JPH04502315A - 新規ｔｎｆ―ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規ＴＮＦ−ペプチド 本発明は、腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ　Ｎｅｋｒｏｓｅ　Ｆａｋｔｏｒ）（ＴＮ Ｆ）から誘導された新規ペプチド、その製法及び薬剤としてのその使用に関する 。

カールスウェル（Ｃａｒｓｗｅｌｌ）等によって（Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳ＾　７２，３６６６、　１９７５）、前もっ てミコバクテリア−菌株カルメッテーグエ＋７ン（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｅｎ 　−ＳｔａＩＩＩｍＣａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）を感染させて おいた、エンドトキシンで処理された動物の血清が、マウスにおける種々の腫瘍 に出血性の壊死を引き起こすことが報告されている。

この活性は腫瘍壊死因子に起因した。またＴＮＦは試験管内において多数の変態 細胞系（Ｚｅｌｌｉｎｉｅｎ）に対して静細胞又は細胞毒作用を示し、一方正常 なヒト及び動物の細胞系は、それによって影響されない（リンホカイン・レボー ツ（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　Ｒｅｐｏｒｔｓ）　２巻。

２３５〜２７５頁、アカデミツク・プレス（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ）　、 ニューヨーク、１９８１）、最近、ヒトＴＮＦについての生化学的特徴付は及び 遺伝子が文献に記載された（ネイチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）　３１２．　７２４ ゜１９８４：Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｗ、２６０．２３４５，１９８５　；　Ｎｕ ｃｌ、＾ｃｉｄｓ　Ｒｅｓ、　１３　、　６３６１　、　１９８５）。

これらのデータから、成人ヒトＴＮＦについての次の蛋白質構造が誘導されうる ： ＶａｌＡｒｇｕｅｒＳａｒＳａｒＡｒｇＴｈｒＰｒｏＳｅｒＡｓｐＬｙｓＰｒｏ ＶａｌＡ　ｌ　ａＨＩ　ｓＶａ　ＩＶａＩＡ　ｌ　ａＡｓｎoｒ。

’　ＧｌｎＡｌａＧｌｕＧｌｙＧ１ｎＬｅｕＧ１ｎＴｒｐＬｅｕＡｓｒ＋Ａｒｇ ｘｒｇ＾ｌ　ａＡｓｎＡ　ｌ　ａＬａｕＬｅｕＡ　ｌ　ａＡ唐獅f　ｌ　ｙ ｖａ　ＩＧ　ｌｕＬａｕＡｒｇＡｓｐＡｓｎＧｌｎＬｅｕＶａｌＶａｌ　Ｐｒｏ ＳｅｒＧｌ　ｕＧｌｙＬｅｕＴｙｒＬｅｕ　Ｉ　ｌ　ｅＴｙ窒唐■■ ＧｌｎＶａＩＬｅｕＰｈｅＬｙｓＧＩＹＧｌｎＧＩ　ｙｃｙｓＰｒＯ５ｅｒＴｈ ｒＨＩＳＶａｌＬｅｕＬｅｕＴｈｒＨＩｓ丁ｈｒｌｌｅＳｅｒ＾ｒｇＨｅ＾Ｉａ ＶａｌＳｅｒＴｙｒＧｌｎＴｈｒＬｙｓＶａｌＡｓｎＬｅｕＬｅｕＳｅｒ＾ｌａ ｌ　１ｅＬｙｓｓｅｒＰｒ。

ＣｙｓＧｌｎＡｒｇＧｌｕＴｈｒＰｒｏＧｌｕＧ１ｙＡｌａＧｌｕＡｌａＬｙｓ ＰｒｏＴｒｐ丁ｙｒＧｌｕＰｒｏｌｌｅＴｙｒＬｅｕＧＩｙＧｌｙＶａ　ｌＰｈ ｅＧｌｎＬｅｕＧｌｕＬｙｓＧｌｙＡｓｐＡｒｇＬｅｕＳｅｒＡｌ　ａＧｌｕ　 Ｉ　ｌｅＡｓｎＡｒｇＰｒｏＡｓ■ ＴｙｒＬｅｕＡＳｐＰＭＡｌ　ａ（ｉ　１ｕｓｅｒＧｌｙＧｌｎＶａ　１Ｔｙｒ ＰｈｅＧｌｙ　Ｉ　ｌｅ　Ｉ　ｌ　ｅＡｔ　ａＬｅｕ更に、ウシ、ウサギ及びマ ウスのＴＮＦ−遺伝子が記載されている（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏ ｒ　Ｓ）ａ＋ｐ、　Ｑｕａｎｔ。

Ｂｉｏｌ、５１，５９７．１９８６）。

ＴＮＦはその細胞毒性のほかに、炎症性反応に関与する主因子の１つである。動 物モデルにおいて、敗血性シミツクの際（サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　２２ ９　、　８６９．１９８５）及びＧＶＨ症（Ｇｒａｆｔ　ｖｅｒｓｕｓ　１ｌｏ ｓｔＤｉｓｅａｓｅ）　（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１６６、　１２８０．　１９８ ７）の際に、ＴＮＦの関与を示すことができた。

ところで、著るしく低い分子量を有するペプチドが有利な特性を有することが判 明した。

本発明の目的は、式Ｉ： Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｔｙ　ｒ−Ｙ　１ ［式中ＡはＳｅｒ、Ｖａｌ、ｌｉｅ又はＰｒｏであり、Ｂは　ｃｉｙ又はＳｅｒ を表わし、Ｘは基Ｇ−ＮＨ−ＣＨＭ−ＣＯ−１Ｇ−ＮＨ−ＣＨＭ−ＣＯ−Ｗ−１ Ｇ−Ｒ−ＮＨ−ＣＨＭ−ＣＯ−又はＧ−Ｒ−ＮＨ−ＣＨＭ−ＣＯ−Ｗ−ｔ−表ｔ ）しかつＹは基−Ｚ、−ＮＨ−ＣＨＱ−ＣＯ−Ｚ、−Ｖ−ＮＨ−ＣＨＱ−Ｃｏ− Ｚ。

−ＮＨ−ＣＨＱ−Ｃｏ−Ｕ−Ｚ又は−Ｖ−ＮＨ−ＣＨＱ−Ｃｏ−Ｕ−Ｚを表わし 、この際Ｘ及びＹにおいて、Ｇは水素原子又はアミノ保護基を表わし、ＺはＯＨ −又はＮＨ２−基又はカルボキシル保護基を表わすか又はＧ及びＺは一緒になっ て共有結合又は基−ｃｏ−（ＣＨ２）ａＮＨ−を表わし、この際、ａは１〜１２ の数であり、Ｒ，Ｕ、Ｖ及びＷは１〜４個の天然に存在するα−アミノ酸よりな るペプチド鎖でありかつＭ及びＱは水素原子又は基−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ （ＣＨ３）−Ｃ２Ｈｓ　、−Ｃ６Ｈｓ　、ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３、 又は−（ＣＨ２）　ｂ　Ｔ　（この際すは１〜６の数を表わしかつＴは水素原子 又は０Ｈ−１ＣＨ３０−１ＣＨ３Ｓ−１（ＣＨ３）２ＣＨ−１Ｃ６Ｈ５−１Ｐ− ＨＯ−Ｃ６Ｈ４−１Ｈ３−１Ｈ２Ｎ−１ＨＯ−Ｃ０−１Ｈ２Ｎ−Ｃｏ−１Ｈ２Ｎ −Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−基を表わす）を表わすか又はＭ及びＱは一緒になっチー 　（ＣＨ２）Ｃ−３−８−（ＣＨｚ）ｄ−１（ＣＨｚ）ｅ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ ２）　ｆ−又は−（ＣＨ２）ｅ−ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ２）ｇ＝ＮＨＣｏ　（ＣＨ２ ）ｆ−橋（この際Ｃ及びｄは１〜４の数を表わし、ｅ及びｆは１〜６の数を表わ しかつｇは１〜１２の数を表わす）を表わすコのペプチド並びに生理学的に認容 性の酸とのその塩である。

式■のペプチドは、Ｌ−アミノ酸から構成されているが、これは１〜２個のＤ− アミノ酸を含有してよい。３官能性アミノ酸の側鎖は、保護基を有するか又は保 護されずに存在してよい。

生理学的に認容性の酸としては特に次のものが挙げられる；塩酸、クエン酸、酒 石酸、乳酸、燐酸、メタンスルホン酸、酢酸、蟻酸、マレイン酸、フマル酸、リ ンゴ酸、コハク酸、マロン酸、硫酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、 ピルビン酸、粘液酸、安息香酸、グルクロン酸、蓚酸、アスコルビン酸、アセチ ルグリシン。

新規ペプチドは、開鎖であってもよ＜　（Ｇ＝Ｈ，アミノ保護基、Ｚ＝ＯＨＳＮ Ｈ２、カルボキシル保護基、Ｍ及びＱは相互には結合していない）かつ特にジス ルフィド−架橋されていてもよ＜　（Ｇ＝Ｈ，アミノ保護基：　Ｚ＝ＯＨ，ＮＨ ２、カルボキシル保護基；Ｍ十Ｑ＝　−（ＣＨ２）　ｃ−３−８−（ＣＨ２）　 ｄ−）　、側鎖−架橋されていてもよ＜　（Ｇ＝Ｈ，アミン保護基、Ｚ＝ＯＨ， ＮＨ２、カルボキシル保護基、Ｍ十Ｑ＝−（ＣＨ２）　ｅ−ＮＨ−Ｃｏ　−（Ｃ Ｈ２）　ｆ−又は−（ＣＨ２）ｅ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｇ−ＮＨ−Ｃｏ−（ ＣＨ２）ｆ−）又は頭部−尾部−結合されて（Ｇ十Ｚ＝共有結合又は−Ｃｏ　− （ＣＨ２）　ａ−ＮＨ−）いてもよい。

この新規化合物は、ペプチド化学で公知の方法により製造できる。

すなわち、ペプチドは、逐次的にアミノ酸から又は適当な小さなペプチドのフラ グメント結合によって構成することができる。この逐次的構成の際に、ペプチド 鎖は、Ｃ−末端から始まって、段階的に各々１個のアミノ酸を延長する。フラグ メント結合では、様々の長さのフラグメントを相互に結合することができ、その 際、フラグメントは再び逐次的構成によってアミノ酸から又はその側でフラグメ ント結合によって得ることができる。環状ペプチドは、開鎖ペプチドの合成によ り高い希釈度で実施される環化反応によって得られる。

逐次的構成においても並びにフラグメント結合の場合でも、構成要素はアミド結 合の形成によって結合されなければならない。そのためには、酵素的及び化学的 方法が好適である。

アミド結合形成のための化学的方法は、ミューチー（Ｍｕｅｌｌｅｒ）　、メト ーデン・デア・オルガニッシェン・　ヒ　エ　ミ　−　（Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄ ｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ）ＸＶ／２巻、１−３６４頁、テ イーメ社（ＴｈｉｅｍｅＶｅｒｌａｇ）　、スツッツガルト、１９７４　；ステ ワルト（Ｓｔｅｗａｒｔ）　、ユング（Ｙｏｕｎｇ）　、ソリッド・フェイス・ ペプチド・シンセーシス（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈ ｅｓｉｓ）　、３１−３４．７１−８２頁、ピアス。

ケミカル・カンパニー（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）、 ロックホルト（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ）　、１９８４　；ボダンスキー（Ｂｏｄａｎ ｓｚｋｙ）　、クラウスチー（Ｋｌａｕｇｎｅｔ）　、オンデッティ（０ｎｄｅ ｔｔｉ）　、ペプチド・シンセシス（Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）　 、８５−１２８頁、ジョン・ウィリー・アンド・ソング（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ 　＆　５ｏｎｓ）、ニューヨーク、１９７６及びペプチド化学の他の標準的論文 に詳しく扱われている。アジド法、対称及び混合無水物法、その場で生成された 又は既成の活性エステル及び結合試薬（活性剤）、特にジシクロへキシルカルボ ジイミド（ＤＣＣ）　、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−エトキ シカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）　、１− エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−力ルポジイミド塩酸塩（ＥＤＣ Ｉ）、無水ｎ−プロパンホスホン酸、Ｎ、Ｎ−ビス（２−オキソ−３−オキサゾ リジニル）アミド燐酸クロリド（ＢＯＰ−ＣＩ）、ジフェニルホスホリルアジド （ＤＰＰＡ）、カスドロ試薬（Ｃａｓｔｒｏ’ｓ　Ｒｅａｇｅｎｚ）　（Ｂ　Ｏ Ｐ　）　、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−Ｎ、Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’　−テトラメチルウ ロニウムー塩（ＨＢＴＵ）　、２．５−ジフェニル−２，３−ジヒドロ−３−オ キソ−４−ヒドロキシチオフェンジオキシド（ステグリッヒス試薬（Ｓｔｅｇｌ ｉｃｈｓＲｅａｇｅｎｚ）　；　ＨＯＴ　Ｄ　Ｏ）及び１．１′−カルボニル− ジイミダゾール（ＣＤＩ）を用いるアミド結合形成が特に有利である。結合試薬 を単独で又は添加剤、例えばＮ、Ｎ’−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡ Ｐ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾ トリアジン（ＨＯＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）又は２ −ヒドロキシピリジンと組合せて使用することができる。

酵素的ペプチド合成においては、通例、保護基を省略することができるが、化学 的合成のためには、両方の反応成分のアミド結合の形成に関与しない反応性官能 基の可逆的保護が必要である。化学的ペプチド合成では、文献で公知の３つの保 護基法が有利である：ベンジルオキシカルボニル（２）＋、１−ブチルオキシカ ルボニル（Ｂｏｃ）−及び９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏ　 ｃ）−保護基法。各々、鎖を延長する構成要素のα−アミノ官能の保護基が特徴 である。３官能性アミノ酸の側鎖保護基は、必ずしもそれがα−アミノ保護基と 一緒に脱離されないように選択される。アミノ酸保護基に関する詳細は、ミュー ラ−（Ｍｕｅｌｌｅｒ）　、メトーデン・デア・オルガニッシエン瞥ヒエミー（ Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ）　、ＸＶ ／１巻、２０−９０６頁、ティーメ社（Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖａｒｌａｇ）　、シュ ッッッガルト、１９７４に記載されている。

ペプチド鎖の構成に用いる構成要素は、溶液中で、懸濁液中で又は例えばメリフ ィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）による　Ｊ、　＾ｔｌｅｒ、ＣｈｅＩｌ、Ｓ ａｃ、８５．　２１４９．　１９６３に記載されているような方法により反応さ せることができる。特に、ペプチドが逐次的に又はフラグメント結合により、Ｚ −１Ｂｏｃ−又はＦｍｏ　ｃ−保護基法の使用下で構成され、その際、反応成分 が溶液で反応に使用される方法、並びに前記のメリフィールド法と同様に、反応 成分が不溶性のポリマー担体（次に樹脂とも称せられる）に結合して反応に使用 される方法時（有利である。その際、ペプチドは、典型的には、ＢＯｃ−又はＦ ｍｏ　ｃ−保護基法の使用下で逐次的にポリマー担体に接して構成され、その際 、延長するペプチド鎖は、Ｃ−末端の所で、不溶性の樹脂部分と共有結合してい る（図１及び２参照）。この作業法は、試薬及び副生成物を濾過によって除去す ることを可能とし、従って中間生成物の再結晶は不必要となる。

保護されたアミノ酸は、任意の適当なポリマーに結合することができ、このポリ マーはは、単に、使用溶剤中に不溶であり、かつ簡単な濾過を可能とする安定し た物理的な形を有すべきである。このポリマーは、それに最初の保護されたアミ ノ酸が共有結合によりしっかり結合されつる。１個の官能基を有すべきである。

この目的のためには、極めて様々なポリマー、例えばセルロース、ポリビニルア ルコール、ポリメタクリレート、スルホン化ポリスチロール、スチロールとジビ ニルペンゾールとのクロルメチル化コポリマー（メリフィールド−樹脂）、４− メチルベンズヒドリルアミン−樹脂（ＭＢＨＡ−樹脂）、フェニルアセトアミド メチル−樹脂（Ｐａｍ−樹脂）、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール−樹脂 、ベンズヒドリルアミン−樹脂（ＢＨＡ−樹脂）、４−（ヒドロキシメチル）− ベンゾイルオキシメチル−樹脂、ブライポール（Ｂｒｅｉｐｏｈｌ）等による樹 脂（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、２８．５６５．１９８７　：　Ｆａ、 ＢＡＣＨＥＭ）　、ＨＹＣＲＡＭ−樹脂（Ｆａ、０ＲＰＥＧＥＮ）又は５ＡＳＲ ＩＮ−樹脂（Ｆａ、ＢＡＣＨＥＭ）が好適である。

溶液中でのペプチド合成には、反応条件下で不活性であると実証される全ての溶 剤、特に水、Ｎ、Ｎ’　−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　、ジメチルスルホ キシド（ＤＭＳＯ）　、アセトニトリル、ジクロルメタン（ＤＣＭ）　、１．４ −ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）　、Ｎ−メチル−２−ピロリドン （ＮＭＰ）並びに前記の溶剤の混合物が好適である。ポリマー担体でのペプチド 合成は、使用されたアミノ酸誘導体がそれに溶性である全ての不活性有機溶剤中 で実施されうる；しかしながら付加的に樹脂膨潤特性を有する溶剤、例えばＤＭ ＦＳＤＣＭ、ＮＭＰ、アセトニトリル及びＤＭＳＯ，並びにこれらの溶剤の混合 物が有利である。

成果のある合成後に、このペプチドをポリマー担体から脱離させる。様々の型の 樹脂を脱離できる条件は、文献に公知である。最も一般的には、酸性及びパラジ ウム−触媒脱離反応、特に液状の無水弗化水素中、無水トリフルオルメタンスル ホン酸中、希又は濃トリフルオル酢酸中の脱離又は弱塩基、例えばモルホリンの 存在でＴＨＦ又はＴＨＦ−ＤＣＭ−混合物中のパラジウム−触媒作用脱離が使用 される。保護基の選択に依り、これは脱離条件下で保持されたままであるか又は 同様に脱離される。ペプチドの部分的脱保護（Ｅｎｔｓｃｈｕｅｔｚｕｎｇ）は 、一定の誘導体化反応（Ｄｅｒｉｖａｔｉｓｉｅｒｕｎｇｓｒｅａｋｔｉｏｎｅ ｎ）又は環化を実施すべき場合に、重要になりつる。

新規のペプチドは、部分的に良好な細胞毒特性を示す。ペプチドの他の部分は細 胞ＴＮＦ−受容体への高い親和性を有するが、細胞毒活性を有することはない。

すなわち、これはＴＮＦ−アンタゴニストである。

これは天然のＴＮＦと競争して細胞のＴＮＦ−受容体に結合し、かつそうしてＴ ＮＦ−作用を抑制する。新規ペプチドは、新生物疾患及び自己免疫疾患の治療に 並びに移植の際の感染、炎症及び拒絶反応の治療及び予防に使用することができ る重要な薬剤であると実証される。個々のペプチドがいかなる作用を有するかを 簡単な実験により解明することができる。ＴＮＦ−感受性細胞を用いてペプチド の細胞毒性は、ペプチドの存在で細胞系をインキュベートすることにより測定さ れる。第２の実験パッチ中で、細胞系を相応するペプチドと共にＴＮＦ＝致死作 用量の存在でインキュベートする。それによってＴＮＦ−拮抗作用を実証するこ とができる。更に試験管内結合実験により、細胞のＴＮＦ−受容体へのペプチド の親和性が測定される。

新規ペプチドのそのアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔｉｓｃｈｅ）　又は拮抗（ａｎ ｔａｇｏｎｉｓｔｉｓｃｈｅ）作用についての生物学的解明を次の試験系で行な った： １、ＴＮＦ−感受性指標細胞に対する細胞毒性試験Ｉ１．　ＴＮＦ−感受性指標 細胞に対する競争−細胞毒性試験、 ■、　ＴＮＦ−受容体を表現する指標細胞に対する競争−受容体結合試験。

■、　細胞毒性試験 新規ペプチドのアゴニスト作用評価は、ＴＮＦ−感受性細胞（例えばＬ９２９、 ＭＣＦ−７、Ａ２０４、Ｕ９３７）へのその細胞毒作用に基づ（。Ｆｅ２９及び ＭＣＦ−７での試験を次のように実施した：１．３〜５Ｘ１０３個の新たにトリ プシン処理した（ｔｒｙｐｓｉｎｉｅｒｔｅｎ）　、指数的生長状態にあるＦｅ ２９−細胞（マウス）もしくはＭＣＦ−７−細胞（ヒト）を有する培地１００μ ｌを、９６一孔−平底−培養ブｌノートの凹部にピペットで入れた。このプレー トを恒温器中で３７℃で一夜恒温保持した。恒温器中の水蒸気で飽和された空気 は、ＣＯ２５ＭＯ１％を含有した。

このＦｅ２９−培地は、ＭＥＭ　Ｅａｒｉｅ　ｌｘ　（ヘ−リンガ−（Ｂｏｅｈ ｒｉｎｇｅｒ）　、マンハイム）５００．ｚ。

熱で不活性化された（３０分間、５６℃）胎生子牛血清（Ｆｅ２）５０ｍＩ！、 Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ）５０ｍ／、１００Ｘ非必須アミノ酸５　ｍｌ、　 Ｉ　Ｍ　Ｈｅｐｅｓ−緩衝液ｐＨ７，２（３ｍｌ）及びゲンタマイシン（５０翼 ９／翼１）５０藁ｌを含有した。

ＭＣＦ−７−−培地は、ＭＥＭ　Ｄｕｌｂｅｃｃｏ　Ｉ　Ｘ　（ベーリンガー、 マンハイム）５００＋＋Ｃ熱で不活性化された（３０分間、５６℃）ＦＣ３１０ ０冨１．、Ｌ−グルタミン５ｇ／及び１００×非必須アミノ酸５ｍｌを含有した 。

２、　次の日に、検査すべきペプチド−溶液１００μｌを細胞培養物に加え、か つ連続して２回滴定した。付加的に若干の細胞対照（すなわちペプチド−希釈液 で処置されていない細胞培養物）及び若干のｒ　ｈ　ｕ−ＴＮＦ一対照（すなわ ち組換えヒトＴＮＦで処理された細胞培養物）を共に用意した。培養プレートを ＣＯ２５Ｖｏ１％を有する水蒸気飽和空気よりなる雰囲気中で３７℃で４８時間 恒温保持した。

３、　ペプチド−希釈液で処理した培養物中の生存細胞のパーセンテージをクリ スタルバイオレット染色を用いて測定した。そのために、試験プレートをひっく り返して凹部から液体を除去した。各凹部にクリスタルバイオレット溶液５０μ ｌをピペットで入れた。

クリスタルバイオレット溶液は次の組成を有した：クリスタルバイオレット　３ ．７５９ ＮａＣ１１，７５ｇ エタノール　１６１．５ｍＡ’ ３７％ホルムアルデヒド　４３．２薦ｌ水　全量　５００ｍ１ このクリスタルバイオレット溶液を、凹部中に２０分間入れたままにしかつ次い で同様に除去した。引続き、細胞に結合しなかった染料を除くために、プレート を各々５回水中に浸漬することにより洗浄した。細胞に結合した染料を各凹部中 に試薬溶液（エタノール５０％、氷酢酸０．１％、水４９．９％）１００μ！を 添加することによって細胞から抽出した。

４．５分間のプレートの振動によって凹部中に一様に呈色した溶液が得られた。

生存細胞の測定のために個々の凹部中の呈色溶液の吸光度を５４０ｎｍで測定し た５、　それによりて、細胞対照に対して、５０％細胞毒性値を規定しかつ５０ ％細胞毒性となる試料希釈度の逆数を検査試料の細胞毒活性として調べた。

■、　競争−細胞毒性試験 ペプチドの拮抗性評価は、ＴＮＦ−感受性細胞（例えばＦｅ２９、ＭＣＦ−７、 Ａ２０４、Ｕ９３７）へのｒｈｕ−ＴＮＦの細胞毒作用を競争するその特性に基 づく。Ｆｅ２９及びＭＣＦ−７−細胞を用いる競争−細胞毒性試験を次のように 実施した：■、　３〜５Ｘ１０３個の、新たにトリプシン処理され、指数的生長 状態にあるＦｅ２９−細胞（マウス）もしくはＭＣＦ−７−細胞（ヒト）を有す る培地１００μｌを、９６一孔−平底−培養プレートの凹部にピペットで入れた 。プレートを恒温器中で３７℃で一夜恒温保持した。恒温器中の水蒸気で飽和さ れた空気は、Ｃ０２５Ｖｏ１％を含有した。

Ｆｅ２９−培地は、ＭＥＭ　Ｅａｒｌｅ　ｌｘ　（ベーリンガー、マンハイム） ５００屓Ｃ５６℃で３０分間熱で不活性化されたＦＣ５５０ｘｉ、Ｌ−グルタミ ン（２００ｍＭ）５０ｇ７＋、１００×非必須アミノ酸５ｍｌ、ＩＭ　Ｈｅｐｅ ｓ−緩衝液ｐＨ７，２（３ｇ／）及びゲンタマイシン（５０ｍｑ／ｍｌ）　５０ μｌを含有した。

ＭＣＦ−７−培地は、Ｍ　Ｅ　Ｍ　Ｄｕｌｂｅｃｃｏ　Ｉ　Ｘ　（ベーリンガー 、マンハイム）５０ｏｍ１、熱で不活性化された（３０分間、５６℃）ＦＣ３１ ００ｍｌ、Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ）５＋＋／及び１００×非必須アミノ酸 ５冨ｌを含有した。

２、　次の日に、検査すべきペプチド−溶液１００μｌを細胞培養物に添加し、 かつ連続的に２回滴定した。

次いでこの細胞培養物に、細胞培養物中の最終濃度において８０−１００％細胞 毒作用を有する培地中のｒｈｕ−ＴＮＦ−希釈液１００μｌを添加した。更に若 干の細胞対照（すなわちペプチド−溶液で処置されていないかつｒｈｕ−ＴＮＦ −溶液で処置されていない細胞培養物）及び若干のｒ　ｈ　ｕ　−Ｔ　Ｎ　Ｆ一 対照（＝ｒｈｕ−ＴＮＦ−溶液でのみ処置された細胞培養物）を共に用意した。

次いで培養プレートをＣＯ２５Ｖｏ１％を有する水蒸気飽和空気よりなる雰囲気 中で３７℃で４８時間恒温保持した。

３、　物質溶液で処置された培養物中の生存細胞のパーセンテージを、クリスタ ルバイオレット呈色に依り測定した。そのために試験プレートをひっ（り返すこ とによって凹部から液体を除去した。各凹部中にクリスタルバイオレット溶液５ ０μｌをピペットで入れた。

クリスタルバイオレット溶液は■、３に挙げた組成を有した。

クリスタルバイオレット溶液を凹部中で２０分間放置しかつ次いで同様に除去し た。引続き、細胞に結合しなかった染料を除去するために、プレートを各々５回 水中への浸漬によって洗浄した。細胞に結合した染料を各凹部中への試薬溶液（ エタノール５０％、氷酢酸０，１％、水４９．９％）１００μｌの添加によって 細胞から抽出した。

４、　プレートを５分間振動することによって各凹部中で一様の呈色溶液を得た 。生存細胞の測定のために各凹部中の呈色溶液の吸光度を５４０ｎｍで測定した 。

５、　それによって、細胞対照及びｒｈｕ−ＴＮＦ一対照に対して、５０％競争 値を規定し、かつ前もって準備したｒｈｕ−ＴＮＦ−濃度においてｒｈｕ−ＴＮ Ｆ−細胞毒性の５０％競争となる試料濃度を、検査試料の拮抗的活性として調べ た。

■、　競争−受容体結合試験 ペプチドの共働並びに拮抗作用は、後者がＴＮＦ−受容体に結合することを前提 とする。このことは、共働もしくは拮抗作用を有するペプチド及びｒｈｕ−ＴＮ Ｆが、ＴＮＦ−感受性指標細胞（例えばＵ９３７）へのＴＮＦ−受容体での結合 を競争することを意味する。競争−受容体−結合試験を次のように実施した：１ 、　検査すべきペプチド並びにｒｈｕ−ＴＮＦ　（＝対照）の種々の濃度を有す る培地１００μｌを反応容器中にピペットで入れた。この培地は、ＰＢＳ　（ベ ーリンガー、マンハイム）５００ｍ／、熱で不活性化された（３０分間、５６℃ ）ＦＣＳＩＯ厘！及びアジ化ナトリウム１００麿９を含有した。

２、引続！、１２５ｍ！−ドで標識したｒｈｕ−ＴＮＦ　（ポルトン（Ｂｏｌｔ ｏｎ）によるラクトペルオキシダーゼ一方法）ｌｎｇを有する培地　１００μｌ を反応容器に加えかつ混合した。非特異的結合（ＮＳＢ）の測定のたメニ、１２ ５ヨートチ標識された　ｒｈｕ−ＴＮＦ　（培養基１００　ｕｎ中１２５ｒ−ｒ ｈｕ−ＴＮＦ　ｌｎｇ）を放射性標識されていないｒｈｕ−ＴＮＦ　（培養基　 １００μ７中ｒｈｕ−ＴＮＦ２００ｎｇ）の２００−倍の過剰量と混合した。

３、　次いで２Ｘ１０６個のＵ９３７−細胞（ヒト）を有する培養基１００μｌ を反応容器にピペットで入れかつ混合した。反応容器（試験容量３００μｌ）を ９０分間０℃で恒温保持した。４５分間後に反応装入物をもう一度十分に混合し た。

４、　恒温保持時間の経過後に、細胞を５分間１８００ｒｐｍ及び４℃で遠心分 離し、培地で３回洗浄し、定量的に計数管中に移しかつ細胞結合した放射能をク リニ・ガンｖ−カウンター（Ｃ１ｉｎｉ　Ｇａｍｍａ　Ｃｏｕｎｔｅｒ）　１２ ７２　（ＬＫＢ　ｆａｌｌａｃ）　テ測定した。

５、　非特異的結合に関する測定値の補正後に、総結合に対して、５０％競争値 を規定しかつ前もって準備した１２５Ｉ　−ｒ　ｈ　ｕ−ＴＮＦ−濃度で１２５ （−ｒｈｕ　ＴＮＦ−結合の５０％競争をもたらす試料濃度を検査試料の競争活 性として調べた。

次の例で本発明を詳説する。プロピオン酸ｇｅｎ）アミノ酸は、例中公知の３文 字−コードで略記されている。更に次の文字は以下の意味を表わす＝Ａａｄ＝α −アミノアジピン酸、Ａｂｓ＝４−アミノ酪酸、Ａｃ＝酢酸、Ａｏ　ｃ＝８−ア ミノオクタン酸、Ａｐｅ＝５−アミノペンタン酸、Ｈｃｙ＝ホモシスティン、Ｈ １７＝ホモリジン、０ｒｎ＝オルニチン、Ｄａｐ＝２．３−ジアミノプロピオン 酸。

Ａ、　一般的作業法 ｒ、請求項ｌによるペプチドの合成は、アプライド・ビオシステムズ社（Ｆｉｒ ＩＩＩａ　ＡＰＰＬＩＥＤ　ＢＩＯ３ＹＳＴＥＭＳ）の全自動ペプチドシンセサ イザー（Ｐｅｐｔｉｄｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）　Ｍｏｄｅｌｌ　４３０　Ａで 固相ペプチド合成の標準法を用いて行なった。この装置はＢｏａ−及びＦｍｏｃ −保護基法のために種々異なる合成サイクルを利用する。

ａ）　Ｂｏｃ−保護基法のための合成サイクル１、ＤＣＭ中トジトリクロル酢酸 ３０％１×３分間２、ＤＣＭ中トジトリル酢酸５０％　１×１７分間３、　ＤＣ Ｍ−洗浄工程　５×１分間 ４、ＤＣＭ中ジビジイソプロピルエチルアミン５％１×１ ５％１×１ ７、　予備活性化保護化アミノ酸の添加（ＮＭＰ／ＤＣＭ中ＤＣＣＩ当量及びＨ ＯＢ　ｔ１当量による活性化）：ペプチド結合（第１部）１×３０分間 ８、ＤＭＳ０２０％の容量割合にまで反応混合物へのＤＭＳＯの添加 ９、　ペプチド結合（第２部）　ｌＸ１６分間１０　反応混合物へジイソプロピ ルエチルアミン３．８当量の添加 １１、ペプチド結合（第３部）　１×７分間１２、ＤＣＭ−洗浄工程　３×１分 間 １３、不完全な変換の際に結合の繰り返しく５，に戻る）１４、ＤＣＭＣ熱中酢 酸１０％、ジイソプロピルエチルアミン５％　ＩＸ２分間 Ｌ５．ＤＣＭＣ熱中酢酸１０％　１×４分間１６、ＤＣＭ−洗浄工程　４％１分 間 １７、１．に戻る ｂ）　Ｆｍｏｃ−保護基法のための合成サイクル１、ＮＭＰ−洗浄工程　１×１ 分間 ２、ＮＭＰ中ピ中ソペリジ２２０％　１×４分間３、ＮＭＰ中ピ中ソペリジ２２ ０％　ｌＸ１６分間４、ＮＭＰ−洗浄工程　５×１分間 ５、　予備活性化保護化アミノ酸の添加（ＮＭＰ／ＤＣＭ中ＤＣＣ　１当量及び ＨＯＢｔ１当量による活性化）： ペプチド結合　１×６１分間 ６、ＮＭＰ−洗浄工程　３×１分間 ７．　不完全な変換の際に結合の繰り返しく５．に戻る）８、ＮＭＰ中無水酢酸 １０％　ＩＸＳ分間９、ＮＭＰ−洗浄工程　３Ｘ１分間 １０．２．　に戻る Ｉｌ、　Ｉａにより得られるペプチド樹脂の後処理Ｉａにより得られるペプチド 樹脂を、真空中で乾燥しかつテフロン（Ｔｅｆｌｏｎ）　−ＨＦ−装置（ペニン スラ社（Ｆａ、ＰＥＮ　Ｉ　Ｎ５ＵＬＡ）の反応容器中に転移させた。スカベン ジャー（Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）　殊にアニソール（１ｍｌ／樹脂ｇ）並びにトリ プトファン含有のペプチドの場合にはインドール系ホルミル基の除去のためにチ オール、殊にエタンジチオール（０、５ｍｌ／樹脂ｇ）の添加後に、液体Ｎ２で の冷却下で弗化水素を凝縮導入（ｅｉｎｋｏｎｄｅｎｓｉｅｒｔ）　させた（　 １０　ｍｌ／樹脂ｇ）。混合物を０℃に加温しかつこの温度で４５分間撹拌した 。引続き弗化水素を真空中で留去しかつ残留するスカベンジャーを除去するため に、残渣を酢酸エステルで洗浄した。ペプチドを３０％の酢酸で抽出し、濾過し かつ濾液を凍結乾燥させた。

ペプチドヒドラジドの製造のために、ペプチド樹脂（パムー（Ｐａｍ−）又はメ リフィールド樹脂）をＤＭＦ中に懸濁させ（１５ｍｆ／ｍ脂９）かつヒドラジン 水和物（２０当量）の混合後に２日間室温で撹拌した。後処理のために、樹脂を 濾別しかつ濾液・を蒸発乾固させた。残渣を　ＤＭＦ／Ｅｔ２０　又は　Ｍ　ｅ 　ＯＨ／Ｅｔ２０　から結晶させた。

ｍ、　ｒｂにより得られるペプチド樹脂の後処理Ｉｂにより得られるペプチド樹 脂を真空中で乾燥させ、かつ引続いてアミノ酸組成に応じて次の分離法を行なっ た（ｆａｄｅＳＴｒｅｇｅａｒＳＨｏｗａｒｄ　Ｆｌｏｒｅｙ　Ｆｍｏｃ　−Ｗ ｏｒｋｓｈｏｐ　Ｍａｎｕａｌ、Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ　１９８５　）。

適当なＴＦＡ−混合物中のペプチド樹脂の懸濁液を、室温で所定の時間撹拌し、 次いで樹脂を濾別しかつＴＦＡ並びにＤＣＭで洗浄した。濾液及び洗浄溶液を十 分に濃縮しかつペプチドをジエチルエーテルの添加により沈殿させた。水浴中で の冷却後に沈澱を濾別し、酢酸３０％中に入れかつ凍結乾燥させた。

■、　ペプチドの精製及び特徴付は 精製をゲルクロマトグラフ＜−（ＳＥＰＨＡＤＥＸ’Ｇ−１０、Ｇ−１５／１０ ％ＨＯＡｃ；Ｓ＋ＥＰＨＡＤ■ ＥＸ　ＬＨ２０／ＭｅＯＨ）及び引続いて中圧クロマトグラフィー　（Ｍｉｔｔ ｅｌｄｒｕｃｋｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ、ｐｈｉｅ）　（固定相：ＨＤ−３ＩＬ 　Ｃ−１８，２０−４′５μ、１００Ａ；移動相：Ａ＝０．１％　ＴＦＡ／Ｍｅ ＯＨＳＢ＝０．１％　ＴＦＡ／Ｈ２０での傾斜）により行なった。

得られた最終生成物の純度は、分析ＨＰＬＣ（固定相：　１００Ｘ２．１ｍｍ　 ＶＹＤＡＣＣ１８，５μ、３００Ａ；移動相＝　ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−傾斜、０ ．１％ＴＦＡ、４０℃で緩衝化）で測定した。特徴付けのためにアミノ酸分析及 びファストーアトムーボムバードメントー質量分析法（１”ａｓｔ−＾ｔｏｍ− Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　−Ｍａｓｓｅｎｓｐｅｋｔｒｏｓｋｏｐｉｅ）を利用 した。

Ｂ、　特別な作業法 例Ｉ Ｈ−Ａｒｇ−１１ｅ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙ ｓ−Ｎ）＋２Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　−（ＣＩ−Ｚ）−ＭＢＨＡ−樹脂（置換〜０．３ ６ｍモル／９）１．３８１Ｆ（成分量０．５ｍモルに相当）を、Ａｌａに依り、 ＢｏＣ−Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）−ＯＨ１Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ，ＢｏＣ−Ｇｌｎ− ＯＨ，Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ，Ｂｏａ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）　−ＯＨ，Ｂｏｃ− Ｉ　１ｅ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｓｅｒ　（Ｂｚ　１）　−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ａｒｇ　（ Ｔｏｓ）　−ＯＨ各２ｍモルと反応させた。

合成終了後に、ペプチド樹脂をＮ−末端で脱保護しくＡＩａに依る工程１−３の 実施）、かつ引続いて真空中で乾燥させた；収量は２．３ｇであった。

こうして得られた樹脂１．１５９をＡＩＩに依り、ＨＦ−分離させた。粗生成物 （１９５ＩＩｇ）をゲル濾過（ＳＥＰＨＡＤＥＸ■Ｇ−１０）及び中圧クロマト グラフィー（ＡＩＶ参照；Ａ６０−７５％；０．２５％ｗｉｎ−１）により精製 した。純粋生成物１０２ｍ＋９が得られた。

例２ ＾ｃ　−１１ｅ　−Ａｌａ　−Ｖａｌ　−Ｓｅｒ　−Ｔｙｒ　−Ｇｉｎ　−Ｔｈ ｒ　−ＯＲＦｍｏｃ−Ｔｈｒ　（ＯｔＢｕ）−ｐ−フルコキ’ｉベンジルアルコ ール樹脂　（置換〜０．６３ｍモル／９）０．４９（成分量０．２５ｍモルに相 当）をＡ　Ｉ　ｂ　ｉ：依り、Ｆｍｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｎ−ＯＨ，Ｆｍｏ　ｃ−Ｖ ａ　Ｉ　−ＯＨＳＦｍｏｃ−Ｔｙｒ　（ｔＢｕ）−ＯＨｌＦｍｏｃ　−Ａ　Ｉ　 ａ−ＯＨＳＦｍｏ　ｃ−８ｅ　ｒ　（ｔ　Ｂｕ）　−ＯＨ。

Ｆｍｏ　ｃ　−Ｉ　Ｉ　ｅ−ＯＨ各１ｍモルと反応させた。

合成終了後にＮ−末端をアセチル化した（Ａ　Ｉ　ｂに依り工程２−４及び８− ９の実施）。得られたペプチド樹脂を真空中で乾燥させた：収量は０．６９であ ったＡｍに依るＴＦＡ−分離により得られた粗製ペブチ■ ド（１６０１９）をゲル濾過（ＳＥＰＨＡＤＥＸ　Ｇ−１０）及び中圧タロマド グラフィー（ＡｒＶ参照：６０−７５％；０．２５％ｍ１ｎ−１）により精製し た。純粋生成物８７翼９が得られた。

例１及び２と同様にして次のものを製造することができる： ３、＋−ａｌａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−丁ｙｒ−Ｇｉｎ−ＯＨ５、Ｈ−＾１ａ−Ｖａ ｔ−５ｅｒ−Ｔ７ｒ−Ｇｌｎ−ＮＨ２６、Ａｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−５＠ｒ−Ｔｙ ｒ−Ｇｉｎ−ＮＨ２７、Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｉｎ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−ＯＨ８ 、Ａｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−ＯＨ９、Ｈ−＾１ａ−Ｖａ ｌ−Ｇｉｎ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−８８２１０、＾Ｃ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔ ｙｒ−Ｇｉｎ−ＮＨ。

＋１．　Ｈ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｖａｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−ＯＨ１３、８ −１１！−ＡＩａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＮＨ２＋１＋、＾ｅ−１ １ｅ−＾１ａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＮＨ２＋５．　Ｈ−Ｐｈｅ− ａｌａ−Ｖａｌ−５ａｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＯＨ１６、＾ｃ−Ｐｈｅ−＾１ａ− Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＯＨ１７、Ｈ−Ｐｈｅ−＾１ａ−Ｖａｔ−５ ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＮＨ２１８、Ａｃ−Ｐｈｅ−＾１ａ−Ｖａｔ−５ｅｒ− Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−ＮＨ２１９、８−１１ｅ−Ａｌａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ− Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ２０、Ａｃ−Ｌｅｕ−＾１ａ−Ｖａｔ−５＠ｒ−Ｔｙｒ− Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ２１、８−１１ｅ−＾１ａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇ ｌｎ−Ｔｔｌｒ−ＮＨ２２２、＾ｃ−１１ｅ−＾１ａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ −Ｇｉｎ−Ｔｊｌｒ−ＮＨ２２３、Ｈ−Ｐｈｅ−＾１ａ−Ｖａｔ−５＠ｒ−Ｔｙ ｒ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ２６、＾ｅ−Ｐｈｅ−＾１ａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙ ｒ−Ｇｉｎ−Ｔｆｉｒ−ＮＨ２３９、Ｈ−１１ｅ−Ｇｌｙ−Ｖａｔ−５＠ｒ−Ｔ ｙｒ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ４０、Ａｃ−Ａｒｇ−１１ｅ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇ ｉｎ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−ＬｙＳ−ＮＪ４１゜Ａｃ−５ｅｒ−＾ｒｇ−１ ｉｅ−＾１ａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−＾ ５ｎ−ＮＨ２Ｂｏａ−Ｃｙｓ　（ｐＭＢ）−ＭＢ’ＨＡ−樹脂（置換〜０．５１ ｍモル／９）０．９８ａ（０，５ｍモルの成分量に相当）をＡＩａに依り、Ｂｏ ｃ−Ｔｙｒ　（Ｂｒ−Ｚ）−ＯＨ，Ｂｏａ−Ａｌａ−ＯＨ，Ｂｏｃ−３ｅｒ　（ Ｂｚ　Ｉ）−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　（ｐＭＢ）−０ＨＳＢｏ　ｃ−Ｖａ　１− ＯＨ各２ｍモルと反応させたこのペプチド樹脂を真空中で乾燥させた：収量は１ ．５ｇであった。

こうして得られた樹脂０．７５ｙをＡＩＩに依り、ＨＦ−分離させた。凍結乾燥 させた粗生成物を０．１％の酢酸２１中に入れ、かつ引続きアンモニア水でｐＨ ８，４に調整した。アルゴン雰囲気下で　０．０１　ｎＫ３　［Ｆ　ｅ　（ＣＮ ）　ｓ］−溶液を、帯黄緑色が１５分間以上持続するまで、徐々に滴加した。更 に１時間後撹拌し、次いで氷酢酸でｐ）（４，５に酸性化しかつ陰イオン交換体 （ＢＩＯＲＡＤ■３ｘ４Ａ、塩化物形）の水性懸濁液１５＊１を加えた。３０分 後に、イオン交換体樹脂を濾別し、濾液を回転蒸発器で１００１１まで濃縮し、 かつ引続き凍結乾燥させた。

全ての使用溶剤は、遊離システィン基の場合による酸化を避けるために、前もっ て窒素で飽和しておいた粗生成物をゲルクロマトグラフィー（ＳＥＰＨＡＤＥＸ ｏＧ−１５）及び中圧クロマトグラフィ（ＡｒＶ参照；Ａ２０〜４０％；０．２ ５％ｗｉｎ−１）　１．：より精製した。純粋生成物１８ｍ９が得られた。

例２４と同様にして、次のものが製造できる（ペプチド酸の製造のためにＰＡＭ −樹脂を使用した）：４３、　Ｈ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−５ｓｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ− ＯＨｋｋ、　ＡＣ−ＣｙＳ−Ｖａｌ−５１！ｒ−Ｔｙｒ−ＩＪｓ−ＮＨ２に５． 　Ｈ−ＣｙＳ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−ＣｙＳ−ＮＨ２４６、ＡＣ−Ｃｙｓ− ＡＩａ−０−Ｖａｔ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−Ｃ％−ＮＨ２４７、Ｈ−ＣｙＳ−Ａｌａ −０−Ｖａｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−ＣｙＳ−ＮＨ２４８、Ｈ−ＣｙＳ−Ｖａｌ−５ ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＣｙＳ−ＮＨ２４９、＾ｃ−ＣｙＳ−Ｖａｌ−５１！ｒ −Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＣｙＳ−ＮＨ２５０、Ｈ−Ｃｙｓ−ｖａｌ−ｏ−５ｅｒ−■ ｙｒ−Ｇｌｎ−Ｃ％−ＮＨ２５１、ＡＣ−ＣｙＳ−Ｖａｌ−０−５ｅｒ−Ｔｙｒ −ＧＩＲ−ＣｙＳ−ＮＨ２５２、Ｈ−Ｃｙｓ−ｖａｔ−０−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇ ｌｎ−ＣｙＳ−ＮＨ２５３、＾ｃ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−０−＾１ａ−Ｔｙｒ−Ｇｌ ｎ−Ｃｙｓ−ＮＨ２５４、Ｈ−Ｃｙｓ−ａｌａ−Ｖａｔ−５ｓｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙ ｓ−ＯＨ５５、＾ｃ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−ＣｙＳ−ＮＨ ２５６、Ｈ−Ｈｃｙ−＾１ａ−Ｖａｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−ＯＨ５７、＾ ｃ−Ｈｃｙ−Ａｌａ−Ｖａｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２５８、Ｈ−Ｈｃ ｙ−＾１ａ−Ｖａｔ−５ｅｒ−ＴｙｒニーＨｃｙ−ＯＨ５９、＾ｃ−Ｈｃｙ−＾ １ａ−Ｖａｌ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−Ｈｅｙ−ＮＨ２６０、Ｈ−Ｃｙｓ−＾１ａ−ｖ ａｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−ＯＨ６１、Ｈ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｖａ ｌ−５＠ｒ−丁ｙｒ−Ｇｉｎ−Ｃｙｓ−ＮＨ２６２、＾ｃ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｖ ａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＣｙＳ−ＮＨ２６３、ＡＣ−ＣｙＳ−Ｇｌｙ− Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−ＣｙＳ−ＮＨ２６７、Ｈ−ＣｙＳ−Ｖａｌ− Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−ＣｙＳ−ＮＨ２６８、＾ｃ−ＣｙＳ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ −Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−ＣｙＳ−ＮＨ２６９、＾ｃ−ＨＣｆ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｖａ ｔ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−（ｓｌｎ−ＣｙＳ−ＮＨ２７０、＾ｃ−ＣｙＳ−Ｖａｌ− ５＠ｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−ＬｙＳ−ＣｙＳ−ＮＨ２７１、Ａｃ−Ｃｙｓ −＾１ａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−Ｔｉｎ−ＬｙＳ−ＣｙＳ−ＮＨ２ ７５゜Ｈ−１１＠−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ７ ６、Ａｃ−５ｅｒＡｃ−５ｅｒ−Ａｒ＾１ａ−Ｖａｌ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−ＣＪＳ −Ｔｈｒ−ＬｙＳ−ＮＨ２７７、ＡＣ−ＨＣＩ−Ａｌａ−＋１ｅ−５ｅｒ−Ｔｙ ｒ−ＩＪｓ−ＮＨ２７Ｂ、Ｈ−１１ｅ−５ｅｒ−Ａｒｇ−ＣｙＳ−Ａｌａ−Ｖａ ｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−ＣｙＳ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−ＯＨ７９、Ａｃ−１ｉ ｅ−５ｅｒ−＾ｒ９−ＣｙＳ−ＡＩａ−Ｖａｔ−５ｌｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−Ｃｙ Ｓ−ＬｙＳ−Ｖａｔ−ＮＨ。

例８２ Ｂｏｃ−Ａｓｐ　（ＯＣｈｘ）−ＭＢＨＡ−樹脂（置換〜０．９６ｍモル／ｑ） ０．５３ｇ（、Ｏ，，５ｍモルの成分量に相当）をＡＩａに依り、Ｂ　ｏ　ｃ− Ｔｙ　ｒ　（Ｂ　ｒ−Ｚ）−ＯＨＳＢｏｃ−Ｖａ　１−ＯＨ，Ｂｏｃ−３ｅｒ　 （Ｂｚ　Ｉ）−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｏｒｎ　（Ｚ）−ＯＨ６２ｍモルと反応させた。

合成終了後にＮ−末端をアセチル化した（ＡＩａによる工程１−６及び１４−１ ６の実施）。得られたペプチド樹脂を真空乾燥させた、収量は１．０３９であっ た。

ＡＩＩに依るＨＦ−分離の後に得られた。粗生成物（３０５り）の２５０属９を 脱ガス化ＤＭＦ’３８０真！中に溶かし、トリエチルアミン０．５３厘ｌを加、 えかつ−２５℃でジフェニルホスホリルアジド０　、３　ＭＩＪを加えた。

混合物を一２５℃で２時間撹拌し、−２：５℃で２時間、４℃で４日間かつ室温 で２日間放置し、かつ引続いて濃縮乾燥させた。粗製ペプチドをゲルクロマトグ ラ■ フィー（ＳＥＰＨＡＤＥＸ　Ｇ−１５）、により精製した。純粋生成物５１厘９ が得られた。

ブライポール（Ｂｒｅｉｐｏｈｌ）等による引、脂（Ｂａｃｈｅｍ社）１ｗ（０ ，５ｍモルの成分量に相当）を、Ａ　Ｉ　ｂ　ｌ：依り、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ　（ ＯｔＢｕ）−Ｃ）Ｈ，Ｆｍ。

ｃ−Ｖａ　ｌ　−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ−ＯＨ，Ｆｍ。

ｃ−Ａｌａ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨＳ　Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ　 （Ｂｏｃ）−ＯＨＳ　Ｆｍｏｃ−８ｅｒ　（ｔＢｕ）−ＯＨ各２ｍモルと反応さ せた。合成終了後にＮ−末端をアセチルした（Ａ　Ｉ　ｂによる工程２−４及び ８−９の実施）。このペプチド樹脂を真空中で乾燥させた；収量１．５５ｇ。

Ａｌ１１によるＴＦＡ−分離によって得られた粗生成物（３３５属ｇ）を脱ガス 化ＤＭＦ５００ｇｌ中に溶かし、トリエチルアミンＱ　、　３　ｍｌを加えかつ 一２５℃でジフェニルホスホリルアジドＱ　、　３　ｍｌを加えた。混合物を一 ２５℃で２時間撹拌し、−２５℃で２日間、４℃で２日間かつ室温で２日間放置 しかつ引続いて濃縮蒸発乾固させた。粗製ペプチドをゲルクロマトグラフィー■ （ＳＥＰＨＡＤＥＸ　ＬＨ２０）により精製した。純粋生成物１２７ｍｖが得ら れた。

Ｈ−Ａｓｐ−ＡＩａ　−Ｖａｌ　−Ｓｅｒ　−Ｔｙｒ　−Ｇｉｎ　−Ｌｙｓ　− ＯＨＦｍｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｂｏａ）−メリフィールド−樹脂（置換〜０．３５　 ｍモル／　９　）　５　、７　ｑ　（２ｍモルの成分量に相当）をＡＩｂにより 、Ｆｍｏ　ｃ−Ｇ　Ｉ　ｎ　−ＯＨＳＦｍｏｃ−Ｖａ　１−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔ ｙｒ　（ｔＢｕ）−ＯＨＳＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−３ｅｔ−（Ｂｚ ｌ）−ＯＨＳＦｍｏｃ−Ａｓｐ　（ＯｔＢｕ）−ＯＨ各８ｍモルと反応させた。

引続きｔ−ブチル−及びＢｏａ−保護基を脱離させた（ＡＩａによる工程１−６ の実施）。ノ樹脂での環化は、ＮＭＰ中でＢＯＰ　３．５４ｇ及びジイソプロピ ルエチルアミン３　、５　ｍｌの添加下で行なった（１６時間）。ペプチド樹脂 をＮ−末端で脱保護しＣ（Ａ　Ｉ　ｂによる工程２−４の実施）かつ真空中で乾 燥、させた。収量は６．４ｇであった。

ＡｎによるＨＦ−分離によって得られ光粗生成物をゲｔｌｉ’ｌｌＡ　（５ｅｐ ｈａｄｅｘｏＧ　−１５）及び中ＥｆｌＯ−。

トゲラフイー（ＡＩＶ参照：１０−３０％；　０．２５ｍ１ｎ−１）によって精 製した。純粋生成物２３票りが得られた。

例８３及び８４と同様にして、次のも（のを製造することができる： ８５、＾Ｃ−＾５ｐ−Ｖａｌ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−ＬｙＳ−ＮＨ２８６、ＡＣ−Ｌ ｙＳ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−ＮＨ２８７、＾ｃ−Ｌｙｓ−ｖａｔ− ５ｅｒ−Ｔｙｒ−＾５ｐ−ＯＨ８８、ＡＣ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−５１！ｒ−Ｔｙｒ −ＬｙＳ−ＮＨ２８９、＾ｃ−ＧＷ−π震；コア石５−０Ｈ９０、＋−ａｓｐ− ｖａｔ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＯＨ９１、＾ｃ−Ｌｙｓ−Ｖａｔ−５ｅｒ− Ｔア２ｕ−ｓ＋２９２、＾ｅ−ＧＩＬＩ−Ｖａｌ−５１！ｒ−Ｔｙｒ−Ｏｒｎ− ＮＨ２９３、ＡＣ−＾５ｐ−Ｖａｔ−５ｓｒ−Ｔｙｒ−Ｏｒｎ−ＮＨ２９４、＾ Ｃ−＾５ｐＧ１１−５ｆｌｒ−Ｔｆｒ−Ｏｒｎ−ＮＨ２９５、＾ｃ−Ｏａｐ−Ｖ ａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−＾Ｓｐ−ＭＨ２９６、Ａｅ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−５ｅｒ− Ｔｙｒ−Ｏａｐ−ＮＨ２９７、＾ｃ−Ｄａｐ−Ｖａπ；コア：１ｕ−ｓＨ２９８ 、＾ｃ−ａ［；π；；石；−ρ−聞２９９、ＡＣ−＾５ｐ−Ａｌａ−Ｖａｔ−５ ｅｒ−丁ｙｒ−Ｇｉｎ−ＬｙＳ−ＮＨ２ｔｏｏ、　ＡＣ−Ａｓｐ−＾１ａ−Ｖａ ｌ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−ＯＨ１０１、Ａｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｖ ａｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−＾５ｐ−ＮＨ２１０４、Ａｅ−Ｏｒｎ−＾１ａ −Ｖａｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−＾５ｐ−ＮＨ２＋０５．　Ａｃ−＾ｒｇ４ １ｅ−＾５ｐ−Ｖｌｌｌ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−ＬｙＳ−Ｔｈｒ−ＬｙＳ−Ｎ１ｊ２ １０６、Ｈ−ＬｙＳ−Ｖａｌ−Ｇｉｎ−丁ｙｒ−＾５ｐ−ＯＨ１０７、ＡＣ−Ｌ ｙＳ−Ｖａｌ＝Ｇ１ｎ−Ｔｙｒ−＾Ｓρ−ＮＨ２１０８、＾ｅ−１１＠−Ｌｙｓ −Ｖａｌ−５ｓｒコア”ｎｕ−Ｔｈｒ−ＮＨ２＋０９．　Ａｃ−１１ｓ−Ｌｙｓ −Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇ　ｕ−Ｔｈｒ−ＯＨ１１０、ＡＣ−＾５ｐ−１１ ＠−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｏｒｎ−ＮＨ２ＩＩ＋、＾ｃ−１１＠−５ｅｒ−＾「９− ＾ｓｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−５ｓｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−Ｌｙｉ−Ｌｙｓ−Ｖａｔ− ＾５ｎ−ＮＨ２＋１２．＾ｃ−Ｏｒｎ−＾１ａ−０−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ− Ｇｌｎ−＾５ｐ−ＮＨ２例１１３ Ａｌａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−＾ｂｓＢｏｃ−Ａｂｓ−メリフィー ルド樹脂（置換〜１ｍモル／９）０．５ｇ（０，５ｍモルの成分量に相当）を、 ＡＩａに依り、Ｂｏ　ｃ−Ｇ　Ｉ　ｎ−０ＨＳＢｏ　ｃ　＝Ｖａ１−ＯＨ，Ｂｏ ａ−Ｔｙｒ　（Ｂｒ−Ｚ）−ＯＨ，Ｂ。

ｃ−Ａｌａ−ＯＨＳＢｏｃ−３ｅｒ　（Ｂｚｌ）−ＯＨ６２ｍモルと反応させた 。合成終了後に、このペプチド樹脂をＮ−末端で脱保護しくＡｌｂによる工程２ −４の実施）かつ引続いて真空中で乾燥させた。収量は０．９１９であった。

ＡｎによるＴＦＡ−分離によって得られた粗製ペプチド（２９０−９）を脱ガス 化ＤＭＦ５０ＯＮＩ中に溶かした。ＮａＨＣＯ３２１０１９及びＢＯＰ６００＋ ＋ｇの添加後に室温で３日撹拌した。次いで蒸発乾固させかつ粗製ペプチドをゲ ルクロマトグラフィー（ＳＥＰＨＡＤＥＸｏＬＨ２０）により精製した。純粋生 成物１３８罵りが得られた。

例１１４ 山二戸二巴２＝巴り児−Ａｌａ　−ＶａｌづｅｒＦｍｏ　ｃ−３ｅ　ｒ　（ｔ− Ｂｕ）　−ｐ−アルコキシベンジルアルコールー樹脂（置換〜０．４５ｍモル／ ９）１．１１ｇ（０，５ｍモルの成分量に相当）をＡＩｂに依り、Ｆｍｏｃ−Ｖ ａ　１−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−ＯＨ，Ｆｍｏ　ｃ−Ａ　１　ａ−Ｏ ＨＳＦｍｏ　ｃ−Ｔｈｒ　（ｔＢｕ）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−１１ｅ−ＯＨＳＦｍｏ ｃ−Ｇｉｎ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ　 （ｔＢｕ）−ＯＨ各２ｍ−Ｅルと反応させた。合成終了後に、このペプチド樹脂 をＮ−末端で脱保護しくＡＩｂによる工程２−４の実施）、引続き真空中で乾燥 させた。収量は１．８９であった。

ＡＩＩＩによるＴＦＡ−分離の後に得られた粗製ペプチドを脱ガス化ＤＭＦ５０ ０ｍＡ’中に溶かした。

ＮａＨＣＯ３２１０１１９及びＢＯＰ　６６０ｍ＋９の添加の後に室温で３日撹 拌した。次いで、蒸発乾個させ、粗製ペプチドをゲルクロマトグラフィ（ＳＥＰ ＨＡＤＥＸｏＬＨ２０）により精製した。単離されたモノマー（２１９鳳ｇ）を ＡＩＩに依り脱保護し、中圧クロマトグラフィ（Ａ、　ｒＶ参照；Ａ４０〜６０ ％；　０．２５％ｗｉｎ−１）により精製した。純粋生成物６８りが得られゾこ 。

例１１３及び１１４と同様にして、次のものが製造１１８、Ａｌａ−Ｖａｔ−５ ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ１１９、巴ぜ亡とヴ二巳匣知 Ａｌａ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−０−Ｐｒ。

＋２２．　１ｙ−Ｖａｔ−５ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−＾ｂｓ１２３、Ａｌａ−Ｖ ａｌ−５ｅｒ−０−Ｔｙｒ−Ｇｉｎｌ、２４．　１ｙ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｔｙｒ −Ｇｉｎ−Ｔｈｒ１２７、ｒｌｅ−Ａｌａ−Ｍａｌ−５＠ｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ− Ｔｈｒ−０−Ａｌａ国際調査報告 ＰＣｒ／ＥＰ８９１０１４フ４

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉ： Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｔｙｒ−ＹＩ ［式中ＡはＳｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＰｒｏであり、Ｂは天然由来のα−アミ ノ酸を表わし、Ｘは基：【配列があります】 を表わし、Ｙは基 【配列があります】 又は−Ｖ−ＮＨ−ＣＨＱ−ＣＯ−Ｕ−Ｚを表わし、ここで、Ｘ及びＹ中のＧは水 素原子又はアミノ保護基を表わし、ＺはＯＨ−又はＮＨ−基又はカルボキシル保 護基を表わすか又はＧとＺは一緒になって、共有結合又は基−ＣＯ−（ＣＨ２） ａ−ＮＨ−をも表わし、この際、ａは１〜１２の数であり、Ｒ、Ｕ、Ｖ及びＷは 天然のα−アミノ酸１〜４個より成るペプチド鎖を表わし、Ｍ及びＱは水素又は 基：−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ６Ｈ５、ＣＨ（Ｏ Ｈ）−ＣＨ３、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります▼又は− （ＣＨ２）ｂ−Ｔ（ここで、ｂは１〜１６の数を表わし、Ｔは水素原子又はＯＨ −、ＣＨ３Ｏ−、ＣＨ３Ｓ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、Ｃ６Ｈ５−、Ｐ−ＨＯ−Ｃ ６Ｈ４−、ＨＳ−、Ｈ２Ｎ−、ＨＯ−ＣＯ−、Ｈ２Ｎ−ＣＯ−、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ ＮＨ）−ＮＨ−基である）を表わすか又はＭとＱは一緒になって、−（ＣＨ２） ｃ−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｄ−、−（ＣＨ２）ｅ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｆ−又 は−（ＣＨ２）ｅ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｇ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｆ−橋 （ここでｃ及びｄは１〜４の数であり、ｅ及びｆは１〜６の数であり、ｇは１〜 １２の数である）を表わす］のペプチド又は生理学的に認容性の酸とのその塩。
2. ２．式中のＧは水素原子又はアミノ保護基でり、Ｚがヒドロキシ−又はアミノ基 又はカルボキシル保護基であり、ＭとＱは相互には結合していない、請求の範囲 第１項記載のペプチド。
3. ３．式中のＧは水素又はアミノ保護基を表わし、Ｚはヒドロキシ又はアミノ基又 はカルボキシル保護基を表わし、Ｍ及びＱは一緒になって−（ＣＨ２）ｃ−Ｓ− Ｓ−（ＣＨ２）ｄ−橋を表わす、請求の範囲第１項記載のペプチド。
4. ４．式中のＧは水素原子又はアミノ保護基を表わし、Ｚはヒドロキシ又はアミノ 基又はカルボキシル保護基を表わし、Ｍ及びＱは一緒になって基−（ＣＨ２）ｅ −ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｆ−又は−（ＣＨ２）ｅ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｇ −ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｆを表わす、請求の範囲第１項記載のペプチド。
5. ５．式中のＧ＋Ｚは一緒になって共有結合又は−ＣＯ−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ−を 表わす、請求の範囲第１項記載のペプチド。
6. ６．疾病の治療の際に使用するための、請求の範囲第１項から第５項までのいず れか１項記載のペプチド。
7. ７．新生物疾患及び自己免疫疾患の治療並びに移植の際の感染、炎症及び拒絶反 応の治療及び予防のための、請求の範囲第１項から第５項までのいずれか１項に 記載のペプチドの使用。
8. ８．ペプチド化学で公知の方法で製造することを特徴とする、請求の範囲第１項 から第５項までのいずれか１項記載のペプチドの製法。