JPH0449247A - ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子（以下
ｔｐ＾と称する）や該物質を一部改変した物質（以下改
変型ｔＰＡと称する）を含有する組成物に関する。更に
詳しくは、本発明はｔｐ＾又は改変型ｔＰＡと、特定の
アミンやその塩とを含有してなる組成物に関する。

（発明の背景） ｔＰＡは、フィブリン親和性を有し、フィブリンと結合
したプラスミノーゲンを活性化し極めて効率的に血栓を
溶解するので、ストレプトキナーゼやウロキナーゼに代
わる出血傾向など副作用の少ない血栓溶解剤として注目
されている。

また近年ではｉｎ　ｖｉｖｏにおける血中半ｆｉ期が極
めて短かいなどｔＰＡが有する難点を改善し、ｔＰＡの
生物学的活性を高めることなどを目的として遺転子工学
等の手法を駆使してｔｐへの構造を改変した改変型ｔｐ
への開発研究も盛んである。

これらｔＰＡや改変型ｔＰＡは、いずれも蛋白（糖鎖を
含む場合もあるが）であり、経口投与には適さず、専ら
静注なと注射薬としての製剤化検討が進められている。

しかしながら、ｔＰＡや改変型ｔＰＡは、水に対して難
溶であり、水に溶解して投与する注射剤などの製剤化を
極めて困難なものにしている。

従って、ｔｐ＾や改変型ｔＰＡの臨床的使用にあたり、
これらの物質の水に対する溶解性を改善した製剤の開発
が要望されている。

従来、ｔｐ＾の水に対する溶解性を高める方法としては
、液のｐｎを３〜５と低くすることが試みられている（
特開昭６２−２６２３３号及び特開昭６２−３６３２２
号参照）。

しかしながら、これらの方法は、ｔＰＡや改変型ｔＰＡ
がｐＨを低くした溶液状態では速やかに分解され、失活
してしまい、臨床的に用いることが困難であることを確
認した。

（課題を解決するための手段） 溶解度を高める方法としては、可溶化剤を加える方法も
知られており、本発明者らは、ｔＰＡや改変型ｔＰＡを
安定に保つ中性ｐＨの領域でこれらの物質の溶解度を高
める可溶化剤を加えての製剤化を種々検討した結果、ト
リス（ヒドロキシエチル）アミノメタンなどでは臨床上
実用的な溶解度を示さなかったが、下記一般式（Ｉ）で
示される特定のアミンやその塩が、臨床的使用を可能に
する溶解性を示し製剤化の目的を達成するものであるこ
とを知見し、本発明を完成させるに至った。

（ｘ（ＣＨｚ）＊　）　−ＮＨ−（１）（式中の記号は
以下の意味を有する。

Ｘ：水酸基又はアミノ基 ｌ：１乃至４の整数 ｍ：１乃至３の整数 ｎ：０，１又は２であって、３−ｍの関係を有する数。

但し、Ｘがアミノ基のとき、ｍは２、ｎは１を意味する
。） すなわち、本発明は、ｔＰＡ又は改変型ｔｐ＾と前記一
般式（Ｉ）で示されるアミン及びその塩からなる群より
選択された一種又は二種以上とを含有してなるｔＰＡ又
は改変型ｔｐ＾含有組成物である。

本発明の目的の一つは、中性ｐＨ領域でｔＰＡや改変型
ｔＰＡの水に対する溶解性を高めたこれらｔＰＡなどと
前記特定アミンやその塩とを含有してなる組成物の提供
にある。

本発明の他の目的は、本明細書の記載から明らかとなろ
う。

以下、本発明組成物につき詳述する。

本発明においてｔＰＡとは、天然型ｔＰＡの他、遺伝子
工学的手法により得られたｔＰＡをも含む。

また、本発明において改変型ｔｐ＾は、ｔＰＡの難点を
改善しｔＰＡの有する生物学的活性などを高めたもので
あって、水に対する溶解度が低く、低いｐｎ領域では分
解され易く、かつ本発明の組成によって中性ｐＨｉ域に
おける水溶性が高められるものであれば、いずれの改変
型ｔＰＡであってもよい。

このような改変型ｔＰＡとしては、本出願人の出願に係
る特願昭６３−２７２０２０号、特願平１−３１９４３
８号などに示された改変型ｔＰＡなどが挙げられるが、
これらに限定されるものではない。

また、本発明で用いられる特定アミンは、一般式（１）
で示されるアミンであれば、いずれも中性ｐＨにおける
ｔＰＡや改変型ｔＰＡの水に対する溶解性を高めること
ができるが、中でもモノエタノールアミン、ジェタノー
ルアミンやトリエタノールアミン（以下エタノールアミ
ン類という）が好ましい。

この特定アミンの塩としては、塩酸、臭化水素酸、リン
酸、硫酸、硝酸などの鉱酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸
、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマール酸、マレイ
ン酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、ピク
リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸などの有
機酸との酸付加塩やグルタミン酸、アスパラギン酸など
の酸性アミノ酸との塩やアンモニウム塩が挙げられる。

本発明の組成物は、ｔＰＡ又は改変型ｔＰＡと、前記特
定アミン類及びその塩からなる群より選択された一種又
は二種以上とを配合することにより調製され、通常滅菌
下これを水（精製水）に溶解してｔＰＡ又は改変型ｔｐ
への液剤あるいはこれを更に凍結乾燥などの乾燥手段で
乾燥して用時溶解型製剤とする。

ここに、ｔＰＡ又は改変型ｔＰＡの濃度は少なくとも約
０．１ｍｇ／■１以上であり、一方ｔＰＡ又は改変型ｔ
ＰＡに対する特定アミンやその塩類の濃度は０．０１〜
１．０Ｍ、好ましくは０．１〜０．５Ｍである。

本発明の組成物には、医薬製剤化において通常使用され
る添加剤を、随意配合することができ、また配合した方
が好ましい。

このような添加剤としては、トリス塩酸緩衝液、リン酸
、炭酸、ホウ酸、クエン酸、バルビッール酸やアミノ酸
などの緩衝液としうる緩衝化剤、ソルビトール、マンニ
トール、キシリトール、蕨糖、ブドウ糖、乳糖、グルコ
ース、ガラクトース、マルトース、フラクトース、デキ
ストラン、シクロデキストリン類などの１！類や種々の
アミノ酸などの安定化剤、塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、リン酸−水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム
などの無機塩類の電解質等の等張化剤、ポリオキシエチ
レンソルビタンモノステアレートやポリオキシエチレン
ソルビタンモノパルミテート等のポリオキシエチレン脂
肪酸エステル、ソルビタンモノステアレート、ソルビタ
ンセスキオレート等のソルビタン脂肪酸エステル、ポリ
オキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリ
オキシプロピレン縮金物などの界面活性剤、セルロース
、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメ
チルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロ
キシプロピルセルロース、ヒドロキシメチルエチルセル
ロースなどの賦形剤などが挙げられる。前記Ｉ！類は賦
形剤としても使用できる。

これらの添加剤は、適宜選択され、同種のものが２種以
上であってもよい。これら添加剤や必要により含まれて
いる水の使用量は、先のｔＰＡ　、改変型ｔＰＡ　、特
定アミンやその塩の残余である。

なお、温時溶解型の製剤とするときは、溶解液に可溶化
剤を加えたり、緩衝液とすることもてきる。

（発明の効果） 本発明は、ｔＰＡや改変型ｔＰＡを安定に保つ中性ｐＨ
６Ｎ域でこれらの水に高する熔解性を高めた組成物を提
供したものである。従って、本発明組成物はｔＰＡや改
変型ｔＰＡの臨床上使用しうる製剤として有用である。

また、本発明はｔＰＡや改変型ｔＰＡの水に対する可溶
化剤の技術を豊富化させる利点もある。

本発明組成物によるｔＰＡや改変型ｔｐへの熔解性の向
上は以下の試験法によって確認されたものである。

実験例１ 天然型ｔＰＡの凍結乾燥品を秤量し、０．０１％のツイ
ーン０８０（商品名、花王アトラス社製、ポリオキシエ
チレン高級脂肪酸エステル、以下Ｔｗｅｅｎ　８０と称
する）を含むｐＨ７，０の５０＋ｎＭリン酸緩衝液を加
えてよく振り混ぜた。これを遠心分離し、上清を採取し
てたん白質濃度を測定した。こうして求められた天然型
ｔＰＡの溶解度は０．０６ｍｇ／　ｌ１Ｉｎであった。

ｐＨを７．０に保ったままリン酸の濃度を１００ｍＭ　
。

５００ｍＭとした場合にもそれぞれの溶液中の天然型ｔ
ＰＡの溶解度は０．１３ｍ１ｇ／■１２．　０．２５　
ｖＩｇ／ｍｌｌと低いものであった。次に、トリス（ヒ
ドロキシエチル）アミノメタン、エチレンジアミン、モ
ノエタノールアミンをそれぞれ含み、リン酸でｐＨを７
．０とした０、０１％、Ｔｗｅｅｎ　８０含有緩衝液を
用い、天然型ｔＰＡについて同様の実験を行った。その
結果を第１図に示す。第１図より、本発明に記すアミン
類およびその塩が天然型ｔＰＡの溶解度を高める効果を
有することは明らかである。

一方改変型ｔＰＡ　　（国際公開第８９１０３８７４号
の改良型ＴＰＡ（Ｖｌ）を精製したもの）のｐＨ７−０
の５０ｆｆｉＭリン酸緩衝液中の溶解度は０．２４ｍｇ
／　ｖａｌであったが０．２Ｍのモノエタノールアミン
を含むリン酸緩衝液中では１．０ｍｇ／　ｖａｎ以上の
濃度で析出を起こすことな（安定に保たれた。

実験例２ 天然型ｔＰＡを用い、実験例１に同様の実験を、ジェタ
ノールアミン、トリエタノールアミンを用いて行った。

実験結果を第２図に示す。第２図に示されるとおりエタ
ノールアミン類による天然型ｔＰＡの可溶化効果はモノ
−、ジー　トリーの３種のエタノールアミンで同等であ
った。

このことは改変型ｔＰＡでも同様であり、０．２Ｍ以上
のモノ−１あるいはジェタノールアミンを含むリン酸緩
衝液中では１．０５１ｇ／　ｓｊ！以上の濃度で澄明な
液として保たれた。

実験例３ 実験例１及び２より得られた知見にもとづき、以下の組
成による凍結乾燥品の製造を行った。

なおＴＰＡの表示は実験例１の改変型ｔＰＡを示す。

処方Ｉ ＴＰＡ　　　　　　　　　　　　　　２　　ｗａｇ／ｃ
ａｌリン酸　　　　　　　　　　　　０．１Ｍトリエタ
ノールアミン　　　　　０．２Ｍマンニトール　　　　
　　　　１０　　％Ｔｗｅｅｎ　８０　　　　　　　　
　　　０．０１％処方２ ＴＰ＾　　　　　　　　　　　　　２　　ｍｇ／ｍｌリ
ン酸　　　　　　　　　　　　０．１Ｍトリエタノール
アミン　　　　　０．２Ｍ乳Ｉ！５％ 塩化ナトリウム　　　　　　　　５　％Ｔｗｅｅｎ　８
０　　　　　　　　　　　０．０１％処方３ ＴＰＡ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５　　
　ｍｇ／讃ｌリン酸　　　　　　　　　　　　　　０．
３Ｍトリエタノールアミン　　　　　０．５　Ｍデキス
トラン　　　　　　　　１０　　％Ｔｗｅｅｎ　８０　
　　　　　　　　　０．０１％処方４ ＴＰ＾　　　　　　　　　　　　　５　　ｍｇ／ｖａｌ
リン酸　　　　　　　　　　　　０．３　Ｍトリエタノ
ールアミン　　　　　０．５Ｍヒドロキシエチルセルロ
ース　ｌＯ％ Ｔｗｅｅｎ　８０　　　　　　　　　　　０．０１％こ
れらの凍結乾燥品を注射用水で再熔解したところ溶液中
のｔＰＡ濃度は２〜５ａｉｇ／ｍｆであるか澄明な液と
なった。この例により使用時高濃度のｔＰＡを与える凍
結乾燥品を製造可能なことが明らかとなった。

【図面の簡単な説明】

第１図はｔＰＡに対する数種の化合物の可溶化効果の実
験結果を、第２図はｔＰＡに対するエタノールアミン類
の可溶化効果の実験結果をそれぞれ示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子又は該物質
   を一部改変した物質と、一般式 〔ｘ（ＣＨ＿２）＿ｌ〕＿ｍＮＨ＿ｎ （式中の記号は以下の意味を有する。 ｘ：水酸基又はアミノ基。 ｌ：１乃至４の整数。 ｍ：１乃至３の整数。 ｎ：０、１又は２であって、３−ｍの関係を有する数。 但し、ｘがアミノ基のとき、ｍは２、ｎは１を意味する
   。） で示されるアミン及びその塩からなる群より選択された
   一種又は二種以上とを含有してなるヒト組織プラスミノ
   ーゲン活性化因子又は該物質を一部改変した物質含有組
   成物。
2. （２）アミンがモノエタノールアミン、ジエタノールア
   ミン又はトリエタノールアミンである請求項第（１）項
   記載の組成物。