JPH04230700A - 抗ヒトリンパ球抗体の製造方法 - Google Patents
抗ヒトリンパ球抗体の製造方法Info
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、夾雑物の混入の可能性
のある血漿蛋白質成分含有水溶液から実質的に夾雑物を
含まない血漿蛋白質成分を製造する方法に関する。
のある血漿蛋白質成分含有水溶液から実質的に夾雑物を
含まない血漿蛋白質成分を製造する方法に関する。
【0002】
【従来技術・発明が解決しようとする課題】血液は有形
成分(血球)と液体成分(血漿)から成り、血漿の中に
主として存在する蛋白質成分を血漿蛋白質といい、10
0種類以上の蛋白質が含まれている。
成分(血球)と液体成分(血漿)から成り、血漿の中に
主として存在する蛋白質成分を血漿蛋白質といい、10
0種類以上の蛋白質が含まれている。
【0003】正常人では、各々の血漿蛋白質は一定の濃
度範囲内(正常値)にあり、ホスオスタシスを保ってい
る。このバランスが崩れ、血漿蛋白質量が正常域をはず
れることは、なんらかの病態を反映していることになる
。従って、これを詳細に検査することは、非常に多くの
病態の理解に役立つ。また、遺伝的理由等で血漿蛋白質
成分が欠損している疾患があり、治療には健康者の血漿
から、重要な生物学的活性をもった蛋白質成分を精製ま
たは凝縮した製剤(血漿分画製剤)を補充する方法がと
られている。例えば、アルブミン製剤、γ−グロブリン
製剤、特異免疫グロブリン製剤、各種の血液凝固因子濃
縮液等が用いられている。
度範囲内(正常値)にあり、ホスオスタシスを保ってい
る。このバランスが崩れ、血漿蛋白質量が正常域をはず
れることは、なんらかの病態を反映していることになる
。従って、これを詳細に検査することは、非常に多くの
病態の理解に役立つ。また、遺伝的理由等で血漿蛋白質
成分が欠損している疾患があり、治療には健康者の血漿
から、重要な生物学的活性をもった蛋白質成分を精製ま
たは凝縮した製剤(血漿分画製剤)を補充する方法がと
られている。例えば、アルブミン製剤、γ−グロブリン
製剤、特異免疫グロブリン製剤、各種の血液凝固因子濃
縮液等が用いられている。
【0004】しかし、血漿蛋白質成分には夾雑物(血液
型抗体、ヘモアグルチニン、抗ヒト蛋白抗体、抗ヒト血
清抗体、抗ヒト腎糸球体基底膜抗体等)が混入するので
、かかる製剤を多量に投与した場合には、様々な副作用
を招来することになる。例えば、赤血球と投与された血
液型抗体とが抗原抗体反応を起こし、赤血球を減少させ
る等の問題がある。
型抗体、ヘモアグルチニン、抗ヒト蛋白抗体、抗ヒト血
清抗体、抗ヒト腎糸球体基底膜抗体等)が混入するので
、かかる製剤を多量に投与した場合には、様々な副作用
を招来することになる。例えば、赤血球と投与された血
液型抗体とが抗原抗体反応を起こし、赤血球を減少させ
る等の問題がある。
【0005】ところで、血漿蛋白質成分を従来の赤血球
で処理する方法、アルコール分画法、硫安分画法、イオ
ン交換処理法、ポリエチレングリコール分画法またはこ
れらの組合せから成る方法等で製造しても、血漿蛋白質
成分から夾雑物(例えば、血液型抗体、ヘモアグルチニ
ン、抗ヒト蛋白抗体、抗ヒト血清抗体、抗ヒト腎糸球体
基底膜抗体等)を十分に除去することができず、従って
、かかる蛋白質成分を含有する血漿分画製剤にも、ショ
ック症状(呼吸困難、血圧降下等)、過敏症(発熱、蕁
麻疹、発疹、そう痒感等)、血液障害(血小板減少、白
血球減少、血栓等)、血栓性静脈炎、消化器出血等の副
作用の問題があった。
で処理する方法、アルコール分画法、硫安分画法、イオ
ン交換処理法、ポリエチレングリコール分画法またはこ
れらの組合せから成る方法等で製造しても、血漿蛋白質
成分から夾雑物(例えば、血液型抗体、ヘモアグルチニ
ン、抗ヒト蛋白抗体、抗ヒト血清抗体、抗ヒト腎糸球体
基底膜抗体等)を十分に除去することができず、従って
、かかる蛋白質成分を含有する血漿分画製剤にも、ショ
ック症状(呼吸困難、血圧降下等)、過敏症(発熱、蕁
麻疹、発疹、そう痒感等)、血液障害(血小板減少、白
血球減少、血栓等)、血栓性静脈炎、消化器出血等の副
作用の問題があった。
【0006】従って、上述の如き夾雑物を実質的に含ま
ない血漿蛋白質成分の製造方法が待望されているのが実
情である。
ない血漿蛋白質成分の製造方法が待望されているのが実
情である。
【0007】本発明の目的は、上述の如き夾雑物を実質
的に含まない血漿蛋白質成分の製造方法を提供すること
である。
的に含まない血漿蛋白質成分の製造方法を提供すること
である。
【0008】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、血漿蛋白質成分含
有水溶液を固定赤血球で処理することにより夾雑物を実
質的に含まない血漿蛋白質成分を製造できることを見出
して本発明を完成した。
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、血漿蛋白質成分含
有水溶液を固定赤血球で処理することにより夾雑物を実
質的に含まない血漿蛋白質成分を製造できることを見出
して本発明を完成した。
【0009】即ち、本発明は、血漿蛋白質成分含有水溶
液を固定赤血球で処理することを特徴とする血漿蛋白質
成分の製造方法である。
液を固定赤血球で処理することを特徴とする血漿蛋白質
成分の製造方法である。
【0010】本発明の血漿蛋白質成分は、血漿に由来す
るものであれば特に限定されない。具体的には、血液凝
固因子(例えば、第VIII因子、第IX因子、第IX
因子複合体、第XIII因子等)、フィブロネクチン、
プラスミノゲン、アンチトロンビンIII 、アルブミ
ン、免疫グロブリン、抗ヒトリンパ球抗体(AHLG)
、ハプトグロビンおよびコロニー形成刺激因子等が挙げ
られる。
るものであれば特に限定されない。具体的には、血液凝
固因子(例えば、第VIII因子、第IX因子、第IX
因子複合体、第XIII因子等)、フィブロネクチン、
プラスミノゲン、アンチトロンビンIII 、アルブミ
ン、免疫グロブリン、抗ヒトリンパ球抗体(AHLG)
、ハプトグロビンおよびコロニー形成刺激因子等が挙げ
られる。
【0011】また、本発明の固定赤血球との接触時の血
漿蛋白質成分の精製度は特に限定されるものではなく、
任意の精製度のものに適用可能であり、従って、血漿蛋
白質成分は未精製、部分精製、高度精製のいずれの段階
にあってもよい。
漿蛋白質成分の精製度は特に限定されるものではなく、
任意の精製度のものに適用可能であり、従って、血漿蛋
白質成分は未精製、部分精製、高度精製のいずれの段階
にあってもよい。
【0012】本発明の方法が適用される水溶液は、血漿
蛋白質成分を含有する水溶液であれば特に制限はないが
、就中、血液、血漿、血清、コーンの低温エタノール分
画法で得られた画分(例えば、フラクションII+II
I 、フラクションIV−1、フラクションV等)およ
びクリオプレシピテート等が好ましい。本発明では、特
に抗ヒトリンパ球抗体が好ましい。その製法としては、
特開昭53−139720号公報等に開示されている方
法等が挙げられる。
蛋白質成分を含有する水溶液であれば特に制限はないが
、就中、血液、血漿、血清、コーンの低温エタノール分
画法で得られた画分(例えば、フラクションII+II
I 、フラクションIV−1、フラクションV等)およ
びクリオプレシピテート等が好ましい。本発明では、特
に抗ヒトリンパ球抗体が好ましい。その製法としては、
特開昭53−139720号公報等に開示されている方
法等が挙げられる。
【0013】本発明で使用する固定赤血球は、赤血球に
人為的操作を加えてもとの形態や構造内容物をできるだ
け保持し、変化させないようにしたものであり、例えば
、赤血球をグルタルアルデヒド、ホルマリン等で処理す
ることによって製造される。固定赤血球の作製法をより
詳細に説明すれば次の通りである。
人為的操作を加えてもとの形態や構造内容物をできるだ
け保持し、変化させないようにしたものであり、例えば
、赤血球をグルタルアルデヒド、ホルマリン等で処理す
ることによって製造される。固定赤血球の作製法をより
詳細に説明すれば次の通りである。
【0014】ヒト、ヒツジ、ウシ、ウマ、サル、イヌ、
ネコ、ウサギ(好ましくは、ヒト、ヒツジ)等から血液
を採取し、1500回転/分×10分間遠心分離を行い
、上澄液を廃棄して赤血球を分離する。更に赤血球沈渣
の20倍量の生理食塩液を添加して赤血球を浮遊せしめ
た後、再度上記条件下で遠心分離を行い上澄液を廃棄す
る。
ネコ、ウサギ(好ましくは、ヒト、ヒツジ)等から血液
を採取し、1500回転/分×10分間遠心分離を行い
、上澄液を廃棄して赤血球を分離する。更に赤血球沈渣
の20倍量の生理食塩液を添加して赤血球を浮遊せしめ
た後、再度上記条件下で遠心分離を行い上澄液を廃棄す
る。
【0015】同様の操作を通常2回繰り返して赤血球を
沈澱せしめ、0.075Mリン酸緩衝生理食塩液、pH
7.2にて5%(V/V)赤血球浮遊液を調製する。
沈澱せしめ、0.075Mリン酸緩衝生理食塩液、pH
7.2にて5%(V/V)赤血球浮遊液を調製する。
【0016】この5%(V/V)赤血球浮遊液3容に2
.5%(V/V)グルタルアルデヒド溶液1容添加し、
30℃にて5分間反応させる。
.5%(V/V)グルタルアルデヒド溶液1容添加し、
30℃にて5分間反応させる。
【0017】反応後、再び遠心分離等の操作を行い、使
用濃度の赤血球浮遊液を調整し固定赤血球を得る。
用濃度の赤血球浮遊液を調整し固定赤血球を得る。
【0018】本発明における固定赤血球による処理は、
通常前記水溶液を固定赤血球と接触させることによって
行われる。より具体的には、血漿蛋白質成分含有水溶液
1容に対して5〜10%(V/V)、好ましくは6〜8
%(V/V)の固定赤血球1〜6容を添加するのが好ま
しい。
通常前記水溶液を固定赤血球と接触させることによって
行われる。より具体的には、血漿蛋白質成分含有水溶液
1容に対して5〜10%(V/V)、好ましくは6〜8
%(V/V)の固定赤血球1〜6容を添加するのが好ま
しい。
【0019】また、処理温度および時間は、0〜10℃
において、1〜60分程度である。
において、1〜60分程度である。
【0020】なお、固定赤血球は当該処理後、遠心分離
法、濾過法等により血漿蛋白質成分含有水溶液から除去
することにより繰り返し使用することができるので経済
的である。
法、濾過法等により血漿蛋白質成分含有水溶液から除去
することにより繰り返し使用することができるので経済
的である。
【0021】
【発明の効果】本発明の製造方法によると、不純物(例
えば、血液型抗体、ヘモアグルチニン、抗ヒト蛋白抗体
、抗ヒト血清抗体、抗ヒト腎糸球体基底膜抗体等)を実
質的に含まない血漿蛋白質成分を製造することができる
。従って、ショック症状(呼吸困難、血圧降下等)、過
敏症(発熱、蕁麻疹、発疹、そう痒感等)、血液障害(
血小板減少、白血球減少、血栓等)、血栓性静脈炎、消
化器出血等の副作用の極めて少ない高品質で安全性の高
い製剤の供給が可能となる。しかも、本発明で使用され
る固定赤血球は、繰り返し使用できるので、安価で簡単
かつ工業的規模で不純物を実質的に含まない血漿蛋白質
成分を製造することができる。
えば、血液型抗体、ヘモアグルチニン、抗ヒト蛋白抗体
、抗ヒト血清抗体、抗ヒト腎糸球体基底膜抗体等)を実
質的に含まない血漿蛋白質成分を製造することができる
。従って、ショック症状(呼吸困難、血圧降下等)、過
敏症(発熱、蕁麻疹、発疹、そう痒感等)、血液障害(
血小板減少、白血球減少、血栓等)、血栓性静脈炎、消
化器出血等の副作用の極めて少ない高品質で安全性の高
い製剤の供給が可能となる。しかも、本発明で使用され
る固定赤血球は、繰り返し使用できるので、安価で簡単
かつ工業的規模で不純物を実質的に含まない血漿蛋白質
成分を製造することができる。
【0022】
【実施例】以下、本発明を詳細に説明するため実施例を
挙げるが、本発明はこれら実施例によって何ら限定され
るものではない。
挙げるが、本発明はこれら実施例によって何ら限定され
るものではない。
【0023】実施例1
■ 固定赤血球の作製
ヒトから採取した血液を1500回転/分×10分間遠
心分離を行った後、上澄液を廃棄して赤血球を分離し、
更に赤血球沈渣の20倍量の生理食塩液を添加して赤血
球を浮遊せしめた後、再度1500回転/分×10分間
の遠心分離を行い上澄液を廃棄した。同様の操作を2回
繰り返して赤血球を沈澱せしめ0.075Mリン酸緩衝
生理食塩液、pH7.2にて、5%(V/V)赤血球浮
遊液とした。
心分離を行った後、上澄液を廃棄して赤血球を分離し、
更に赤血球沈渣の20倍量の生理食塩液を添加して赤血
球を浮遊せしめた後、再度1500回転/分×10分間
の遠心分離を行い上澄液を廃棄した。同様の操作を2回
繰り返して赤血球を沈澱せしめ0.075Mリン酸緩衝
生理食塩液、pH7.2にて、5%(V/V)赤血球浮
遊液とした。
【0024】この赤血球浮遊液1容に2.5%(V/V
)グルタル溶液1/3容添加し、30℃にて5時間反応
させた。反応後1500回転/分×10分間遠心分離を
行い、上澄液を廃棄して赤血球を分離し、更に赤血球沈
渣の20倍量の生理食塩液を添加して赤血球を浮遊せし
め再度1500回転/分×10分間遠心分離を行った後
、上澄液を廃棄した。同様の操作を2回繰り返して赤血
球を沈澱せしめた後、生理食塩液にて使用濃度の浮遊液
を調整し固定赤血球を得た。
)グルタル溶液1/3容添加し、30℃にて5時間反応
させた。反応後1500回転/分×10分間遠心分離を
行い、上澄液を廃棄して赤血球を分離し、更に赤血球沈
渣の20倍量の生理食塩液を添加して赤血球を浮遊せし
め再度1500回転/分×10分間遠心分離を行った後
、上澄液を廃棄した。同様の操作を2回繰り返して赤血
球を沈澱せしめた後、生理食塩液にて使用濃度の浮遊液
を調整し固定赤血球を得た。
【0025】■ AHLGの製造方法ウマに対して、
培養リンパ球1×109 細胞数/1ショットを0日、
10日、20日と皮下注射し,血漿を血液返還法によっ
て採血した。得られたウマの血漿にクエン酸ナトリウム
(4%溶液)50mlを添加し、全血量を700mlと
して1,000r.p.m×10分間遠心分離し、上清
を回収した。この上清に塩化カルシウム0.4%になる
ように加え、加温してフィブリンを析出させ、遠沈して
脱フィブリンした後、56℃で30分間加温して、補体
成分を非働化した。
培養リンパ球1×109 細胞数/1ショットを0日、
10日、20日と皮下注射し,血漿を血液返還法によっ
て採血した。得られたウマの血漿にクエン酸ナトリウム
(4%溶液)50mlを添加し、全血量を700mlと
して1,000r.p.m×10分間遠心分離し、上清
を回収した。この上清に塩化カルシウム0.4%になる
ように加え、加温してフィブリンを析出させ、遠沈して
脱フィブリンした後、56℃で30分間加温して、補体
成分を非働化した。
【0026】次に、予め作製しておいた固定赤血球を血
清量の25%に加えて赤血球凝集素の吸収を行った。
清量の25%に加えて赤血球凝集素の吸収を行った。
【0027】次にDEAE−セルロース処理をpH7.
2±0.1の条件下で行った後、その濾液に対してさら
に硫安42%飽和をpH6.9±0.1の条件下で行い
、その沈澱を透析してAHLGを回収した。得られた透
析液を0.22μmの口径を有するフィルターによって
除菌濾過を行った。この濾液を凍結乾燥して約20gの
AHLGを回収した。このAHLGについて、細胞障害
試験、ロゼット試験を行った結果充分な力価を認めた。 また、赤血球凝集試験、血小板凝集試験によりこれらの
抗体の存在は認められなかった。更に、オクタロニー法
および重層沈降法で抗ヒト血清抗体を、また蛍光抗体法
により抗ヒト腎糸球体基底膜抗体を調べたが、これらの
抗体の存在は認められなかった。
2±0.1の条件下で行った後、その濾液に対してさら
に硫安42%飽和をpH6.9±0.1の条件下で行い
、その沈澱を透析してAHLGを回収した。得られた透
析液を0.22μmの口径を有するフィルターによって
除菌濾過を行った。この濾液を凍結乾燥して約20gの
AHLGを回収した。このAHLGについて、細胞障害
試験、ロゼット試験を行った結果充分な力価を認めた。 また、赤血球凝集試験、血小板凝集試験によりこれらの
抗体の存在は認められなかった。更に、オクタロニー法
および重層沈降法で抗ヒト血清抗体を、また蛍光抗体法
により抗ヒト腎糸球体基底膜抗体を調べたが、これらの
抗体の存在は認められなかった。
【0028】このAHLGを用いて局所刺激試験、急性
毒性試験を行ったが、いずれも良好な結果を得た。
毒性試験を行ったが、いずれも良好な結果を得た。
【0029】実施例2 免疫グロブリンの製造方法特
開昭63−183539号公報に準じて調製した免疫グ
ロブリンを実施例1と同様に固定赤血球で処理し、夾雑
物の除去された良好な製剤を得た。
開昭63−183539号公報に準じて調製した免疫グ
ロブリンを実施例1と同様に固定赤血球で処理し、夾雑
物の除去された良好な製剤を得た。
【0030】実施例3 血液凝固第VIII因子の製
造方法特開平1−305036号公報に準じて調製した
血液凝固第VIII因子を実施例1と同様に固定赤血球
で処理し、夾雑物の除去された良好な製剤を得た。
造方法特開平1−305036号公報に準じて調製した
血液凝固第VIII因子を実施例1と同様に固定赤血球
で処理し、夾雑物の除去された良好な製剤を得た。
Claims (1)
- 【請求項1】 血漿蛋白質成分含有水溶液を固定赤血
球で処理することを特徴とする血漿蛋白質成分の製造方
法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP02416757A JP3106509B2 (ja) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | 抗ヒトリンパ球抗体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP02416757A JP3106509B2 (ja) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | 抗ヒトリンパ球抗体の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH04230700A true JPH04230700A (ja) | 1992-08-19 |
JP3106509B2 JP3106509B2 (ja) | 2000-11-06 |
Family
ID=18524953
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP02416757A Expired - Fee Related JP3106509B2 (ja) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | 抗ヒトリンパ球抗体の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3106509B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0696470A1 (en) | 1994-08-12 | 1996-02-14 | Mitsubishi Jukogyo Kabushiki Kaisha | Catalysts for cleaning exhaust gases |
-
1990
- 1990-12-28 JP JP02416757A patent/JP3106509B2/ja not_active Expired - Fee Related
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0696470A1 (en) | 1994-08-12 | 1996-02-14 | Mitsubishi Jukogyo Kabushiki Kaisha | Catalysts for cleaning exhaust gases |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP3106509B2 (ja) | 2000-11-06 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |