JPH08512048A - 例えばｎ−（３−オキシヘキサノイル）ホモセリンラクトンのような免疫抑制剤及び抗アレルギー性化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 薬剤として用いるための式（１）： ［式中、ｎは２又は３であり；ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり；ＸはＯ、Ｓ又はＮＨであり；Ｒは置換されることができる、（Ｃ₁−Ｃ₁₈）アルキル又はアシルである］で示される化合物。

Description

【発明の詳細な説明】 例えばＮ−（３−オキシヘキサノイル）ホモセリンラクトンのような 免疫抑制剤及び抗アレルギー性化合物 本発明は薬剤として用いるための化合物と、これらの化合物を含む薬剤組成物 とに関する。 吸入されたタンパク質（アレルゲン／抗原）に対する免疫系の反応がアレルギ ー性鼻炎（例えば、花粉症）及び喘息の臨床発現の基礎となる。免疫学における 研究は、少なくとも２種類のＩｇＥ抗体（これらはそれらのＦｃ部分によってヒ ト白血球、すなわち血液好塩基球及び組織マスト細胞の表面上の受容体に自然に 結合する）の架橋が一連の生化学的及び薬理学的事象(event)を推進して、臨床 アレルギーの発現を生じることを確認している。アレルゲンによる、又は抗Ｉｇ Ｅ抗体を用いて模倣された表面結合ＩｇＥの架橋は、好塩基球及びマスト細胞の 顆粒内に貯蔵される又は顆粒内で合成される強力な炎症仲介体の放出を生じる。 放出される主要な炎症誘導物質はヒスタミンであるが、２０種を越える他の分子 がこれらの細胞の表面上のＩｇＥの架橋に関連した陽性シグナルに従って定義さ れている。これらの作用剤(agent)の放出の全てが平滑筋、脈管構造の劇的な変 化及び、他の炎症細胞（例えば、好酸球、好中球）を誘引する他の走化性因子の 放出を生じる。これはこれらの化合物の主要な相乗作用と、炎症反応の増強とを 招来し、炎症反応の増強は、次には、稀な状況での生命を脅かす全身化アレルギ ー反応までの、例えば、呼吸困難、イッチング、粘液分泌過多等の臨床アレルギ ーとして発現する。 マスト細胞及び好塩基球からの仲介体の放出を阻止する及び／又は標的組織に 対する仲介体の効果のブロック又は改善によって下流事象(downstream event)を 治療することを試みて、多くの作用剤が治療的に用いられている。一般的に用い られる治療剤は下記主要グループに分類される： （１）抗ヒスタミン剤：これらはヒスタミン（すなわち、アレルギー反応の主 要な仲介体）の放出をブロック及び排除するように意図される。 （２）β１、β２アゴニスト、例えばエピネフリン、サルブタモール。これら は脈管構造と平滑筋に対する下流効果を間接的に抑制するように意図される。 （３）クロモグリケート：これはマスト細胞／好塩基球の脱顆粒反応の予防(p rimary prevention)に有用である。この予防は絶えず考慮しなければならない； これはＩｇＥの架橋を防止しないが、その後の事象を多少妨害する。 （４）テオフィリンと、他のホスホジエステラーゼ阻害剤は、特に環状ヌクレ オチドに関連した、下流の生化学事象に再び影響を与える。 （５）ステロイド−これらはアレルギー反応に対して、複数の活性部位を有す る。これらは局部的及び／又は全身的に投与される。 これらの治療のいずれも理想的ではなく、各々は例えば副作用及び突破(breakth rough)のような問題を種々な程度に有する。それ故、アレルギー反応の治療に予 防的に及び／又は治療的に寄与する新規な作用剤が絶えず求められている。 免疫抑制剤化合物は免疫反応系の抑制を誘導する。免疫抑制剤活性を示すこと が知られている化合物には、真菌代謝産物シクロスポリンＡと、ＦＫ５０６なる 名称のマクロライド系抗生物質（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ ｔｓｕｋａｂａｅｎ ｓｉｓ からの代謝産物）がある。これらの作用剤の両方ともが移植及び幾つかの 疾患の治療において免疫系の抑制に臨床的に及び実験的に用いられている。 免疫仲介拒絶プロセスは臓器移植における移植失敗の主要な原因である。免疫 抑制（Ｔ細胞増殖に対する）とその後の臓器移植及び患者生存との劇的な改良が シクロスポリンＡを用いて得られている。ＦＫ５０６によっても有望な結果が得 られている。 自己免疫疾患は、“自己”対“非自己”のホスト識別力が衰え、個体の免疫系 （後天的成分と先天的成分との両方）が自己組織を攻撃する障害である。これら の疾患は非常に一般的な存在(entity)（例えば、慢性関節リウマチ、甲状腺自己 免疫疾患及び１型真性糖尿病）からあまり一般的でない存在（例えば、多発性硬 化症）まで及び稀な障害（例えば、重症筋無力症）までの範囲である。基礎バイ オメディカルサイエンス、特に免疫学における進歩は、大抵の自己免疫疾患の誘 導及び持続の原因となる主要な基礎病変がＴリンパ球の自己反応性増殖に在るこ とを実証している。シクロスポリンＡとＦＫ５０６の両方が自己免疫疾患の治療 に臨床的に用いられて、有望な結果を得ている。 免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン）がＴ細胞癌の治療において腫瘍細胞(p lastic cell)増殖を抑制することも実証されている。 現在入手可能な免疫抑制剤は狭い治療指数（すなわち、毒性対臨床利益）とい う欠点を有する。これらの化合物は腎毒性、神経毒性及び恐らく糖尿病誘発性で あることが知られており、このことは上記分野におけるそれらの使用を制限して いる。これらの化合物の投与、これらの化合物の生体適合性及び臨床的と実験室 内との両方におけるそれらのレベルの監視に関しても問題が存在する。 我々は今回、免疫抑制活性を示し、ヒスタミンの放出を抑制する化合物の種類 を発見した。これらの化合物と、それらの製造方法はＷＯ−Ａ−９２／１８６１ ４に開示される。しかし、この資料は、これらの化合物がオートインデューサー (autoinducer)として及び、微生物における遺伝子発現を抑制するための作用剤 として作用することのみを開示し、これらが薬理学的活性を有することを示唆し ていない。この系列の化合物はＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ ｙ ，１７５巻，１２号，１９９３年６月，３８５６〜３８６２頁にも挙げられて いるが、この場合にも、これらが微生物の外部で効果を有することを開示してい ない。Ｇ．Ｐａｐａｃｃｉｏ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃ ｔ． ，１３巻，１号，１９９１，９５〜１０２頁は化学的に誘導される糖尿病に 対する保護を高めようと試みて、スーパーオキシドジスムターゼのエンハンサー としてのＮ−アセチルホモシステインチオラクトンの使用を開示する。 ＩｇＥ分子を改質するためのＮ−アセチルホモシステインチオラクトンの使用 は、Ｊ．Ｌｊａｌｊｅｖｉｃ等によってＯｄ．Ｍｅｄ．Ｎａｕｋａ，２４巻，１ ９７１，１３７〜１４３頁と、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，７８巻 ，７号，１９７３年２月，要約Ｎｏ．４１２１３ａとに開示されている。しかし 、この論文には、免疫抑制又はヒスタミン放出の抑制は開示されていない。 本発明は、第１実施態様では、薬剤として用いるための 式１： ［式中、ｎは２又は３であり；ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり；ＸはＯ、Ｓ又はＮＨ であり；Ｒは置換されていてもよい、（Ｃ₁−Ｃ₁₈）アルキル又はアシルである ］ で示される化合物を提供する。ｎが２であり、ＸがＯであり、ＹがＳである場合 には、Ｒはアセチルでないことが好ましい。 好ましくは、ＹはＯ又はＮＨ（より好ましくはＯ）であり、ＸはＯであり、ｎ は２であり、Ｒはアシルである。Ｒが好ましくはβ−位置にケト基又はヒドロキ シ基を有することも好ましい。これらの化合物はラセミ混合物、光学活性異性体 又はそれらの混合物の形態であることができる。先行技術の化合物に比べてこれ らの化合物が比較的小さいサイズであることは、これらが毒性の可能性のある代 謝産物を殆ど生じないと思われることを意味すると理解される。 本発明は、例えば喘息若しくは花粉症のようなアレルギー疾患、及び／又は自 己免疫疾患の治療用薬剤の製造への式１化合物の使用をも提供する。式１化合物 を患者に投与することを含むアレルギー疾患及び／又は自己免疫疾患の治療方法 も、本発明によって提供される。 他の実施態様では、本発明は式１化合物と、薬剤学的に受容される希釈剤又は キャリヤーとを含む薬剤組成物を提供する。適当な希釈剤又はキャリヤーは組成 物の投与方法に依存するが、当業者によって容易に決定されると考えられる。 式１化合物は、膜結合ＩｇＥ分子の架橋後のヒトマスト細胞及び／又は好塩基 球からのヒスタミン放出を有意に抑制する。ヒスタミン抑制活性に関して、Ｒが Ｃ₁−Ｃ₁₂基であることが好ましい。窒素原子に結合した環炭素原子においてＬ −及びＤ−立体化学の両方を有する化合物がヒスタミン放出の抑制剤として活性 であることが判明しており、Ｎ−（３−オキソヘキサノイル）ホモセリンラクト ンのＬ−異性体とＤ−異性体の両方が有効であることが判明している。この活性 の結果として、これらの化合物は例えばヒト臨床アレルギーのような障害の治療 に有用であると期待される。この非常に一般的な障害を治療するための新規な種 類の化合物の利益は明らかである。 本発明の化合物は、ヒトリンパ球反応性（特にＴ細胞増殖性反応）の顕著な抑 制を惹起することも判明しており、ヒト免疫反応系の調節(control)、特にその 抑制が重要である用途において免疫抑制剤として使用可能である。これらの化合 物は、免疫抑制活性に関しては、Ｃ₇−Ｃ₁₈基としてのＲを含み、窒素原子に結 合した環炭素原子においてＬ−立体化学を有する異性体が特に好ましい。したが って、既存の免疫抑制剤と同様に、本発明の化合物及び組成物は、例えば移植片 拒絶の防止及び自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症又は慢性関節リウマチ）の 治療に、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏに使用可能である。これらはまた 、ＡＩＤＳの治療においてＴ細胞活性化の抑制剤(controller)としても使用可能 である。 Ｔ細胞機能の抑制におけるそれらの活性の結果として、本発明の化合物及び組 成物が腫瘍性Ｔリンパ球の増殖に関連した癌の治療において治療的に重要である ことが考えられる。この種の癌の例には、成人及び小児における急性リンパ芽球 性白血病、非Ｈｏｄｇｋｉｎｓリンパ腫、慢性リンパ球白血病並びに、例えばＨ ａｉｒｙ細胞白血病及びＨＴＬＶＩ関連Ｔ細胞白血病／リンパ腫のような、稀な 疾患がある。 既存の免疫抑制剤に優越するこれらの化合物の他の利益は、それらの構造及び 低分子量に起因すると考えることができ、極性溶媒への大きい溶解度(indreased solubility)、容易な投与形式、あまり厳しくない監視及び有意に改良された薬 物動態を含む。実施例 ［Ｎ−（３−オキソヘキサノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン］とその類似体の 合成 １．Ｎ−（３−オキソヘキサノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトンの合成 一般的方法 水（２ｍｌ）中のホモセリンラクトン塩酸塩（ラセミ混合物のＬ−異性体又は Ｄ−異性体）（１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にトリエチルアミン（１ｍｍｏｌ）を加 えた後に、３−オキソアルカン酸のエチレングリコールケタール（１ｍｍｏｌ） と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１ ｍｍｏｌ）とを加えた。混合物を２０時間撹拌し、次に約３５℃において乾燥す るまで回転蒸発させた。淡橙色残渣を熱酢酸エチル（５ｘ５ｍｌ）によって抽出 し、抽出物をプールし、水（１ｘ３ｍｌ）、５％炭酸水素ナトリウム溶液（１ｘ ３ｍｌ）、１Ｍ硫酸水素カリウム溶液（１ｘ３ｍｌ）、最後にブライン（１ｘ５ ｍｌ）によって連続的に洗浄した。乾燥（ＭｇＳＯ₄）と溶媒の真空蒸発とによ って、３−オキソアルカノイル化ホモセリンラクトンのエチレングリコールケタ ール（４０〜５０％）を得た。 ジクロロメタン（１５ｍｌ）中のアルカノイル化ラクトン（０．５ｍｍｏｌ） の氷冷溶液に過塩素酸（６０％，０．２５ｍｌ）を加えた。混合物を０℃におい て０．５時間撹拌し、次に室温において１．５時間撹拌した。溶媒を真空除去し 、残渣を酢酸エチル（２０ｍｌ）中に再溶解した。溶液を冷水（２ｘ５ｍｌ）と ブライン（１ｘ５ｍｌ）によって洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、回転蒸発さ せて、所望のＮ−（３−オキソアルカノイル）ホモセリンラクトン（５５〜６０ ％）を得た。 ２．Ｎ−アシル化ホモセリンラクトンの合成 一般的方法 水（２ｍｌ）中のホモセリンラクトン塩酸塩（ラセミ混合物のＬ−異性体又は Ｄ−異性体）（１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にトリエチルアミン（１ｍｍｏｌ）を加 えた後に、酸無水物（３ｍｍｏｌ）又は酸（１．５ｍｍｏｌ）及び１−エチル− ３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１．５ｍｍｏｌ） を添加した。混合物を室温において一晩撹拌し、乾燥するまで真空蒸発させた。 残渣を水（５ｍｌ）と酢酸エチル（２０ｍｌ）とに分配し、有機層を５％ＮａＨ ＣＯ₃溶液（２ｘ５ｍｌ）と、１Ｍ ＫＨＳＯ₄溶液（１ｘ５ｍｌ）及びブライン （１ｘ５ｍｌ）によって連続的に洗浄した。乾燥（ＭｇＳＯ₄）と溶媒の除去と によって、標題のアシル化ラクトン（２０〜６０％）を得た。 ３．Ｎ−（３−ヒドロキシアルカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトンの合成 一般的方法 Ｎ−（３−オキソアルカノイル）−Ｌ−ラクトン（０．２ｍｍｏｌ）をメタノ ール（５ｍｌ）中に溶解し、この溶液を２Ｍ ＨＣｌ−メタノールによって酸性 （ｐＨ３〜４）にした。ナトリウムシアノボロヒドリド（０．５ｍｍｏｌ）を撹 拌しながら１ロットで加え、２Ｍ ＨＣｌ−メタノールを時々加えて、反応混合 物をｐＨ３〜４に維持した。２時間後に、溶媒を真空除去し、残渣の酢酸エチル 抽出物（３ｘ５ｍｌ）を一緒にし、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、蒸発させて、標題 のヒドロキシ誘導体を得た。生成物をＣＨＣｌ₃−ＭｅＯＨ（９：１）中のシリ カプレート上での分取薄層クロマトグラフィーによって精製し、ＨＰＬＣによっ て再精製した。後者を再溶解して、ジアステレオ異性体を分離した。 これらの方法によって製造した化合物は９０％を越える純度であり、これを１ ｘ２５ｃｍ Ｓ５０ＤＳ２セミプレプ(semi-prep)カラムを用いる逆相ＨＰＬＣ によってさらに精製して、１５〜２０％ＭｅＯＨ−Ｈ₂Ｏ混合物によってイソク ラチカルに(isocratically)に溶離し、２１０ｎｍにおいて監視した。精製物を 凍結乾燥させ、０℃未満に貯蔵した。実施例１ ヒスタミン放出の抑制 式１化合物による、ヒスタミン放出の抑制の研究にＮ−（３−オキソヘキサノ イル）ホモセリンラクトン（ＯＨＨＬ）のＤ−異性体とＬ−異性体を用いた。Ｏ ＨＨＬは下記構造式を有する： ヒスタミン放出を定量するために、下記を用いた： Ｐｈａｒｍａｃｉａ（商標）メチルヒスタミンラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ） コード Ｎｏ．１０−９１３８−０１ Ｐｈａｒｍａｃｉａ（商標）標準ヒスタミン(Histamine Standard) コード Ｎｏ．１０−９２０６−０１分析原理 抗ＩｇＥは好塩基球表面上の受容体結合ＩｇＥを架橋させる。ヒスタミンが血 漿(plasma)中に放出される。血漿中に含まれるヒスタミンは一定量の¹²⁵Ｉ標識 ヒスタミン−アルブミン複合体（ＣＳＡ）と、モノクローナル抗ヒスタミン抗体 に関して競合する。第２抗体と免疫吸着剤との添加によって、抗体結合物質を分 離し、これらを遠心分離させ、非結合物質をデカントした。 化合物（Ｄ−異性体及びＬ−異性体）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中 に最初に溶解し、次に、Ｐｉｐｅｓ−Ｃａバッファー中で希釈した。Ｐｉｐｅｓ−ＣａバッファーｐＨ７．４ Ｐｉｐｅｓ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ’− ビス（２−エタンスルホン酸）） ３．０２ｇ／リットル 酢酸エチル三水和物 １９．０５ｇ／リットル 酢酸カリウム ０．４９ｇ／リットル ヒト血清アルブミン ０．３０ｇ／リットル グルコース １．００ｇ／リットル 塩化カルシウム二水和物 ０．１５ｇ／リットル １Ｍ ＴｒｉｓバッファーによってｐＨ７．４に緩衝化する。 テオフィリンをＰｉｐｅｓ−Ｃａバッファー中で直接再構成した。抗−ＩｇＥ 製剤はＥＩであり、これはＰｉｐｅｓ−Ｃａバッファー中で希釈した、マウスモ ノクローナル抗ヒトＩｇＥである。ＥＩはこの分析に１ｍｇ／ｍｌストック溶液 の１：４００００の標準濃度で用いる。血液はアトピーの雄個体によって供給し た。 凝固防止剤としてヘパリンを用いて、全血を静脈穿刺によって回収し、同日に 回収した新鮮な血液を各実験に用いた。全血２００μｌをＤＭＳＯ／Ｐｉｐｅｓ −Ｃａバッファー中の化合物１９０μｌと共に、１０分間毎に穏やかに撹拌しな がら、３７℃において３０分間インキュベートし、次に抗ＩｇＥ １０μｌを加 え、得られた分析混合物を、１０分間毎に穏やかに撹拌しながら、３７℃におい てさらに６０分間インキュベートした。 試験管を氷冷水浴に入れることによって（最大１０分間）、分析を停止させ、 サンプルを４℃で１０分間、７００ｇにおいて遠心分離した。上清２００μｌを ヒスタミン分析のために抽出し、次に¹²⁵Ｉ−ヒスタミンＣＳＡ ２００μｌと 抗ヒスタミン抗体２００μｌとを全ての試験管に加える。 標準ヒスタミンを希釈することによって、ヒスタミンの標準曲線を得る。標準 ヒスタミン試験管を分析試験管と正確に同じ方法で処理する、すなわち、標準ヒ スタミン試験管に¹²⁵Ｉ−ヒスタミンと抗ヒスタミン抗体とを同様に加える。 これらの成分を４℃において１６時間インキュベートし、その後に、デカント (decanting)懸濁液（Ｐｈａｒｍａｃｉａ（商標）キットとして供給）２ｍｌを 各試験管に加え、混合物を室温において３０分間インキュベートし、室温で１５ ００ｇにおいて１０分間遠心分離する。上清をデカントし、試験管を¹²⁵Ｉ検出 機能(facility)を有するガンマカウンターで計測した。全てのガンマカウンター 結果を希釈剤（すなわち、ヒスタミンを含まず）カウントに関する平均カウント の％として表現する［％結合活性］。 カウントを％結合活性として表現したならば、これが表すヒスタミン濃度を標 準曲線から知ることによって、カウントから量を測定することができる(quantif ied)。 結果を次に自然放出（バックグラウンド）に関して修正し、全放出の％として 表現する。 ３回の凍結−解凍サイクルによって又はプローブを用いる超音波処理（超音波 浴ではなく）によって、全ヒスタミン放出を達成する。全血２００μｌを水８０ ０μｌと混合して、ヒスタミン値が標準曲線範囲に確実に入るようにする（結果 を算出する場合に、“合計値(Totals)”を２．５倍することによってこれを修正 する）。 自然−バックグラウンドヒスタミン放出レベル：全血をＰｉｐｅｓ−Ｃａと共 に分析期間（この場合には、９０分間）３７℃においてインキュベートすること によって生じる。 最初に、ＯＨＨＬの２異性体（Ｄ−異性体とＬ−異性体）を３種類の用量で試 験した。ヒスタミン放出分析に用いる最終濃度は、全血中で測定して、２４１μ ｇ／ｍｌ、２４μｇ／ｍｌ、２．４μｇ／ｍｌであった。実験に用いたＤＭＳＯ の最終濃度は２％であり、これを対照とした(controled for)。 ２．０％、１．０％及び０．１％のＤＭＳＯ対照が有意なヒスタミン放出を生 じないことが判明した。 分析において異性体自体を抗−ＩｇＥの存在なしに試験し、化合物のみでは有 意なヒスタミン放出を生じないことが判明した。 ヒスタミン放出を誘導するためにこの分析に用いる抗−ＩｇＥは、ＩｇＥのＣ ε₄ドメインに位置する領域に対してエピトープ特異性を有するネズミ(murine) モノクローナル抗−ＩｇＥであった。 Ｄ−異性体とＬ−異性体の両方は抗−ＩｇＥ誘導ヒスタミン放出を示した。抗 −ＩｇＥ放出の４３．５％抑制はＤ−異性体に関して、分析に２４１μｇ／ｍｌ で用いた場合に観察され、抗−ＩｇＥ放出の５５．３％抑制はＬ−異性体に関し て、同じ濃度で用いた場合に達成された。試験した続きの濃度は抗−ＩｇＥ誘導 ヒスタミン放出の抑制を生じないことが判明したので、この抗−ＩｇＥ誘導ヒス タミン放出抑制が試験した濃度の範囲にわたって用量依存性であるとは認められ なかった。 用量依存性を確認するために、種々な濃度範囲を用いて、実験を繰り返した。 試験した濃度は２４１μｇ／ｍｌ、４８μｇ／ｍｌ、２４μｇ／ｍｌであった。 ２異性体は両方とも抗−ＩｇＥ誘導ヒスタミン放出を用量依存的に調節すること が判明した。Ｌ−異性体は２４１μｇ／ｍｌの濃度で用いた場合に抗−ＩｇＥ誘 導ヒスタミン放出を６２．５％抑制した。Ｄ−異性体は２４１μｇ／ｍｌの最終 濃度で用いた場合に抗−ＩｇＥ誘導ヒスタミン放出を４５．９％抑制した。抗− ＩｇＥ誘導ヒスタミン放出の抑制は４８μｇ／ｍｌの濃度では観察されたが、２ ４μｇ／ｍｌの濃度では観察されず、反応が顕著に用量依存性であることを実証 した。 テオフィリン（非選択性ホスホジエステラーゼ抑制剤）をヒスタミン放出の標 準抑制剤として２種類の濃度（１０^-3Ｍと１０^-7Ｍ）で分析に用いた。これを分 析を通して用いた同じ濃度の抗−ＩｇＥと組合せて分析した。試験した２種類の 濃度のテオフィリンによって抗−ＩｇＥ誘導ヒスタミン放出の用量依存性抑制が 観察された。テオフィリンの最高濃度（１０^-3Ｍ）では、抗−ＩｇＥ誘導ヒスタ ミン放出の６７．１％抑制が観察された。 抗−ＩｇＥ誘導ヒスタミン放出の再現可能な抑制がＤ−異性体とＬ−異性体の 両方によって達成された。実施例２ 免疫抑制 免疫抑制効果の分析に用いた方法と物質は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏ ｌｏｇｙ−Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｈ．Ｍ．Ｃｈａｐｅｌ とＨ．Ｃ．Ｇｏｏｉ編集，ＩＲＬ−オックスフォード大学出版局，１９９０年発 行），Ｈ．ＣｈａｐｅｌとＨ．Ｆ．Ｓｅｗｅｌｌ，「Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍ ｕｎｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：ｃｅｌｌ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｓｐｅｃｉ ａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ」，第２章；及び「ヒトリンパ球活 性化抗原発現及び幼若化に対するｆｋ５０６と低濃度シクロスポリンの影響：血 球測定分析」，Ｓｃａｎ．Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３１，２９７（Ｊ Ｗｏｏ ，Ｈ Ｆ ＳｅｗｅｌｌとＡ Ｗ Ｔｈｏｍｓｏｎ（１９９０））に開示された方法 に基づく。 精製したＮ−（３−オキソデカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトンをＤＭＳＯ 中に溶解し、ｐＨ６の水性バッファーによって希釈した。 健康なドナーから採取した静脈血から標準フィコールハイパーク(ficoll hypa que)方法を用いて、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を調製した。 （ａ）コンカナバリンＡリンパ球形質転換分析 コンカナバリンＡを２．５μｇ／ｍｌの最終濃度で用いた。 ＲＰＭＩ（Ｒｏｃｈｅ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ） 中の５ｘ１０⁵ｍｌのＰＢＭＣ＋１０％ＡＢ血清をコンカナバリンＡと共にイン キュベートした。Ｎ−（３−オキソデカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトンを添 加せずと、０．５、５及び２５μｇ／ｍｌの最終濃度で添加した場合の培養を確 立した。対照として相当量のＤＭＳＯのみによっても培養を確立した。 細胞を空気中５％二酸化炭素の混合物によって３７℃において７２時間培養し た。 ［³Ｈ］チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ）２０μｌ（０．２μＣｉ）を添加し、 ２０時間インキュベートして、細胞の標識と回収とを実施した。細胞をガラス繊 維ディスク上に回収し、液体シンチレーションカウンターを用いてチミジン摂取 量を測定した。 平均カウント／分（ｃｐｍ）を測定した。 結果は表１に示す。 結果は、１％ＤＭＳＯ中の５μｇ／ｍｌにおいて化合物が免疫抑制を示すこと を実証する。５％濃度では、ＤＭＳＯはリンパ球のコンカナバリンＡ刺激を明確 にブロックする、そのため、２５μｇ／ｍｌの濃度における化合物の結果は解釈 できない。 式１の化合物の種類の幾つかのメンバー（Ｄ−異性体とＬ−異性体の療法）が 微生物における遺伝子発現を抑制するとＷＯ−Ａ−９２／１８６１４に示されて いる。この事実を考慮すると、我々が得た結果から、これらの化合物もヒスタミ ン放出抑制及び／又は免疫抑制活性を示すと推論することは妥当である。ＷＯ− Ａ−９２／１８６１４に遺伝子発現を抑制し、それ故、ヒスタミン放出抑制剤及 び／又は免疫抑制剤として作用すると考えられると開示された化合物には下記化 合物がある：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/38 ＡＣＤ 9454−4Ｃ Ａ６１Ｋ 31/38 ＡＣＤ ＡＤＹ ＡＤＹ 31/445 ＡＦＦ 9454−4Ｃ 31/445 ＡＦＦ Ｃ０７Ｄ 211/56 9284−4Ｃ Ｃ０７Ｄ 211/56 333/32 9455−4Ｃ 333/32 // Ｃ０７Ｍ 7:00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，Ｆ Ｉ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 セウェル，ハーバート・フィッツジェラル ド イギリス国レスター エルイー４ ７エス ジー，オークランド・アベニュー 75 (72)発明者 スチュアート，ゴードン・シドニー・アン ダーソン・バーニー イギリス国レスター エルイー11 ０キュ ーエル，ラックバーロー，ジェームズ・ア ベニュー 14 (72)発明者 ウィリアムズ，ポール イギリス国ノティンガム エヌジー16 １ キューディー，ナットホール，ガンナーズ ベリ・ウェイ 67

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．薬剤として用いるための 式１： ［式中、ｎは２又は３であり；ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり；ＸはＯ、Ｓ又はＮＨ であり；Ｒは置換されていてもよい、（Ｃ₁−Ｃ₁₈）アルキル又はアシルである ］ で示される化合物。 ２．ＹがＯであり、ＸがＯであり、ｎが２であり、そしてＲがアシルである 請求項１記載の化合物。 ３．Ｒがケト基又はヒドロキシ基を有する請求項１又は２に記載の化合物。 ４．Ｒがβ−位置にケト基を有する請求項３記載の化合物。 ５．窒素原子に結合した環炭素原子においてＬ立体化学を有する請求項１〜 ４のいずれかに記載の化合物。 ６．Ｒが（Ｃ₁−Ｃ₁₂）基である請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。 ７．Ｎ−（３−オキソヘキサノイル）ホモセリンラクトンである請求項１〜 ５のいずれかに記載の化合物。 ８．マスト細胞及び／又は好塩基球からのヒスタミン放出の抑制剤として用 いるための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。 ９．アレルギー性疾患の治療に用いるための請求項８記載の化合物。 １０．喘息又は花粉症の治療に用いるための請求項９記載の化合物。 １１．免疫抑制剤として用いるための請求項１〜５のいずれかに記載の化合 物。 １２．Ｒが（Ｃ₇−Ｃ₁₈）基である請求項１１記載の化合物。 １３．Ｔ細胞機能の免疫抑制剤として用いるための請求項１１又は１２に記 載の化合物。 １４．移植片拒絶の防止に用いるための請求項１１〜１３のいずれかに記載 の化合物。 １５．自己免疫疾患の治療に用いるための請求項１１〜１４のいずれかに記 載の化合物。 １６．ＡＩＤＳ治療において免疫活性化の抑制剤として用いるための請求項 １５記載の化合物。 １７．疾患が多発性硬化症又は慢性関節リウマチである請求項１５記載の化 合物。 １８．請求項１から５で定義した式１化合物と、薬剤学的に受容される希釈 剤又はキャリヤーとを含む薬剤組成物。