JPH04211022A

JPH04211022A - 光学異性体分離剤

Info

Publication number: JPH04211022A
Application number: JP3046537A
Authority: JP
Inventors: Takashi Kajima; 梶間　隆; Yoichi Iimura; 洋一飯村; Naoko Suzuki; 直子鈴木; Naoki Asakawa; 直樹浅川; Teiichi Hattori; 服部　禎一; Hachiro Sugimoto; 八郎杉本
Original assignee: Eisai Co Ltd
Current assignee: Eisai Co Ltd
Priority date: 1990-03-15
Filing date: 1991-03-12
Publication date: 1992-08-03
Anticipated expiration: 2015-05-29
Also published as: JP3046369B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

［０００１］

【産業上の利用分野】本発明は光学異性体の分離剤に関
し、詳しくは、コラン酸あるいはコラン酸誘導体を担体
に結合又は被覆した固定相からなる光学異性体の分離剤
に関する。［０００２］従って、本発明は光学異性体の分離が技術
課題として提起されている化学の分野とりわけ医薬品の
分野において利用される。［０００３］

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】不斉炭
素原子を含むキラルな化合物についてその光学異性体を
分離することが、特に医薬品の分野において強く要求さ
れている。［０００４］光学異性体の分離法としては、クロマトグ
ラフィーの進歩により、とりわけ高速液体クロマトグラ
フィーにより分離分析する方法が知られている。即ち、
分割しようとする対掌体を担体でも区別可能な形に変換
して分離する、キラル（ｃｈｉｒａｌ）誘導体化法、具
体的には光学活性な試薬を目的対掌体のクロマトグラフ
分離に先立って反応させ、いわゆるジアステレオマーと
する方法、また、金属イオンと配位する光学活性配位子
とを移動相に添加し、注入された目的対掌体とカラム内
で配位子交換させ、ジアステレオメックな錯体形成を意
図させるキラル移動相法がある。［０００５］一方、クロマトグラフ担体に光学的な立体
配置を持つ化合物を結合させた分離カラムを用いる方法
、即ちキラル固定相法がある。［０００６］近年、医薬品分野では光学活性化合物をそ
れぞれの薬理作用、毒性を研究するにあたって分離分割
することが要求され、分離手段としてキラル固定相を用
いて分離する研究がなされている。［０００７］例えば、シクロデキストリンをシリカゲル
に結合した固定相を使用して分離する方法（Ｄ、　Ｍ、
Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｃｈｒｏ
ｍａｔｇｒ、　Ｓｃｉ、、　２２．４１１（１９８４）
　、米国特許第４．５３９．９９９号明細書）　、（Ｒ
）　−Ｎ−（３，５−ジニトロベンゾイル）フェニルグ
リシンを使用する方法（Ｉ。Ｗ、　Ｖａｉｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｃｈｒｏ
ｍａｔｇｒ、、　２８４．１１７（１９８４））、牛血
清アルブミンをシリカあるいはアガロースに結合した固
定相を使用して分離する方法（Ｓ、　Ａｌｌｅｎｍａｒ
ｋ　ｅｔａｌ、、　Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｇｒ、、　２
６４．６３（１９８３）、　Ｓ、　Ａｌｌｅ−ｎｍａｒ
ｋｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｇｒ、、　２
３７．４７３（１９８２））、キラルな血清蛋白である
α１−酸性糖蛋白を使用する技術（ＪＯｎｇｅｒ。Ｈｅｒｍａｎｓｓｏｎ、　Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｇｒ、
、　３２５．３７９（１９８５））、オボムコイドとそ
の官能類似体等を使用して分離する方法（特開昭６０−
４１６１９号公報）等がある。（０００８］また、本発明者の一人はすでに固定相とし
てオボムコイドを担体に結合せしめた技術を開示してい
る（特開昭６４−３１３０号公報）。またアビジンを担
体に結合せしめた技術も開示している（特開昭６４−３
１２９号公報）。

【０００９】しかしながら、これらの技術は使用資材に
おいて一般に高価である。本発明の目的は、安価で優れ
た分離力を有する光学異性体分離剤を提供することにあ
る。［００１０１

【課題を解決するための手段］本発明者らは、光学異性
体の分離剤について上記課題を解決すべく鋭意検討した
結果、本発明を完成するに到った。即ち、本発明は、フ
ラン酸あるいはコラン酸誘導体を担体に結合又は被覆し
た固定相からなることを特徴とする光学異性体分離剤を
提供するものである。本発明による光学異性体分離剤は
、安価で光学異性体分離力に優れている。［００１１］以下、本発明の詳細な説明する。本発明に
用いられるコラン酸あるいはコラン酸誘導体としては、
下記の構造式を有する市販のフラン酸、デヒドロコール
酸、コール酸及びそれらの誘導体であるコール酸トリア
セテート、デオキシコール酸、デオキシコール酸ジベン
ゾエート等が挙げられる。［００１２］【化１】［００１３］本発明に用いられる担体としては、コラン
酸誘導体と結合し固定相を形成し得るものであれば特に
限定されないが、本発明における光学異性体の分離は主
として液体クロマトグラフィーによって行われるので、
担体としては、シリカゲル、セルロース、合成ポリマー
等が好ましく用いられる。［００１４］本発明において、コラン酸あるいはコラン
酸誘導体を担体に結合する方法は、固定相を形成するた
めに通常に行われる方法に従って行えばよい。即ち、ア
ミノ基を有するシランカップリング剤、例えば３−アミ
ノ−プロピルトリエトキシシランを用いてトルエン中で
シリカゲルと反応させアミノプロピル化シリカゲルを得
、これを担体とし、次に活性Ｎ−アシルを導入できる試
薬である１、１−カルボニルジイミダゾールを架橋剤と
して、コラン酸あるいはコラン酸誘導体を結合させる方
法などがある。この反応に用いる、■、１−カルボニル
ジイミダゾールの使用量はアミノプロピル化シリカゲル
に対してモル比で１〜４倍が好ましく、更に好ましくは
２〜３倍である。モル比が１倍未満では分離効率が悪く
、また４倍を越えるとアミノプロピル化シリカゲルに結
合する量より過剰となり経済的ではない。シリカゲルに
アミノプロピル基を結合した市販のアミノプロピルシリ
カたとえば、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ（登録商標）　ＮＨ２
を使用してもよい。［００１５］その他の結合方法として、コラン酸あるい
はコラン酸誘導体を、シリカゲルを担体とし、３−グリ
シドキシプロピルトリメトキシシランを架橋剤として結
合したり、あるいはセルロースを担体としブロムシアン
で活性化してから結合したり、陽イオン交換合成ポリマ
ーに結合したりする方法が挙げられる。［００１６１本発明の分離剤は前記したごとく、コラン
酸あるいはコラン酸誘導体を担体に結合し又は被覆して
得られた固定相からなることを特徴とする。従って、本
発明の分離剤には、当該固定相が必須の構成成分として
含まれるが、同時に分離剤中に他の成分、例えばシリカ
ゲルやセルロースが任意に選択されて加えられることは
自由であり分離効率の向上のために適宜行うことができ
る。［００１７］本発明において光学異性体とは分子内に不
斉炭素原子を有するキラル化合物をいい、多くの医薬品
にその例をみることができる。［００１８１本発明の分離剤は主として液体クロマトグ
ラフィーにおいて使用される。従ってその使用方法は液
体クロマトグラフィーにおける通常の操作によって行え
ばよく、例えば本発明の分離剤をカラムに充填し、光学
異性体に係るラセミ体をチャージ（ｃｈａｒｇｅ）　Ｌ
／、次に、リン酸緩衝液、エタノール水溶液、イソプロ
パツール等の移動相を用い、保持時間の差により、光学
異性体を単離することができる。［００１９］

【実施例】以下実施例により本発明を更に詳細に説明す
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。［００２０１実施例１（１）デオキシコール酸ジベンゾエートの合成ベンジル
デオキシコレート（Ｂｅｎｚｙｌ　ｄｅｏｘｙｃｈｏｌ
ａｔｅ）の合成デオキシコール酸２５．０ｇをアセトニトリル５００　
ｍｌに溶解し、１，８−ジアザビシクロ〔５，４，０）
　−７−ウンデセン（ＤＢＵ）　１９．０ｍｌと臭化ベ
ンジル１８．９ｍｌを加えた。１５時間加熱還流した後
室温まで放冷し、減圧濃縮した。得られた残渣を酢酸エ
チルにて希釈した後、０．ＩＮ塩酸、飽和炭酸水素ナト
リウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した
。硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧濃縮し、得られた
残渣をシリカゲルカラム（塩化メチレン−メタノール）
にて精製し、標題化合物２４．４ｇ（収率７９％）を得
た。［００２１１分子式Ｃ３１Ｈ４６０４ ’　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　　δ：０．６４　（３
Ｈ，ｓ）、０．９０　（３Ｈ，ｓ）、０．９３　（３Ｈ
，ｄ）、０．９５〜２゜４３　（２８Ｈ，ｍ）　、３．
３５〜３．７０（ＩＨ，ｍ）　、３．９０（ＩＨ，ｂｓ
）、５゜０６　（２Ｈ，Ｓ）、７．２８　（５Ｈ，ｓ）
へ゛ンシ゛ル３，１２−ジー０−ベンゾイルデオキシコ
レート（Ｂｅｎｚｙｌ　３．１２−ｄｉ−０−ｂｅｎｚ
ｏｙｌｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）の合成ベンジル　デ
オキシコレート４．３０ｇをピリジン５０ｍ１に溶解し
、塩化ベンゾイル４．１４ｍ１を加えた。室温にて２日
間撹拌した後減圧濃縮し、得られた残渣を酢酸エチルに
て希釈し、水、飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した
。硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧濃縮し、得られた
残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン−酢酸エチル）にて
精製し、標題化合物６．００ｇ（収率９７％）を得た。［００２２］分子弐　Ｃ４ｓＨｂ　４０ｓ’ＨＮＭＲ（
ＣＤＣ１３）　δ：０．８０　（３Ｈ，ｓ）、０．９３　（３Ｈ，ｄ）、０
．９７　（３Ｈ，ｓ）、１．００〜２゜４５　（２６Ｈ
，ｍ）　、４．６０〜５．００　　（ＩＨ，ｍ）、５．
０２　（２Ｈ，ｓ）、５．３２　（ＩＨ，ｂｓ）　、７
．１０〜８．１２（１０Ｈ，ｍ）、７．２８　（５Ｈ，
ｓ）デオキシコール酸ジベンゾニー）（Ｄｅｏｘｙｃｈ
ｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｄｉｂｅｎｚｏａｔｅ　）の合成ベンジル　３，１２−ジー０−ベンゾイルデオキシコレ
−）６．００　ｇをテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）　１
２０ｍ１に溶解し、１０％パラジウム−炭素１ｇを加え
た。常温常圧にて４時間水素添加した後、触媒を濾別し
、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラ
ム（塩化メチレン−メタノール）にて精製し、さらにア
セトニトリルから再結晶化し、標題化合物４．６０ｇ　
（収率器％）を白色結晶として得た。［００２３］融点（’Ｃ）　　；　１６９〜１７０比旋
光度　；〔α〕２４Ｄ＋１０８°（ｃ　＝１．００．　
ＣＨＣｌａ　）元素分析結果；Ｃ３８Ｈ４８０６として
Ｈ理論値（％）　　７１５．９７　８．０５１−一ミリ漏
り値（％）　　７５，９８　８．０６（２）　　固定化
およびカラム調整上記方法により得たデオキシコール酸ジベンゾエート０
゜５ｇ　（０，８３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（
ＴＨＦ）　４ｍｌに溶かし、水冷した。水冷下、１，１
−カルボニルジイミダゾール（ＬＬ　−Ｃａｒｂｏｎｙ
ｌｄｉｉｍｉｄａｓｏｌｅ）　０．１３５ｇ（０，８３
ｍｍｏｌ）／２ｍ１ＴＨＦ溶液を添加し、３時間ゆっく
りと撹拌した。その後、ヌクレオジル５ＮＨ２（Ｎｏ−
ｃｌｅｏｓｉｌ（登録商標）５ＮＨ２ニアミノプロピル
シリカゲル）２．０ｇを加え、室温で５時間反応させた
。反応液を濾過後、残渣をテトラヒドロフラン、メタノ
ールの順に洗浄後、減圧乾燥した。［００２４］元素分析結果Ｃ：　１５．７７％、　　Ｈ：２．１４％、　　Ｎ：１
．０２％上記方法により得たデオキシコール酸ジベンゾ
エート固定化シリカゲルをスラリー法により、ステンレ
ススチールカラム（４，６ｍｍ１．Ｄ、　Ｘ１５０　ｍ
ｍ）に充填し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）分析用カラムとした。［００２５］実施例２ＫｕｒａｍＯｌＯらの方法（Ｔ、　Ｋｕｒａｍｏｔｏ、
　Ｋ、　Ｋｉｈｉｒａ、　Ｎ、　Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ　
ａｎｄ　Ｔ、　Ｈｏ５ｈｉｔａ、Ｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒ
ｍ、　Ｂｕｌｌ、、　２９．１１３６（１９８１））に
より得たコール酸トリアセテート０．５ｇ　（０，９４
ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）　　５ｍｌ
に溶かし、水冷した。水冷下、１，１−力ルボニルジイ
ミダゾール（１，ＩＣａｒｂｏｎｙｌｄｉｉｍｉｄａｚ
ｏｌｅ）　０．１５　ｇ　（０，９４ｍｍｏｌ）　７４
ｍ１ＴＨＦ溶液を添加し、３時間ゆっくりと撹拌した。その後、ヌクレオジル５ＮＨ２（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　
（登録商標）　５ＮＨ２ニアミノプロピルシリカゲル）
２．０ｇを加え、室温で５時間反応させた。反応液を濾
過後、残渣をテトラヒドロフラン、メタノール、ｎ−ヘ
キサンの順に洗浄後、減圧乾燥した。［００２６］元素分析結果Ｃ：　８．３２％、　　Ｈ：１．５７％、　　Ｎ：１．
７４％上記方法により得たコール酸トリアセテート固定
化シリカゲルをスラリー法により、ステンレススチール
カラム（４，６ｍｍ１．　Ｄ、　Ｘ１５０　ｍｍ）に充
填し、ＨＰＬＣ分析用カラムとした。［００２７］実施例３粒径１０μ、孔径１０〇八、表面積３５０ｍ２／ｇのシ
リカゲル５ｇを無水トルエン７０ｍ１中で９０℃、２４
時間、３−アミノプロピルトリエトキシシラン５ｇと反
応させてアミノプロピル化シリカゲルを合成した。次に
市販のコール酸０．５ｇ（１゜２ｍｍｏｌ）をテトラヒ
ドロフラン１２ｍ１に溶かし、Ｎ−ヒドロキシコハク酸
イミド０．１４ｇ（１，２ｍｍｏｌ）　、アミノプロピ
ル化シリカゲル２．０ｇ、さらに１，３−ジシクロへキ
シルカルボジイミド０．２５ｇ　（１，２ｍｍｏ　ｌ）
を加え、室温にて２４時間ゆっくり撹拌した。反応終了
後、反応液を濾過、残渣をテトラヒドロフラン、メタノ
ールの順に洗浄後、減圧乾燥した。［００２８］元素分析結果Ｃ：　１１．６３％、Ｈ：　１．９３％、Ｎ　：　１．
００％上記方法により得たコール酸固定化シリカゲルを
ステンレススチールカラム（４，６ｍｍφＸ１５０　ｍ
ｍ）にテトラブロムエタン、メタノール、四塩化炭素か
らなる平衡スラリー法により充填した。［００２９］実施例４市販デヒドロコール酸１．０　ｇ　（２，５ｍｍｏ　ｌ
）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）３０　ｍｌに溶か
し、水冷した。水冷下、１，１カルボニルジイミダゾー
ル（１，１−Ｃａｒｂｏｎｙｌ−ｄｉｉｍｉｄａｚｏｌ
ｅ）　０．４ｇ（２，５ｍｍｏｌ）　／１ｍｌ　　ＤＭ
Ｆ溶液を添加し、３時間ゆっくりと撹拌した。その後、
ヌクレオジル５ＮＨ２（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　（登録商
標）　５ＮＨ２ニアミノプロピルシリカゲル）２．０ｇ
を加え、室温で５時間反応させた。反応液を濾過後、残
渣をＤＭＦ、テトラヒドロフラン、メタノールの順に洗
浄後、減圧乾燥した。［００３０１元素分析結果Ｃ：　１０．１３％、　　Ｈ：１．６７％、　　Ｎ：１
．１９％上記方法により得たデヒドロコール酸固定化シ
リカゲルをスラリー法により、ステンレススチールカラ
ム（４，６ｍｍ１．Ｄ、　ｘ１５０　ｍｍ）に充填し、
ＨＰＬＣ分析用カラムとした。［００３１］実施例５デオキシコール酸１．０ｇをアセトニトリル３０　ｍｌ
に溶かし、水冷した。水冷下、１，１−カルボニルジイ
ミダゾール０．４ｇ／ｍｌアセトニトリル溶液を添加し
、３時間ゆっくりと撹拌した。その後、ヌクレオジル５
ＮＨ２（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　（登録商標）　５ＮＨ２
ニアミノプロピルシリカゲル）２゜０ｇを加え、室温で
５時間反応させた。反応液を濾過後、残渣をアセトニト
リル、テトラヒドロフラン、メタノールの順に洗浄後、
減圧乾燥した。［００３２］上記方法により得たデオキシコール酸固定
化シリカゲルをスラリー法により、ステンレススチール
カラム（４，６ｍｍ１．　Ｄ、　Ｘ１６０　ｍｍ）に充
填し、ＨＰＬＣ分析用カラムとした。［００３３］

【発明の効果】以下の実験例によって本発明の効果を示
す。［００３４］実験例１実施例１で用意されたデオキシコール酸ジベンゾエート
固定化カラムを用いて、ＨＰＬＣにより１，１′−ビー
２−ナフトール（１，１’−ｂｉ−２−ｎａｐｈｔｈｏ
ｌ）のエナンチオマーにおける分離を行った。溶出液は
ｎ−ヘキサン：エタノール＝９０：１０、流出速度は０
．５　ｍｌ／ｍｉｎとした。結果を図１に示す。［００３５］尚、図１において、（ａ）はＨＰＬＣの流
出曲線、（ｂ）は各フラクションにおける（＋）一体と
（−）一体の割合を示す図である。［００３６］実験例２実施例５で用意されたデオキシコール酸固定化カラムを
用いて、ＨＰＬＣにより１，１′−ビー２−ナフトール
（１，１’　−ｂ　１２−ｎａｐｈｔｈｏｌ）のエナン
チオマーにおける分離を行った。溶出液はアセトニトリル：水＝３５　：　６５、流出速
度は１ｍｌ／ｍｉｎとした。結果を図２に示す。［００３７１図２より、１，１′−ビー２−ナフトール
のエナンチオマーが分離されていることがわかる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実験例１の結果を示す図であり、（ａ）はＨＰ
ＬＣの流出曲線、（ｂ）は各フラクションにおける（＋
）一体と（−）体の割合を示す図である。

【図２】実験例２の結果を示す図であり、デオキシコー
ル酸固定化カラムを用いて、１，１′−ビー２−ナフト
ールエナンチオマーの分析を行った場合のクロマトグラ
フである。フロントページの続き

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　コラン酸あるいはコラン酸誘導体を担体
に結合又は被覆した固定相からなることを特徴とする光
学異性体分離剤。
【請求項２】　コラン酸誘導体がコール酸、コール酸ト
リアセテート、デオキシコール酸ジベンゾエート、デオ
キシコール酸又はデヒドロコール酸である請求項１記載
の光学異性体分離剤。
【請求項３】　担体がシリカゲル、セルロース又は合成
ポリマーである請求項１又は２記載の光学異性体分離剤
。