JPS6115894A - 新規な３糖類化合物及びその製造法並びに血栓防止剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔技術分野〕 本発明は、新規な３糖類化合物及びその製造法並びに該
化合物を有効成分とする血栓防止剤に関する０ 〔発明の背景〕 アンチトロンビン■は、一本鎖ポリペゾチドよりなる糖
夕／・臂り質であって、血液凝固阻害因子として重要な
ものと考えられている。

一方、ヘノ皆リンは、アンチトロンビン厘ト結合し、ア
ンチトロンビン璽の有する血液凝固阻止作用を飛躍的に
高めるムコ多糖であり、へ・マリンのアンチ）ロンピン
厘との結合部位は次に示すような糖残基から構成されて
いると考えられている（　Ｌ、　Ｔｈｕｎｂｅｒｇ、　
ａ、　Ｂａｃｋｓｔｒｏｍ　ａｎｄ　Ｕ、　Ｌｌｎｄａ
ｈｔ。

Ｃａｒｂｏｈｙｄ、　Ｒｅｓ、　／　００　（／り１．
２）３り３とその中の引用文献参照〕。

又、非常に興味あることは、最近、動物実験により上記
結合部位を含む小さなヘノ母リン断片には高い抗血栓活
性があることが示されたことである。

この結果は１近い将来、副作用の少ない且つ効果的な抗
血栓剤の開発が可能となることを示している。

本発明者らは、上記観点から、ヘノ（リンのアンチトロ
ンビン■結合部位の合成化学的研究を進め、その過程に
おいて、先に、新規な３糖類化合物を、初めて合成する
ことに成功した（特願昭ｊｇ−コθｌ／Ｌ≠グＯ号明細
書参照）。

［発明の目的〕 本発明の目的は、崩液凝固抑制活性を有する新規な硫酸
化された３糖類化合物及びその製造法を提供することに
ある。更に、本発明の目的は、該３糖類化合物を有効成
分とする血栓防止剤を提供することにある。

〔発明の構成〕

本発明の新規な３糖類化合物は、下記の構造式％式％ 又、本発明の新規な３糖類化合物は、次の工程により得
ることができる。すなわち、式：で示される化合物を出
発物質として１、該化合物を脱アセチル化して、式： で示される化合物を得、該化合物を、硫酸化した後、Ｎ
ａ＋型イオン交換樹脂で処理して、式：で示される化合
物を得、該化合物を、接触還元して、式： ′　で示される化合物を得、該化合物をＮ−硫酸化した
後、Ｎａ　型イオン交接樹脂で処理してメチルエステル
を加水分解し、式： で示される化合物を得る。

更に体発明は、上記化合物（５）を有効成分とする血栓
防止剤である。

以下に、本発明の詳細な説明する。

く出発物質化合物（１）の合成） 本発明の出発物質化合物（１）は、セロビオースかう得
うレる／１６−アンヒドロ−β−セロビオース（Ａ）　
（１，Ｆｕｊｌｍａｋｌ　ａｔ　ａｔ、　Ｃａｒｂｏｈ
ｙｄｒ、　ＲｅＳ、ｅ１０ＩＣ／９ｇ、２）／ＩＩざ〜
／Ｊ／参照〕参照−グルコースから得られるプロミド体
（６）。

（Ｈ，Ｐａｕｌｓｅｎ　　ｅｔ　　ａｌ、、　　Ｃｈｅ
ｍ、　　日＠ｒａｎ／　　タ　７Ｊ’。

／／／、、２３３１／ＬＮ、２３≠７参照〕より、例え
ば、次の工程によって得ることができる。

く本発明の新規な３糖類化合物の合成）出発物質化合物
（１）を脱アセチル化して、化合物（２）を得る。脱ア
セチル化は、アルカリ加水分解することによって行なわ
れる。例えば、Ｎ　ａＯＨＳＫＯＨ水溶液とメタノール
、エタノール、イソ７’　ｏ　ｔ４ノール等の混合溶液
を用いて行う。反応温度、反応時間は、それぞれｏ−ｔ
ｒｏ℃、５９〜３時間が適当である。

得られた化合物（２）の水酸基を、硫酸化した後、Ｎａ
＋型イオン交換樹脂で処理して化合物（３）を得る。硫
酸化剤としては、５ｏ３−　）　’）メチルアミン、Ｓ
Ｏ３−ピリジン、に−キノリル硫酸、ビペリソンーＮ−
硫酸、クロルスルホン酸等が好適であり、溶媒としては
、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等が用
いられる。反応温度、反応時間は、それぞれ、室温〜１
０℃、５時間〜２日が適当である。次いで、Ｎａ＋型イ
オ／交換樹脂を用いて、カラムクロマトグラフィーを行
って中和精製する。得られた化合物（３）を、脱ペンツ
ル化及びアジド基のアぽノ化を行って、化合物（４）を
得るが、これは、接触還元を行うことにより両反応を一
挙に行うことができる。接触還元触媒としては、／　０
　％　Ｐ　ｄ−Ｃｓ　Ｐ　ｔ０２を用い、溶媒ハ、水−
酢酸−メタノール、メタノール−酢酸等を用いるのが適
当である。この反応は、水素加圧下でｊ−７０時間行う
ことが適当である。

得られた化合物（４）のアミノ基を硫酸化（Ｎ−硫酸化
）した後、Ｎａ＋型イオン交換樹脂で処理してメチルエ
ステルを加水分解し、目的化合物（５）を得る。

硫酸化剤は、前記硫酸化剤を用いることができるが、水
溶液中、Ｐｈを調整して行うことが好ましい。反応温度
、反応時間は、それぞれＯ−ＳＯ℃、７０時間〜５日間
が適当である。

次に、上記のようにして得られた化合物（５）を有効成
分とする血栓防止剤について説明する。

本発明の薬剤は、臨床症状に応じて、その時の最も適切
な投与方法をとることができる。すなわち、静脈注射法
、皮下注射法、筋肉注射法あるいは経口投与法等による
が、急性症状の場合には、やはり静脈投与が適切である
。

又、本発明の有効成分は１適当な不活性溶媒、例えば、
殺菌水、生理食塩水等に溶解もしくは懸濁させ、あるい
は不活性担体または増量剤を加え、例えば注射剤などの
非経口剤：散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、コーティ
ング剤、シラッゾ剤、水剤その他の経口剤などの剤型に
して用いるのが適当である。

上記不活性担体または増量剤としては、例えば、リン酸
カルシウム、炭酸カルシウム、ブドウ糖、ラクトース、
シュークロース、テキストリン、蔗糖エステル、殿粉、
ソルビット、マンニット、結晶上ルロース、メルク、カ
オリン、合成ケイ酸アルミニウム、カルがキシメチルセ
ルロース、メチルセルロース、セルロースアセテート７
タレート、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコー
ル、アラビアゴム、トンガントゴム、ゼラチン、寒天末
、クエラック々とをあげることができる。

本発明の有効成分は、通常、組成物重量に基づいて／〜
り０重量％含有するのが好ましい。これらの含有量は剤
型によって適当に変更できる。

以下に、本発明を、実施例、製剤例及び試験例によって
詳述するが本発明は、何らこれらによって限定されるも
のではない。

なお、実施例中、結晶物質のＩＲはヌゾヨール法を用い
、又、　Ｈ−ＮＭＲは、１１ｔＯＯＭＨ１％内部標準Ｔ
ＭＳ、溶媒ｃｏｃｔ３　及びＤ２０を用いた。

実施例　１ Ｏ−２−アット−３，１１−ノー〇−ベンジルー２−デ
オキシ−α−〇−グルコピラノシルー（／→４ｔ）−〇
−メチル２．３−ジー０−ベンジル−β−Ｄ−グルコピ
ラノシルウロネート−（／→＆　）　−／、、！ｌ）−
アンヒドローーーアジドー２−デオキシ−β−Ｄ−ゲル
コピ２ノース（２） ＮａＯＨ水溶液（／（ｌｌＪｍ、／Ｎ）を、化合物（１
）（３００■、０．３０ミリモル）の冷メタノールＣ６
Ｃ）ｄ）ｆｉｌ液に、０〜ｊ℃にて加え、次いで反応混
合液を室温で３時間攪拌し、その後、Ｄｏｗｅｘ　ｊ　
（１）Ｗ　−ＸＪ’　（Ｈ”）型樹脂で処理する。反応
混合液を沖過し、ν液を溶媒留去する。残液を、メタノ
ール−エーテル中、ジアゾメタンで再エステル化し、溶
媒を留去すると化合物（２）が得られる。これを、分取
用薄層クロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ　Ａｒｔ　３７
／７　＃　Ａ　ＯＦ　　　ｓ溶媒：ペンゼノーメタノー
ル−１０二ｌ）で精製して、不定形粉末ｌざ９ｍ（収率
、６９％　）を得る。

〔化合物（２〕の物理的性質〕 比旋光度：〔α〕８２＋１００（Ｃ０，７３、クロロホ
ルム）１、Ｒ，：　　νｍａｘ　３ｊ００ＣＯＨ）、２
／３０（Ｎ３＞。

／　７６６　（Ｃ００ＣＨ３）　ＣＲ″″１Ｈ−ＮＭＲ
ａ、： ３、．２１１　（ｄｄ　、　／Ｈ、Ｊ３．りＯ及びＹ　
ＯＪ　Ｈｚ　ｐ　Ｈ−−２’　）　＋３、．２６（ｄ、
／Ｈ，，１４４１ｈ弘Ｈｚ　５）ｌ−ｊ）Ｃ３，７り（
Ｓ　ａ　３Ｈ＃　−ＣＯ２ＣＨ，）　？３．１６（ｄ、
／Ｈ，Ｊ’ＡＩ／ＬＯＨ１、Ｈ−Ｊ）。

弘θ０（ａ、／Ｈ，ＪＺＪ２Ｈｚ、Ｈ−６’　）＃４’
、　６０　（ｄ　ｅ　／　Ｈ−Ｊ　’７．　ｊ　７　Ｈ
ｚ　−Ｈ−／　’　）　＊ｊＪり（ｓｐ／ｈｓ＋−／）
、及び ｉｌ／ＬＡｃｄｅ／Ｈ，Ｊ３．りＯＨ２，Ｈ−／’）。

元素分析 計算値（Ｃ，７８５２Ｎ６０□４）： Ｃ１乙／、０３；Ｈ，ｉ乙’７；Ｎ、９．０’７゜実測
値 Ｃ、１，／、０．！；　；　ｌ−１，１７９；　　Ｎ　
、　１．４Ｌ３０実施例　２ ０−２−アジド−３，１１１−ジーＯ−ペン・ゾル−コ
ープオキシ−６−０−スルホネート−α−Ｄ−グルプピ
ラノクル−（／→＋）−０−メチル−２３−ジーＯ−ベ
ンジルーβ−Ｄ−グルコピラノシルクロネート−（／→
≠）−／、Ａ−アンヒドロ−！−アジドー２−デオキシ
ー３−〇−スルホネート−β−Ｏ−グルコビラノースの
でフナトリウム塩（３）Ｓ０３−トリメチルアミン快合
体（７７１１ｆｉｌ。

ｏ、５ｓｉｖモル）を、化合物（２）の冷ジメチルホル
ムアミド（，２ｖ）溶液に加え、混合液を室温でｊ時間
攪する。更に、５ｏ３−　）リメチルアミン複合体（Ｊ
ＯＩＲ９，０，３７＃　！Ｊモル）を反応液に加え、５
０℃で５時間攪拌する１、反応液を溶媒留去し、残渣を
、Ｄｏｗｅｘ　ｊ（７Ｗ−ＸＪ’　（Ｎａ　　）型樹脂
ヲ用いて、カラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノ
ール）に付し、粗製物を得る。このものをシリカゾルカ
ラムクロマトグラフィー（Ｕ出液：クロロホルム−メタ
ノール−９：　／　（ｖ／ｖ　）Ｋ付した後、更に分取
用薄層クロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ　Ａｒｔ　ｊ　
７／　７−６０　Ｆ１５４−溶媒：クロロホルム：メタ
ノール−ｊ：、！（ｖ／ｖ））で精製して化合物（３）
を／Ｊ−≠〜の不定形粉末で得た（収率７≠チ）。

〔化合物（３）の物理的性質〕 １、Ｒ，：　ｓｒｍａｘ２／３０ＣＮ３）　＃　／７１
）（ＣＯＯＣＨ３）　１／２乙Ｏと／　０３０　（Ｓｏ
、　）　ｃＩｎ、”−１実施例　３ ０−２−アミノ−λ−デオキシー６−〇−スルホ４−）
−α−０−グルコヒラノシルー（／→４ｔ　）−０−メ
チルβ−Ｄ−グルコビラノシルーウａネート−（／→ｔ
〕−！−アＳノー八乙−アンへドロー２−デオキシ−３
−０−スルホネート−β−Ｄ−グルコビラノースのジナ
トリウムｉＭ　（４）化合物（３）　（／４ｔＯＩｎ９
　、０．７．２ミリモル）。

／　Ｑ　％　Ｐｄ／ｃ（，２００’Ｒ９）のメタノール
（／Ｊ’ｓｄ）溶液、酢酸（ざ−）及び水（了−）の混
合物を、水素雰囲気中、電温でり時間振とぅする。反応
混合物を沖過し、ν液を溶媒留去する。残渣シロップを
アビセルを用いたカラムクロマトグラフィー（溶出液、
ブタノール：酢酸：水＝に：３：３（ｖ／ｖ））に付し
て、化合物（１３）を＜ｔ　ｊ〜得た（収率ｊ／％）。

〔化合物（４）の物理的性質〕 １、Ｒ，ニジ１．ｎａｘ３１１Ｌｊｏ（ＯＨとＮＨ２）
。

／　７４’Ｊ　（Ｃ００ＣＨａ’）　、／　Ｏｊ　Ｏ（
５０３）　ｃｖｉ−１実施例　ｔ Ｏ−２−デオキシ−２−スルホアミノ−Ａ−０−スルホ
ネート−α−Ｄ−グルコピラノシル−（／→＜１）　−
〇−β−Ｄ−グルコピラノーシルウロネート−（／→４
１．）−へ６−アニ／ヒドロー２−デオキシ−２−スル
ホアミノ−５−ｏ−スルホネート−β−Ｄ−グルコビラ
ノースのｊナトリウム塩（５） Ｓ０３　−トリメチルアミン複合体（’ｊ［ｌｌｌ１ｉ
＋。

０．３ｚミリモル）を、θ〜Ｓ℃で、化合物（４）（，
２ｘ４．０．０’ｌミリモル）（Ｄ冷ＮａＯＨ水溶液（
ｐＨ＊ｊ、Ｊ、ｚ）に刀ｎえ、仄いで室温にて２６時間
蒲拝掌る。この＋！］・更にＳＯ，−）リメチルアオン
裏合本（ｆ／ダ、ｏ、、５′７ぼりモル）を３回に分け
て加える。得られた反応液にＮｉＯＨ水溶液を声！、２
．０になるまで加え、仄いで室温で６時間攪拌する。／
　Ｎ　−ＨＣｌを−′Ｚｊになるまで加え、反応液を碑
結乾燥する。残液を５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　−，２ｊを
用いたイオン交換力ツムクロマトグラフィー（溶出液６
、水）に付し、化合物（５）の粗製物を得る。

次いで、Ｄｏｗｅｘ　ＪＯＷ　−）ｌ　（Ｎａ＋）型樹
脂を用いたカラムを、メタノールを溶出液として通過さ
せ、化合物（５）の不定形粉末、２３〜を得る（収率６
／ダ）。

〔化合物〔５〕の物理的性質〕 比旋光度：〔α〕♂Ｔり０（旦０１ｓｏ、水）１１４−
Ｎ、Ｍ、ｌ’（。

δＨＣＤ２０）”、３．２０Ｃｄｄ、Ｉｋ−１，Ｊ３．
６６及びシ：Ｉ　ｆ　　Ｈｚ　　　ｒ　　　Ｈ−−２”
）　。

３、’ｌ−／（ｒｉｄ　、ＩＨ，Ｊ７．ｇ／及び反７７
Ｈ２＃　）Ｉ−，２’）＋ｊ、＃ｊ（ｓ　、ＩＨ，Ｈ−
，２）、３．！；／−３，１０（’ｍ、ＪＨ）。

３．６３（ｒｉｄ、ＩＨ１）、２．ざ／及び５ｉ！ざｇ
Ｈｚ＋Ｈ−３’）ｍ３．７１Ｃｄｄ、ＩＨ，、Ｊ！、３
７及び１．０　！；　Ｈｚ　−）１−　Ａ　ｂ　）　ｅ
久０ター４４／７（ｍ、ＪＨ）。

ｌＡ３０ｃｄｄ、ＩＨ，Ｊ２．／９及びと７りＨ２ＩＨ
−！’）　＋ＩＡ！；７Ｃｓ　、ＩＨ、Ｈ−Ｊ）　−１
Ａ乙ｊ（ｄ　、ＩＨ５ＪＺｆ／Ｈｚ＊Ｈ−／’）＃４１
．７４’（ｄ、ＩＨ，Ｊよｊ７Ｈｚ、）−１−ｊ）。

よｊ′ｆ（ｓ、ＩＨ，Ｈ−／）、及び ｊ：６０（’＊／Ｈ１ＪＪ、ＡＡＨｚ　　ｅＨ−／’）
。

元素分析： 計算値　（Ｃ１８Ｈ２５Ｎ２０２６Ｓ４”Ｃ５”　−２
８２０）　：Ｃ，２，２，≠／：Ｈ，３，０３：Ｎ、２
．りＯ８実測値　Ｃ，，２２，２３：Ｈ，３，０３：Ｎ
、、２．９００質量分析： ｍ／ｚ（ＳＩＭＳ）９．２♂（（Ｍ）”。

計算値Ｃｌ８Ｈ２５Ｎ２０２６Ｓ４Ｎａ５　”り、２Ｊ
’、、２ｊ−：ｌ。

（ＦＡＢＭＳ）り０６（（Ｍ−Ｎａ）”　　。

計算値Ｃ）８Ｈ２５Ｎ２０２６　Ｓ４”４　”　５ＰＯ
よ５９〕。

製剤例／（注射剤） 実施例で得られた化合物（５）／ｊｇ、重炭酸ナトリウ
ムｏ、、２ｇおよび塩化ナトリウムｏ、　ｇ　ｙを注射
用蒸留水に溶解して１００ｄとした後、常法により注射
剤とする。

製剤例、２（錠剤） 実施例で得られた化合物（５）２００９とラクトース／
≠ＯＳを混和した後、ＵＳ標準篩Ｃ１，０メツシユ＞ｔ
−ｉｔ。次いで混合物を、アルコール性ぼりビニルピロ
リドンｔＯｇで湿らした後７．２メツシユ篩に通して顆
粒を作り乾燥する。乾燥顆粒を７６メツシユの篩に通し
たのち、タルクｊＯ９と殿粉、２０７／を加え、次いで
重量＜ｔ−ｓｏｗの錠剤を製造する。

製剤例３（顆粒剤） 実施例で得られた化合物（ｓ　）、ｚ００１ｓメチルセ
ルｐ−ス／ｊｒ０＆、コーンスターチｇＯｇおよび香料
若干を混和し、６０メツシユの篩を通す。

混合物を、アルコール性ポリビニルピロリド７２０ｇで
湿した後、０．７　ｍｍの径を有するステンレススチー
ル篩で製粒する。

試験例／（抗凝血活性） アメリカ薬局方「−・バリン」の力価検定法（Ｐｈａｒ
ｍａｃ’ｏｐａｌａ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｌｔｅｄ　５
ｔａｔｅｓ　ｏｆＡｍｅｒｉｃａ、　ＸＩＸ％第２．２
２〜．２３０頁）に準じて測定した。

被験物質を生理食塩水に溶解し／１．Ｏ１／−濃度とす
る。また標準ヘパリン（／６０ＩＵ／Ｉｌ＆）の１０ｒ
／−生理食塩水溶液を調製する。

被験物質溶液及び標準ヘパリン溶液を夫々ｏ、ｇ。

０．７．０．ｌ、、０．ｊ、　０．１！−、０，，３，
０，，２，０，／及び０．０２−ずつ、ガラス試験管（
／ＪＸ１０ｊｍｍ）にとり、更に全量がＯｌｇ−になる
よう、生理食塩水を加え混合する。

容管に羊血漿／−ずつを加え混合し、次いでコチ塩化カ
ルシウム水溶液０１．２−ずつを加え、直ちに管を静か
に転倒混和し、３７℃の水浴中に保つ。

３０分後、容管の凝血状態を０１０．コｓ、ｏ、ｓ。

０．７Ｊ、／、０のクラスにわけて記録し、凝血状態が
Ｏｌｊの時の被験物質及び標準へ・クリンの量から、被
験物質の力価を求めた。この結果を第１表に示すＯ 第１表 ＊Ｌｏｔ　５ｔ−Ｊ’０／Ａｌｓ　　／Ｊ’ｊｕＳＰ　
ｕ／Ｉｎ９ｅＨｅｐａｒ　ｌｎｄ。

試験例２（抗Ｘａ活性） Ｘａ因子（約７．　／　ｎＫａｔ　ｓ　−，２，２−２
−２／ｄＨｚｏ　）、２　ｊｌｉｔに試料（０，／　〜
４１−００　ｌｉｇ／　ｍ　５ａｌｉｎｅ　）あるいは
生理食塩水２ｊｐｔさらにアンチトロンビン−ＩＩ　（
／　Ｕ／ｗｊＨ２０）λｊ−を加え、この混液に０．　
Ｏｊ　Ｍ−トリス緩衝液（−と３．０．．２．！７モル
／　ｌ　、　Ｎａ（、ｔＯ，／チアルツさンを含む）、
２２３　ｌｉｔを加えて混合し、約７分放置し、この混
合液に合成基質Ｓ−，２，２２２（／　ｔリモル７ｔ。

Ｉｎ　　Ｏ，ＯｊＭ−トリス緩衝液）　＋　ｏ　ｏ　ｐ
ｔを加え、反応を開始する。この反応の、’１０６ｎｒ
ｎ　　における吸光度変化△Ｅ／分を測定し、これがら
Ｘａ活性を求め、試料添加時の活性低下より、被験物質
の抗Ｘａ活性を次式より算出した。この結果を第−表に
示す。

第２表 なお、化合物（５）のマウスを用いた急性毒性（ＬＤ５
ｏ）は、１０００ｍ９／に７７以上（静注）であった。

本発明の化合物は、出血の危険をおさえた有用な血栓予
防物質であると思われる。なぜならば、抗凝血活性がほ
とんどないに等しいのに対し、抗Ｘａ活性が認められた
からである。

手続補正書く方式） ２１発明の名称　　　新規な３糖類化合物及びその製造
法並びに血栓防止剤 ３、補正をする者 事件との関係　　出願人 名称　（６７９）理化学研究所 同　　　小玉株式会社 ４、代理人

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される３糖類化合物。
2. （２）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物を脱アセチル化して、式：▲数式、化
   学式、表等があります▼ で示される化合物を得、該化合物を、硫酸化した後、Ｎ
   ａ＾＋型イオン交換樹脂で処理して、式：▲数式、化学
   式、表等があります▼ で示される化合物を得、該化合物を、接触還元して、式
   ： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物を得、該化合物をＮ−硫酸化した後、
   Ｎａ＾＋型イオン交換樹脂で処理してメチルエステルを
   加水分解し、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物を得ることを特徴とする３糖類化合物
   の製造法。
3. （３）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物を有効成分とする血栓防止剤。