JPH07506591A - ホスホジエステラーゼ阻害剤としての８−置換キサンチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ホスホノエステラーゼ阻害剤としての８−置換キサンチン本発明は薬理活性を有 する新規化合物、該化合物の製法、該化合物を含有する匡Ｉ組成物ならびに該化 合物および組成物の医薬における使用に関する。

モレキュラ・ファーマコロノイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇ ｙ）　、第６巻、Ｎｏ、６．５９７〜６０３頁（１９７０）は１．３−ジメチル −８−ニトロ−キサンチンを開示している。この化合物は脂肪分解活性を有する と開示されている。アナリ・／・ノミ力（＾ｎｎ、ｃｈｉｍ）　、　４７．３６ ２−３６５　（１９５７）は１．３−ジメチル−８−アミノ−キサンチンおよび その調製法を開示している。この化合物に関する薬理学的有用性は開示されてい ない。ドラッグ・リサーチ（Ｄｒｕｇ　Ｒｅｓ、）　２７　（１）Ｎｒ、１９． ４〜１４頁（１９７７）、ヴ７ン・ケイ・エイチ・クリンクラー（Ｖａｎ　Ｋ、 　Ｈ，）：１ｉｎｇｌｅｒ）は、フェニルエチルアミノアルキルキサンチンの合 成における中間体としての、１，３−ジメチル−８ｆ［換キサンチンを開示して いる。ドラッグ・リサーチ３１　（１１）Ｎｒ、１２．　（１９８１）アール・ シイ・ワーナーら（Ｒ，Ｇ、Ｖｅｒｎｅｔ）　、２０４４〜２０４８頁は、ある 種の１，３−ジメチル−８−置換−キサンチンを開示している。これらの化合物 に関する薬理活性は開示されていない。

ヨーロッパ特許出願公開第０３６９７４４号も、喘息の治療において、とりわけ 気管支拡張藁として用いるある種の１．３−または１．３．７−８−Ｈシクロア ルキルアルキレンキサンチンを開示している。

一連の新規８−置換キサンチンがホスホジェステラーゼ阻害剤としての活性を示 すことが見いだされている。

これらの化合物は誘起された血液好酸球増加症の良好な阻害剤であり、従って喘 い、のような好酸球数の増加に伴う障害、および尊麻疹、湿疹および鼻炎などの アトピーに伴うアレルギー障害の治療および／または予防において潜在的に有用 であることが示されている。

これらの化合物は、また気管支拡張活性を有し、従って可逆性気道閉塞および喘 ９のような呼吸管の障害の治療において潜在的に有用であることが示されている 。

こＡ１らの化合物はまた、脳代謝阻害の結果に対する防御効果を有する。該化合 物は、一過性前脳虚血の後のデータの取得まｔ：は回ｉ！を改善し、従って、脳 の老化、多梗塞痴呆、アルツハイマー型の老人性痴呆、年齢に伴う記憶減退およ びパーキンノン病に関連するある種の障害を包含する学習、記憶および認識障害 を伴う脳血管および神経細胞変性障害の治療に有用である。

これらの化合物はまた神経保護活性を有することが指摘されている。これらはし たがって、心拍停止、卒中による脳虚血を包含する虚血現象に起因し、さらに手 術および／また（ｊ出産に起因するような脳虚血後の現象に起因する神経細胞の 変性にＩ：ＩＩＩする障害の予防に有用である。加えて、該化合物を用いた治療 は虚血後の脳機能疾寄に起因する機能障害の治療に有益であることが指摘されて いる。

これらの化合物はまた虚血骨格筋の酸素圧の増加において活性である。この性質 により虚血骨格筋中を流れる栄養血流が増加し、このことは本発明の化合物が間 欠性波付などの末梢血管疾壱の治療薬として有用であることを意味する。

本発明の化合物はまた、腫瘍壊死丙子（ＴＮＦ）のｉｎ　ｖｉｖｏにおける産生 の阻害剤であると考えられ、従って慢性関節リウマチ、リウマチ様を椎炎、変形 性関Ｉｉ？ｉ症、痛風性関節炎および他の関節炎：敗血症、敗血症性ノヨソク、 内毒素ノヨノク、グラム陰性敗血症、毒性／ヨノク症候群、成人呼吸窮迫症候群 、脳性マラリア、慢性肺炎、珪肺症、肺すルコイドーノス、骨再吸収症、再潅流 傷害、移植片対宿王反応、同種移植片拒絶反応、インフルエンザのような感染症 による発熱および筋肉痛、感染または悪性腫瘍に続発するカヘキノー、後天性免 疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に続発するカへキ／−１ＡＩＤＳＳＡＲＣ（ＡＩＤＳ 関連症候群）、ケロイド形成、ｑ痕組織形成、クローン病、潰瘍性大腸炎または 熱病を含む過度または未調整のＴＮＦ産主にｆ１随する疾ψの治療について可能 性を有する。本発明の化合物は、また、感染の結果としてＴＮＦを産生ずるウィ ルス感染症の治療においてＧｍであるか、まｔ：は本発明の化合物により直接ま たは間接的に復製が減少するような阻害に感受性であるウィルス性感染症の治療 に有用である。このようなウィルスは、例えば、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２および Ｈ！Ｖ−３、サイトメカロウイルス（ＣＭＶ）、インフルエンザ、アデノウィル スおよび、限定されるものではないが、帯状ヘルペスおよび単純ヘルペスのよう なヘルペス群のウィルスを包含する。

前記治療法は、もちろん、獣医学的治療を含み、特に、例えば、ネコ免疫不全ウ ィルス（Ｆ　Ｉ　Ｖ）または他のレトロウィルス性感染症、例えばウマ感染性貧 血ウィルス、ヤキ関節炎ウィルス、ビスカウイルス、マエノウィルスおよび他の レノヂウイルスなどを包含するＴＮＦ媒介ウィルス感染症の治療を包含する。

これらの化合物はまた、ヒトまたはヒト以４の哺乳動物における増殖性皮膚病の 治療において潜在的に有用である。

従って、本発明は、式（１） ［式中、Ｒ）およびＲ２は、各々独立して、式（ａ）（ＣＨ２）１ｍ　、Ａ　（ ａ） （式中、ｍｆ′！Ｑまたは１．２もしくは３の整数を表わし、Ａは置換または非 置換環状炭化水素基を意味する） てテされる基。

Ｒ３は水素、置換または非置換アルキルまたはアリール部分が置換されているか または置換されていないアラルキル基：およびＲ４は水素、アルキルまたはアル キルカルボニルを意味する］て示される化合物または適当ならばその医薬上許容 される塩を提供する。

適当には１．へは置換されていない。好ましくは、Ａは置換または非置換の炭素 数３〜８ｇの７クロアルキル基、特に炭素数３〜６の７クロアルキル基である。

特に、八は置換または、好ましくは、非置換シクロプロビル、／クロブチル、ノ クロベンチルまたはノクロヘキ／ル基を表わす。

望ましくは、Ａはノクロブロビル基またはシクロブチル基を表わす。

好ましくは１．へはシクロブロピル基を表わす。

Ｒ３が非置換アルキルを表わす場合、適当な例は、メチルを包含する。

Ｒ３が１買換アルキルを表わす場合、適当な例は、メトキノメチルのようなアル コキンメチルを包含する。

適当には、Ｒ３はアリール部分において置換されているかまたは置換されていｌ よいアラルキル基、例えばヘンシル基を表わす。

Ｒ３がヘノノル基である場合、例えば、非置換ベンジルまたはフェニル部にてメ トキノ基で置換されているベンノルが挙げられ、特に４−メトキノメチルをと含 する。

適当には、Ｒ″は水素を表わす。

適当には、Ｒ４はアルキルカルボニルを表わす。

適当には、アルキルカルボニル基は、炭素数１〜４＠のアルキルカルボニル基、 例えばアセチル基である。

適当な医薬上許容される塩は、医薬上許容される塩基性塩および医薬上許容され る酸付加塩である。式（＋）の化合物の適当な医薬上許容される塩基性塩は、ナ トリウム塩などのアルカリ金属塩などの金属塩、またはエチレンンアミンを用い て調製される有機アミン塩などを含む７−Ｎ塩基性塩を包含する。

式（＋）の化合物の適当な医薬上許容される酸付加塩は、硫酸塩、硝酸塩、燐酸 塩、硼酸塩、塩酸塩および臭化水素酸塩などの医薬上許容される無機塩および酢 酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコ ルビノ酸塩、メタンスルホン酸塩、α−ケトグルタル酸塩、α−グリセロリン酸 塩およびグルコース−１−リン酸塩等の医薬上許容される有機酸付加塩を含む酸 付加塩である。好ましくは、酸付加塩は塩酸塩である。

式（＋）の化合物の医薬上許容される塩は、常套手段を用いて調製される。

本明細３において用いるｒｉ状炭化水素基Ｊなる語は、各環が８個までの炭素［ １貰子、適当には６個までの炭素原子、例えば３．４．５または６個の炭素原子 からなる中環および縮合環の脂環式炭化水素を包含する。

環状炭化水素基の適当な任意の置換基は、炭素数１〜６個のアルキル基またはハ ロケノ原子を包含する。

本明細書において用いる「アリール」なる語は、単独で用いられる場合であって も、あるいは他の基（例えばアラルキル基）の一部であっても、５個までの、好 ましくは３個までの、ハロゲン、アルキル、フェニル、アルコキン、ハロアルキ ル、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、カルボキノ、アルコキンカルボニル、アルフ キノカルボニルアルキル、アルキルカルボニルオキシまたはアルキルカルボニル 基から選択される基で所望により置換されていてもよいフェニルおよびナフチル 基を包含する。フェニレン基の任意の置換基は、アリール基に関して記載した３ 個までの置換基を包含する。

アラルキル基のアリール邪の適当な任意の置換基は、「アリール」基に関して前 記したものを包含し、特に、アルコキン基、例えばメトキシ基を包含する。

本明細書において用いる「アルキル」なる語は、単独で用いられる場合であって も、あるいは他の基の（例えばアルキルカルボニル基中にあるような）一部であ っても、１〜１２個の炭素原子、適当には１〜６個の炭素原子を含む直鎖および 分岐鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピルまたはブチルを包含する 。アルキル基についての適当な任、Ｗの置換基は、アリール基に関して前記した ５個までの、好ましくは３個までの置換基を包含する。

本明細書において用いる「増殖性皮膚病」なる表現は、良性または悪性増殖性皮 膚病であって、表皮、真皮またはその付属物における加速的な細胞分裂を特徴と し、不完全な組織分化を伴うものである。このような病気は、ヒトにおける乾痺 、アトピー性皮膚炎、非特異性皮膚炎、−次刺激接触性皮膚炎、アレルギー性接 触皮膚炎、皮膚の基底細胞癌および偏平上皮癌、薄板状上魚鱗癖、表皮剥離性角 質増殖症、前癌性日光角化症、非悪性角化症、挫削および脂漏性皮膚炎、および 家畜におけるアトピー性皮膚炎および家畜済１等を包含する。

八Ｎ）の化合物は好ましくは医薬上許容される形管である。医薬上許容される形 態とは、希釈剤および担体などの通常の医薬添加物を除いて医薬上許容されるレ ベルの純度であり、通常の投与量レベルで毒性であると考えられる物質を含まな いものを意味する。医薬上許容される純度は、一般に、通常の医薬添加物を除い て少な（とも５０％、好ましくは７５％、より好ましくは９０％、さらに好まし くは９５％である。

本発明は、さらには、式（１）の化合物の製法であって、式（■）：（Ｉｌｌ ［式中、Ｒｌｏは式　（１）に関して定義したＲ１またはＲ１に変換可能な基を 表わし、Ｒｌｏは式　ＣＩ）に関して定義したＲ２またはＲ２に変換可能な基を 表わし、Ｒ３“は式　（１）に関して定義したＲ３またはＲ３に変換可能な基を 意味する］て示される化合物を、式（Ｉ［［） ％式％（） ［式中、Ｒ５はヒドロキシ保護基を表わし、ＬＩは脱離基を意味する］て示され る化合物と反応させ、その後、必要ならば１以上の以下の任意の工程を行うこと からなる （１）保護基を除去する。

（２）Ｒ”をＲ１に、および／まｔ二はＲ２°をＲ２に、および／またはＲ３° をＲ３に変換する。

（３）式（１）の化合物を別の式（１）の化合物に変換する：（４）式（＋）の 化合物をその医薬上許容される塩に変換することからなる製法を提供する。

適当な脱離基Ｌ１は、ハロゲン原子、特にヨウ素原子である。

式（■）および（ＤＩ）の化合物間の反応は、通常のアルキル化条件、例えばン メトキ／エタン、ジメチルホルムアミドまたはテトラヒドロフランなどの非プロ トノ性溶媒中、適当な生成率で所望の生成物が得られる温度、たとえば０℃から １（Ｈｌ”Ｃ１通常４０℃から８０℃の範囲内、例えば６０℃で、好ましくは不 活性雰囲気中、例えば窒素雰囲気中で行う。

適当には、化合物（ＩＩ）の８−アミノ基は、活性化された形態であり、好まし くは、イオン形態、例えば塩形態、例えば式（■）の化合物をアルカリ金属塩基 、例えばカリウムｔ−ブトキッドで処理することにより得られるアルカリ金属塩 等の塩の形態である。

式（ＩＩ）の化合物は、ヨーロッパ特許出願公開第０３８９２８２号に記載され た方法を用いて調製される。

式（Ｉ［［）の化合物は既知の化合物であるか、または既知の化合物を調製する のに用いられる方法、例えばテトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）　、４ ６．　６９０３　（１９９０）中で検討されている方法に従って調製される。

式（１）の化合物の他の式（１）の化合物への変換は、−のＲ４基を他のＲ４基 に変換すること、例えばＲ４がアルキルカルボニル基である化合物を、Ｒ４が水 素原子である式（１）の化合物に加水分解することを包含する。

前記変換において、適当な常套手段が適宜用いられ、前記加水分解においては、 通常の加水分解条件を用いる。例えばアルキルカルボニル基の加水分解は、好ま しくはメタノールなどのエタノール性溶液中、好都合には外界温度で、好ましく は、炭酸カリウムによる穏やかな塩基性加水分解を用いて行う。

Ｒ１−およびＲｌａついての適当な例は、各々、Ｒ１およびＲ２、または窒素保 護基、例えばベンシル、ニトロベンジルまたはトリメトキシベンジル基を包含す る。適当なＲ３“の例はＲ３である。

適当には、Ｒが置換または非置換アラルキルである場合、Ｒ”およびＲ２−は、 Ｒ３に影響を与えずに挿入および除去できる窒素保護基、例えばトリメチルシリ ル基である。

好ましくは、Ｒ３が置換または非置換アラルキルである場合、その場合、Ｒｌ　 −はＲ１、ＲｌｏはＲ２である。

Ｒ１−１Ｒ２°またはＲ３−が、各々、Ｒ１、Ｒ２またはＲ３以外の基である場 合、適当な常套手段を用いて、Ｒ１′をＲ１に、Ｒ２ＪをＲ２に、Ｒ３−をＲ３ にする前記の変換を実施する。例えば、Ｒ１’　（またはＲ２°）がベンジル基 などの窒素保護基である場合、保護基を適当な常套手段、例えば接触水素添加を 用いて除去し、得られた生成物を式（■）。

Ｘ　（ＣＨｚ）ｍ　Ａ　（ＴＶ） ［式中、Ａおよびｍは式ＣＩＡ）に関して定義したとおりであり、Ｘは脱離基、 例えば臭化物またはヨウ化物のようなハロゲン化物を意味する］て示される化合 物と反応させる。

反応性基または原子、例えばキサンチン窒素原子の保護は、前記プロセスのいず れの適当な段階で行ってもよい。適当な保護基は、特定の基または原子の保護に 通常用いられるものを包含し、例えばキサンチン窒素原子の適当な保護基（よア ルキルンリル基、特にトリメチルノリルまたはｔ−ブチルジメチルノリル基であ る。

保護基は適当な常套手段を用いて調製し、除去できる。例えば、アルキルノリル 保：ｌＷは、式（ＩＩ）の化合物を適当なアルキルシリル／％ライド、例えばト リメチルノリル基に関してはトリメチルシリルクロリド、ｔ−ブチルジメチルノ リル基に関してはｔ−プチルノメチルシリルクロリドで処理する。シリル保護基 を、適当な溶媒、例えばテトラヒドロフラン中、好都合には外界温度でｔ−ブチ ルア〉モニウムフルオリドで処理することにより除去する。

前記のように、本発明の化合物は有用な治療上の性質を有することが示されて（ ・る。本発明は、したがって、活性な治療物質として用いる式（１）の化合物ま たは適当ならばその医薬上許容される塩および／またはその医薬上許容される溶 媒和物を提供する。

かくして、本発明は、好酸球数の増加に付随する障害、例えば喘息、およびアト ピーにアトピーに付随するアレルギー性障害、例えば辱麻疹、湿疹および鼻炎の 治療および／または予防に用いるための、式（１）の化合物または適当ならｉｆ その医薬上許容される塩および／またはその医薬上許容される溶媒和物を提供す 別の１！！！様において、本発明は、また、ホスホジェステラーゼ阻害剤として 用いるための、式（１）の化合物または適当ならばその医薬上許容される塩およ び／またはその医薬上許容される溶媒和物を提供する。

−４様において、本明細書において前記したように、本発明は呼吸管の疾患、例 えば回連性気道閉塞および喘息の治療に用いる式（１）の化合物または適当なら ばその医薬上許容される塩および／またはその医薬上許容される溶媒和物を提供 する。

別の一聾様において、本発明は、学習、記憶および認識障害に伴う脳血管および 神経細胞変性障害、末梢血管疾患または増殖性皮膚病のような前記した治療また は虚血事象より得られる神経細胞変性に付随する障害の予防に用いるための、式 （しの化合物または適当ならばその医薬上許容される塩および／またはその医薬 上許容される溶媒和物を提供する。

さらに別の態様において、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のｉｎ　ｖｉｖｏ産生の阻害 剤として用いるための、式（１）の化合物または適当ならばその医薬上許容され る塩もよび／またはその医薬上許容される溶媒和物が提供される。

特に、過度または未Ｘ１１￥ｌのＴＮＦ産生に伴う疾患の治療および／または予 防に用いるための、式（１）の化合物または適当ならばその医薬上許容される塩 および／またはその医薬上許容される溶媒和物を提供する。

過度のまたは未調整のＴＮＦ産生に付随する病気は、慢性関節リウマチ、リウマ チ様を椎炎、変形性関節症、痛風性関節炎および他の関節炎；敗血症、敗血症性 ンコンク、内毒素ショック、グラム陰性敗血症、毒性ショック症候群、成人呼吸 窮迫症候群、脳性マラリア、慢性肺炎、珪肺症、肺サルコイドーシス、骨再吸収 症、再潅流傷害、移植片対宿主反応、同種移植片拒絶反応、インフルエンザなど の感染症による発熱および筋肉痛、感染または悪性腫瘍に続発するカヘキンー、 ｉ炎天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に続発するカヘキンー、ＡＩＤＳ、ＡＲＣ （ＡＩＤＳ関連症候群）、ケロイド形成、搬痕組織形成、クローン病、潰瘍性大 腸炎または熱病を包含する。

さらに別の態様において、感染の結果ＴＮＦを産生ずるウィルス性感染症または 本発明の化合物により、直接または間接的に複製が減少する等、阻害に対して感 受性のウィルス性感染症の治療および／または予防に用いるための、式（１）の 化合物または適当ならばその医薬上許容される塩および／またはその医薬上許容 される溶媒和物が提供される。このようなウィルスは、例えば、ＨＩＶ−１、＋ １１Ｖ−２およびＨＩＶ−３、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）　、インフルエ ンザ、アデノウィルスおよび限定されるものではないが、帯状ヘルペスおよび単 純ヘルペスのようなヘルペス群のウィルスを包含する。

式（夏）の化合物または適当ならばその医薬上許容される塩および／またはその 医薬上許容される溶媒和物は、それ自体、または好ましくは医薬上許容される担 体からなる医薬組成物として投与される。

従って、本発明は、式（１）の化合物または適当ならばその医薬上許容される塩 および／またはその医薬上許容される溶媒和物、および医薬上許容される担体か らなる医薬組成物を提供する。

活性化合物は、適当な経路による投与用に処方され、好ましい経路は治療を必要 とする疾患に依存し、好ましくは、単位投与形またはヒト患者が自分自身で１回 の服用量で服用できる形態である。有利には、該組成物は、経口、経直腸、局所 、非経口、静脈内または筋肉内投与または呼吸管からの投与に適したものである 。調製物は活性成分がゆっくり放出されるようにデザインされている。

本発明の組成物は、錠剤、カプセル、薬袋、バイアル、散剤、顆粒剤、トローチ 、坐剤、復元可能な散剤、または経口または滅菌非経口液体溶液または懸濁液な どの液体調製物の形態である。適当ならば局所処方物であってもよい。

投与の一貫性を得るために、本発明の組成物は単位投与の形態であるものが好ま しい。

経口投与用の単位投与形態は、錠剤およびカプセルで、通常の賦形剤、例えば結 合剤、例えば、７０ツブ、アカノア、ゼラチン、ソルビトール、トラガントまた はポリヒニルビロリドン：増量剤、例えばラクトース、砂糖、トウモロコノチン ブ〉、燐酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤滑沢剤、例えばステ アリン酸マグネシウム、崩壊剤、例えばデンプン、ポリビニルピロリドン、グリ コール酸デンプンナトリウムまたは微結晶セルロース：または医薬上許容される 湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを含んでもよい。

固体経口組成物は、通常の混合、充填、錠剤形成などの方法により調製される。

繰り返しブレンド操作を用いて活性成分を大量の増ｌ剤を用いた組成物全体に分 散させてもよい。

このような操作はもちろん当業界においては慣例のものである。錠剤は通常の医 薬実務においてよく知られている方法にしたがってコートしてもよく、特に腸溶 剤にしてもよい。

経口液体調製物は、例えば、乳剤、ノロノブ、またはエリキンル削等の形態であ ってもよく、あるいは水または池の適当なビヒクルで使用前に復元するための乾 燥製品にしてもよい。このような液体調製物は、例えばソルビトール、シロップ 、メチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキノエチルセルロース、カルボキンメチ ルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、硬化食用油脂などの沈殿防止剤 ８例えばレノチン、モノオレイン酸ソルビタン、またはアカノアなどの乳化剤： 例えばアーモンド油、分画ココナツ油、グリセリンエステルなどの油性エステル 、プロピレングリコール、またはエチルアルコールなどの非水性ビヒクル（食用 油を含んでもよい）：たとえばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルま たはソルビン酸等の保存料、および所望により通常の矯味矯臭剤または着色料な どの通常の添加物を含んでもよい。

組成物はまた、呼吸気管への投与用に、嗅剤またはアエロゾルまたはネブライサ ー用溶液、あるいは吸入用微粉末として、単独またはラクトースなどの不活性担 体と組合せてもよい。そのような場合、活性化合物の粒子は適当には直径５０ミ クロン未満、例えばＯｌｌから５０ミクロン、好ましくは１０ミクロン未満、例 えば１から１０ミクロン、１から５ミクロンまたは２から５ミクロンである。

適当ならば、少量の他の抗喘９．薬および気管支拡張薬、例えばイソプレナリン 、イソエタリン、サルブタモール、フェニレフリンおよびエフェドリンなどの交 換神経興奮剤アミン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイドおよびＡＣＴＨ なとの副腎刺激剤を含んでもよい。

非経口投与に関しては、本発明の化合物および滅菌ビヒクルを使用して液体単位 投与形を：Ａ製し、これは使用した濃度によって、懸濁できるかまたは溶解でき るかのいずれかである。溶液の調製においては、化合物を注射用の水中に溶解し 、適当なバイアルまたはアンプルに充填して密封する前に濾過滅菌する。

局所麻酔薬、保存料および緩衝剤などのアジュバントもビヒクル中に溶解させる のが有利である。安定性を向上させるために、組成物をバイアルに充填した後に 凍結し、水分を真空下で除去することができる。非経口艷濁液は化合物をビヒク ル中に溶解する代わりに懸濁させ、滅ωを濾過により行うことができない以外は 実質的に同じ方法で調製する。化合物は滅菌ビヒクル中にせ濁する前に酸化エチ レンにｉｆｆすることにより滅菌する。化合物の均一な分散を促進するために組 成物中に界面活性剤または湿潤剤を含むのが有利である。

組成物は、投与方法に応じて、０１から９９重量％、好ましくは１０から６０重 １％の活性物質を自有する。

式（１）の化合物、または適当ならばその医薬上許容される塩および／またはそ の医Ｔ上；Ｔ８される溶媒和物も、通常の局所用賦形剤と組合せて局所処方物と して投与できる。

局所処方物は、例えば軟膏、クリームまたはローンチン、浸漬包帯剤、ゲル、ケ ルスティック、スプレーおよびアエロゾルとしてもよ（、適当な通常の添加剤、 例えば保存料、薬剤の浸透を助ける溶媒および軟膏およびクリームにおいては皮 膚軟化工を含んでもよい。処方物は、相溶性の通常の担体、例えばクリームまた は軟介ベースおよびロー／コンに関してはエタノールまたはオレイルアルコール を含んでもよい。

式（＋）の化合物または適当ならばその医薬上許容される塩に使用される適当な りリーム、ロー／ヨ／、ゲル、スティック、軟膏、スプレーまたはアエロゾル処 方物は、例えば、バリーのコスメティコロノー（Ｈａｒｒｙ’　ｓ　Ｃｏｓｍｅ ｔｉｃｏｌｏｇｙ）（レオナルト・ヒル・ブノクス（Ｌｅｏｎａｒｄ　Ｈｉｌｌ 　Ｂｏｏｋｓ）出版、レミントンズ・フＴ−マ’ｙニア’イカル・サイエンシズ （Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’　ｓ　ＰｈａｒＩＩａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ ｓ）などのけ準的教本ならびにイギリスおよびアメリカ合衆国薬局方に記載され ているような当業界において公知の通常の処方物である。

適当には、式（１）の化合物、または適当ならばその医薬上許容される塩は、処 方物の約０５から２０重愚％、好ましくは約１から１０％、例えば２から５％で ある。

本発明の治療において用いられる化合物の投与量は、疾患の程度、患者の体重、 および化合物の相対的効力に依存する。しかし、一般的規準単位投与量は通常０ １から１０００ｍｇ、例えば０５から２００，０．５から１００または０．５か ら１０ｍｇ１例えば、０．５．１．２．３．４または５ｍｇであり、このような 投与単位を１日に１回以上、例えば１日に２．３．４．５または６回、好ましく は１日に１または２回投与し、１日の合計投与量が７０ｋｇの成人に関して通常 ０１から１０００ｍｇ、即ち約０．００１から２０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば００ ０７から３．０００７から１４．０．００７から０．１４または０．０１から０ ．５ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、００１．０．０２．００４．０．０５．０，０６ ．００８．０．１または０．２ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、このような治療法 は、数遇間または数カ月に及ぶ。

本明細書において用いる「医薬上許容される」なる語は、ヒトおよび獣医学的用 途の両方に適した物質を包含する。前記投与量範囲において本発明の式（１）の 化合物に関して、毒学的効果は見られない。

以下の藁理学的データおよび実施例において本発明を説明する。以下の調製例は 式（Ｉ）の新規化合物の中間体の調製例を示すものである。

実施例１ ８−［４−アセトキノ−３−（アセトキンメチル）ブチルアミノ］−１，３−ジ （ンクカリウムｔ−ブトキシド（０，３５ｇ、３．１３ミリモル）を、８−アミ ノ−１，３−ン（シクロプロピルメチル）−７−（４−メトキンベンジル）キサ ンチン（０，９９ｇ、２．５ミリモル）のンメトキシエタン（ＤＭＥｌｏｍｌ） 中溶液に６０℃、窒素雰囲気下で添加する。３時間後、４−アセトキン−３−（ アセトキノメチル）ブチルヨーシト（１，６９ｇ、５．４ミリモル）のＤＭＥ　 （３ｍｌ）中溶液を５分かけてゆっくり添加する。１８時間攪拌した後、混合物 を冷却し、酢酸エチル中に注ぎ、有機溶液を水で洗浄し、乾燥し、蒸発させる。

シリカゲル上クロマトグラフィー（アセトン／ヘキサンドア）により、８−［４ −アセトキノ−３−（アセトキンメチノリブチルアミノ］−１，３−ジ（シクロ プロピルメチル）−７−（４−メトキシベンジル）キサンチン（０，６３ｇ、４ ３％）を得る。融点１２０〜１２９５℃。

δ（ＣＤＣ１３）　０．４３　０．５０（８Ｈ，ｍ）：１．２６−１．３８（２ Ｈ。

ｍ）　：１．５８　（２Ｈ，ｍ）　：１．９１　（ＬＨ，ｍ）　：２．０５　（ ６Ｈ，ｓ）　：３．４７　（２Ｈ，ｍ）　：３．７９　（３Ｈ，ｓ）　：３．９ ０　（２Ｈ，ｄ、Ｊ　＝３．９Ｈｚ）　；３．９３　（２Ｈ，ｄｌ＝３．９Ｈｚ ）；　４．０３　（４Ｈ，ｍ）：　４．３０　（ＩＨ，ｔ。

Ｊ＝６．０Ｈｚ）：５．２９　（２Ｈ，ｓ）：６．８８　（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８． ５Ｈｚ）；７．２２　＜２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ＞Ｖｍａｘ　（ＫＢｒ）３２ ７２　（ｍ）　、１７４２　（ｓ）　、１６９３　（ｓ）　、１６５１　（ｓ） 、１６１７　（ｓ）、１５６６　（ｓＬ　１２５０　（ｓＬ　１２４０　（ｓ） 、１２２１　（ｓ）　、１０４０　（ｓ）ｃｍ−’。

ｍ／ｅ　（Ｆ／’ＩＢ）１２１　（１００％）、１４５　（３４）、１０５　（ ２７）、５８２　（ＭＩＩ’、２５）　、６０４　（ＭＮａ”、１５）元素分析 （Ｃ，。Ｈコ＊Ｎ５Ｃｈとして）実測値：Ｃ，６１，７８；Ｈ，６，８９；Ｎ、 １１．８２計算値：Ｃ，６１，９４；比　６．７６；Ｎ、１２．０４％規準サン プルと同一の出発物質（０，４１ｇ、４２％）による。

実施例２ １．３−ノ（シクロプロピルメチル）−８−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキ シメチル）ブチルアミノ）］−７−（４−メトキンベンジル）キサンチン８−［ ４−アセトキノ−３−（アセトキシメチル）ブチルアミノコ−１，３−ジ（シク ロプロピルメチル）−７−（４−メトキシベンジル）キサンチン（０，２２ｇ。

０３７ミリモル）および炭酸カリウム（０，００５ｇ、０．０３７ミリモル）を メタノール（８ｍｌ）中で室温にて５時間撹拌する。混合物を濃塩酸で中和し、 溶媒を減圧下に除去する。残’ｌｌｔ　（２５０ｍｇ）のシリカゲル上クロマト グラフィー（ヘキサン／アセトン勾配）により、１．３−ジ（シクロプロピルメ チル）−８−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチルアミノコ−７ −（４−メトキノベンジノリキサンチン（０，１１ｇ、５９％）を得る。融点１ ４１〜２℃。

δ（ＣＤＣ１３）　０．３９　０．４９　（８Ｈ，ｍ）　；　１．２８　１．３ ８　（２Ｈ。

ｍ）：１．６１−１．６５　（３Ｈ，ｍ）；　２．２９　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝４． ５Ｈｚ）；３．４６　（２Ｈ，ｍ）　；　３．６８　（４Ｈ，ｂｒ、ｓ）　；　 ３．８０　（３Ｈ，ｓ）　；　３．９２（４Ｈ，ｔ（オーバーラッピングｄ）、 Ｊ＝６．５Ｈｚ）；　４．５６　（ＩＨ，ｔ。

Ｊ＝５．３Ｈｚ）　：　５．２８　（２＋１．ｓ）　；　６．８８　（２Ｈ，ｄ ｊ＝８．５Ｈｚ）　ニア、２３　（２Ｈ，ｄｌミ８．５）１ｚ）Ｖｍａｘ　（Ｋ Ｂｒ）　３３１４　（ｍ）　、３２５０　（ｓ）　、！６９５　（ｓ）　、１６ ８５（ｓＬ　１６３４（ｓ）、１６１１　（ｓ）、１６０７（ｓ）、１５７８（ ｍ）、１０３０　（ｍ）　、７５６　（ｍ）ｃｍ−’ｍ／ｅ　（ＣＩ）　４９８ 　（ＭＨ”、　１００９ｆｉ）　、３５　（４０）　、４４８　（１２）、３９ ６　（ＩＯＬ　１２１　（７） 元素分析（Ｃ２ｓＨ３ｓＮ、Ｏｓとして）実７［？１１：Ｃ，６２，９２；Ｈ， ７，１０：Ｎ、１４．２２８−［ｌトアセトキン−３−（アセトキノメチル）ブ チノげミノ］−１，３□１１１−■■−− ノ（／クロプロピルメグ・ル）−７−メチルキサンチン８−［４−アセトキノ− ３−（アセトキノメチル）ブチルアミノコ−１，３−ジ（ン知プロピルメチル） −７−メチルキサンチンを８−アミノ−１，３−ン（シクロプロピルメチル）− ７−メチルキサンチンから実施例１と同じ方法で調製する。

収率３２９６つ融点１６３〜４℃。

δ（ＣＤＣｌ２）　０．月０．４９　（８１１，ｍ）　：　１．２４−１．３７ 　（２８゜５ｍ）　：　１．７２　（２＋１．ｑ、Ｊ＝（３，９１１ｚ）　：　 ２．０８　（６Ｈ，ｓ）　；　２．１３（団、Ｌ、Ｊ＝６．３１１ｚ）　：　３ ．５９　（２１１，ｄ　ｔｊ＝６．９．６、ＱＨｚ）：３、６８　（３１１，ｓ ）　；　３．９０　（４１ｉ、　ｔ　（オーバーラッピングｄ）。

Ｊ＝７．０Ｈｚ）；　４．０６−４．２０（４Ｈ，ｍ）；　４．５０（ＩＨ，ｔ 。

Ｊ−６，０ｌ−１ｚ） 元素分析（Ｃ２３１−＋ココＮ５Ｏｓとして）実測値：Ｃ，５８，０５；Ｈ，６ ，９７：Ｎ、１４．５３計算値：Ｃ，５８，０９；圧６．９９：Ｎ、１４．７３ １３−ノ（シクロプロピルメチル）−８−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシ メチル）ブチルアミノ］−７−メチルキサンチン１．３−ン（シクロプロピルメ チル）−８−［４−ヒドロキシ−３−化ドロキシメチル）ブチルアミノコ−７− メチルキサンチンを８−［４−アセトキシ−３−（アセトキノメチル）ブチルア ミノコ−１，３−ジ（シクロプロピルメチル）−７−メチルキサンチンから実施 例２と同じ方法で調製する。収率５９％。融点１７３℃。

δ（ＣＤＣ１３）　０．３９−０．４８　（８Ｈ，ｍ）；　１．２５−１．３９ （２Ｈ，ｍ）：　１．６９　（２Ｈ，ｑ、」＝６．６Ｈｚ）；　１．８３　（Ｉ Ｈ，ｍ）；３．４９　（２Ｈ，ｍ）　：　３．６４　（３Ｈ，ｓ）　：　３．６ ７　（４Ｈ，ｔ。

Ｊ−５，５Ｈｚ）＋３．８７　（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）：３．９１　（２ Ｈ，ｄ。

Ｊ＝７．２Ｈｚ）：４．０４　（２Ｈ，ｔｊ＝５．５Ｈｚ）：６．１７　（ＩＨ ，ｔ。

Ｊ＝５．５Ｈｚ） 元素分析（ＣｎＨｔ・Ｎ、０．として）実測Ｗｉ：Ｃ，５８，１１：Ｈ，７，５ ６；Ｎ、１７．９８計算値　Ｃ，５８，２９：Ｈ，７，４７；Ｎ、１７．８９％ １＝塵撚ｊ ８−［４−アセトキノ−３−（アセトキノメチル）ブチルアミノ］−１，３−ノ （ノクロブロビルメチルｌ−７−Ｃメトキンメチル）キサンチン実施例１に記載 したのと類似の方法を用いて標記化合物（融点９８〜９９℃）を調製する。

薬理学的データ ホスホノエステラーゼの阻害 ホスホノエステラーゼの単離 Ｃａ”／カルモデユリンで刺激されたＰＤＥ　（ＰＤＥ　Ｉ　第１表および命名 法に関シテハビーボおよびライフノングー（ＢｃａｖｏおよびＲｅ１ｆｓｙｎｄ ｅｒ）　（１９９０）ｖ詔）をウノ心室から調製する。Ｍｏｎｏ　Ｑカラム上で のクロマトグラフィー１こより、Ｃａ’“およびカルモデユリンによりＰＤＥ活 性の刺激を示すフラクションをプールし、さらにカルモデユリン−アフィニティ ーカラム上で生成する。

ｃ　Ｇ　Ｍ　Ｐ−刺激ＰＤＥ　（ＰＤＥ　ｎ）　、ｃＧＭＰ−阻害ＰＤＥ　（Ｐ ＤＥ　ｍ）およびｃＡＭＰ−特異性ＰＤＥ　（ＰＤＥ　ｒＶ）を全てモルモ・ノ ド心室から単離する。

１回目の２０ｍ１のＭＯロＯＱカラム上でのクロマトグラフィーでＰＤＥ　ｎお よびＰＤＥ　ｒＶの両方を含むピークからＰＤＥ　ｎｌを分割する。後者を別１ こ１ｍ１Ｍｏｎｏ　Ｑカラム上で再びクロマトグラフィーに付す。ｃＧＭＰ−選 択性ＰＤＥ（ＰＤＥ　Ｖ）をＤＥＡＥセルロースおよびＭｏｎｏ　Ｑカラム上ク ロマトグラフィーを用いてブタ肺から得、カルモデユリン−アフィニティーカラ ムを、残留するＰＤＥ　Ｉ活性を除くのに用いる。

ホスホノエステラーゼイソ酵素の特性 正の協同性を示すＰＤＥ　ＩＩを除いて、全ての調製物は単純なミバエリス−メ ントノ速度論を示した（第１表参照）。

ＰＤＥ　ｌ　このイソ酵素の活性は、Ｃａ”−力ルモデュリン複合体により刺激 される。このイソ酵素は、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方を加水分解でき、後者 が好ましい基質である。

ＰＤＥ　ＩＴ　ｃＡＭＰを基質とするこのイソ酵素の活性は、ｃＧＭＰにより刺 激される。このイソ酵素は、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方を加水分解でき、基 本的条件下で後者が好ましい基質である。このイソ酵素の活性は、Ｃａ”−カル モデユリン複合体により影響を受けない。

ＰＤＥＤＩｃＡ〜ＩＰを基質とするこのイソ酵素の活性は、ｃＧＭＰにより阻害 される。このイソ酵素は、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方を加水分解でき、前者 が好ましい基質である。このイソ酵素の活性は、Ｃａ”カルモデユリン複合体に より影響を受１ノない。

ＰＤＥ　ＩＶ　このイソ酵素はｃＡＭＰに関して高い親和性を有し、この加水分 解はｃＧ〜１Ｐにより阻害されない。このイソ酵素の活性は、Ｃａ”−力ルモデ ュリノ＋ｉ＝体により影響を受けない。

ＰＤＥ　〜′　このイソ酵素はｃＧＭＰに関して高い親和性を有する。このイソ 酵素の活性は、Ｃａ”−カルモデユリン複合体により影響を受けない。

ホスホノエステラーゼ活性の検定 ＰＤＥ活性を前記されているボロネートカラム法（リーベス（Ｒｅｅｖｅｓ）ら 、１９８７）により検定する。酵素を、３７℃で４〜３０分間、３Ｈ標識環状ヌ クレオチド（４ｘ　１０’崩壊／分）および１４Ｃ標識ヌクレオチド５゛−モノ ホスフェート（３ｘ１．０３Ｘ壊／分）と−緒に５　Ｑ　ｍＭ　Ｔｒｉｓ、５ｍ Ｍ　ＭｇＣｈ　（ｐＨ７，５）中で培養することにより試験する。検定を、煮沸 により停止し、３Ｈ標識５°−モノホスフェート生成物をボロネートカラム上基 質から分離する。反応混合物を０．５ｍＬ　１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ　［Ｎ−（ ２−ヒドロキシエチル）ピペラジンンー＼１−２−エタノスルホノ酸］　、１０ ０ｍＭ　ＮａＣ１、ｐＨ８，５で希釈し、カラムにかける。カラムを同じ綾南液 でよく洗浄し、５°−ヌクレオチドを６ｍＬの０２５〜１酢酸で溶出する。Ｉ４ ０回収率により判定される生成物の回収率は約８０％である。全ての検定はこれ らの実験において用いた範囲にわたり、培養時間および酵素濃度に関してａ線的 である。

ＩＣ５ａ値（活性の５０％阻害に要する阻害物質濃度）を、１μＭ　ｃＧＭＰを ＰＤＥ　Ｉ　（Ｃａ”およびカルモデユリンの非存在下）　、ＰＤＥ　ｎおよび ＰＤＥ〜“のｌとして用い、１μＭｃΔＭＰをＰＤＥ　ＩｎおよびＰＤＥ　ｒＶ の基質として用いたイソ酵素の培養により占る。

０、ｌＸＩＣ５０から１００×１ｃｓｏの阻害物質濃度範囲を用いる。

参考文献 ヒーホ・ノエイ・エイおよびディー・エッチ・ライフノングー（Ｂｅａｖｏ、　 Ｊ＾およびり、ＨＲＥＩＦＳＮＹＤＥＲ）　、環状ヌクレオチド・ホスホノエス テラーゼ・イソ酵素の王たる配列および選択阻害剤のデザイン（Ｐｒｉｍａｒｙ 　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｃｙｄｉｃｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｈｏｓｐｈｏ ｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｓｏｚｙｍｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｓｉｇｎ　ｏ ｆ　ｓｅ］ｅｃｔｉ魔■@１ｎｈｉｂｉ ｔａｒｓ）トレノズ・ファーマコール・サイ（Ｔｒｅｎｄｓ、　Ｐｈａｒｍａｃ ｏｌ　Ｓｃｉ、）　１１．１５０−１５５　（１９９０）。

リーベス・エム・ンエイ、ビー・ケイ・ライおよびピー・／エイ・イングランド （ＲＥＥｖＥＳ　Ｍ、Ｌ、、Ｂに、　ＬＩＪＧｌヨヒＰ、Ｊ、ＥＮＧＬＡＮＤ） 　、ヒトオヨヒモルモノト心室における新規環状ヌクレオチドホスホノエステラ ーゼ活性の同定（丁ｈｅ　１ｎｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ 　ｃｙｄｉｃ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｈｏｓｐｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅａｃ ｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ａｎｄ　ｇｕｉｎｅａ−ｐｉｇ　ｃａｒｄｉ ａｃ　ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ）　、ノ〈イオケム・ノエイ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ 、）　２４１．　５３５−５４１　（１９８７）。

第１表　ホスホノエステラーゼイソ酵素の速度論的性質イノ酵Ｚ　Ｋｍ（７７Ｍ ）　Ｖｍａｘ　ｃＡＭＰｃＡ〜ＩＰ　ｃＧＭＰ　Ｖｍａｘ　ｃＧＭＰｌ、　Ｃａ ’°／カルモデユリン刺＃３６５５０ｃＧＭＰ刺ｆｆ１４５１４１ ｍ、　ｃＧＭＰ阻害　０．５　０．１　５ｒＶ、　ｃＡＭＰ特異性　２　＞　ｎ 、ｄＶ、　ｃＧＭＰ特異性　＞　Ｉ　Ｎ、ｄａｌｉｌ素が正の協同性を示す 〉　Ｋｍ〉１００μＭ ｎ、ｄ、ＰＤＥが基質のうちの１つを加水分解できないため測定せず結果 実施例番号　阻害 ＰＤＥ　〜′、八　ＰＤＥ　ｒＶ ２０．２９ 式（１）の化合物のヒト単球によるｉｎ　ｖｉｔｒｏのＴＮＦ産生に対する阻害 効果セクノチン■　検定の構成 式（１）の化合物のヒト単球によるｉｎ　ｖｉｔｒｏのＴＮＦ産生に対する阻害 効果を以下の方法により試験した。

ヒト末梢血単球を血液バンク軟膜または血小板のいずれかからクロツタ・アール （Ｃｏｌｏｔｔａ、　Ｒ，）ら、ジャーナル・オブ・イムノロノー（Ｊ、　ＩＩ ＩＩＩｕｎｏｌ、　）　１３２（２）、９３６　（１９８ｔｌ）の方法にしたが って単離し生成する。単球を２４ウェルマルチティッンユ中に、ｌＸｌ０’細胞 ／ｍｌ（培地）／ウェルの密度でプレートする。細胞を１時間付着させ、その後 、上清を吸引して、１ｍｌの１％ウン胎児血清およびべ二ノリンおよびストレプ トマイシンを１０単位／ｍ＋で含有する新しい培地（ＲＰ、Ｍ　Ｉ−１６４０（ Ｗｈｉｔａｋｅｒ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、　Ｗｈｉｔａｋ ｅｒ。

ＣＡ））を添加する。細胞を４５分間、１ｎＭ〜１０ｕＭの用量範囲の試験化合 物（化合物はノメチルスルホキシド／エタノール中に溶解して、培地中最終溶媒 濃度が０．５％ジメチルスルホキシド１０５％エタノールになるようにする）の 存在下または非存在下に培養する。細菌のリボ多糖類（イー・コリ０５５：Ｂ５ ［Ｌ　Ｐ　Ｓ］シグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　 ）　）を、つぎに１１００ｎ／ｍ１で１０ｍ１リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に 溶解し、培養物を１６〜１８時間３７℃で５％ＣＯ２インキュベーター内で培養 する。培養期間の終わりに、培養上清を細胞から除去し、３０００回転／分（ｒ ｐｍ）で遠心分離して細胞片を除去し、以下に記載するラノオイムノアノセイを 用い、ＴＮＦ活性について０．０５ｍ１の上清を検定する。

セクション■　ＴＮＦ活性に関するラジオイムノアッセイ操作試験緩衝液は、０ 　、　ＯＩ　Ｍ　Ｎａ　Ｐ　Ｏａ、０．１５Ｍ　ＮａＣ１，０，０２５Ｍ　ＥＤ ＴＡおよび０．１％ナトリウムアジドを含有する（ｐＨ７，４）。チェノ（Ｃｈ ｅｎ）ら。

ネイチ＋−（Ｎａ　ｔｕ　ｒｅ）、３３０　：　５８１−５８３　（１９８７） の方法を用いて得られたヒト組み換えＴＮＦ　（ｒｈＴＮＦ）を、以下□のセク ション■において記載する修飾クロルアミン−Ｔ法によりヨウ素化する。サンプ ル（５０μｍ培養土ｌ′１１）またはｒｈＴＮＦ標準に、１／９０００希釈度の ポリクローナルウサギ抗ｒｈＴＮＦ（マサチューセソッ州、ボストン、ノンザイ ム（Ｇｅｎｚｙａｅ、　Ｂｏｓｔｏｎ。

ＭＡ）および８０００ｃｐｍ”’Ｉ−ＴＮＦを最終容積４００μｌの緩衝液中に 添加し、４℃で一夜培養する。正常ウサギ血清およびヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｃａ ｌｂｉｏｃｈｅ■）を互いに抗ｒｈＴＮＦの最大沈殿に関して滴定する。適当な 希釈度の担体正常ウサギ血１　（１／２００）　、ヤギ抗ウサギＩｇＧ　（１／ ４）および２５単位ヘパリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を沈殿させ、試験管１本 当たりにこの複合体２ＯＯμｍを添加し、４℃で一夜培養する。試験管を３０分 間２０００Ｏｒｐｍで遠Ｉし・分離し、上清を注意深く吸引し、ペレットの放射 活性をベックマンガンマ５５００カウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｇａｍｍａ　５ ５００　ｃｏｕｎｔｅｒ）で測定する。対数一対数線型変換曲線を計算に用いる 。サンプル中のＴＮＦｆｉ度を１５７〜２０．０００１）ｇ／ｍ＋の範囲で直線 状であるｒｈＴＮＦ標準曲線から読み取る。

セクション■・ｒｈＴＮＦの放射性ヨウ素化ｒｈＴＮＦのヨウ素化は、フロリフ （Ｆｒｏｌｉｋ）ら、ジャーナル・オン・バイオロジール・ケミストリー（Ｊ、 　Ｒ４ｏｔ、　Ｃｈｅｌｌ、）　、２５９　：１０９９５−１１０００（１９８ ４）の修飾クロルアミン−Ｔ法を用いて行う。簡単には、５ｍｇのｒｈＴＮＦの ５ｍｌの２０ｍＭＴｒｉｓ　（ｐＨ７，５）中溶液を１５ｍ１の１５ＭＫＰＯ， および１０ｍ１の担体を含まない”’Ｉ　（１００ｍＣｉ／ｍｌ　；　ｒｃＮ） て希釈する。反２を開始するために、５ｍｌの１００ｍｇ／ｍｌ　（水性）クロ ルアミン−Ｔ溶液のアリコートを添加する。室温で２分後、さらに５ｍｌのアリ コートを添加し、１５分後、最後のクロルアミン−Ｔ５ｍｌを添加する。１分後 に連続して１０ｍ１の５ＱｍＭメタ亜硫酸水素ナトリウム、１００ｍ１の１２０ ｍＭヨウ化カリウムおよび２００ｍ１の１．２ｍｇ／ｍ＋尿素を添加することに より反応を停止する。内容物を混合し、反応混合物をあらかじめ充填したセファ デクスＧ−２５カラム（ＰＤ　１０　ファーマ／ア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）　） を通し、平衡化し、０２５％ゼラチンを含有するリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４ ）で溶出する。

ピークの放射活性を含有するフラクノチンをプールし、−２０℃で保存する。

１：３１比活性は８０〜１００ｍＣ１／ｍｇタンパク質である。ヨウ素化ＴＮＦ の生物学的活性をニール・エム・エル（Ｎｅａｌｅ、　Ｍ、　Ｌ、　）らのＬ９ ２９細胞傷害検定（ヨーロピアン・ジャーナル・オン・カンサ・アンド・クリニ カル・オンコロジー　（Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｃａｎ、　Ｃｌ１ｎ、　０ｎｃｏ１． ）　、２５　（１）　：　１３３−１３７　（１９８９）　）により測定し、未 標識化ＴＮＦの８０％であることが判明した。

Ｔ　Ｎ　Ｆのレベルを、ウィンストン（ｆｉｎｓｔｏｎ）ら、カーレント・プロ トコルズ・イノ１モレキユラー１バイオロジー（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃ ｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）１１２１頁、オースベル （＾ｕｓｕｂｅｌ　）ら、４ｇ集（１９８７）ノチン・ウィリー・ア〉ト・サノ ズ（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ）　、二ｓ−ヨーク、ＵＳＡ）に より記載されている塩基性サンドウィンチＥＬＩＳＡ検定法の変法を用いて測定 する。ＥＬＩＳＡは以下に記載するネズミモノクローナル抗ヒトＴＮＦ抗体を抗 体の捕捉抗体として、また以下に記載するポリクローナルウサギ抗ヒトＴＮＦを 第二抗体として用いる。検出のために、ペルオキシダーゼ複合ヤギ抗ウサギ抗体 （アメリカＯＭ国、インディアナ州、インディアナポリス、ベーリンカー・マン ハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　ＭａｎｎｈｃｉＩｌ、　Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌ ｉｓ、　Ｉｎｄｉａｎａ、　Ｕ　Ｓ　Ａ）　、　Ｃａｔａｌｏｇ　煤@６０５２ ２２）を添加し、その後ペルオキシダーゼの基質を添加する（１ｍｇ／ｍｌのオ ルトフエニレンノアミンおよび０．１％過酸化尿素）。サンプル中のＴＮＦレベ ルを、イー・コリ（アメリカ合衆国、ペンノルベニア州、キング・オン・ブルン 了　スミスクライン・ビーチャム・）７−マ／ユーテイカルズ（Ｓｍｉｔ）＋） ：ｌｉｎｅＢｅｅｃｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、　Ｋｉｎｇ　ｏ ｒ　Ｐｒｕｓｓｉａ、　Ｐ　Ａ、　Ｕ　Ｓ　Ａ　）から入手）中に産生された組 み換えヒトＴＮＦに関する標準曲線から計算する。

セクションＶ　抗ヒトＴＮＦ抗体の産生ヒトＴＮＦに対するモノクローナル抗体 を、出典明示により本明細書の一部とみなす、コーラ−およびミル／ケタイン（ Ｋｏｈｌｅｒ　ａｎｄ　Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ）　、ネイチャー（＼ａｔｕｒｅ） 、２５６　：　４９５　（１９７５）の変法を用い、組み換えヒトＴＮＦで免疫 化したＢ、ＡＬＢ／ｃマウスの牌臓から調製する。ポリクローナルウサキ抗ヒト Ｔ＼Ｆ抗体を、ニュージーランドフロウサギ（ＮＺＷ）を、完全フロインドアツ ユバント（アメリカ合衆国、イリノイ州、ディフコ（ＤＩＦＣＯ，Ｉ　Ｌ、　Ｕ Ｓ　Ａ）中で乳化した組み換えヒトＴＮＦで繰り返し免疫化することにより調製 する。

結実− ８−（４−アセトキ／−３−アセトキノメチル）−１−ブチルアミノ−１，３− ジ（ノクロプロピルメチル）　−７−ｐ−メトキシベンジルキサンチンはｉｎ　 ｖｉｔｒ。

ＴＮＦ産生産生アノレインステムいて約０．３０ＭＭのＩＣ５゜を示す。

１）−ｇａｌ−ｇ作マウスにおける内毒素／ヨノクこの方法は基本的に、ガラノ ス（Ｇａｌａｎｏｓ）ら、プロンーディングズ・オン・す／ヨナルアカデミー・ オン・サイエンンス・ニー・ニス・エイ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ’　１゜＾ｃａｄ 、ｓｃｉ、ＵｓＡ）、７６　：　５９３９　４３　（１９７９）に記載されたと おりに行う（この開示を出典明示により本明細書の一部とみなす）。

簡単には、Ｄ−ｇａ　ｌ　（Ｄ’（＋）ガラクトンダーゼ）は種々のマウスを内 毒素の致死効果に対して感作する。Ｄ−ｇａｌ（３００〜５００ｍｇ／ｋｇ）を 静脈内（ｉ、ｖ、）投与することによりマウスを０．１μｇの低用量のリボ多糖 類（ＬＰＳ）に対して感作する。簡単には、６〜１２週齢のチャールズ・リバー ・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　１．ａｂｏｒａｔｏｒｉｃｓ ）　（ストーン／リッジ（ＳｔｏｎｅＲｉｄｇｅ）　、　二、−ヨーク、ＵＳＡ ）から入手したオスＣ５７ＢＬ／６マウスに、０、２０−０．２５ｍ　ｌの発熱 物質不含の食塩水中、Ｄ　（＋）　−ｇａ　ｌ　（シグマ（Ｓｉｇｍａ）：　５ ００ｍｇ／ｋｇ）と混合した腸チフス菌（サルモネラ・チホサ（Ｓａｌｍｏｎｅ ｌｌａ　ｔｙｐｈｏｓａ）　、ディフコ・ラボラドリース（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂ ｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　。

デトロイト、ミシガン州、ＵＳＡ）からのＬＰＳ（０，１μｇ）を静脈内注射す る。

試験する化合物をＬＰＳ／Ｄ−ｇａｌの静脈内注射の前または後のいろいろな時 点て投与する。このモデルにおいては、対照動物は、２４〜４８時間で死亡した 場合もあったが、通常ＬＰＳ注射の５〜６時間後に死亡した。

ＴＮＦ活性の測定 ＴＮＦの血漿レベルをウィンストン（Ｗｉｎｓｔｏｎ）ら、カーレント・プロト コルズ・イ／・モレキュラー・バイオロジー、１１．２．１頁、オースベルら３ 編集（１９８７）ノチン・ウィリー・アンド・サンズ９ニューヨーク、ＵＳＡ） により記載された塩基性サンドウィンチＥＬｆ　ＳＡ法の変法を用いて測定する 。ＥＬＩＳＡはハムスターモノクローナル抗マウスＴＮＦ　（ンンザイム、ボス トン、ＭＡ。

ＵＳＡ）を捕捉抗体として用い、ポリクローナルウサギ抗ネズミＴＮＦ　（ジン ザイムホストノ、ＭＡ、ＵＳＡ）を検出抗体として用いる。マウスサンプル中の ＴＮＦレベルを、組み換え不ズミＴＮＦ　（ジンザイム、ボストン、ＭＡ、ＵＳ Ａ）に関する櫻準曲線から１−１７Ｅする。ＥＬＩＳＡにより測定したＴＮＦレ ベルはラフ（Ｒｕｆｆ）ら、ツヤ−ナル・オン・イムノロノー〇、　ｒｍｍｕｎ ｏｌ、）　１２５　：１６７１−１６７７　（１９８０））のＬ９２９バイオア ンセイにより検出したレベルと相関関係がありバイオアッセイにおける活性１単 位はＥＬＩＳＡにおけるＴＮＦの７０ピコグラム（ｐｇ）に相当する。ＥＬＩＳ Ａは２５ｐｇ／ｍｌまでのＴＮＦを検出する。

活性化合物は前記モデルにおいて正のｉｎ　ｖｉｖｏ応答を示し、例えば約２５ ０ｍｇ／ｋｇ（経口）の血清の還元に関するＥＤｓｏを示す。

国際調査報告　ｏｒｔｚｒ：ＱＱｔ／ｎ１ｎｌ＋１＋１ｒＴ／ｆ：Ｑ　Ｑ’ｌ／ ｎｌｆＮ４フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、 　ＭＲ，ＮＥ、　ＳＮ。

ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ。

ＣＨ，ＣＺ、　ＤＥ、　ＤＫ、　ＥＳ、　ＦＩ、　ＧＢ、　ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、 ＫＲ，ＫＺ、ＬＫ、ＬＵ、ＭＧ、ＭＮ、ＭＷ、　ＮＬ、　Ｎｏ、　ＮＺ、　ＰＬ 、　ＰＴ、　ＲＯ，ＲＵ、　ＳＤ。

ＳＥ、　ＳＫ、　ＵＡ、　ＵＳ

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々、独 立して式（ａ）：−（ＣＨ２）ｍ−Ａ（ａ） （式中、ｍは０または１、２または３の整数を表わし、Ａは置換または非置換環 状炭化水素基を意味する）； で示される基； Ｒ３は水素、置換もしくは非置換アルキル、またはアリール部分が置換されてい るかまたは置換されていないアラルキル基；およびＲ４は水素、アルキルまたは アルキルカルボニルを意味する］で示される化合物または適当ならばその医薬上 許容される塩。
2. ２．Ａがシクロプロピル基である請求項１記載の化合物。
3. ３．Ｒ３がアラルキル基である請求項１または請求項２記載の化合物。
4. ４．Ｒ３が置換または非置換ベンジル基である請求項１〜３のいずれか１つに記 載の化合物。
5. ５．Ｒ３が４−メトキシベンジル基である請求項１〜４のいずれか１つに記載の 化合物。
6. ６．Ｒ４が水素である請求項１〜５のいずれか１つに記載の化合物。
7. ７．Ｒ４がアルキルカルボニルである請求項１〜５のいずれか１つに記載の化合 物。
8. ８．本願明細書の実施例１から２８のいずれ１つより選択される請求項１に記載 の化合物。
9. ９．式（ＩＩ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）［式中、Ｒ１ｎは式（Ｉ）に関して 定義したＲ１またはＲ１に変換可能な基を表わし、Ｒ２ｎは式（Ｉ）に関して定 義したＲ２またはＲ２に変換可能な基を表わし、Ｒ３ｎは式（Ｉ）に関して定義 したＲ３またはＲ３に変換可能な基を意味する］で示される化合物を、式（ＩＩ Ｉ）： Ｌ１−（ＣＨ２）２ＣＨ（ＣＨＯＲ５）２（ＩＩＩ）［式中、Ｒ５はヒドロキシ 保護基を表わし、Ｌ１は脱離基を意味する］で示される化合物と反応させ、その 後、必要ならば１またはそれ以上の以下の任意の工程： （ｉ）保護基を除去する； （ｉｉ）基Ｒ１ｎをＲ１に、および／またはＲ２ｎをＲ２に、および／またはＲ ３ｎをＲ３に変換する； （ｉｉｉ）式（Ｉ）の化合物を別の式（Ｉ）の化合物に変換する；（ｉｖ）式（ Ｉ）の化合物をその医薬上許容される塩に変換するに付すことからなる式（Ｉ） の化合物の製法。
10. １０．Ｌ１が、ハロゲン原子、特にヨウ素原子である式（Ｉ）の化合物の製法。
11. １１．式（Ｉ）の化合物または適当ならばその医薬上許容される塩および／また はその医薬上許容される溶媒和物、および医薬上許容される担体からなる医薬組 成物。
12. １２．活性な治療物質として用いるための、式（Ｉ）の化合物または適当ならば その医薬上許容される塩および／またはその医薬上許容される溶媒和物。
13. １３．腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のｉｎ　ｖｉｖｏの産生の阻害剤として用いるた めの、式（Ｉ）の化合物または適当ならばその医薬上許容される塩および／また はその医薬上許容される溶媒和物。
14. １４．過度または未調整のＴＮＦ産生に伴う病気の治療および／または予防に用 いるための、式（Ｉ）の化合物または適当ならばその医薬上許容される塩および ／またはその医薬上許容される溶媒和物。
15. １５．治療が慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、変形性関節症、痛風性関節 炎および他の関節炎；敗血症、敗血性ショック、内毒素ショック、グラム陰性敗 血症、毒性ショック症候群、成人呼吸窮迫候群、脳性マラリア、慢性肺炎、珪肺 症、肺サルコイドーシス、骨再吸収疾患、再潅流傷害、移植片対宿主反応、同種 移植片拒絶反応、インフルエンザのような感染症による発熱および筋肉痛、感染 または悪性腫瘍に続発するカヘキシー、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に続 発するカへキシー、ＡＩＤＳ、ＡＲＣ（ＡＩＤＳ関連症候群）、ケロイド形成、 瘢痕組織形成、クローン病、潰瘍性大腸炎、または熱病の治療および／または予 防である請求項１４に記載の使用。
16. １６．治療が、感染の結果としてＴＮＦを産生するウイルス感染症、または本発 明の化合物により直接または間接的に複製が減少するような阻害に対して感受性 のウイルス感染症の治療または予防であって、ウイルスが、例えばＨＩＶ−１、 ＨＩＶ−２およびＨＩＶ−３、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、インフルエン ザ、アデノウイルスおよび限定されるものではないが、帯状ヘルプスおよび単純 ヘルペスのようなヘルペス群のウイルスを包含する請求項１４記載の使用。