HU216793B - Eljárás nem glikozilezett K2P pro t-PA-származékot tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására - Google Patents
Eljárás nem glikozilezett K2P pro t-PA-származékot tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására Download PDFInfo
- Publication number
- HU216793B HU216793B HU912738A HU273891A HU216793B HU 216793 B HU216793 B HU 216793B HU 912738 A HU912738 A HU 912738A HU 273891 A HU273891 A HU 273891A HU 216793 B HU216793 B HU 216793B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- acid
- citrate
- process according
- mmol
- sodium citrate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/49—Urokinase; Tissue plasminogen activator
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Finger-Pressure Massage (AREA)
- Soil Conditioners And Soil-Stabilizing Materials (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
Abstract
A találmány tárgya eljárás nem glikőzilezett K2P prő t-PA-bázisú,legalább 1,4 MU/ml enzimaktivitású és 4,5–6,5 pH-jú újgyógyszerkészítmény előállítására. A találmány szerint a M>K2P prő t-PA-t citrátpűfferrel és az alábbiak közül legalább egy vegyülettel a)aszkőrbinsav; b) EDTA; c) taűrin, e-aminő-kaprőnsav, transz-4-(aminő-metil)-ciklőhexánkarbőnsav, lizin, őrnitin, d-aminő-valeriánsav, 4-(aminő-metil)-benzőesav, 8-aminő-őktánsav, 7-aminő-h ptánsav, 4-aminő-bűtanől, 5-aminő-pentanől, 1,9-diaminő-nőnán, 1,8-diaminő-őktán, 1,7-diaminő-heptán, 1,6-diaminő-hexán, 1,5-diaminő-pentán, 1,4-diaminő-bűtán, 1,3-diaminő-prőpán; d) karbamid, gűanidinő-vajsav, arginin; e)almasav, tejsav, fűmársav, 2-őxő-glűtársav; f) dimetil-bigűanid; g)timidin, citőzin, űridin; h) trehalóz, glükóz-amin, N-metil-glükamin;és kívánt esetben klőridiőnőkat tartalmazó vegyülettel és/vagytővábbi, gyógyászatilag elfőgadőtt adalékanyaggal megfelelőgyógyászati adagőlási főrmájú gyógyszerkészítménnyé alakítják. ŕ
Description
A találmány tárgya eljárás nem glikozilezett K2P pro I-P4-származékot tartalmazó új gyógyszerkészítmény előállítására.
A humán szöveti plazminogén aktivátor (t-PA) nagy gyógyászati jelentőséggel bír a véralvadékok feloldásánál, például szívinfarktus esetén. A t-PA a véralvadékok oldására a plazminogén plazminná való aktiválása útján hat. A plazmin viszont oldja a fibrint, az alvadt vér proteinmátrixának főkomponensét.
A természetes t-PA több funkcionális doménből, az F, E, KI, K2 és P doménekből tevődik össze. A P dómén tartalmazza a proteolitikusan aktív centrumot, amely a plazminogén plazminná való hasítását végzi. A t-PA vagy különböző olyan t-Pd-muteinek (proteinmutánsok) géntechnológiai előállítása, amelyekben az F, E, KI és K2 domének közül egy vagy több deletált, eukarióta vagy prokarióta sejtekben már ismert. A prokariótákból származó í-P4-származékok a természetes Ζ-ΡΛ-val ellentétben nem glikozilezett formában szintetizálódnak.
Ismeretes továbbá, hogy a cukorrész a proteinek oldhatóságára és aggregációjára jelentős befolyással bír [J. Bioi. Chem., 263, 8832-8837. (1988)]. Azt észlelték, hogy egy, a K2P domén-összetétellel rendelkező, nem glikozilezett t-Prt-mutain lényegesen rosszabbul oldódik, mint bármely glikozilezett í-P4-származék. Ez a nem glikozilezett í-PT-változat csak igen csekély mértékben oldódik a proteinek szolubilizálására szokásosan használt pufferokban, például 50 mmol/1 koncentrációjú nátrium-citrát-oldatban, 50 mmol/1 koncentrációjú foszfátoldatban vagy fiziológiás nátrium-klorid-oldatban. Gyógyászati hatóanyagként való felhasználásra azonban a nem glikozilezett K2P pro t-PA-származéknak lényegesen magasabb, legalább 1,4 MU/ml, előnyösen
1,4 MU/ml-től 10 MU/ml-ig teijedő enzimaktivitással kellene rendelkeznie. [MU=Mega (vagyis 106 U nemzetközi egység)].
Az EP-A 0217 379 számú európai szabadalmi bejelentésből ismert, hogy a prokarióta szervezetekből származó t-PA (t-PA pro) oldhatósága semleges vagy enyhén lúgos argininkészítményekkel növelhető. Ezen eljárás hátránya azonban, hogy a t-PA pro jó oldhatósága csak nagyon magas argininkoncentrációkkal érhető el.
A találmány feladatául azt tűztük ki, hogy olyan gyógyszerkészítményeket fejlesszünk ki, amelyek
1,4 MU/ml-nél magasabb aktivitású, nem glikozilezett K2P pro t-PA-származékot tartalmaznak.
A feladatot a találmány szerint egy 4,5-től 6,5-ig terjedő tartományba eső pH-jú, hatóanyagként legalább
1,4 MU/ml enzimaktivitású, nem glikozilezett K2P pro t-Prt-származékot tartalmazó gyógyszerkészítmény előállításával oldottuk meg, amelynél a K2P pro tPAszármazékot citrátpufferrel és az alábbi csoportok valamelyikét tartalmazó legalább egy vegyülettel
a) aszkorbinsav;
b) EDTA;
c) taurin, ε-amino-kapronsav, tranexámsav [transz4-(amino-metil)-ciklohexánkarbonsav], lizin, omitin, δ-amino-valeriánsav, 4-(amino-metil)-benzoesav, 8amino-oktánsav vagy/és 7-amino-heptánsav, 4-aminobutanol, 5-amino-pentanol, 1,9-diamino-nonán, 1,8-diamino-oktán, 1,7-diamino-heptán, 1,6-diamino-hexán, 1,5-diamino-pentán, 1,4-diamino-bután, 1,3-diaminopropán;
d) karbamid, guanidino-vajsav és/vagy arginin;
e) almasav, tejsav, fümársav vagy/és 2-oxo-glutársav;
f) dimetil-biguanid;
g) timidin, citozin, uridin;
h) trehalóz, glükóz-amin, N-metil-glükamin;
és kívánt esetben kloridionokat tartalmazó vegyülettel és/vagy további, gyógyászatilag elfogadott adalékanyaggal megfelelő gyógyászati adagolási formájú gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
A felsorolt vegyületek közül legfeljebb öt komponenst tartalmaz a találmányunk szerint előállított készítmény.
A találmány leírása során nem glikozilezett K2P pro alatt egy olyan í-PT-származékot értünk, amely a 2-perec alakú és a proteázdoménból áll, és a 174-180. aminosavak egyikénél kezdődik, és az 527. aminosavnál végződik. A nem glikozilezett K2P pro tartalmazhatja még ezenkívül részben vagy egészen a-3 (Gly)-től a +5 (Ile)-ig terjedő aminosavakat is. Előnyösen egy olyan protein, amely a 176. aminosavnál kezdődik, és adott esetben a -3-tól a +5-ig teijedő tartományból a lánc elé kapcsolva még a Ser, Tyr, Gin aminosavakat tartalmazza. Az aminosavak megjelölése a T. J. R. Harris által a t-PA elnevezésére megadott nómenklatúrából [Protein Engineering, 1, 449-458. (1987)] következik. Nem glikozilezett K2P pro t-PA előállítását az EP-A 0382 174 számú, nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentésben igák le. A K2P pro-ra standard egységként (U) megadott enzimaktivitást a WHO által a t-PA-ra megadott definíció szerint adjuk meg. Az aktivitás meghatározása H. Lili [ZGIMAL, 42, 478—486. (1978)] szerint történik.
A nem glikozilezett K2P pro szolubilizálására egy citrátpuffer bizonyult különösen előnyösnek. A citrátkoncentrációnak például legalább 5 mmol/l-nek, előnyösen 5-100 mmol/l-nek, különösen előnyösen 50 mmol/lnek kell lennie. A pH-t az alkalmazott vegyület bázicitásától függően előnyösen sósavoldattal vagy valamilyen bázissal, például nátrium-hidroxiddal vagy káliumhidroxiddal állítjuk be.
Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy a nem glikozilezett K2P pro oldhatósága más pufferrendszerekben, például foszfátpufferben ugyanolyan ionerősségnél és ugyanolyan pH-nál lényegesen rosszabb. Az viszont megfelelőnek bizonyult, ha a lúgos citrátoldatok pH-ját sósavval állítottuk be, azaz a készítmény még kloridionokat is tartalmazott. Kloridionok jelenlétében a nem glikozilezett K2P pro nagyon tömény oldatai lényegesen stabilabbak, mint például foszfátionok jelenlétében. A savas citrátoldatok pH-ját rendszerint nátrium-hidroxiddal állítjuk be.
Egy találmány szerinti készítmény esetében 4,5 és
6,5 közötti pH-érték a megfelelő, előnyös az 5-6 pH-érték. A natív t-PA esetében szokásosan alkalmazott 7 pH feletti készítményeknél a nem glikozilezett K2P pro í-Prí-származék stabilitása jelentősen csökken. így például a K2P pro egyláncú formája argininnel pufferolt
HU 216 793 Β
7,2 és 8,0 pH-jú oldatokban szobahőmérsékleten vagy magasabb hőmérsékleten csak néhány napig stabil.
Mint említettük, egy találmány szerint előállított gyógyszerkészítmény aszkorbinsavat is tartalmaz, előnyösen 0,1-1 mol/1, különösen előnyösen 0,2-0,3 mol/1 koncentrációban.
Az EDTA koncentrációjának előnyösen 1 -200 mol/1, különösen előnyösen 10-100 mmol/l-nek kell lennie.
Egy találmány szerint előállított készítményhez aminovegyületként előnyösen taurint, ε-amino-kapronsavat, tranexámsavat [transz-4-(amino-metil)-ciklohexánkarbonsav], lizint, omitint, Ő-amino-valeriánsavat, 4-(amino-metil)-benzoesavat, 8-amino-oktánsavat vagy/és 7-amino-heptánsavat használunk. Különösen előnyös ε-amino-kapronsav, 4-(amino-metil)-benzoesav, 7-amino-heptánsav, 8-amino-oktánsav, tranexámsav vagy/és lizin alkalmazása. Az előnyös koncentrációk 0,5-20 mmol/1, különösen előnyösen 1-10 mmol/1 tartományba esnek.
Ugyancsak megfelelő, ha 4-amino-butanolt, 5-amino-pentanolt, 6-amino-hexanolt, 1,9-diamino-nonánt, 1,8-diamino-oktánt, 1,7-diamino-heptánt, 1,6-diaminohexánt, 1,5-diamino-pentánt, 1,4-diamino-butánt vagy/és 1,3-diamino-propánt használunk. Egy találmány szerint előállított készítményhez alkalmas α,ω-diaminok és α,ω-amino-alkoholok koncentrációja előnyösen 10 és 100 mmol/1 közé esik.
Taurint és analóg vegyületeket előnyösen 0,ΙΟ,5 mol/1, különösen előnyösen 0,1-0,3 mol/1 koncentrációban használunk.
Egy találmány szerint előállított készítményhez alkalmazunk továbbá guanidinanalóg vegyületként előnyösen karbamidot, guanidino-vaj savat és/vagy arginint. A karbamid koncentrációja előnyösen 0,1-0,4 mol/1, különösen előnyösen 0,5-2 mol/1. Egyéb guanidinanalógok esetében a koncentráció előnyösen 10-200 mmol/1, különösen előnyösen 50-100 mmol/1.
Olyan karbonsavakként, amelyek hidroxi-, oxovagy/és további karboxicsoportokkal vannak szubsztituálva, például almasav, tejsav, fúmársav vagy/és 2-oxoglutársav megfelelők. Ezek koncentrációja előnyösen 0,001 -1 mol/1, különösen előnyösen 0,01-0,5 mol/1.
Dimetil-biguanidot előnyösen 50-400 mmol/1, különösen előnyösen 100-300 mmol/1 koncentrációban használunk.
Pirimidinnukleozidokként például timidin, citozin és uridin, illetve a megfelelő nukleotidok alkalmazhatók. Ezeket az anyagokat előnyösen 1-300 mmol/1, különösen előnyösen 10-300 mmol/1 koncentrációban használjuk.
Trehalózt, glükóz-amint és N-metil-glükamint előnyösen 1-500 mmol/1, különösen előnyösen 10300 mmol/1 koncentrációban használunk.
A következőkben egy sor különösen előnyös találmány szerinti összetételt sorolunk fel. Egy készítmény 50 mmol/1 koncentrációjú, 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 2 mol/1 karbamidot tartalmaz. Egy további készítmény 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát-puffert és 0,5-1,0 mol/1 guanidint tartalmaz. Egy másik további készítmény 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát-puffert és
0,3 mol/1 taurint tartalmaz. Ismét egy másik további készítmény 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát-puffert és 0,2-0,3 mol/1 aszkorbinsavat tartalmaz. Egy ugyancsak további készítmény 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 300 mmol/1 dimetil-biguanidot tartalmaz. Ugyancsak egy másik további készítmény 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 10-300 mmol/1 timidint, uridint vagy citozint, illetve 10-100 mmol/1 fentebb említett α,ω-diamint vagy előbbiekben említett α,ω-amino-alkoholt tartalmaz. Egy másik, ugyancsak további készítmény 50 mmol/16 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 10-300 mmol/1 trehalózt, glükóz-amint vagy N-metil-glükamint tartalmaz.
Egy találmány szerint előállított, különösen előnyös készítmény 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 1-10 mmol/1 ω-amino-kapronsavat, δ-amino-valeriánsavat, 7-amino-heptánsavat, 8-amino-oktánsavat, 4-(amino-metil)-benzoesavat, L-lizint, omitint vagy tranexámsavat tartalmaz. Ezek az anyagok meglepő módon már kis (10-40-szeres) molekuláris feleslegben kiváló hatást fejtenek ki a K2Ppro oldhatóságára.
Előnyösek továbbá az olyan készítmények is, amelyek 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és egy guanidinanalóg vegyületet, különösen arginint és guanidino-vajsavat tartalmaznak 50-100 mmol/1 koncentrációban. Egy további, találmány szerint előállított készítmény 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát-puffert és 10-500 mmol/1 almasavat, tejsavat, fúmársavat vagy 2-oxo-glutársavat tartalmaz. Egy másik további készítményben 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát-puffert és 10-100 mmol/ EDTA-t alkalmazunk.
Amint a példákból kitűnik, az előbb említett vegyületek és a citrátpuffer kombinációi nagyon jó hatást gyakorolnak a K2P pro oldhatóságára. Megfelelők például lizin argininnel, omitinnel, glükóz-aminnal vagy/és timidinnel készült kombinációi, vagy EDTA ε-aminokapronsavval, lizinnel, argininnel, glükóz-aminnal vagy/és timidinnel készített kombinációi. Ugyancsak megfelelők legalább két előbb említett vegyület citrátpufferrel készített kombinációi is.
A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmények elsősorban injekciós vagy infúziós oldatokként kerülnek alkalmazásra. A felhasználás történhet úgy, hogy egy már elkészített, injektálásra kész oldat áll rendelkezésre, amely a találmány szerinti összetételű. Lehetséges azonban az is, hogy a gyógyszerkészítmények liofilizátumok formájában álljanak rendelkezésre. Ezeket azután önmagukban ismert, injekciós célokra alkalmas szerekkel vagy oldatokkal elegyítve hozzuk felhasználásra kész állatpoba. Injekciós közegként előnyösen vizet használunk, amely az injekciós oldatoknál szokásos adalékanyagokat, így stabilizálószereket, oldásközvetítőket, pufferokat és izotóniás adalékokat, például fiziológiás koncentrációjú nátrium-kloridot tartalmaz. Ilyenfajta adalékokként például mannit, tartarát- vagy citrátpufferok, etanol, kompexképzők, így etilén-diamin-tetraecetsav és ennek nem toxikus sói, valamint viszkozitásszabályzásra szolgáló, nagy molekulájú polimerek, így folyékony poli(etilén-oxid) említhetők. Az injekciós célokra szolgáló folyékony hordozók3
HU 216 793 Β nak sterilnek kell lenniük, és előnyösen ampullákba töltve kerülnek forgalomba.
A következő példák a találmány konkrét kivitelezésének bővebb szemléltetését hivatottak szolgálni.
Az E. coliból származó aktív K2P t-PA-származék előállítása
A sejtek lízise és az inklúziós testek (IB’s) előállítása
1,6 kg nedves sejttömeget (E. coli, DSM 3689, pA27,3 plazmiddal transzformálva) 1010,1 mol/1 TriszHCl és 20 mmol/1 EDTA elegyében 4 °C-on felszuszpendáltuk, pH=6,5. Az elegyhez 2,5 g lizozimot adtunk, és 4 °C-on 30 percig inkubáltuk; a teljes sejtfeltárást nagynyomású diszperzió segítségével végeztük el. A feltárás során kapott anyaghoz 5 1 0,1 mol/1 TriszHCl, 20 mmol/1 EDTA, 6% Triton XI00 és 1,5 mol/1 NaCl elegyét adtuk, pH=6,5, és 4 °C-on 30 percig inkubáltuk. Végül az oldhatatlan alkotórészeket (IB’s) Padberg-centrifugával távolítottuk el.
A pelleteket 10 1 0,1 mol/1 Trisz-HCl és 20 mmol/1 EDTA elegyében 4 °C-on felszuszpendáltuk, pH = 6,5. Az elegyhez 2,5 g lizozimot adtunk, és 4 °C-on 30 percig inkubáltuk, majd a kapott IB-preparátumot centrifugálással izoláltuk.
Az inklúziós testek (IB’s) szolubilizálása
100 g inklúziós testet (IB’s) 450 ml 0,1 mol/1 TriszHCl, 6 mol/1 guanidin.HCl, 0,2 mol/1 DTE (1,4-ditioeritrit) és 1 mmol/1 EDTA elegyében felszuszpendáltuk, pH = 8,6, majd 2,5 órán keresztül 25 °C-on kevertük.
Miután a pH-értéket HCl-dal (25%) 3-ra állítottuk, a mintát 10 mmol/1 HC1 segítségével dializáltuk (3 χ 50 1, 24 óra, 4 °C).
Derivatizálás
A guanidin.HCl (szilárd) előkészítése során a fenti dializátum végső koncentrációját 10 mmol/1 HCl-el állítjuk be, 6 mol/1 guanidin.HCl értékre.
Az anyagot 25 °C-on 1,5 órán keresztül előinkubáljuk, majd 0,1 mol/1 glutation (GSSG) és 0,05 mol/1 Trisz-HCl mellett oxidáljuk, és 5 mol/1 NaOH segítségével pH=9,3-ra titráljuk. Ezután az anyagot 25 °C-on 1,5 órán keresztül keveijük.
A pH-értéket HCl-dal (25%) 3-ra állítjuk, majd az anyagot 10 mmol/1 HCl-dal dializáljuk (3 χ 100 1,48 óra, 4 °C). A dialízis után a megmaradt tiszta anyagot dolgozzuk fel.
Naturálás
Egy 10 1-es reakcióedényt 0,1 mol/1 Trisz-HCl-dal, 0,8 mol/1 L-argininnal, 2 mmol/1 GSH-val (gentation, redukált alak) és 1 mmol/1 EDTA-val megtöltjük, pH=8,5. A renaturálást 20 °C-on végezzük, háromszor, esetenként 100-100 ml származék (elegyített diszulfid, lásd fent) adagolása mellett, a reakció időtartama 24 óra.
A renaturálás után 1500-10000 IU/mg specifikus aktivitással rendelkező anyagot kapunk (a megállapítás összevethető a 4. b példával). Az IU a WHO, National Institute fór Biological Standards and Control definíciója szerint az aktivitás egysége.
A renaturált anyag betöményítése
A renaturált anyag igény esetén hemodializátorban tömény íthető be.
Az E. coli-ból származó K2P tisztítása
1. Az E. coli-ból származó K2P tisztítása a fenti koncentrációban ETI-Sepharose oszlopon történik, affinitáskromatográfiás eljárás alkalmazásával, a. Citromsavas elúció
A renaturált anyagot hemodializátorban (Asahi AM 300) 1:23 arányban betöményítjük, és 0,5 mol/1 NaClot adunk hozzá. Egy 0,1 mol/1 Trisz-HCl-dal, pH=7,5, 0,8 mol/1 argininnel és 0,5 mol/1 NaCl-dal ekvilibrált ÉTI- (Erythrina-Trypsin-Inhibitor) Sepharose-oszlopot (V=50 ml) 550 ml koncentrált, reoxidált anyaggal feltöltünk (10 oszloptérfogat, 10 oszloptérfogat/h), és az ekvilibráló pufferrel addig mossuk, amíg az eluátum abszorpciója 280 nm-en eléri a puffemek megfelelő háttérértéket. A megkötött anyag elúciója 20 mmol/1 citromsavval történik, pH=3,2.
Térfogat ml | Aktivitás IU/ml | c '-'pro! mg/ml | SA’) IU/mg | |
Koncentrátum | 550 | 57,162 | 14 | 4,083 |
ETI-eluátum | 90 | 330,000 | 0,71 | 465,000 |
1 Specifikus aktivitás; a kromogén vizsgálatok alapján (vesd össze 4. b példa) az aktivitás a minta proteintartalma szerint oszlik meg.
b. 0,3 mol/1 argininnel (pH=4,5) végzett elúció A renaturált anyagot a 3.1.a. pont alapján betöményítjük. Egy 0,1 mol/1 Trisz-HCl-dal, pH = 7,5, 0,8 mol/1 argininnel és 0,5 mol/1 NaCl-dal ekvilibrált ETI-Sepharose-oszlopot (V=25 ml) 800 ml koncentrátummal feltöltünk (12 oszloptérfogat/h), és az ekvilibráló pufferrel addig mossuk, amíg az eluátum abszorpciója 280 nm-en eléri a puffemek megfelelő háttérértéket. A megkötött anyag elúciója 0,3 mol/1 argininnel (pH=4,5) történik.
Térfogat ml | Aktivitás IU/ml | c ^prot mg/ml | SA IU/mg | |
Koncentrátum | 800 | 20,000 | 11,3 | 1770 |
ETI-eluátum | 55 | 280,000 | 0,6 | 550,000 |
2. Az E. coli-ból származó K2P affinitáskromatográfiás eljárás alkalmazásával ETI-Sepharose-oszlopon történő tisztítása, az előzetes betöményítés nélkül
Egy 0,1 mol/1 Trisz-HCl-dal, pH=7,5, 0,8 mol/1 argininnel és 0,5 mohi NaCl-dal ekvilibrált ETI-Sepharose-oszlopot (V=10 ml) 12 1 reoxidált anyaggal feltöltjük, és az ekvilibráló pufferrel addig mossuk, amíg az eluátum abszorpciója 280 nm-en eléri a puffemek megfelelő háttérértéket. A megkötött anyag elúciója 0,8 mol/1 argininnel történik, pH = 5.
Térfogat ml | Aktivitás IU/ml | Cproi mg/ml | SA IU/mg | FD | |
Koncent- rátum | 12,000 | 615 | 0,135 | 4556 | 25 |
ETI- eluátum | 42 | 105,300 | 0,185 | 568,000 | 35 |
1 A fibrinen keresztül történő stimulálás - fibrin jelenlétében az aktivitás a fibrinmentes minta szerint oszlik meg.
HU 216 793 Β
Az E. coli-ból származó, megtisztított K2P jellemzése a) Proteinkémiai jellemzés
- SDS-PAGE és reverz fázisú HPLC
Az ETI-Sepharose-oszlopon affinitáskromatográfiás eljárással kapott anyag homogenitását SDSPAGE és reverz fázisú HPLC (RP-HPLC) segítségével vizsgáltuk. A megtett relatív út alapján a prokarióta K2P-kre 38500+2000 molekulatömeg-értéket határoztunk meg. A kiértékelés szerint a preparátum tisztasága >95%.
1. példa
Karbamid befolyása egy K2P domén-összetételű, nem glikozilezett f-PJ-mutein oldhatóságára
Ebben a példában karbamidnak K2P pro (előállítás az EP-A 0382 174 számú nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentés szerint) 6,0 pH-jú citrátpufferolt oldatokban való oldhatóságára való befolyását írjuk le. Amint az 1. táblázatban kiolvasható, a K2P pro 50 mmol/1 koncentrációjú, 6,0 pH-jú citrátpufferben csak kevéssé oldható. Karbamid hozzáadásával az oldhatóság jelentősen javítható. Az optimum körülbelül 2 mol/1 karbamidnál van.
Kivitelezés:
170 ml tisztított K2PproA (0,5 mol/1 koncentrációjú, 7,2 pH-jú arginin-foszfát pufferrel készített oldat) egy Amicon YM 10 membránon ultraszüréssel koncentrálunk. A koncentrátum 1-1 ml-nyi mennyiségeit (aktiválás 5,8 MU/ml) az 1. táblázatban felsorolt pufferokkal szemben dializáljuk. A minták centrifugálása után a tiszta felülúszóban méljük az enzimaktivitást.
Az enzimaktivitást térfogati aktivitásként MU/mlben és összaktivitásként MU-ban adjuk meg.
A K2P-aktivitás mérése szokásos módon egy kromogén szubsztrát hasításával történhet [H. Lili, ZGIMAL, 42, 478-486 (1987)]. Ez az U egység a t-PA aktivitására a WHO, National Institute fór Biological Standards and Controll definíciója szerint megadott egység.
1. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 8 mol/1 karbamid | 1,03 | 1,24 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 6 mmol/1 karbamid | 2,76 | 3,59 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 4 mol/1 karbamid | 3,46 | 4,67 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 2 mol/1 karbamid | 4,20 | 5,67 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 1 mol/1 karbamid | 2,62 | 3,27 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 | 0,32 | 0,93 |
2. példa
Különböző anyagok befolyása K2P pro oldhatóságára
Ebben a példában különböző anyagoknak K2P pro 6,0 pH-jú citrátpufferolt oldatokban való oldhatóságára való befolyását írjuk le. Kiváló oldhatóságot (>2 MU/ml) érünk el taurinnal, aszkorbinsavval, lizinnel, ε-amino-kapronsawal (EACA), tranexámsawal, dimetil-biguaniddal, glükóz-aminnal, trehalózzal, Nmetil-glükaminnal, uridinnel, citidinnel, 4-(metilamino)-benzoesawal, fumársavval és 2-oxo-glutársavval. Látható továbbá, hogy a citrátpuffer azonos moláris koncentrációnál jobb oldhatóságot biztosít a t-PAszármazéknak, mint egy ammónium-hidrogén-karbonát-, trisz- vagy foszfátpuffer.
Kivitelezés:
Lásd az 1. példánál.
Koncentrátum:
Aktivitás: 5,8 MU/ml.
2. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 omitin | 1,92 | 2,11 |
50 mmol/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mol/1 taurin | 2,67 | 4,00 |
50 mmol/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mol/1 aszkorbinsav | 4,00 | 4,20 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 EACA | 3,88 | 5,80 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 L-lizin | 2,46 | 3,32 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 tranexámsav | 5,54 | 7,36 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,3 mol/1 dimetil-biguanid | 2,96 | 3,40 |
50 mmol/1 trisz.HCl, pH 7,2 | 0,04 | 0,06 |
50 mmol/1 ammónium-hidrogénkarbonát | 0,12 | 0,19 |
50 mmol/1 dinátrium-hidrogénfoszfát/foszforsav, pH 7,2 | 0,15 | 0,23 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 | 0,23 | 0,93 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,3 mol/1 glükóz-amin | 2,02 | 2,02 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,3 mol/1 trehalóz | 3,52 | 3,17 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,1 mol/1 timidin, | 1,57 | 1,88 |
HU 216 793 Β
2. táblázat (folytatás)
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,3 mol/1 uridin | 6,32 | 7,58 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 30 mmol/1 citozin | 3,8 | 4,94 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 4-(amino-metil)-ben- zoesav | 3,46 | 5,3 |
50 mmol/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mol/1 almasav | 1,53 | 1,68 |
50 mmol/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mol/1 tejsav | 1,59 | 1,98 |
50 mmol/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mol/1 fumársav | 4,32 | 5,16 |
50 mmol/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mol/1 2-oxo-glutársav | 4,24 | 4,66 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,3 mol/1 N-metil-glükamin | 3,36 | 3,70 |
3. példa ε-Amino-kapronsav (EACA) befolyása K2P pro oldhatóságára.
Kivitelezés:
Lásd 1. példa Koncentrátum:
Aktivitás: 6,3 MU/ml.
3. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 | 0,34 | 0,48 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 EACA | 3,81 | 4,57 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCI, pH 6 5 mmol/1 EACA | 3,52 | 4,86 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 1 mmol/1 EACA | 2,70 | 3,83 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,1 mmol/1 EACA | 0,58 | 0,75 |
A 3. táblázat azt mutatja, hogy az EACA 1-10 mmol/1 koncentrációban (a K2P pro-hoz viszonyítva 10-40szeres moláris felesleg) jelentősen javítja az oldhatóságot 6,0 pH-nál citrátpufferolt oldatokban.
4. példa
Aszkorbinsav befolyása K2P pro oldhatóságára Kivitelezés:
Lásd 1. példa.
Koncentrátum:
Aktivitás: 6,3 MU/ml.
4. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 | 0,34 | 0,48 |
50 mmol/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mmol/1 aszkorbinsav | 4,04 | 4,24 |
50 mmol/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,2 mmol/1 aszkorbinsav | 2,40 | 2,93 |
A 4. táblázat adatai azt mutatják, hogy citrátpufferolt oldatokban a K2P pro oldhatósága aszkorbinsav hozzáadásával tovább növelhető.
5. példa ε-Amino-kapronsav befolyása K2P pro oldhatóságára citrát- és foszfátpufferolt oldatokban.
Tisztított K2P pro-t ultraszűréssel 4,2 MU/ml-re koncentrálunk, és a 7. táblázatban megadott pufferokkal szemben dializáljuk és centrifugáljuk. A minták centrifugálása után a tiszta felülúszóból mérjük az aktivitást.
5. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 | 0,32 | 0,93 |
50 mmol/1 dinátrium-hidrogénfoszfát/foszforsav, pH 6 | 0,07 | 0,10 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 2 mmol/1 EACA | 3,30 | 4,60 |
50 mmol/1 dinátrium-hidrogénfoszfát/foszforsav, pH 6 2 mmol/1 EACA | 0,90 | 1,39 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 2 mmol/1 EACA 0,15 mmol/1 nátrium-klorid | 2,43 | 3,52 |
50 mmol/1 dinátrium-hidrogénfoszfát/foszforsav, pH 6 2 mmol/1 EACA 0,15 mmol/1 nátrium-klorid | 1,08 | 1,57 |
Az 5. táblázat azt mutatja, hogy az oldhatóság javulása citrátpufferolt oldatokban EACA-val lényegesen jobb, mint foszfátpufferokban.
HU 216 793 Β
6. példa
Tranexámsav (TES) befolyása K2P pro oldhatóságára.
Kivitelezés:
Lásd 1. példa.
Koncentrátum:
Aktivitás: 4,2 MU/ml.
6. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 TES | 2,66 | 3,60 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 5 mmol/1 TES | 2,54 | 3,30 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 1 mmol/1 TES | 2,35 | 3,29 |
Az eredmények azt mutatják, hogy tranexámsavval (TES)1 a K2P pro hasonló mértékű oldhatósága érhető el, mint EACA-val.
1 transz-4-(Amino-metil)-ciklohexánkarbonsav.
7. példa ω-Amino-karbonsavak befolyása a K2P pro oldhatóságára.
Kivitelezés:
Lásd 1. példa.
Koncentrátum:
Aktivitás: 4,2 MU/ml
7. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 | 0,32 | 0,93 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 8-amino-oktánsav | 3,12 | 4,05 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 7-amino-heptánsav | 3,54 | 4,42 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 EAC A | 4,22 | 2,90 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 δ-amino-valeriánsav | 1,83 | 2,47 |
8. példa
Guanidinanalógok befolyása K2P pro oldhatóságára.
Kivitelezés:
Lásd 1. példa Koncentrátum:
Aktivitás: 4,2 MU/ml.
8. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 arginin | L42 | 2,06 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 guanidino-vajsav | 2,21 | 3,08 |
Az eredmények azt mutatják, hogy egy guanidinocsoporttal a K2Ppro oldhatósága jelentősen javítható.
9. példa
EDTA befolyása K2Ppro oldékonysági viselkedésére. Kivitelezés:
Lásd 1. példa.
Koncentrátum:
Aktivitás: 4,2 MU/ml.
9. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
10 mmol/1 EDTA/nátriumhidroxid, pH 6 | 0,02 | 0,03 |
0,3 mmol/1 EDTA/nátriumhidroxid, pH 6 | 1,95 | 1,95 |
50 mmol/1 Na-citrát/nátriumhidroxid, pH 6 50 mmol/1 EDTA | 1,80 | 2,25 |
50 mmol/1 Na-citrát/nátriumhidroxid, pH 6 100 mmol/1 EDTA | 3,36 | 4,03 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 | 0,32 | 0,93 |
A 9. táblázat azt mutatja, hogy EDTA citráttal való kombinálása több mint additív hatással van K.2P pro oldhatóságára.
10. példa
Aminosavak hatása egyedül vagy kombinációban K2P pro oldhatóságára.
Kivitelezés:
Lásd 1. példa.
Koncentrátum:
Aktivitás: 4,2 MU/ml.
10. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 arginin | 1,42 | 2,06 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 L-lizin | 2,81 | 3,94 |
HU 216 793 Β
10. táblázat (folytatás)
12. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 1 mmol/l L-lizin | 2,00 | 2,6 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l L-lizin 10 mmol/l arginin | 2,56 | 3,84 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l L-lizin 50 mmol/l arginin | 3,27 | 4,9 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l L-lizin 10 mmol/l arginin 10 mmol/l omitin | 3,18 | 4,13 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l L-lizin 50 mmol/l arginin 10 mmol/l omitin | 2,70 | 3,78 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l L-lizin 50 mmol/l arginin 50 mmol/l omitin | 3,34 | 4,30 |
11. példa ω-Amino-alkoholok befolyása K2P pro oldhatóságára.
Kivitelezés:
Lásd 1. példa.
Koncentrátum:
Aktivitás: 4,9MU/ml.
11. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/l 4-amino-butanol | 1,84 | 2,4 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/l 5-amino-pentanol | 2,54 | 3,55 |
12. példa
Különböző anyagok kombinációnak befolyása K2P pro oldhatóságára.
Kivitelezés:
Lásd 1. példa Koncentrátum:
Aktivitás: 5,5 MU/ml.
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/l EDTA 1 mmol/l EACA 50 mmol/l glükóz-amin | 4,24 | 5,08 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l EDTA 1 mmol/l EACA 10 mmol/l glükóz-amin | 3,63 | 5,08 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l EDTA 1 mmol/l EACA 10 mmol/l glükóz-amin 50 mmol/l timidin | 3,70 | 5,14 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/l EDTA 1 mmol/l lizin 50 mmol/l glükóz-amin | 4,00 | 5,40 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/l EDTA 1 mmol/l lizin 10 mmol/l glükóz-amin | 3,04 | 3,95 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l EDTA 1 mmol/l lizin 10 mmol/l glükóz-amin 10 mmol/l timidin | 3,12 | 4,52 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l EDTA 1 mmol/l lizin 10 mmol/l arginin 10 mmol/l glükóz-amin 10 mmol/l timidin | 2,60 | 3,77 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/l EDTA 1 mmol/l lizin 25 mmol/l arginin 10 mmol/l glükóz-amin 10 mmol/l timidin | 2,94 | 4,12 |
50 mmol/l Na-citrát/HCl, pH 6 1 mmol/l lizin 10 mmol/l arginin 10 mmol/l glükóz-amin 10 mmol/l timidin | 2,80 | 3,64 |
HU 216 793 Β
12. táblázat (folytatás)
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 EDTA 1 mmol/1 lizin 25 mmol/1 arginin 10 mmol/1 glükóz-amin 25 mmol/1 timidin | 3,20 | 4,32 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmol/1 EDTA 1 mmol/1 lizin 25 mmol/1 arginin 10 mmol/1 glükóz-amin 50 mmol/1 timidin | 4,56 | 5,90 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 1 mmol/1 lizin 25 mmol/1 arginin 10 mmol/1 glükóz-amin 50 mmol/1 timidin | 3,24 | 4,54 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 1 mmol/1 lizin 25 mmol/1 arginin 10 mmol/1 glükóz-amin 25 mmol/1 timidin | 3,54 | 4,95 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 1 mmol/1 lizin 25 mmol/1 arginin 25 mmol/1 glükóz-amin 25 mmol/1 timidin | 3,60 | 4,68 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 1 mmol/1 lizin 25 mmol/1 arginin 100 mmol/1 glükóz-amin 25 mmol/1 timidin | 5,85 | 5,85 |
13. példa α,ω-Diaminok befolyása K2P pro oldhatóságára. Kivitelezés:
Lásd 1. példa Koncentrátum:
Aktivitás: 4,9 MU/ml.
13. táblázat
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 1,9-diamino-nonán | 3,12 | 4,05 |
Puffer | Aktivitás | |
MU/ml | MU | |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 1,8-diamino-oktán | 2,80 | 3,64 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 1,6-diamino-hexán | 3,42 | 4,45 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 1,5-diamino-pentán | 3,52 | 4,40 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 1,4-diamino-bután | 3,96 | 5,15 |
50 mmol/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmol/1 1,3-diamino-propán | 3,33 | 4,23 |
14. példa
K2Ppro liofilizátum 10 U
Nátrium-citrátos, aszkorbinsavat tartalmazó összetétel, pH=6,0
Kompozíció Ampullánként
K2P pro (proteintartalom 10 U-nak megfelelően nátrium-citrát/HCl pufferrendszer, pH = 6,0 17,4 mg mmol/liter aszkorbinsav 0,528 mg poliszorbát 20 1,0 mg ampulla 20 ml, színtelen, hidr. fok I gumidugó, lágyító nélkül, piros
Előállítási eljárás
1. A K2P pro gyógyszerenként! szükséges mennyiségét feloldjuk.
2. Folyamatellenőrzés: a gyógyszeroldat amidolitikus aktivitását és proteintartalmát ellenőrizzük.
3. A szükséges mennyiségű nátrium-citrátot, valamint sósavat és aszkorbinsavat tartalmazó adalékanyagoldatot pH=6,0-ra állítjuk be.
4. A szükséges mennyiségű poliszorbát 20-at feloldjuk az adalékanyag-oldat egy részében, majd öszszekeverjük a maradékkal, és az oldatot sterilre szűrjük.
5. Folyamatellenőrzés: pH, tömeg, bioteher (Bioburden), endotoxinok és szűrőintegritás tekintetében a steril szűrés után.
6. A K2P pro oldatot és az adalékanyag-oldatot összekeverjük. Ez képezi a gyógyszerkészítmény-oldatot.
7. Folyamatellenőrzés: amidolitikus aktivitásra, proteintartalomra, pH-ra, tömegre (szűrés előtt).
8. A gyógyszerkészítmény-oldatot sterilre szüljük. A töltést megelőzően második steril szűrést végzünk, közvetlenül az ampullákba való letöltés során.
9. Folyamatellenőrzés: szűrőintegritást illetően, mindkét steril szűrésből.
10. Letöltjük a gyógyszerkészítmény-oldatot.
11. Folyamatellenőrzés: töltőtérfogat 10,8±0,l ml, sterilitás endotoxinok tekintetében.
12. A liofilizálást automatikusan végezzük, egy előírt fagyasztva szárító program szerint. A fagyasztva
HU 216 793 Β szárító folyamat befejeződése után a kamrát nitrogénnel átöblítjük, az ampullákat automatikusan lezárjuk, átszállítjuk a sapkázóállomásra, és sapkával látjuk el azokat.
13. Az ampullákat vizuálisan vizsgáljuk, csomagoljuk és további felhasználásra tároljuk.
75. példa
K2P pro injekciós oldat
Nátrium-citrátot, aszkorbinsavat tartalmazó összetétel, pH=6,035
Kompozíció Ampullánként
K2P pro (proteintartalom 10 U-nak megfelelően nátrium-citrát/HCl pufferrendszer, pH = 6,0 17,4 mg mmol/liter aszkorbinsav 0,528 mg poliszorbát 20 1,0 mg víz injekciós célra ad. 10,0 ml ampulla 20 ml, színtelen, hidr. fok I gumidugó, lágyító nélkül, piros
Előállítási eljárás
1. A K2P pro gyógyszerenként! szükséges mennyiségét feloldjuk.
2. Folyamatellenőrzés: a gyógyszeroldat amidolitikus aktivitását és proteintartalmát ellenőrizzük.
3. A szükséges mennyiségű nátrium-citrátot, valamint sósavat és aszkorbinsavat tartalmazó adalékanyagoldatot pH = 6,0-ra állítjuk be.
4. A szükséges mennyiségű poliszorbát 20-at feloldjuk az adalékanyag-oldat egy részében, majd összekeverjük a maradékkal, és az oldatot sterilre szűrjük.
5. Folyamatellenőrzés: pH, tömeg, bioteher (Bioburden), endotoxinok és szűrőintegritás tekintetében a steril szűrés után.
6. A K2Ppro oldatot és az adalékanyag-oldatot öszszekeverjük. Ez képezi a gyógyszerkészítmény-oldatot.
7. Folyamatellenőrzés: amidolitikus aktivitásra, proteintartalomra, pH-ra, tömegre (szűrés előtt).
8. A gyógyszerkészítmény-oldatot sterilre szűrjük. A töltést megelőzően második steril szűrést végzünk, közvetlenül az ampullákba való letöltés során.
9. Folyamatellenőrzés: szűrőintegritást illetően, mindkét steril szűrésből.
10. Letöltjük a gyógyszerkészítmény-oldatot.
11. Folyamatellenőrzés: töltőtérfogat 10,8±0,l ml, sterilitás endotoxinok tekintetében.
12. Az ampullákat gumidugóval lezárjuk, átszállítjuk a sapkázórészlegbe és sakpkával látjuk el azokat.
13. Az ampullákat vizuálisan vizsgáljuk, csomagoljuk és további felhasználásra tároljuk.
Claims (18)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás nem glikozilezett K2P pro ί-ΡΛ-bázisú, legalább 1,4 MU/ml enzimaktivitású és 4,5-6,5 pH-jú gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a K2P pro t-PA-t citrátpufferrel és az alábbiak közül legalább egy vegyülettela) aszkorbinsav;b) EDTA;c) taurin, ε-amino-kapronsav, transz-4-(amino-metil)-ciklohexánkarbonsav, lizin, omitin, δ-amino-valeriánsav, 4-(amino-metil)-benzoesav, 8-amino-oktánsav, 7-amino-heptánsav, 4-amino-butanol, 5-amino-pentanol, 1,9-diamino-nonán, 1,8-diamino-oktán, 1,7-diamino-heptán, 1,6-diamino-hexán, 1,5-diamino-pentán, 1,4diamino-bután, 1,3-diamino-propán;d) karbamid, guanidino-vajsav, arginin;e) almasav, tejsav, fumársav, 2-oxo-glutársav;f) dimetil-biguanid;g) timidin, citozin, uridin;h) trehalóz, glükóz-amin, N-metil-glükamin;és kívánt esetben kloridionokat tartalmazó vegyülettel és/vagy további, gyógyászatilag elfogadott adalékanyaggal megfelelő gyógyászati adagolási formájú gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy taurint, ε-amino-kapronsavat, transz-4-(amino-metil)-ciklohexánkarbonsavat, lizint, omitint, δ-amino-valeriánsavat, 4-(amino-metil)-benzoesavat, 4-aminobutanolt, 5-amino-pentanolt, 1,9-diamino-nonánt, 1,8diamino-oktánt, 1,7-diamino-heptánt, 1,6-diamino-hexánt, 1,5-diamino-pentánt, 1,4-diamino-butánt, 1,3diamino-propánt, 8-amino-oktánsavat vagy/és 7-aminoheptánsavat alkalmazunk.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy karbamidot, guanidino-vaj savat vagy/és arginint alkalmazunk.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy almasavat, tej savat, fumársavat vagy/és 2-oxo-glutársavat alkalmazunk.
- 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 5-100 mmol/1, előnyösen 50 mmol/1 koncentrációban citrátot alkalmazunk.
- 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrátot és 0,1 -1 mol/1, előnyösen 0,2-0,3 mol/1 aszkorbinsavat alkalmazunk.
- 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrátot és1-200 mmol/1, előnyösen 10-100 mol/1 EDTA-t alkalmazunk.
- 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrátot és 0,1-0,5 mol/1, előnyösen 0,1-0,3 mol/1 taurint alkalmazunk.
- 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 0,5-20 mol/1, előnyösen 1-10 mmol/1 ε-amino-kapronsavat, δ-amino-valeriánsavat, lizint, omitint, transz-4(amino-metil)-c iklohexánkarbonsavat, 4-(amino-metil)benzoesavat, 7-amino-heptánsavat vagy 8-amino-oktánsavat alkalmazunk.
- 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 10-100 mmol/1 4-amino-butanolt, 5-amino-pentanolt, 1,9-diamino-nonánt, 1,8-diamino-oktánt, 1,7-diaminoheptánt, 1,6-diamino-hexánt, 1,5-diamino-pentánt, 1,4diamino-butánt vagy 1,3-diamino-propánt alkalmazunk.HU 216 793 Β
- 11. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 0,1-4 mol/1, előnyösen 0,5-2 mol/1 karbamidot alkalmazunk.
- 12. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 10-200 mmol/1, előnyösen 50-100 mmol/1 guanidino-vaj savat vagy arginint alkalmazunk.
- 13. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 0,001-1 mol/1, előnyösen 0,01-0,5 mol/1 almasavat, tejsavat, fumársavat vagy 2-oxo-glutársavat alkalmazunk.
- 14. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 50-400 mmol/1, előnyösen 100-300 mmol/1 dimetil-biguanidot alkalmazunk.
- 15. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 1-500 mmol/1, előnyösen 10-300 mmol/1 timidint, citozint vagy úri dint alkalmazunk.5
- 16. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és1-500 mmol/1, előnyösen 10-300 mmol/1 trehalózt, glükóz-amint vagy N-metil-glükamint alkalmazunk.
- 17. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez10 ve, hogy 50 mmol/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és az 1. igénypontban az a)-h) csoportokban felsorolt vegyületek kombinációját alkalmazzuk.
- 18. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a komponenskeveréket injekciós oldattá vagy15 liofilizátummá dolgozzuk fel.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3942141A DE3942141A1 (de) | 1989-12-20 | 1989-12-20 | K2p pro-stabilisierung |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU216793B true HU216793B (hu) | 1999-08-30 |
Family
ID=6395924
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU912738A HUT59318A (en) | 1989-12-20 | 1990-12-19 | Process for stabilizing k2p pro t-pa |
HU912738A HU216793B (hu) | 1989-12-20 | 1990-12-19 | Eljárás nem glikozilezett K2P pro t-PA-származékot tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU912738A HUT59318A (en) | 1989-12-20 | 1990-12-19 | Process for stabilizing k2p pro t-pa |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5352452A (hu) |
EP (1) | EP0458950B1 (hu) |
JP (1) | JPH0660108B2 (hu) |
KR (1) | KR920700681A (hu) |
AT (1) | ATE94408T1 (hu) |
AU (1) | AU625307B2 (hu) |
CA (1) | CA2046861C (hu) |
DE (2) | DE3942141A1 (hu) |
DK (1) | DK0458950T3 (hu) |
ES (1) | ES2060357T3 (hu) |
FI (1) | FI95999C (hu) |
HU (2) | HUT59318A (hu) |
NO (1) | NO305585B1 (hu) |
WO (1) | WO1991008765A1 (hu) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3942141A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | K2p pro-stabilisierung |
DE3942143A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | T-pa pro stabilisierung |
EP0580685B1 (de) * | 1991-04-16 | 1996-01-03 | Roche Diagnostics GmbH | Pharmazeutische verpackungseinheit enthaltend plasminogenaktivatoren zur mehrfachbolusgabe |
AU679913B2 (en) * | 1992-04-30 | 1997-07-17 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Stable polypeptide composition |
DE4405426A1 (de) * | 1994-02-21 | 1995-08-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Pharmazeutisches Präparat enthaltend Plasminogenaktivator (t-PA) oder dessen Derivate |
AU1519399A (en) * | 1997-11-07 | 1999-05-31 | Chiron Corporation | Compositions providing for increased igf-i solubility |
US6767892B1 (en) | 1997-11-07 | 2004-07-27 | Chrion Corporation | Compositions providing for increased IGF-I solubility |
US6733985B1 (en) * | 1999-05-19 | 2004-05-11 | International Technidyne Corporation | Preparation of stable liquid and dried synthetic prothrombin time reagents |
US20060019234A1 (en) * | 2004-07-22 | 2006-01-26 | Shanbrom Technologies, Llc | Modern blood banking employing improved cell preservation composition |
CA2614006C (en) * | 2005-07-02 | 2014-11-04 | Arecor Limited | Stable aqueous systems comprising proteins |
GB0700523D0 (en) * | 2007-01-11 | 2007-02-21 | Insense Ltd | The Stabilisation Of Proteins |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5951220A (ja) * | 1982-08-02 | 1984-03-24 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤 |
DE3584902D1 (de) * | 1984-02-29 | 1992-01-30 | Asahi Chemical Ind | Waessrige loesung eines darin in erhoehter konzentration aufgeloesten gewebe-plasminogen-aktivators und herstellungsverfahren. |
ZW14486A1 (en) * | 1985-07-29 | 1986-10-22 | Smithkline Beckman Corp | Pharmaceutical dosage unit |
CA1267602A (en) * | 1985-09-10 | 1990-04-10 | Fumio Kakimoto | Composition containing tissue plasminogen activator |
US4777043A (en) * | 1985-12-17 | 1988-10-11 | Genentech, Inc. | Stabilized human tissue plasminogen activator compositions |
JPH0678241B2 (ja) * | 1986-04-02 | 1994-10-05 | エーザイ株式会社 | tPA医薬組成物 |
DE3718889A1 (de) * | 1987-06-05 | 1988-12-22 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung einer loesung hoher spezifischer volumenaktivitaet von einem protein mit gewebe-plasminogenaktivator (t-pa)-aktivitaet, loesung, enthaltend protein mit t-pa-aktivitaet und verwendung der loesung in der human- und veterinaermedizin |
US4898826A (en) * | 1987-12-10 | 1990-02-06 | Invitron Corporation | Method to solubilize tissue plasminogen activator |
AU4187389A (en) * | 1988-08-02 | 1990-03-05 | Invitron Corporation | Method for preparing tpa compositions |
US4980165A (en) * | 1989-01-27 | 1990-12-25 | Genetics Institute, Inc. | Pharmaceutical formulations of plasminogen activator proteins |
DE3942141A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | K2p pro-stabilisierung |
DE3942142A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabilisierung von glykosyliertem t-pa |
DE3942143A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | T-pa pro stabilisierung |
DE3942145A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | T-pa-solubilisierung |
DE3942144A1 (de) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabilisierung von k1k2p pro |
JPH0813750B2 (ja) * | 1990-03-01 | 1996-02-14 | 持田製薬株式会社 | 経口用トロンビン製剤 |
-
1989
- 1989-12-20 DE DE3942141A patent/DE3942141A1/de not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-12-19 HU HU912738A patent/HUT59318A/hu unknown
- 1990-12-19 DK DK91901736.8T patent/DK0458950T3/da active
- 1990-12-19 JP JP3502062A patent/JPH0660108B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 AU AU70443/91A patent/AU625307B2/en not_active Ceased
- 1990-12-19 ES ES91901736T patent/ES2060357T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 EP EP91901736A patent/EP0458950B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 WO PCT/EP1990/002250 patent/WO1991008765A1/de active IP Right Grant
- 1990-12-19 AT AT91901736T patent/ATE94408T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-19 KR KR1019910700925A patent/KR920700681A/ko not_active Application Discontinuation
- 1990-12-19 CA CA002046861A patent/CA2046861C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 HU HU912738A patent/HU216793B/hu unknown
- 1990-12-19 DE DE91901736T patent/DE59002760D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 US US07/730,938 patent/US5352452A/en not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-08-19 NO NO913238A patent/NO305585B1/no not_active IP Right Cessation
- 1991-08-19 FI FI913908A patent/FI95999C/fi active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI95999C (fi) | 1996-04-25 |
ATE94408T1 (de) | 1993-10-15 |
NO913238L (no) | 1991-08-19 |
JPH04503683A (ja) | 1992-07-02 |
KR920700681A (ko) | 1992-08-10 |
FI913908A0 (fi) | 1991-08-19 |
DE59002760D1 (de) | 1993-10-21 |
EP0458950B1 (de) | 1993-09-15 |
NO913238D0 (no) | 1991-08-19 |
WO1991008765A1 (de) | 1991-06-27 |
AU7044391A (en) | 1991-07-18 |
CA2046861A1 (en) | 1991-06-21 |
CA2046861C (en) | 2001-04-10 |
ES2060357T3 (es) | 1994-11-16 |
FI95999B (fi) | 1996-01-15 |
EP0458950A1 (de) | 1991-12-04 |
DE3942141A1 (de) | 1991-06-27 |
AU625307B2 (en) | 1992-07-09 |
NO305585B1 (no) | 1999-06-28 |
JPH0660108B2 (ja) | 1994-08-10 |
HU912738D0 (en) | 1992-01-28 |
US5352452A (en) | 1994-10-04 |
HUT59318A (en) | 1992-05-28 |
DK0458950T3 (da) | 1993-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2739050B2 (ja) | 抗血液凝固剤 | |
CA1340270C (en) | Thrombolytic composition and a process for production thereof | |
FI85335C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av lyofiliserad, farmaceutisk vaevnadsplasminogenaktivator(t-pa)-komposition. | |
JP2006257099A (ja) | 高度に濃縮された、凍結乾燥された、および液体の、因子ix処方 | |
JP2690944B2 (ja) | 組織プラスミノーゲンアクチベーター活性を有するタンパク質の高濃度溶液 | |
HU216793B (hu) | Eljárás nem glikozilezett K2P pro t-PA-származékot tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására | |
EP0218112B1 (en) | Composition containing tissue plasminogen activator | |
US4898826A (en) | Method to solubilize tissue plasminogen activator | |
JPH09511495A (ja) | プラスミノーゲン活性化因子を含有する医薬製剤 | |
JPS638339A (ja) | 非経口投与用医薬組成物 | |
US4857320A (en) | Method of enhancing the solubility of tissue plasminogen activator | |
US5366730A (en) | Stabilized compositions having human tissue type plasminogen activator enzymatic activity | |
HU208629B (en) | Process for producing glycosylated protein-based pharmaceutical compositions with tpa-activating effect for treating blood clots | |
KR930008908B1 (ko) | 조직형 플라스미노겐 활성화제 또는 그의 유도체를 함유하는 혈전용해 조성물 | |
US5352453A (en) | Compositions containing non-glycosylated human tissue type plasminogen activator | |
CA2046598C (en) | T-pa solubilisation | |
JP2971680B2 (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 | |
HU208638B (en) | Process for producing pharmaceutical compositions containing t-pa derivative kik2p protein without glycosilyzing applicable for solving blood clot | |
JPH0369332B2 (hu) | ||
JPH1112194A (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子医薬組成物 | |
EP2906236A1 (en) | Liquid pharmaceutical composition of factor vii polypeptide | |
JPH0527607B2 (hu) | ||
JP2005035921A (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有製剤 |