JPH04504209A

JPH04504209A - 胞子形成―アルブスクラー菌根系菌類を刺激する方法および組成物

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Publication number: JPH04504209A
Application number: JP91501483A
Authority: JP
Inventors: サファー，ジーン，アール．; ネアー，ムラリードハラン，ジー．; シクエイラ，ジョゼ，オウ．
Original assignee: ミシガンステイトユニバーシティー
Priority date: 1989-12-04
Filing date: 1990-11-19
Publication date: 1992-07-30
Anticipated expiration: 2010-07-12
Also published as: HU211206B; US5002603A; DE456808T1; CN1186599A; WO1991007868A1; CN1077767C; ES2042433T1; AU6957891A; EP0456808B1; CN1040458C; BR9007092A; CA2045538A1; ATE158920T1; EP0456808A4; HU912581D0; HUT61430A; AU639058B2; ES2042433T3; CN1052329A; CA2045538C

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】を刺激する方法および組成物本発明は胞子形成−アルプスクラ−菌根系菌類（ＶＡＭ菌類：　ｖｅｓｉｃｕｌａｒ−ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ）の刺激にイソフラボノイド化合物を使用することに関する。特に、本発明はＶＡＭ菌類の存在下における植物物質の生長を刺激するためにイソフラボノイド化合物を使用する方法および組成物に関する。従来技術エンドゴナセアｘ　（ＥｎｄｏｇｏｎａｃｅａｅＸＺｉｇｏｎｙｃｅｔｅｓ）族の一員である数種の菌種は地球上に生息しているほとんど全部の種類の大多数の管束植物の根と内部共生集団を形成する［Ｈａｒｌｅｙ、　Ｊ、　Ｌ、およびＳｍｉ　ｔｈ、　Ｓ、　Ｅ、　、　Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｓｙｍｂｉｏｓｉ：Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、４８３頁（１９８３）　；　５ａｆｉｒ、Ｇ、Ｒ，、εｃｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＶＡｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｐｌａｎｔｓ、ｃＲｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　２２４頁（１９８７）］。これらの集団は、胞子形成−アルプスクラ−菌根類（ＶＡＭ）と称され、アブラナ科植物（ｃｒｕｃｉｆｅｒｓ）および若干のその他の種類を除いて、大部分の農業上で重要な作物を含む、少なくとも３００．０００種の植物で発生することが知られている。広く知られているように、ＶＡＭ菌類は、非生物性および生物性の両方のストレスに対して、植物生長、栄養摂取および耐容性に意味深い有益な効果を育することができる［Ｐｏｗｅｌｌ、　Ｇ、　Ｌ、およびＢａｇｙａｒａｊ、　Ｄ、　Ｊ、　、　ＶＡ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ。ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　２３４頁（１９８４）　：　５ａｆｉｒ、。Ｇ、　Ｒ，、εｃｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＶＡ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｐｌａｎｔｓ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、２２４頁（１９８７）コ。これらの利益は、土壌栄養物摂取の増加、マメ科植物における生物学的窒素固定および結節の増加、好ましい植物−水相互関係、疾病の減少、植物生長促進物質の蓄積の増加およびその他の生理学的効果をもたらす［Ｓｍｉ　ｔｈ、　Ｓ、　Ｅ、およびＧｉａｎｉｎａｚｚｉ−Ｐｅａｒｓｏｎ、　Ｖ、　、　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｐｌａｎｔｓ　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　。ＰｌａｎｔＭｏｌ、Ｂｉｏｌ、３９　：　２２１　〜２４４　（１９８８）　コ　。全世界からの研究者および会社は、これらの菌類を農業および林業において大規模に使用することに関して、極めて多大のバイオチクノロシイ的可能性を認識している［Ｊｅｆｆｒｉｅｓ、Ｐ、、Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｅ　ｉｎ　ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ。Ｃｒ１ｔ、Ｒｅｖ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、、５　：　３１９〜３５７（＋　９８７　）　：　Ｐｏｗｅｌｌ、Ｃ，Ｌ、およびＢａｇｙａｒａ　ｊ、　Ｄ、　Ｊ、纒、ＶＡ　ｍｙｃｏｒｒｈｉＺａ、ｃＲｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　２３４頁（１９８４）　；　５ａｆｉｒ、　Ｇ、Ｒ，ｉ！、εｃｏｐｈｙｓｊｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＶＡａ＋ｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｐｌａｎｔｓ、ｃＲｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　２２４頁（１９８７）；および５ｉｑｕｅｉｒａ、　Ｊ、　０．およびＦｒａｎｃｏ。Ａ、Ａ、、　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉａ　ｄｏ　５ｏｌｏ、　ＭＥＣ／ＡＢＥＡＳ、Ｂｒａｓｉｌｉａ。２３４頁（１９８８）］。植物または土壌の接種物として、これらの菌類を使用することは、肥料および農薬使用の減少、非生物学的ストレス（金属素、早魅、有害な温度）および生物学的ストレス（線虫および病原菌の攻撃）による作物収穫の損失の減少によって、農業および地球的環境品質に対して重大な衝撃を与える。さらにまた、これらの菌類は、栽培植物の早まった生長不調および生き残りを改良し、そしてまた貧弱で、有害な場所における生産性または植物再生性を増大させることが証明されている。実際に、成る植林森および果樹ならびにコーヒー実生における自然の成長が５０〜５ｏｏｏ％の適当なＶＡＭ接種によって改良されることが知られている。園芸および耕作作物の場合に、ＶＡＭ接種によって、収穫が５〜２９０％の範囲で増加したことが報告されている［Ｐｏｗｅｌｌ、　Ｃ，Ｌ、およびＢａｇｙａｒａｊ、　Ｄ、　Ｊ、纒、ＶＡｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　２３４頁（１９８４）　；　５ｉｑｕｅｉｒａ、Ｊ、０．およびＦｒａｎｃｏ、　Ａ、　Ａ、　。Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉａ　ｄｏ　５ｏｌｏ、、ＭＥｃ／ＡＢＥＡＳ、Ｂｒａｓｉｌｉａ、２３５頁（１９８８）］。開発国における環境品質に関して、熱帯土壌の高い肥料要求（この地域では農業拡大が期待される）および全地球的なリン酸塩沈着物が約７０年間の間に潜在的に枯渇するだろうという事実を考慮すると、ＶＡＭ接種に対する巨大な全世界的市場が存在している。大部分の土壌における植物生長に対するＶＡＭ菌類の重要性は、土壌化学者、農学者、園芸家、地球学者、農家および養樹家によって受け入れられ、認識されているが［Ｐ　ｏｗｅ　ｌ　Ｌ　Ｃ８Ｌ、およびＢａｇｙａｒａｊ、　Ｄ、　Ｊ、纒、ＶＡｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　２３４頁（１９８４）　：　５ａｆｉｒ、　Ｇ、Ｒ，ｌｉ　Ｅｃｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＶＡｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｐｌａｎｔｓ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　２２４頁（１９８７）］、多量の活性で有効な接種物の供給に対して現在は無力であることがそれらの大規模使用における主要欠点である。ＶＡＭ菌類は絶対ビオトローフ（ｏｂｌｉｇａｔｅ　ｂｉｏｔｒｏｐｈ）として認識されている、すなわちこれらの菌類は異種生物の存在しない条件の下では充分に培養することはできない［Ｈｅｐｐｅｒ、Ｃ，Ｍ、、ＶＡＭ　５ｐａｒｅ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ：　ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　ｆｏｒ　ａｘｅｎｉｃ　ｃｕｌｔｕｒｅ　。Ｉｎ：　Ｐｒｏｃ、７　ｔｈ　ＮＡＣＯＭ、５ｙｌｖｉａ等（纒）　、ＬＩｒ＋ｊｖｅｒｓｊｔｙｏｆ　Ｆｌｏｒｉｄａ、Ｇａ１ｎｅｓｖｉｌｌｅ、１７２〜ｌ　７４　（１９８７）　：Ｍｏ５ｓｅ、Ｂ、、ｓｏｍｅ　５ｔｕｄｉｅｓ　ｒｅｌａｔｉｎｇ　ｔｏ　１ｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ’ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｖｅｓｉｃｕｌａｒ−ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｐｈｙｔｅｓ＋ｃａｎｊ。Ｂｏｔ、、６６　；２５３３〜２５４０　（１９８８）；５ｉｑｕｅｉｒａ等、Ｃａｎ、Ｊ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、３１　：　９６５〜９７２（１９８５）］。感染性のＶＡＭ菌類が無いということは基礎生物学、生態学、宿主関係および接種材料生産技術に対する増大する研究を非常に困難にしている。ＶＡＭ菌類のインビトロ培養は、しばしば試みられているが、不定の結果が得られているだけである［　Ｈｅｐｐｅｒ。Ｃ，Ｍ、、ＶＡＭ　５ｐｏｒｅ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｈｙｐｈａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　１ｎｖｉｔｒｏ：　ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　ｆｏｒ　ａｘｅｎｉｃ　ｃｕｌｔｕｒｅ、Ｉｎ：　Ｐｒｏｃ。７　ｔｈ　ＮＡＣＯＭ、５ｙｌｖｉａ等（纒）　、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｆｌｏｒｉｄａ。Ｇａ１ｎｅｓｖｉ１１．　１７２〜１７４　（１９８７）　；５ｊｑｕｅｉｒａ等、Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ　７４　：　９５２〜９５９　（１９Ｂ２）　；５ｉｑｕｅｉｒａ、　Ｊ、　０．等、Ｃａｎ、Ｊ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、３１　：　９６５〜９７２（１９８５）コ。ヨーロッパ特許出願Ｎｏ、ＥＰ０１７２０８５には、ＶＡＭ菌類の無条件増殖が記載されている。しかしながら、その増殖因子は非植物原からのものであり、これらのＶＡＭ菌類は植物感染に関する能力が制限されている。適当な培地上で表面培養すると、大部分の種類で生きている胞子が容易に生じるが、生きている根の不存在下における発芽管の生長速度および生殖共時態は、数種の先天的な環境因子および栄養因子によって影響を受ける［Ｈｅｐｐｅｒ、　Ｃ，Ｍ、、　ＶＡＭ　ｓｐｏｒｅｇｅｒｍｔｎａｔｔｏｎ　ａｎｄ　ｈｙｐｈａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎ　ＶｉｔｒＯ：　ｐｒｏｓｐｅｃｔｓｆｏｒ　ａｘｅｎｉｃ　ｃｕｌｔｕｒｅ、　Ｉｎ：　Ｐｒｏｃ、７　ｔｈ　ＮＡＣＯＭ、５ｙｌｖｉａ等（編）　、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ＦＩｏｒｉｄａ、Ｇａ１ｎｅｓｖｉｌｌｅ、　１７２〜１７４　（１９８７）　；　５ｉｑｕｅｉｒａ、Ｊ、０．等、Ｃａｎ、　Ｊ。Ｍｊｃｒｏｂｉｏｌ、　３　１　：　９８５〜９７２　（１９８５）　コ　。　大部分の種の胞子は発芽または菌糸生長に対して特異的栄養上の要件を有してはいないが、成る種の因子を加えると、非常に制限された程度ではあるが、有益であることが照明されている［　５ｉｑｕｅｉｒａ、　Ｊ、　０．　、　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　。３１：９８５〜９７２（１９８５）コ。連続する菌糸生長および胞子形成は、生きている植物の根の存在の下で得られるだけである［　Ｂ６ｃａｒｄ、　Ｇ、およびＦｏｒｔｉｎ、Ｊ、Ａ、。ＮｅｗＰｈｙｔｏｌ、、１０８　：　２１１〜２１８　（１９８８）　；Ｍｏ５ｓｅ、　Ｂ、、　ＣａｎＪ、　Ｂｏｔ、、６６　：　２５３３〜２５４０（１９８ｇ）コ。日本特許６３−８７９７３　（１９８８）には、ジャガイモおよび種々の生長促進剤とともに、ＶＡＭ菌類を接種することが示されており、そしてまた、ＩＪｏｓｓｅ等に対する米国特許Ｎｏ、４．２９４．０３７には、植物根の存在の下におけるＶＡＭ菌類の増殖が記載されている。長い間、根はＶＡＭ生産の開始および拡大において重要な役割を果たすものと考えられていた［Ｈａｒｌｅｙ、　Ｊ、　ｏ。およびＳｍ１ｔｈ、Ｓ、Ｅ、、Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｓｙｍｂｉｏｓｉｓ、　ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、４８３頁（１９８３）コ。根の存在は、物理的接触がなくても、菌糸生長を刺激する［　Ｂ６ｃａｒｄ、　Ｇ。およびＦｏｒｔｉｎ、Ｊ、Ａ、、Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ、、　１０８　：　２１１〜２１８　（１９８８）　；Ｍｏ５ｓｅ、Ｂ、およびＨｅｐｐｅｒ、　Ｃ，Ｍ、　、　Ｐｈｙｓｉｏｌ。Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌ、、５　：　２１５〜２２３　（１９７５）　；およびＭｏ５ｓｅ、　Ｂ、、Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｂｏｔ、、６６　：　２５３３〜２５４０（１９８８）］。しかしながら、イイントロの胞子発芽または菌糸生長に対する根浸出物または種油出物の効果は、非常に変わりやすい［Ｈａｒｌｅｙ、　Ｊ、　Ｌ、およびＳｍｉ　ｔｈ、　Ｓ。Ｅ、、　Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｓｙｍｂｉｏｓｉｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、　４８３頁（１９８３）　；　５ｉｑｕｅｉｒａ、Ｊ、Ｏ，、Ｃｕ１ｔｕｒａ　ａｘｅｎｉｃａｅ　ｍｏｎｏｘｅｎｉｃａ　ｄｏｓ　ｆｕｎｇｏｓ　ｍ１ｃｏｓｉｚｉｃｏｓ　ｖｅｓｉｃｕｌｏ−ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｅｓ、Ｉｎ：Ｐｒｏｃ、ＩＩ　Ｒｅｕｎｉａｏ　ｂｒａｓ、ｍ１ｃｏｒｒｉｚａｓ。Ｓａｏ　Ｐａｕｌｏ、Ｓｅｃ、Ｍｅｉｏ　Ａｍｂｉｅｎｔｅ、　４４〜７０頁（１９８７）コ。しかしながら、ｆｉ近の研究によって、１！浸出物の量よりもその質がインビトロでのＶＡＭ菌類増殖に対して重要な因子であることが示された。［ＥＩｒａｓ＋　Ｋ、Ｓ。および５ａｆｉｒ＋Ｇ、Ｒ，、ＡｐＰｌ、Ｂｎｖｉｒｏｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、５３　：　１９２８〜１９３３　（１９８７）コ。この刊行物の著者は、リンを与えられていないクローバ−の根の根浸出物中に一時的なＶＡＭ増殖因子が存在することを示唆した。Ｂｒａｓｓｆｃａのような非ＶＡＭ種は、これらが適合する宿主の根の近くに拡散性の生長刺激物を持っていないことから、集落を形成しないものと見做される［Ｇｌｅｎｎ。Ｍ、　Ｇ、等、ＮｅｗＰｈｙｔｏｌ、１１０　：　２１７〜２２５　（１９８８）］。このことは、ＶＡＭ樹立の初期に化学的シグナルが生じなければならないという示唆と一致する［Ｅｌｉａｓ、　Ｋ、　Ｓ、およびＳａｆ　ｉｒ、　Ｇ、　Ｒ，、Ａｐｐｌ、　Ｅｎｖｉｒｏｎ。Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、５３　：１９２１３〜１９３３　（１９８７）　；Ｂ６ｃａｒｄ、　Ｇ、およびＦｏｒｔｉｎ、Ｊ、Ａ、、Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ、　１０８　；　２１１〜２１８　（１９８８）　：Ｂｏｎｂａｔｅ−Ｆａｓｏｌｏ　１ｎＳｃａｎｎｅｒｉｎｉ等（Ｓｃａｎｎｅｒｉｎｉ、　Ｓ、　、　Ｓｍ１ｔｈ、　Ｄ、　、　Ｂｏｎｆａｎｔｅ−Ｆａｓｏｌｏ、　Ｐ、ｉｎ　Ｇｉａｎｉｎａｚｚｉ−Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｖ、纒、Ｃｅ１ｌ　ｔｏ　ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ、ａｎｉｍａｌ　ａｎｄ　ｍ１ｃｒｏｂｉａｌ　ｓｙｍｂｉｏｓｉｓ。Ｓｐｒｉｎｇ　Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ、４　１　４　頁　（１９８８）］　。低分子量フェノール系化合物は、広く種々の植物−微生物系において重要な役割を演じることが知られている、植物−根粒バクテリア（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）共時懇において、根浸出物中に存在するフラボノイド類は、この細菌の共生プラスミドに対して、ｎｏｄ遺伝子のインデューサーまたはリプレッサーとして、調節様相で作用する［ＲｏｌｂｅおよびＧｒｅｓｓｈｏｆｆ、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｐ　１．Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｐ　１．Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、。するルテオリンはアルファルファ根圏に低濃度で生じることがあり、結節および窒素固定を制限する［Ｋａｐｕｌｎｉｋ。Ｙｏ等、Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ、、８４　：　１１９３〜１１９６　（１９８７）］。フラボノイド類はまた、寄生植物で吸管形成を誘発させることができ［５ｔｅｆｆｅｎｓ、　Ｊ、　Ｃ，等、Ａｎｎ。Ｂｏｔ、、５０　：　１〜７　（１９８２）］　、植物−徹生物侵入をコントロールし［Ｂａ１ｌｅｙ、　Ｊ、　Ａ、編、Ｂｉｌｏｇｙ　ａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ−ｐａｔｈｏｇｅｎ　１ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ。ｓｐｒｉｎｇ　Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ、　４１５頁（１９８６）。Ｐａ１ａｃｉｏｓ、　Ｒ，およびＶｅｒｍａ、　Ｄ、　Ｐ、　Ｓ、纒、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｔｉｃｓ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ−ｍｉｃｒｏｂｅ　１ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ、ＡＰＳ、ｓｔ、Ｐａｕｌ。４０１頁（１９８８）　：　Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ、Ｍ、Ｄ、およびＬａｍｂ。ＤＪ、、Ｐｌａｎｔ、Ｃｅ１ｌ　Ｆｕｖｉｒｏｎ、１１　：　３９５〜４０１　（１９８８）　；　Ｖａｎ　Ｅｔｔｅｎ、Ｈ，Ｄ、、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　ｌ　５　：　６５５〜６５９　（１９７６）］、天然のオーキシン調節体として作用し［Ｊａｃｏｂｓ、　Ｍ、およびＲｕｂｅｒｙ、　Ｐ、　Ｈ，、５ｃｉｅｎｃｅ、　２４１つ３４６〜３４９　（１９８７）］、そしてまた病原体侵入に対する応答として蓄積することが知られている［Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ、Ｍ、Ｄ、およびＬａｍｂ、Ｃ，Ｊ、Ｐｌａｎｔ、Ｃｅ１ｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ。１１ψ３９５〜４０１（１９８８）コ。別の低分子量フ［Ｃｏｎｎ、　Ｅ、　Ｅ、編、０ｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ　ｆｏｒ　ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、２１０頁（１９８８）　；　Ｐｏｗｅｌｌ、Ｇ、に、等Ｍｏ１．　Ｐｌａｎｔ−ＭｉｃｒｏｂｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ、　ｌ　：　２３５〜２４２　（１９８８）　コ　、　地衣類におけるサイクルプロセスを調整することができる［　５ｃａｎｎｅｉｒｎｉ、　Ｓ、等、Ｃｅ１ｌ　ｔｏ　ｃｅｌｌ　ｓｉｇｎａｌｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ。ａｎｉｍａｌ　ａｎｄ　ｍ１ｃｒｏｂｉａｌ　ｓｙｍｂｉｏｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇ　Ｖｅｒｌａｇ。Ｂｅｒｌｉｎ、４１４頁（１９８８）］、これらの化合物はまた、遠隔作用性化合物としても作用することができ、インビトロでのＶＡＭ菌糸生長および根集落形成の両方に作用する［Ｗａｃｋｅｒ、　Ｔ、　Ｌ、等、Ｊ、Ｃｈｅｍ、　Ｅｃｏｌ、（ｉｎ　ｐｒｅｓｓ）（１９８９）］。ＶＡＭ菌類は、絶対ビオトローフである。これらはそれらの植物との長期間の共 −進化の間に、席上生長するための遺伝子的能力を失なっている（または、必要なゲノムの中に抑圧された部分を育する）　［５ｉｑｕｅｉｒａ、Ｊ、０．。Ｃｕ１ｔｕｒａ　ａＸｅｎｉｃａ　ｅ　ｍ０ｎＯＸｅｎｉｃａ　ｄｏｓ　ｆｕｎｇｏｓｍｉｃｒｏｒｉｚｉｃｏｓ　Ｖｅｓｉｃｕｌｏ−ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｅｓ、　［ｎ　二Ｐｒｏｃ、　ＩＩＲｅｕｎｉａｏ　ｂｒａｓ、ｍ１ｃｏｒｉｚａｓ、Ｓａｏ　Ｐｏｕｌｏ、Ｓｅｃ、Ｍｅｉ。Ａｍ１ｂｉｅｎｔｅ、　４４〜７０頁（１９８７）］。従って、最近示唆されたように、これらの菌類は菌核ＤＮＡの複製による干渉によって、この菌類のライフサイクルの完全なコントロールは宿主植物が持つことになる。［Ｂｕｒｇｇｒａａｆ、　Ａ、　Ｊ、　Ｐ、およびＢｅｒｉｎｇｅｒ、　Ｊ、　Ｅ、　、　Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ。プロセスは胞子インビビションの後に、容易に誘発されるが［５ｉｑｕｅｉｒａ等、Ｃａｎ、Ｊ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、３１　：　９６５〜９７２　（１９８５）］、少なくとも１種においては、核ＤＮＡ合成は、インビトロ発現の間は見られない［Ｂｕｒｇｇｒａａｆ、　Ａ、　Ｊ、　Ｐ、およびＢｅｒｉｎｇｅｒ、　Ｊ、　Ｅ、　、　Ｎｅｗ　Ｐｈｙｔｏｌ、　。る根の不存在の下においては、アブレソリア（ａｐｐｒｅｓｏｒｉａ）の生成も、あるいはアルプスクルス（ａｒｂｕｓｃｕｌｅｓ）　（ホストリウム状構造体）の生成も報告されたことはない。連続的菌糸生長および分化の両方が宿主のコントロールの下にあるものと見做れる。別の絶対ビオトローフ菌類に見られるように［Ｈｏｃｈ、　Ｈ，Ｃ，および５ｔａｐｌｅｓ、Ｒ，Ｃ，、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ、２５　：　２３１〜２４７（１９８７）］、植物メツセンジャーまたはインデューサーが、侵入歯の初期生長、繁殖および分化に、トリが−として必要であることがある。目的従って、本発明の目的は、培地または土壌中で、あるいは他の植物において、植物感染性ＶＡＭ菌類を生産する方法を提供することにある。本発明のもう一つの目的は、ＶＡＭ菌類を含有する新規組成物を提供することにある。本発明のさらにもう一つの目的は、ＶＡＭ菌類の存在下における植物生長または植物細胞増殖を刺激するための方法および組成物を提供することにある。本発明のさらにもう一つの目的は、植物毒性レベルの除草剤およびその他の農薬を含有する土壌において、感染性ＶＡＭ菌類の刺激により、植物生産性を改良する方法を提供することにある。本発明のさらにもう一つの目的は、簡単にかつまた経済的に使用でき、安価な農業用組成物を調合できる方法を提供することにある。これらの、そしてまたその他の目的は、以下の説明および図面を参照することによって、次第に明白になるであろう。図面において、図１は、イソフラボノイド　クローバ−（Ｃ１ｏｖｅｒ）Ａ［ホルモンネチン（ｆｏｒｍｏｎｏｎｅｔｉｎ）、種油出物からの天然産物）；ホルモンネチン（合成）；ビオカニン（ｂｉｏｃｈａｎｉｎ）　Ａで処理したクローバ−を、無効のフラボノイド化合物と比較して示す図である。ＶＡＭ菌類根集落形成およびクローバ−生長に係る大きい増加が、ホルモンネチン、ビオカニンＡおよびクローバ −八で示されている。図２には、ビオカニンＡ含有栄養培地、ホルモンネチン含有栄養培地およびこれら２種の化学物質のどちらもている。ホルモンネチンまたはビオカニンＡを添加することによって、対照に比較して大きい菌類増殖の増加が生じる。図３〜図６には、天然および合成のホルモンネチンのＣＤｓ　ＯＤおよびＤＭＳＯ中におけるスペクトルデータが示されている。図７には、ビオカニンＡおよびホルモンネチンの濃度の関数として、ＶＡＭ菌類根集落形成パーセンが示されている。図８には、ホルモンネチンおよびビオカニンＡの存在の下で、非殺菌畑土壌におけるトウモロコシ生長による葉面積の増加が示されている。この畑土壌はトウモロコシに対して毒性のレベルで、除草剤イマザクイン（ｉｍａｚａｑｕｉｎ）を含有する。図９には、添加ホルモンネチンおよびビオカニンＡの存在の下での、トウモロコシに対する除草剤による損害の減少が示されている。この損傷レベルは、図８に示されいるトウモロコシ植物に関するものである。図１Ｏには、ホルモンネチンおよびビオカニンＡの存在の下における図８に記載のトウモロコシ植物の収穫（乾燥重量）の４週間令での増加が示されている。一般的説明本発明は胞子形成−アルプスクラ−根菌系菌類の存在の下における植物生長を刺激する方法に関するものであり、この方法は、好ましくは次式で示されるイソフラボノイド化合物の存在の下に、上記菌類とともに植物を生長させることからなる方法である：（式中、Ｒ＋、ＲｚおよびＲ８は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）。さらにまた、本発明は植物の生長を刺激するために有用な植物組成物に関するものであり、この組成物は、好ましくは式（式中、Ｒ１、Ｒ，およびＲ１は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物および植物物質をＶＡＭ菌類の存在の下に生長させた場合に、この植物の生長を刺激する量で、イソフラボノイド化合物を含有する植物物質からなる。本発明はさらにまた、植物生長の刺激に有用な胞子形成−アルプスクラー慣菌糸菌類の胞子を含む当該菌類の増殖方法に関するものであり、この方法は、好ましくは式（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ２は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物を、生産される菌類が植物の生長を生長を刺激する量で存在させて、胞子形成−アルプスクラ−根菌系菌類を増殖させることからなる方法である。本発明はまた、菌類組成物に関するものであり、この組成物は、好ましくは式（式中、Ｒ＋、ＲｚおよびＲ５は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を含有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物の存在の下に増殖される胞子形成−アルプスクラ−根菌系菌類を含有する。さらにまた、本発明は、培地中で植物の生長を刺激する方法に関し、この方法は、胞子形成−アルプスクラ−根菌系菌類および好ましくは式（式中、Ｒ＋、ＲｚおよびＲ５は、水素、ヒドロキシルおよび１〜３０個の炭素原子を育するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物を含有する培養溶液中で、植物または植物細胞を生長させることからなる。さらにまた、本発明は次式で示される新規化合物に関する：（式中、Ｒ，、Ｒ，およびＲｓは、１〜３０個の炭素原子を存するアルコキシ基からなる群から選ばれる）。このイソフラボノイド化合物には、種々の長鎖状アルコキシ基を付加することができる。これらの基はＶＡＭ菌類の刺激を干渉しないように選択する。本発明の最も好ましいイソフラボノイド化合物は次式で示される化合物である：この式において、Ｒ，、Ｒ，およびＲ３は、表１に示されているとおりである：表　１（１）　ＨＨＨ（２）　ＯＨＯＨＯＭｅ（３）　ＯＭｅ　ＯＭｅ　ＯＭｅ（４）　ＨＯＨＯＭ　ｅ（５）　ＯＨＯＭｅ　ＯＭｅ（６）　ＨＯＭｅ　ＯＭｅ（７）　ＨＯＭｅ　０Ｈ（８）　ＨＨＯＭｅ最も好ましい化合物は、ビオカニンＡ（２）およびホルモンネチン（４）である。インビトロで菌糸生長を刺激するイソフラボノイド化合物は宿主根から単離され、ホルモンネチンおよびビオカニンＡとして化学的に同定された。ホルモンネチンは後刻、合成されている。５　ｐｐｍ濃度のホルモンネチンおよびビオカニンＡに応答して、大きいＶＡＭ菌類増殖刺激が見い出された。これらの根因子は、自生の土壌菌集団によるＶＡＭ生成の増加によって、あるいは土壌中の外部菌根綱の形成の刺激、それによる土壌からの植物の栄養吸収能の増加によって、植物生長促進物質として使用される。植物物質の用語は、根付き植物、あるいは植物組繊細胞、植物の器管、種子またはその他の部分を意味することができ、ＶＡＭ菌類とともに培地中で生長させることができるものである。好適な植物物質は、トウモロコシ、大豆、コウリャン、アスパラガス、ニラ類、タマネギ、Ｔａｘｕｓ種、コーヒー、クローバ−、カンキツ類、シーオーツ、小麦、ジャガイモおよびその他の作物植物、特にＶＡＭ菌類によって集落を形成する根を有する植物である。イソフラボノイドは土壌中または栽培用ミックス中に約０．１〜４００　ｐｐｍの量で使用する。栽培用ミックスはバーミキュライト、ポリスチレン　ビーズ、ピートモスおよびその他の充填剤および生長因子を含有することができる。組織培養においては、イソフラボノイドは、植物物質およびＶＡＭ菌類とともに、約ｏ、ｏｏｏｔ〜４００　ｐｐｍの量で存在させる。イソフラボノイド化合物は、植物を植付ける前または植付けた後に、土壌または栽培用ミックスに加えることができる。好ましくは、イソフラボノイドを種子の植付時点で施用する。ＶＡＭ菌類もまた、加えることができ、あるいはＶＡＭ菌類は土壌中に天然に存在することもある。イソフラボノイドは、植物物質、たとえば種子または珠芽に施用することができる。好ましくは、イソフラボノイドを、メチルセルロースなどの植物生長に適合する接着剤を用いて種子上に付着させる。イソフラボノイドはまた、種子中に含浸させることもできる。好ましくは、ＶＡＭ菌類およびイソフラボノイド付着種子を一緒に使用する。ＶＡＭ菌類はまた、イソフラボノイドとともに培養することもできる。これらのＶＡＭ菌類は、商業的に特に重要である。ＶＡＭ菌類は、培養培地中で約０．０００１〜４００ｐｐｍの量のイソフラボノイドの存在の下に増殖させると好ましい。この培養培地は、当業者に知られている、炭素源、窒素源、ミネラル源およびビタミン類を含存する。イソフラボノイド化合物は、イソフラボノイドを約０．１〜４００マイクログラム／ｍｌの量で溶液中に維持する分散剤とともに、液状濃業用担体に入れて施用することができる。好適な分散剤は低級アルカノール類、特にメタノールであり、これはアニオン性およびカチオン性界面活性剤を包含する種々の界面活性剤とともに使用する。その他の有機溶剤を使用して、水中のイソフラボノイドのエマルジョンを形成することもできる。イソフラボノイドは分散剤およびイソフラボノイドを含有する固形混合物として提供することもできる。この組成物は土壌または栽培材料中にイソフラボノイドを分散させる働きをする固形担体を用いて調製することができる。イソフラボノイドは固形担体の重量に対し約０．１〜４００　ｐｐｍの量で存在させる。イソフラボノイドは湿潤性粉末、流動性濃縮物、乳化性濃縮物、顆粒状組成物などとして組成物にすることができる。湿潤性粉末は、微粉砕した担体、たとえばカオリン、ベントナイト、ケイソウ土、アタパルガイドなど約２０〜４５重量％、活性化合物４５〜８０重量％、分散剤、たとえばリグノスルホン酸ナトリウム、２〜５重量％および非イオン性界面活性剤、たとえばオクチルフェノキシ　ポリエトキシ　エタノール、ノニルフェノキシ　ポリエトキシ　エタノールなど２〜５重量％を一緒に粉砕することによって調製することができる。代表的な流動性液剤は、活性成分約４０重量％を、ゲル化剤、たとえばベントナイト約２重量％、分散剤、たとえばリグノスルホン酸ナトリウム３重量％、ポリエチレン　グリコール１重量％および水５４重量％を混和することによって調製することができる。代表的な乳化性濃縮物は、活性成分約５〜２５重量％を、Ｎ−メチル−ピロリドン、イソホロン、ブチル　セロソルブ、メチルアセテートなどの約６５〜９０重量％中に溶解し、ここに非イオン性界面活性剤、たとえばアルキルフェノキシ　ポリエトキシ　アルコールなど約５〜１０重量％を分散させることによって調製することができる。この濃縮物は、液状噴霧液として施用する場合に、水を分散させる。イソフラボノイド化合物を土壌処理に使用する場合には、この化合物を製造し、粒状生成物として施用することができる。この粒状生成物の調製は、活性化合物を溶剤、たとえば塩化メチレン、Ｎ−メチルピロリドンなどの中に溶解し、このようにして調製された溶液を粒状担体、たとえばトウモロコシ穂軸粉砕物砂、アタパルガイド、カオリンなどの上に吹付けることによって行なうことができる。このようにして調製された粒状生成物は一般に、活性成分約３〜２０重量％および粒状担体約９７〜８０重量％からなる。イソフラボノイドはまた、除草剤または農薬と混合することもでき、これは除草剤または農薬の施用の前または施用後に、植物に使用する。ＶＡＭ菌類は、イソフラボノイドの存在の下に「緩和剤」として機能し、除草剤または農薬により生じる損傷を解消する。イミダゾリノン除草剤、たとえばイマザクイン（ｉｍａｚａｑｕｉｎ）およびイマゼサピル（ｉｍａｚｅｔｈａｐｙｒ）など、およびベンジメタリン（ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ）によって生じる損傷は本発明の方法によって、特に解消される。この畑に植えられた作物に損傷を生じさせるのに充分の除草剤残留レベルを示す畑に除草剤を施用した後に、その年のうちに、この組成物を施用した場合に、最良の結果が見られる。式（式中、Ｒ１，Ｒ，およびＲ１は、１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシ基からなる群から選ばれる）。で示される新規化合物は、公知のヒドロキシ置換イソフラボノイド化合物に比較して増大した水溶性を育する。これらの新規化合物を製造するには、表１中の（２）などのヒドロキシ　フラボノイド化合物を、塩基または酸および有機溶剤、たとえばジクロロメタン、アセトンなどの存在の下に、アルキル　ハライド（タロライド、ブロマイドまたはヨーダイト）との反応によってアルキル化する。この混合物を数時間、好ましくは１２〜２４時間還流させる。基本的に、この反応はフェノール化合物の慣用のアルキル化反応である。表１に記載のイソフラボノイド化合物は、ノく一アルコキシイソフラボノイド化合物を除いて市販されている。これらのパーアルコキシ化合物は表１中のイソフラボノイド化合物のアルキル化によって製造した。イソフラボノイド化合物を、先ずクローノく−の根から単離し、次いでホルモンネチンおよびビオカニンへとして同定した。イソフラボノイド化合物は、表２に示されている一般経路によって、クローバ−の根から単離した。天然および合成のホルモンネチンのスペクトル　データを図３〜図６に示す。表　２凍結乾燥クローバ−〇根ＭｅＯＦ（抽出液純粋な化合物生物検定（ａ）ＴＬＣは薄層クロマトグラフィである。ＴＬＣからの２種の活性化合物を化学的に特徴確認した。高Ｒｆの化合物、クローバ−Ａは、ホルモンネテン、７−ヒドロキシ、４°　−メトキシ　イソフラボンと同一であることが見い出された。これは、図３〜図６にホされているように、　ＩＨ１”Ｃ−ＮＭＲ１広範囲ｃｏｓｙおよび合成ホルモンネチンとの直接比較によって確認された。低Ｒｆの化合物はＣＨＣｌ、／ＭｅＯＨで溶出し、淡褐色の固形物として得られた：　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＩ　。／ＤＭＳＯ）δ　８．００　（ＩＨ，ｓ、Ｈ−２）。７．４０　（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８Ｈ！、Ｈ−２°。Ｈ−６°）、６．９０　（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ　。Ｈ−３’　、Ｈ−５°）、６．３５　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ−８）、６．２５　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１．８Ｈ２，Ｈ−６）、３．７５　（３Ｈ，Ｓ、ＯＭｅ）：分子イオン：ｍ／ｚで２８４．これらのデータを、ビオカニンＡに関して報告されている数値と比較し、クローバ−根から単離された、この低Ｒｆ化合物がまた、ビオカニンへであることを確認した。これら２？！ｌの化学的に同定された化合物は、７−ヒドロキシ、４゛　−メトキシ　イソフラボン（表１．４）（ホルモンネチン）および５，７−ジヒドロキシ、４′−メトキシ　イソフラボン（表１．２）（ビオカニンＡ）であった。これらの化合物は０．１〜４００　ｐｐｍの濃度範囲で活性であり、この使用は知られていない。初めに、Ｌａｄｉｎｏ白クローバ−の実生からの根浸出物を、表３に示されているリンを含有していない栄養溶液中で生長させた２週間令の当該植物から得た。ＫＮＯｓ　６０６．６０Ｃａ　（ＮＣＬ）２　”４Ｈ２０６５６，４０Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ，０２４０，８０Ｈｚ　ＢＯ３２，８６ＭｎＣ１ｔ　”４Ｈ２０１，８１ＺｎＳＯ４＋　７Ｈ２００，２２ＣｕＳＯ＝　・５Ｈ２００，０８Ｈ＊Ｍｏ０．　０．０２Ｆｅ−酒石酸塩　５．００ｐＨは、Ｏ，ＩＮ　ＮａＯＨにより１）Ｈ６，８に調整。これらの実生の根浸出物を凍結乾燥させ、次いで室温でＭｅＯＨにより抽出した。このＭ　ｅ　ＯＨ抽出液を減圧で乾燥させ、生成した粗製抽出液をシリカ　ゲル薄層プレート上で４：ｌ　クロロホルム−メタノール溶剤系を用いてクロマトグラフィに付した。長波長および短波長の紫外部光（２５４ｎｍおよび３６．６ｎｍ）で検出された３つのバンドを１　：　Ｉ　Ｍｅ　ＯＨＣＨＣ１ｓを用いて別々に溶出し、次いで蒸発乾燥させた。これらの純粋フラクションを、寒天培地におけるＶＡＭ菌・糸の増殖を刺激する、それらの能力に関して生物検定を行ない、この能力に関して活性であることが見い出された。この浸出物フラクションは低濃度の活性化合物を含有しているので、これらの化合物を得るために、クローバ−の根を抽出した。クローバ−根は、非殺菌砂中で、蒸留水を毎日水やりして生長させた、２週間以下の年令の植物から得た。根は５°Ｃで凍結乾燥させ、次いで室温でＭｅＯＨにより抽出した。Ｍ　ｅ　ＯＨ溶剤を４０°Ｃで減圧の下に除去し、生成した抽出液をシリカ　ゲル上でＭ　ｅ　ＯＨを用い、固体相抽出によって部分的に精製し、回転蒸発器を用いて蒸発乾燥させ、次いで生成した生成物をテープ付き薄層プレート（シリカ、４：１　クロロホルム−メタノール）上で精製した。根浸出物と同一のＲｆ値を有する３つのバンドを採取し、抽出し、次いで前記と同様に処理する。得られた純粋な化合物は、ＶＡＭ生物学的活性に関して、根浸出物からの化合物と同一であった。最高のＲｆ値を育する化合物および真中のＲｆ値を有する化合物である２種の化合物を選択し、直接同定およびＶＡＭ菌類増殖に関して試験した。これらの化合物の特徴は’Ｈ−ＮＭＲ，１３Ｃ−ＮＭＲおよびＭＳ法により確認し、下記に示すように、環Ｂに結合した１個のメトキシ置換基および埋入に結合したヒドロキシ基（１個または２個以上）を有するイソフラボン化合物であることが見い出された：Ｈ−ＮＭＲスペクトル分析は、この活性化合物が７−ヒドロキシ−４′−メトキシイソフラボン（ホルモンネチン、表１の化合物４）および５．７−シヒドロキシー４°　−メトキシイソフラボン（ビオカニンＡ１表１の化合物２）であることを示した。子および他の種類の植物からの種子の表面を７０％エチル　アルコールで３０秒間、次いで１ｍＭ　ＨＣｌ中（７）０．１％　ＨｇＣ１２で５〜７分間殺菌し、次いで無菌蒸留水で徹底的に洗浄した。これらの種子を次いで、無菌ペトリ皿中の含水フィルター紙上におき、暗所において２３°Ｃて２日間インキュベートし、発芽させた。このペトリ皿から、５０個の実生を、殺菌Ｈｏａｇｌａｎｄ栄養溶液１００ｍ１を含存し、リンを含有していない、無菌ガラス皿中の含水チーズクロスに移した。これらの皿を無菌の透明プラスティック製袋の中に入れ、気密にシールし、次いで１６時間の昼間長さの蛍光光（４，５ルツクス）の下でこれらの実生を生育した。Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液は１週間毎に変えた。１週間の間隔で、これらのクローバ−およびその他の実生の根から浸出物または抽出物を採取した。１週間毎に、溶液を集め、濾過殺菌し、元の容積のｌ／１０の量まで回転蒸発させ、再び殺菌濾過し、凍結乾燥させ、次いで４℃で貯蔵した。（２）化学的特徴種々の植物源からのイソフラボノイド化合物を含有する活性フラクションの化学的特徴を、確立されている方法に従い調べた。精製または特徴確認の各段階において、抽出液の一部分を取り出し、ＶＡＭ菌類増殖刺激活性を測定した。この生物検定の結果は、イソフラボノイド化合物のもう一つの化学的特徴を示す。例２：クローバー根から単離された化合物、ホルモンネチンおよびビオカニンＡの化学性にもとづいて、追加の市販のフラボノイド化合物のＶＡＭ生物学的活性を、ホルモンネチンおよびビオカニンＡとともに試験した。これらの実験は、池の化合物がＶＡＭｍ類１！！集落形成を刺激し、引続いて植物を生長させるかに関して測定するために行なった。クローバ−植物を使用し、Ｇｌｏｍｕｓｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ　または類似菌類Ｇｌｏｍｕｓ　ｆａｓｃｉｃｕｌａｔｕｍを感染させた基質で生長させた。殺菌した発芽前のクローバ一種子を４つの各６０ｃｃセルを含むプラスティック製挿入物中の砂土環ミックス（２：　１）中に移植した。４−セル単位のそれぞれを、９０Ｘ１５ｍｍプラスティック製ペトリ皿の底におき、化学的汚染を回避し、水かけを容易にした。ＶＡＭ球芽珠芽土壌接種により感染させた。基質は、中性ｐＨ１低交換能および低階中の肥よくレベルを育していた。このＶＡＭ土壌接種物は少なくとも４ケ月間、温室に保持されたポット培地から得た。乾燥した接種物を基質と充分に混合し、土壌ミックスｔｇ当り２〜５個の胞子の範囲の最終胞子濃度を得た。種子を植える前に、クローバ−Ａ（単離された天然のホルモンネチン）または他の純粋化学物質の５　ｐｐｍ溶液５〜１０ｍ１を各セルに分配した。この挿入物をプラスティック製トレイにおき、１日当り日照１４時間＋１日当り暗時１０時間にセットした完全光生育箱に移した。植物には、１日２回、蒸留水を与え、４週間生長させ、その後で収穫した。生長応答は、成長新鮮重量として測定した。土壌から根を分離し、ＶＡＭ根集落形成の評価に使用した。ａｔに示されているように、ホルモンネチン（天然形および合成形の両方）およびビオカニンＡは、植物をＶＡＭ菌類感染基質で生長させた場合に、ＶＡＭ菌類根集落形成およびクローバ−植物生長を刺激した。他の無効の被験化合物、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）　、７−８ジヒドロキシフラボン、クリシン（ｃｈｒｙｓｉｎ）　、ルテオリン（Ｉｕｔｅｏｌｉｎ）、ナリンゲニン（口ａｒｉｎｇｅｎｉｎ）およびヘセペルチン（ｈｅｓｅｐｅｒｔ　ｉｎ）は、植物生長またはＶＡＭ菌類根集落形成の改善に失敗した。図７には、ビオカニンＡおよび類集落形成パーセントに対する効果が示されている。同様の生長および菌類憬集落形成における増加か、トウモロコシおよびコウリャンに関して、ホルモンネチンおよびビオカニンへによる処理後に見い出された。例３：ホルモンネチン（Ｆｏｒｍ）、ビオカニンＡ（Ｂ　ｉ　ｏ）またはＶＡＭ菌類Ｇｌｏｍｕｓ　ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ（Ｍｙｃ）（７胞子／土壌１ｇの添加割合）の存在または不存在における、非殺菌畑土壌で生育させた、トウモロコシ実生に関する生長が図８および図１０に、そして除草剤による損傷レベルが図９に示されている。この畑土壌は除草剤イマザクイン１３ｐｐｂの初期残留レベルおよび約７胞子／土壌１ｇの固有のＶＡＭ菌類レベルを有していた。土壌から三番目の葉の葉面積測定を、発芽前トウモロコシ種子を生育箱中の３．５“×６“スチロフォームポット内の畑土壌中に植付け、生長させた後の２週問および３週間後に行なった。この生育箱は３０°Ｃの日中温度および２５℃の夜間温度を存し、かつまた１日当り昼１４時間＋１日当り暗時１０時間であった。図８は、ホルモンネチン（−Ｍｙ　ｃ　Ｆ　ｏ　ｒｍ）　、ビオカニンＡ　（−Ｍｙ　ｃ　Ｂ　ｉ　ｏ）またはＶＡＭ菌類Ｇｌｏｍｕｓｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓで処理した後の２週問および３週間の時点におけるトウモロコシ葉の増加面積が対照植物（ −ｍｙｃ対照）と比較して示している。付加ＶＡＭ！１類接種物とともにビオカニンＡまたはホルモンネチンを添加すると（＋ＭｙＣＢｉＯまたは＋ＭｙｃＦｏｒｍ）、トウモロコシ葉面積はまた、増加した。図９には、移植後の２週問および３週間の時点における、図８（上記）に記載のトウモロコシ実生の除草剤による損傷が示されている。この損傷評価尺度は葉の萎黄化の強さにもとづき、０＝損傷なしから５＝重篤までの範囲で示すものである。ホルモンネチンおよびビオカニンＡは両方ともに、これらの化合物で処理されていない植物に比較して、トウモロコシ植物の除草剤による損傷を減少させた。図１Ｏには、４週間の時点における、図８に記載のトウモロコシ植物の収穫物の乾燥重量に係り、ＶＡＭ接種されていない対照と比較した増加パーセントが示されている。ホルモンネチンまたはビオカニンＡによる処理はトウモロコシ植物の収穫物の乾燥重量を増加した。数種の菌類のＶＡＭ胞子を、殺菌土壌を含有するポットで、増殖させる胞子の存在の下に、コウリャン植物を生長させることによって得た。これらの胞子を発芽させ、生長している植物に感染させ、３〜４ケ角の間に、土壌中に新しい胞子を産生ずる根菌感染を生じさせた。生じる胞子を実験目的に使用した。胞子分裂後に、ポット培養物を、使用前の少なくとも３０日間、４℃で貯蔵した。このＶＡＭ感染土壌を湿らせて篩分けし、土壌の大部分および篩上に集められた有機物片を除去した。次いで、各種濃度のＦｉｃｏｌｌ溶液中で改良遠心−浮遊技法を使用し、土壌残片から胞子を単離した。パスツールとベットを解剖顕微鏡の下に操作することによって、胞子懸濁液から有機物残片をさらに除去した。これらの胞子を次いで、２９４クロラミン（Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ）　−Ｔ　（ｗ／　ｖ　）＋ストレプトマイシン２００　ｐｐｍを含有する溶液で表面殺菌し、その後発芽および菌糸生長試験に使用した。２、発芽および菌糸生長生物検定ホルモンネチンおよびビオカニンＡを、培地容積当り成る範囲の濃度で、寒天に加えた。ＶＡＭ胞子の発芽および菌糸生長を追跡した。発芽は、胞子の径が少なくとも２倍である発芽管と定義する。菌糸生長効果の用語は発芽する胞子だけの平均菌糸長さを意味するものとする。生物検定時間は４週間から２週間に短縮した。菌類増殖の生物検定法には２種の追加の方法がある。第一の方法は液状培地を使用する方法であり、第二の方法は栄養物質含有無菌砂上に重ねられたＶＡＭ胞子を含有する膜サンドイッチの使用を包含している。これらの両方法は、１週間で類似の結果をもたらした。寒天培地からの結果ホルモンネチン（２５０ｍｇ）およびビオカニンＡ（５００ｍｇ）を別々に、アセトン（２５ｍｌ）中に溶解＼し、室温で無水Ｋｔ　ＣＯｓ　（３０ｇ）とともに攪拌した（５分間）。上記反応混合物に、硫酸ジメチル（各３　ｍｌ）を加え、１８時間還流させた。この反応混合物を冷却し、別々に濾過し、次いでメタノールとともに回転蒸発させた。粗製生成物をメタノールから結晶化させ、次いで減圧の下に乾燥させた。このメチル化生成物の融点をコフラーホットステージ装置で測定し、補正はしない。このパーメトキシイソフラボノイド化合物の物理学的性質を下記に示す：融点、７−メトキシ、４′−メチル　イソフラボン±１５５〜１５６℃（白色板状結晶）、分子量＝２８２融点、５，７−ジメトキシ、４゛−メトキシ　イソフラボン＝１５８〜１６０℃ （淡黄色板状結晶）、分子量＝３１２溶解性：５，７−ジメトキシ、４′−メトキシ　イソフラボンおよび７−メトキシ、４′−メチルイソフラボン＝メタノール、メタノール−水に可溶、ＣＨＣｌ、中に部分的に可溶。これらのイソフラボノイド化合物が増大された水溶性を有することは、これらの化合物を特に有用にする。例６：表２に示されているイソフラボノイド化合物、たとえばホルモンネチンを包含する、その他のヒドロキシのメチル化に例４の方法を使用することができる。この方法によって、公知の化合物が生成される。前記の記載は本発明を説明するものにすぎず、本発明は以下に示す請求の範囲によってだけ制限されるものとする。へ（′　ｒＯでλ′らＱトｖＡＭ　ｌ；シ＃４千′ンノブ＼ｃ（７ａ）１罠イ爲レベ、し　（Ｏ・ブシ：Ｓ＝童バ烏９惟（才１甲ワつ専乞脈１１１ヒ　（す１デ、子、しこ少１づ）５ツ１０γｔ）国際調査報告　ＰＣ’ｒ／１Ｊｓ９０１０６７１４１１１１−＋ｔａ神Ｌ１ｎｌ　Ａ峠ｋｔｊｌ−Ｎａ、　ＫＴ／Ｌ’５９０１０６７１４Ｆｃｒ／ＵＳ９０１０６７１４ｙ　ＪＰ、　Ａ、　６３−８７９７３　（ＫＹＯＷＡ　）ｔＡＫＫｏ　Ｘ０ＥＹＯＫｌ（１１９Ａｐｒｉｌ　１ｓａａ、３．２２−２８ｙ　Ｒ，Ｐａ１ａｃｉｏｓ　ａｔ　ａｌ、　ａｄ、　”ＭＯｌａＣｕｌａｒ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｏｆ　Ｐｌａｎｔ−１，［１−１５Ｍ１ｃｒｏｂｅ工ｎｔ＊ｒａｃｔｉｏｎｓ、”　Ｍ＋ａｙ　１９８Ｂ、　ｐ、７３−９１，９４−９５゜ＦＣＴ／郭９０１０６７１４Ｐ、Ｙ　ＵＳ、Ａ、４，９４５，０５９　（ＯＫ：ＨＥＴ　ＡＬ）　コＬ　Ｊｕｌｙ　１９９０．　１，３．８−１５．２２−２８ＰＣＴ／υ！９９０１０６７１４ υ、Ｓ、＋　４フ／１．１，５７．６；　７１／７．フ７，８Ｂ、９２，９４．Ｌ２１；　５１４／１００；　５４９／４０３１ＭｕｕＭｍｌＩｌｌｉｌａｌｋｌａｂｓ＊１１ｖ　Ｘ１ｎｌＱＱｎＫ−ｆｆｌムＰＣＴ／υ５９０１０６７１４、Ａｎ、ＡＯＩ％ａＴ　Ｔｏ　ＰＡＲＴ　Ｖ工（ｒｏｍ　ＰＣＴ／ＩＳＡ／２１０．　ｘｐｐｌｅｍｅｎｃａｌ　５ｂｅｅｔ）にｒｏｕｐ　ｎ７．　ＣＩＪＩｉｍｓ　７，４３，４４　ｄｒａｗｎ　ｔｏ　ａ　ｎｘｔｈｏｄ　ｔｏ　ａｕｅｖｉａｔａ　ｐａｓｔｉｄｄ＝@ｏｒ　ｈａｒｂｉｃｉｄｅｉｎｊｕｒｙ、　ｅｌａｓｇ　７１　ｇｕｂｃｌａｓｓ　１２１゜Ｇｒｏｕｐ　Ｖ、Ｃｌａｉｍｓ　７，４３，４４　ｄｘｔｖｎ　ｔｏ　ａ　ｍａｔｈｓセｏ　ａｕｅｖｉａｔｅ　ｐａｓｔｉｃｉｄｅ　ｏｒ@ｈｅｒｂｉｃｉｄｅｉｎｊｕｒ）ｙ、　ｅｌａｓｓ　５１４５ｕｂｃｌａｓｓ　Ｌｏｏｋ。Ｇｒｏｕｐ　ＸＸ　ｉｓ　ａｎ　ａｄ４ｉｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔ。Ｇｒｏｕｐｓ　ＸＸ１．ＩＶ　ａｎｄ　ｖ　ａｒ＠ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｕｓｅ。

Claims

【特許請求の範囲】１．胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類の存在下における植物物質の生長を刺激する方法において、植物物質をイソフラボノイド化合物の仔在の下に、上記菌類とともに生長させることからなる改良方法。２．植物の生長を刺激するために有用な植物物質組成物であって、（ａ）イソフラボノイド化合物、および（ｂ）植物物質、からなり、この植物物質は、ＶＡＭ菌類の存在の下に生長させた場合に、この植物物質の植物への生長を刺激する量で、上記化合物を添加剤として含有している、組成物。３．植物生長の刺激に有用な、胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類の胞子を含む、当該菌類を増殖させる方法であって、胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類を、産生される当該菌類が植物の生長を刺激する量のイソフラボノイドの存在の下に増殖させることからなる方法。４．胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類の存在の下における植物物質の生長を刺激するために有用な農業用組成物であって、および（ｂ）農業用担体からなり、上記イソフラボノイド化合物が担体の０．１〜４００重量％の量で存在しており、この組成物は上記菌類の存在の下に植物物質の生長を刺激するものである、農業用組成物。５．イソフラボノイド化合物の存在の下に増殖させた胞子形成−アルブスクラ− 菌根系菌類を含有する菌類組成物。６．（ａ）イソフラボノイド化合物、および（ｂ）このイソフラボノイド化合物によって刺激される胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類、の混合物を含む、菌類組成物。７．農薬または除草剤が施用されており、植物に対して毒性のレベルで存在する土壌において、胞子形成−アルブスクラ−菌根系菌類の存在の下における農薬または除草剤による損傷を軽減する方法であって、植物物質をイソフラボノイド化合物の存在の下に、上記菌類を用いて生長させる方法。８．胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類の存在の下における植物物質の生長を刺激する方法において、植物物質を、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物の存在の下に、上記菌類とともに生長させることからなる改良方法。９．胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類の存在の下における植物物質の生長を刺激する方法において、植物物質の生長を刺激する量の、ホルモノネチンおよびビオカニンＡ、ならびにそれらの混合物からなる群から選ばれるイソフラボノイド化合物の存在の下に、植物物質を上記菌類とともに生長させることからなる改良方法。１０．胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類を含有する土壌または栽培用ミックスに植えられている植物の生長を刺激する方法であって、ホルモノネチンおよびビオカニンＡ、ならびにその混合物からなる群から選ばれるイソフラボノイド化合物を、植物の生長を刺激する量で土壌に施用することからなる方法。１１．イソフラボノイド化合物を、土壌または栽培用ミックスに、約０．１〜４００ｐｐｍの量で施用する、請求項１０の方法。１２．上記菌類をイソフラボノイド化合物とともに施用する、請求項１１の方法。１３．植物が、これらの菌類によって集落形成する根を有する植物からなる群から選ばれる、請求項１０の方法。１４．種子または実生を植付け、この植付け時点付近でイソフラボノイド化合物を施用する、請求項１０の方法。１５．種子または実生に、イソフラボノイド化合物を付着させる、請求項１４の方法。１６．植物の生長の刺激に有用な植物物質組成物であって、（ａ）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物、（ｂ）植物物質、からなり、この植物物質は、ＶＡＭ菌類の存在の下に生長させた場合に、この植物物質の植物への生長を刺激する量で、上記化合物を添加物として含有している、植物物質組成物。１７．種子または植付けられた種子の球芽からの植物の生長を刺激するために有用な植物物質組成物であって、（ａ）ホルモノネチンおよびビオカニンＡ、ならびにそれらの混合物からなる群から選ばれるイソフラボノイド化合物、および（ｂ）種子または球芽、からなり、この種子または球芽は、植付けられた場合に、この種子または球芽の生長を刺激する量で、上記化合物を添加物として含有している、植物物質組成物。１８．種子または球芽が、胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類によって集落形成する植物の全部からなる群から選ばれる、請求項１７の組成物。１９．胞子形成−アルブスクラー菌類が種子または球芽と混和されている、請求項１５の組成物。２０．イソフラボノイド化合物が種子または球芽に付着されている、請求項１７の組成物。２１．イソフラボノイド化合物が種子または球芽中に含浸されている、請求項１７の組成物。２２．植物生長を刺激するために有用な菌類の胞子を包含する胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類の増殖方法であって、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物を、産生される菌類が植物の生長を刺激する量で存在させ、当該胞子形成− アルブスクラー菌根系菌類を増殖させることからなる方法。２３．植物生長の刺激に有用な胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類を、菌類胞子分裂を含み、増殖させる方法であって、ホルモノネチンおよびビオカニンＡ、ならびにそれらの混合物からなる群から選ばれるイソフラボノイド化合物を、産生される菌類が植物生長を刺激する量で存在させ、当該胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類を増殖させることからなる方法。２４．菌類が植物の根を集落形成する菌類からなる群から選ばれる、請求項２３の方法。２５，約０．１〜４００ｐｐｍの量の上記化合物を、菌類増殖用培地中に付与する、請求項２３の方法。２６．上記培地が、炭素源、窒素源および菌類の増殖を刺激するビタミン類およびミネラル類を含有する、請求項２５の方法。２７．上記培地がこれらの菌類の増殖を刺激する植物物質を含有する、請求項２５の方法。２８．上記培地が、炭素源、窒素および菌類の増殖を刺激するビタミン類およびミネラル類を含有しており、そしてまたこの培地が菌類の生長を刺激する植物物質を含有する、請求項２５の方法。２９．胞子形成−アルブスクラ−菌根系菌類の存在下における植物物質の生長を刺激するために有用な農業用組成物であって、（ａ）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示される、本質的に純粋なイソフラボノイド化合物、および（ｂ）農業用担体、からなり、上記イソフラボノイド化合物が担体の０．５〜４００重量部の量で存在しており、当該組成物は、菌類の存在下における植物物質の生長を刺激するものである、農業用組成物。３０．胞子形成−アルブスクラ−菌根系菌類の存在下における植物または植物の種子の生長を刺激するために有用な農業用組成物であって、（ａ）本質的に純粋なホルモノネチンおよびビオカニンＡならびにそれらの混合物からなる群から選ばれる、実質的に純粋なイソフラボノイド化合物、および（ｂ）農業用担体、からなり、上記イソフラボノイド化合物が、担体の０．１〜４００重量部の量で仔在しており、当該組成物は、菌類の存在の下における植物または種子の生長を刺激するものである、農業用組成物。３１．担体が胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類の増殖を刺激する栄養物質を含有している、請求項３０の組成物。３２．胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類をさらに含有する、請求項３０の組成物。３３．培地中の植物の生長を刺激する方法であって、（ａ）胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類と、ホルモノネチンおよびビオカニンＡ、ならびにそれらの混合物からなる群からの化合物を含有する培養溶液中に、植物または植物の細胞を加え、次いで（ｂ）この培地溶液中で植物を生長させる、ことからなる方法。３４．植物が上記菌類によって集落形成するものである、請求項３８の方法。３５．フラボノイド化合物の量が溶溶中で薬０．１〜４００ｐｐｍである、請求項３３の方法。３６．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物の存在の下に増殖させた胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類を含有する菌類組成物。３７．上記イソフラボノイド化合物がホルモノネチンおよびビオカニンＡからなる群から選ばれる、請求項３６の組成物。３８．上記菌類が植物物質と混和されている、請求項３６の組成物。３９．（ａ）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物、および（ｂ）胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類、を混合物で含む、菌類組成物。４０．上記イソフラボノイド化合物が、ホルモノネチンおよびビオカニンＡからなる群から選ばれる、請求項３９の組成物。４１．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシ基からなる群から選ばれる）で示される化合物。４２．Ｒ１、Ｒ２およびＲ３がメトキシである、請求項４１の化合物。４３．土壌中に存在する毒性レベルの農薬または除草剤による植物に対する損傷を軽減する方法であって、胞子形成−アルブスクラー菌根系菌類および式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、水素、ヒドロキシおよび１〜３０個の炭素原子を有するアルコキシからなる群から選ばれる）で示されるイソフラボノイド化合物の存在の下に植物を生長させ、これによって上記土壌における植物の生長を増大させることによる上記軽減方法。４４．上記イソフラボノイド化合物かビオカニンＡおよびホルモノネチンならびにその混合物からなる群から選ばれる、請求項４３の方法。