JPH04216465A - リガンドを免疫学的に測定するための方法及び試薬 - Google Patents
リガンドを免疫学的に測定するための方法及び試薬Info
- Publication number
- JPH04216465A JPH04216465A JP3024556A JP2455691A JPH04216465A JP H04216465 A JPH04216465 A JP H04216465A JP 3024556 A JP3024556 A JP 3024556A JP 2455691 A JP2455691 A JP 2455691A JP H04216465 A JPH04216465 A JP H04216465A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ligand
- binding
- reagent
- receptor
- measured
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims abstract description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 44
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 32
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 55
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 20
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 19
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 18
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 17
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 17
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 12
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 9
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 4
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 102000009488 Thyroxine-Binding Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010048889 Thyroxine-Binding Proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- MHQHHBYRYFICDV-UHFFFAOYSA-M sodium;pyrimidin-3-ide-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].O=C1CC(=O)[N-]C(=O)N1 MHQHHBYRYFICDV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- RYCLIXPGLDDLTM-UHFFFAOYSA-J tetrapotassium;phosphonato phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O RYCLIXPGLDDLTM-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYJJLCDCWVZEDZ-UHFFFAOYSA-N 8-aminonaphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC(S(O)(=O)=O)=C2C(N)=CC=CC2=C1 CYJJLCDCWVZEDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- -1 D- Biotinyl- Chemical group 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000012812 general test Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000007981 phosphate-citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/563—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving antibody fragments
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、リガンドの免疫学的な
測定方法及びこれに適当な試薬組成物に関する。
測定方法及びこれに適当な試薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】体液及び組織中には、特異な結合成分と
結合可能であり、かつ特定の病気又は人体の健康状態に
対するパラメータとして使用される著しく多数の物質が
存在する。これらの物質には、一方では結合部位をその
表面に有する免疫学的に活性のタンパク質、例えば腫瘍
標識物質、ホルモン又はウィルス性タンパク質が属し、
かつ他方ではＤＮＡフラグメントが属する。上記の以下
「リガンド」と呼称される物質はしばしば著しく少量で
のみ存在するために、該物質の検出には免疫検定の原理
による方法が使用され、この場合、この方法を用いて上
記物質は著しく特異的かつ正確に測定されることができ
る。公知の免疫学的測定方法は、均質相方法と不均質相
方法とに分類される。不均質相方法の場合には、検出す
べき物質及び標識化成分を含有する複合体を固定化し、
かつこのことによって結合されていない成分から分離す
るために常に固相反応が関与している。均質相方法の場
合には、結合された標識と結合されていない標識との分
離は行なわれず、その結果、結合された標識と結合され
ていない標識との区別は別の方法によって行なわれる必
要がある。
結合可能であり、かつ特定の病気又は人体の健康状態に
対するパラメータとして使用される著しく多数の物質が
存在する。これらの物質には、一方では結合部位をその
表面に有する免疫学的に活性のタンパク質、例えば腫瘍
標識物質、ホルモン又はウィルス性タンパク質が属し、
かつ他方ではＤＮＡフラグメントが属する。上記の以下
「リガンド」と呼称される物質はしばしば著しく少量で
のみ存在するために、該物質の検出には免疫検定の原理
による方法が使用され、この場合、この方法を用いて上
記物質は著しく特異的かつ正確に測定されることができ
る。公知の免疫学的測定方法は、均質相方法と不均質相
方法とに分類される。不均質相方法の場合には、検出す
べき物質及び標識化成分を含有する複合体を固定化し、
かつこのことによって結合されていない成分から分離す
るために常に固相反応が関与している。均質相方法の場
合には、結合された標識と結合されていない標識との分
離は行なわれず、その結果、結合された標識と結合され
ていない標識との区別は別の方法によって行なわれる必
要がある。
【０００３】不均質相の免疫検定は本質的に２つの変法
、即ち拮抗的検定及びサンドイッチ検定を基礎とする。 上記変法の場合には通常少なくとも２つの受容体が使用
され、この場合、受容体は検出すべきリガンドと結合可
能であり、かつ受容体の１つは標識を有し、別の１つは
固相に結合されているか又は固相への結合を仲介する。 このために多数の変法が、別の受容体の使用下で公知で
ある。固相に結合されており、かつ標識を有する全ての
複合体が測定される。
、即ち拮抗的検定及びサンドイッチ検定を基礎とする。 上記変法の場合には通常少なくとも２つの受容体が使用
され、この場合、受容体は検出すべきリガンドと結合可
能であり、かつ受容体の１つは標識を有し、別の１つは
固相に結合されているか又は固相への結合を仲介する。 このために多数の変法が、別の受容体の使用下で公知で
ある。固相に結合されており、かつ標識を有する全ての
複合体が測定される。
【０００４】拮抗的不均質相免疫検定の実施のために本
質的に２つの変法が存在し、この場合、リガンドに対す
る抗体が固定化されるか又はリガンドに類似の物質が固
定化される。第１の変法の場合には、リガンドを含有す
る試料溶液及びリガンドと標識とからなる接合体が固定
化された抗体と一緒に恒温保持される。この場合、リガ
ンド及び標識化物質は抗体への結合について競合してい
る。より多量のリガンドが溶液中に存在すればするほど
、より少量の標識化物質が結合されることができる。 固相と液相の分離後さらに標識は２相のうち１相中で測
定することができる。結合された標識化物質の量は、測
定すべき物質、即ちリガンドの量に対する間接的な尺度
である。
質的に２つの変法が存在し、この場合、リガンドに対す
る抗体が固定化されるか又はリガンドに類似の物質が固
定化される。第１の変法の場合には、リガンドを含有す
る試料溶液及びリガンドと標識とからなる接合体が固定
化された抗体と一緒に恒温保持される。この場合、リガ
ンド及び標識化物質は抗体への結合について競合してい
る。より多量のリガンドが溶液中に存在すればするほど
、より少量の標識化物質が結合されることができる。 固相と液相の分離後さらに標識は２相のうち１相中で測
定することができる。結合された標識化物質の量は、測
定すべき物質、即ちリガンドの量に対する間接的な尺度
である。
【０００５】第２の変法の場合には、リガンドを含有す
る試料溶液が、リガンドに対して特異的な抗体及び固定
化物質類似体と一緒に恒温保持される。この場合、固定
化されたリガンド及び溶液中に存在するリガンドは抗体
への結合について競合している。より多量のリガンドが
溶液中に存在すればするほど、より少量の抗体が固定化
リガンドへの結合により、同様に固相への結合によって
結合される。この場合にも再度、固相を液相から分離し
た後に、試料溶液中のリガンドの量に再び間接的に比例
している結合された標識の量が測定される。
る試料溶液が、リガンドに対して特異的な抗体及び固定
化物質類似体と一緒に恒温保持される。この場合、固定
化されたリガンド及び溶液中に存在するリガンドは抗体
への結合について競合している。より多量のリガンドが
溶液中に存在すればするほど、より少量の抗体が固定化
リガンドへの結合により、同様に固相への結合によって
結合される。この場合にも再度、固相を液相から分離し
た後に、試料溶液中のリガンドの量に再び間接的に比例
している結合された標識の量が測定される。
【０００６】サンドイッチ免疫検定の変法の場合には、
リガンドに対する抗体は固定化され、試料溶液は固定化
された上記抗体の存在下で、リガンドと結合可能であり
かつ標識化されている別の抗体と一緒に恒温保持される
。この場合に受容体は過剰量で添加され、その結果、試
料中に存在する、検出すべき全ての分子は固相に結合さ
れ、かつ標識化受容体と結合する。
リガンドに対する抗体は固定化され、試料溶液は固定化
された上記抗体の存在下で、リガンドと結合可能であり
かつ標識化されている別の抗体と一緒に恒温保持される
。この場合に受容体は過剰量で添加され、その結果、試
料中に存在する、検出すべき全ての分子は固相に結合さ
れ、かつ標識化受容体と結合する。
【０００７】上記方法の欠点は、それぞれの測定すべき
物質（リガンド）に対して、複数の特殊に適応する受容
体が予め考慮されていなければならない点である。この
ようにして、リガンドごとにそれぞれ異なる、しばしば
標識化された特殊の抗体が必要である。通常抗体分子の
複数部位で攻撃する、抗体への標識群の共有結合は、こ
のように変性された抗体の結合性性質の望ましくない変
化を惹起する可能性がある。
物質（リガンド）に対して、複数の特殊に適応する受容
体が予め考慮されていなければならない点である。この
ようにして、リガンドごとにそれぞれ異なる、しばしば
標識化された特殊の抗体が必要である。通常抗体分子の
複数部位で攻撃する、抗体への標識群の共有結合は、こ
のように変性された抗体の結合性性質の望ましくない変
化を惹起する可能性がある。
【０００８】別の問題が、結合部位以上の数を示すタン
パク質又はＤＮＡ‐もしくはＲＮＡフラグメントの検出
の場合に生じる。
パク質又はＤＮＡ‐もしくはＲＮＡフラグメントの検出
の場合に生じる。
【０００９】この場合にはそれぞれ受容体の大多数もし
くは多数は結合することができ、この場合、結合の結果
として生じる不正確さは標準の使用によって尚補正され
なければならない。しかしながら、全ての使用された受
容体自体が他方において二価であるか又は多価である場
合に、上記の不正確さは尚強められる。
くは多数は結合することができ、この場合、結合の結果
として生じる不正確さは標準の使用によって尚補正され
なければならない。しかしながら、全ての使用された受
容体自体が他方において二価であるか又は多価である場
合に、上記の不正確さは尚強められる。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の課題は
、リガンドが高い正確度、良好な再生可能性及び高い特
異性をもって検出されることができ、かつその上普遍的
に使用可能な標識化成分及び普遍的に適当な固相材料が
使用されることができる方法を提供することであった。 殊に、唯一の特殊に適応する受容体のみが必要とされる
。
、リガンドが高い正確度、良好な再生可能性及び高い特
異性をもって検出されることができ、かつその上普遍的
に使用可能な標識化成分及び普遍的に適当な固相材料が
使用されることができる方法を提供することであった。 殊に、唯一の特殊に適応する受容体のみが必要とされる
。
【００１１】
【課題を解決するための手段】上記課題は、測定すべき
リガンドを ａ）特異的結合能を有する物質Ｐ２の、その分子のうち
少なくとも１個が標識を有する少なくとも分子２個並び
に ｂ）Ｐ２に対して１価の結合能を有する結合成分Ｐ１と
、測定すべきリガンドに対する結合部位Ｒ１とからなる
受容体Ｒと反応させ、かつ標識を測定することを特徴と
するリガンドの免疫学的測定方法によって解決される。
リガンドを ａ）特異的結合能を有する物質Ｐ２の、その分子のうち
少なくとも１個が標識を有する少なくとも分子２個並び
に ｂ）Ｐ２に対して１価の結合能を有する結合成分Ｐ１と
、測定すべきリガンドに対する結合部位Ｒ１とからなる
受容体Ｒと反応させ、かつ標識を測定することを特徴と
するリガンドの免疫学的測定方法によって解決される。
【００１２】
【作用】特徴ａ）によれば、標識化されたＰ２は既知の
量で有利にリガンドの可能量に対する過剰量で使用され
、この場合、上記過剰量は、全Ｐ２が標識化されている
場合にはリガンドの化学量論的量の２倍に相応しており
、また標識化されていないＰ２が使用されている場合に
は該過剰量はリガンドの化学量論的量の１倍に相応して
いる。また、標識化されていないＰ２が使用されている
実施態様の場合には、標識化されていないＰ２が１倍の
過剰量で存在する。
量で有利にリガンドの可能量に対する過剰量で使用され
、この場合、上記過剰量は、全Ｐ２が標識化されている
場合にはリガンドの化学量論的量の２倍に相応しており
、また標識化されていないＰ２が使用されている場合に
は該過剰量はリガンドの化学量論的量の１倍に相応して
いる。また、標識化されていないＰ２が使用されている
実施態様の場合には、標識化されていないＰ２が１倍の
過剰量で存在する。
【００１３】本発明による方法は、体液もしくは組織抽
出物中で検出すべき、特異的な結合能力がある全てのリ
ガンドの測定に適当であり、この場合、低く濃縮された
物質は、高く濃縮された物質と同様に良好に検出するこ
とができる。本発明による方法の感度及び正確さは、従
来の公知方法と比較して改善されている。本発明は、簡
単な試薬を用いて迅速かつ確実に測定を実施する可能性
を提供する。
出物中で検出すべき、特異的な結合能力がある全てのリ
ガンドの測定に適当であり、この場合、低く濃縮された
物質は、高く濃縮された物質と同様に良好に検出するこ
とができる。本発明による方法の感度及び正確さは、従
来の公知方法と比較して改善されている。本発明は、簡
単な試薬を用いて迅速かつ確実に測定を実施する可能性
を提供する。
【００１４】本発明による方法は、複数の結合部位を有
するリガンド及びＤＮＡ‐もしくはＲＮＡ分子の測定に
好適である。この場合、特異的な結合部位とは、別の物
質との特異的な結合を生じることができる結合部位と理
解される。上記結合部位の例は、抗原決定基、タンパク
質上の特異的な結合部位又はＤＮＡもしくはＲＮＡ上の
特異的な核酸配列である。
するリガンド及びＤＮＡ‐もしくはＲＮＡ分子の測定に
好適である。この場合、特異的な結合部位とは、別の物
質との特異的な結合を生じることができる結合部位と理
解される。上記結合部位の例は、抗原決定基、タンパク
質上の特異的な結合部位又はＤＮＡもしくはＲＮＡ上の
特異的な核酸配列である。
【００１５】本質的な特徴は、受容体Ｒが、特異的な結
合対Ｐ１／Ｐ２の唯一の結合成分であるＰ１を含有し、
かつこの結合成分Ｐ１はＰ２に対して１価であり、その
結果、受容体Ｒ１分子につき唯１分子Ｐ２のみが結合さ
れることができることである。成分Ｒ１として、リガン
ドと特異的に結合可能である物質が適当である。この物
質は、例えば高分子、例えば抗体、抗体フラグメント及
び特異的結合能を有する結合タンパク質、ハプテン、エ
ピトープであることができるし、ＤＮＡ検出もしくはＲ
ＮＡ検出の場合にはＤＮＡプローブであることができる
。有利に成分Ｒ１は、リガンドに対して結合部位１個の
みを有する。タンパク質検出の場合には有利に、抗体結
合部位１個のみを有する抗体フラグメントが使用される
か又は、タンパク質を特異的に結合させる物質、例えば
Ｔ４を結合するタンパク質検出のためのＴ４が使用され
る。ＤＮＡもしくはＲＮＡの検出については、成分Ｒ１
として例えば、検出すべきＤＮＡもしくはＲＮＡの配列
とハイブリッド形成することができるゾンデが使用され
る。特に有利に受容体Ｒ中の成分Ｒ１として、リガンド
と結合可能な抗体のＦａｂ′フラグメントが使用される
。Ｒ１は、リガンドに依存して単一物質であってもよく
、混合物であってもよい。
合対Ｐ１／Ｐ２の唯一の結合成分であるＰ１を含有し、
かつこの結合成分Ｐ１はＰ２に対して１価であり、その
結果、受容体Ｒ１分子につき唯１分子Ｐ２のみが結合さ
れることができることである。成分Ｒ１として、リガン
ドと特異的に結合可能である物質が適当である。この物
質は、例えば高分子、例えば抗体、抗体フラグメント及
び特異的結合能を有する結合タンパク質、ハプテン、エ
ピトープであることができるし、ＤＮＡ検出もしくはＲ
ＮＡ検出の場合にはＤＮＡプローブであることができる
。有利に成分Ｒ１は、リガンドに対して結合部位１個の
みを有する。タンパク質検出の場合には有利に、抗体結
合部位１個のみを有する抗体フラグメントが使用される
か又は、タンパク質を特異的に結合させる物質、例えば
Ｔ４を結合するタンパク質検出のためのＴ４が使用され
る。ＤＮＡもしくはＲＮＡの検出については、成分Ｒ１
として例えば、検出すべきＤＮＡもしくはＲＮＡの配列
とハイブリッド形成することができるゾンデが使用され
る。特に有利に受容体Ｒ中の成分Ｒ１として、リガンド
と結合可能な抗体のＦａｂ′フラグメントが使用される
。Ｒ１は、リガンドに依存して単一物質であってもよく
、混合物であってもよい。
【００１６】受容体Ｒの成分Ｐ１は、特異的な結合対の
結合成分である。特異的に相互結合する対は公知である
。適当な結合対は、殊にビオチン‐ストレプタビジンな
いしはアビジン；ハプテン‐抗体、抗原‐抗体、コンカ
バリン（Ｃｏｎｃａｖａｌｉｎ）‐抗体；糖‐レクチン
；ハプテン‐結合タンパク質、例えばチロキシンを結合
するグロブリン及びチロキシン‐もしくはオリゴペプチ
ド抗体である。
結合成分である。特異的に相互結合する対は公知である
。適当な結合対は、殊にビオチン‐ストレプタビジンな
いしはアビジン；ハプテン‐抗体、抗原‐抗体、コンカ
バリン（Ｃｏｎｃａｖａｌｉｎ）‐抗体；糖‐レクチン
；ハプテン‐結合タンパク質、例えばチロキシンを結合
するグロブリン及びチロキシン‐もしくはオリゴペプチ
ド抗体である。
【００１７】特に有利に結合対としてビオチンとストレ
プタビジンないしはアビジンが使用され、その結果、受
容体Ｒ１は特に有利に唯１分子ビオチンを結合成分Ｐ１
として含有する。
プタビジンないしはアビジンが使用され、その結果、受
容体Ｒ１は特に有利に唯１分子ビオチンを結合成分Ｐ１
として含有する。
【００１８】接合体は、当業者に公知の方法の使用下で
得られる（例えばＥｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．１
３１（１９８０） ３３３〜３３８と同様である）。
得られる（例えばＥｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．１
３１（１９８０） ３３３〜３３８と同様である）。
【００１９】不均質相処理の実施の場合には、Ｐ２は標
識化されていない形で固相への結合を仲介する。
識化されていない形で固相への結合を仲介する。
【００２０】本発明によれば、固相及び標識接合体は全
測定に対して不変であることができ、かつ唯一受容体が
それぞれの検出すべきリガンドに一致させる必要がある
だけであるため、一般的試験を提供することができる。 Ｒとリガンドと、標識化されたＰ２との結合が均質相中
で進行するため、この結合は、不均質相中で進行する、
固相、即ちＰ２へのＲの結合と比較して有利である。従
って、固相に結合された、標識化されていない、特異的
に結合する系のＰ２は過剰量で使用される。
測定に対して不変であることができ、かつ唯一受容体が
それぞれの検出すべきリガンドに一致させる必要がある
だけであるため、一般的試験を提供することができる。 Ｒとリガンドと、標識化されたＰ２との結合が均質相中
で進行するため、この結合は、不均質相中で進行する、
固相、即ちＰ２へのＲの結合と比較して有利である。従
って、固相に結合された、標識化されていない、特異的
に結合する系のＰ２は過剰量で使用される。
【００２１】有利に受容体Ｒとして特に、抗体もしくは
抗体フラグメントＲ１並びにＰ１としてのビオチンから
なる接合体が使用される。
抗体フラグメントＲ１並びにＰ１としてのビオチンから
なる接合体が使用される。
【００２２】接合体Ｒは、自体公知の方法で、例えば抗
体ないしは抗体誘導体の成分Ｒ１が結合成分Ｐ１と化学
量論による比１：１で反応されることによって得られる
。有利にカップリングは、遊離ＳＨ基又はアミノ基によ
って行なわれる。この場合に統計的に生じる、２個もし
くはそれ以上の成分Ｐ１を有する生成物はゲルクロマト
グラフィーによる方法によって分離することができる。 特に有利に本発明による方法に対して、Ｆａｂ′フラグ
メントとビオチンとからなる接合体Ｒが使用される。こ
の種の接合体を得るために、例えば検出すべきリガンド
と結合可能な抗体がペプシンで処理され、生じるＦ（ａ
ｂ′）２フラグメントを還元させる条件にさらされ、か
つ引き続き成分Ｐ１と反応させられ、この場合、成分Ｐ
１中に存在する官能基によってか又はスペーサーによっ
て場合により結合部位の活性化後に成分Ｐ１はＦａｂ′
フラグメントの遊離ＳＨ基もしくはアミノ基に結合する
。１個もしくは複数の結合成分Ｐ１を含有する生成物は
、例えば欧州特許出願公開第０ １３１ ３４３号明細
書に記載の方法により分離することができ、この場合、
親和性のタンパク質の電荷差異は分離に関与する。 タンパク質のアミノ官能基による結合成分同士の結合の
際に単結合もしくは多重結合により、その分離を可能に
する異なる電荷を有する接合体が得られる。
体ないしは抗体誘導体の成分Ｒ１が結合成分Ｐ１と化学
量論による比１：１で反応されることによって得られる
。有利にカップリングは、遊離ＳＨ基又はアミノ基によ
って行なわれる。この場合に統計的に生じる、２個もし
くはそれ以上の成分Ｐ１を有する生成物はゲルクロマト
グラフィーによる方法によって分離することができる。 特に有利に本発明による方法に対して、Ｆａｂ′フラグ
メントとビオチンとからなる接合体Ｒが使用される。こ
の種の接合体を得るために、例えば検出すべきリガンド
と結合可能な抗体がペプシンで処理され、生じるＦ（ａ
ｂ′）２フラグメントを還元させる条件にさらされ、か
つ引き続き成分Ｐ１と反応させられ、この場合、成分Ｐ
１中に存在する官能基によってか又はスペーサーによっ
て場合により結合部位の活性化後に成分Ｐ１はＦａｂ′
フラグメントの遊離ＳＨ基もしくはアミノ基に結合する
。１個もしくは複数の結合成分Ｐ１を含有する生成物は
、例えば欧州特許出願公開第０ １３１ ３４３号明細
書に記載の方法により分離することができ、この場合、
親和性のタンパク質の電荷差異は分離に関与する。 タンパク質のアミノ官能基による結合成分同士の結合の
際に単結合もしくは多重結合により、その分離を可能に
する異なる電荷を有する接合体が得られる。
【００２３】固相として、ポリスチレン及び類似のプラ
スチックからなる試薬壜又は微量滴定板が好適であり、
この場合、容器は吸着もしくは共有結合によって内側表
面をＰ２で被覆されている。さらに粒子状物質、例えば
モレキュラーシーブ材料、ガラス玉、プラスチック管（
Ｋｕｎｓｔｓｔｏｆｆｓｃｈｌａｅｕｃｈｅ）及び類似
物並びに多孔性層状支持材、例えば紙もまた適当である
。結合成分Ｐ２の結合は自体公知の方法で行なわれる。
スチックからなる試薬壜又は微量滴定板が好適であり、
この場合、容器は吸着もしくは共有結合によって内側表
面をＰ２で被覆されている。さらに粒子状物質、例えば
モレキュラーシーブ材料、ガラス玉、プラスチック管（
Ｋｕｎｓｔｓｔｏｆｆｓｃｈｌａｅｕｃｈｅ）及び類似
物並びに多孔性層状支持材、例えば紙もまた適当である
。結合成分Ｐ２の結合は自体公知の方法で行なわれる。
【００２４】Ｐ２の少なくとも一部分は標識化された形
で使用され、均質相試験の実施の場合には全Ｐ２が標識
化された形で使用される。この場合には標識として、常
用の免疫試験標識、例えば酵素、蛍光体、化学発光体も
しくは放射性物質が適当である。標識の方法は、例えば
Ｃｌｉｎ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ ８１（１９７７）
１〜４０から当業者に公知であり、かつ本明細書では更
に詳説はされない。標識は、自体公知の方法で測定する
ことができる。
で使用され、均質相試験の実施の場合には全Ｐ２が標識
化された形で使用される。この場合には標識として、常
用の免疫試験標識、例えば酵素、蛍光体、化学発光体も
しくは放射性物質が適当である。標識の方法は、例えば
Ｃｌｉｎ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ ８１（１９７７）
１〜４０から当業者に公知であり、かつ本明細書では更
に詳説はされない。標識は、自体公知の方法で測定する
ことができる。
【００２５】本発明が単相処理の実施をもって、即ち固
相を使用すること無く使用される場合、全Ｐ２は標識化
された形で使用される。さらに、この際に形成される、
リガンドとＲ少なくとも２分子と、複合体中のＲの分子
数に相応する分子数の標識化されているＰ２とからの複
合体は、単相処理の実施の場合の当業者に公知の標識測
定方法で検出される。適当な検出方法は、例えば欧州特
許第００８４ ８０７号明細書に記載されている。
相を使用すること無く使用される場合、全Ｐ２は標識化
された形で使用される。さらに、この際に形成される、
リガンドとＲ少なくとも２分子と、複合体中のＲの分子
数に相応する分子数の標識化されているＰ２とからの複
合体は、単相処理の実施の場合の当業者に公知の標識測
定方法で検出される。適当な検出方法は、例えば欧州特
許第００８４ ８０７号明細書に記載されている。
【００２６】本発明による方法の不均質相処理の場合並
びに単相処理の場合に付加的に接合体Ｋは使用すること
ができ、この場合、接合体は、受容体Ｒ中の結合成分Ｐ
１と同一である結合成分Ｐ１と一緒にリガンドもしくは
リガンド類似体を含有する。上記処理の実施の場合には
試料溶液中のリガンドは、添加された接合体Ｋ中のリガ
ンドもしくはリガンド類似体と受容体Ｒ中の成分Ｒ１を
めぐって競合し、その結果、拮抗的方法が生じる。上記
実施態様は、固相方法の場合並びに均質相中での方法の
場合に使用することができる。接合体Ｋを得るのに、受
容体Ｒを得るための実施態様は同様に有効である。この
場合、受容体Ｒ中の成分Ｒ１との結合能力に関してリガ
ンドそのものと類似する性質を有する物質は、リガンド
類似体と見做され、その結果、実際的に結合部位をめぐ
る競合が、使用された化学量論的条件下で存在する。
びに単相処理の場合に付加的に接合体Ｋは使用すること
ができ、この場合、接合体は、受容体Ｒ中の結合成分Ｐ
１と同一である結合成分Ｐ１と一緒にリガンドもしくは
リガンド類似体を含有する。上記処理の実施の場合には
試料溶液中のリガンドは、添加された接合体Ｋ中のリガ
ンドもしくはリガンド類似体と受容体Ｒ中の成分Ｒ１を
めぐって競合し、その結果、拮抗的方法が生じる。上記
実施態様は、固相方法の場合並びに均質相中での方法の
場合に使用することができる。接合体Ｋを得るのに、受
容体Ｒを得るための実施態様は同様に有効である。この
場合、受容体Ｒ中の成分Ｒ１との結合能力に関してリガ
ンドそのものと類似する性質を有する物質は、リガンド
類似体と見做され、その結果、実際的に結合部位をめぐ
る競合が、使用された化学量論的条件下で存在する。
【００２７】本発明による方法は、１工程で実施するこ
ともできるし、複数工程で実施することもできる。評価
は自体公知の方法で行なわれる。各受容体及び測定すべ
き物質もそれぞれ特異的にのみ、各々に対して特定的な
反応結合成分と反応することができるため、全受容体及
び試料を一緒に恒温保持することが可能であり、かつ方
法を１工程で実施することが可能である。このことは、
自動分析装置中で方法を実施する場合に特に有利である
。方法が１工程で不均質に実施される場合には有利に、
標識を有する物質Ｐ２は受容体Ｒと比較して不足量で使
用される。
ともできるし、複数工程で実施することもできる。評価
は自体公知の方法で行なわれる。各受容体及び測定すべ
き物質もそれぞれ特異的にのみ、各々に対して特定的な
反応結合成分と反応することができるため、全受容体及
び試料を一緒に恒温保持することが可能であり、かつ方
法を１工程で実施することが可能である。このことは、
自動分析装置中で方法を実施する場合に特に有利である
。方法が１工程で不均質に実施される場合には有利に、
標識を有する物質Ｐ２は受容体Ｒと比較して不足量で使
用される。
【００２８】全ての本発明による方法の変法の実施は、
有利に緩衝溶液中で行なわれる。上記方法用の緩衝液系
は、自体公知である。これには、グッドの緩衝液（ＧＯ
ＯＤ‐Ｐｕｆｆｅｒ）及びホスフェート緩衝液が好適で
ある。
有利に緩衝溶液中で行なわれる。上記方法用の緩衝液系
は、自体公知である。これには、グッドの緩衝液（ＧＯ
ＯＤ‐Ｐｕｆｆｅｒ）及びホスフェート緩衝液が好適で
ある。
【００２９】本発明による方法を不均質相中で実施する
ために、受容体Ｒ３個、標識化されたＰ２及び場合によ
ってはＫを有する試料溶液を標識化されていないＰ２で
被覆された固相の存在下で同時にか又は順次に恒温保持
される。この場合に、例えば受容体Ｒ２個はリガンドに
成分Ｒ１によって結合する。さらに、受容体Ｒの結合成
分Ｐ１によって、標識化されたＰ２が結合され、かつ別
の受容体Ｒによって結合対Ｐ１／標識化されていないＰ
２によって固相への結合が行なわれる。固相に結合され
ており、かつ標識を有する全複合体が評価される。
ために、受容体Ｒ３個、標識化されたＰ２及び場合によ
ってはＫを有する試料溶液を標識化されていないＰ２で
被覆された固相の存在下で同時にか又は順次に恒温保持
される。この場合に、例えば受容体Ｒ２個はリガンドに
成分Ｒ１によって結合する。さらに、受容体Ｒの結合成
分Ｐ１によって、標識化されたＰ２が結合され、かつ別
の受容体Ｒによって結合対Ｐ１／標識化されていないＰ
２によって固相への結合が行なわれる。固相に結合され
ており、かつ標識を有する全複合体が評価される。
【００３０】本発明によれば、容易かつ迅速に実施され
ることができ、かつまたポリクローナル抗体の使用の場
合に著しく敏感である１つの方法が提供される。
ることができ、かつまたポリクローナル抗体の使用の場
合に著しく敏感である１つの方法が提供される。
【００３１】本発明のもう１つの対象は、試薬が、少な
くとも一部分は標識化された形で存在する、特異的結合
能を有する物質Ｐ２及び、Ｐ２に対して１価の結合能を
有する結合成分Ｐ１と、測定すべきリガンドに対する結
合部位Ｒ１とからなる受容体Ｒを含有することによって
特徴付けられている、リガンドの免疫学的測定のための
試薬である。有利に該試薬は、標識化された形での物質
Ｐ２及び固相に結合された形として合一された糖剤（例
えば試験キャリヤーデバイスの層又は泥状粒子溶液）で
の物質Ｐ２を含有する。
くとも一部分は標識化された形で存在する、特異的結合
能を有する物質Ｐ２及び、Ｐ２に対して１価の結合能を
有する結合成分Ｐ１と、測定すべきリガンドに対する結
合部位Ｒ１とからなる受容体Ｒを含有することによって
特徴付けられている、リガンドの免疫学的測定のための
試薬である。有利に該試薬は、標識化された形での物質
Ｐ２及び固相に結合された形として合一された糖剤（例
えば試験キャリヤーデバイスの層又は泥状粒子溶液）で
の物質Ｐ２を含有する。
【００３２】有利な実施態様により上記試薬は、標識化
されていない、固相に結合されているか又は固相と結合
可能なＰ２を含有する。別の有利な実施態様により試薬
は、既に定義された通り付加的にリガンドもしくはリガ
ンド類似体と成分Ｐ１とからの接合体Ｋを含有する。上
記試薬は、体液及び組織抽出物中の数多くのパラメータ
の測定に適当である。
されていない、固相に結合されているか又は固相と結合
可能なＰ２を含有する。別の有利な実施態様により試薬
は、既に定義された通り付加的にリガンドもしくはリガ
ンド類似体と成分Ｐ１とからの接合体Ｋを含有する。上
記試薬は、体液及び組織抽出物中の数多くのパラメータ
の測定に適当である。
【００３３】有利な実施態様において試薬は付加的に緩
衝剤を含有する。特に有利に該試薬はホスフェート緩衝
液又はグッドの緩衝液を含有する。
衝剤を含有する。特に有利に該試薬はホスフェート緩衝
液又はグッドの緩衝液を含有する。
【００３４】図１は、チロキシン結合率の測定について
の結果が描かれている線図である。
の結果が描かれている線図である。
【００３５】図２は、抗Ｔ４抗体の測定についての結果
が描かれている線図である。
が描かれている線図である。
【００３６】次に、本発明を図及び例につき詳説する。
【００３７】
【実施例】例１
ＡＦＰ（α‐フェトプロテイン）の測定ａ） ビオチ
ンと、抗ＡＦＰ抗体のＦａｂ′フラグメントとからの接
合体（抗ＡＦＰ‐Ｆａｂ′‐ビオチン）の製造ＡＦＰに
抗するポリクローナル抗体を免疫吸着により排除し、こ
れからＦａｂ′フラグメントを得た。このＦａｂ′フラ
グメントをＡｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． １６１（
１９８７） ２６２〜２７１ないしはＡｎａｌｙｔ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ． １４９（１９８５）５２９〜５３６の
記載によりビオチンにカップリングした。
ンと、抗ＡＦＰ抗体のＦａｂ′フラグメントとからの接
合体（抗ＡＦＰ‐Ｆａｂ′‐ビオチン）の製造ＡＦＰに
抗するポリクローナル抗体を免疫吸着により排除し、こ
れからＦａｂ′フラグメントを得た。このＦａｂ′フラ
グメントをＡｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． １６１（
１９８７） ２６２〜２７１ないしはＡｎａｌｙｔ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ． １４９（１９８５）５２９〜５３６の
記載によりビオチンにカップリングした。
【００３８】ｂ） 試験実施
緩衝液Ａ：
バルビツル酸ナトリウム１２０ｍｍｏｌ／ｌホスフェー
ト緩衝液 ｐＨ８．６ １８．２ｍｍｏｌ／ｌ８‐
アミノ‐１‐ナフタレンスルホン酸１．２７ｍｍｏｌ／
ｌ ウシ血清アルブミン０．２重量％ （試験における最終濃度） 緩衝液Ａ４８０μｌ及び抗ＡＦＰ‐Ｆａｂ′‐ビオチン
２０μｌ（試験における最終濃度：４μｇ／ｍｌ）をス
トレプタビジンで被覆されたポリスチレン容器（欧州特
許出願公開第０ ２６９ ０９２号明細書により製造）
中に試料（ＡＦＰで増加されたヒト血清）５０μｌと一
緒に注入し、かつ２５℃で３０分間恒温保持した。引き
続き、緩衝液Ａ４８０μｌ及びストレプタビジン‐ＰＯ
Ｄ接合体（５０ｍＵ／試験）の溶液２０μｌを添加し、
かつ２５℃で３０分間恒温保持した。この混合物を洗浄
し、かつＡＢＴＳ（登録商標；以後省略）溶液（ＡＢＴ
Ｓ、２，２′‐アジノ‐ジ［３‐エチルベンゾチアゾリ
ン‐スルホン酸（６）］‐ジアンモニウム塩９．１ｍｍ
ｏｌ／ｌ、ホスフェート‐シトレート緩衝液 ｐＨ４
．４ １００ｍｍｏｌ／ｌ、過硼酸ナトリウム３．２
ｍｍｏｌ／ｌ）１ｍｌを添加し、２５℃で３０分間恒温
保持し、かつＡＦＰ含量の尺度として光学濃度を４２２
ｎｍで測定した。
ト緩衝液 ｐＨ８．６ １８．２ｍｍｏｌ／ｌ８‐
アミノ‐１‐ナフタレンスルホン酸１．２７ｍｍｏｌ／
ｌ ウシ血清アルブミン０．２重量％ （試験における最終濃度） 緩衝液Ａ４８０μｌ及び抗ＡＦＰ‐Ｆａｂ′‐ビオチン
２０μｌ（試験における最終濃度：４μｇ／ｍｌ）をス
トレプタビジンで被覆されたポリスチレン容器（欧州特
許出願公開第０ ２６９ ０９２号明細書により製造）
中に試料（ＡＦＰで増加されたヒト血清）５０μｌと一
緒に注入し、かつ２５℃で３０分間恒温保持した。引き
続き、緩衝液Ａ４８０μｌ及びストレプタビジン‐ＰＯ
Ｄ接合体（５０ｍＵ／試験）の溶液２０μｌを添加し、
かつ２５℃で３０分間恒温保持した。この混合物を洗浄
し、かつＡＢＴＳ（登録商標；以後省略）溶液（ＡＢＴ
Ｓ、２，２′‐アジノ‐ジ［３‐エチルベンゾチアゾリ
ン‐スルホン酸（６）］‐ジアンモニウム塩９．１ｍｍ
ｏｌ／ｌ、ホスフェート‐シトレート緩衝液 ｐＨ４
．４ １００ｍｍｏｌ／ｌ、過硼酸ナトリウム３．２
ｍｍｏｌ／ｌ）１ｍｌを添加し、２５℃で３０分間恒温
保持し、かつＡＦＰ含量の尺度として光学濃度を４２２
ｎｍで測定した。
【００３９】例２
Ｔ捕捉試験
測定を、過剰量のＴＢＧを飽和させるためにＴ４を試料
に添加する方法で行なった。この測定によりチロキシン
結合率（ＴＢＩ）に直接比例する較正曲線が得られた。
に添加する方法で行なった。この測定によりチロキシン
結合率（ＴＢＩ）に直接比例する較正曲線が得られた。
【００４０】試料：試料として、ヒト血清中で定義され
た量のＴＢＧ及びＴ４を含有する標準液を使用した。試
料１についてはＴＢＩ０．４４が得られ、試料２につい
てはＴＢＩ１．４４が得られた（ベーリンガー・マンハ
イム社（Ｂｏｅｈｒｉｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｇｍ
ｂＨ）のエンツィームン‐テストの作業手引書（Ａｒｂ
ｅｉｔｓａｎｌｅｉｔｕｎｇ ｚｕ Ｅｎｚｙｍｕｎ−
Ｔｅｓｔ）ＴＢＫ（登録商標）、注文Ｎｏ．２４９４１
６を参照のこと）。
た量のＴＢＧ及びＴ４を含有する標準液を使用した。試
料１についてはＴＢＩ０．４４が得られ、試料２につい
てはＴＢＩ１．４４が得られた（ベーリンガー・マンハ
イム社（Ｂｏｅｈｒｉｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｇｍ
ｂＨ）のエンツィームン‐テストの作業手引書（Ａｒｂ
ｅｉｔｓａｎｌｅｉｔｕｎｇ ｚｕ Ｅｎｚｙｍｕｎ−
Ｔｅｓｔ）ＴＢＫ（登録商標）、注文Ｎｏ．２４９４１
６を参照のこと）。
【００４１】
試薬１
ストレプタビジンとＰＯＤとからの接合体１００Ｕ／ｌ
Ｔ４ ３６ｐｍｏｌ／ｌ バルビツル酸ナトリウム１２０ｍｍｏｌ／ｌホスフェー
ト緩衝液 ｐＨ８．６ １８．２ｍｍｏｌ／ｌウシ
血清アルブミン０．２重量％ 試薬２ Ｔ４とビオチンとからの接合体０．２ｎｍｏｌ／ｌＴ４
に抗するポリクローナル抗体からの抗Ｔ４‐Ｆａｂ′‐
ビオチン（例１に相応して製造された）０．１５ｍｇ／
ｌ バルビツル酸ナトリウム１２０ｍｍｏｌ／ｌホスフェー
ト緩衝液 ｐＨ８．６ １８．２ｍｍｏｌ／ｌウシ
血清アルブミン０．２重量％ 試料５０μｌを試薬１ ５００μｌと一緒にストレプ
タビジンで被覆されたポリスチレン容器中に注入し、か
つ２５℃で３０分間恒温保持した。この混合物に試薬２
５００μｌを添加し、かつ２５℃で３０分間恒温保
持した。引き続き、水で洗浄し、かつＡＢＴＳ溶液（例
１を参照のこと）１ｍｌを添加し、２５℃で３０分間恒
温保持し、かつチロキシン結合率の尺度として光学濃度
を４２２ｎｍで測定した。この結果は図１から見て取る
ことができる。
Ｔ４ ３６ｐｍｏｌ／ｌ バルビツル酸ナトリウム１２０ｍｍｏｌ／ｌホスフェー
ト緩衝液 ｐＨ８．６ １８．２ｍｍｏｌ／ｌウシ
血清アルブミン０．２重量％ 試薬２ Ｔ４とビオチンとからの接合体０．２ｎｍｏｌ／ｌＴ４
に抗するポリクローナル抗体からの抗Ｔ４‐Ｆａｂ′‐
ビオチン（例１に相応して製造された）０．１５ｍｇ／
ｌ バルビツル酸ナトリウム１２０ｍｍｏｌ／ｌホスフェー
ト緩衝液 ｐＨ８．６ １８．２ｍｍｏｌ／ｌウシ
血清アルブミン０．２重量％ 試料５０μｌを試薬１ ５００μｌと一緒にストレプ
タビジンで被覆されたポリスチレン容器中に注入し、か
つ２５℃で３０分間恒温保持した。この混合物に試薬２
５００μｌを添加し、かつ２５℃で３０分間恒温保
持した。引き続き、水で洗浄し、かつＡＢＴＳ溶液（例
１を参照のこと）１ｍｌを添加し、２５℃で３０分間恒
温保持し、かつチロキシン結合率の尺度として光学濃度
を４２２ｎｍで測定した。この結果は図１から見て取る
ことができる。
【００４２】例３
Ｔ４に抗する抗体の測定
試料として、Ｔ４に抗するポリクローナル抗体の標準溶
液を濃度０ｍｇ／ｌ、０．５ｍｇ／ｌ及び１．０ｍｇ／
ｌで使用した。
液を濃度０ｍｇ／ｌ、０．５ｍｇ／ｌ及び１．０ｍｇ／
ｌで使用した。
【００４３】
試薬：
Ｔ４‐ビオチン接合体１０ｍｍｏｌ／ｌストレプタビジ
ン‐ＰＯＤ接合体５０Ｕ／ｌバルビツル酸ナトリウム１
２０ｍｍｏｌ／ｌホスフェート緩衝液 ｐＨ８．６
１８．２ｍｍｏｌ／ｌ８‐アミノ‐１‐ナフタレンス
ルホン酸１．２７ｍｍｏｌ／ｌ ウシ血清アルブミン０．２重量％ 試料５０μｌを試薬１ｍｌと一緒にストレプタビジンで
被覆されたポリスチレン容器中で２５℃で３０分間恒温
保持した。引き続き、洗浄し、かつＡＢＴＳ溶液（例１
を参照のこと）１ｍｌを添加し、２５℃で３０分間恒温
保持し、かつＴ４に抗する抗体の含量の尺度として光学
濃度を４２２ｎｍで測定した。この結果は図２から見て
取ることができる。
ン‐ＰＯＤ接合体５０Ｕ／ｌバルビツル酸ナトリウム１
２０ｍｍｏｌ／ｌホスフェート緩衝液 ｐＨ８．６
１８．２ｍｍｏｌ／ｌ８‐アミノ‐１‐ナフタレンス
ルホン酸１．２７ｍｍｏｌ／ｌ ウシ血清アルブミン０．２重量％ 試料５０μｌを試薬１ｍｌと一緒にストレプタビジンで
被覆されたポリスチレン容器中で２５℃で３０分間恒温
保持した。引き続き、洗浄し、かつＡＢＴＳ溶液（例１
を参照のこと）１ｍｌを添加し、２５℃で３０分間恒温
保持し、かつＴ４に抗する抗体の含量の尺度として光学
濃度を４２２ｎｍで測定した。この結果は図２から見て
取ることができる。
【００４４】例４
ＩｇＧ‐ビオチン（１：１）の製造
１） ＴＳＨ（ＥＣＡＣＣ８７１２２２０２）に抗す
るモノクローナル抗体５０ｍｇを２倍モル過剰量のＤ‐
ビオチニル‐ξ‐アミドカプロン酸‐Ｎ‐ヒドロキシ‐
スクシンイミドエステルとＪＡＣＳ １００（１９７
８）、３５８５〜３５９０により反応させた。主要生成
物としてモノビオチニル化ＩｇＧ′ｓ及び分離される高
ビオチニル化副生成物が得られる。
るモノクローナル抗体５０ｍｇを２倍モル過剰量のＤ‐
ビオチニル‐ξ‐アミドカプロン酸‐Ｎ‐ヒドロキシ‐
スクシンイミドエステルとＪＡＣＳ １００（１９７
８）、３５８５〜３５９０により反応させた。主要生成
物としてモノビオチニル化ＩｇＧ′ｓ及び分離される高
ビオチニル化副生成物が得られる。
【００４５】
２） 分離は、例えば欧州特許出願公開第０ １３１
３４３号明細書に記載され ているＤＩＰクロマトグラフィー（Δ‐等電点（Ｄｅｌ
ｔａ‐Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ‐Ｐｏｉｎｔ））を用い
て行なった。
３４３号明細書に記載され ているＤＩＰクロマトグラフィー（Δ‐等電点（Ｄｅｌ
ｔａ‐Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ‐Ｐｏｉｎｔ））を用い
て行なった。
【００４６】混合物の分離は、モノ‐Ｓカチオン交換カ
ラム（Ｍｏｎｏ‐Ｓ Ｋａｔｉｏｎｅｎａｕｓｔａｕｓ
ｃｈｅｒｓａｅｕｌｅ）（ファルマシア社（Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ））で行なった。
ラム（Ｍｏｎｏ‐Ｓ Ｋａｔｉｏｎｅｎａｕｓｔａｕｓ
ｃｈｅｒｓａｅｕｌｅ）（ファルマシア社（Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ））で行なった。
【００４７】混合物をカリウムピロホスフェート緩衝液
１ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６．９（緩衝液Ａ）中に供給した
。結合された成分を線状勾配の接触によってカリウムピ
ロホスフェート緩衝液２０ｍｍｏｌ／ｌ ／ Ｎａ
Ｃｌ２００ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６．９（緩衝液Ｂ）で溶
離した。純粋なモノビオチニル化ＩｇＧ画分が高い収率
で、より高いビオチニル化度を有するプールとともに得
られた。
１ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６．９（緩衝液Ａ）中に供給した
。結合された成分を線状勾配の接触によってカリウムピ
ロホスフェート緩衝液２０ｍｍｏｌ／ｌ ／ Ｎａ
Ｃｌ２００ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６．９（緩衝液Ｂ）で溶
離した。純粋なモノビオチニル化ＩｇＧ画分が高い収率
で、より高いビオチニル化度を有するプールとともに得
られた。
【００４８】例５
Ｆａｂ‐ビオチン（１：１）の製造
１） ＴＳＨ（ＥＣＡＣＣ８７１２２２０２）に抗す
るモノクローナル抗体を、ジョンストン（Ａ． Ｊｏｈ
ｎｓｔｏｎｅ）、ソープ（Ｒ． Ｔｈｏｒｐｅ）著；Ｉ
ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐ
ｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ（１９８２）、５２〜５３によ
りＦａｂに分解した。
るモノクローナル抗体を、ジョンストン（Ａ． Ｊｏｈ
ｎｓｔｏｎｅ）、ソープ（Ｒ． Ｔｈｏｒｐｅ）著；Ｉ
ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐ
ｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ（１９８２）、５２〜５３によ
りＦａｂに分解した。
【００４９】Ｆａｂ５０ｍｇを、例４に記載された通り
に反応させた。
に反応させた。
【００５０】
２） 分解は、本例では変更された条件下で行なった
： 緩衝液Ａ：ＭＥＳ５０ｍｍｏｌ
／ｌ、ｐＨ５．６ 緩衝液Ｂ：ＭＥ
Ｓ５０ｍｍｏｌ／ｌ ／ ＮａＣｌ２００ｍｍｏｌ
／ ｌ、ｐＨ
５．６上記条件下で、Ｆａｂ‐ビオチンを高い収率下で
純粋に得ることができた。
： 緩衝液Ａ：ＭＥＳ５０ｍｍｏｌ
／ｌ、ｐＨ５．６ 緩衝液Ｂ：ＭＥ
Ｓ５０ｍｍｏｌ／ｌ ／ ＮａＣｌ２００ｍｍｏｌ
／ ｌ、ｐＨ
５．６上記条件下で、Ｆａｂ‐ビオチンを高い収率下で
純粋に得ることができた。
【００５１】
略称
ビオチン Ｘ‐ＯＳｕ：
Ｎ‐ビオチニル‐ξ‐アミノカプロン酸‐ヒドロキシス
クシンイミドエステル ＭＥＳ：２‐（Ｎ‐モルホリノ）エタンスルホン酸ＫＰ
Ｐ： カリウムピロホスフェートＲＳＡ： ウシ血
清アルブミン ＰＯＤ： ペルオキシダーゼ 例６ ＴＳＨ試験 試験を、例５によりＦａｂ‐ビオチンとして得られた、
ＴＳＨに抗する２つのモノクローナル抗体（ＥＣＡＣＣ
８７１２２２０１及びＥＣＡＣＣ８７１２２２０２）か
らの混合物を用いて実施した。
クシンイミドエステル ＭＥＳ：２‐（Ｎ‐モルホリノ）エタンスルホン酸ＫＰ
Ｐ： カリウムピロホスフェートＲＳＡ： ウシ血
清アルブミン ＰＯＤ： ペルオキシダーゼ 例６ ＴＳＨ試験 試験を、例５によりＦａｂ‐ビオチンとして得られた、
ＴＳＨに抗する２つのモノクローナル抗体（ＥＣＡＣＣ
８７１２２２０１及びＥＣＡＣＣ８７１２２２０２）か
らの混合物を用いて実施した。
【００５２】
工程１：
ホスフェート緩衝液５０ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ７．５、１
ｍｌ中のＦａｂ‐ビオチン混合物３μｇ、ＲＳＡ０．１
％を試料（ＴＳＨで増加されたヒト血清）２００μｌと
一緒にストレプタビジンで被覆された容器（例１、ＡＦ
Ｐを参照のこと）中で２時間恒温保持した。その後、結
合されていない材料を洗い落した。
ｍｌ中のＦａｂ‐ビオチン混合物３μｇ、ＲＳＡ０．１
％を試料（ＴＳＨで増加されたヒト血清）２００μｌと
一緒にストレプタビジンで被覆された容器（例１、ＡＦ
Ｐを参照のこと）中で２時間恒温保持した。その後、結
合されていない材料を洗い落した。
【００５３】
工程２：
緩衝液（上記参照のこと）１ｍｌ中のストレプタビジン
‐ＰＯＤ‐接合体２００ｍＵを１時間恒温保持し、かつ
その後に結合されていない材料を洗い落した。
‐ＰＯＤ‐接合体２００ｍＵを１時間恒温保持し、かつ
その後に結合されていない材料を洗い落した。
【００５４】
工程３：
基質溶液（例１、ＡＦＰを参照のこと）１ｍｌを１時間
恒温保持し、かつＴＳＨ含量の尺度として光学濃度を４
２２ｎｍで測定した。
恒温保持し、かつＴＳＨ含量の尺度として光学濃度を４
２２ｎｍで測定した。
【図１】チロキシン結合率の測定についての結果が描か
れている線図である。
れている線図である。
【図２】抗Ｔ４抗体の測定についての結果が描かれてい
る線図である。
る線図である。
Claims (10)
- 【請求項１】 リガンドを免疫学的に測定するための
方法において、測定すべきリガンドをａ）特異的結合能
を有する物質Ｐ２の、その分子のうち少なくとも１個が
標識を有する少なくとも分子２個並びにｂ）Ｐ２に対し
て１価の結合能を有する結合成分Ｐ１と、測定すべきリ
ガンドに対する結合部位Ｒ１とからなる受容体Ｒと反応
させ、かつ標識を測定することを特徴とするリガンドの
免疫学的測定方法。 - 【請求項２】 不均質相中で作業を行ない、かつこの
ために、固相に結合され、かつ標識化されていない分子
Ｐ２を使用する請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 均質相中で作業を行ない、かつ全ての
分子Ｐ２を標識化された形で使用する請求項１記載の方
法。 - 【請求項４】 付加的にリガンドもしくはリガンド類
似体とＰ１とからなる接合体Ｋを恒温保持の際に添加す
る請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項５】 Ｐ１がビオチン、ハプテン又はエピト
ープである請求項１から４までのいずれか１項に記載の
方法。 - 【請求項６】 Ｐ２がアビジン、ストレプタビジン、
これらのポリマー又は抗体もしくは抗体フラグメントで
ある請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項７】 Ｒ１がハプテン、エピトープ、ＤＮＡ
‐もしくはＲＮＡ配列、又は高分子である請求項１から
６までのいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項８】 リガンドを免疫学的に測定するための
試薬において、該試薬が、少なくとも部分的に標識化さ
れた形で存在する、特異的結合能を有する物質Ｐ２、並
びにＰ２に対して１価の結合能を有する結合成分Ｐ１と
、測定すべきリガンドに対する結合部位Ｒ１とからなる
受容体Ｒを含有することを特徴とする、リガンドの免疫
学的測定のための試薬。 - 【請求項９】 該試薬が固相に結合されているか又は
固相と結合可能である標識化されていないＰ２を含有す
る請求項８記載の試薬。 - 【請求項１０】 該試薬が付加的にリガンドもしくは
リガンド類似体とＰ１とからの接合体Ｋを含有する請求
項８又は９記載の試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4006054.3 | 1990-02-26 | ||
| DE4006054A DE4006054A1 (de) | 1990-02-26 | 1990-02-26 | Verfahren zur immunologischen bestimmung von liganden |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04216465A true JPH04216465A (ja) | 1992-08-06 |
| JP2501960B2 JP2501960B2 (ja) | 1996-05-29 |
Family
ID=6401009
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3024556A Expired - Lifetime JP2501960B2 (ja) | 1990-02-26 | 1991-02-19 | リガンドを免疫学的に測定するための方法及び試薬 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0444561B1 (ja) |
| JP (1) | JP2501960B2 (ja) |
| KR (1) | KR940008091B1 (ja) |
| AT (1) | ATE145479T1 (ja) |
| AU (1) | AU647449B2 (ja) |
| CA (1) | CA2034922A1 (ja) |
| DE (2) | DE4006054A1 (ja) |
| ES (1) | ES2096596T3 (ja) |
| ZA (1) | ZA911343B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7138251B1 (en) | 1996-04-22 | 2006-11-21 | Amgen Inc. | Polynucleotides encoding a neurotrophic factor receptor |
| AU7165998A (en) * | 1997-05-30 | 1998-12-30 | Amgen, Inc. | Neurotrophic factor receptors |
| WO2005062048A1 (de) | 2003-12-01 | 2005-07-07 | Dade Behring Marburg Gmbh | Homogenes nachweisverfahren |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5510590A (en) * | 1978-05-04 | 1980-01-25 | Wellcome Found | Enzyme immunity quantity analysis |
| JPS60252265A (ja) * | 1984-05-29 | 1985-12-12 | Toray Ind Inc | 発光試薬およびそれを用いる生物学的に活性な物質の測定法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4228237A (en) * | 1978-09-21 | 1980-10-14 | Calbiochem-Behring Corp. | Methods for the detection and determination of ligands |
| US4495296A (en) * | 1979-05-21 | 1985-01-22 | New York Blood Center, Inc. | Labeled anti-hapten antibodies and their use as a universal reagent for solid phase radio- and/or enzyme-immunoassays |
| NZ211888A (en) * | 1984-05-10 | 1987-08-31 | Abbott Lab | Biotin-antibiotin immunoassay for detecting ligands |
| IE64286B1 (en) * | 1988-05-25 | 1995-07-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the determination of an immunologically detectable substance and a suitable vessel therefor |
| DE3834766A1 (de) * | 1988-10-12 | 1990-04-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung einer spezifisch bindefaehigen substanz |
-
1990
- 1990-02-26 DE DE4006054A patent/DE4006054A1/de not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-01-25 CA CA002034922A patent/CA2034922A1/en not_active Abandoned
- 1991-02-12 AU AU71013/91A patent/AU647449B2/en not_active Ceased
- 1991-02-19 JP JP3024556A patent/JP2501960B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-02-25 DE DE59108355T patent/DE59108355D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-02-25 ZA ZA911343A patent/ZA911343B/xx unknown
- 1991-02-25 EP EP91102712A patent/EP0444561B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-02-25 ES ES91102712T patent/ES2096596T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-02-25 AT AT91102712T patent/ATE145479T1/de active
- 1991-02-26 KR KR1019910003058A patent/KR940008091B1/ko not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5510590A (en) * | 1978-05-04 | 1980-01-25 | Wellcome Found | Enzyme immunity quantity analysis |
| JPS60252265A (ja) * | 1984-05-29 | 1985-12-12 | Toray Ind Inc | 発光試薬およびそれを用いる生物学的に活性な物質の測定法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2501960B2 (ja) | 1996-05-29 |
| ES2096596T3 (es) | 1997-03-16 |
| AU7101391A (en) | 1991-08-29 |
| EP0444561A3 (en) | 1992-10-14 |
| KR910021586A (ko) | 1991-12-20 |
| DE59108355D1 (de) | 1997-01-02 |
| ATE145479T1 (de) | 1996-12-15 |
| DE4006054A1 (de) | 1991-08-29 |
| EP0444561A2 (de) | 1991-09-04 |
| CA2034922A1 (en) | 1991-08-27 |
| EP0444561B1 (de) | 1996-11-20 |
| AU647449B2 (en) | 1994-03-24 |
| KR940008091B1 (ko) | 1994-09-02 |
| ZA911343B (en) | 1991-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6184042B1 (en) | Method for reducing hook effect in an immunoassay | |
| US4624930A (en) | Immunochemical process | |
| KR920005963B1 (ko) | 특이적으로 결합가능한 물질의 측정방법 | |
| US5143852A (en) | Antibodies to ligand analogues and their utility in ligand-receptor assays | |
| JPH0467914B2 (ja) | ||
| KR920000057B1 (ko) | 특이적으로 결합가능한 물질의 측정 방법 및 시약 | |
| US5792606A (en) | Nucleic acid hybridization based assay for determining a substance of interest | |
| EP0124366B1 (en) | Method of measuring biological ligands | |
| JPH09500215A (ja) | 被分析成分を測定する方法及び患者血清中の抗−ｔｓｈ受容体自己抗体の測定へのその使用 | |
| JP2002296281A (ja) | 改良された均一系イムノアッセイ法 | |
| US5437981A (en) | Method for the immunological determination of ligands | |
| CA1335265C (en) | Solid phase matrices and a process for the production thereof | |
| JPH05295000A (ja) | 共有結合的交雑種抗体、その調製法およびこれを使用する均質的免疫検定法 | |
| JPH0224559A (ja) | 免疫学的に検出可能な物質の測定法、反応容器及びイムノアツセイ原理による方法における種々のパラメーターの測定法 | |
| JPH01209370A (ja) | 免疫活性物質の測定法及び測定試薬 | |
| JP2501960B2 (ja) | リガンドを免疫学的に測定するための方法及び試薬 | |
| US4885255A (en) | Immunochemical process and reagent for the determination of a polyvalent antigen in a liquid sample | |
| JPH02145967A (ja) | ビオチン架橋および万能固相を利用するイムノアッセイ | |
| JPH05223817A (ja) | 免疫学的に結合可能な物質の定量方法 | |
| AU703940B2 (en) | Regenerable solid phase for carrying out specific binding reactions | |
| JP2672151B2 (ja) | 磁性体を利用した酵素免疫測定法 | |
| CA2420768C (en) | Conjugates of defined stoichiometry | |
| JP4302798B2 (ja) | リガンド結合表面の調製方法 | |
| JP2729917B2 (ja) | 生体液中アナライトの遊離部分の測定方法 | |
| JP2003004748A (ja) | 膵臓癌診断用試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090313 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100313 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110313 Year of fee payment: 15 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |