JPH04210921A - 新規リン脂質・ヌクレオシド誘導体を有効成分とする抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規リン脂質・ヌクレ
オシド誘導体に関を有効成分とする抗腫瘍剤に関する。 さらに詳しくは、本発明は下記一般式〔■〕

【化１】（
ただし式中、Ｒ１およびＲ２は長鎖脂肪酸残基を示し、
Ｎｓは５−フルオロウリジン−５”−イル基を示す）で
表される新規リン脂質・ヌクレオシド誘導体またはその
塩を有効成分とする抗腫瘍剤に関する。 ［０００２］

【従来の技術】ヌクレオシド系抗腫瘍剤は、種々の型の
腫瘍細胞の化学療法に有用な薬剤として従来から広く臨
床に応用されてきた。しかしながら、化学療法剤として
の応用において、いくつかの問題点が指摘されている。 すなわち、これらヌクレオシド系抗腫瘍剤は、その作用
機作として５′−リン酸化されて活性を発現するもので
あり、加リン酸分解、脱アミノ化等の不活化を受は急速
に不活性な物質に分解されやすいこと、また腫瘍細胞が
、これら抗腫瘍剤に抵抗性を有するようになること、更
に急速に分裂しつつある正常細胞に対しても毒性を表す
ことなど種々の欠点があった。リボヌクレオシドは、細
胞内グリセロリン脂質の生合成や膜の構成に重要な役割
を演じていることから、ヌクレオシドを含むリポヌクレ
オシドが化学的に合成された。 ［０００３］一方、前記ヌクレオシド系抗腫瘍剤の毒性
等の欠点を改善する目的でプロドラッグとして種々の化
合物が化学的に合成されてきた。このような経過から抗
腫瘍作用（細胞毒性）を有するリボヌクレオシドを合成
する試みがなされ、シトシンアラビノシド（ａｒａＣ）
を含むリポヌクレオシドが合成されて、ある程度の効果
が認められていた〔Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　　ｅｔＢｉ
ｏｐｈｙｓ　１ｃａＡｃｔａ、６１９　（１９８０）６
１９−６３１．Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、、１９８２，２
５．１３２２−１３２９）。 ［０００４］

【発明が解決しようとする課題】上述したようなりポヌ
クレオシドは化学的合成法で合成されているために、そ
の合成には多段階反応工程を必要とし、従って収率も低
くしかも工程もはん雑であった。また、そのためにリン
脂質・ヌクレオシド誘導体のヌクレオシド残基成分とし
てシトシンアラビノシドの例しかなく、従って、その抗
腫瘍剤としての効果も、終局的にはシトシンアラビノシ
ド（ａｒａ−Ｃ：１−β−アラビノフラノシルシトシン
）としての効果しかなく、従ってシトシンアラビノシド
に伴う毒性等の欠点は改善されなかった。 ［０００５］

【課題を解決するための手段】このような欠点を解決す
るための一手段としては、シトシンアラビノシド以外の
ヌクレオシド化合物を使用すればよいのであるが、それ
らのリン脂質・ヌクレオシド誘導体を化学的に合成する
には多段階の合成工程を必要とし、反応条件も設定し難
く、合成は実質上困難であった。 ［０００６］本発明者らは、このような欠点を有する合
成法を改善し、新たなリン脂質・ヌクレオシド誘導体を
合成し、前記公知の抗腫瘍剤よりもすぐれた物質を得よ
うとして研究を重ねた結果、グリセロリン脂質と５−フ
ルオロウリジンであるヌクレオシドをホスホリパーゼＤ
の存在下反応させることにより、ヌクレオシドの一級ア
ルコール基とグリセロリン脂質とが容易に反応して、−
般式〔■〕で表される優れた抗腫瘍活性を有する新規な
リン脂質・ヌクレオシド誘導体を得たものである。 ［０００７１本発明は、上記の知見に基づいて完成され
たもので、下記一般式〔■〕

【化１】（ただし式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｎｓは前記と同じ
基を示す）で表されるリン脂質・ヌクレオシド誘導体ま
たはその塩を有効成分とする抗腫瘍剤である。 ［０００８］まず、本発明の一般式〔■〕で表されるリ
ン脂質・ヌクレオシド誘導体を得るために用いられるグ
リセロリン脂質としては、例えば下記一般式（ＩＩ）で
表されるホスファチジルコリン系グリセロリン脂質が挙
げられる。

【化２】

【■〕

（ただし式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同じ基を示し、
Ｒ３はコリン残基を示す） ［０００９］一般式（ＩＩ）で表されるホスファチジル
コリン系グリセロリン脂質において、基Ｒ１、Ｒ２は同
−または異なった長鎖脂肪酸残基を示すものであるが、
それらは例えば炭素数１６〜２０の長鎖脂肪酸残基であ
り、詳細には、例えばバルミトイル、ステアロイル、ド
デカノイルなどの炭素数１６〜２０の長鎖飽和脂肪酸残
基、パルミトオレオイル、オレオイル、リルオイル、リ
ルノイル、アラキトニルなどの１〜４つの不飽和結合を
有する炭素数１６〜２０の長鎖不飽和脂肪酸残基が挙げ
られる。 ［００１０１一般式［ＩＩ：］の化合物として具体的に
はＲ１およびＲ２がともにバルミトイル基で示されるジ
パルミトイルホスファチジルコリン、Ｒ１およびＲ２が
ともにリルオイル基で示されるシリルオイルホスファチ
ジルコリンなどの飽和または不飽和脂肪酸残基を有する
ホスファチジルコリンでもよく、さらにＲ１およびＲ２
が炭素数１６〜２０の長鎖脂肪酸の混合体であるラジー
ル（Ｒａｄｙｌ）基で示される天然のホスファチジルコ
リンでもよい。またこれらのＲ１およびＲ２の基を有す
るホスファチジルコリンは、適宜炭素数１６〜２０の脂
肪酸を用いて合成して得たものでもよく、市販のものを
用いてもよい。 ［００１１］また、本発明に使用されるヌクレオシドと
しては、例えば５−フルオロウリジン［：５−Ｆｌｕｏ
ｒｏｕｒｉｄｉｎｅ；５−Ｆｌｕｏｒｏ−１−β−Ｄ−
ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ−２，４−（ＬＨ，３Ｈ）
ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ　　ｄｉｏｎｅ；以下ＦＵＲと略
す〕が挙げられる。 ［００１２］さらに、一般式〔■〕で表されるリン脂質
・ヌクレオシド誘導体は、前記のグリセロリン脂質とヌ
クレオシドとを、必要に応じて金属イオンの存在下、ホ
スホリパーゼＤを用いて溶媒中で反応せしめて得ること
ができる。用いるホスホリパーゼＤとしては、例えばス
トレプトミセス属に属するストレプトミセス・ニス・ピ
ー−ＡＡ５８６　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　５ｐ
−ＡＡ５８６　；　ＦＥＲＭＰ−６１００）由来のホス
ホリパーゼＤ−Ｐ　（特開昭５８−１５２４８１号公報
、東洋醸造社製カタログ番号Ｐ−３９）が好ましい。ま
たその使用景は、ホスファチジルコリン１ｍｇ当りホス
ホリパーゼＤＯ１０１単位以上、好ましくは１〜１００
単位である。 ［００１３］さらに用いられる溶媒としては、例えばエ
ーテル、ベンゼンまたはクロロホルムなどの有機溶媒と
ｐＨ４〜９の有機溶媒層−水層の＝層系溶媒が挙げられ
る。さらにまた金属イオン形成のための水溶性塩類とし
ては、通常塩化カルシウムが用いられ、また反応温度は
通常２０〜６０℃で、反応時間は３０分〜５時間で充分
である。このようにして得られたリン脂質・ヌクレオシ
ド誘導体は、分液法およびシリカゲルクロマトグラフィ
ーにより精製することができる。 ［００１４１以上述べたような本発明のリン脂質・ヌク
レオシド誘導体の一段階工程合成法は、以下のように示
される。 【化３］ （式中、Ｒ＋　、Ｒ２およびＮｓは前記と同じ意味を有
する） ［００１５］　このようにして得られたリン脂質・ヌク
レオシド誘導体は、リン脂質のリン酸基の部分と用いた
ヌクレオシドの５“位の一級水酸基の部分が塩基交換反
応により結合したものである。さらに本誘導体は、ナト
リウム塩などの無毒性塩となすこともでき、一般に注射
用蒸留水に懸濁して投与することができる。本誘導体は
抗腫瘍剤として、単独または薬剤として許容される担体
と複合して投与される。その組成は一般に投与経路や投
与方法などにより決定される。投与量は一般の薬剤と同
様に、投与されるヒトまたは動物の年令、健康状態、体
重、症状、併用薬剤との相互作用などを考慮して決定さ
れる。例えば注射剤としては、１５〜３０ｍｇ／ｋｇ、
経口剤としては３０〜２００■／ｋｇを投与すればよい
。 ［００１６］ 【発明の効果】このようにして得られた本発明のリン脂
質・ヌクレオシド誘導体は、元の原料として用いたヌク
レオシドと比較して、脂溶性が大きいため生体内に長時
間溜まり（従って活性が持続することになる）、デアミ
ネーション、ホスホリレーション、還元等の不活性化を
受けにくい、生体膜への親和性が高まる、キナーゼの関
与なしに抗腫瘍性ヌクレオシドの５′−モノリン酸体が
細胞内で生成する、等の利点があり、活性が持続、増強
され、毒性が低くなる等の利点を有する。 ［００１７］本発明による新規なリン脂質・ヌクレオシ
ド誘導体は、後に示すように生体内（ｉｎ　　ｖｉｖｏ
）で著名な抗腫瘍作用が認められる。また、更に生体内
に発生した腫瘍が他の部位に転移するのを阻害する、抗
転移効果も認められる。 ［００１８］本発明のリン脂質・ヌクレオシド誘導体に
ついてＰ−３８８白血病（ｌｅｕｋｅｍｉａ　　Ｐ−３
８８ｃａｒｃｉｎｏｍａ）およびエールリッヒ腹水癌（
Ｅｈｒｉｃｈ　　ａｓｃｉｔｅｓ　　ｃａｒｃｉｎｏｍ
ａ）に対する抗腫瘍活性を調べた結果を以下に示す。 ［００１９］ く抗腫瘍作用〉 試料： 表１に記載。 動物： ＢＤＦｌまたは■ＣＲマウス、５〜６週令、雄、１群５
匹、対照群（非薬物投与群）７匹。 ［００２０１腫瘍細胞： Ｐ−３８８白血病細胞：　ｌＸｌ０６１０．２ｍｌをＢ
ＤＦ１マウスの腹腔内に移植。エールリッヒ腹水癌細胞
＝２Ｘ１０６１０．２ｍｌをＩＣＲマウスの腹腔内に移
植。 ［００２１１試料調製投与スケジユール：各試料を超音
波処理によりトリス塩酸緩衝化食塩水に懸濁。マウス体
重１０ｇ当り０．　１ｍｌを腹腔内に投与した。調製試
料は遮光して４℃で保存。投与：Ｐ−３８８白血病；腫
瘍移植の翌日より１日１回、３〜５日間投与。エールリ
ッヒ腹水癌；腫瘍移植後２日日（翌々日）より１日１回
２〜７日間投与。試料投与量は、表１中に示す。 ［００２２］延命率は以下により求めた。 試料投与群の平均延命日数 延命率（ＩＬＳ）（％’）＝　　　　　　　　　　　　
　　Ｘ１００対照群の平均生存日数 ［００２３］観察期間：３５日間（一部　３０日間）最
終田こ生存していたマウスは延命率に加えない。 ［００２４］対照群平均生存日数： Ｐ−３８８白血病移植群ニア、５７−７．７９日エール
リッヒ腹水癌移植群：１５．１４−１５．４３日［００
２５］

【表１】 ［００２６］

【実施例】

以下に本発明の実施例を挙げて具体的に述べるが、本発
明は何らこれらによって限定されるものではない。 実施例　１ ５−フルオロウリジン（ＦＵＲ）４．０ｇを、１００ｍ
Ｍ塩化カルシウム含有１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５゜
６）２０ｍｌに加えて、４５℃で２０分間攪拌した。こ
れに、ホスホリパーゼＤ−Ｐ　（ストレプトミセス属由
来、東洋醸造社製）１０■（比活性：１６０単位／ｍｇ
）およびジパルミトイルホスファチジルコリン１．５ｇ
を３０ｍ１クロロホルム（Ｍｅｒｃｋ社製：液体クロマ
トグラフィー用）溶液として加え、４５℃にて、３時間
攪拌して反応せしめた。反応後、反応液を冷却した。こ
の反応液にメタノール２０ｍ１を加えて分液して有機層
を回収し、残った水層にクロロホルム３０ｍ１およびメ
タノール１５ｍ１を加えて分液した。有機層は合わせて
、水２０ｍ１、メタノール２０ｍ１を加えて分液し、ワ
ットマン１−ＰＳ濾紙にて濾過した後、減圧乾固した。 残渣にクロロホルム：エタノール（１：　１）混液３０
ｍ１を加えて再び減圧乾固後、残渣を少量のクロロホル
ムに溶かし、フラッシュカラム（Ｍｅｒｃｋ社、シリカ
ゲルＡｒｔ９３８５、直径４ｃｍＸ　１５ｃｍ）にチャ
ージして、クロロホルムから、クロロホルム：メタノー
ル混液（２０：　１）、（７：　１）、　（４：１）、
　（３：　１）、　（２：　１）の順にて展開溶出した
。溶出液を減圧乾固して白色粉末の下記構造式［Ｉ　ａ
：］で示される化合物０．　９２ｇ　（収率５０．５％
）を得た。 ［００２７］

【化４】 （ただし式中、Ｒ１およびＲ２はいずれもバルミトイル
基を示す）ＵＶ吸収スペクトルλｍａｘ　：　２６８ｎ
ｍ　（メタノール：クロロホルム−２０：１中にて測定
）ＦＡＢマススペクトル：　ｍ／　ｅ　９１５　（Ｍ＋
Ｎ　ａ）Ｒｆ値：０．３７（クロロホルム：メタノール
：水＝６５：２５：３を展開溶媒とし、ＭｅｒＣｋ社製
Ａｒｔ５７１５プレートを使用し、スポットはＵ■クラ
ンプよびモリブデン青試薬により検出した。なお、以下
Ｒｆ値の測定は同一条件にて行ったものである。）［０
０２８］本化合物の抗腫瘍活性は表１に示した通りであ
り、また１５０■／ｋｇ投与における急性毒性試験を行
った結果、何ら異常は認められなかった。 ［００２９］ 実施例　２ 実施例１におけるジパルミトイルホスファチジルコリン
の代わりにシリルオイルホスファチジルコリン１．５ｇ
を用い、以下実施例１と同様に行って下記構造式〔■ｂ
〕で示される化合物１．０９ｇを得た。 ［００３０１

【化５］ （ただし式中、Ｒ１およびＲ２はいずれもリルオイル基
を示す）Ｕ■吸収スペクトルλｍａｘ：２６８ｎｍ（メ
タノール：クロロホルム＝２０：１）ＦＡＢマススペク
トル：ｍ／ｅ　９６３　（Ｍ＋Ｎａ）Ｒｆ値：０．３７ ［００３１］本化合物の抗腫瘍活性は、腫瘍細胞Ｐ−３
８８白血病に対してＩＬＳは１００．８％（１５ｍｇ／
ｋｇ、５回投与）で良好な活性を示し、さらに７５ｍｇ
／ｋｇ投与量において急性毒性試験を行ったが、何ら異
常は認められなかった。 ［００３２］ 実施例　３ ＦＵＲ４，Ｏｇを１００ｍＭ塩化カルシウム含有の１０
０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５，６）２０ｍｌに加え、４５
℃にて２０分間攪拌した後、ホスホリパーゼＤ−Ｐ　（
東洋醸造社製）１０ｍｇおよびホスファチジルコリン（
卵黄レシチン）１．５ｇを３０ｍ１のクロロホルム溶液
として加えた。次いで、４５℃、３時間攪拌反応せしめ
た後冷却した。反応後、以下実施例１と同様にして分液
し、シリカゲルクロマトグラフィーを行って下記構造式
〔ＩＣ〕で示される化合物１．１１ｇを得た。 ［００３３］ 【化６】 （ただし式中、Ｒ１およびＲ２はいずれもラジール基を
示す） ［００３４］本化合物のＵＶ吸収スペクトルλｍａｘは
２６８ｎｍ（メタノール：クロロホルム＝２０：１）、
Ｒｆ値は０．３７であり、その抗腫瘍活性は腫瘍細胞Ｐ
３８８白血病に対してＩＬＳは９８．３％を示し、さら
に１５０■Ａｇ投与量において急性毒性試験を行ったが
、何ら異常は認められなかった。 ［００３５］ 実施例　４ 実施例１においてシバイトイルホスファチジルコリンの
代わりにジステアロイルホスファチジルコリンを用いて
、以下実施例１と同様に行って目的物である一般式（Ｉ
）で表されるリン脂質・ヌクレオシド誘導体を得た。得
られた化合物は表２に示すように有用な抗腫瘍活性を示
し、その１５０ｍｇ／ｋｇをマウス腹腔内に投与して、
急性毒性試験を行ったが、何ら異常は認められなかった
。 ［００３６］

【表２】 ［００３７］さらに以下に、実施例１におけるリン脂質
、ヌクレオシドの代わりに下記原料化合物を用いること
により、実施例１と同様にして製造されるリン脂質・ヌ
クレオシド誘導体を挙げる。

【表３】 特開平４ ２１０９２１

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　下記一般式 【１】 ［］ （ただし式中、Ｒ１およびＲ２は長鎖脂肪酸残基を示し
   、Ｎｓは５−フルオロウリジン−５′−イル基を示す）
   で表される新規リン脂質・ヌクレオシド誘導体またはそ
   の塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
2. 【請求項２】　一般式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２
   がバルミトイル基、Ｎｓが５−フルオロウリジン−５“
   イル基である請求項１記載の新規リン脂質・ヌクレオシ
   ド誘導体またはその塩を有効成分とする抗腫瘍剤。