JPH04334378A - 新規フタライド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、神経成長因子（以下、
ＮＧＦと略称する。）と同様な作用およびＮＧＦの作用
増強効果を有する新規な生理活性物質を系統的に研究す
る中で見いだされた新規なフタライド誘導体に関するも
のである。

【０００２】

【従来の技術】アルツハイマー型老年痴呆においては、
大脳基底核神経細胞であるアセチルコリン作動性神経の
変性・脱落が認められ、記憶障害・知的活動低下と深く
関わっていることが知られている１）。ＮＧＦは、繊維
切断によるアセチルコリン作動性神経の変性・脱落を抑
制すること２）、さらには、老齢ラットの迷路学習障害
を改善すると共にアセチルコリン作動性神経細胞の萎縮
を抑制すること３）、が報告されている。これらは、Ｎ
ＧＦがアルツハイマー型老年痴呆の治療薬となりうるこ
とを示唆している。ＮＧＦは、脳虚血スナネズミの海馬
神経細胞脱落を防ぐことも確かめられており４）、脳卒
中後遺症治療薬としての可能性も考えられる。一方、Ｎ
ＧＦ様の神経細胞保護活性を示す生体成分がいくつか発
見されており、これらも治療薬としての可能性がある５
）。しかし、ＮＧＦをはじめとしていずれも蛋白質であ
り、薬剤として用いる際には脳室内投与が必要となるた
め実用上問題がある。低分子で、ＮＧＦの生産を促進し
たり、ＮＧＦ様の神経細胞保護活性を持つ物質が、医薬
品としてより有用な薬剤となりうると考えられている。 本発明化合物は、分子量２４０、分子式Ｃ１３Ｈ２０Ｏ
４の新規な化合物である。これと類似の化合物としては
、薬学雑誌第１０９巻、第４０２頁〜第４０６頁（１９
８９年）に記載されているＳｅｎｋｙｕｎｏｌｉｄｅが
知られているが、ＮＧＦの作用増強効果については何等
記載されていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ＮＧＦと同
様な作用およびＮＧＦの作用増強効果を有する有用な化
合物を提供することを目的とすると共に、それを用いて
の神経細胞の活性化に関する。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、各種の植
物成分を検索し、ブラジルにて採取されたセリ科（Ｕｍ
ｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ）のＡｐｉｕｍ　　ｇｒａｖｅｏ
ｌｅｎｓ　　Ｌ．の５０％エタノール抽出液にＮＧＦの
作用増強効果を有する物質が存在することを見いだし、
本発明を完成するに至った。

【０００５】本発明は、式（１）

【０００６】

【化２】 で示される新規なフタライド誘導体（以下、ＮＧ−０７
２と略称する）に関するものである。

【０００７】上記（１）式の化合物はたとえば次のよう
な抽出、精製経路により製造することが出来る。ブラジ
ルにて採取されたセリ科のＡｐｉｕｍ　　ｇｒａｖｅｏ
ｌｅｎｓ　　Ｌ．を粉砕し、エタノール抽出、好ましく
は５０％エタノールで抽出し、濃縮後水性溶媒、例えば
水あるいは水とメタノールの混合溶媒に懸濁し、適当な
溶媒で処理して、脂溶性成分などを抽出除去したり、あ
るいは、目的物を単離抽出する。上記懸濁物を溶媒で処
理するにあたっては、通常の生薬エキス剤などを製造す
るにあたって採用される手法を用いることができる。

【０００８】こうして得られた目的の活性を含有する中
性画分は、必要に応じて、クロロホルム、エタノール、
メタノールなどの有機溶媒に懸濁したり、溶解したり、
さらにはそれで抽出処理された後、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー、高速液体クロマトグラフィーなどにより、生理
活性物質ＮＧ−０７２を精製単離することができる。

【０００９】上記単離処理を施こすにあたっては、塩酸
、硫酸などの酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、
炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなどのアルカリ、
さらにはリン酸緩衝液などの緩衝液、塩化ナトリウム、
硫酸アンモニウムなどの塩などで、ｐＨ及び塩濃度など
を調節しながら行なうことができる。

【００１０】本発明の生理活性物質ＮＧ−０７２は、そ
の化学的あるいは物理的性状及び／又は生物学的性状を
指標にして、上記例示以外の天然物資源、例えば植物か
らも得ることが可能である。

【００１１】さらにまた、本発明の生理活性物質ＮＧ−
０７２は、化学的あるいは酵素的に既知の化合物から誘
導することもできようし、さらには、化学的にあるいは
酵素的に他の誘導体化合物に変換することもできる。

【００１２】本発明は、植物からの抽出液であって、実
質的にＮＧＦの該神経細胞の脱落抑制作用を増強する作
用を有するものもその範囲内のものとすることができる
。さらに、本発明は後述する実施例で得られた活性物質
と実質的に同様な作用を有する組成物も包含するもので
ある。

【００１３】本発明の生理活性物質ＮＧ−０７２は実質
的に本明細書で示すような活性を有するものである限り
、いかなる形態、例えば、純粋なものあるいは、粗抽出
液のものであってよい。このような形態のものも、本発
明の該活性物質を含むものであれば本発明の範囲内であ
る。以下、生理活性物質ＮＧ−０７２の理化学的性質を
示す。

【００１４】（ＮＧ−０７２の理化学的性質）（１）外
観：無色透明油状 （２）ＥＩマススペクトル ｍ／ｚ　　２４０（Ｍ）＋ （３）分子式：Ｃ１３Ｈ２０Ｏ４ （４）ＵＶ吸収スペクトル（０．０１ｍｇ／ｍｌ，ＣＨ
３ＯＨ）： λｍａｘ＝２０８ｎｍ（ξ＝２０，０００）（５）ＩＲ
吸収スペクトル Ｎｅａｔ法で測定したスペクトルを第１図。 （６）１Ｈ−ＮＭＲスペクトル 重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定したスペクトル
を第２図に示す。 （７）１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル 重クロロホルム中、１００ＭＨｚで測定したスペクトル
を第３図に示す。 （８）溶解性 メタノール、クロロホルム、アセトン、ベンゼンに、可
溶。ジメチルエーテルに難溶。

【００１５】

【発明の効果】近年、増えつつあるアルツハイマー型痴
呆症は、前脳基底野のコリン作動性神経細胞が選択的に
脱落するために起こると言われている。ＮＧＦは、この
神経細胞の脱落を抑制する作用があることから、その作
用増強効果を有する本発明化合物ＮＧ−０７２は、抗痴
呆剤として利用できる可能性を持つ。

【００１６】次に、本発明の実施例並びに出発物質の製
造例を挙げ、本発明を更に詳細に説明する。

【００１７】実施例１ 採取されたＡｐｉｕｍ　　ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ　　Ｌ
を粉砕し、５０％エタノールで抽出したエキス４００ｇ
を水２５０ｍｌとメタノール５００ｍｌの混合溶媒に懸
濁し、ｎ−ヘキサン５００ｍｌで抽出して得た脂溶性成
分を除去した後溶媒を留去し、残りの水層を等量のクロ
ロホルムで２回抽出する。

【００１８】クロロホルム抽出画分を濃縮後、炭酸水素
ナトリウムでｐＨ９にした水に懸濁し、等量のクロロホ
ルムで抽出した。この抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾
燥後、溶媒を留去し、更に塩酸でｐＨ３にした水に懸濁
し、等量のクロロホルムで抽出し、乾燥後、濃縮するこ
とにより中性のシロップ状物質２４．８ｇを得た。

【００１９】この物質をクロロホルム２０ｍｌに溶解し
、クロロホルムで調製したシリカゲルを充填した９００
ｍｌのカラムに吸着させ、１００％クロロホルムで溶出
される画分のみを濃縮乾固し、シロップ状物質１３ｇを
得た。

【００２０】この物質１３ｇをｎ−ヘキサン１０ｍｌに
溶解し、ｎ−ヘキサンで調製した３５０ｍｌのシリカゲ
ルカラムに吸着させ、ｎ−ヘキサン−アセトン混合溶媒
（１００：０〜９８：２）で洗浄し、次いでアセトン濃
度を徐々に上げて溶出される活性画分を集めて濃縮乾固
し、シロップ状物質７．９ｇを得た。

【００２１】この物質を再度、ｎ−ヘキサン５ｍｌに溶
解し、ｎ−ヘキサンで調製した３５０ｍｌのシリカゲル
カラムに吸着させ、ｎ−ヘキサン−アセトン混合溶媒（
９７：３）で溶出される活性画分を濃縮乾固し、褐色の
シロップ状物質２．１３ｇを得た。

【００２２】この物質を、メタノール３ｍｌに溶解し、
メタノールで調製した１１０ｍｌの逆相シリカゲルカラ
ムに吸着させ、メタノールで洗浄後、７０％メタノール
で溶出し、活性画分を集めてから、それを濃縮乾固し、
シロップ状物質７００ｍｇを得た。

【００２３】この物質を、少量のメタノールに溶解し、
高速液体クロマトグラフィー〔充填剤センシュウ科学株
式会社製　　ヌクレオシル５Ｃ１８、カラム径：１０×
２５０ｍｍ、溶媒：５０％アセトニトリル水、流速：４
．０ｍｌ／分、温度：５０℃、検出吸光度（２１５ｎｍ
）〕を用いてくり返し行ない、保持時間５．３〜６．３
分の画分を集めて濃縮後、得られた水溶液を等量の酢酸
エチルで２回抽出し、濃縮乾固し、ＮＧ−０７２の無色
油状物質９ｍｇを得た。こうして得られたＮＧ−０７２
の理化学的性状は前述した通りであるが、それに基づい
て決定された構造は、前述した式（Ｉ）であることを示
している。ところで、本発明は、またその生物活性に着
目して発明がなされていることから、実質的に同様の活
性を有するものをも含むものである。

【００２４】試験例（ＮＧＦ作用増強効果）（検体）実
施例で得られたＮＧ−０７２の無色油状物質をメタノー
ルに溶解し０．１ｍｇ／ｍｌとした。

【００２５】（試験細胞） ラット褐色細胞腫：ＰＣ−１２細胞 （ＮＧＦ応答細胞） なお：ＰＣ−１２細胞は、１９７６年、ＮＥＤｗｈｉｔ
ｅ　　ｒａｔｓ副腎髄質のクロム親和性細胞（ｃｈｒｏ
ｍａｆｆｉｎｅ　　ｃｅｌｌｓ）由来の褐色細胞腫（ｐ
ｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ）より単離され樹立さ
れたクローン細胞である６）。副腎髄質が神経冠由来で
あることから、この細胞はＮＧＦに応答してニューロン
様細胞となるためモデル神経細胞として神経細胞やＮＧ
Ｆの研究に広く用いられている７）。

【００２６】（使用した培地）１０％熱非働化（５６℃
、３０分処理）牛胎児血清（ｆｅｔａｌ　　ｂｏｖｉｎ
ｅ　　ｓｅｒｕｍ，Ｇｉｂｃｏ社）、５％熱非働化馬血
清（ｈｏｒｓｅ　　ｓｅｒｕｍ，Ｇｉｂｃｏ社）、５０
Ｕ／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ストレプトマイシンを
含有するダルベッコ改良イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃ
ｏ’ｓ　　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　　Ｅａｇｌｅ　　ｍｅｄ
ｉｕｍ，高グルコース含有，Ｇｉｂｃｏ社）

【００２７】（試験方法）ＰＣ−１２細胞を、上記培地
にて、２×１０４ｃｅｌｌ／ｍｌに調製し、コラーゲン
コート２４孔プレート（２ｃｍ２，Ｃｏｒｎｉｎｇ社）
へ、０．５ｍｌ／ｗｅｌｌずつまき、３７℃、５％ＣＯ
２で培養した。２４時間後、プレート下部に付着した細
胞を残して、０．５ｎｇ／ｍｌＮＧＦ（Ｓｉｇｍａ社、
５０ｎｇ／ｍｌの０．１％牛血清アルブミン含有リン酸
緩衝生理食塩水溶液を１％）と前記濃度の検体１％を含
む上記培地０．３ｍｌ／Ｗｅｌｌと交換した。さらに４
８時間培養後、細胞の突起伸長を顕微鏡下に観察した。

【００２８】観察結果を細胞の突起長で４種類に分類し
、形態変化のない細胞を０点、突起の伸長を伴わず形態
変化を起こした細胞を１点、細胞体の直径以内の突起を
持つ細胞を２点、細胞体の直径以上の突起を持つ細胞を
３点とし、１００細胞の合計点を突起伸長活性とし、３
視野を平均した。結果を表１に示す。

【００２９】

【表１】 〔参考文献〕 １）Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，Ｐ．Ｊ．，Ｐｒｏｃｅ，Ｄ
．Ｌ．，ＳＴＲＵＢＥ，Ｒ．Ｇ．，Ｃｌａｒｋ，Ａ．Ｗ
．，Ｃｏｙｌｅ，Ｊ．Ｔ．ａｎｄ　　Ｄｅ　　Ｌｏｎｇ
，Ｍ．Ｒ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２１５，１２３７（１９
８２） ２）Ｋｏｒｓｃｈｉｎｇ，Ｓ．，Ｈｅｒｍａｎｎ，Ｒ．
，Ｔｈｏｅｎｅｎ，Ｈ．ａｎｄ　　Ｈｅｆｔｉ，Ｆ．，
Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ　　Ｌｅｔｔｅｒｓ，６６，
１７５（１９８６） ３）Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｗ．，Ｗｉｃｔｏｒｉｎ，Ａ．，
Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ，Ａ．，Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ，Ａ．
，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｌ．Ｒ．，Ｖａｒｏｎ，Ｓ．ａｎ
ｄ　　Ｇａｇｅ，Ｆ．Ｈ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２９，６
５（１９８７） ４）茂野卓、美馬達夫、常盤令子、高倉公明、古川昭栄
、Ｄａｖｉｄ　　Ｉ．Ｇｒａｈａｍ、医学のあゆみ、１
４５、５７９（１９８８） ５）Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｄａｍ，Ｄ．，Ｌｅ
ｅ，Ｓ．ａｎｄ　　Ｃｏｔｍａｎ，Ｃ．Ｗ　　，Ｎａｔ
ｕｒｅ，３２２，３６０（１９８８） ６）Ｇｒｅｅｎｅ，Ｌ．Ａ．ａｎｄ　　Ｔｉｓｃｈｅｒ
，Ａ．Ｓ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
，７３，２４２４（１９７６） ７）畠中寛、神経成長因子などによる神経クローン細胞
の分化、「動物培養細胞利用集成」遠藤浩良編、Ｒ＆Ｄ
プランニング社、（１９８５）ｐｐ３９７−４０５

【０
０３０】上記結果より、上記実施例で得たＮＧ−０７２
である無色油状物質は顕著なＮＧＦ活性増強作用を示し
、ＮＧＦを用いる場合にそれに配合して用いるばかりで
なく、例えば、ｉｎ　　ｖｉｖｏなどでＮＧＦが産生さ
れる条件のもとに外部的に与えられて、ＮＧＦ活性を増
強するのにも使用することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】Ｎｅａｔ法で測定したＩＲ吸収スペクトル図で
ある。

【図２】重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定した１
Ｈ−ＮＭＲスペクトル図である。

【図３】重クロロホルム中、１００ＭＨｚで測定した１
３Ｃ−ＮＭＲスペクトル図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　式 【化１】 で表されるフタライド誘導体。