JPS59164722A - 血液凝固抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （式中ｍ　／　ｎはθ〜左であｊｔ、、、ｍ＋ｎは３０
〜／３０の整数を示す。） で表わされる硫酸化多糖体を有効成分として含有するこ
とを特徴とする血液凝固抑制及び脂血清澄剤に関するも
のである。

血栓症あるいは高脂血症は、悪性腫瘍、動脈硬化症、糖
尿病、ネフローゼ症候群等の疾患に伴って起こる場合が
多い。近年、上記疾患の増加に伴って、血栓症あるいは
高脂血症は、増加傾向にある。

現在、これらの治療に有効な薬剤としては、例えば、デ
キストラン硫酸あるいはヘパリン等がある。すなわち、
デキストラン硫酸は、微生物、例えば、ロイコノストッ
ク・メツセンチロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ　ｍ
ｅｓｅｎｔｅｒｏｌｄｅｓ　）によって生産されるα−
／、６結合をしたＤ−グルコビラノースのポリマーであ
るデキストランの硫酸エステルであり、脂血清澄作用を
有し、血中のコレステロ−効な薬剤として知られている
。

これらの生理活性は、分子量が大きいほど、又イオウ含
有量の高いほど強いが、それと共に毒性も強くなること
が知られている。

Ｒ＝Ｈ：デキストラン Ｒ＝　５０５Ｎａ　：デキストラン硫酸一方、動物組織
中に存在するムコ多糖類のヘパリンは、強い血液凝固抑
制作用、脂血清澄作用々ど広範な生理作用を有しており
、その活性は人工のへ７４′リノイドに比べ、非常に強
いが、標品の品質が一定でなく、又構造が複雑で単離方
法も煩雑である。ヘノ４１Ｊンは、その分子中に硫酸化
されたアミノ糖、例えば、下記の如きユニットを有する
ことが特徴的である。

Ｈ３Ｏ５− （ただし、式中、ＸはＨ又はＳＯ，−を示す。）本発明
者らは、血液凝固抑制作用及び脂血清澄作用を有する物
質の合成を目的として鋭意研究を行なった結果、前記一
般式に示すようなα−／、６結合した糖鎖を有し、しか
もその分子中にへＡ？　ＩＪンの如きアミン基を含む、
天然には存在しない新規な硫酸化多糖体を合成すること
に成功し、該硫酸化多糖体が、後述の実施例の如く優れ
た血液凝固抑制作用及び脂血清澄作用を有することを見
出し、本発明を完成するに至ったものである。

以下に本発明の有効成分について説明する。

本発明の有効成分は、前記一般式に示した通りの硫酸化
多糖体であるが、例えば、次の方法によシ合成すること
ができる。先に本発明者らは、アミノ糖の前駆物質とし
てアジド糖を用いることにより、α−／、６結合した糖
鎖を有し、その分子、中に、ヘノヤリンの如きアミン基
を含む重合度の高いアミノ糖Ｉリマー及びそのＤ−グル
コースとのコデリマーを合成することに成功した（特開
昭！ｒ７−／１０１，０３号、同タクー／ｊ１０１，０
グ号、同ｓ’ｙ−ｉｇｏｂｏｓ号、同！；７−／ｇＯＡ
Ｏｌ。

号公報参照）。

１１）　　　　　　　　　　１２＋　　　　　　　　　
　１３１　　　　　　　　　（’ｌ−ａ　）Ｗ （ただし、式中、Ｂｚは、ベンゾイル基、ＭｓはＢｎ、
ｍ、ｎは前記に同じ。） （！−ｂ）　　　　　　　　　　（、ｔ−ａ）　　　　
（、ｔ−ｂ）、メタンスルホニル基を示し、 すなわち、化合物（２）は、β−Ｄ−グルコビラノース
よりｐ導される／、６−ア／ヒドロ−β−Ｄ−グルコビ
ラノース（１）を、ベンゾイルクロライドで処理するこ
とによ）、容易に得ることができる（　Ｍ、Ｃｅｒｎｙ
　ｅｔａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｌｏｎ　Ｃｚｅｃｈｏｓｌ
ｏｖ、　Ｃｈｅｍ。

Ｃｏｍｍｕｎ、Ｖｏｌ、　　λ６　、コ、１＜ｔコ（／
り６　／）参照。〕。

化合物（２）を乾燥ピリジンに溶解し、氷冷する。

攪拌しながらメタンスルホニルクルリドを滴下し、徐々
に室温にもどす。３時間後、大量の氷水中にあけ攪拌す
ると、化合物（３）の粗結晶が析出する。

Ｆ別、水洗、乾燥後、メタノールから再結晶すると白色
結晶の化合物（３）を得る。

化合物（３）をクロロホルムにとかし氷冷する。これに
、金属ナトリウムをメタノールに溶解して調製したナト
リウムメトキシド溶液を、攪拌しつつ滴下する。混合物
を室温に一晩放置後、３％塩酸で中和し、減圧濃縮乾固
する。残渣をアセトンで５回抽出し、抽出液を減圧濃縮
すると油状物を得る。シリカゲルのカラムクロマトグラ
フィ（展開溶媒クロロホルム−メタノール、／　００　
：　／　ｖ／ｖ）で精製すると化合物（４ｔ−ａ）と（
４ｔ−ｂ　）の混合物を得る。

化合物（ｌＩ−ａ）と（ｌＩ−ｂ）の混合物を、乾燥し
たテトラヒドロフランに溶かし、水冷下水素化ナトリウ
ム（純度６０％）を、加えて３０分間攪拌する。次に、
臭化ベンジルを加え、室温でダ時間反応させる。氷冷し
た飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、３０分攪拌後、
エーテルで３回抽出する。抽出液を無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥後、減圧濃縮し、生じた油状物を、シリカゲル
のカラムクロマトグラフ（展開溶媒ベンゼン−酢酸エチ
ル２０：／ｖ／ｖ）で精製すると、油状の化合物（ｊ−
ａ）と（、ｔ−ｂ）の混合物が得られる。

化合物（ｊ−ａ）と（、ｔ−ｂ）の混合物を、エタノー
ルと飽和塩化アンモニウム水の混合溶媒に溶かし、アジ
化ナトリウムを加えて攪拌しつつ　　−６０時間加熱還
流する。冷却後、蒸溜水を力０え、エタノールを減圧下
除去し、残った水溶液をクロロホルムで抽出する。抽中
液を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮すると油
状物を得る。シリカグルのカラムクロマトグラフ（展開
溶媒、ベンゼン−エーテル１．２０：／ｖ／Ｖ）で精製
すると、化合物（乙−ａ）と（乙−ｂ）の混合物を得る
。

化合物（乙−ａ）と（乙−ｂ）の混合物を乾燥テトラヒ
ドロフランに溶かし、氷冷する。水素化ナトリウム（純
度乙０チ）を加え３０分攪拌後、臭化ベンジルを加える
。室温で３時間攪拌後、水冷した飽和塩化アンモニウム
水浴液を加え、さらに３０分攪拌する。この混合溶液を
エーテルで抽出し、抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾
燥後、減圧濃縮すると油状物を得る。シリカダルのクロ
マトグラフ（展開溶媒、ヘキサン−酢酸エチル、！−：
　／　ｖ／ｖ　）で精製すると油状の化合物（力を得る
。これは放置しておくと結晶化し、シクロヘキサンから
再結晶が可能である。

化合物（７）を１０ｍｍＨｇ　の高真空下、−夜真空乾
燥し、予め水素化カルシウムによって乾燥した塩化メチ
レンに真空アンプル中で溶解する。この浴液全−乙Ｑ℃
にて、予め重合管中で３０分間反応させである五フッ化
リン、フッ化ベンゾイル、塩化メチレン中に混合し一乙
Ｏ℃にて、２３時間反応後、重合アンプルを開管し、メ
タノールを注ぎ込む。この際、ポリマーが沈殿するので
、これにクロロホルムを、ポリマーが十分に溶解するま
で加え、重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、水洗して、
無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤を炉別除去した
後、Ｐ液を濃縮して、石油ベンジンを加えて再沈する。

溶解、濃縮、再沈の操作をさらにΩ回行ないベンゼンに
溶）１屏し、凍結乾燥を行ない、ポリマー（８）を得る
。

化合物（７）の使用量、重合時間を変えて、上記と同様
に反応を行うことによシ、種々の分子量、重合度を有す
るポリマーを得ることができる。

これを、次の方法によシ還元を行って、アミン多糖（Ｉ
）を得る。

ポリマー（８）の還元は、バーチ還元、部ち液体アンモ
ニア中のアルカリ金属によシ行なう。アルカリ金属とし
ては、カリウム、ナトリウム、リチウムが挙げられる。

アルカリ金属はポリマー中の／ユニットに対し、乙原子
以上加えることが必要で、通常はその３倍量であること
が望ましい。ポリマー（８）は、予め適当な溶媒例えば
、／、、２−ジメトキシエタン、ジグリム婢中に溶解し
ておいたものを加える。

反応温度は、約−７０〜−ｇθ℃が適当であυ、反応時
間は、約３０分〜３時間が適当である。

すなわち、金属ナトリウムと液体アンモニアを混合して
一７ｇ℃に保持し、ポリマー（８）の／、２−−ジメト
キシエタン溶液を徐々に滴下する。パノージメトキシエ
タンは予め金属ナトリウムで十分に乾燥しておく必要が
ある。反応の際は、系が均一となるように攪拌しておく
のがよい。所定時間反応を行った後、エタノールまたは
塩化アンモニウムを加えることにより反応を停止し、少
量の水を加えて一夜放置してアンモニアを蒸発させる。

未反応のポリマーは塩化メチレンで抽出して取り除く。

蒸留水にて３日間透析し、不溶部があればこれを涙別し
た後、不溶部はＸ仝乾燥し、可溶部は濃縮し凍結乾燥す
ることにニジ、アミノ多糖（１１を得る。

一方、化合物（９）は、／、乙−アンヒドローβ−〇−
グルコビラノース（１）ｋ、ベンジルプロミド等で処理
することにより容易に得ることができる。

かくして得られた化合物（’７）、（９）を次の方法に
より共重合、還元を行ってアミノ糖コポリマー（ｎ）を
得る。

共重合反応は、化合物（７）、（９）を充分に乾燥した
溶媒に溶解し、ルイス酸を触媒として反応させることに
より行われる。溶媒としては、塩化メチレン、クロロホ
ルム等が適当である。ルイス酸としては、五フッ化リン
、五塩化アンチモン、三フッ化ホウ素エーテラートが挙
げられるが、収率及び得られるコポリマーの立体規則性
の点から五フッ化リンが最適である。ルイス酸の使用量
は、化合物（７）、（９）の総モル数に対して、Ω〜７
モルチ、特に２〜３モルチが最適である。なお、化合物
（７）、（ワ）の混合比を変えることによって、種々の
コポリマーを得ることができる。

反応温度は、約−３０〜−６θ℃が適当であシ、重合時
間は、約４ｔＯ−Ａθ時間が適当である。

この重合反応は、Ｘ空中あるいは不活性ガス（例えば、
Ｎ２　ガス）雰囲気中で行うのが好ましい。

かくして、分子中に、アジド基を有するアジド糖含有多
糖（１０）が得られるが、次いでこれを前記と同様バー
チ還元することによりアミノ糖コポリマー叩が得られる
。

かくして、得られたポリマー（１）、（ＩＤから次の反
応により、本発明の有効成分である硫酸化多糖体を得る
。

前記ポリマー（１）又は（ＩＩ）　’ｉ前処理して膨潤
させた後適描な溶媒に懸濁させる。溶媒としては、ピリ
ジン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアぐド等
が適当である。この懸濁液を硫酸化剤（及び前記溶媒）
と共に反応させる。硫酸化剤としては、クロルスルホン
酸、ピペリジン−Ｎ−硫酸等が適当である。硫酸化剤の
使用量は、出発物質のアミノ単糖残基に対して、２０〜
３０モル用いるのが適当である。反応温度、反応時間は
、溶媒、硫酸化剤によ・つても異なるが、約７θ〜７０
０℃、ｌＩ、１〜Ａθ分が適当である。反応後、放冷し
、蒸留水を加えて反応を停止し、次いで、アルカリ、例
えば水酸化ナトリウムで中和し、エタノール等を加えて
、ポリマーを沈殿させる。これを遠心分離して、蒸留水
に溶解し、透析後、濃縮乾燥することによって有効成分
の硫酸化多糖体を得る。

ホモポリマー佃） 上記の如く１本発明の有効成分を得ることができるが、
ホモ４リマー（ｍ）の場合、極限粘度約０．１５〜０．
１８．イオウ含量約１６〜１８憾。

コーリマー（Ｎ）の場合、極限粘度約０．０７〜０．１
０．イオウ含量約１０〜１５優のものを用いるのが適当
である。本発明の薬剤は、臨床症状に応じて、その時の
最吃適切な投与方法をとることができる。すなわち、静
脈注射法、皮下注射法、筋肉注射法あるいは経口投与法
等によるが、急性症状の場合には、やはシ静脈投与が適
切である。

又１本発明の有効成分は、適当な不活性溶媒。

例えば、殺菌水、生理食塩水等に溶解本しくけ懸濁させ
、あるいは不活性担体または増量剤を加え、例えば注射
剤などの非経口剤：散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、
コーティング剤、シラツブ剤、水剤その他の経口剤など
の剤型にして用いるのが適当である。

上記不活性担体または増量剤としては１例えば、リン酸
カルシウム、炭酸カルシウム、ブドウ糖。

ラクトース、シュークロース、デキストリン、蔗糖エス
テル、殿粉、ソルビット、マンニット、結晶セルロース
、タルク、カオリン、合成ケイ酸アルミニウム、カルが
キシメチルセル、ロース、メチルセルロース、セルロー
スアセテートフタレート、ポリビニルピロリドン、ポリ
ビニルアルコール。

アラビアゴム、トラガントプム、ゼラチン、寒天束、シ
ェラツクなどをあげることができる。

本発明の有効成分Ｆｉ、通常１組成物重量に基づいて１
〜９０重量係含有するのが好ましい。これらの含有量は
剤型によって適当に変更できる。

以下に１本発明を、製造例、実施例及び試験例によって
詳述するが本発明は、何ら、これらによって限定される
ものではない。

製造例１ ポリマー（１−ａ）（嘉ｎ＝５−５ｘ　１０　　％ＤＰ
ｎ　＝　９５　（１００１Ｖ−ＮＨ２基：　０−６２１
　ｍｍｏｌ　ｓＯＨ基：　１　、２４ｍｍｏｌ　）を水
（１０ｍ）中で粉砕し、遠心分離する。次にエタノール
（２０ｄ）中で３回、続いてエーテル（２０ｍｌ　）中
で３回攪拌遠心分離し、予め乾燥したピリジン（８−）
中に懸濁させる。この懸濁液を予め０℃で反応させたク
ロルスルホンｍ　（１ｍｌ、　　１５ｍｍｏｌ　）と乾
燥ピリジン（６−）中に加え、沸騰している湯浴に浸し
。

１時間反応させる。放冷後、蒸留水（２ｏ＋ｙ）を加え
て反応を停止し、２．５Ｎ水酸化す）　ＩＪウム水溶液
（７，５＋＋ｄ）で中和し、エタノール（５〇−）を加
えてポリマーを沈澱させる。これを遠心分離して、蒸留
水に溶解し、３日間透析後、濃縮、凍結乾燥することに
よって硫酸化アミノ多糖ホモポリマー（ｍ−ａ）を得る
。（１８３，７■、８１．０係） 〔ホモポリマー（ｍ−ａ）の物理的性質〕ＨＮＳ 元素分析値　実測値　　　２０．１６　４．ｊ３３．７
５　１６．１４計算値　（Ｃ６Ｈ，Ｏ，ｏＮＳ２Ｎａ□
）　　１９，７３　２，４８　３．８３　１７．５６ニ
ンヒドリン反応：隘性 ＩＲ：　　５８　ＱｃＭ（Ｍ） ８ＤＯ１，７ｙＩ（Ｍ） ６１０ｃｍ（Ｍ） １２４　ＱＣｒｎ（ｓ、　ｂｒｏａｄ）７ １５１０ｃｒｎ　　　（Ｍ） ”Ｃ−ＮＭＲ：　ａ９７．５３ｐｐｍ（Ｉ　Ｃ，Ｃ−１
）６８．０７　　　　（１ｃ、ｃ−６） ５５．０７　　　　（ＩＣ，Ｃ−３） ５ 〔α］ｏ＋１１６．９°（Ｃ＝１．０、ＣＨＣＬ３）Ｉ
Ｊ］　＝’ｏ　、　１７　（＋（２〇中％３０℃〕製造
例２ ポリマー（■−ａ）（百私＝　１４４４　ｍ／ｎ＝１．
０４．１００ヤ）を水（２−）に溶解し、エタノール２
０−を加えて沈澱させる。遠心分離後。

更にエタノール、次いでエーテル中で攪拌分離後。

予め乾燥したピリジン（８−）中に懸濁させる。

この懸濁液を予め０℃で反応させたクロルスルホンＭ　
（１ｍｌ、　　１５ｍｒｎｏｌ　）と乾燥ピリジン（６
−）中に加え、沸騰している湯浴に浸し、１時間反応さ
せる。放冷後、蒸留水（２０ｍ）を加えて反応を停止し
、２．５Ｎ水酸化す）　ＩＪウム水溶液８ （７，５ｍ／）で中和し、エタノール（５［］ｄ）を加
えてポリマーを沈殿させる。これを遠心分離して、蒸留
水に溶解し、３日間透析後、濃縮、凍結乾燥することに
よって硫酸化アミン糖含有多糖〔コポリマー（ＩＶ−８
））を得る（１６８ｍ９．７６．２係）。

〔コポリマー１／−ａ）の物理的性質〕ＣＨＮ”　　　
　　Ｓ 元素分析：実測値　１７．４０３．３９１．５５１４．
６５計算値Ｃ６Ｈ８，５８９０１０，２１１Ｎｏ、４８
９３１．９ＯＮａ　１．９０”３Ｈ２０１７，５９３，
５９１，６８１４，８７（硫酸化率：糖−残基当す５Ｏ
５−１、９０個）ＩＲ：　　　５８０副　（Ｍ） ８００ｃｒｎ　（Ｍ） １２１１　ＱｔＭ（ｓ、ｂｒｏａｄ） １５１０ｍ　（Ｗ） 〔α：］２５＝＋１００．２°（Ｃ−１，０，Ｈ２Ｏ）
〔η〕＝　ｏ　、　０７　（）−＋２ｏ％３０℃）製造
例３ ：ｌ’　ｙｌ！　ＩＪ　マ（Ｉｆ　　ｂ　）　（０Ｐｒ
１＝　１００〜１２　Ｄ、ｍ／ｎ＝４．７６、Ｎ）１２
基ｏ、１１４ｍｍｏ１％ＯＨ基１．７４ｍｍｏｌ　、１
００ｍｙ）を用いた他は、製造例２と同様に反応、後処
理すると、＠酸化アミン糖含有多糖（Ｖ−ｂ）が得られ
た（１７６叩。

７２．０係）。

〔コポリマー（ｔｖ−ｂ）の物理的性質〕ｌ−ｌＮ５ 元素分析：実測値　２２．７６　Ａ、Ａ６０．６７１０
．８２計算値Ｃ６Ｈ９，＋　１５０８，０２５ＮＯ，１
８５”　１．０７Ｎａ　１，０７２２．１６４．６Ｂ　
０．８０１０．５５（硫酸化率：糖−残基当りｓｏ５″
″１．０７個）ＩＲ：　　　５８０口　（Ｍ） ８００Ｃｒｎ（Ｍ） １２４　ＱＣｒｎ（ｓ　＋ｂｒｏａｄ　）５ 〔αｍｌＤ　＝＋１０９．６°ｃｃ＝ｉ、ｏ、ｔ−＋２
ｏ）〔η］　　〜０．１５（８２０，３０℃）実施例１
（注射剤） 製造例１で得られた硫酸化多糖体５１％、重炭酸ナトリ
ウム０．２ｔおよび塩化ナトリウム０．４？を注射用蒸
留水に溶解して１００７！とじた後１常法忙よシ注射剤
とする。

実施例２（錠剤） 製造例２で得られた硫酸化多糖体２００？とラクトース
１４０？を混和した後、ＵＳ標準篩（６０メツシユ）を
通す。次いで混合物を、アルコール性ぼりビニルピロリ
ドン４Ｑｉで湿らした後１２メツシユ篩に通して顆粒を
作シ乾燥する。乾燥顆粒を１６メツシユの岬に通したの
ち、タルク５０１ｆと殿粉２０？を加え１次いで重量４
５０叩の錠剤を製造する。

実施例３（顆粒剤） 製造例３で得られた＠酸化第糖体２００？、メチルセル
ロース１５０ｐ、コーンスターチ８０？および香料若干
を混和し％　６０メツシユの篩を通す。混合物を、アル
コール性ぼりビニルピロリドン２０９−で湿した後、０
．７ｕの径を有するステンレススチール篩で製粒する。

１ 試験例／（抗凝血活性） アメリカ薬局方「ヘノ苧リン」の力価検足法（Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｐｅｌａ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｌｔｅｄ　５ｔ
ａｔｅｓ　ｏｆＡｍｅｒｉｃａ、　ＸＩＸ、第、２．２
９〜．２．？θ頁）に準じて測定した（但し、羊血漿の
ベシに牛血漿を用いた）。

被験物質を生理食塩水に溶解し／ｌＯｒ／ＩＩｌ濃度と
する。また標準ヘノぐリン（／１ｏｌｕ、／ｖ）の／　
Ｏｒ　／　ｔｘｌ生理食塩水溶液を調製する。

被験物質溶液及び標準ヘノ母リン溶液を夫々ｏ、ｇ　。

Ｏｏり、０．乙、θ、！ｒ１０ｍ１Ｉｚ　　θ、３．０
．２．０、／及びＯ２０，ｔｄずつ、ガラス試験管（／
３×１０！ｒｗ＋）にとシ、更に全量がθ、ざｒｘｌに
なるよう、生理食塩水を加え混合する。

６管に牛血漿＊／ＩＩＩＩ！ずつを加え混合し、次いで
２チ塩化カルシウム水溶液０　、　Ｊｓｄずつを加え、
直ちに管を静かに転倒混オロし、３りＣの水浴中に保つ
。

３０分後、６管の凝血状態ｋＯ，０２，２３）θ、、！
−、０．７．！ｔ、／、０のクラスにわけて記録し、−
血状態が、Ｏ９Ｓの時の被験物質及び標準へ２ ノ母リンの量から、被験物質の力価を求めた。この結果
を第１表に示す。

峯牛血漿：あらかじめ、採血容器に７０％クエン酸ナト
リウム（Ｎａ、Ｃ６Ｈ，Ｏ，−，２Ｈ２０）　　水溶液
ｙ。

−を入れておき、この容器に新鮮な牛血９６０ｄを入れ
、混和したのち３θ００ｒｐｍ、７０分間遠心分離して
血漿を採取する。

第１表　　抗凝血活性 ａ）対照物質、極脂粘度〔り〕θ、θ、２ｓｔ　；ｓ含
ｆ／１４ｔ％本発明の薬剤はへ７４リンの約１０Ｓの抗
凝血活性を有し、且対照のデキストラン硫酸の約−０！
倍の活性を有することが知られる。

試験鑞２（全血凝固、阻止作用） 体重２．３〜３．ＯＫ４の日本白ウサギ（雄）を用い、
被験’＄ＩＪ倉（，２１−％生理食塩水溶液）を２Ｓη
／Ｉ’ｙずつ靜注し、／−０分後に耳静脈より採血して
、Ｌｊｅ　Ｖｌｌｌｈ　ｌ　ｔｅ氏変法（゛金井泉、金
井正光編著、臨床検査法提要、金原出版■、昭和３．７
年、第２ｇ版）によシ全血凝固時間を測定した。

即ち、乾燥しｆｃ２本めガラス試験管（／σ×／２０ｍ
）を３７℃の恒温永槽中に保ち、採血後卓ちに注射針！
、悸す、シ、泡立たないように／ｄずつ入れる。

第１の試験管を静ｔＳ分後゛かす、１０秒毎にＭＥ倒し
て凝血の有無を観察する。これが凝固したら４第コの、
試験管を同様に観察す７る。　　　　　　　。

血液が静脈から注射器に入った時から、第一の試験、管
が凝固する声での時間會全奥凝固、時間とする。、こ９
．結果を第−表に示す。

第、２衣　　全血凝固時間 ａ）対照品、極限粘度〔η’ＪＯ，０２夕乙、Ｓ金蓋／
ｇ、クチ本発明の有効成分は、いずれも、２．５−■／
　Ｋｙ投与で、血液凝固時間を有意に延長させることが
知られる。

試験例３（脂血清澄活性） 体重ユ、Ｓ〜３．０Ｋｑの日本白ウサギ（雄）を用い、
被験物質（０，５％生理食塩水溶液）をＳ■／に９ずつ
靜注し、１０分後に耳静脈から、採血して血漿中の脂血
清澄作用を、原・葛谷法（蛋白質・核酸・酸素、１０　
ハ２２４ｔ〜／２．２９、／９乙Ｓ）により測定した。

即ち、あらかじめ１０チクエン酸ナトリウム水溶液０．
／πｅの入った注射器で全抑コ、４ｔｄを採り、３００
０　ｒ、ｐ、ｍ、でＳ分間遠心分離して血漿を得る。

別にｐＨ７、ＩＩのリン酸緩衝液ざ、３ｒｘｌに牛アル
ブミン左左Ｏηを耐力・ｒし、次いでｐＨ７、りのリン
′酸緩衝液で７０倍に希釈した乳剤ＥｄｌＯ１（Ｃａｌ
ｂｌｏｃｈｅｍ社製）／、！；ｄを加えて基質液を調製
する。

血漿／　ｒｎｅと基質液／ｄを混和し、直ちに層長Ｓ笥
で波長Ａ　Ａ　Ｏｎｍの吸光度（−１ｏｇＴ、）　　を
測定する。

次いで３７℃の恒温水槽中で３時間インキユーペーショ
ンした後、同様に吸光度（−ＩｏｇＴ２）　ｋ測定する
。

一方、対照として扱験物質投与前の血漿を用いて、イシ
キュペーション前後の吸光度（−１ｏｇＴ３及び−ｌ　
ｏｇＴ４）を測定する。

次の式から被験物質の脂血清澄活性を求める。

脂血清澄活性−（（−ｌ　ｏｇＴ、　）−（−ＩｏｇＴ
２　））−（（−ＩｏｇＴ、）（絽ｏｇＴ）　　　（−
＋。ｇ７４月 第３表　　脂血清澄活性（Δ−１ｏｇＴ　）ａ）対照物
質、極限粘度〔η〕０．０コ左６Ｓ含童　７ｇ、’７％ 本発明の有効成分は、いずれも優れた脂血清澄いずれの
有効成分化合物においてもそれぞれ、３　ｇ／に９以上
及び２９／に９以上（静注）であった。

〔考　察〕

本発明の有効成分は、上記実施例からも明らかな如く、
デキストラノ株酸より優れた抗凝血活性あるいは脂血清
澄作用を有し、又急性毒性（ＬＤ５ｏ）も３９７ｉ’９
以上（マウス）、２９／’９以上（ラット）であり、極
めて有望な薬剤への利用が期待される。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１一般式： （式中、ｍ／ｎは０−４であり、ｍ−１−ｎは３０〜／
   ！ＴＯの整数を示す。） で表わされる硫酸化多糖体を有効成分として含有するこ
   とを特徴とする血液凝固抑制及び脂血清澄剤。