JPH05178752A - 脂血清澄剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記の構造単位からなる硫酸化多糖体また
は構造単位と構造単位からなる硫酸化多糖体（ただ
しｎは該硫酸化多糖体中の構造単位の数であり、ｍは
該硫酸化多糖体中の構造単位の数であり、ｍ／ｎは０
〜５であり、ｍ＋ｎは３０〜１５０の整数を示す。）を
有効成分として含有する脂血清澄剤。 【効果】 デキストラン硫酸より優れた脂血清澄作用を
有し、低毒性である。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は硫酸化多糖体を有効成分
として含有することを特徴とする脂血清澄剤に関するも
のである。

【従来の技術】高脂血症は、悪性腫瘍、動脈硬化症、糖
尿病、ネフローゼ症候群等の疾患に伴って起こる場合が
多い。近年、上記疾患の増加に伴って、高脂血症は、増
加傾向にある。現在、これらの治療に有効な薬剤として
は、例えば、デキストラン硫酸あるいはヘパリン等があ
る。すなわち、デキストラン硫酸は、微生物、例えば、
ロイコノストック・メッセンテロイデス（Leuconostoc
mesenteroides)によって生産されるα−１，６結合をし
たＤ−グルコピラノースのポリマーであるデキストラン
の硫酸エステルであり、脂血清澄作用を有し、血中のコ
レステロール、トリグリセリドを低下させる作用を有す
る。又、抗凝血作用、抗ヒアルロニダーゼ作用及び繊維
素溶解作用も有しており、血栓症、高脂血症や動脈硬化
症の治療に有効な薬剤として知られている。これらの生
理活性は、分子量が大きいほど、又イオウ含有量の高い
ほど強いが、それと共に毒性も強くなることが知られて
いる。

【０００２】

【化２】

【０００３】一方、動物組織中に存在するムコ多糖類の
ヘパリンは、強い血液凝固抑制作用、脂血清澄作用など
広範な生理作用を有しており、その活性は人工のヘパリ
ノイドに比べ、非常に強いが、標品の品質が一定でな
く、又構造が複雑で単離方法も煩雑である。ヘパリン
は、その分子中に硫酸化されたアミノ糖、例えば、下記
の如きユニットを有することが特徴的である。

【０００４】

【化３】

【０００５】

【発明が解決しようとする課題及びその解決手段】本発
明者らは、脂血清澄作用を有する物質の合成を目的とし
て鋭意研究を行なった結果、前記一般式に示すようなα
−１，６結合した糖鎖を有し、しかもその分子中にヘパ
リンの如きアミノ基を含む、天然には存在しない新規な
硫酸化多糖体を合成することに成功し、該硫酸化多糖体
が、後述の実施例の如く優れた脂血清澄作用を有するこ
とを見出し、本発明を完成するに至ったものである。

【０００６】本発明は、下記の構造単位からなる硫酸
化多糖体または構造単位と構造単位からなる硫酸化
多糖体（ただしｎは該硫酸化多糖体中の構造単位の数
であり、ｍは該硫酸化多糖体中の構造単位の数であ
り、ｍ／ｎは０〜５であり、ｍ＋ｎは３０〜１５０の整
数を示す。）を有効成分として含有する脂血清澄剤であ
る。

【化４】

【０００７】以下に本発明の有効成分について説明す
る。本発明の有効成分は、前記一般式に示した通りの硫
酸化多糖体であるが、例えば、次の方法により合成する
ことができる。先に本発明者らは、アミノ糖の前駆物質
としてアジド糖を用いることにより、α′−１，６結合
した糖鎖を有し、その分子中に、ヘパリンの如きアミノ
基を含む重合度の高いアミノ糖ポリマー及びそのＤ−グ
ルコースとのコポリマーを合成することに成功した（特
開昭57-180603 号、同57-180604 号、同57-180605 号、
同57-180606 号公報参照）。その工程を以下に示す。

【０００８】

【化５】

【０００９】

【化６】

【００１０】

【化７】

【００１１】すなわち、化合物（２）は、β−Ｄ−グル
コピラノースより誘導される１，６−アンヒドロ−β−
Ｄ−グルコピラノース（１）を、ベンゾイルクロライド
で処理することにより、容易に得ることができる〔M. C
erny et al Collection Czechoslov. Chem. Commun. Vo
l.２６，２５４２（１９６１）参照。〕。化合物（２）
を乾燥ピリジンに溶解し、氷冷する。撹拌しながらメタ
ンスルホニルクロリドを滴下し、徐々に室温にもどす。
３時間後、大量の氷水中にあけ撹拌すると、化合物
（３）の粗結晶が析出する。濾別、水洗、乾燥後、メタ
ノールから再結晶すると白色結晶の化合物（３）を得
る。化合物（３）をクロロホルムにとかし氷冷する。こ
れに、金属ナトリウムをメタノールに溶解して調製した
ナトリウムメトキシド溶液を、撹拌しつつ滴下する。混
合物を室温に一晩放置後、５％塩酸で中和し、減圧濃縮
乾固する。残渣をアセトンで５回抽出し、抽出液を減圧
濃縮すると油状物を得る。シリカゲルのカラムクロマト
グラフィ（展開溶媒クロロホルム−メタノール、１０
０：１v/v)で精製すると化合物（４−ａ）と（４−ｂ）
の混合物を得る。化合物（４−ａ）と（４−ｂ）の混合
物を、乾燥したテトラヒドロフランに溶かし、氷冷下水
素化ナトリウム（純度６０％）を、加えて３０分間撹拌
する。次に、臭化ベンジルを加え、室温で４時間反応さ
せる。氷冷した飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、３
０分撹拌後、エーテルで３回抽出する。抽出液を無水硫
酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、生じた油状物
を、シリカゲルのカラムクロマトグラフ（展開溶媒ベン
ゼン−酢酸エチル２０：１v/v)で精製すると、油状の化
合物（５−ａ）と（５−ｂ）の混合物が得られる。化合
物（５−ａ）と（５−ｂ）の混合物を、エタノールと飽
和塩化アンモニウム水の混合溶媒に溶かし、アジ化ナト
リウムを加えて撹拌しつつ６０時間加熱還流する。冷却
後、蒸溜水を加え、エタノールを減圧下除去し、残った
水溶液をクロロホルムで抽出する。抽出液を無水硫酸マ
グネシウムで乾燥後、減圧濃縮すると油状物を得る。シ
リカゲルのカラムクロマトグラフ（展開溶媒、ベンゼン
−エーテル、２０：１v/v)で精製すると、化合物（６−
ａ）と（６−ｂ）の混合物を得る。化合物（６−ａ）と
（６−ｂ）の混合物を乾燥テトラヒドロフランに溶か
し、氷冷する。水素化ナトリウム（純度６０％）を加え
３０分撹拌後、臭化ベンジルを加える。室温で３時間撹
拌後、氷冷した飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、さ
らに３０分撹拌する。この混合溶液をエーテルで抽出
し、抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮
すると油状物を得る。シリカゲルのクロマトグラフ（展
開溶媒、ヘキサン−酢酸エチル５：１v/v)で精製すると
油状の化合物（７）を得る。これは放置しておくと結晶
化し、シクロヘキサンから再結晶が可能である。化合物
（７）を１０^-5mmHgの高真空下、一夜真空乾燥し、予め
水素化カルシウムによって乾燥した塩化メチレンに真空
アンプル中で溶解する。この溶液を−６０℃にて、予め
重合管中で３０分間反応させてある五フッ化リン、フッ
化ベンゾイル、塩化メチレン中に混合し−６０℃にて２
３時間反応後、重合アンプルを開管し、メタノールを注
ぎ込む。この際、ポリマーが沈殿するので、これにクロ
ロホルムを、ポリマーが十分に溶解するまで加え、重炭
酸ナトリウム水溶液で中和し、水洗して、無水硫酸ナト
リウムで乾燥する。乾燥剤を濾別除去した後、濾液を濃
縮して、石油ベンジンを加えて再沈する。溶解、濃縮、
再沈の操作をさらに２回行ないベンゼンに溶解し、凍結
乾燥を行ない、ポリマー（８）を得る。化合物（７）の
使用量、重合時間を変えて、上記と同様に反応を行うこ
とにより、種々の分子量、重合度を有するポリマーを得
ることができる。これを、次の方法により還元を行っ
て、アミノ多糖（１）を得る。ポリマー（８）の還元
は、バーチ還元、即ち液体アンモニア中のアルカリ金属
により行なう。アルカリ金属としては、カリウム、ナト
リウム、リチウムが挙げられる。アルカリ金属はポリマ
ー中の１ユニットに対し、６原子以上加えることが必要
で、通常はその３倍量であることが望ましい。ポリマー
（８）は、予め適当な溶媒例えば、１，２−ジメトキシ
エタン、ジグリム等中に溶解しておいたものを加える。
反応時間は、約−７０〜−８０℃が適当であり、反応時
間は、約３０分〜３時間が適当である。すなわち、金属
ナトリウムと液体アンモニアを混合して−７８℃に保持
し、ポリマー（８）の１，２−ジメトキシエタン溶液を
徐々に滴下する。１，２−ジメトキシエタンは予め金属
ナトリウムで十分に乾燥しておく必要がある。反応の際
は、系が均一となるように撹拌しておくのがよい。所定
時間反応を行った後、エタノールまたは塩化アンモニウ
ムを加えることにより反応を停止し、少量の水を加えて
一夜放置してアンモニアを蒸発させる。未反応のポリマ
ーは塩化メチレンで抽出して取り除く。蒸留水にて３日
間透析し、不溶部があればこれを濾別した後、不溶部は
真空乾燥し、可溶部は濃縮し凍結乾燥することにより、
アミノ多糖（Ｉ）を得る。一方、化合物（９）は、１，
６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノース（１）を、
ベンジルブロミド等で処理することにより容易に得るこ
とができる。かくして得られた化合物（７）、（９）を
次の方法により共重合、還元を行って構造単位II−と
構造単位II−からなるアミノ糖コポリマー(II)を得
る。共重合反応は、化合物（７）、（９）を充分に乾燥
した溶媒に溶解し、ルイス酸を触媒として反応させるこ
とにより行われる。溶媒としては、塩化メチレン、クロ
ロホルム等が適当である。ルイス酸としては、五フッ化
リン、五塩化アンチモン、三フッ化ホウ素エーテラート
が挙げられるが、収率及び得られるコポリマーの立体規
則性の点から五フッ化リンが最適である。ルイス酸の使
用量は、化合物（７）、（９）の総モル数に対して、２
〜７モル％、特に２〜３モル％が最適である。なお、化
合物（７）、（９）の混合比を変えることによって、種
々のコポリマーを得ることができる。反応温度は、約−
３０〜−６０℃が適当であり、重合時間は、約４０〜６
０時間が適当である。この重合反応は、真空中あるいは
不活性ガス（例えば、N₂ガス）雰囲気中で行うのが好ま
しい。かくして、分子中に、アジド基を有する構造単位
（１０）−と構造単位（１０）−からなるアジド糖
含有多糖（１０）が得られるが、次いでこれを前記と同
様バーチ還元することによりアミノ糖コポリマー(II)が
得られる。かくして、得られたポリマー（1)、(II)から
次の反応により、本発明の有効成分である硫酸化多糖体
を得る。前記ポリマー(I) 又は(II)を前処理して膨潤さ
せた後適当な溶媒に懸濁させる。溶媒としては、ピリジ
ン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド等が
適当である。この懸濁液を硫酸化剤（及び前記溶媒）と
共に反応させる。硫酸化剤としては、クロルスルホン
酸、ピペリジン−Ｎ−硫酸等が適当である。硫酸化剤の
使用量は、出発物質のアミノ単糖残基に対して、２０〜
３０モル用いるのが適当である。反応温度、反応時間
は、溶媒、硫酸化剤によっても異なるが、約７０〜１０
０℃、４５〜６０分が適当である。反応後、放冷し、蒸
留水を加えて反応を停止し、次いで、アルカリ、例えば
水酸化ナトリウムで中和し、エタノール等を加えて、ポ
リマーを沈殿させる。これを遠心分離し、蒸留水に溶解
し、透析後、濃縮乾燥することによって有効成分の硫酸
化多糖体を得る。

【００１２】

【化８】

【００１３】上記の如く、本発明の有効成分を得ること
ができるが、ホモポリマー(III) の場合、極限粘度約0.
１５〜0.１８、イオウ含量約１６〜１８％、コポリマー
(IV)の場合、極限粘度約0.０７〜0.１０、イオウ含量約
１０〜１５％のものを用いるのが適当である。本発明の
薬剤は、臨床症状に応じて、その時の最も適切な投与方
法をとることができる。すなわち、静脈注射法、皮下注
射法、筋肉注射法あるいは経口投与法等によるが、急性
症状の場合には、やはり静脈投与が適切である。又、本
発明の有効成分は、適当な不活性溶媒、例えば、殺菌
水、生理食塩水等に溶解もしくは懸濁させ、あるいは不
活性担体または増量剤を加え、例えば注射剤などの非経
口剤；散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、コーティング
剤、シラップ剤、水剤その他の経口剤などの剤型にして
用いるのが適当である。

【００１４】上記不活性担体または増量剤としては、例
えば、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ブドウ糖、
ラクトース、シュークロース、デキストリン、蔗糖エス
テル、殿粉、ソルビット、マンニット、結晶セルロー
ス、タルク、カオリン、合成ケイ酸アルミニウム、カル
ボキシメチルセルロース、メチルセルロース、セルロー
スアセテートフタレート、ポリビニルピロリドン、ポリ
ビニルアルコール、アラビアゴム、トラガントゴム、ゼ
ラチン、寒天末、シエラックなどをあげることができ
る。本発明の有効成分は、通常、組成物重量に基づいて
１〜９０重量％含有するのが好ましい。これらの含有量
は剤型によって適当に変更できる。

【００１５】以下に、本発明を、製造例、実施例及び試
験例によって詳述するが本発明は、何らこれらによって
限定されるものではない。 製造例１ ポリマー（Ｉ−ａ）（Mn＝3.５×１０⁴ 、DPn ＝９５）
（１００mg、NH₂ 基：0.６２１mmol、OH基：1.２４mmo
l）を水（１０ml）中で粉砕し、遠心分離する。次にエ
タノール（２０ml）中で３回、続いてエーテル（２０m
l）中で３回撹拌遠心分離し、予め乾燥したピリジン
（８ml）中に懸濁させる。この懸濁液を予め０℃で反応
させたクロルスルホン酸（１ml、１５mmol）と乾燥ピリ
ジン（６ml）中に加え、沸騰している湯浴に浸し、１時
間反応させる。放冷後、蒸留水（２０ml）を加えて反応
を停止し、2.５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（7.５ml）で
中和し、エタノール（５０ml）を加えてポリマーを沈澱
させる。これを遠心分離して、蒸留水に溶解し、３日間
透析後、濃縮、凍結乾燥することによって硫酸化アミノ
多糖ホモポリマー(III−ａ）を得る。（１８3.７mg、８
1.０％） 〔ホモポリマー(III−ａ）の物理的性質〕 Ｃ Ｈ Ｎ Ｓ 元素分析値 実測値 ２0.１６ 4.１８ 3.７５ １6.１４ 計算値 (C₆H₉O₁₀NS₂Na₂) １9.７３ 2.４８ 3.８３ １7.５６ ニンヒドリン反応：陰性 ＩＲ： ５８０cm^-1（Ｍ）、８００cm^-1（Ｍ）、６１０
cm^-1（Ｍ）、１２４０cm^-1（ｓ、broad)、１５１０cm^-1
（Ｍ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ：δ９7.５３ppm(１Ｃ、Ｃ−１）、７5.５
４（３Ｃ、Ｃ−２、Ｃ−４、Ｃ−５）、７4.６８（３
Ｃ、Ｃ−２、Ｃ−４、Ｃ−５）、７1.０３（３Ｃ、Ｃ−
２、Ｃ−４、Ｃ−５）、６8.０７（１Ｃ、Ｃ−６）、５
5.０７（１Ｃ、Ｃ−３） 〔α〕_D ²⁵＋１１6.９゜（Ｃ＝1.０、CHCl₃) 〔η〕＝0.１７（H₂O 中、３０℃）

【００１６】製造例２ ポリマー（II−ａ）（DPn ＝１４４、ｍ／ｎ＝1.０４、
１００mg）を水（２ml）に溶解し、エタノール２０mlを
加えて沈澱させる。遠心分離後、更にエタノール、次い
でエーテル中で撹拌分離後、予め乾燥したピリジン（８
ml）中に懸濁させる。この懸濁液を予め０℃で反応させ
たクロルスルホン酸（１ml、１５mmol）と乾燥ピリジン
（６ml）中に加え、沸騰している湯浴に浸し、１時間反
応させる。放冷後、蒸留水（２０ml）を加えて反応を停
止し、2.５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（7.５ml）で中和
し、エタノール（５０ml）を加えてポリマーを沈殿させ
る。これを遠心分離して、蒸留水に溶解し、３日間透析
後、濃縮、凍結乾燥することによって硫酸化アミノ糖含
有多糖〔コポリマー（IV−ａ）〕を得る（１６８mg、７
6.２％）。 〔コポリマー（IV−ａ）の物理的性質〕 Ｃ Ｈ Ｎ Ｓ 元素分析：実測値 １7.４０ 3.３９ 1.５５ １4.６５ 計算値 C₆H_8.589O_10.211N_0.489S_1.90Na_1.90・３H₂O １7.５９ 3.５９ 1.６８ １4.８７ （硫酸化率：糖−残基当り SO₃ ^- 1.９０個） ＩＲ： ５８０cm^-1（Ｍ）、８００cm^-1（Ｍ）、１２４
０cm^-1（Ｓ，broad)、１５１０cm^-1（Ｗ） 〔α〕_D ²⁵＝＋１０0.２゜（Ｃ＝1.０、H₂O) 〔η〕＝0.０７（H₂O 、３０℃）

【００１７】製造例３ コポリマー（II−ｂ）（DPn ＝１００〜１２０、ｍ／ｎ
＝4.７６、NH₂ 基0.１１４mmol、OH基1.７４mmol、１０
０mg）を用いた他は、製造例２と同様に反応、後処理す
ると、硫酸化アミノ糖含有多糖（IV−ｂ）が得られた
（１７６mg、７2.０％）。 〔コポリマー（IV−ｂ）の物理的性質〕 Ｃ Ｈ Ｎ Ｓ 元素分析：実測値 ２2.７６ 4.４６ 0.６７ １0.８２ 計算値 C₆H_9.115O_8.025N_0.185S_1.07Na_1.07 ２2.１６ 4.６８ 0.８０ １0.５５ （硫酸化率：糖−残基当り SO₃ ^- 1.０７個） ＩＲ： ５８０cm^-1（Ｍ）、８００cm^-1（Ｍ）、１２４
０cm^-1（ｓ，broad)〔α〕_D ²⁵＝＋１０9.６゜（Ｃ＝1.
０、H₂O) 〔η〕＝0.１５（H₂O 、３０℃）

【００１８】実施例１（注射剤） 製造例１で得られた硫酸化多糖体５ｇ、重炭酸ナトリウ
ム0.２ｇおよび塩化ナトリウム0.４ｇを注射用蒸留水に
溶解して１００mlとした後、常法により注射剤とする。 実施例２（錠剤） 製造例２で得られた硫酸化多糖体２００ｇとラクトース
１４０ｇを混和した後、ＵＳ標準篩（６０メッシュ）を
通す。次いで混合物を、アルコール性ポリビニルピロリ
ドン４０ｇで湿らした後１２メッシュ篩に通して顆粒を
作り乾燥する。乾燥顆粒を１６メッシュの篩に通したの
ち、タルク５０ｇと殿粉２０ｇを加え、次いで重量４５
０mgの錠剤を製造する。 実施例３（顆粒剤） 製造例３で得られた硫酸化多糖体２００ｇ、メチルセル
ロース１５０ｇ、コーンスターチ８０ｇおよび香料若干
を混和し、６０メッシュの篩を通す。混合物を、アルコ
ール性ポリビニルピロリドン２０ｇで湿した後、0.７mm
の径を有するステンレススチール篩で製粒する。

【００１９】試験例１（脂血清澄活性） 体重2.５〜3.０kgの日本白ウサギ（雄）を用い、被験物
質（0.５％生理食塩水溶液）を５mg／kgずつ静注し、１
０分後に耳静脈から、採血して血漿中の脂血清澄作用
を、原・葛谷法（蛋白質・核酸・酸素、１０ １２２４
〜１２２９、１９６５）により測定した。即ち、あらか
じめ１０％クエン酸ナトリウム水溶液0.１mlの入った注
射器で全血2.４mlを採り、３０００r.p.m.で５分間遠心
分離して血漿を得る。別にpH7.４のリン酸緩衝液8.５ml
に牛アルブミン５５０mgを溶解し、次いでpH7.４のリン
酸緩衝液で１０倍に希釈した乳剤 Ediol(Calbiochem 社
製）1.５mlを加えて基質液を調製する。血漿１mlと基質
液１mlを混和し、直ちに層長５mmで波長６６０nmの吸光
度（−logT₁)を測定する。次いで３７℃の恒温水槽中で
３時間インキューベーションした後、同様に吸光度（−
logT₂)を測定する。一方、対照として被験物質投与前の
血漿を用いて、インキュベーション前後の吸光度（−lo
gT₃ 及び−logT₄)を測定する。次の式から被験物質の脂
血清澄活性を求める。 脂血清澄活性（Δ−logT) ＝｛（−logT₁)−（−log
T₂)｝−｛（−logT₃)−（−logT₄)｝ 結果を表１に示す。

【００２０】

【表１】 ａ）対照物質、極限粘度〔η〕0.０２５６ Ｓ含量 １8.４％

【００２１】本発明の有効成分は、いずれも優れた脂血
清澄作用を有することがわかる。なお、マウス及びラッ
トを用いた急性毒性（LD₅₀) は、いずれの有効成分化合
物においてもそれぞれ、３ｇ／kg以上及び２ｇ／kg以上
（静注）であった。

【００２２】

【発明の効果】本発明の有効成分は、上記実施例からも
明らかな如く、デキストラン硫酸より優れた脂血清澄作
用を有し、又急性毒性（LD₅₀) も３ｇ／kg以上（マウ
ス）、２ｇ／kg以上（ラット）であり、極めて有望な薬
剤への利用が期待される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 松崎 啓 東京都杉並区成田東４−10−10 (72)発明者 小川 孝雄 愛知県海部郡美和町大字篠田字南大門35− ６ (72)発明者 棚橋 英治 愛知県海部郡蟹江町源氏２−25 (72)発明者 北国 秀三郎 岐阜県可児市矢戸240−20

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の構造単位からなる硫酸化多糖体
   または構造単位と構造単位からなる硫酸化多糖体
   （ただしｎは該硫酸化多糖体中の構造単位の数であ
   り、ｍは該硫酸化多糖体中の構造単位の数であり、ｍ
   ／ｎは０〜５であり、ｍ＋ｎは３０〜１５０の整数を示
   す。）を有効成分として含有する脂血清澄剤。 【化１】