JPH0450292B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はヒトおよび動物についてのがん症状の
治療および予防に用いる医薬組成物並びに同組成
物の製法に関する。 ハイポキシダセアエ科の植物の抽出物はリンパ
球白血病の治療に関するマウスP388を用いての
生体内選別試験において活性を示すことが見出さ
れている（“Distribution of Anticancer
Activity in Higher Plants”，A.Barclayおよび
R.E.Purdue，Cancer Treatment Reports
1976，60 1081−1113）。本明細書の目的上は、
リンパ球性白血病はがん症状とはみなしておら
ず、たとえみなす場合があるとしても、そのよう
な症状は本発明の範囲からは除外している。ハイ
ポキシス属の抽出物も抗炎症及び前立腺肥大治療
薬として使用されてきた（英国特許第1595240号、
同第1417272号、同第1259503号）。 本発明によれば、がん症状の予防または治療に
有用な組成物は下記に示す式の化合物を含み、
さらに好ましい形態においては、ハイポキシダセ
アエ科の植物の水、アルコール、水／アルコール
混合液、その他の溶剤による抽出物を含む。この
点ではハイポキシダセアエ科のすべての種が有用
であると信じられるが、特に良好な結果はハイポ
キシス アクミナータ、ハイポキシス ニチダ、
H.オブツサー ニチダ、H.ラチフオリア、H.リ
ギデユリ、H.ルーペリなどのハイポキシス属の
種から選んだ抽出物を用いて得られている。 理論に拘束されたくないが発明者のみる限りで
はそのような抽出物の制がん剤としての有効性は
下記の化合物： およびそのグリコシド誘導体の存在によるもので
ある。 服用量には個人差があり、またがん症状の重症
度によつても異なる。しかしながら、１日の服用
量として植物の抽出により得た粉末600〜2400mg
あるいは化合物（）の量で300〜1200mgが有効
である。 既に述べたように抽出は水またはアルコールま
たは両者の混合液で行なうことができる。下記の
実施例は本発明につながる抽出法を例示するもの
である。 実施例 １ ハイポキシス ルーペリの球茎の新鮮な粉砕物
（10Kg）をエタノール（25）を用いて室温で48
時間抽出した。過、真空濃縮に続き凍結乾燥を
行なつて褐色の粉末（792ｇ）を得た。この未精
製物質（10ｇ）を、溶媒としてMeOH−H₂Ｏ
（50：50）を用いた逆相カラム（PrepPAK−
500／C₁₈）を用いた調整用高速液体クロマトグラ
フイーによつて分離し、同物質を高濃度に含む濃
縮物6.9ｇを得た。最終的な分離はこの物質の10
ｇ分量を、ブタン−２−オール−C₆H₆−H₂Ｏ−
MeOH（４：３：２：１）を溶媒として用いたSi
ゲル60カラム（230−400メツシユ 45mm×600mm）
で分離することにより行なつた。典型的な例で示
せば、10ｇ分量はブタン−２−オールにより7.9
ｇ（新鮮な球茎に対して4.0％の結晶質の（）
を生じた。m.p.147−148℃、〔α〕²⁰、−110°（τ、
メタノール中0.45）。（実測値：Ｃ，54.18；Ｈ，
6.01；C₂₉H₃₄O₁₄・2H₂Ｏとしての計算値：Ｃ，
54.20；Ｈ，5.96；H₂Ｏ，5.61％）；ν_nax（KBr）：
3150−3500（Ｈ−OH結合）cm^-1ν_nax（MeOH）：
247，257および287nm；δ（CD₃OD），3.10−4.05
（14H，ｍ，２プロントがＣ−３上におよび12グ
ルコシルプロトン）、4.75（2H，ｍ，２プロトン
がＣ−１上に），6.06（Ｈ，dt，Ｊ＝15.0およびＪ
＝5.0Hz，プロトンＣ−４上に），6.53（1H，ｄ，
Ｊ＝15Hz，プロトンＣ−５上に）、6.65−6.90
（4H，ｍ，AromH），7.07（2H，ｄ，AromH）。 実施例 ２ 最良の本抽出法および抽出条件を評価するた
め、以下の抽出を行つた。 ａ ハイポキシスルーペリ（Hypoxis rooperi）
のすりおろした球茎（10Kg）を空気乾燥し、生
成物（2.95Kg）を沸騰水（20）で１時間抽出
した。この抽出物を噴霧乾燥すると、部分的に
水溶性の薄茶色の粉末で化合物（）を20％含
むもの（550ｇ）が得られた。 ｂ ハイポキシスルーペリの柔らかくした球茎か
ら固体物質を遠心分離により除いて得られたガ
ム質を冷水（1.51，５℃）で希釈し、遠心分離
されたもの（４）を噴霧乾燥すると部分的に
水溶性の薄クリーム色の粉末で化合物（）を
30％含むもの（900ｇ）を得た。 ｃ ハイポキシスオブツサ−ニチダ
（Hypoxisobtusa−nitida）のパルプ状球茎
（10Kg）を６時間の間時々攪拌しながら水（15
，25℃）で抽出した。過した抽出物
（12.78）を凍結乾燥すると、部分的に水溶性
の薄茶色の粉末で化合物（）を35％含むもの
（757ｇ）が得られた。残りの湿潤パルプ（10.8
Kg）を沸騰した無水エタノール（10.8Kg）で20
分間抽出した。過した抽出物を真空下で濃縮
して大部分をアルコールを除き、水（１）で
希釈し、次いで凍結乾燥すると、ほとんど完全
に水溶性で薄茶色の粉末（361ｇ）で化合物
（）を43％含むものが得られた。 ｄ ハイポキシスオブツサ−ニチダのパルプ状球
茎（10Kg）を沸騰水（15）で５分間抽出し
た。液（10.4）を凍結乾燥すると、部分的
に薄茶色の粉末（742ｇ）で化合物（）を37
％含むものが得られた。 ｅ ハイポキシスオブツサ−ニチダのパルプ状球
茎（10Kg）を無水エタノール（25，25℃）で
66時間の間連続攪拌しながら抽出した。液
（23）を真空下で濃縮して大部分のアルコー
ルを除き、水（１）で希釈し次いで凍結乾燥
すると水溶性で暗褐色の粉末（）（630ｇ）で
化合物（）を45％含むものが得られた。残り
の湿つたパルプ（8.05Kg）を沸騰している無水
エタノール（20）で抽出した。上記の通りに
処理した液を凍結乾燥すると、ほとんど完全
に水溶性で暗褐色の粉末（）（99ｇ）で化合
物（）を42％含むものが得られた。 ｆ ハイポキシスオブツサ−オブツサ（H.
obtusa−obtusa）の細片状の球茎を凍結乾燥
して乾燥した物質（3.086ｇ）を得た。この乾
燥した物質を細粉しおよび一部（300ｇ）を沸
騰している50％エタノール水溶液（５）で５
分間抽出した。液を上記の通り処理しおよび
凍結乾燥して水溶性の薄クリーム色の粉末で化
合物（）を35％含むもの（116ｇ）を得た。 ｇ 若いハイポキシスオブツダ−ニチダのパルプ
状球茎を沸騰水（５）で５分間抽出した。
液を凍結乾燥すると部分的に水溶性の薄茶色の
粉末（54ｇ）で化合物（）を32％含むものが
得られた。 ｈ 上記工程ｇに記載された若いハイポキシスオ
ブツダ−ニチダ球茎の抽出で、煮沸工程を20分
に延長すると、比較的不溶性の暗褐色の粉末
（82.3ｇ）で化合物（）を27％含むものが得
られた。 ｉ 新鮮なハイポキシスアクミナタ
（Hypoxisacuminata）球茎をパルプにして直
接へタノール中に室温で入れた（エタノール２
当り球茎1.5Kg）。パルプを１時間攪拌した後
過した。液を真空下（30Kpa）で昇温下
（70℃〜85℃）で蒸発させた。得られた残渣を
凍結乾燥して黄褐色状生成物を新鮮な球茎から
７−10％の収率で得た。この抽出物に関して化
合物（）の含量は42−57％の間で変化した。
これらの収率は季節の変化に依存した。 ｊ 新鮮なハイポキシスアクミナタ
（Hypoxisacuminata）の球茎を細片状にして
直接液体窒素に入れた。凍結した細片を凍結乾
燥しておよび細粉して微細粉末にした。次いで
この粉末をアルコール水溶液（水１部に対しエ
タノールまたはメタノール２部）で植物の粉末
１Kg当り６のこの水溶液を用いて抽出した。
30分攪拌した後、混合物を過した。実施例２
の（）に記載したように液からこの溶液を
蒸発すると黄褐色の生成物を最初の新鮮な球茎
から９〜12％の収率で得た。この抽出物に関す
る化合物（）の含量は49〜56％の間で変化し
た。収列は季節の変化に依存する。 ｋ スピロキセンシレキテリ
（Spiloxeneschlechteri）のパルプ状球茎をエ
タノール水溶液で処理すると、相当量の化合物
（）を含む抽出物を得た。 比較薄層クロマトグラフイおよびHPLC解析に
より上記評価を得た。 上記実施例において、溶剤がメタノール水溶液
又はエタノール水溶液であり、抽出を低温で短時
間行う場合、格別に優れた収率が得られることが
判る。この結果は、これまでに得られている結果
と相反する。例えば、本発明の出願人と同一人の
特開昭52−18199の実施例３（ａ）、３（ｂ）および
３（ｃ）では測定不可能な又は極く低い収率のス
テロリンが生産されたに過ぎない。事実、その当
時にはそれらの方法が他の化合物（即ち、本発明
の化合物）を高収率で得られることに気付いてい
なかつた。 実施例 ３ 本発明の抽出液の活性を示すために、Ｍ（52）
Ｂ細胞培養系についてインビトロで細胞傷害試験
を行つた。 マウスサルコーマ細胞Ｍ（52）Ｂを106牛胎児血
清を含むMEM中で単分子層として培養した。融
合が達成された後（容器当りの添加細胞数に依る
が通常３〜４日以内）、細胞をトリプシンで処理
した。細胞がバラバラになつたところで、トリプ
シンを失活させるために細胞懸濁液を10％の胎児
子牛血清を含有するMEMで処理した。 任意容量の懸濁液を新鮮栄養溶液に移し、最終
容量を５cm³にした。 新たに調製した細胞懸濁液に、または単分子層
が少くとも40〜50％の融合を持つ24時間進行細胞
培養物に試験物質を異なる濃度で添加した。 全ての処理は層流室内において滅菌条件下で行
つた。 結 果 十分量の試験物質を添加することにより、細胞
は24時間以内に死んだ。すなわち、移された細胞
は組織培養フラスコの底面上で相互に接合でき
ず、これに対して未反応対照細胞は48〜72時間内
に融合単分子層を形成した。 十分量に達しない量で試験物室を添加した場
合、最初の24時間にわたつて細胞のある程度の再
生が培養フラスコ内で明らかになつた。しかしな
がら、これらの事例では40〜60％融合を達成する
ために10日以上を要し、移された細胞の相当な量
は完全に破壊された。

【表】 かに分離細胞が付着
本発明の抽出物はそのまゝでも投与できるが、
噴霧乾燥または凍結乾燥粉末の形態であることが
好ましい。この場合、粉末は錠剤、カプセル、糖
衣剤、クリーム、粉剤、軟こうおよびその他の通
常の剤形で良い。その他の知られている添加物を
打錠、カプセル化等を改善するために配合でき
る。服用単位当り約100〜50mgの抽出物を含有す
ることができ、投与率は１日当り３回、１〜３服
用単位である。 実施例 4a ハイポキシスエキスの急性毒性評価 実施例2e（）記載のエキスから調製した溶液
を用い、マウス群（雄、雌同数）で毒性テストを
実施した。 マウス重量は22〜30ｇだつた。マウス毎に１回
投与後７日間追行観察した。結果の解釈を複雑に
する恐れある粒子を除き、滅菌溶液得るために、
調製溶液を静脈内投与に先立つてMillex過膜
（0.45mm）で過した。 経口又は腹腔内投与では調製したままの、即ち
事前の過を行うことなく溶液を投与した。 結果を表２に示す。

【表】

【表】 実施例 4b （）の急性毒性評価 所要濃度の（）の蒸留水溶液を調製した。投
与量は10cm³／Kgの一定にした。各場合に同数の雄
と雌を単一量で処理した。全マウスの毒性及び／
又は薬動学的効果の徴候を７日間観察した。全生
存ラツトを剖検した。結果を次表に示す。

【表】 結 論 （）の直接的毒性効果が低いのは明白である。
生存動物の剖検で病変は肉眼的には観察されなか
つた。 実施例 4c 胎児毒性−（）の奇形発生作用 十分に妊娠したマウス（Swiss
Websteroffspring系）６匹からなる二群を（）
の水溶液で１日に１回（10mg／Kg）経口的に処置
し、これを妊娠期間の初日から始め８日目まで行
なつた。妊娠期間の20日目に、このマウスをジエ
チルエーテルで軽く麻酔し、そして、帝王切開に
よつて子宮を露出させた。着床部位の総数をかぞ
えた。胎児を全て摘出し、そして(a)生存胎児数お
よび(b)四肢と頭部の肉眼解部学的奇形について検
査した。 結果を対照群のものと比較した。これを下記の
表４に示す。

【表】 実施例 4d Hypoxis rooperiのエキス（実施例２(e)（））
および化合物“試験管内”細胞増殖抑制／細胞
毒作用を下記の４種類の細胞培養物により試験し
た。 （）マウス ザルコーマ …… Ms
52B （）マウス メラコーマ ……
MelB1−６ （）Heha 229 （）ヒト胎児包皮線繊維芽細胞……HFSF （良性） 試験方法 トリプシンで処理された細胞をMEM中に収納
し、適当に希釈して約２×10⁵個細胞／cm³とした。
培地を4.5cm³含有する培養フラスコに調製済細胞
懸濁液0.5cm³を接種した。次いで、この細胞培養
物を37℃で24時間培養し、その後、培地0.5cm³に
とかした試験物質を添加した。対照フラスコ中の
培養が完全なレベルにたつするまた、全培養物を
生長させた。表５に示された全ての事例におい
て、細胞の生長はかなり抑制され、そして、MS
52B，Mel B1−６およびHeha229細胞培養物で
は生長後退が認められた。

【表】 被験動物の数は少ないが、実験した限りでは、
試験投与量で（）は奇形発生作用を示さないと
思われる。処置群のどれにも胎児の生長速度が異
常に低下されたような徴候は認められなかつた。
処理された母体動物には副作用はみとめられなか
つた。 実施例 ５ 実施例２に記載した方法で調製したハイポキシ
ス抽出物を種々のタイプのがん患者の治療に用い
た。 ａ 64才の男子皮膚がん（顔面および腕）患者は
肛門付近で手術不能にま進行した腫瘍を持ち、
かつほおおよび口びるの腫瘍については手術が
行われていた。実施例2aにより調製された抽
出物による治療（200mg、１日３回服用）を開
始した後、患者の症状は改善され、全ての腫瘍
は最初の３週間以内に縮少を始め、最終的に完
全に消滅した。患者は６年前に治療され、依然
として元気に生存している。 ｂ 現在79才の男子患者の経過は次の通りであつ
た。 70才の時、患者は腹部切開および結腸造瘻が
施こされた。 所見：Ｓ状結腸、直腸Ｓ状結腸連結部および直
腸内に大きな塊り。腫瘍の腹腔への広範囲の浸
潤によりおよび傷害物が存在するという事実に
基き、突出物のいくつかを生検しかつ近位結腸
造瘻を行うことが決定された。病理レポートに
はリンパ肉腫の存在が記録されており、これは
後にＸ線検査が確認された。 手術および術後の放射線照射が推められた。
診査腹部切開を行つた外科医はＳ状結腸および
直腸上部に大きな腫瘍を発見した。この腫瘍は
後腹部および骨盤側部壁に浸潤しており、切除
困難な塊であつた。手術後、患者は２ケ月以上
は生きられないであろうと予測された。 この時点で、実施例2aおよび2bの方法によ
るハイポキス ルーペリ抽出物により200mgず
つ１日３回投与する治療を開始した。４ケ月
後、患者は依然として生存しており、腹部壁か
ら結腸造瘻を自由にするため手術を行い、大腸
の切除を行つた。この際、残りの腹腔部分には
何らの異変もみられなかつた。 腸重積症状の大腸切除に関する病理レポート
には、腸重積は浮腸状であり、硬化していたと
の記録があつた。一方、治療経過レポートでは
この大腸標本の区域には充血および粘膜の表存
性潰瘍が認められたがリンパ肉腫または悪性腫
瘍の症状は認められなかつた、と記録された。
その後、患者は断続的にハイポキシス抽出物の
使用を継続し、体重の再増加が認められた。患
者は現在79才であり、依然として健康で活動的
である。がんの再発の徴候は認められていな
い。 ｃ ７年前、中年女性が手術不能肺ガンと診断さ
れた。彼女は実施例2aの方法で調整されたハ
イポキシス スペーリ抽出を１日当り600mg投
与して治療を開始した。彼女は化学療法または
放射線治療を受けなかつた。１ケ月以内に患者
には主観的な改善が報告され、６ケ月以内に患
者は完全に回復した。この患者は現在依然とし
て生存しており、ハイポキシス抽出物を規則的
に摂取し、少なくとも１年に２回報告を行つて
いる。 ｄ 就床男子患者は手術不能肺がんのために放射
線治療を受けており、２ケ月以上は生存できな
いと予測されていた。実施例2aおよび2bの方
法で調製されたハイポキス ルーペリ抽出物を
１日当り600mg使用して治療を行つたところ、
患者がベツトから離れて歩きまわれることので
きる改善がみられた。患者はその後６ケ月間生
存していたがその際、連絡がとだえた為、抽出
物による治療が中断した。その２週間の間に、
患者はベツトに戻らざるを得なかつた。治療が
再開され。その１週間以内に患者は再び十分に
歩けるように良くなつた。４ケ月後、この患者
は再び治療を中断し、その後まもなく死亡し
た。 ｅ 徹底的な乳房切除およびその後の放射線治療
および化学療法後の33才の女子患者は脊柱内に
転移がんが進行しており、脊椎の１つが破壊さ
れていた。患者はそれ以後の化学療法を拒否
し、実施例2e（）の方法で調製されたハイポ
キシスオブツサ−ニチダ抽出物を１日当り３×
300mg投与する治療を開始した。 １ケ月後の骨の走査を行つたところ、がんの
徴候は見られず、患者は１週間以内に腰骨の移
植により脊椎を再生する手術を行つた。この手
術中がんの残存の徴候は見られなかつた。 ｆ 進行した皮膚がんを持つ２人の女子患者は実
施例2aの方法で調製されたハイポキス ルー
ペリ抽出物の１日当り３×200mg投与での治療
を施された。患者の症状は60日以内に治ゆし
た。 実施例 ６ 組織病理学で確認されたがんを持つ２人の女子
患者は１日当り600mgのハイポキス抽出物４回投
与で治療された。ハイポキシス抽出物治療を開始
した際、２人の患者は治療可能と考えられてお
り、衰弱および痛みの一般症状を和らげる治療以
外の静細胞薬治療または放射線治療を受けなかつ
た。 ハイポキシス抽出物は実施例2e（）の方法で
ハイポキシス アクミラタから調製され、52％の
（）を含有した。 ａ 77才の患者は胸膜への転移および明らかな浸
出液を伴う固形乳がんの浸潤腫瘍を持つてい
た。ハイポキシス抽出物による64日間の治療
後、浸出液の減退と共に転移の減少が明らかに
なつた。排液法は不要であつた。患者の全般的
症状は改善され、痛みが完全に除かれたことが
報告された。 ｂ 54才の患者は、腹腔および腸間浸潤並びに腹
水を伴う重症の乳頭、卵巣腺がんを持つてい
た。ハイポキシス抽出物により半月間治療した
ところ、患者は全般的症状は改善された。腹水
は排液法および利尿剤の使用無しに減少した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式（） を有する化合物を有効成分として含むことを特徴
   とする制癌剤または抗癌剤。 ２ 式（） を有する化合物を含むハイポキシダセアエ科の植
   物の水抽出物、アルコール抽出物、アルコール水
   溶液抽出物または他の溶剤抽出物を有効成分とし
   て含むことを特徴とする、制癌剤または抗癌剤。