JPH05229959A - 鉄吸収促進組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 魚肉をタンパク分解酵素処理し、得られたペ
プチド原液を活性炭処理してなる鉄吸収促進性ペプチド
ＥＳＰ−２、及びそれを精製してなるＤＡＮ−１００。 【効果】 本ペプチドの鉄化合物及び必要あればクエン
酸塩を配合して鉄吸収性にすぐれた鉄剤を製造すること
ができ、鉄分の補給や貧血改善のための飲食品、医療品
として利用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は鉄吸収促進性ペプチドＥ
ＳＰ−２及びＤＡＮ−１００を有効成分とした鉄吸収促
進組成物及びこれらとクエン酸及び鉄化合物を混合乃至
はキレート結合させてなる吸収性のよい鉄剤に関するも
のである。

【０００２】本発明の鉄吸収促進組成物や鉄剤は鉄の吸
収性を著じるしく改善することができるので、貧血改善
のための健康食品、薬剤として好適なものである。

【０００３】

【従来の技術】本発明に先だって、本発明者らは、魚肉
をタンパク分解酵素処理し、得られたペプチド原液を活
性炭処理して、新規ペプチドＥＳＰ−２を開発し（特開
平２−２７３１４４号）、そして、これを更にイオン交
換処理することによって、新規ペプチドＤＡＮ−１００
を開発するのに成功した（特公平３−５４９５８号）。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明では魚肉のタン
パク分解酵素処理によって得られたペプチドの鉄吸収促
進作用を確認し、更には貧血改善のための鉄剤ないし飲
食品、栄養剤、栄養食品、特定保健用食品等を開発せん
とするものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に各方面から検討の結果、安全性の面から天然物を利用
することとし、そこで、先に本発明者らが開発した魚肉
由来のペプチド、ＤＡＮ−１００に着目した。そして、
ＤＡＮ−１００及び関連物質について、その生理活性を
徹底的に検討した結果ペプチドＤＡＮ−１００のほか、
その原料であるところの魚肉のタンパク分解酵素処理物
を活性炭処理して得たペプチドＥＳＰ−２が、すぐれた
鉄可溶化作用及び鉄吸収促進作用を有するという新規に
して有用な知見を得た。本発明はこのような有用な新知
見に基づいてなされたものである。

【０００６】本発明において使用するペプチドは、既述
のように本発明者らによって開発されたものであって、
例えば特開平２−２７３１４４号、特公平３−５４９５
８号に記載されているように、魚介類をタンパク分解酵
素で処理することによりペプチドを生成させた後、活性
炭処理して先ずペプチドＥＳＰ−２を得、次いでこれを
アルコール分画、イオン交換樹脂処理することにより、
そして必要あればこ（れら）の処理をくり返して分離、
精製を行い、ペプチドＤＡＮ−１００を得るのである。

【０００７】本ペプチドは魚介類を原料として製造する
ものであるが、先ず、これを採肉機、デボーナー等によ
って処理して魚肉質を分離する。原料は出来る限り新鮮
なものが好ましい。分離した魚肉は、１０ｋｇ程度のす
り身に分割し、このまま次の処理に使用してもよいが、
−２０〜−５０℃、例えば−３０℃、程度の冷気を吹き
付けて急速凍結し、−２０〜−２５℃に保存しておき、
必要に応じてこれを適宜使用するようにしてもよい。

【０００８】魚介類としては、イワシ、アジ、マグロ、
カツオ、サンマ、サバ等赤身魚；ヒラメ、タイ、キス、
コノシロ、タラ、ニシン、ブリ等白身魚；サメ、エイ等
軟骨魚肉；ワカサギ、コイ、イワナ、ヤマメ等淡水魚
肉；アイザメ、アンコウ等深海魚肉のほか、エビ、カ
ニ、タコ、アミ類等も適宜使用できる。

【０００９】本発明においては、採肉した後、粉砕機等
によって魚介類を粉砕し、原料重量に対して無加水〜１
０倍量加水、酵素適温（使用酵素によって異なるが、２
０〜６０℃程度）にまで加温し、ｐＨも適値（ｐＨ２〜
１１程度）に調整し、蛋白分解酵素を加えて、１〜３０
時間処理する。希望するのであれば粉砕魚介肉を加水し
た後攪拌タンク内で４０〜６０℃程度に１〜５時間保持
して自己消化せしめ、しかる後に酵素を添加して分解せ
しめてもよい。

【００１０】蛋白分解酵素としては、蛋白質を分解し得
る酵素であればすべての酵素が単独で又は混合して使用
し得る。その起源は、動植物のほかに微生物に求めるこ
とができ、ペプシン、レニン、トリプシン、キモトリプ
シン、パパイン、ブロメレインのほか、細菌プロテアー
ゼ、糸状菌プロテアーゼ、放線菌プロテアーゼ等も広く
利用できる。これらの酵素は、通常、市販されているも
のが使用されるが、未精製の酵素、酵素を含有した培養
液、麹といった固体又は液体の酵素含有物も、目的によ
り必要に応じて使用することができる。

【００１１】蛋白分解酵素の量は、酵素の精製度によっ
て相違し、また、処理時間によっても相違するが、処理
液の０．０５〜５％、好ましくは０．１％程度の使用で
十分である。０．１％濃度のプロテアーゼ液を使用した
場合、魚肉としてイワシのような赤身肉を処理するとき
には、ｐＨ４．１、４５℃で約１７時間、又はｐＨ５．
９、４８℃で約４時間で酵素処理は終了する。

【００１２】次いで中和した後、８０℃以上の温度に５
〜３０分間保持して酵素を失活させる。加熱失活処理
後、バイブロスクリーン等によって濾過し、必要により
ジェクター処理した後、シャープレス遠心分離機等を用
いて例えば１００００〜３００００ｒｐｍで遠心分離す
る。

【００１３】これを常法により濃縮し（３０Ｂｘ程度に
まで）た後、再度遠心分離してペプチド原液を得る。

【００１４】次いでペプチド原液は、活性炭、ケイソウ
土を加えて脱色し、濾過してそのまま機能性ペプチド原
液として使用することができる。また、ここに得られる
機能性ペプチド原液は、デキストリンを添加もしくは添
加せずに、凍結乾燥したり、噴霧乾燥したりして、粉末
化することもできるものである。

【００１５】このようにして得た機能性ペプチドは、文
献未載で新規なものであり、本発明者らによってＥＳＰ
−２と命名された。

【００１６】ペプチドＥＳＰ−２の物理化学的性質は、
下記表１、表２のとおりである。

【００１７】

【表１】

【００１８】

【表２】

【００１９】上記により調製した機能性ペプチドＥＳＰ
−２は、後記するように本発明における有効成分として
利用できるが、これを更に精製して得られるペプチドも
すぐれた機能性を有し、本発明の有効成分として利用す
ることができる。その精製は、次のようにして行う。先
ず、ＥＳＰ−２にアルコールを加えて放置する。アルコ
ールとしては、メタノール、エタノール、プロパノー
ル、イソプロパノール、ブタノール等が好適であるが、
他のアルコールを使用してもさしつかえない。アルコー
ルは冷時使用し（０〜１０℃）、ペプチド原液と等量な
いし３０倍以上使用する。冷アルコール添加後、冷室に
３０分〜３時間以上放置して沈殿を生成せしめて更に精
製してもよい。

【００２０】上記によって得たアルコール沈殿に加水し
て溶液とした後、この溶液は、イオン交換樹脂で処理す
るが、樹脂としては、カチオン交換樹脂、特に強酸性カ
チオン交樹樹脂を使用する。例えば、これらの樹脂を充
填したカラムに上記溶液を注入し、水洗したあと希アン
モニウム水等のアルカリ水溶液で溶出し、溶出液を得
る。

【００２１】得られた溶出液は、減圧濃縮等の方法によ
りアンモニアを除去した後、必要に応じて上記処理をく
り返し、濃縮して、常法にしたがって凍結乾燥等の方法
によって粉末化し、目的とする塩基性ペプチドを得る。
前記したように、上記溶出液を、濃縮又は希釈して、各
種の用途に使用してもよい。

【００２２】このようにして得られたペプチドは、本発
明者らによって開発されたものでありしかも極めて有用
なものであって、ＤＡＮ−１００と命名した。

【００２３】ペプチドＤＡＮ−１００の物理化学的性質
は、下記表３、表４のとおりである。

【００２４】

【表３】

【００２５】

【表４】

【００２６】本発明に係るペプチドは、後記するところ
から明らかなように、いずれも、各種の鉄塩に対する鉄
可溶化能にすぐれているのみでなく、ｉｎ ｖｉｖｏに
おいてもすぐれた鉄吸収促進作用を示し、人畜に対する
鉄の補給、鉄の強化、鉄欠乏性貧血の予防、治療、改善
に有利に使用することができ、鉄吸収促進組成物とし
て、例えば、鉄吸収促進剤、飲食品、栄養強化食品、機
能性食品（特定保健用食品）、ないしは動植物肥飼料添
加剤として使用されるほか、医薬として、または輸液、
健康食品、臨床栄養食品等としても巾広く使用すること
ができる。

【００２７】また、後記するところから明らかなように
上記した作用は、クエン酸及び／又はクエン酸塩の存在
下で更に増巾されるので、本発明のペプチド、鉄化合物
及びクエン酸（塩）を併用すれば更に効果が高まること
となる。したがって、ペプチド及び鉄化合物を配合した
鉄剤、そして、これに更にクエン酸（塩）を配合した鉄
剤は、鉄欠乏性貧血をはじめとする各種の鉄欠乏による
疾病の予防、治療、改善のため、医薬品、飲食品、飼料
添加物等の形態に製剤化することができる。鉄化合物と
しては、特に限定されることなく、塩化鉄、硫酸第一
鉄、クエン酸第一鉄、クエン酸鉄アンモニウム、コハク
酸クエン酸鉄ナトリウム、乳酸鉄、ピロリン酸鉄その他
無機ないし有機の鉄化合物が適宜使用できるし、配合量
も市販鉄剤と同様にすればよい。本発明においては、鉄
の吸収促進効果が高いので、少量の鉄分を配合してもこ
れを有効に利用することができる。また、クエン酸
（塩）としては、遊離のクエン酸のほか、ナトリウム
塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩その他
の塩が適宜自由に使用することができ、格別の限定はな
い。そしてこの場合、クエン酸第一鉄ナトリウムといっ
た化合物を使用すれば、クエン酸と鉄とを同時に配合す
ることにもなる。

【００２８】本発明によって著効が奏される詳細なメカ
ニズムについては、今後の研究にまたねばならないが、
ＥＳＰ−２、ＤＡＮ−１００を、ＨＰＬＣを用いて、ク
エン酸第一鉄を含む酢酸緩衝液で溶出し、分画した画分
について鉄の濃度を測定したところ、ペプチドの溶出パ
ターンと同一パターンの鉄濃度変化が確認され、イワシ
筋肉由来ペプチドの鉄吸収促進効果はクエン酸を介した
鉄とのキレート現象によることが示唆された。したがっ
て本発明に係る鉄剤は、ペプチド、クエン酸及び／又は
その塩、鉄化合物の３成分を単に混合したもののみでな
く、これらのキレート結合せしめてなるものも包含する
ものである。

【００２９】本発明に係るイワシ由来のペプチド（ＥＳ
Ｐ−２、ＤＡＮ−１００）を鉄吸収促進組成物、として
特に飲食品タイプで使用する場合には、ペプチド（液
状、ペースト状、粉末状）をそのまま添加したり、他の
食品ないしは食品成分と併用したりして適宜常法にした
がって使用できる。また、鉄吸収促進剤や鉄剤等医薬タ
イプとして使用する場合には、経口又は非経口投与する
ことができる。経口投与の場合には、例えば常法にした
がい、錠剤、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤、散剤とする
ことができ、又、非経口投与の場合には、例えば注射薬
製剤、点滴剤、坐剤等として使用することができる。

【００３０】本発明に係るペプチドは、天然起源である
ために毒性が全くないか又は極めて低く、きわめて安全
である（ＬＤ₅₀＞３０００ｍｇ／ｋｇ皮下、＞５０００
ｍｇ／ｋｇ経口：いずれもラット）。

【００３１】以下、本発明の製造例及び実施例について
述べる。

【００３２】［製造例１］新鮮イワシをボデーナーで処
理して採肉した。採肉した魚肉質を１０ｋｇのすり身に
分割した。これを粉砕機で粉砕した後等量の水を加え、
４５〜４８℃に加熱し、これを攪拌タンクに移して同温
に２〜３時間保持して自己消化合解せしめた。次いでｐ
Ｈを４．１に調節した。これに、デナチーム（市販プロ
テアーゼ製剤商品名）の０．１％液を加え、４５℃に１
７時間保持して酵素分解を行った。中和し、次いで１５
分間煮沸して酵素を失活せしめた。

【００３３】これをバイブロスクリーン（１５０メッシ
ュ）で濾過し、濾液を５０００ｒｐｍでジェクター処理
した後、シャープレス遠心分離機で処理し（１５０００
ｒｐｍ）、２０Ｂｘとなるまで常温加熱濃縮し、そして
再度シャープレス遠沈処理（１５０００ｒｐｍ）してペ
プタイド原液（ＤＡＮ−Ｎｏ．２）を得た。

【００３４】［製造例２］上記で得たペプタイド原液
（ｐＨ６．２２）を１８４０ｍｌとり、これに活性炭１
００ｇを加え６０分間攪拌した後濾過して濾液（ｐＨ
６．１２）（ＥＳＰ−２）１５００ｍｌを得た。次い
で、濾液を１００ｍｌとり、これに冷メタノールを２０
００ｍｌ加え、冷室に６０分間放置して沈澱を生ぜしめ
た。生じた沈澱物を水に加えて溶液（Ｅ）を得た。

【００３５】［製造例３］ＥＳＰ−２を含有する上記溶
液（Ｅ）を１００ｍｌとり、これをダウエックス５０Ｗ
〔Ｈ+〕を充填したカラム（径５×１５ｃｍ）に注入し
た。そして、水２０００ｍｌを用いて樹脂を水洗し、２
Ｎ−ＮＨ₄ＯＨ２５０ｍｌを用いて溶出し、得られた溶
出液を濃縮した後、セファデックスＧ−２５カラムによ
るクロマト処理を行った。得られたペプチドフラクショ
ンについて、上記と同様にダウエックスカラムクロマト
処理、脱イオン水による水洗、アンモニア水溶出、濃縮
処理を行った後、凍結乾燥してペプチドＤＡＮ−１００
の白色粉末を得た。

【００３６】このようにして製造したペプチドＥＳＰ−
２及びＤＡＮ−１００について、Ａｓａｈｉｐａｋ Ｇ
Ｓ−３２０カラム（径４．０ｍｍ×４５ｃｍ）を用い、
次の条件で高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を行
い、図１のパターンを得た。溶離液：０．１％トリフル
オロ酢酸中４５％アセトニトリル、流速：０．５ｍｌ／
ｍｉｎ、検出：ＵＶ２２０ｎｍ、マーカー：Ｂ＝バシト
ラシン（分子量１，４５０）、Ｇ＝グリシル−チロシン
（分子量２３８）。その結果、ＥＳＰ−２で５００〜１
０，０００程度の、そしてまたＤＡＮ−１００で５００
〜２，０００程度の分画分子量域を示した。

【００３７】［実施例１］本発明に係るペプチドＥＳＰ
−２、ＤＡＮ−１００について、各種の鉄試料に対する
ｐＨ７．０での（蒸留水ベース及びリン酸緩衝液ベー
ス）鉄可溶化試験を行った。なお、比較対照試料として
は、カゼインペプチドを用いた。

【００３８】鉄のアッセイは次のようにして行った。先
ず、各ペプチド（タンパク含量０．１〜０．５％）に、
蒸留水ベースの場合（図面においてはＡで示す）には蒸
留水を２．５ｍｌ加え、リン酸緩衝液ベースの場合（図
面においてはＢに示す）には６００ｍＭホスフェートバ
ッファー（ｐＨ６．８）を２．５ｍｌ加え、ＨＣｌでｐ
Ｈを２．５に調整した後、鉄の標準溶液（Ｆｅ：１００
０ｐｐｍ）をそれぞれ各０．１ｍｌ加え、ＨＣｌでｐＨ
を２．０に調整した後、室温に３０分保持し、ＮａＯＨ
でｐＨを７．０に調整した。これを希釈して１０ｍｌに
し、３７℃に３０分保持した後、濾過した（東洋、Ｎ
ｏ．２）。濾液について、極性ゼーマン原子吸収スペク
トロフォトメーター（日立、ＨＩＴＡＣＨＩ Ｚ−６１
００）により鉄含量を測定した。そして、上記と同様に
して各々の鉄を加えないペプチド自体の鉄含有量を求
め、差引値を鉄可溶化量とした。

【００３９】上記した手法にしたがって、５種類の鉄試
料、塩化鉄（ＦｅＣｌ₂）、硫酸第一鉄（ＦｅＳＯ₄）、
クエン酸第一鉄ナトリウム（ＦｅＮａＨ（Ｃ₆Ｈ
₈Ｏ₇）₂）、クエン酸添加塩化鉄、及びクエン酸添加硫
酸第一鉄について、鉄可溶化率を測定し、それぞれ図２
〜図６の結果を得た。なお、各図において、Ａは蒸留水
ベース、及びＢは１５０ｍＭホスフェートバッファーベ
ースにおけるデータを示した。また、各試験において、
鉄及びクエン酸の含有量は１００μｇ／１０ｍｌであっ
た。

【００４０】上記結果から明らかなように、イワシ筋肉
由来ペプチドは、すぐれた鉄可溶化能を示し、とりわけ
クエン酸存在下では鉄可溶化能が大幅に増加することが
立証された。すなわち、図２にみられるように塩化鉄に
ついてはカゼインペプチドの方が鉄可溶化率が高かった
が、図３から明らかなように硫酸第一鉄を用いたリン酸
緩衝液ベースでは、カゼインペプチドの鉄可溶化率は低
下し、ＤＡＮ−１００の方が高い鉄可溶化率を示した。
図４から明らかなように、クエン酸第一鉄ナトリウムを
用いたときは、両ベースともにＥＳＰ−２、ＤＡＮ−１
００の鉄可溶化率が高く、リン酸緩衝液ベースではカゼ
インペプチドを大きく上回っていた。図５、図６から明
らかなように、塩化鉄（図２）、硫酸第一鉄（図３）単
用の場合に比して、クエン酸を添加することにより、Ｅ
ＳＰ−２、ＤＡＮ−１００の鉄可溶化率が増加するのに
対して、カゼインペプチドの鉄可溶化率の改善はみられ
なかった。

【００４１】［実施例２］イワシ筋肉由来ペプチド（Ｅ
ＳＰ−２）について、鉄欠乏性貧血モデルラットを用い
て鉄吸収促進作用を検討し、鉄欠乏性貧血改善効果を確
認した。

【００４２】すなわち、下記の表５に示した手順にした
がって鉄欠乏性貧血モデルラットによる貧血回復試験を
行った。つまり、雄性ＳＤ系ラットを鉄欠乏飼料で４週
間飼育し、鉄欠乏性貧血モデルラットとしたのち、クエ
ン酸第一鉄ナトリウムのみを与えたコントロール群、イ
ワシペプチドＥＳＰ−２をクエン酸第一鉄ナトリウムと
ともに１．２５％、５．００％それぞれ与えた群を４０
日間飼育した。さらに初めから通常飼料で飼育したもの
を正常ラットとした。１０日目ごとにヘモグロビン量、
ヘマトクリット値を、最終日に血清鉄及び不飽和鉄結合
能を測定した。

【００４３】

【表５】

【００４４】鉄欠乏飼料の配合は、下記の表６に示し
た。なお、鉄欠乏飼料におけるミネラル混合及びビタミ
ン混合の組成は、下記の表７及び表８に示した。本実施
例においては、この鉄欠乏飼料を用いて鉄欠乏性貧血モ
デルラットを作成し、クエン酸第一鉄ナトリウムを１２
ｍｇ／１００ｇ（Ｆｅとして１０ｐｐｍ）添加したもの
を実験試料（コントロール群）とした。

【００４５】

【表６】

【００４６】

【表７】

【００４７】

【表８】

【００４８】実験試料中のミネラル成分の実測値は、下
記の表９のとおりであり、また、ＥＳＰ−２のミネラル
成分の実測値は下記の表１０のとおりである。したがっ
て、本実施例においては、実験試料にＥＳＰ−２を１．
２５％及び５．００％添加しても、ミネラル成分の値は
ほぼ同等である。

【００４９】

【表９】

【００５０】

【表１０】

【００５１】鉄欠乏性貧血ラットの回復試験における体
重推移及び飼料摂取量の変化の結果は、図７及び図８に
示したとおりである。これらの結果から明らかなよう
に、イワシペプチドＥＳＰ−２添加群においては、ペプ
チドの栄養効果が幾分認められるが、統計的な有意差は
認められなかった。また、飼料摂取量についても、自由
摂取のため幾分イワシペプチドＥＳＰ−２添加群のほう
が摂取量が多いが、統計的な有意差はなかった。

【００５２】本貧血回復試験過程における血中へモグロ
ビン量及び血中ヘマトクリット値の変化の結果は、図９
及び図１０に示したとおりである。これらの結果から明
らかなように、貧血状態からの鉄添加によるヘモグロビ
ン量の回復は、イワシペプチドＥＳＰ−２添加群が２０
日目以降有意な効果を示し、特に５．００％添加群は４
０日目において、正常ラットの９０％のレベルにまで回
復した。また、回復の早さはイワシペプチドＥＳＰ−２
添加のＤｏｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅが認められた。ま
た、貧血回復試験過程における血中ヘマトクリット値の
変化については、ヘモグロビン量と同様、良好な回復促
進効果を示し、イワシペプチドＥＳＰ−２添加群は２０
日目以降、用量依存的に有意差が認められた。４０日目
にはＥＳＰ−２ ５．００％添加群は正常ラットとほぼ
同等のレベルにまで回復した。

【００５３】貧血回復試験４０日後における心臓血液血
清中の４種のパラメーター、血清鉄（Ｆｅ）、不飽和鉄
結合能（ＵＩＢＣ）、総鉄結合能（ＴＩＢＣ）、飽和率
（ＢＲ）、を分析し、下記する表１１の結果を得た。

【００５４】

【表１１】

【００５５】上記において、血清鉄はニトロソＰＳＡＰ
法で測定した。上記結果から明らかなように、コントロ
ール群に対し、ＥＳＰ−２添加群はＤｏｓｅ ｒｅｓｐ
ｏｎｓｅがあり、有意な差が認められた。特に５．００
％添加群は正常ラットに対し、９０％以上まで回復し
た。

【００５６】不飽和鉄結合能は玄番らの方法により測定
した。上記結果から明らかなように、これもコントロー
ル群に比べ、用量依存的に有意な回復を示した。これか
ら算出した血液中の鉄飽和率は、コントロール群が正常
ラットに比べて４６％であるのに対し、イワシペプチド
ＥＳＰ−２ １．２５％添加群は６７％、５．００％添
加群は８２％にまで回復し、コントロール群の２倍の効
果を示した。

【００５７】上記結果から明らかなように、ＥＳＰ−２
を添加することにより、各種鉄塩の鉄可溶化率が増加し
た。鉄欠乏性貧血モデルラットについては、体重及び摂
餌量において有意な差を認めず、ヘモグロビン量及びヘ
マトリット値は２０日目以降有意な回復が認められた。
血清鉄の回復及び不飽和鉄結合能から算出した結合率も
ＥＳＰ−２の用量依存的に有意差が認められ、鉄欠乏性
貧血の改善に有効であることが確認された。つまり、イ
ワシ筋肉由来ペプチドは、鉄欠乏性貧血に対し、特にク
エン酸とともに用いることによって、その改善に有意な
効果があることが実証されたのである。この効果はＥＳ
Ｐ−２のみならずその有効成分を含有するペプチド例え
ばＤＡＮ−１００においても当然に奏されるものであ
る。

【００５８】［実施例３］本発明に係るイワシ筋肉由来
ペプチド、ＥＳＰ−２及びＤＡＮ−１００について、Ａ
ｓａｈｉｐａｋ ＧＳ−３２０（径４．０ｍｍ×４５ｃ
ｍ）を用い、次の条件で高速液体クロマトグラフィ（Ｈ
ＰＬＣ）を行い、クエン酸第一鉄を含む酢酸バッファー
で溶出し、（緩衝液中の鉄濃度は鉄可溶化能測定時とほ
ぼ同様とした）分画について鉄の濃度を測定し、図１１
及び図１２の結果を得た。

【００５９】ＨＰＬＣ条件：溶離液：０．０１Ｍアセテ
ートバッファー（ｐＨ４．０）／クエン酸第一鉄ナトリ
ウム（ＦｅＮａＨ（Ｃ₆Ｈ₈Ｏ₇）₂）（Ｆｅ：１０．４ｐ
ｐｍ）、流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ、分画：１．０ｍ
ｌ。

【００６０】上記結果から明らかなように、いずれのペ
プチドにおいても、ペプチドの溶出パターンと同一パタ
ーンの鉄濃度変化が確認された。したがって、ペプチド
とクエン酸第一鉄が溶解して可溶化している状態におい
て、ペプチドとクエン酸第一鉄とそれぞれ単一に溶解し
ているのではなく、錯体を作り溶解している、すなわ
ち、キレートを起こしていることがわかる。このことか
ら、イワシ筋肉由来ペプチドの鉄吸収促進効果はクエン
酸を介した鉄とのキレート現象によることが強く示唆さ
れた。

【００６１】［実施例４］ビタミンＣ ２０ｇ、硫酸第
一鉄 １０ｇ、グラニュー糖 ４０ｇ、コーンスターチ
と乳糖の等量混合物 ３０ｇに、実施例３で得たペプチ
ドＤＡＮ−１００を５０ｇ加えて充分に混合した。混合
物を１００等分して袋に詰め、１袋１．５ｇの鉄吸収促
進性を有するスティック状栄養健康食品を１００袋製造
した。

【００６２】［実施例５］ペプチドＤＡＮ−１００にか
えて実施例２で得たペプチドＥＳＰ−２を用い、またビ
タミンＣ２０ｇにかえてビタミンＣとクエン酸の等量混
合物２０ｇを用いたほかは、実施例４と同様の処理をく
り返し、充分に乾燥せしめた後、鉄吸収促進性栄養健康
食品を製造した。

【００６３】［実施例６］次の配合により鉄剤を製造し
た。（１）実施例２で得たペプチドＥＳＰ−２５０ｇ、
（２）硫酸第一鉄 １０ｇ、（３）クエン酸 １０ｇ、
（４）ラクトース ７０ｇ、（５）コーンスターチ ２
９ｇ、（６）ステアリン酸マグネシウム１ｇ。

【００６４】先ず、（１）、（２）、（３）、（４）及
び（５）（但し１７ｇ）を混合し、（５）（但し７ｇ）
から調製したペーストとともに顆粒化した。得られた顆
粒に（５）（但し５ｇ）と（６）を加えてよく混合し、
この混合物を圧縮錠剤機により圧縮して、１錠あたり鉄
１０ｍｇを含有する錠剤１００個を製造した。

【００６５】投与量は、患者の症状、年令によっても異
なるが、０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで１日１
〜４回投与する。本発明において用いるペプチドは本来
食品由来のものであるので、既述のように安全性にはほ
とんど問題はなく、したがって上記用量をこえて投与し
ても差し支えはない。また、健康の維持、増進、保健、
栄養剤等としてこれを利用する場合は、上記用量よりも
少ない量を長期間に亘って服用すればよい。また、既述
のように本発明に係る鉄剤は、経口投与以外の方法でも
投与することができるが、静脈投与及び筋肉投与の場合
は０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙであり、通常
の鉄剤と同様にして投与することができる。

【００６６】［実施例７］次の配合を用意した。（１）
実施例２で得たＥＳＰ−２ １０ｇ、（２）塩化鉄 １
ｇ、（３）クエン酸ナトリウム １ｇ、（４）塩化ナト
リウム ８ｇ、（５）クロロブタノール ４ｇ、（６）
炭酸水素ナトリウム １ｇ。

【００６７】全成分を蒸留水１０００ｍｌに溶解し、こ
れを５００ｍｌの点滴ビン２本に分注し、鉄含有栄養輸
液を得た。

【００６８】

【発明の効果】本発明においては、イワシ筋肉由来ペプ
チドＥＳＰ−２、ＤＡＮ−１００を用いることにより、
鉄の吸収が促進され、クエン酸を配合することによって
それが更に増幅される。したがって、本発明に係る鉄吸
収促進剤や鉄剤は鉄の吸収性が著じるしく改善されるの
で、貧血改善のための鉄吸収組成物、例えば健康食品、
薬剤として好適なものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＥＳＰ−２及びＤＡＮ−１００のＨＰＬＣのパ
ターンを示す。

【図２】塩化鉄（ＦｅＣｌ₃）を用いたときの各ペプチ
ドの鉄可溶化率を示す。

【図３】硫酸第一鉄（ＦｅＳＯ₄）を用いたときの各ペ
プチドの鉄可溶化率を示す。

【図４】クエン酸第一鉄ナトリウム（ＦｅＮａＨ（Ｃ₆
Ｈ₈Ｏ₇）₂）を用いたときの各ペプチドの鉄可溶化率を
示す。

【図５】塩化鉄を用い、クエン酸を添加したときの、各
ペプチドの鉄可溶化率を示す。

【図６】硫酸第一鉄を用い、クエン酸を添加したとき
の、各ペプチドの鉄可溶化率を示す。

【図７】鉄欠乏貧血ラットの回復試験におけるラット体
重の推移を示す。

【図８】鉄欠乏貧血ラットの飼料給餌量を示す。

【図９】貧血回復過程におけるヘモグロビン量の変化を
示す。

【図１０】貧血回復過程におけるヘマトクリット値の変
化を示す。

【図１１】硫酸第一鉄含有溶離剤によるＥＳＰ−２のＨ
ＰＬＣのパターンを示す。

【図１２】硫酸第一鉄含有溶離剤によるＤＡＮ−１００
のＨＰＬＣのパターンを示す。

【図１３】ＥＳＰ−２のＵＶスペクトルを示す。

【図１４】ＥＳＰ−２のＩＲスペクトルを示す。

【符号の説明】

○：ＥＳＰ−２ □：ＤＡＮ−１００ △：カゼインペプチド Ａ：蒸留水 Ｂ：緩衝液

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｐ 21/06 8214−4Ｂ

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ペプチドＥＳＰ−２又はペプチドＤＡＮ
   −１００を有効成分とする鉄吸収促進組成物。
2. 【請求項２】 該組成物が鉄吸収促進剤又は鉄吸収促進
   性飲食品である請求項１に記載の鉄吸収促進組成物。
3. 【請求項３】 ペプチドＥＳＰ−２、クエン酸及び鉄化
   合物からなる鉄剤。
4. 【請求項４】 ペプチドＤＡＮ−１００、クエン酸及び
   鉄化合物からなる鉄剤。
5. 【請求項５】 鉄化合物が、塩化鉄、硫酸第一鉄、クエ
   ン酸第一鉄、クエン酸鉄アンモニウム、コハク酸クエン
   酸鉄ナトリウム、乳酸鉄及びピロリン酸鉄からなる群か
   ら選ばれるものである請求項３又は請求項４に記載の鉄
   剤。
6. 【請求項６】 該鉄剤が該ペプチド、クエン酸及び鉄化
   合物を単に混合してなるもの、あるいは、これをキレー
   ト結合させてなるものである請求項３〜請求項５のいず
   れか１項に記載の鉄剤。