JPH0482863A - ｐ―ニトロベンジルアルコールマロン酸モノエステルの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、医薬品の製造原料であるＰ−ニトロベンジル
アルコールマロン酸モノエステルの製造法に関する。

従来の技術 Ｐ−ニトロヘンシルアルコールとマロン酸を酸触媒の存
在下加熱脱水反応させる化学的手法により目的とするモ
ノエステルが製造できる事は公知である。しかし、その
ような方法ではモノエステルと同時にジエステルが副生
ずる。実際に、Ｐ−ニトロヘンシルアルコールとマロン
酸のモル比をいろいろ変化させてみてもジエステルが相
当副生ずる事が判明した。

１例として、両者の比を１：１とした場合、目的とする
モノエステルとジエステルの生成割合は、６０：４０程
度であり、触媒、溶媒の種類、反応温度等の条件を変え
てもジエステルの生成を抑える事はできなかった。副生
ずるジエステルは、目的とするモノエステルの製品純度
を低下させるため完全に除去する必要がある。

副生ずるジエステルは、加水分解して、モノエステルと
するか、原料だけでも回収しないと工業的に不利である
。アルカリを用いる加水分解では、モノエステルの段階
で停止する事ができず原料にまで分解される。

酸触媒により、ジエステルを加水分解する場合、モノエ
ステルの収率は、約３０％であり、残りは原料にまで分
解される。

これら反応式でまとめると次の様になる。

発明が解決しようとする課題 本発明は、Ｐ−ニトロヘンシルアルコールとマロン酸の
ジエステルを効率良く加水分解し、目的とするモノエス
テルを製造する方法に関する。

課題を解決するための手段 本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を重ね
た結果、脂質分解酵素を用いることにより、ジエステル
をモノエステルに効率良く加水分解できる事を見出した
。即ち、本発明は、Ｐ−ニトロベンジルアルコールマロ
ン酸ジエステルを脂質分解酵素により加水分解すること
を特徴とするＰ−ニトロベンジルアルコールマロン酸モ
ノエステルの製造法を提供する。

ジエステルは水に対して極めて溶解が悪く、構造上の特
徴から酵素阻害も心配されたが、驚くべき事にほぼ定量
的にモノエステルを製造する事ができた。

本発明を実施するに当り、使用する酵素としては、生体
内で脂質分解の役目を荷っているリパーゼ、ホスホリパ
ーゼ、コレステロールエステラーゼ、スフィンゴミエリ
エーゼ、動物の臓器中に存在するエステラーゼ等をあげ
る事ができる。

これらの由来である生物としては、微生物、植物、動物
等特に限定はされない。

最近では、リパーゼについては、酵母、バクテリヤ、カ
ビ等の生産するものが工業的に入手できる様になった。

これらは、本発明の酵素として充分使用できる。これら
の例を一部下記に掲げる。

リパーゼＡＹ、リパーゼＡ１リパーゼＭ１リパーゼＤ、
リパーゼＧＣ１リパーゼＲ１リパーゼＬ１リパーゼＣＢ
、リパーゼＦ−ＡＰ−１５、リパーゼＰ、ニューラーゼ
Ｆ（以下天野製薬）、リパーゼＭＹ（泡糊産業）、リパ
ーゼ（サイケン）（大阪細菌研究所）、パラターゼ、リ
ボザイム（ノボ社）また、豚、或は馬のスイ臓や肝臓に
存在するエステラーゼも本発明の酵素として使用できる
。

本発明の酵素としては、工業的に安価に入手できるもの
が望ましいが、これらに限定されない。

反応の溶媒は水が好ましいが、有機溶媒と水の混合物も
使用できる。有機溶媒としては、ベンゼン、トルエン、
ｎ−ヘキサノ等のやや極性の低いものから、メタノール
、エタノール、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミド等の極性の高いものまで使用で
きるが、極性の高い溶媒の場合、酵素阻害を起場合があ
るので注意を要する。

反応方法としては、溶媒と、Ｐ−ニトロペンの ジルアルコールへマロン酸ヘジエステルと、酵素を仕込
み攪拌するだけでよいが、それらの使用量や濃度反応条
件等について以下に記述する。

溶媒は、ジエステルの１０〜４００倍（重量比、以下同
じ）使用するのがよく、そのうち水は、５〜２００倍量
とするのがよい。工業的には水は、１０倍から１００倍
とするのが最も良い。酵素の使用量は、ジエステルの０
．２％〜５％程度使用するのが最も良い。反応時はｐＨ
を３〜９程度に保つのがよい。これはバッファ溶液を用
いてもよいが、反応の進行に応じてコントロールする方
法でもかまわない。

反応の温度は、室温〜８０°Ｃ１特に、２０°Ｃ〜５０
°Ｃの範囲で行うのが良い結果を与える。

反応時間は、酵素によって１２時間〜５日ぐらいを要す
る場合もある。

反応終了後は、分解して回収されるＰ−二ｌ・ロベンジ
ルアルコールを有ＩＩ　？ｔｊ媒で抽出したり、結晶化
して濾過する事によって分離し、その後、塩として水に
溶解しているＰ−ニトロベンジルアルコールのマロン酸
モノエステルｔ　酸析マタは、カルシウム、マグネシウ
ム等の不溶性塩を形成させる事によって取り出す事がで
きる。

本発明の応用として、化学的方法によりモノエステルと
ジエステルの６０：４０の混合物を合成し、然る後に本
発明の製法により水と酵素を加えて、加水分解しモノエ
ステルと原料のＰニトロヘンシルアルコールを得るプロ
セスも可能である。脂質分解酵素によるジエステルか微
量である。反応の進行状況、目的物の純度はＨＰＬＣに
よって知ることが出来る。次に実施例により説明する。

実施例１ ガラス製のビンにマグネチックスクーラーの攪拌子ヲ入
れＰ−ニトロベンジルアルコールマロン酸ジエステルを
０．３ｇ、水２０成、リパーゼＭＹ（泡糊産業）を０．
０３ｇ、ＫＨ□ＰＯ４０，４ｇ、に２ＨＰＯ４０，Ｇｇ
を仕込み２０〜２５°Ｃで２日間攪拌した。反応終了後
ＨＰＬＣ分析によりＰ−ニトロヘンシルアルコールとＰ
−ニトロベンジルアルコールマロン酸モノエステルが収
率９５％で、生成している事を確認した。これより８　
ｍｌのトルエンを加えＰ−二トロヘンジルアルコールを
抽出して除き水層に塩酸を加えて酸析した。５°Ｃに冷
却し、沈澱している結晶を濾過乾燥して０．１５ｇのＰ
−ニトロベンジルアルコールマロン酸モノエステルを得
た。収率は７９％であり、ＨＰ　Ｌ　Ｃによる純度は９
９．７％であった。

このものは融点が９９〜１００°Ｃであり、ＮＭＲ，Ｊ
Ｒスペクトルが標品と一致し、構造確認された。濾液を
ＨＰＬＣにて分析したところ０．０３ｇのモノエステル
が含まれており、合計の収率ば９５％であった。

実施例２〜６ 酵素の種類を変えて、実施例１と同じ様に反応を行い次
の結果を得た。ジエステルが消失するまで反応させた。

実施例７ ガラス製のネジ付ビンにマグネチソクスクーラーの攪拌
子を入れ、Ｐ−ニトロベンジルアルコの −ルＮマロン酸墾ジエステルを０．３ｇ水２０成トルエ
ン１０戚リパーゼＦ−ＡＰ−１５（天野製薬）を０．０
５ｇ仕込み３０°Ｃにて、加水分解を行った。

ＰＨは、３Ｎ−ＫＯＨ水溶液で６．５〜７．５に保ち、
３日間反応させた。ＨＰＬＣにより分析し、モノエステ
ルが０．１８ｇ存在している事を確認した。水層を分離
して取り、ＭｇＣｌ□を加える事により、Ｐ−ニトロヘ
ンシルアルコールのマロン酸モノエステルのＭｇ塩 の沈澱を生成させた。

この沈澱を濾過、乾燥したところ０．１４ｇであり、収
率は６５％であった。トルエン層と濃縮乾固し、更に乾
燥して０．１３ｇの結晶を得た。これをＨＰＬＣ分析し
たところ、Ｐ−ニトロヘンシルアルコール８５．７％、
Ｐ−ニトロヘンシルアルコールのマロン酸ジエステルが
１４．３％含まれていた。ジエステルの反応率は９３゜
７％、モノエステルへの選択率は９０％であった。

〔発明の効果〕

Ｐ−ニトロヘンシルアルコール奏マロン酸慢ジエステル
から酵素による部分加水分解により、Ｐ−二ｌ・ロヘン
ジルアルコールとマロン酸へモノエステルが効率よく合
成できる様になった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、Ｐ−ニトロベンジルアルコールマロン酸ジエステル
   を脂質分解酵素により、加水分解することを特徴とする
   Ｐ−ニトロベンジルアルコールマロン酸モノエステル製
   造法