨ範囲で良好な活性を示
し、また安定であり、簡便にウリジンジフォスホ−Ｎ−
アセチルグルコサミンからＮ−アセチルグルコサミン残
基を、非還元末端にガラクトース残基を持つ少糖類ある
いは糖鎖の非還元末端ガラクトース残基の３位にβ結合
で転移することができるという有用な性質を持つもので
ある。このように本発明は、従来、非常に困難であった
少糖類あるいは糖鎖を有する糖脂質、糖タンパク質及び
糖誘導体にＮ−アセチルグルコサミン残基を簡便に安価
で効率よく導入するという技術に関して新しい進歩をも
たらしたものである。また、本発明の酵素がブタ血清中
に含まれるということは、現在、そのほとんどが廃棄さ
れている屠畜血液の利用範囲を拡大するという観点にお
いても有用なことである。

【００２０】以下、実施例を示して本発明を具体的に説
明する。

【実施例１】ブタ血清中に含まれるβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサ
ミニル転移酵素の調製（濃縮）法 ブタ鮮血を４℃で一晩静置した後、２，０００×ｇで１
０分間遠心分離して血清を分離する。ブタ血清に２０％
飽和となるように固形硫酸アンモニウムを攪拌しながら
加え、硫酸アンモニウムが溶解したら２時間静置する。
２０，０００×ｇで２０分間遠心分離して上清を集め
る。上清に更に６０％飽和となるように固形硫酸アンモ
ニウムを攪拌しながら加え、硫酸アンモニウムが溶解し
たら８時間静置する。２０，０００×ｇで２０分間遠心
分離して沈澱を集める。沈澱を少量の２０ｍＭトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ７．２）（緩衝液Ａ）に溶解し、緩衝
液Ａに対して１２時間透析する。これを緩衝液Ａで平衡
化した弱陰イオン交換カラムに通し、酵素タンパク質を
吸着させる。カラムを緩衝液Ａで充分洗浄した後、緩衝
液Ａ中の０−０．５Ｍ塩化カリウム直線濃度勾配で、酵
素タンパク質をカラムから溶出する。溶出した酵素溶液
を、緩衝液Ａに対して透析し、脱塩する。分画分子量１
０，０００の限外濾過を用いて酵素タンパク質を濃縮す
る。濃縮した酵素液を、緩衝液Ａで平衡化した分画分子
量７００，０００までのゲル濾過カラムに通し、緩衝液
Ａで酵素タンパク質をカラムから溶出する。溶出した酵
素溶液を、分画分子量１０，０００の限外濾過を用いて
酵素タンパク質を濃縮して、部分精製した酵素標品が得
られる。

【００２１】

【実施例２】０．２Ｍの乳糖、０．２ｍＭのウリジンジ
フォスホ−Ｎ−アセチルグルコサミン、１０ｍＭの塩化
マンガン、５０ｍＭのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．
５）、７０％（ｖ／ｖ）の酵素液を含む、総量１リット
ルの反応液を、３７℃で４時間保温して、転移反応を行
った。得られた反応液を、１００℃で３分間加熱して酵
素を失活させた。次に、この反応液を、５０００×ｇで
２０分間遠心分離して不溶化した物質を除き、活性炭カ
ラム（φ３×５０ｃｍ）に通して、生成したＮ−アセチ
ルグルコサミニル転移生成物であるトリサッカライド
（三糖）を吸着させた。次いで、２リットルの水をカラ
ムに通し、非吸着物質を除いた後、２リットルの５％
（ｖ／ｖ）エタノールをカラムに通し、吸着した乳糖を
完全に溶出し、除去した。次に、５〜３０％（ｖ／ｖ）
のエタノール、２リットルをカラムに通して精製し、Ｎ
−アセチルグルコサミニル転移生成物である三糖を１５
ｍｇ得た。

【００２２】得られた三糖を１Ｎトリフルオロ酢酸中で
１００℃、２時間加水分解し、これを高速液体クロマト
グラフィーを用いて分析すると、グルコサミン、ガラク
トース、グルコースがモル比１：１：１で検出された。
得られた三糖を還元した後、常法によりメチル化分析し
た結果、２Ｎ−メチルアセトアミド−２−デオキシ−
３，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルシトール、
２，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラクチトール、
１，２，３，５，６−ペンタ−Ｏメチル−Ｄ−グルシト
ールが、モル比１：１：１で得られた。また、得られた
三糖にタチナタマメ由来のβ−Ｎ−ヘキソサミニダーゼ
を作用させると、Ｎ−アセチルグルコサミンと乳糖が生
成した。これらのことから、生成したＮ−アセチルグル
コサミニル転移生成物である三糖がＯ−β−Ｄ−Ｎ−ア
セチルグルコサミニル−（１→３）−Ｏ−β−Ｄ−ガラ
クトシル−（１→４）−Ｏ−Ｄ−グルコースであること
が確認された。

【００２３】

【実施例３】０．２Ｍのラクトシルセラミド、０．２ｍ
Ｍのウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコサミン、
１０ｍＭの塩化マンガン、０．１％（ｗ／ｖ）のトリト
ン−Ｘ１００、５０ｍＭのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８．５）、７０％（ｖ／ｖ）の酵素液を含む、総量の１
リットルの反応液を、３７℃で８時間保温して、転移反
応を行った。得られた反応液を、１００℃で３分間加熱
して酵素を失活させた。

【００２４】次に、この反応液を、５０００×ｇで２０
分間遠心分離して不溶化した物質を除き減圧濃縮した
後、シリカゲルカラム（φ２×２５ｃｍ）に通して、ラ
クトシルセラミドと生成したＮ−アセチルグルコサミニ
ル転移生成物である糖脂質を吸着させた。次いで、２５
０ｍｌのクロロホルム：メタノール：水（８０：２０：
２，ｖ／ｖ／ｖ）をカラムに通し、非吸着物質と吸着し
たラクトシルセラミドを除いた後、２５０ｍｌのクロロ
ホルム：メタノール：水（７０：３０：３，ｖ／ｖ／
ｖ）をカラムに通し、生成したＮ−グルコサミニル転移
生成物である糖脂質を得た。得られた糖脂質を、更に、
シリカゲルカラム（φ１×２５ｃｍ）に通して、糖脂質
を吸着させ、同様に溶出して精製し、２５ｍｇの糖脂質
を得た。得られたＮ−アセチルグルコサミニル転移生成
物である糖脂質は、Ｏ−β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサ
ミニル−（１→３）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトシル−（１
→４）−Ｏ−β−Ｄ−グルコシルセラミドであることが
確認された。

【図面の簡単な説明】

【図１】ブタ血清中に含まれるβ１→３−Ｎ−アセチル
グルコサミニル転移酵素の至適ｐＨを示す。

【図２】同転移酵素の安定ｐＨ範囲を示す。

【図３】同酵素の２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．２）中における熱安定性を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 守田 稔 埼玉県川越市新宿町５−11−３ 雪印乳業 株式会社技術研究所独身寮 (72)発明者 出家 栄記 埼玉県狭山市入間川１−６−６−802

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ブタ血清に由来し、次の酵素的性質で特
   徴づけられる新規なβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミ
   ニル転移酵素 作用 ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコサミンのＮ−
   アセチルグルコサミン残基を、少糖類あるいは糖鎖の非
   還元末端ガラクトース残基の３位にβ結合で転移する。 基質特異性 糖供与体；ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコサ
   ミン 糖受容体；非還元末端にガラクトース残基をもつ少糖
   類、非還元末端にガラクトース残基をもつ糖鎖のある糖
   脂質、糖タンパク及び糖誘導体。 至適ｐＨ 至適ｐＨは約８．５。 安定ｐＨの範囲 安定ｐＨの範囲は５．５乃至９．５。 作用適温の範囲 作用適温の範囲は約４０℃。 失活の条件 ｐＨ７．２において５５℃以上、１５分間の処理により
   ほぼ完全に失活する。 阻害及び活性化 エチレンジアミン四酢酸、Ｚｎ²⁺、Ｆｅ²⁺及びＮｉ²⁺で
   阻害されるＣｄ²⁺、Ｍｇ²⁺及びＭｎ²⁺で２〜３０倍活性
   化される。
2. 【請求項２】 ブタ血清を硫酸アンモニウムによる塩析
   法により処理して酵素タンパク質を濃縮し、得られた濃
   縮液を陰イオン交換クロマトグラフィー及びゲル濾過ク
   ロマトグラフィーを用いて転移酵素を得ることを特徴と
   する新規なβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移
   酵素の製造方法。
3. 【請求項３】 非還元末端にガラクトース残基を有する
   少糖類、あるいは非還元末端にガラクトース残基をもつ
   糖鎖を有する糖脂質、糖タンパク質及びその誘導体を糖
   受与体とし、ウリジンジフォスホ−Ｎ−アセチルグルコ
   サミンを糖供与体とし、ブタ血清中に含まれる請求項１
   記載のβ１→３−Ｎ−アセチルグルコサミニル転移酵素
   によって糖供与体中のＮ−アセチルグルコサミン残基を
   糖受容体の非還元性末端のガラクトース残基の３位に、
   β結合で転移結合させ、これを採取することを特徴とす
   るＮ−アセチルグルコサミニル転移生成物の製造方法。