JPH05124980A

JPH05124980A - 老化防止剤

Info

Publication number: JPH05124980A
Application number: JP3311662A
Authority: JP
Inventors: Yoji Niimoto; 洋士新本; Shunichi Dosemari; 俊一堂迫
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1991-10-30
Filing date: 1991-10-30
Publication date: 1993-05-21
Anticipated expiration: 2015-10-23
Also published as: JP3103167B2

Abstract

(57)【要約】【構成】パーオキシダーゼ単独またはパーオキシダー
ゼと抗酸化剤とを有効成分とする老化防止剤。パーオキ
シダーゼにはラクトパーオキシダーゼが、抗酸化剤には
ビタミンＥが用いられる。老化防止剤は、医薬、食品、
飼料、化粧料の形態で用いられる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、パーオキシダーゼ、特
にラクトパーオキシダーゼを有効成分とする老化防止剤
に関する。

【０００２】

【従来の技術】現在先進諸国においては寿命が延び、ま
た出生率が低下していることから、社会の高齢化が急速
に進んでいる。高齢化が進むことによって直面すること
になる最も大きな問題は老化である。

【０００３】老化は加齢に伴って生じる様々な現象、す
なわち、視力低下、記憶障害、運動能力低下、免疫機能
低下、聴力障害等の総称である。

【０００４】老化の原因としては様々な要因が提示され
ているが、老化速度を決定する要因として注目されてい
るのが活性酸素やハイドロキシラジカルのような過酸化
状態にある物質によるＤＮＡの損傷である。したがっ
て、このような過酸化物質の除去、あるいは生成を防止
するような物質は、老化を防止する機能を有する。

【０００５】これらの物質としてはスーパーオキサイド
ディスムターゼ等の酵素あるいは抗酸化物質等がある。
スーパーオキサイドディスムターゼやカタラーゼはそれ
ぞれスーパーオキサイドラジカル、過酸化水素を生体内
から除去するのに役立っている。また、抗酸化物質は、
過酸化物質による老化を防ぐ働きがある。

【０００６】活性酸素、酸素ラジカル、ハイドロキシラ
ジカルのような物質の寿命は短い。しかし、生体内で
は、これらの酸化状態は過酸化脂質中に蓄えられてい
る。過酸化脂質は不飽和脂肪酸分子内にパーオキサイド
結合を持っており、老化に伴う続発性疾患の原因となる
ことが指摘されている。

【０００７】ハイドロキシラジカルや過酸化脂質の生成
には遷移金属が重要な役割を果たしている。すなわち、
鉄イオンは、マロンジアルデヒドの生成を促進すること
がJanes ら〔Brain. Res, 246, 113-119(1982)〕によっ
て報告されているし、最近では、Kobayashi ら〔Agric.
Biol. Chem., 54, 69-76 (1990)〕によって、鉄(II)、
銅(II)イオン存在下で過酸化水素がＤＮＡに損傷を与え
ることが示されている。したがって、このような遷移金
属が生体内に過剰に存在することは、老化の原因とな
る。

【０００８】これまでに提案されている老化防止物質に
は発毛再伸剤（特開昭55−164616号公報）、ペプチド含
有化粧料による皮膚老化防止剤（特開昭56−115707号公
報）、植物抽出成分や骨髄成分を含有する食品（特開昭
61− 15423号公報、特開昭61−82744 号公報）などがあ
る。また、過酸化脂質生成防止を目的とした老化防止物
質としては大豆サポニン（特開昭56− 73025号公報）、
アゼピノカルボリン誘導体（特開昭55− 65619号公報）
が提案されている。

【０００９】しかし、これらの物質はいずれも遷移金属
由来の過酸化脂質の生成を抑制しうるものではない。一
方、Gutteridgeら〔Biochem. J, 199, 259(1981)〕は乳
中の鉄結合性タンパク質であるラクトフェリンが、鉄依
存性の過酸化脂質生成を抑制することを見出した。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、このよ
うに過酸化脂質の生成が老化を生ずる原因になるという
見地から、生体内において鉄を主とする遷移金属の存在
に基づく過酸化脂質の生成を阻止し、老化を防ぐ物質の
探索を行なった。すなわち、本発明の課題は、新規で有
効な老化防止剤を提供することにある。

【００１１】本発明は、このような生体内における鉄を
主とする遷移金属の存在に基づく過酸化脂質の生成に着
目し、この生成をパーオキシダーゼ、特にラクトパーオ
キシダーゼが抑制することができるかどうか検討を行っ
た。

【００１２】本発明者らは、まず種々の物質を食品に添
加して過酸化脂質生成抑制効果を検討したところ、パー
オキシダーゼ、特にラクトパーオキシダーゼを0.1〜５
重量％配合した組成物が過酸化脂質の生成を抑制するこ
とができることを見出し、本発明を完成するに到った。

【００１３】特に、本発明者らは、ラクトフェリンを用
いた鉄依存性過酸化脂質生成抑制試験を追試した際に、
乳中の酵素、ラクトパーオキシダーゼについても過酸化
脂質生成抑制作用があるかどうか検討した。その結果ラ
クトパーオキシダーゼにラクトフェリンとほぼ同等の過
酸化脂質生成抑制効果があることを見出した。

【００１４】ラクトパーオキシダーゼの作用は過酸化水
素の分解によるハイドロキシラジカル生成の防止であ
る。生体内での過酸化水素の分解においては、カタラー
ゼやグルタチオンパーオキシダーゼが働くとされている
（大澤俊彦、月刊フードケミカル、1991年１月号Ｐ59〜
65）。しかし、ラクトパーオキシダーゼの抗酸化作用に
ついてはこれまで詳しい研究は行なわれていなかった。
本発明はこのようなラクトパーオキシダーゼが生体内に
おいて鉄依存性過酸化脂質生成抑制作用をもつことを見
出したものである。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明は、パーオキシダ
ーゼを有効成分とする老化防止剤に関する。さらに、本
発明は、パーオキシダーゼと抗酸化剤とを有効成分とす
る老化防止剤に関する。

【００１６】パーオキシダーゼには、ミエロパーオキシ
ダーゼ、ホースラディッシュパーオキシダーゼ、アルス
ロマイセスパーオキシダーゼ等が用いられるが、過酸化
脂質生成防止効果及び安全性の点から、ラクトパーオキ
シダーゼの使用が望ましい。ラクトパーオキシダーゼは
哺乳動物の乳から調製することが可能である。給源とし
ては、ウシ、水牛、ヒト、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ等
の乳があげられるが、牛乳を用いることが量及び質の面
から望ましい。

【００１７】ラクトパーオキシダーゼは、公知の物質で
あって、それを製造するには、公知の方法、例えばスル
ホン化担体を用いてラクトパーオキシダーゼを吸着し、
精製する方法（特開平3-109400号公報）が工業的有利に
利用することができる。

【００１８】ラクトパーオキシダーゼは、鉄イオンが存
在すると、鉄とラクトパーオキシダーゼとが総合してそ
の作用が弱まるので、鉄イオン濃度は出来る限り低いこ
とが望ましい。50ppm 以上となるとラクトパーオキシダ
ーゼによる過酸化脂質生成抑制能が著しく低下する。

【００１９】ラクトパーオキシダーゼは種々の形態の組
成物に老化防止作用を有する成分として添加することが
可能である。例えば、製剤上慣用の担体、賦形剤等と混
合し、成型を行なって錠剤、顆粒剤、カプセル剤あるい
はドリンク剤等として医薬あるいは健康食品として用い
ることができる。また、食品成分と混合し食品として用
いることもできるし、飼料成分あるいは餌料成分と混合
して飼料、餌料として用いることができる。さらに、こ
のような経口的な使用ばかりではなく、クリームの成分
と混合して医薬用軟膏あるいは化粧クリーム等のような
外用剤として用いることもできる。本発明の老化防止剤
は、一般的な製剤ばかりではなく、このような医薬品、
飲食品、飼料、餌料等の経口組成物、クリーム、軟膏等
の外用剤等をも老化防止剤という。

【００２０】そして、パーオキシダーゼの使用量は、症
状、性別、体重等によって異なるが成人男子１日当たり
約0.5 〜５ｇを１回乃至数回に分けて経口投与すること
が好ましい。

【００２１】老化防止剤の製造にあたってはラクトパー
オキシダーゼの酵素活性を失なわせないような殺菌処理
が必要である。殺菌は温和な状態での加熱が望ましい
が、特願平3-257010号で開示された方法、すなわち 0.1
モル以上の１価塩溶液中で殺菌する方法を用いると、パ
ーオキシダーゼの酵素活性の低下を防止して付着する微
生物を効率的に殺減することができる。

【００２２】また、抗酸化剤、特に脂溶性酸化防止剤、
例えばビタミンＥおよび／または、鉄イオンをキレート
するラクトフェリンなどをラクトパーオキシダーゼと共
に配合することはさらに望ましい。抗酸化剤としては、
エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム、dl−α−
トコフェロール（ビタミンＥ）等があるが、これらを用
いることもできる。しかし、特にビタミンＥが天然に存
在し毒性のない酸化防止効果を奏することから特に有用
である。その使用量は組成物中 0.001〜１％が望まし
い。

【００２３】ラクトパーオキシダーゼは生体内に発生し
た過酸化水素の除去に有効だと考えられるのに対し、ラ
クトフェリンは、ラジカル生成を触媒する鉄イオンを除
去するのに有効である。したがってラクトパーオキシダ
ーゼとラクトフェリンの両者を混在させることによって
老化防止剤の作用機作が広がり、その結果様々な過酸化
脂質生成要因に対して広範に効果を発揮することができ
る。ラクトフェリンの使用量も 0.1〜５重量％であるこ
とが望ましい。

【００２４】また、ラクトパーオキシダーゼ及びラクト
フェリンに加えて、ビタミンＥとを併用することによっ
て相乗的に生体内での過酸化脂質の生成を抑制すること
ができる。本発明では、好ましくは、ラクトパーオキシ
ダーゼの作用発現を妨害しないように鉄含量の少ない、
他の食品素材と組み合わせるのがよい。

【００２５】本発明者らは以下の試験例によって、ラク
トパーオキシダーゼの添加量を決定した。

【００２６】〔試験例１〕ラクトパーオキシダーゼによる鉄依存性過酸化脂質生成
の抑制シグマ社のリポソームキット（卵黄レシチン由来）に５
mlの20m ヘペス（Ｎ−[２−ヒドロキシエチル] ピペラ
ジンＮ′−[ ２−エタンスルホン酸] ）を含む生理食塩
水（pH8.2)を加え、超音波処理してリポソームを調製し
た。リポソーム 200μl, 80 μM のFeNH₄(SO⁴)₂溶液 1
00μl, 300μM のアスコルビン酸 100μl,ラクトパーオ
キシダーゼ溶液 100μl をフタ付き試験管に入れ、さら
に生理食塩水で全量を１mlに調整した。混合液を37℃で
１時間インキュベーション後生じた過酸化脂質をＴＢＡ
法〔Buege, J.A. and Aust. S.T.D. MethodsEnzymol.,
52, 302-310(1978)〕で測定した。過酸化脂質濃度はマ
ロンジアルデヒド（ＭＤＡ）相当量として表示した。

【００２７】結果を表１に示す。

【表１】 ──────────────────────────────── ラクトパーオキシダーゼ濃度過酸化脂質生成量抑制率（終濃度、mg／ml）（nmol）（％） ──────────────────────────────── 1.0 0.22 100.0 0.5 0.28 90.6 0.1 0.70 25.0 0.01 0.80 9.4 0 0.86 0 ──────────────────────────────── 鉄−アスコルビン酸不含のコントロール 0.22 （−） ────────────────────────────────

【００２８】この表にみられるように、0.1mg/mlのラク
トパーオキシダーゼは鉄−アスコルビン酸による過酸化
脂質生成を25％抑制した。1mg/mlのラクトパーオキシダ
ーゼは完全に抑制した。

【００２９】〔試験例２〕ラクトパーオキシダーゼ給餌ラットにおける血中過酸化
脂質生成抑制表２に示す組成の飼料を４週齢ＳＤ系雄ラット（日本ク
レア）５頭づつに与え、６週間飼育後、エーテル麻酔下
で心臓採血を行ない、血液中過酸化脂質濃度をＴＢＡ法
で測定した。結果を表３に示す。表３にみられるよう
に、試験食中に１％以上ラクトパーオキシダーゼを添加
した群では著しい血中過酸化脂質濃度の低下がみられ
た。

【００３０】

【表２】 ──────────────────────────────────── 標準食試験食 ──────────────────────────────────── カゼイン 25％ 25％トウモロコシ油 5 5 塩類混合物^* 4 4 ビタミン混合物^** 1 1 塩化コリン 0.2 0.2 ウシラクトパーオキシダーゼ ── 0.5, 1, 2, 4 しょ糖しょ糖で全量をしょ糖で全量を 100%とした 100%とした ──────────────────────────────────── ^* ミネラル混合物MM-2〔Ebihara et al. J. Nutr. 109, 2106 (1979)〕^** ハーパーの混合物〔Harper, J. Nutr., 68, 405 (1959)〕

【００３１】

【表３】 ───────────────────────────────── ラクトパーオキシダーゼ量血中過酸化脂質濃度（５頭の平均値）（％）（nmol／ml） ───────────────────────────────── 0 1.86 0.5 1.68 1 1.24 2 1.30 4 1.32 ─────────────────────────────────

【００３２】なお、試験食中の鉄含量は 38ppmであっ
た。試験例１及び２より、ラクトパーオキシダーゼ添加
量は 0.1〜５％が適当であると判断した。

【００３３】次に、本発明の実施例を示し、本発明をさ
らに具体的に説明する。

【００３４】

【実施例１】ラクトパーオキシダーゼ含有老化防止剤 (1) 粉末食品脱脂粉乳 960ｇにウシラクトパーオキシダーゼ粉末20
ｇ、ガラクトシルラクトース35％を含むオリゴ糖粉末20
ｇを混合し、粉末食品を調製した。鉄含量は5ppmであっ
た。

【００３５】(2) 飲料表４に示した配合比で混和した原料ミックスに水を加え
て全量を 100ｌとし、これをジャケット式タンクで65
℃、30分間加熱殺菌後、プラスチック無菌ブローボトル
に 160mlずつ充填した。鉄含量は１ppm であった。

【００３６】

【表４】 ─────────────────────── ショ糖 11kg 香料 100ｇ冷凍濃縮果汁（Ｂ×45） 12l ウシラクトパーオキシダーゼ 600ｇ dl−α−トコフェロール（１％、アルコール溶液） 50ml ──────────────────────

【００３７】(3) ヨーグルト水22.1ｇに脱脂粉乳 3.6ｇを溶解し、95℃で30分間加熱
殺菌保持後、37℃に冷却し、市販のL.bulgaricusおよび
S.thermophilus(いずれもハンセン社）の混合スタータ
ーを 0.3ｇ接種し、37℃で６時間培養した。この培養物
に対し、ラクトパーオキシダーゼおよびラクトフェリン
をそれぞれ２ｇづつ添加し、撹拌、冷却し、ヨーグルト
調製用乳酸菌スターターを得た。

【００３８】次に乳脂肪 3.5％に標準化した生乳（市販
牛乳)970ｇにビタミンＥ0.05ｇを添加し、90℃で10分間
加熱殺菌保持後、37℃に冷却し、先に調製した乳酸菌ス
ターターを30ｇ接種し、カップに充填後37℃で乳酸酸度
0.85％まで培養後直ちに冷却し、プレーンヨーグルトを
調製した。ヨーグルトの鉄含量は1.2ppmであった。

【００３９】(4) 化粧クリーム以下の表５に示される組成を混合乳化させてクリームを
調製した。

【表５】 ───────────────────────────── 多価アルコール脂肪酸エステル 10ｇ流動パラフィン 10ｇ１，３−ブチレングリコール 5ｇステアリン酸 5ｇグリセリン脂肪酸エステル 5ｇポリエチレングリコール脂肪酸エステル 2ｇベヘニルアルコール 1ｇメチルパラベン 0.1ｇブチルパラベン 0.1ｇラクトフェリン 100mg ラクトパーオキシダーゼ 100mg 脱イオン水全量を 100ｇに調整 ─────────────────────────────

【００４０】

【実施例２】製品投与試験実施例１-(2)で調製した飲料を、一群５頭のＳＤ系ラッ
ト（４週齢オス）に自由摂取させた。飼料は市販の飼料
（日本クレアCE-2）を与えた。６週間後の血中過酸化脂
質濃度を試験例２にしたがって測定した。その結果を表
６に示す。

【００４１】

【表６】 ────────────────────────── 飲料血中過酸化脂質濃度 (nmol／ml） ────────────────────────── 水 1.76 試験飲料 1.30 ──────────────────────────

【００４２】実施例１-(2)の飲料は、血中過酸化脂質を
低下させる効果があることが確認された。

【００４３】

【実施例３】製品投与試験実施例１-(1)で製造した粉末食品を表７に示すように飼
料に配合し、一群10頭のBALB／Ｃ系マウス（５週齢オ
ス）に与え、水、飼料を自由摂取させ、長期飼育して、
寿命を測定した。

【００４４】

【表７】 ────────────────────────────────── 標準食試験食（重量部）（重量部） ────────────────────────────────── 脱脂粉乳 30 ─ オリゴ糖粉末 0.6 ─ 実施例１-(1)の粉末 ─ 30 トウモロコシ油 3 3 塩類混合物（MM-2) 4 4 ハーバーのビタミン混合物 1 1 塩化コリン 0.2 0.2 しょ糖しょ糖で全量をしょ糖で全量を 100とした。 100とした。 ──────────────────────────────────

【００４５】この試験結果を表８に示す。試験食投与群
では寿命が著しく延長され、寿命延長効果があることが
確認された。

【表８】 ─────────────────── 平均寿命 ─────────────────── 標準食 596日試験食 625日 ───────────────────

【００４６】

【発明の効果】本発明の老化防止剤は、老化の原因とな
る過酸化脂質の生体内での生成を抑制し、寿命を延長さ
せ、老化防止する効果を奏するので高度の機能性組成物
として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 7/00 Ｈ 8615−4ＣＷ 8615−4Ｃ 7/48 9051−4Ｃ //(Ａ６１Ｋ 37/50 31:355） 7252−4Ｃ (Ａ６１Ｋ 37/50 31:375） 7252−4Ｃ (Ａ６１Ｋ 37/50 37:14） 8314−4Ｃ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】パーオキシダーゼを有効成分とすること
を特徴とする老化防止剤。
【請求項２】パーオキシダーゼがラクトパーオキシダ
ーゼである請求項１記載の老化防止剤。
【請求項３】パーオキシダーゼと抗酸化剤及び／また
はラクトフェリンとを有効成分とすることを特徴とする
老化防止剤。
【請求項４】抗酸化剤がビタミンＥまたはアスコルビ
ン酸である請求項３記載の老化防止剤。
【請求項５】請求項１〜４のいずれかにおいて、パー
オキシダーゼ含量が0.１〜５重量％である老化防止剤。
【請求項６】老化防止剤中の鉄イオン濃度が 50ppm以
下である請求項１〜４のいずれかに記載の老化防止剤。
【請求項７】経口組成物の形態をしている請求項１〜
６のいずれかに記載の老化防止剤。
【請求項８】外用剤の形態をしている請求項１〜６の
いずれかに記載の老化防止剤。