JPH04502307A

JPH04502307A - 新規ｔｎｆペプチド

Info

Publication number: JPH04502307A
Application number: JP2500555A
Authority: JP
Inventors: ベーム，ハンス―ヨアヒム; ダウム，ロタール; ハウプト，アンドレアス; シュミート，ベルンハルト; ウォーカー，ニゲル; ツェヒェル，ヨハン―クリスティアン
Original assignee: ビーエーエスエフ　アクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1988-12-12
Filing date: 1989-12-02
Publication date: 1992-04-23
Also published as: EP0447431A1; CA2005056A1; WO1990006938A1; DE3841755A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】新規ＴＮＦペプチド本発明番よ腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）から誘導した新規のベブヂド、その製造およびその医薬としての用途に関する．ＣａｒＳｔｒｅｌｌ　ａｔ　ａｌ．　（Ｐｒｏｃ−　ＩＪａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ７２，　３６６６．　１９７５　）により、あらかじめミコバクテリア菌株ガルメット・ゲラン（Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）　（ＢＣＧ）で感染させたエンドトキシン処理した動宙の血清番よ、マウスの多様な腫瘍において出血性壊死を引き起こすことが報告された．この活性は腫瘍壊死因子にあるとされた，ＴＮＦは、試験管内で形質転換した多数の細胞系に対して静細胞性または細胞毒性の作用を示すが、正常なヒトおよび動物の細胞系はそれによって作用されなイ（　Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　Ｒｅｐｏｒｔｓ　ｌ／ｏｌ．　２，　ｐｐ　２３５７２７５，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　＋９８１）　ａ最近では、生化学的特性の解明およびヒトＴＮＦの遺伝子について記載されている（　Ｎａｔｕｒｅ　３１２，　７２４，　１９８４；　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．ＣｈｅＩＩ１．　２６０，　２３４５，１９８５；　Ｎｕｃｌ．＾ｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．　１３，　６３６１．１９８５）　．これらのデータから、成熟したヒトＴＮＦについて、次のタンパク質構造を導き出すことができる．ｖａ　＋Ａｒ９ｓ＠　ｒｓ＠ｒ５ｅｒＡ　ｒｇＴｈｒＰｒｏＳｅｒａｓｐＬｙ　ｓＰｒｏｖａ　ｌ　Ａ　Ｉ　ａＨ　Ｉ　ｓ　ｖａ　ｌ　Ｖａ @Ｉ　Ａ　ｌ　ａＡｓｎＰｒｏＧ１ｎＡｌａＧｌｕＧ１ｙＧ１ｎＬｅｕＧｌｎＴｒｐＬｅｕＡｓｎＡｒｇＡｒｇＡｌａＡｓｎＡ１ａＬｅｕＬｅｕＡｌａＡｓｎＧｌｙｖａＩＧｌｕＬｅｕＡｒｇＡＳｐＡＳｎＧ１ｎＬｅｕＶａＩＶａＩＰｒｏＳｅｒＧ１ｕＧ１ｙＬｅｕＴｙｒＬｅｕＥｌｅＴｙｒｓｅｒＧＩｎＶａｌＬｅｕＰｈｅＬｙｓＧＩｙＧｌｎＧ１ｙＣｙｓＰｒｏＳｅｒＴｈｒｓｉｓＶａＩＬｅｕＬｅｕ丁ｈｒＨｉｓ丁ｈｒｌｌｅＳｅｒＡｒｇ　Ｉ　１　ｅＡ　１　ａＶａ　Ｉ　ＳｅｒＴｙｒＧ　ｌ　ｎＴｈｒＬｙ　ｓＶａ　ｌＡｓｎ　ＬｅｕＬｅｕＳｅ　ｒｘ　１　ａ@Ｉ　１　ｅＬｙ　ｓｓｅｒＰｒｏＣｙｓＧ　ｌ　ｎＡｒｇＧ　ｌｕＴｈｒＰｒｏＧ　ｌｕＧ　１　ｙＡ　１　ａＧ　ｌ　ｕＡ　１　ａＬｙ　ｓＰｒｏＴｒｐＴｙ　ｒＧ　１　浮oｒｏ　１　１ｅＴｙｒＬｅｕＧｌｙＧｌｙＶａｌＰｈａＧＩｎＬｅｕＧｌｕＬｙｓＧｌｙＡｓｐ＾ｒｇＬｅｕｓｅｒ＾ｌａＧｌｕｌｌｅＡｓｎＡｒｇＰｒｏＡｓｐＴｙｒＬ＠ｕＡｓｐＰｈｅＡ　ｌ　ａＧ　１ｕＳｅｒＧ　１　ｙＧ　１ｎＶａ　ＩＴｙｒＰｈｅＧ１ｙ　Ｉ　ｌｅ　Ｉ　１ｅＡ　ｌ　ａＬｅ■ さらに、ウシ、ウナギおよび７ウスのＴＮＦ遺伝子が記載されている（ＣｏＩｒｌ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｓｙｍｐ．　Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．　５１，　５９７．　１９８６）　．ＴＮＦはその細胞毒性のほかに、炎症反応に関与する主因子の一つである（Ｐｈａｒｍａｃ．　Ｒｅｓ．．　５，　１２９．　１９８８）．動物モデルにおいて、ＴＮＦの関与は、敗血性のショックの場合＜Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２９，　８６９．　１９８５）および抗宿主移植片症（Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．　１６６，　１２８０．　１９８７）の場合に認められた．極めて低い分子量のべブチドが有利な特性を脊することが見出された．本発明の目的は、式■：Ｘ−Ａ　ｌ　ｔｃ−Ｆ｛　ｉ　ｓ−Ａ−Ｙ　Ｉ［式中、Ａは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ，Ｉｌｅまたは基：一ＮＨ−　（Ｃ｝Ｉ！）．−Ｃｏ　（ただし、ｍは１〜ｌ２の整数を表す）を表し、ｘｌｉ−、基：　Ｇ−ＮＨ−ＣＨＭ−ＣＯ−、Ｇ−ＮＨ−ＣＨＭ−ＧＯ−Ｗ−、Ｇ−Ｒ−ＮＫ−ＣＨＭ−ＣＯ−またはＧ−Ｒ−ＭＨ−ＣＨＭ−ＣＯ−Ｗ−を表し、およびＹｌよ、　基　：　−Ｚ，　−Ｎ１｛−Ｃ｝ＩＱ−Ｇｏ−Ｚ、　−Ｖ− Ｎｌ｛−ＧＨＱ−Ｇｏ−Ｚ．　−ＮＫ−ＣＨＱ−ＣＯ−Ｕ−Ｚ　＊　ｔ：　ｉｔ −Ｖ−Ｎ｝Ｉ−ＧＨＱ−Ｇｏ−Ｕ−Ｚ　＆表し、その際、ＸおよびＹにおいて、Ｇは、水素原子またぱアミノ保護基を表し、Ｚば、ＯＨ一また（よＭＫ．基また（よガルポキシル保獲基を表し、またはまた｛よ５〜Ｌ１個のアミノ酸基の長さのこのペプチド鎖の部分配列または１〜４の天然由来のα−アミノ酸からのべブチド鎖を表し、Ｕ．ＶおよびＷは１〜４の天然由来のα−アミノ酸からのペプチド鎖を表し、（ただし、ｂは１〜６の数を表し，Ｔは水素原子またｉ＊ＯＨ−、Ｃ｝ｒ，Ｏ− 、ｃ｝［．ｓ−、（　ｃＨｓ　）　ｚｃＨ−、ＣＪ＊−、ｐ−ＨＯ−Ｃ＠Ｈ４− 、ＨＳ−、Ｉ｛．Ｎ−、｝１０−ＧＯ−、ＨｔＮ−ＣＯ−、旧Ｎ−Ｃ（＝Ｎ■） −Ｎ｝［一を表す）を表すか、またはＭおよびＱは一緒になって−（ＣＨ！）．−Ｓ−Ｓ−（Ｃ｝！１），−．　−（ＣＬ）、−Ｇｏ−ＮＨ−（ＣＬ）　ｔ−＊たｌ！−（ＣＨＩ）　、−ＮＨ−Ｇｏ −（ＣＨり。

ＮＨ−Ｇｏ−（ＣＨｉ）　ｒ−架橋基（ただし、Ｃおよびｄば１〜４の数を表し、ｅおよびｆは１〜６の数を表し、ｇは１〜１２の数を表す）を表す］のペプチド、ならびに生理学的に認容性の酸とのその塩である。

式Ｉのペプチドは、Ｌ−アミノ酸から構成されているが、しかし１〜２個のＤ− アミノ酸を含有していてもよい、三官能性アミノ酸の側鎖は、保護基を有するかまた番よ保護されていないで存在していてもよい。

生理学的に認容性の酸として、特に次のものが挙げられる。

塩酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、ギ酸、７レイン酸、フマル酸、リンゴ酸、コハク酸、７０ン酸、硫酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、無性ブドウ酸、粘液酸、安息香酸、グルクロン酸、シュウ酸、アスコルビン酸、アセチルグリシン。

新規ペプチドは、開鎖であってもよ＜　（Ｇ＝Ｈ、アミノ酸保護基；　Ｚ　＝ＯＨ，ＭＨｚ、カルボキシル保護基。

ＭおよびＱは相互に結合していない）かつ特にジスルフィド架橋であってもよ＜（Ｇ＝）Ｉ、アミノ保護基；Ｚ　＝Ｏ）１．ＮＨ，、カルボキシ保護基；　Ｍ　＋　Ｑ　＝−（ＣＨ，）、−３−３−（ＣＨＩ）＜−）または側鎖架橋であってもよい（Ｇ＝）［、アミノ保護基、Ｚ　＝ＯＨ，ＮＨ２、カルボキシ保護基、Ｍ＋　Ｑ　＝−（ＣＨ，）、−ＮＨ−Ｃｏ−（ＣＨ２）Ｉ−または−（ＣＨ，）、 −ＮＨ−ＣＯ−（Ｃ）［、’）　、−ＮＨ−Ｇｏ−（ＣＨＩ）＋−）−新規化合物はペプチド化学で公知の方法により製造することができる。

ペプチドは、逐次的にアミノ酸からまたは好適な小さいペプチドの７ラグメント結合により形成することができる。逐次的構成の際に、ペプチド鎖はＣ末端で開始し、段階的にその都度１個のアミノ酸を延長する。

フラグメントカップリングの際、種々の長さのフラグメントを相互に結合させることができ、この場合、フラグメントもまた、アミノ酸からの逐次的構成によりまた番よフラグメントカップリングにより得られる。環状ペプチドは、開鎖ペプチドの合成後に、高い希釈度で実施する環化反応により得られる。

逐次的構成でも、またフラグメントカップリングでも、構成要素をアミド結合の形成により結合しなければならない、このためには、酵素的方法および化学的方法が適している。

アミド結合を形成するための化学的方法は、Ｍｕｅｌｌｅｒ、Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅ＋ａｉｅ　Ｖｏｌ　ＸＶ／２．　ｐｐ　１−３６４．　Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅｒｌａｇ、　Ｓｕｔｔｇａｒｔ、　１９７４；　Ｓｔｅｗａｒｔ、　Ｙ。

ｕｎｇ、　５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　ｐｐ　３１−３４．７１−８２．Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、　１９８４；　Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ、　Ｋｌａｕｓｎｅｒ、　０ｎｄｅｔｔｉ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　ｐｐ８５−１２８．　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９７６　および他のペプチド化学の標準的論文に詳しく扱われている。特に優れているのは、アジド法、対称および混合アンヒドリド法、その場で生成もしくｊよ予備形成される活性エステルならびにカップリング試薬（活性剤）、特にジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤｒＣ）、１−エトキシカルボニル−２−二トキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ）、ｎ−ブユバンホスホン酸無水物（ＰＰＡ）　、Ｎ、Ｎ−ビス（２−才キソー３−オキサゾリジニル）アミドリン酸クロリド（ＢＯＰ−ＣＩ）、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、キャストロ試薬（Ｃａｓｔｒｏ’ｓ　Ｒｅａｇｅｎｚ　；　Ｂ　ＯＰ　）　、　Ｏ−ベンゾトリアゾリル−Ｎ、Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’　−テトラメチルウロニウム塩（Ｉ（ＢＴＵ）、２．５−ジフェニル−２，３−ジヒドロ−３−才キソー４−ヒドロキシチオフェンジオキシド（Ｓｔｅｇｌｉｃｈｓ　Ｒｅａｇｅｎｚ　；　ＨＯＴ　Ｄ　Ｏ）および１゜１′−カルボニル−ジイミダゾール（ＣＤ　Ｉ　）を用いるアミド結合形成である。カップリング試薬は、単独でまたは添加物、たとえばＮ、Ｎ’　−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯ８ｕ）または２−ヒドロキシピリジンと組み合わせて使用することができる。

一般に酵素的ペプチド合成の場合、保護基を使わなくてもよいが、化学的合成の場合、アミド結合形成に関与しない双方の反応成分の反応性官能基の可逆的保護が必要である。化学的ペプチド合成の場合、文献により公知の３つの（ｌ［方法が優れている：ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）−１℃−ブチルオキシガルボニル（Ｂｏｃ　）−および９−フルオロエニルメチルオキシガルポニル（Ｆｍｏｃ）−保護基法、それぞれ、連鎖が延長する構成要素のα−アミノ官能基の保護基である。

三官能性アミノ酸の側鎖保護基（よ、それが必然的にα−アミノ酸保護基と一緒に脱離されないように選択される。アミノ酸保護基に関する詳細は、Ｍｕａｌ　ｌｅｒ、　Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ　Ｖｏｌ　ＸＶ／１．　ｐｐ　２０−９０６゜Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅｒｌａｇ、　Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、　１９７４に記載されている。

ペプチド鎖の構成に有用な構成要素は、溶液中で、！！濁液中でまた番よメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）によるＪ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｆｆｌ、　Ｓｏｃ、　８５．２１４９．１９６３に記載されたような方法により反応させることができる。反応成分を溶液中で反応させて、逐次的にまたはフラグメントカップリングによりＺ〜、Ｂｏａ−またはＦｍｏｃ−保護方法を適用しながらペプチドを構成する方法ならびに前記のメリフィールド法と同様に、反応成分を不溶のポリ７−担体（以下樹脂ともいう）に結合させて反応させる方法が特に優れている。この場合、ペプチドをＢｏｃ−また番よＦｍｏｃ−保護基法を適用してポリ７−担体に構成させるのが代表的であり、その際成長するペプチド鎖は、Ｃ末端で不溶性樹脂粒子と共有結合している（第１図およびＷ；２図参照）、この操作法は、試薬および副生成物を濾過により除去することができ、従って中間生成物の再結晶は不必要である。

この保護したアミノ酸番よ任意の適当な重合体に結合させることができ、この重合体は、使用する溶剤中に不溶性であり、かつａ単な濾過が可能な物理的に安定な形を有していなげればならない。この重合体（よ、保護した最初のアミノ酸と共存結合により固く結合することのできる官能基を有していなければならない、このため、多様な重合体、たとえばセルロース、ポリビニルアルコール、ポリメチルアクリレート、スルホン化ポリスチレン、スチレンとジビニルベンゼンとのクロロメチル化共重合体（メリフィールド樹脂）、４−メチルペンゾヒドリルアミンー樹脂（ＭＢＨＡ−樹脂）、フェニルアセトアミドメチル樹脂（Ｐａｍ−樹脂）、ｐ−ペンゾオキシベンジルアルコール樹脂、ベンゾヒドリルアミン樹脂（Ｂ）ＩＡ−樹脂）、４−（ヒドロキシメチル）−ベンゾイルオキシメチル樹脂、Ｂｒｅｉｐｏｈｌ　ｅｔａｌ、　（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　２８．５６５，１９８７；　Ｆａ、　ＢＡＣｔ（ＥＭ）による樹脂、ＨＹＣＲＡＭ樹脂（Ｆａ、　０ＲＰＥＧＥＮ）または５ＡＳＲ［Ｎ樹脂（Ｆａ、　ＢＡＣ）［ＥＭ　）が適している。

溶液中で行うペプチド合成には、反応条件下に不活性であることが明らかな全ての溶剤、特に水、Ｎ、Ｎ′−ジメチルホルム１ミド（ＤＭＦ）　、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、ジグロロメタン（ＤＣＭ）　、１．４ −ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＩ（Ｆ）　、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）ならびに前記溶剤の混合物が適している。ポリ７−担体を用いたペプチド合成は、使用したアミノ酸誘導体が可溶性である全ての不活性有機溶剤中で実施することができるが、付加的に樹脂膨潤特性を存する溶剤、たとえばＤＭＦ、ＤＣＭ％ＮＭＰ、アセトニＩ、リルおよびＤＭＳＯならびにこれらの溶剤の混合物が優れている。

良好な結果の合成の後に、ペプチドをポリ７−担体から分離する。多様な樹脂タイプを分離することができる条件は、文献に公知である。酸性のパラジウム接触性分離反応が、最もＩＩＸ繁に適用され、特に、液状の無水フッ化水素、無水トリフルオロメタンスルホン酸、希または濃トリフルオロ酢酸中での分離、もしくはたとえばモルホリンのような弱塩基の存在で、ＴＫＦ＊たはＴｆ（Ｆ−ＤＣＭ混合物中で行うパラジウム接触反応が適用される。保護基の選択に応じて、この保護基は、分離条件下で保持されるかまたは同様の条件下で脱離することができる。さらに、特定の誘導化反応または環化を実施すべき場合には、ペプチドの部分的脱保護が有効である。

新規ペプチドは、一部で良好な細胞毒性を示す、このペプチドの他の一部は、細胞ＴＮＦレセプターに対して高い親和性を有するが、細胞毒活性を存していない、従って、これ番よＴＮＦアンタゴニストである。これ１よ天然のＴＮＦアンタゴニストに拮抗して細胞ＴＮＦレゼプターに結合し、ＴＮＦ作用を抑制する。この新規ペプチドは、新生物疾患および自己免疫疾患の治療ならびに感染、炎症および移植の場合の拒否反応の治療および予防に使用することができる有用な医薬であることが明らかになった。筒車な実験により、個々のペプチドがどのような作用を有するかを解明することができる。ＴＮＦ感受性細胞を用いてこのペプチドの細胞毒性をペプチドの存在で細胞系のインキュベートにより測定する。Ｉｒ２の実験パッチでは、致死ＴＮＦ量の存在で、細胞系を相応するペプチドと共にインキュベートする。これによりＴＮＦ拮抗作用を検出することができる。さらに、試験管内結合試験により、ｍ胞ＴＮＦレセプターに対するペプチドの親和性を測定する。

新規ペプチドの７ゴニストまたはアンタゴニスト作用に関する生物学的特性の解明を次に試験系で行った：１、ＴＮＦ感受性指示細胞に対する細胞毒性試験Ｉ　１．ＴＮＦ感受性指示細胞に対する競合細胞毒試験Ｉ　ｒ　１．ＴＮＦレセプターである指示細胞に対する競合レセプター結合試験Ｉ−細胞毒性試験新規ペプチドのアゴニストとしての評価は、ＴＮＦ感受性細胞（たとえばＬ９２９、ＭＣＦ−７、Ａ２０４、Ｕ９３７）に対する細ｍ’ｔｇ性作用に基づ＜、Ｌ９２９およびＭＣＦ−７を用いた試験番よ次のように実施した。

１、３〜５　Ｘ　１０’個の、トリプシン地理したでの、指数的に成長しているＬ９２９−細ａ（７ウス）ｔ−た（よＭＣＦ−７−細胞（ヒト）を有する培養基１００μｌを、９６穴の平底の培養プレートの凹みにピペット装入した。このプレートを定温器中で３７℃で一晩中インキュベートした。定温器中の水蒸気で飽和した空気はＣ０２５容量％を含んでいた。

Ｌ９２９−培養基は、ＭＥＭ　Ｅａｒｌｅ　ＩＸ　（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ。

Ｍａｎｎｈｅｉｍ）　５００　ｍ　ｌ　、熱により失活化（５６℃で３０分間）させたウシ胎児血清（Ｆ　ＣＳ　）　５０　ｍ　ｌ、Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ）５ｍ１．１００Ｘ非必須アミノ酸５　ｍ　ｌ、ＩＭＨｅｐｅｓ−Ｍ＠液　ｐＨ７゜２３ｍ１およびゲンタマイシン５０ｍｌ（５０ｍｇ／ｍｌンを含存していた、ＭＣＦ−７−培養基は、ＭＥＭ　Ｄｕｌｂｅｃｃｏ　ＬＸ　（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ、　Ｍａｎｎｈｅｉｍン５００　ｍ　ｌ　、熱により失活させた（３０分、５６℃）Ｆｅ２　ｌｏｏｍｌ、Ｌ−グルタミン５　ｍ　ｌおよび１００ｘ非必須アミノ酸５　ｍ　ｌを含有していた。

２、翌日、試験すべきペプチド溶液１００μｍを、この細胞培地に添加し、連続して２回滴定した。さらに、若干の細胞対照（つまり、ペプチド希釈液で処理していない細胞培ａ）および若干のｒｈｕ−ＴＮＦ対照（二組換えヒトＴＮＦで処理したｍ胞培地ンを一緒に設置した０次いで、この培養プレートを３７℃で４８時間、ＣＯ３５容量％を有する水蒸気で飽和した空気からなる＃囲気中でインキュベートした。

３、ペプチド希釈液で処理した培地中で生き残った細胞のパーセンテージ１よ、クリスタルバイオレット染色を用いて測定した。このため、テストプレートをひ）くり返して、凹みから液体を眸去した。それぞれの凹みに、クリスタルバイオレット溶液５０μｌをとベットで入れた。

このクリスタルバイオレット溶液は次の組成を有していた；クリスタルバイオレット　３．７５ｇＮａＣ１１，７５ｇエタノール　１６１．５ｍ１３７％ホルムアルデヒド　４３．２ｍｌ水　全量５００ｍ１このクリスタルバイオレット溶液を、この凹みに２０分間滞留させ、次いで同様にひっくり返して除いた。

引き続き、このプレートをそれぞれ５回水に漬けることで洗浄し、細胞に結合していない染料を除去した。

細胞に結合した染料を試薬溶液１００μｌ　（エタノール５０％、氷酢酸０−１％、水４９４９％）をそれぞれの凹みに添加することで細胞から抽出した。

４、このプレートを５分間振盪させることにより、それぞれの凹みで１ヨ、均質に着色した溶液が得られた。

生き残った細胞を調定するため、個々の凹みの中の着色溶液の吸光度を５４０ｎｍで測定した。

５、その後、細胞対照に関して５０％の細Ｉ＆毒性値を規定し、５０％の細胞毒性を引き起こす試料希釈液の逆数を試験試料の細胞毒性作用とした。

Ｉｌ、競合−細胞毒性試験ペプチドのアンタゴニストとしての評価は、ｒｈｕ−ＴＮＦのＴＮＦ感受性細胞（たとえば、Ｌ９２９、ＭＣＦ−７、Ａ２０４、Ｕ９３７）に対する細胞毒性作用に競合するその特性に基づいている。Ｌ９２９およびＭＣＦ−７−細胞を用いたこの競合−細胞毒性試験は、次のように実施した。

１．３〜５Ｘ１０’個の、トリプシン処理したでの、指数的に成長しているＬ９２９−細胞（′７ウス）またばＭＣＦ−７−細胞（ヒト）を宥する培養基１００ μｌを、９６穴の平底の培養プレート・の凹みにとベット装入した。このプレートを定温器中で３７℃で一晩中インキユベートした。定温器中の水蒸気で飽和した空気はＣ０，５容量％を含んでいた。

Ｌ９２９−培養基は、ＭＥＭ　Ｅａｒｌａ　ＩＸ　（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ。

Ｍａｎｎｈｅｉｍ）　５００　ｍ　ｌ、５６℃で３０分間熱により失ｉ舌化させたＦＣ５５０ｍｌ、Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ）５ｍｌ、１００Ｘ非必須アミノ酸５ｍｌ、１ＭＨｅｐｅｓ−ａ街液ｐＨ７，，２３ｍ　ｌおよびゲンタマイシン５００μｌ　（５０ｍｇ／ｍｌ）を含有していた。

ＭＣＦ−７−培養基は、ＭＥＭ　Ｄｕｌｂｅｃｃｏ　ＩＸ　（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ、　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）　５００　ｍ　ｌ　、熱により失活させた（３０分、５６℃）−Ｆｅ２　１００ｍ１．Ｌ−グルタミン（２００ｍ　Ｍ　）　５　ｍ、　ｌおよび１ｏｏｘ非必須アミノ酸５ｍｌを含有していた。

２、翌日、試験すべきペプチド溶液１００μＩを、この細胞培地に添加し、連続して２回滴定した０次いで、この細胞培地に、細胞培地中で最終濃度において８０〜１００％の細胞毒性作用を有する培養基中のｒｈｕ−ＴＮＦ希釈液１００μ ｍを添加した。さらに、若干のｍ胞対照（つまり、ペプチド溶液で処理していないおよびｒｈｕ−ＴＮＦ溶液で処理していない細胞培ａ）および若干のｒｈｕ− ＴＮＦ対照（＝　ｒ　ｈ　ｕ　−Ｔ　Ｎ　Ｆ溶液で処理しただけの細胞培地）を −緒に設置した。

次いで、この培養プレートを３７℃で４８時間、Ｃ０１５容量％を有する水蒸気で飽和した空気からなる雰囲気中でインキュベートした。

３、物質溶液で処理した培地中で生き残った細胞のパーセンテージは、クリスタルバイオレット染色を用いて測定した。このため、テストプレートをひっくり返して、凹みから液体を除去した。それぞれの凹みに、クリスタルバイオレット溶液５０μｌをピペットで入れた。

このクリスタルバイオレット溶液（よｒｌ、３に記載したＭ成を有していた。

このクリスタルバイオレット溶液を、この凹みに２０分間滞留させ、次いで同様にひっくり返して除いた。

引き続き、このプレートをそれぞれ５回水に漬けることで洗浄し、紙胞に結合していない染料を除去した。

細胞に結合した染料を試薬溶液１００μｍ　（エタノール５０％、氷酢酸０．１％、水４９．９％）をそれぞれの凹みに添加することで細胞から抽出した。

４、このプレートを５分間振盪させることにより、それぞれの凹みでは、均質に着色した溶液が得られた。

生き残った細胞を測定するため、個々の凹みの中の着色溶液の吸光度を５４０ｎｍで測定した。

５、その後、細胞対照およびｒｈｕ−ＴＮＦ対照に関して５０％の競合値を規定し、適用したｒ　ｈ　ｕ　−Ｔ　ＮＦ濃度において、ｒｈυ−ＴＮＦ＃ａｌ胞毒性の５０％の競合を起こさせる試料濃度が、試験試料のアンタゴニスト活性とした。

ＩＩｌ、競合−レセプター結合試験ペプチドのＴゴニスト作月もアンタゴニスト作用も、ペプチドがＴＮＦレセプターに結合することを前提としている。このことは、アゴニストもしく【よアンタゴニストの作用を宥するペプチドとｒｈｕ−ＴＮＦとが、ＴＮＦ−感受性の指示細胞（たとえばＵ９３７）上のＴＮＦレセプターへの結合をめぐって競合することを意味している。この競合−レセプター結合試験は次のように実施した。

１、試験すべきペプチドならびにｒｈｕ−ＴＮＦ　（＝対照）を異なる濃度で含有する培地１００μｌを反応容器にピペットで入れた。この培地はＰ　Ｂ　Ｓ　（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ、　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）　５００　ｍ　ｌ　、熱により失活させた（３０分、５６℃）ＦＣ３ＩＯｍ＋およびナトリウムアジドｌ　ＯＯｍ　ｇを含有していた。

２、引き繞き、１２′ヨウ素−榎徴したｒ　ｈ　ｕ　−Ｔ　Ｎ　Ｆｌ　ｎ　ｇ　（Ｂｏ１℃ｏｎによるラクトペルオキシダーゼ法）を有する培ａＬＯｏμｍを、反応容器に入れ、温合した。

非特異的結合（ＮＳＢ）を測定するために、反応容器中で、′。ヨウ素−標識したｒｈｕ−ＴＮＦ　（培地１００ｐ１中の１！′ヨウ素−ｒ　ｈ　ａ　−Ｔ　Ｎ　Ｆ　１．　ｎ　ｇ　）を、２００倍の過剰量の放射線により標識していないｒ −ｈｕ−ＴＮＦ（培地ｌｏｏｇｉ中ｒｈＬＬ−ＴＮＦ　２００ｎｅンと混合した。

３、次に、Ｕ９３７細胞（ヒト）２Ｘ１０“個を有する培地１００μｌを、反応容器にとベットで入れ、混合した。この反応容器（テスト容量３００μｌ）を、０℃で９０分インキュベートした。４５分後に、この反応バッチを再度十分混合した。

４、インキュベート時間の後、細胞を４℃で５分間１８００ｒｐｍで遠心分離し、培地で３回洗浄し、定量的に計数管に移し、細胞と結合した放射能をＣ１１ｎｉ　Ｇａ＊ｍａ　Ｃｏｕｎｔｅｒ　１２７２　（ＬＫＢ　Ｗａｌｌａｃ）で測定した。

５、測定値を非特異的結合だけ校正することにより、全結合に関して５０％の競合値を規定し、かつ、適用した１！Ｉヨウ素−ｒｈｕ−ＴＮＦ濃度において、Ｉｚ’Ｅつ素−ｒｈｕ−ＴＮＦ結合の５０％の競合を引き起こす試料濃度を、試験試料の競合活性とした。

次の実施例により、本発明を詳説する。プロテオゲンアミノ酸は、例中で、公知の三文字コードで略記しである。その他は次の意味である。

Ａ　ｂ　ｓ　＝　４−アミノ酪酸、Ａｃ＝酢酸、Ａ、　ｄ　ｅ　＝　Ｌ　Ｏ−アミノブガン酸、Ａ　ｈ　ｘ　＝　６−アミノヘキサン酸、Ａ　ｎ　ｏ　＝＝　９ −アミノノナン酸、Ａｏｃ＝８−アミノオクタン酸、Ａｐｅ＝５−アミノペンタン酸、Ｅ（ｃｙ＝ホモシスティン、Ｈ１７＝ホモリシン、０ｒｎ＝オルニチン、Ｄａｐ＝２．３−ジアミノプロピオン酸Ａ−一般的な作業法１、請求項１によるペプチドの合成を、固相ペプチド合ＩＸ）ｌ［１７ｙ法ヲ用いて、ＡＰＰＬＩＥＤ　ＢＩＯＳＹＳＴＥＭＳ社の完全自動ペプチド合成装置Ｍｏｄｅ１１４３０Ａで実施した。この装置番よ、Ｂｏｃ−およびＦｍｏｃ−保護基法について異なる合成サイクルを利用する。

ａ　）　Ｂｏｃ−１ｊ獲基法についての合成サイクル１．００Ｍ中の３０％のトリフルを口酢酸１×　３分２．００Ｍ中の５０％のトリフルオロ酢酸１×１７分３、ＤＣＭ洗浄工程　５×　１分４．００Ｍ中の５％のジイソプロピルエチルアミン１×　１分５、ＮＭＰ中の５％のジイソプロピルエチルアミンＬＸ　１分６、ＮＭＰ洗浄工程　５×　１分７、あらかじめ活性化し、保護したアミノ酸の添加（ＮＭＰ／ＤＣＭ中＋７）ＤＣＣＩ当量および１（ＯＢｔｌ当量により活性化）；ペプチドカップリング（′ Ｍ１部）１Ｘ３０分８．２０％のＤ　）（Ｓ　Ｏの容量割合まで反応混合物にＤＭＳＯを添加９、ペプチドカップリング（第２部）ｌＸ１６分１０、反応混合物にジイソプロピルエチルアミン３゜８当量を添加１１．ペプチドカップリング（第３部）ＩＸ　７分１１ＤＣＭ洗浄工程　３ｘ　１分１３、不完全な反応の場合、カップリングを繰り返す（５に戻る）１４、ＤＣＭ中の１０％無水酢酸、５％ジイソプロピルエチルアミン　ｌｘ　２分１５−ＤＣＭ中の１０％の無水酢酸　ＬＸ　４分１６、ＤＣＭ洗浄工程　４Ｘ　１分１７．１に戻る１）　ンＦｍｏｃ−保護基法についての合成サイクル１、ＮＭＰ洗浄工程　１× 　１分２、ＮＭＰ中の２０％のピペリジン　ＬＸ　４分３、ＮＭＰ中の２０％のとベリジン　１×１６分４、ＮＭＰ洗浄工程　５×　１分５、あらかじめ活性化し、保護したアミノ酸の添加（ＮＭＰ／ＤＣＭ中（７）ＤＣＣ１当量オ、１−び）（ＯＢｔｌ当量により活性化）；ペプチドカップリングｌＸ６１分６、ＮＭＰ洗浄工程　３×　１分７、不完全な反応の場合、カップリングを繰り返す（５に戻る）８、ＮＭＰ中の１０％の無水酢酸　１×　８分９、ＮＭＰ洗浄工程　３Ｘ　１分１０．２に戻るＩｒ、ｒａにより得られたペプチド樹脂の後処理工＆により得られたペプチド樹脂を真空中で乾燥し、Ｔｅｆｌｏｎ−ＨＦ−装置（ＰＥＮｌＮＳＵＬＡ社）の反応容器に移した。

スカベンジャー、有利にアニソール（４！を脂１ｇあたりｌ　ｍ　ｌ　）　、ならびに、トリプトファン含存のペプチドの場合、インドール性のホルミル基の除去のためチオール、有利にエタンジチオール（樹脂１ｇあたり０゜５　ｍ　ｌ　）を添加した後、液＃−Ｎ２で冷却しなからフッ化水素を凝縮させた（Ｗ脂１ｇあたり１０　ｍ　ｌ　）　、この混合宙を０℃に昇温させ、この温度で４５分間撹拌した。引き続きフッ化水素を真空中で留去させ、残分を酢酸エステルで洗浄して残留したスカベンジャーを除去した。このペプチドを３０％の酢酸で抽出し、濾過し、この濾液を凍結乾燥した。

ペプチドヒドラジドを製造するために、このペプチド樹脂（Ｐａ＋ｎ−また（よメリフィールド樹脂）をＤＭＦに＠濁させ（樹脂１ｇあたり１５　ｍ　ｌ　）　、ヒドラジンヒトレート（２０当量）を添加した後、室温で２日間撹拌した。後処理のために、樹脂を濾別し、濾液を蒸発乾固させた。残分をＤＭＦ／ＥｔｚＯまたｌよＭ　ｅ　ＯＨ／Ｅｔ、Ｏから晶出させた。

ｒｌｌ、Ｉｂにより得られたペプチド樹脂の後処理Ｉｂにより得られたペプチド樹脂を、真空中で乾燥し、引き硬きアミノ酸Ｊｉ［に依存して、次の分離処理の１つむ行った（Ｗａｄｅ、　Ｔｒｅｇｅａｒ、　Ｈｏｗａｒｄ　Ｆｌｏｒｅｙ　Ｆｍ。

ｃ−Ｗｏｒｋｓｈｏｐ　Ｍａｎｕａｌ、　Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ　１９８５）　。

適当なＴＦＡ混合物中のペプチド樹脂懸濁液を、室温で上記の時間撹拌し、次いで、この樹脂を濾別し、ＴＦＡならびにＤＣＭで洗浄した。この濾液および洗浄溶液を十分に濃縮し、ペプチドをジエチルエーテルの添加により沈殿させた。水浴で冷却した後、沈殿物を濾別し、３０％酢酸中に取り、凍結乾燥した。

ＩＶ、ペプチドの精製および特性調査ＭＨヲ、　’ｆルクｏｖトク５フィー　（ＳＥＰＨＡＤＥＸＯＧ−１０゜Ｇ−１５／１０％ＨＯＡｃ；　５ＥＰＨＡＤＥＸ＠ＬＨ２０／ＭｅＯＨ）　ｂヨび引き続き中圧クロ７トグラフイー（固定相：■Ｄ−３［Ｌ　Ｃ−１８，２０−４５μ 、　１００人；移動相：　Ａ＝Ｏ−１％　ＴＦＡ／ＭｅＯＨ，Ｂ＝０−１％　ＴＦＡ／Ｒ２０での勾配）を用いて行った。

得られた最終生成物の純度は、分析ＫＰＬＣＣ固定相：　１００Ｘ２．１ｍｍ　ＶＹＤＡＣＣ−１８，５μ、　３００人；移動相＝Ｃ１（ＳＣＮ／Ｈ，Ｏ勾配、０．１％ＴＦＡでａ＠、４０℃）で測定した。

特性屑査のため、アミノ酸分析および高速医子衝撃質量分析を利用した。

Ｂ、特別な作業法例１＾ｃ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｈｊｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−１１ｅ−１１ｅ−＾１’ａ−Ｌｅｕ−ＯＨＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｐａ！Ｉ樹脂１．１１ｇ（置換的０．４５ｍｍｏ　ｌ　／　ｇ、０．５ｍｍｏｌのＡツｆｌｋ＋二相当）をＡｌａにより、それぞれ２ｍｍｏｌの８ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨＢｏｃ−１（１ｓ（Ｚｌ−ＯＨ８０Ｃ−ＬｙＳ（Ｃ１−Ｚｌ−ＯＨＢｏｃ−１１ｅ−ＯＨＢｏｃ−Ａｌａ−ＯＨＢＯＣ−ＡＳｐ（ＯＣｈＸｌ−ＯＨＢｏｃ−１１ｅ−ＯＨＢｏＣ−Ｖａｌ−ＯＨ８ｏｃ−５ｅｒ（Ｂｚｌｌ −ＯＨ８ｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨＢｏＣ−Ｐｒｏ−ＯＨＢｏＣ−Ｐｒｏ−ＯＨａＯＣ −＾ｐｅ−ＯＮと反応させた（Ｈｊｓに続（全てのカップリングの場合、工程１４〜１６は行わない）。

合成が完了した後、Ｎ−”末一端をアセチル化しくＡＩ＆による工程１〜６および１４〜１６の実施）、このペプチド樹脂を真空中で乾燥した；収率番よ１．９１ｇであった。

こうして得られた樹脂０．９５ｇを）ＩＦ分割にがけた。この粗製生成物（２４５ｍｇ）をゲル濾過（ＳＥＰＨＡＤＥＸ８　Ｇ−１０）および中圧りＯＴトゲラフイー（ＡＩＶ；６０−８０％　人、０．２５％　ｍ１ｎ−’）により精製した。１２７ｍｇの最終生成物が得られた。

例２Ｈ−Ｖａ　ｌ　−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ− ５ｅｒ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａ　１−＾１ａ−Ｈｉr−Ａｏｃ−Ｇｌｙ −ｒｌｅ− Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂０゜４８ｇ（置換的０．５２ｍｍｏｌ／ｇ、０．２５ｍｍ０１のバッチ量に相当）をＡＩｂにより、それぞれ１ｍｍｏｌのと反応させた。

合成が完了した後、Ｎ−末端を脱保護した（Ａｌｂによる工程２〜４の実施）、得られたペプチド樹脂を真空中で乾燥し、この収率は１．２４ｇであった。

ＡＩｒＩによるＴＦＡ分離の後に得られた粗製ベプチＦ（４７５ｍｇ）を、ゲル濾過（ＳＥＰ）［ＡＤＥＸＯＧ−１０）及び中圧クロ７トグラフイー（ＡＴＶ参照、５０〜７０％；０．２５％ｍ１ｎ−’）でＭＷした。に粋生成抜Ｌ　９７　ｍ　ｇが得られた。

例１および２と同様に次のものを製造することができた：３、　Ｈ−ｖａｌ−Ａｒｇ−５＠ｒ−５ｅｒ−５ｅｒ−＾ｒｇ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ −５ｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｈｉ刀|＾ｐｅ− ５、ＡＣ−Ｐｒｏ−５ｉｒ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−ｖａｌ−＾１ａ−）１１ｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−４１ｅ−夏１ｅ−＾１ａ−ＬｅｌＪ−mＨ２９、＾ｃ−５ｅｒ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ｙａｌ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｐｅ −Ｇｌｙ−１１＠−１１ｅ−＾１ａ−Ｌ＠ｕ−ＮＨ２例１０Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈｌｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−ｒｌｅ−＾１ａ−Ｌｅｕ−。ＨＢｏａ−Ｌｅｕ−Ｐａｗ樹脂１．１１ｇ（置換的０．４５ｍｍ０１／ｇ、０．５ｍｍｏｌのバラ升１こ相当〉をＡＩａによりそれぞれ２ｍｍｏｌの８ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨＢｏｃ−＾ｐｅ−ＯＨ８０Ｃ−Ｐｒｏ−０１４８ｏｃ−１１ｅ−０１４ｅｏｃ−Ｈｉｓ（ｚ）−ｏＨｓｏｃ−ｔｙｓ（ｃｔ−ｚ）−。ＨＢｏｃ−Ｃｙｓ（ｐＭＢｌ−ＯＨＢｏｃ−Ａｌａ−ＯＨＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＣｈｘｌ−ＯＨＢｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ８ｏｃ−Ｃｙｓ（ｐＭＢｌ−ＯＨと反応させた（　Ｈｉｓに引き続く全てのカップリングの場合、工程１４−１６を実施しない）。

得られたペプチド樹脂を真空中で乾燥させた；収量は１．７６ｇであった。

こうして得られた樹脂０．８８ｇをＡＩｒによりＥＦ分離を行った。凍結？！燥した粗製生成物を０．１％酢酸ｚｌ中に取り、引き絖きアンモニア水を用いてｐＨを８−４に調節した。アルゴン雰囲気下で０．０１Ｎ　Ｋ、叶ｅ（ＣＮ）ａ］溶液を黄緑色の呈色が１５分以上持続するように徐々に清加した。なお１時間撹拌し、次いで氷酢酸でｐＨ４，５に酸性にし、アニオン交換体（ＢＩＯＲＡＤ＠　３　Ｘ　４ａ、クロリド形）の水性懸濁液１５ｍ１を添加した。３０分後に、このイオン交換樹脂を濾別し、濾液を回転蒸発器で１００　ｍ　ｌに濃縮し、引き練き凍結乾燥した。

使用した全ての溶剤番よ、あらかじめ窒素で抱和して、場合により起こる遊離システィン基の酸化を回避した。

この粗製生成物をゲルクロマトグラフィー（ＳＥＰＨＡＤＨＸ■Ｇ−１５）および中圧クロマトグラフィー（ＡＩＶ参照、５０〜７０％；０，２５％ｍ１ｎ−’ ）でＭ製した。

純粋生成物７２　ｍ、　ｇが得られた。

例１０と同様に、次のものを製造することができた（ペプチドアミドの製造のためにｐ−ＭＢ）ＩＡ樹脂を使用した璽　−一−７−− 比Ａｃ−Ｃｙｓ−Ａ＋ａ−ＨＩｓ−ＶａＩ−ＣｙＳ−Ｈ２＋２．　Ａｃ−ｃｙｓ −＾１ａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ＣｙＳ−ＮＨ２＋３．　Ａｃ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈｉｓ−１１ｅ−ＣｙＳ−ＮＨ２！４．　ＡＣ−ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈｉｓ−＾ＱＣ −Ｃ）Ｓ−ＮＨ２１５、ＡＣ−ＣｙＳ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−＾ｎｏ−Ｃｙｓ−ＮＨ２＋６．＾ｃ−ｃｙｓ−＾１ａ−）＋ｔｓ−＾ｄｅ−ＣｙＳ−ＮＨ２１７、５− ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈ１ｓ−＾ｂｓ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−ＯＨ＋８．　＊ｃ−Ｃｙｓ −＾１ａ−Ｈ１ｓ−＾ｂｓ−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−ＮＨ２＋９．　Ｈ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈ１ｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−ＯＨ２０、＾ｃ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈ１ｓ−＾−−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−ＮＨ２２１、Ｈ−Ｃｙｓ−＾１♂−Ｈ４ｓ−＾ｈスーＧｌｙ−Ｃｙｓ−ＯＨ２２、＾ｃ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈ１ｓ−＾ｐ＠ −Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−ＩＩｓ−ＮＨ２２３、Ａｃ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−１１ｅ−＾１ａ−ＮＨ２２４、５−Ａｓｐ−Ｌｙｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａｂｓ−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−１１ｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＮ２５、Ａｃ−ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａｂｓ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−ｒｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ２６、Ｈ −Ａｓｐ−ＬｙＳ−Ｐｒｏ−ＣｙＳ−Ａｌａ−）＋１ｓ−＾ｂｓ−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−１１ｅ−＾１ａ−ＬＩＩＬＩ−ＮＨ２２７、Ａｃ−ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ −Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈ１ｓ−Ａｂｓ−Ｇ＋ｙ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ −ＮＪ２８、　Ｈ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−Ｈｃｙ−＾１ａ−＋＋５−ａｂｓ −Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＋１ｅ−＾１ａ−Ｌｅｕ−ＯＨ２９、Ａｃ−＾５ｐ−ＬｆＳ −Ｐｒｏ−ＨＣｙ−＾１ａ−１１１ｓ−＾ｂｓ−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−ＩＩ＠−Ａｌａ−ＩＪｕ−ＮＨ２３０、Ｈ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−＋＋ｓ−＾ｂｓ−Ｇｌｙ−Ｈａｙ−ｆｌｅ−ａｌａ−Ｌｓｕ−ＯＨ３１、Ａｃ−＾ｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａｂｓ−Ｇｌｙ−Ｍｃｙ−＋　ｌｅ−＾１ａ−Ｌ＠ｕ−ＮＭ２３２、Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｈｃｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｂｓ−Ｇｌｙ−Ｈｃｙ−＋　＋＠−＾＋ａ−Ｌ＠ｕ−ｏ＋３３、＾ｃ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−Ｈａｙ−＾１ａ−Ｈ１ｓ−＾ｂｓ−Ｇｌｙ− Ｈｃｙ−＋１ｅ−＾１ａ−ＬｅＬＩ−ＮＨ２３Ｌ　Ａｃ−ａｓｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−ｃｙｓ−ａｌａ−用５−Ａｐ＠−ＧＩｙ−ＣｙＳ−口ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ− ＯＨ３５、Ｈ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−＾１＆−１４１５−Ａｐｅ− ＧＩｙ−ＣｙＳ−１ｒｅ−ＡＩａ−Ｌｅｕ−ＭＨ２３６、Ａｃ−＾５ｐ−ｔｙｓ −ｐｒｏ−ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈｌｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−１１ｅ−＾１ａ −Ｌｅｕ−ＮＨ２３７、Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−Ｈｃｙ−＾１ａ−Ｈｌｓ −＾ｐｅ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＋１ｅ−Ａｌａ−ｔｅｕ−ＯＨ３Ｂ、　ＡＣ−Ａｓｐ−ＬｙＳ−ＰｒＯ−Ｈｃｙ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａｐ＠−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−１１ｅ−ＡＩａ−Ｌｅｕ−Ｎ町３９、ト＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−ａｌａ− ＋１ｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−Ｈｃｙ−＋１ｓ−＾１ａ−Ｌｅｕ−０１４４０、＾Ｃ −＾５ｐ−ｔｙｓ−ｐｒｏ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈｉｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−ｓｃｙ −Ｚｌｅ−＾＋ａ−Ｌｅｕ−ＭＨ２４！、Ｈ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｈｃｙ −＾１ａ−Ｈ１ｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−Ｍａｙ−＋ｌｅ−＾１ａ−Ｌｅｕ−ＯＨ４２、ａｃ−ａｓｐ−Ｌｙｅ−Ｐｒｏ−Ｈａｙ−＾１ａ−Ｈｉ５−＾ｐｅ−Ｇｌｙ −Ｈｃｙ−１１ｅ−＾１ａ−ＬｅＬＩ−ＮＨ２４３、Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈｌｓ−ａｈｘ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−重１ｅ−Ａｌａ−Ｌ＠ｕ−ＯＨニぜジ４４．＾Ｃ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−＾ｈｘ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｓｕ−ＯＨ４５、５−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ −ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈ１ｓ−Ａｈｘ−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ −ＮＨ２に６．　Ａｃ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−＾１ａ−ｓｉｓ−＾ｈｘ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２４Ｂ、　ａｃ−＾５ｐ −ＬｙＳ−ＰｒＯ−Ｈｃｙ−＾１ａ−Ｈｌｓ−Ａｈｘ−Ｇｌｙ−Ｈｃｙ−１１ｅ −＾１　ａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２４９、Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−ｃｙｓ−＾１ａ−ｓＩｓ−＾Ｍ−Ｇｌｙ−ＨｃｙＪｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ５０、ＡＣ− ＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈｉｓ−＾ｈＸ−Ｇ　ｌｙ−＋ｅｙ −＋　１ｅ−Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２５１、Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｈｃｙ−＾１ａ−８１３−＾ｈｘ−Ｇｌｙ−Ｈａｙ−１１ｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ５２、＾Ｃ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−ｓＣｙ−＾＋ａ−ｓ＋ｓ−＾ｈｘ−Ｇｌｙ−Ｈｃｙ−口ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２５６、Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−１１ｅ−＾１４−Ｌｅｕ−ＯＨ５７、ＡＣ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｖａｔ−＾１ａ−＋ｌｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−ｒｌｅ−＾１ａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２５８、Ｈ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ｐｒｏ−ｃｙｓ−＾１ａ−Ｈ１ｓ−＾ｐ嗜−Ｇｌｙ−１１＠−Ｃｙｓ−＾１　ａ−Ｌｅｕ−ＯＨ５９、ＡＣ−Ａｓｐ−ＬｙＳ−Ｐｒｏ−Ｃｌ３−Ａｌａ−Ｈｉ５−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−４１ｅ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨＪ６０、Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−ＶａＩ−＾１ｓ−Ｈｌｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−１１ｓ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｌｅｕ−ＯＨ６１、＊ｃ−ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｖａｔ−＾１ａ−Ｈｉｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−１１ｌ−Ｃ７Ｓ−ＡＩａ−ＬｅＬｌ−Ｎ１４２６２、Ｈ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＣｙＳ−＾１ａ−Ｈｉｓ−＾ρ句−＾１ａ −Ｃｙｓ−にＩｅ−＾１ａ−Ｌｅｕ−ＯＨ６３、ＡＣ−＾５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ −Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−＾ｐｅ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−１１ｅ−＾１ａ−Ｌｅｕ −ＮＪ６７、　Ｈ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−＾１ａ−８１５−＾ｈｘ−Ｇｌｙ −Ｃｙｓ−１１ｅ−＾１　ａ−Ｌｅｕ−ＯＨ６Ｂ、　Ｈ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ｃｙｓ−ＡＩａ−Ｈｌｓ−＾ｏｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＋ｌｅ−＾＋ａ−ｔｅｕ−ｏＨＨＣＯ２Ｃ−Ｐｒｏ−Ｏａｐ−＾１ａ−１４ｉｓ−Ａｏｃ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−１１ｅ− Ａ　ｌ　ａ−Ｌｅｕ　−ＮＨ２Ｂｏａ−Ｌｅｗ−ＭＢＨＡ樹脂１−０２ｉ（置換鯰０−４９ｍｍｏ　ｌ　／　ｇ、バッチ量の約０−５ｍｍｏｌに相当）を、ＡＩａにより、それぞれ２ｍｍｏｌの５ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ８ｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨＢｏｃ−Ａｌａ−ＯＨＢｏａ−１１ｅ−ＯＨＢｏａ−Ａｏｃ−ＯＨＢｏｃ−Ｏａｐ（２１−ＯＨＢｏｃ−Ａｓｐ−［０Ｃｈｘｌ−ＯＨＢｏａ−）１ｔｓ（Ｚｌ−ＯＨＢｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨと反応させた（Ｈｉｓに引き続く全てのガラプリングの場合、工程１４〜Ｌ６を実施しない）０合成の終了後、Ｎ末端をアセチル化した（Ａ４ａにより１〜６および１４〜１６の工程を実施）、得られたペプチド樹脂を真空中で乾燥した：収ｊＬ番＝１−５８ｇであった。

ＡｒｌによるＨＦ分離により得られた粗製生ｅ、＊（３８５ｍｇ）を、脱ガスＤ　Ｍ　Ｆ　５００　ｍ　ｌ中に洛かし、チェニルアミン０．４３ｍ１．−２５℃ でジフェニルホスホリルアジド０．４３ｍ１を添加した。この混合物を一２５℃ で２時間、−２０℃で２日間、４℃で２日問および室温で２日間貯蔵し、引き続きＭＲ乾固した。この組成ペプチドをゲルクロ７トグラフイー（５ＥＰＨＡＤＥＸ■Ｌｌ（２０）および引き続き中圧クロマトグラフィー（ＡＩＶ参照：５０〜７０％；０．２５％ｍ１ｎ−’）で精製した。純粋生成物１２２ｍｇが得られた。

例７０＾ｃ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｄａｐ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｈｘ−Ｇｌｙ−＾ｓｐ−■ １ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２ブライポール（Ｂｒｅｉｐｏｈｌ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｆａ−ＢＡＣＨＥＭ）による樹脂１　ｇ　（０−５ｍｍｏ　１のバッチ量に相当）をＡＩｂにより、それぞれ２ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨＦｍｏｃ−Ｏａｐ（２１−ＯＨＦｍｏｃ−１１ｅ−ＯＨＦｍｏｃ−Ｈｌｓ（Ｔｒｔｌ−ＯＨＦｍｏｃ−ＬｙＳ（Ｚｌ−ＯＨＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕｌ−ＯＨＦｍ０ｃ−Ａｌａ−ＯＨと反応させた０合成の１ｋＴ後、Ｎ末端をアセチル化した（Ａｒｂによる工程２〜４および８〜９を実施）。

このペプチド樹脂を真空中で乾燥した；収量１．７５人ＩＩＩによるＴＦＡ分離により得られた粗製生成官（５１８ｍｇ）を脱ガ＊ＤＭＦ５００ｍｌ中に溶かした。トリエチルアミン０．４３ｍ１およびジフェニルホスホリルアジド０．４３ｍ１　（−２５℃）を添加した後、−２５℃で２時間撹拌し、−２０℃で２日間、４℃で２日問および室温で２日間貯蔵した０次いで凍結乾燥し、この粗製ペプチドをゲルクロマトグラフィー（ＳＥＰ）１人ＤＥＸ■［、Ｈ２Ｏ）により精製した。単離した単量体（１８２ｍｇ）をＡＩＩによるＨＦで脱保護し、中圧クロマトグラフィー（ＡＩＶ参照；５５〜７５％−０，２５５ｍ１ｎ−’）で精製した。純粋生成物１４４ｍｇが得られた。

例７１Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）メリフィールド樹脂６−４５ｇ　（置換約０．３１ｍｍｏ　ｌ／ｇ、バッチ量の２ｍｍｏｌに相当）を入ｒｂにより、それぞれ８ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ａｏｃ−ＯＨＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨＦｍｏｅ−Ｈｌｓ　（Ｔｏｓｌ−ＯＨＦｍ０Ｃ−Ｏａｐ（ＢＯＣＩ−ＯＨと反応させた。引き続き、Ｎ末端を脱保護し、アセチル化しくＡＩｂによる工程２．〜４および８〜９の実施）、ｔ−ブチル−およびＢ　ｏ　ｃ−俵に基を分離した（Ａｒａによる工程１〜６の実施）、樹脂の環化ば、ＮＭＰ中で、ＢＯＰ３．５４ｇおよびジイソプロピルエチルアミン３．！５ｍｌ’！−添加しながら行った（１６時間）、このペプチドを真空中で乾燥させた。収量は７．０ｇであった。ＡｒＩによる）（Ｆ分離により得られた粗製生震宙を、ゲル濾過（ＳＥＰ）［ＡＤＥＸ＠　Ｇ−１５＞および中圧クロマトグラフィー（ＡｒＶ参照：５〜２０％；０゜２５％ｍｉｎ” ）で精製した。純粋生成宮２１　ｇが得られた。

例６９．７０および７１と同様に、次のものを製造７３、　Ａｃ−０ａｐ−Ａｌａ；１Ｓ−ＡＯＣ−Ｇ　ＩＩ−ＮＨ２７４、Ａｃ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＨＩＳ−ＡｎＯ−ＧＩＬＩ−ＮＨ２７５、Ｈ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａｈｘ−Ｇｌｕ− ＯＨ７６、Ａｃ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｈｘ−Ｇｌｕ−ＯＨ７７、Ｈ−Ｏａｐ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａ６ｃｍＧ　ｕ−ＯＨ７８、Ａｃ−０ａｐ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｄｅ−Ａｓｐ−ＮＨ２７９、Ａｃ−＾ｓｐ−＾Ｉａ−ＨＩｓ−＾ＱＣ− Ｏａｐ−ＮＨ２８０、　Ａｃ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−Ａｎｏ−Ｏａｐ−ＮＨ２８５，ＡＣ−ＬｙＳ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｔａ−Ｈｌｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｎ）！２８６、ＡＣ−Ａｓ　Ｐ−ＬＹ　５−Ｐｒｏ−ＡＳｐ−Ａ　１　ａ−ＨＩ　５−Ａｐｅ−Ｇ　１　ｙ−ｔ、ｙ　５−１ｆ　ｅ−Ａ　１　ａ−Ｌ■普|ＮＨ２８７、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−ＬｙＳ−１１ｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ８８、ＡＣ−Ａｓｐ−ＬｙＳ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２８９、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｆｆ吉ｐｓ−Ｇｌｙ−ＬｙＳ−１１ｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＮ？９０、　ＡＣ−Ａｓｐ−ＬｙＳ−Ｐｒｏ−ＩＪＳ−Ａｌａ−ＨＩＳ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２９１、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ− Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−ＯＨ９２、Ｈ−Ａｓｐ−ＬｙＳ−Ｐｒｏ−ＬｙＳ−Ａｌａ−Ｈｌｓ−ＡｈＸ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２９３、Ａｃ−Ａｓｐ− Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｃ１ａｐ−Ａｌａ−Ｈｔｓ−Ａｈｘ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−１１ｅ −Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ９４、ＡＣ−Ｐｒｏ−ＡＳｐ−ＬｙＳ−＾５ｐ−Ｖａｌ −＾１ａ−Ｈ：５−Ａｐｅ−ＧＩＪ−Ｏｒｎ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２９５、Ａｃ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｔ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−Ｏｒｎ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ９６、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−＾１ａ−Ｈｉｓ−＾ｐｅ−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｏｒｎ−＾１ａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２９７゜Ｈ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａ　１　ａ− Ｈ１ｓ−Ａｐｅ−Ｇ　１　ｙ−Ｉ　１　ｅ−Ｏｒｎ−Ａ　１　ａ−Ｌｅｕ−ＯＨ９Ｂ、　ＡＣ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−ＬｙＳ−＾５ｐ−Ｖａｔ−Ａｌａ−Ｈ４ｓ−＾ｐｅ−Ｇ　１ｙ−１１ｅ−ｏａｐ−Ａ１　ａ−Ｌｅｕ　−Ｎg２９９、Ａｃ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−ｖａｔ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｐｅ−Ｇｌｙ−ｔｌｅ−Ｏａｐ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ１００、Ｈ−Ａｓｐ−ＬｙＳ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｐｅ−Ａｌａ−ｎａｐ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２１ｏｔ、　Ａｃ−Ａｓｐ−ＬｙＳ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｌａ −Ｈｌｓ−＾ｐｅ−Ａｌａ−Ｏａｐ−１１ｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ第１図：ポリマー担体を使ったＢｏｃ保護基法Ｂｏｃ　＝ｔ−ブチロキシカルボニル保護基ＳＧ＝側鎖保護基日にアミノ酸側鎖第２図：ポリマー担体を使ったＦｍｏｃ−保護基法Ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメチロキシ力ルポニルイ呆護基国際調査報告 −１陶−ａ−一−１ｍ　ＰＣｒ／ＥＰ　８９１０１４７１

Claims

【特許請求の範囲】

１．式Ｉ：Ｘ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａ−ＹＩ「式中、Ａは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅまたは基：−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ（ただし、ｍは１〜１２の整数を表す）を表し、Ｘは、基；Ｇ−ＮＨ−ＣＨＭ−ＣＯ、Ｇ−ＮＨ−ＣＨＭ−ＣＯ−Ｗ−、Ｇ−Ｒ− ＮＨ−ＣＨＭ−ＣＯ−またはＧ−Ｒ−ＮＨ−ＣＨＨ−ＣＯ−Ｗ−を表し、およびＹは、基：−Ｚ、−ＮＨ−ＣＨＱ−ＣＯ−Ｚ、−Ｖ−ＮＨ−ＣＨＱ−ＣＯ−Ｚ、 −ＮＨ−ＣＨＱ−ＣＯ−Ｕ−Ｚまたは−Ｖ−ＮＨ−ＣＨＱ−ＣＯ−Ｕ−Ｚを表し、その際、ｘおよびＹにおいて、Ｇは、水素原子またはアミノ保護基を表し、Ｚは、ＯＨ−またはＮＨ２基またはカルボキシル保護基を表し、またはＲは、【配列があります】または５〜１１個のアミノ酸基の長さのこのペプチ。ド鎖のひとつの部分配列または１〜４の天然由来のα−アミノ酸からのペプチド鎖を表し、Ｕ、ＶおよびＷは１〜４の天然由来のα−アミノ酸からのペプチド鎖を表し、ＭおよびＱは、水素原子または基： ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼（ただし、ｂは１〜６の数を表し、Ｔは水素原子またはＯＨ−、ＣＨ３Ｏ−、ＣＨ３Ｓ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、Ｃ６Ｈ５−、ｐ−ＨＯ −Ｃ６Ｈ４−、ＨＳ−、Ｈ２Ｎ−、ＨＯ−ＣＯ−、Ｈ２Ｎ−ＣＯ−、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−を表すか、またはＭおよびＱは一緒になって−（ＣＨ２）ｃ−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｄ−、−（ＣＨ２）ｅ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｆ−または−（ＣＨ２）■−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｒ−架橋基（ただし、ｃおよびｄは１〜４の数を表し、ｅおよびｆは１〜６の数を表し、ｇは１〜１２の数を表す）を表す］のペプチド、ならびに生理学的に認容性の酸とのその塩。
２．Ｇは水素原子またはアミノ保護基を表し、Ｚはヒドロキシ−またはアミノ基またはカルボキシル保護基を表し、ＭおよびＱは相互に結合していない請求項１記載のペプチド。
３．Ｇは水素原子またはアミノ保護基を表し、Ｚはヒドロキシ−またはアミノ基またはカルボキシル保護基を表し、ＭおよびＱは一緒になって、−（ＣＨ２）４ −Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）４−架橋基を表す請求項１記載のペプチド。
４．Ｇは水素原子またはアミノ保護基を表し、Ｚはヒドロキシ−またはアミノ基またはカルボキシル保護基を表し、ＭおよびＱは一緒になって、　基−（ＣＨ２）■−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｆ−または−（ＣＨ２）６−（ＣＨ２）５−ＮＨ −ＣＯ−（ＣＨ２）ｆ−を表す請求項１記載のペプチド。
５．疾患の治療に使用する請求項１から５までのいずれか１項記載のペプチド。
６．新生物性疾患および自己免疫疾患の治療ならびに感染、炎症および移植の際の拒否反応の治療および予防のための請求項１から５までのいずれか１項記載のペプチドの用途。
７．ペプチド化学で公知の方法により製造する請求項１から５までのいずれか１項記載のペプチドの製法。