JPH0463593A - ワモンゴキブリ由来のリポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体のクローン化ｄｎａ、その断片、これらの調製法並びに該クローン化ｄｎａ又は断片が組み込まれたプラスミド - Google Patents
ワモンゴキブリ由来のリポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体のクローン化ｄｎａ、その断片、これらの調製法並びに該クローン化ｄｎａ又は断片が組み込まれたプラスミドInfo
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- JPH0463593A JPH0463593A JP17517490A JP17517490A JPH0463593A JP H0463593 A JPH0463593 A JP H0463593A JP 17517490 A JP17517490 A JP 17517490A JP 17517490 A JP17517490 A JP 17517490A JP H0463593 A JPH0463593 A JP H0463593A
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性
レクチン様物質前駆体のクローン化ＤＮＡ、その断片、
これらの調製法ならびに上記のクローン化ＤＮＡ又は断
片が組み込まれたプラスミドに係る。
レクチン様物質前駆体のクローン化ＤＮＡ、その断片、
これらの調製法ならびに上記のクローン化ＤＮＡ又は断
片が組み込まれたプラスミドに係る。
（従来の技術）
ワモンゴキブリのりボボリサッカライド結合性レクチン
様物質は、本発明者等によりワモンゴキブリの体液から
初めて単離された物質であって、レクチンの一種である
（特開平２−８８５９９）。
様物質は、本発明者等によりワモンゴキブリの体液から
初めて単離された物質であって、レクチンの一種である
（特開平２−８８５９９）。
ワモンゴキブリのりボポリサッカライド結合性レクチン
様物質は分子量的２８０００の構成単位を宵しており、
平均分子量は約４５００００である。ワモンゴキブリの
りボポリサッカライド結合性レクチン様物質の性質とし
てはり、 Ｌ−フコース、Ｄ−グルコース及びＤ−ガラ
クトース等の単糖類に特異性があり、更に大腸菌のりポ
ポリサッカライドの糖鎖に対して強い親和性を示すこと
が知られている。
様物質は分子量的２８０００の構成単位を宵しており、
平均分子量は約４５００００である。ワモンゴキブリの
りボポリサッカライド結合性レクチン様物質の性質とし
てはり、 Ｌ−フコース、Ｄ−グルコース及びＤ−ガラ
クトース等の単糖類に特異性があり、更に大腸菌のりポ
ポリサッカライドの糖鎖に対して強い親和性を示すこと
が知られている。
従ってワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性レ
クチン様物質のこれらの性質を利用しての用途としては
種々のものが考えられるが、例えば医薬品製造過程で混
入したりポポリサッカライドの除去や細菌の分離に利用
することができ、又リポポリサッカライドの定量試薬と
しても有用であると考えられる。
クチン様物質のこれらの性質を利用しての用途としては
種々のものが考えられるが、例えば医薬品製造過程で混
入したりポポリサッカライドの除去や細菌の分離に利用
することができ、又リポポリサッカライドの定量試薬と
しても有用であると考えられる。
（発明が解決しようとする課題乃至発明の目的）従来技
術によるワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性
レクチン様物質はワモンゴキブリの体液より分離精製す
ることにより得られており、従って廉価に且つ大量に生
産することが困難である点に課題があった。
術によるワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性
レクチン様物質はワモンゴキブリの体液より分離精製す
ることにより得られており、従って廉価に且つ大量に生
産することが困難である点に課題があった。
それ故に、本発明が解決しようとする基本的課題は、所
謂「バイオテクノロジー」を応用してワモンゴキブリの
りボボリサッカライド結合性レクチン様物質及びその関
連物質の工業的生産方法にアプローチすることにある。
謂「バイオテクノロジー」を応用してワモンゴキブリの
りボボリサッカライド結合性レクチン様物質及びその関
連物質の工業的生産方法にアプローチすることにある。
本発明の主たる目的は、ワモンゴキブリのリポポリサッ
カライド結合性レクチン様物質前駆体を含むそのクロー
ン化ＤＮＡ及びその断片を提供することにある。
カライド結合性レクチン様物質前駆体を含むそのクロー
ン化ＤＮＡ及びその断片を提供することにある。
本発明の付随的目的は、ワモンゴキブリのりポポリサッ
カライド結合性レクチン様物質前駆体を含むそのクロー
ン化ＤＮＡ及びその断片を調製する方法を提供すること
にある。
カライド結合性レクチン様物質前駆体を含むそのクロー
ン化ＤＮＡ及びその断片を調製する方法を提供すること
にある。
本発明の他の付随的目的は、ワモンゴキブリのりポポリ
サッカライド結合性レクチン様物質前駆体を含むそのク
ローン化ＤＮＡ及びその断片、たとえばワモンゴキブリ
のりポポリサッカライド結合性レクチン様物質それ自体
を微生物または動物細胞において発現させ大量生産する
ために、上記のＤＮＡ又は断片の組み込まれたプラスミ
ドを提供することにある。
サッカライド結合性レクチン様物質前駆体を含むそのク
ローン化ＤＮＡ及びその断片、たとえばワモンゴキブリ
のりポポリサッカライド結合性レクチン様物質それ自体
を微生物または動物細胞において発現させ大量生産する
ために、上記のＤＮＡ又は断片の組み込まれたプラスミ
ドを提供することにある。
（課題を解決し、目的を達成するための手段及び作用）
本発明者等は鋭意研究の結果、ワモンゴキブリのりボボ
リサッカライド結合性レクチン様物質前駆体ＤＮＡのク
ローン化に初めて成功し、その構造決定をなし、これに
よって上記の基本的課題を解決するに至ったのである。
リサッカライド結合性レクチン様物質前駆体ＤＮＡのク
ローン化に初めて成功し、その構造決定をなし、これに
よって上記の基本的課題を解決するに至ったのである。
即ち、本発明によれば、既述の基本的課題はワモンゴキ
ブリのリポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆
体のアミノ酸配列をコードしている約７７０個のデオキ
シリボヌクレオチドを含むクローン化−木蓋ＤＮＡ又は
この一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡとからなるクローン化二
本鎖ＤＮＡにより解決されるのである。
ブリのリポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆
体のアミノ酸配列をコードしている約７７０個のデオキ
シリボヌクレオチドを含むクローン化−木蓋ＤＮＡ又は
この一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡとからなるクローン化二
本鎖ＤＮＡにより解決されるのである。
本発明によるこのクローン化ＤＮＡは、式５式％
（式中においてＡｌＣ，Ｇ及びＴは、それぞれアデニン
、シトシン、グアニン及びチミン塩基を有するデオキシ
リボヌクレオチドを意味し且つ上記の式はアミノ酸に対
応するコドン毎の配列として示されている） にて示されるヌクレオチド配列またはこれと生物学的に
同等のヌクレオチド配列を有している。ここで、生物学
的に同等のヌクレオチド配列とは、例えば２つのコドン
ｒ ＴＴＡＪとｒｃＴＧＪにおけるようにコドンを構成
するヌクレオチドの種類や配置が異なるにも拘らず同一
のアミノ酸（この場合は「ロイシン （Ｌｅｕ）Ｊ ）
を指定するようなヌクレオチド配列を意味しており、従
って上記のヌクレオチド配列式にて示されるアミノ酸配
列、即ちＭｅｔ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ａ
ｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−ＬｅｕＳｅｒ４ａｌ
−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａ ｌａ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ
−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−
１１ｅ−Ｐｒｏ−１１ｅ−１ｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｐ
ｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｐｒ。
、シトシン、グアニン及びチミン塩基を有するデオキシ
リボヌクレオチドを意味し且つ上記の式はアミノ酸に対
応するコドン毎の配列として示されている） にて示されるヌクレオチド配列またはこれと生物学的に
同等のヌクレオチド配列を有している。ここで、生物学
的に同等のヌクレオチド配列とは、例えば２つのコドン
ｒ ＴＴＡＪとｒｃＴＧＪにおけるようにコドンを構成
するヌクレオチドの種類や配置が異なるにも拘らず同一
のアミノ酸（この場合は「ロイシン （Ｌｅｕ）Ｊ ）
を指定するようなヌクレオチド配列を意味しており、従
って上記のヌクレオチド配列式にて示されるアミノ酸配
列、即ちＭｅｔ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ａ
ｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−ＬｅｕＳｅｒ４ａｌ
−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａ ｌａ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ
−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−
１１ｅ−Ｐｒｏ−１１ｅ−１ｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｐ
ｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｐｒ。
１１ｅ−Ａ １ａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−Ａｓｐ−
Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒｌ １ｅ−Ｔｈｒ−Ｓ
ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇ
１ｙ−）１１ｓ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｖ
ａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｌｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｕ−）１１ｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−５ｅｒ−ＣＩｙ−５ｅ
ｒ−Ａｓｎ−Ｃｌｎ−Ｈｌｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｐ
−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−ＧＩｎ−ｖａ！−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ４ａｌ
−Ｇｌｎ−１１ｅ−１１ｅ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−１１ｅ−
Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａ
１ａ−Ａ １ａ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−
Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａ
ｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙ
ｓ−Ｐｈｅ−Ｈｌｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ
−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−
１１ｅ−１１ｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇ １ｕ−
Ｇ １ｙ−Ｇ １ｙ−ＨＩｓ−Ｌｅｕ−Ｖａ ｌ −＋
１ｅ−１１ｅ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｃ１ｕ−Ａｓｐ−Ｇ
ｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓ
ｎ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ
−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇ １ｕ−Ｇ １ｙ−Ａ １ａ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−＋１ｅ−Ｐｈ
ｅ−１１ｅ−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｈｌｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ４ａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−１
１ｅＴｂｒ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−ＴｈｒＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｔ
ｈｒ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−１１
ｅ−（ｉｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｇ ｌ
ｙ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｈ１ｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｇ １
ｙ−Ｇ １ｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｐｒ
ｏ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
−ＰｈｅＶａｌ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ４ａｌ−Ｇｌｕ−Ｌｅ
ｕト同一のアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド
配列を意味している。
Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒｌ １ｅ−Ｔｈｒ−Ｓ
ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇ
１ｙ−）１１ｓ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｖ
ａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｌｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｕ−）１１ｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−５ｅｒ−ＣＩｙ−５ｅ
ｒ−Ａｓｎ−Ｃｌｎ−Ｈｌｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｓｐ
−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−ＧＩｎ−ｖａ！−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ４ａｌ
−Ｇｌｎ−１１ｅ−１１ｅ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−１１ｅ−
Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａ
１ａ−Ａ １ａ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−
Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａ
ｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙ
ｓ−Ｐｈｅ−Ｈｌｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ
−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−
１１ｅ−１１ｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇ １ｕ−
Ｇ １ｙ−Ｇ １ｙ−ＨＩｓ−Ｌｅｕ−Ｖａ ｌ −＋
１ｅ−１１ｅ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｃ１ｕ−Ａｓｐ−Ｇ
ｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓ
ｎ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ
−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇ １ｕ−Ｇ １ｙ−Ａ １ａ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−＋１ｅ−Ｐｈ
ｅ−１１ｅ−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｈｌｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ４ａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−１
１ｅＴｂｒ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−ＴｈｒＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｔ
ｈｒ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−１１
ｅ−（ｉｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｇ ｌ
ｙ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｈ１ｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｇ １
ｙ−Ｇ １ｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｐｒ
ｏ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
−ＰｈｅＶａｌ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ４ａｌ−Ｇｌｕ−Ｌｅ
ｕト同一のアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド
配列を意味している。
上記のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を有している
ワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性レクチン
様物質前駆体のＤＮＡによれば、ワモンゴキブリのりポ
ポリサッカライド結合性レクチン様物質は開始コドンで
あるＡＴＧが指定するメチオニン （Ｎｅｔ）残基から
数えて３４−２５１１ｉ番目の領域にコードされている
。尚、Ｍｅｔから始まりＡｒｇ迄の最初の３３個のアミ
ノ酸はその構造に鑑みて分泌に関与するシグナルペプチ
ド （Ｓ）に相当するものと考えられる。
ワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性レクチン
様物質前駆体のＤＮＡによれば、ワモンゴキブリのりポ
ポリサッカライド結合性レクチン様物質は開始コドンで
あるＡＴＧが指定するメチオニン （Ｎｅｔ）残基から
数えて３４−２５１１ｉ番目の領域にコードされている
。尚、Ｍｅｔから始まりＡｒｇ迄の最初の３３個のアミ
ノ酸はその構造に鑑みて分泌に関与するシグナルペプチ
ド （Ｓ）に相当するものと考えられる。
本発明方法によれば、ワモンゴキブリのりボボリサッカ
ライド結合性レクチン様物質を含むクローン化二本鎖Ｄ
ＮＡはワモンゴキブリ脂肪体のＲＮＡをｐｏｌｙ（Ａ）
ＲＮＡに変じ、このｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡとベクタプラ
イマＤＮＡとを用いｃＤＮＡライブラリを作製して大腸
菌株の形質転換を行い、一方既知のワモンゴキブリのＮ
末端アミノ酸配列における５から １１番目の配列であ
る Ｇ １ｕ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ａ １ａ−Ａｓｐ
−Ｐｒ。
ライド結合性レクチン様物質を含むクローン化二本鎖Ｄ
ＮＡはワモンゴキブリ脂肪体のＲＮＡをｐｏｌｙ（Ａ）
ＲＮＡに変じ、このｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡとベクタプラ
イマＤＮＡとを用いｃＤＮＡライブラリを作製して大腸
菌株の形質転換を行い、一方既知のワモンゴキブリのＮ
末端アミノ酸配列における５から １１番目の配列であ
る Ｇ １ｕ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ａ １ａ−Ａｓｐ
−Ｐｒ。
に相当するｍＲＮＡと相補的な式
（式中、■はイノシンを意味し、ＡＸＧ、 Ｔ及びＣの
全ての可能性があるデオキシリボヌクレオチドの部位に
用いられた） にて示される２０個のデオキシリボヌクレオチドからな
る２４種類の混合物を予め調製しておき、上記の式（Ａ
）にて示される各合成オリゴデオキシリボヌクレオチド
の５”末端に標識を施し、これをプローベとし上記の形
質転換細胞をハイブリダイゼーションによるスクリーニ
ングに付してハイブリダイズするポジティブクローンを
得ることにより調製することができる。
全ての可能性があるデオキシリボヌクレオチドの部位に
用いられた） にて示される２０個のデオキシリボヌクレオチドからな
る２４種類の混合物を予め調製しておき、上記の式（Ａ
）にて示される各合成オリゴデオキシリボヌクレオチド
の５”末端に標識を施し、これをプローベとし上記の形
質転換細胞をハイブリダイゼーションによるスクリーニ
ングに付してハイブリダイズするポジティブクローンを
得ることにより調製することができる。
上記においてブローベとしての各オリゴデオキシリボヌ
クレオチド （Ａ）に関してはワモンゴキブリのりボポ
リサッカライド結合性レクチン様物質のＮ末端アミノ酸
配列における５−１１番目のデオキシリボヌクレオチド
配列に相当するものが選択され、又イノシンがＡｌＧｌ
Ｔ及びＣの全ての可能性がある部位に用いられた理由は
、これらのアミノ酸配列に対応するオリゴデオキシリボ
ヌクレオチドの種類をできる限り少なくして、合成の手
間を軽減するためである。
クレオチド （Ａ）に関してはワモンゴキブリのりボポ
リサッカライド結合性レクチン様物質のＮ末端アミノ酸
配列における５−１１番目のデオキシリボヌクレオチド
配列に相当するものが選択され、又イノシンがＡｌＧｌ
Ｔ及びＣの全ての可能性がある部位に用いられた理由は
、これらのアミノ酸配列に対応するオリゴデオキシリボ
ヌクレオチドの種類をできる限り少なくして、合成の手
間を軽減するためである。
ワモンゴキブリのリポポリサッカライド結合性レクチン
様物質を含むクローン化−本鎖ＤＮＡは、得られた上記
のクローン化二本鎖ＤＮＡを自体公知の方法で分離させ
ることにより、例えば９０℃で約３分間処理し、次いで
氷冷することにより調製することができる。
様物質を含むクローン化−本鎖ＤＮＡは、得られた上記
のクローン化二本鎖ＤＮＡを自体公知の方法で分離させ
ることにより、例えば９０℃で約３分間処理し、次いで
氷冷することにより調製することができる。
上記クローン化−本鎖又は二本鎖のワモンゴキブリのり
ボボリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体を含む
ＤＮＡは自体周知の手法を用いて、例えば適当な制限酵
素を用い断片化し、接合し、又これによって作製できな
かった部分については自体周知の方法で合成して前記の
接合断片に接合することによりワモンゴキブリのりポポ
リサッカライド結合性レクチン様物質領域のみからなる
ＤＮＡ断片となすことができる。
ボボリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体を含む
ＤＮＡは自体周知の手法を用いて、例えば適当な制限酵
素を用い断片化し、接合し、又これによって作製できな
かった部分については自体周知の方法で合成して前記の
接合断片に接合することによりワモンゴキブリのりポポ
リサッカライド結合性レクチン様物質領域のみからなる
ＤＮＡ断片となすことができる。
尚、上記クローン化二本鎖のワモンゴキブリのりボボリ
サッカライド結合性レクチン様物質前駆体を含むＤＮＡ
又はその断片は自体公知の手法を用いてプラスミドに組
み込むことができる。即ち、例えば大腸菌からプラスミ
ドを取り出して精製し、このプラスミドに制限酵素をを
作用させて特定の塩基位置でプラスミドを切断し、上記
のワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性レクチ
ン様物質前駆体を含むＤＮＡ又はその断片をＤＮＡ Ｉ
Ｊガーゼにより結合させることによりプラスミドに組み
込み、これによって遺伝子組換えプラスミドとすること
ができる。
サッカライド結合性レクチン様物質前駆体を含むＤＮＡ
又はその断片は自体公知の手法を用いてプラスミドに組
み込むことができる。即ち、例えば大腸菌からプラスミ
ドを取り出して精製し、このプラスミドに制限酵素をを
作用させて特定の塩基位置でプラスミドを切断し、上記
のワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性レクチ
ン様物質前駆体を含むＤＮＡ又はその断片をＤＮＡ Ｉ
Ｊガーゼにより結合させることによりプラスミドに組み
込み、これによって遺伝子組換えプラスミドとすること
ができる。
（発明の効果）
本発明によるワモンゴキブリのりポポリサッカライド結
合性レクチン様物質前駆体を含む二本鎖ＤＮＡ又はその
断片を組み込んだプラスミドを微生物又は動物細胞に取
り込ませて培養することによリワモンゴキブリのりボボ
リサッカライド結合性レクチン様物質前駆体又はワモン
ゴキブリのりボポリサッカライド結合性レクチン様物質
自体を大量に発現させることができる。
合性レクチン様物質前駆体を含む二本鎖ＤＮＡ又はその
断片を組み込んだプラスミドを微生物又は動物細胞に取
り込ませて培養することによリワモンゴキブリのりボボ
リサッカライド結合性レクチン様物質前駆体又はワモン
ゴキブリのりボポリサッカライド結合性レクチン様物質
自体を大量に発現させることができる。
従って、本発明は上記のレクチン様物質及びその前駆体
の工業的な生産の途を開き、これらの−殻内な利用を可
能にすると云う効果を存している。
の工業的な生産の途を開き、これらの−殻内な利用を可
能にすると云う効果を存している。
（実施例等）
次に、製造例及び構造決定のための試験例に関連して本
発明を更に詳細に且つ具体的に説明する。
発明を更に詳細に且つ具体的に説明する。
髪り叢」
（ａ）ワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性レ
クチン様物質のｉ＋ＲＮＡを含むｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡ
の調製 ワモンゴキブリの脂肪体を原料とし、チルブライン等の
方法［”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”第１８巻第５２９
４−５２９９頁（１９７９年）コに準じ４Ｍ−グアニジ
ニウムチオシアネートにより全ＲＮＡ （０，９ｍｇ）
を抽出し、０．５Ｍ ＫＣＩを含有する１０ｍＭ ）リ
ス塩酸バッファを用いてオリゴｄＴセルロースに結合さ
せ、次にＫＣｌを含有しないバッファで溶出させること
によってｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡを約５６μｇ得た。
クチン様物質のｉ＋ＲＮＡを含むｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡ
の調製 ワモンゴキブリの脂肪体を原料とし、チルブライン等の
方法［”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”第１８巻第５２９
４−５２９９頁（１９７９年）コに準じ４Ｍ−グアニジ
ニウムチオシアネートにより全ＲＮＡ （０，９ｍｇ）
を抽出し、０．５Ｍ ＫＣＩを含有する１０ｍＭ ）リ
ス塩酸バッファを用いてオリゴｄＴセルロースに結合さ
せ、次にＫＣｌを含有しないバッファで溶出させること
によってｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡを約５６μｇ得た。
（ｂ）ワモンゴキブリのりポボリサソカライド結合性レ
クチン様物質のアミノ酸配列に相当するｍＲＮＡと相補
的なりＮＡの合成 ワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性蛋白に関
して既知のアミノ酸配列におけるＮ末端から５−１１番
目の配列である Ｇ １ｕ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ａ １ａ−Ａｓｐ
−Ｐｒ。
クチン様物質のアミノ酸配列に相当するｍＲＮＡと相補
的なりＮＡの合成 ワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性蛋白に関
して既知のアミノ酸配列におけるＮ末端から５−１１番
目の配列である Ｇ １ｕ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ａ １ａ−Ａｓｐ
−Ｐｒ。
に相当するｍＲＮＡと相補的な式
（式中、■はイノシンを意味し、Ａ、 ＧｌＴ及びＣの
全ての可能性があるデオキシリボヌクレオチドの部位に
用いられた） にて示される２０個のデオキシリボヌクレオチドからな
る２４種類の混合物を予め調製した。これら２４種類の
各合成オリゴデオキシリボヌクレオチドは可能性がある
アミノ酸配列を全て網羅している。尚、これらの各オリ
ゴデオキシリボヌクレオチドの調製は、アプライドバイ
オシステムズ社製のＤＮＡ合成装置（型式： ３８１Ａ
）を用いて行われた。
全ての可能性があるデオキシリボヌクレオチドの部位に
用いられた） にて示される２０個のデオキシリボヌクレオチドからな
る２４種類の混合物を予め調製した。これら２４種類の
各合成オリゴデオキシリボヌクレオチドは可能性がある
アミノ酸配列を全て網羅している。尚、これらの各オリ
ゴデオキシリボヌクレオチドの調製は、アプライドバイ
オシステムズ社製のＤＮＡ合成装置（型式： ３８１Ａ
）を用いて行われた。
（ｃ） ｃＤＮＡライブラリの作製
Ｏｋａｙａｍａ −Ｂｅｒｇの方法［”Ｍｏｌ 、 Ｃ
ｅ１１． Ｂｌｏ、”第２巻第１ＧＩ −１７０頁（１
９８２年）］に従って約３５μｇの上記ｐｏｌｙ（Ａ）
ＲＮＡと４．３μｇのベクタプライマＤＮＡとを用いて
ｃＤＮＡ （プラスミド）を合成し、モリソン等の方法
［”Ｍｅｔｈｏｄｓ ＩｎＥｎｚｙＩＩｉｏ＋、”第６
８巻第３２１１ｉ −３３１頁（１９７９年）コに従っ
て大腸菌（ＨＢ １０１株）の形質転換を行った。
ｅ１１． Ｂｌｏ、”第２巻第１ＧＩ −１７０頁（１
９８２年）］に従って約３５μｇの上記ｐｏｌｙ（Ａ）
ＲＮＡと４．３μｇのベクタプライマＤＮＡとを用いて
ｃＤＮＡ （プラスミド）を合成し、モリソン等の方法
［”Ｍｅｔｈｏｄｓ ＩｎＥｎｚｙＩＩｉｏ＋、”第６
８巻第３２１１ｉ −３３１頁（１９７９年）コに従っ
て大腸菌（ＨＢ １０１株）の形質転換を行った。
５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを含有するＬＢ−寒天培
地を用いて形質転換細胞をスクリーニングした処、アン
ピシリン耐性を示す形質転換細胞がｌμｇのｐｏｌｙ（
Ａ）ＲＮＡ当り約９０００個、計約３２万個得られた。
地を用いて形質転換細胞をスクリーニングした処、アン
ピシリン耐性を示す形質転換細胞がｌμｇのｐｏｌｙ（
Ａ）ＲＮＡ当り約９０００個、計約３２万個得られた。
（ｄ）クローニング
クローニングはＧｅｎｅ”第１θ巻第Ｅｉ３−１１ｉ７
頁（１９８０年）に記載の方法に従って行われた。
頁（１９８０年）に記載の方法に従って行われた。
即ち、上記の（Ｃ）項に記載の方法により得られ、アン
ピシリン耐性を示す約３２万個の形質転換細胞の内で約
６万個の形質転換細胞を対象としてニトロセルロースフ
ィルタにレプリカシ、５０μｇ／ｍ ｌのアンピシリン
を含有する寒天プレートで３−４時間培養した後に、さ
らに、５００μｇ／ｍｌのクロラムフェニコールを含有
するＬＢ−寒天プレートに移し ３７°Ｃで一夜培養し
た。
ピシリン耐性を示す約３２万個の形質転換細胞の内で約
６万個の形質転換細胞を対象としてニトロセルロースフ
ィルタにレプリカシ、５０μｇ／ｍ ｌのアンピシリン
を含有する寒天プレートで３−４時間培養した後に、さ
らに、５００μｇ／ｍｌのクロラムフェニコールを含有
するＬＢ−寒天プレートに移し ３７°Ｃで一夜培養し
た。
フィルタ上に生じたコロニーを０．５Ｎ ＮａＯＨによ
りフィルタに固定した後に中和してｐＨ７，５となし、
次いで１．５Ｍ ＮａＣ１を含有するトリス塩酸バッフ
ァ （ｐＨ７，５）に上記のフィルタを浸漬して菌体の
カスを除去した。その後にフィルタを風乾し、８０°Ｃ
で２時間ベーキングしてスクリーニング用の被験フィル
タとした。
りフィルタに固定した後に中和してｐＨ７，５となし、
次いで１．５Ｍ ＮａＣ１を含有するトリス塩酸バッフ
ァ （ｐＨ７，５）に上記のフィルタを浸漬して菌体の
カスを除去した。その後にフィルタを風乾し、８０°Ｃ
で２時間ベーキングしてスクリーニング用の被験フィル
タとした。
一方、形質転換細胞のスクリーニングはグルンシュタイ
ン等の方法［”Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、
Ｓｃｌ。
ン等の方法［”Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、
Ｓｃｌ。
ＵＳＡ”第７２巻第３９６１−３９Ｅｉ５頁（１９７５
年）に準じて下記のように行なわれた。
年）に準じて下記のように行なわれた。
即ち、上記（ｂ）項に記載の方法で合成され且つ式（Ａ
）で示される各オリゴデオキシリボヌクレオチドの５′
末端に［γ−３２ｐコＡＴＰとＴ４キナーゼで標識を施
してスクリーニング用のプローベとなした。これらの各
オリゴデオキシリボヌクレオチドの比活性は １−２
ｘ １０’ ｃｐｍ／ｐｍｏｌであった。
）で示される各オリゴデオキシリボヌクレオチドの５′
末端に［γ−３２ｐコＡＴＰとＴ４キナーゼで標識を施
してスクリーニング用のプローベとなした。これらの各
オリゴデオキシリボヌクレオチドの比活性は １−２
ｘ １０’ ｃｐｍ／ｐｍｏｌであった。
既述の被験フィルタ上の形質転換細胞を、これらのブロ
ーベにて５０℃でのハイブリダイゼーシｅンによりスク
リーニングし、オートラジオグラムでの感光により判定
した処、約６万個の形質転換細胞の内で４個のハイブリ
ダイズするポジティブクローンを得た。
ーベにて５０℃でのハイブリダイゼーシｅンによりスク
リーニングし、オートラジオグラムでの感光により判定
した処、約６万個の形質転換細胞の内で４個のハイブリ
ダイズするポジティブクローンを得た。
このポジティブクローン、即ちワモンゴキブリのりボポ
リサッカライド結合性レクチン様物質前駆体含有クロー
ンを電気泳動により解析した結果。
リサッカライド結合性レクチン様物質前駆体含有クロー
ンを電気泳動により解析した結果。
ｐｏｌｙ（ｄＡ）（ｄＴ）及びｐｏｌｙ（ｄＧ（ｄＣ）
のテイル部分を含み約２３００ｂｐのｃＤＮＡ挿入部位
を含んでいることが判明した。このｃＤＮＡは二本鎖Ｄ
ＮＡであり、後記の試験例において示されているように
、塩基配列が解明されたので、適当な制限酵素を用いる
ことにより、又一部合成したＤＮＡを用いることにより
ワモンゴキブリのりボポリサッカライド結合性レクチン
様物質前駆体部分またはワモンゴキブリのりボボリサッ
カライド結合性レクチン様物質部分からなるＤＮＡ断片
となすことができる。尚、このような二本鎖ＤＮＡ及び
二本鎖ＤＮＡ断片を９０°Ｃで約３分間処理し、次いで
氷冷すれば分離して一本鎖のものとなる。
のテイル部分を含み約２３００ｂｐのｃＤＮＡ挿入部位
を含んでいることが判明した。このｃＤＮＡは二本鎖Ｄ
ＮＡであり、後記の試験例において示されているように
、塩基配列が解明されたので、適当な制限酵素を用いる
ことにより、又一部合成したＤＮＡを用いることにより
ワモンゴキブリのりボポリサッカライド結合性レクチン
様物質前駆体部分またはワモンゴキブリのりボボリサッ
カライド結合性レクチン様物質部分からなるＤＮＡ断片
となすことができる。尚、このような二本鎖ＤＮＡ及び
二本鎖ＤＮＡ断片を９０°Ｃで約３分間処理し、次いで
氷冷すれば分離して一本鎖のものとなる。
跋験Ｌ
（クローン化ワモンゴキブリのりボボリサッカライド結
合性レクチン様物質前駆体の塩基配列決定及び相当する
アミノ酸配列） クローン化ワモンゴキブリのリポポリサッカライド結合
性レクチン様物質のｃＤＮＡ挿入部位の塩基配列決定は
、先ずクローン化ワモンゴキブリのりボポリサッカライ
ド結合性レクチン様物質前駆体を制限酵素で切断した断
片をｐＵｃｌ １Ｂにサブクローニングし、その後デレ
ーションミュータントを作製し変性プラスミドを用いる
版部等のダイデオキシ法［”Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ、”第１５２巻第２３２２３８頁（１９８［ｉ年）に
従って行った。
合性レクチン様物質前駆体の塩基配列決定及び相当する
アミノ酸配列） クローン化ワモンゴキブリのリポポリサッカライド結合
性レクチン様物質のｃＤＮＡ挿入部位の塩基配列決定は
、先ずクローン化ワモンゴキブリのりボポリサッカライ
ド結合性レクチン様物質前駆体を制限酵素で切断した断
片をｐＵｃｌ １Ｂにサブクローニングし、その後デレ
ーションミュータントを作製し変性プラスミドを用いる
版部等のダイデオキシ法［”Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ、”第１５２巻第２３２２３８頁（１９８［ｉ年）に
従って行った。
第１図にはワモンゴキブリのリボボリサ１．カライド結
合性レクチン様物質前駆体含有クローンのｃＤＮＡ領域
と、塩基配列決定に用いられた制限酵素と、塩基配列決
定のためのストラテジーとが示されている。最上段の数
字は、中段において枠で仕切られたワモンゴキブリのリ
ポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体領域を
基準としてボした塩基の番号であり、Ｈｌｎｄｌｌｌ等
は用いられた制限酵素名であり、括弧内の数字は切断部
位の位置（塩基の番号）であり、枠で仕切られた上記の
ワモンゴキブリのリポポリサッカライド結合性レクチン
様物質前駆体領域の内でＳ領域はシグナルペプチドに相
当するものと推定される領域を示し、「リポポリサッカ
ライド結合蛋白」と表示されている領域はワモンゴキブ
リのリポポリサッカライド結合性レクチン様物質に相当
するものと推定される領域を示している。第１図の下段
において、水平な矢印は塩基配列決定の方向と範囲を示
している。
合性レクチン様物質前駆体含有クローンのｃＤＮＡ領域
と、塩基配列決定に用いられた制限酵素と、塩基配列決
定のためのストラテジーとが示されている。最上段の数
字は、中段において枠で仕切られたワモンゴキブリのリ
ポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体領域を
基準としてボした塩基の番号であり、Ｈｌｎｄｌｌｌ等
は用いられた制限酵素名であり、括弧内の数字は切断部
位の位置（塩基の番号）であり、枠で仕切られた上記の
ワモンゴキブリのリポポリサッカライド結合性レクチン
様物質前駆体領域の内でＳ領域はシグナルペプチドに相
当するものと推定される領域を示し、「リポポリサッカ
ライド結合蛋白」と表示されている領域はワモンゴキブ
リのリポポリサッカライド結合性レクチン様物質に相当
するものと推定される領域を示している。第１図の下段
において、水平な矢印は塩基配列決定の方向と範囲を示
している。
第２図には、このようにして決定されたワモンゴキブリ
のりポポリサソカライド結合性レクチン様物質前駆体含
有クローンのｃＤＮＡにおける塩基配列（ｃＤＮＡと相
補的な配列）及びワモンゴキブリのリポポリサッカライ
ド結合性レクチン様物質前駆体部分の塩基配列から翻訳
したアミノ酸配列が示されている。第２図において塩基
配列の上側に付された数字は第１図におけると同様にワ
モンゴキブリのりボポリサッカライド結合性レクチン様
物質前駆体領域を基準として示した塩基の番号であり、
実線で枠組みした領域はワモンゴキブリの体液より精製
されたりポポリサッカライド結合性レクチン様物質のト
リプシン分解断片より得られたアミノ酸配列と同一の配
列を有する領域を示し、破線で枠組みした領域は既述の
実施例で形質転換細胞のスクリーニング用プローベとし
て用いた領域をそれぞれ示している。
のりポポリサソカライド結合性レクチン様物質前駆体含
有クローンのｃＤＮＡにおける塩基配列（ｃＤＮＡと相
補的な配列）及びワモンゴキブリのリポポリサッカライ
ド結合性レクチン様物質前駆体部分の塩基配列から翻訳
したアミノ酸配列が示されている。第２図において塩基
配列の上側に付された数字は第１図におけると同様にワ
モンゴキブリのりボポリサッカライド結合性レクチン様
物質前駆体領域を基準として示した塩基の番号であり、
実線で枠組みした領域はワモンゴキブリの体液より精製
されたりポポリサッカライド結合性レクチン様物質のト
リプシン分解断片より得られたアミノ酸配列と同一の配
列を有する領域を示し、破線で枠組みした領域は既述の
実施例で形質転換細胞のスクリーニング用プローベとし
て用いた領域をそれぞれ示している。
ワモンゴキブリのりボポリサｙカライド結合性レクチン
様物質前駆体部分は開始コドンであるＡＴＧから始まり
終止コドンであるＴＧＡで終了する長い翻訳可能フレー
ム （ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）として
存在し、ワモンゴキブリのりボボリサッカライド結合性
レクチン様物質前駆体領域の始めの部分、即ち第１番目
のＮｅｔから第３３番目のＡｒｇ迄はその構造に鑑みて
、特に６番目のＡｌａから第２７番目のｌｉｅ迄は比較
的疎水性に冨んだアミノ酸が並んでいるので分泌蛋白に
一般的に見られるシグナル配列と考えられる （第１図
のＳ領域）。
様物質前駆体部分は開始コドンであるＡＴＧから始まり
終止コドンであるＴＧＡで終了する長い翻訳可能フレー
ム （ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）として
存在し、ワモンゴキブリのりボボリサッカライド結合性
レクチン様物質前駆体領域の始めの部分、即ち第１番目
のＮｅｔから第３３番目のＡｒｇ迄はその構造に鑑みて
、特に６番目のＡｌａから第２７番目のｌｉｅ迄は比較
的疎水性に冨んだアミノ酸が並んでいるので分泌蛋白に
一般的に見られるシグナル配列と考えられる （第１図
のＳ領域）。
聚産丞」
（ワモンゴキブリのリポポリサッカライド結合性しクチ
ン様物質組み込みプラスミドの調製）本製造例について
は、特に第３図を参照しつつ説明する。先ず、第１図及
び２図に示されるようなワモンゴキブリのりボポリサッ
カライド結合性レクチン様物質前駆体のｃＤＮＡクロー
ンを制限酵素旧ｎｄｌｌｌ及びＥｃｃｉＲＶにより切断
して約９００ｂｐのフラグメントを得た。次に、このフ
ラグメントのＨｌｎｄｌｌｌ断点にＮＨｅ Ｉ リンカ
−を付加し、又ＥｃｏＲＶ断点にＸｈｏｌ リンカ−
を付加した （これらのリンカ−は何れもアブライドバ
イオシステムズ社製のＤＮＡ合成装置を用いて調製され
た）。
ン様物質組み込みプラスミドの調製）本製造例について
は、特に第３図を参照しつつ説明する。先ず、第１図及
び２図に示されるようなワモンゴキブリのりボポリサッ
カライド結合性レクチン様物質前駆体のｃＤＮＡクロー
ンを制限酵素旧ｎｄｌｌｌ及びＥｃｃｉＲＶにより切断
して約９００ｂｐのフラグメントを得た。次に、このフ
ラグメントのＨｌｎｄｌｌｌ断点にＮＨｅ Ｉ リンカ
−を付加し、又ＥｃｏＲＶ断点にＸｈｏｌ リンカ−
を付加した （これらのリンカ−は何れもアブライドバ
イオシステムズ社製のＤＮＡ合成装置を用いて調製され
た）。
一方、動物細胞での発現に用いられる市販のプラスミド
（ファルマンア社製のｒｐＭｓＧＪ ）を制限酵素Ｎ
ｈｅｆ及びＸｈｏｌにより切断し、ワモンゴキブリのり
ボボリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体の上記
リンカ−結合フラグメントを、上記プラスミドの断点に
おける粘着末端と結合させることによりワモンゴキブリ
のりボポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体の
組み込まれたプラスミドを得た。
（ファルマンア社製のｒｐＭｓＧＪ ）を制限酵素Ｎ
ｈｅｆ及びＸｈｏｌにより切断し、ワモンゴキブリのり
ボボリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体の上記
リンカ−結合フラグメントを、上記プラスミドの断点に
おける粘着末端と結合させることによりワモンゴキブリ
のりボポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体の
組み込まれたプラスミドを得た。
このプラスミドは、第３図の末尾に示されるように、マ
ウスマンマリ−腫瘍ウィルスのロングターミナルリピー
ト （ＭＭＴＶ−ＬＴＲ）である強力なプロモータの下
流にワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性レク
チン様物質前駆体のｃＤＮＡクローンを有している。従
って、このプラスミドをＬ細胞やＣ）１０細胞に導入す
ることによって、動物細胞でワモンゴキブリのりボボリ
サッカライド結合性レクチン様物質前駆体を容易に且つ
大量に発現させることができる。
ウスマンマリ−腫瘍ウィルスのロングターミナルリピー
ト （ＭＭＴＶ−ＬＴＲ）である強力なプロモータの下
流にワモンゴキブリのりポポリサッカライド結合性レク
チン様物質前駆体のｃＤＮＡクローンを有している。従
って、このプラスミドをＬ細胞やＣ）１０細胞に導入す
ることによって、動物細胞でワモンゴキブリのりボボリ
サッカライド結合性レクチン様物質前駆体を容易に且つ
大量に発現させることができる。
Claims (6)
- （１）ワモンゴキブリ由来のリポポリサッカライド結合
性レクチン様物質前駆体のアミノ酸配列をコードしてい
る約７７０個のデオキシリボヌクレオチドを含むクロー
ン化一本鎖ＤＮＡ又はこの一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡと
からなるクローン化二本鎖ＤＮＡ。 - （２）式 【遺伝子配列があります】 【遺伝子配列があります】 （式中においてＡ、Ｃ、Ｇ及びＴは、それぞれアデニン
、シトシン、グアニン及びチミン塩基を有するデオキシ
リボヌクレオチドを意味し且つ上記の式はアミノ酸に対
応するコドン毎の配列として示されている） にて示されるヌクレオチド配列またはこれと生物学的に
同等のヌクレオチド配列を有していることを特徴とする
、請求項（１）に記載のクローン化一本鎖ＤＮＡ又はこ
の一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡとからなるクローン化二本
鎖ＤＮＡ。 - （３）アミノ酸配列が 【遺伝子配列があります】 であることを特徴とする、請求項（１）又は（２）に記
載のクローン化一本鎖ＤＮＡ又はこの一本鎖ＤＮＡと相
補ＤＮＡとからなるクローン化二本鎖ＤＮＡ。 - （４）アミノ酸配列が 【遺伝子配列があります】 の一部領域であることを特徴とする、ワモンゴキブリ由
来のクローン化一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡとからなるク
ローン化二本鎖ＤＮＡ断片。 - （５）ワモンゴキブリ由来のリポポリサッカライド結合
性レクチン様物質前駆体のアミノ酸配列をコードしてい
る約７７０個のデオキシリボヌクレオチドを含むクロー
ン化一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡとからなる二本鎖ＤＮＡ
又はこの二本鎖ＤＮＡの断片が組み込まれているプラス
ミド。 - （６）ワモンゴキブリ脂肪体のＲＮＡを ｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡに変じ、このｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮ
ＡとベクタプライマＤＮＡとを用いｃＤＮＡライブラリ
を作製して大腸菌株の形質転換を行い、一方既知のワモ
ンゴキブリのリポポリサッカライド結合性レクチン様物
質のＮ末端アミノ酸配列における５から１１番目の配列
である 【遺伝子配列があります】 に相当するｍＲＮＡと相補的な式 【遺伝子配列があります】 （式中、１はイノシンを意味し、Ａ、Ｇ、Ｔ及びＣの全
ての可能性があるデオキシリボヌクレオチドの部位に用
いられた） にて示される２０個のデオキシリボヌクレオチドからな
る２４種類の混合物における各オリゴデオキシリボヌク
レオチドの５’末端に標識を施し、これをプローベとし
上記の形質転換細胞をハイブリダイゼーションによるス
クリーニングに付してハイブリダイズするポジティブク
ローンとしてクローン化二本鎖ＤＮＡを得、必要に応じ
常法により上記の二本鎖ＤＮＡ分離させて一本鎖ＤＮＡ
にすることを特徴とする、ワモンゴキブリのリポポリサ
ッカライド結合性レクチン様物質前駆体のアミノ酸配列
をコードしている約７７０個のヌクレオチドを含むクロ
ーン化一本鎖ＤＮＡ及びこの一本鎖ＤＮＡと相補ＤＮＡ
とからなるクローン化二本鎖ＤＮＡの調製法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17517490A JPH0463593A (ja) | 1990-07-04 | 1990-07-04 | ワモンゴキブリ由来のリポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体のクローン化ｄｎａ、その断片、これらの調製法並びに該クローン化ｄｎａ又は断片が組み込まれたプラスミド |
| EP19910110368 EP0464553A3 (en) | 1990-07-04 | 1991-06-24 | Dna clone encoding precursor of lectin-like substance from periplaneta americana and cloning therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17517490A JPH0463593A (ja) | 1990-07-04 | 1990-07-04 | ワモンゴキブリ由来のリポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体のクローン化ｄｎａ、その断片、これらの調製法並びに該クローン化ｄｎａ又は断片が組み込まれたプラスミド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0463593A true JPH0463593A (ja) | 1992-02-28 |
Family
ID=15991566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17517490A Pending JPH0463593A (ja) | 1990-07-04 | 1990-07-04 | ワモンゴキブリ由来のリポポリサッカライド結合性レクチン様物質前駆体のクローン化ｄｎａ、その断片、これらの調製法並びに該クローン化ｄｎａ又は断片が組み込まれたプラスミド |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0464553A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0463593A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9090902B2 (en) | 2008-08-26 | 2015-07-28 | Basf Plant Science Gmbh | Nucleic acids encoding desaturases and modified plant oil |
| CN116250548A (zh) * | 2022-08-30 | 2023-06-13 | 华南师范大学 | 抑咽侧体神经肽在防治美洲大蠊中的应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6451084A (en) * | 1987-08-20 | 1989-02-27 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co | Cloned dna of antibacterial polypeptide precursor, its fragment, their preparation and plasmid integrated with said cloned dna or fragment |
-
1990
- 1990-07-04 JP JP17517490A patent/JPH0463593A/ja active Pending
-
1991
- 1991-06-24 EP EP19910110368 patent/EP0464553A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0464553A2 (en) | 1992-01-08 |
| EP0464553A3 (en) | 1992-02-12 |
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