JPH0420595B2 - - Google Patents
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Description
<産業上の利用分野>
本発明は、少なくとも強い無糖生地発酵力性で
強い冷凍耐性の特徴を有する二倍体交雑株に関す
るものである。 <従来の技術> 近年、冷凍パン生地は(1)新鮮パンの提供、(2)製
パン工程の節約(労働力の節約)・夜間作業の廃
止等の労務対策上の問題解決等の大きな長所から
製パン分野で注目されている。冷凍パン生地はパ
ン原料を混合、発酵、−20℃前後で凍結保存され、
必要に応じてホイロ発酵を行つて焼成される。通
常のパン酵母は凍結前の発酵により損傷を受けや
すいために、その使用は原料の砂糖、油脂、卵、
乳製品等が比較的多量に配合されるようなリツチ
な生地において、凍結前の発酵を行わないかある
いは短時間行つた場合にのみ限られている。凍結
前の発酵が短時間のパン酵母の使用の場合には、
解凍してホイロ発酵直後焼成すると、生地の焼成
が不充分となつてパン独特の風味や味覚が損なわ
れる欠点がある。また、解凍後に生地をホイロ発
酵させ熟成させるならば、製パン工程に長時間の
発酵工程を要し、冷凍パン生地の利点が失われ
る。 <発明が解決しようとする課題> そこで冷凍パン生地製造に際しては、発酵後凍
結保存しても損傷を受けにくい冷凍耐性の優れた
パン酵母が必要とされてきた。冷凍耐性の優れた
パン酵母として報告されているものとしては、サ
ツカロミセス・ロゼイ(特公昭59−25584号公
報)、サツカロミセス・セレビシエFTY(FRI−
413)(特公昭59−48607号公報)、サツカロミセ
ス・セレビシエIAM4274(特開昭和59−203442号
公報)等がある。サツカロミセス・ロゼイおよび
サツカロミセス・セレビシエFTY(FRI−413)
は何れもマルトース発酵力が弱く、フランスパン
や食パン等、すなわち無糖生地から中糖生地(糖
0〜20%対小麦粉)の冷凍パン生地に適しておら
ず、またサツカロミセス・セレビシエIAM4274
はマルトース発酵力は有しているものの、リーン
ブレツド等の無糖生地から中糖生地(糖0〜20%
対小麦粉)中での冷凍耐性が不充分であつた。ま
た、サツカロミセス・ロゼイは一般の酵母と比較
して菌の直径が小さいために、製造工程における
酵母の分離、洗浄、脱水操作に長時間を要すると
いう欠点があつた。また、マルトース発酵力を有
し、リーンブレツドの生地にも適用できる冷凍耐
性の優れたパン酵母として報告されているものと
しては、サツカロミセス・セレビシエKYF110
(特開昭62−208273号公報)、細胞融合法により得
た高いマルトース発酵力と強い冷凍耐性を有する
融合株サツカロマイセス・セレビシエ3−2−
6D(特開昭63−294778号公報)が挙げられるが、
いずれも充分に満足のできる効果を得られるもの
ではなかつた。 以上の通り、無糖生地ないし中糖生地に対して
強い生地発酵力を有し、かつ優れた冷凍耐性を備
えたフランスパンやパン粉等の糖を添加しない生
地や食パン等に適するパン酵母がなく、その冷凍
パン生地製パンの実施が困難であつた。 また、現在市販されている従来の無糖生地用パ
ン酵母は、糖含量の高い菓子パン(糖30%対小麦
粉)から糖含量の低い食パン(糖5%対小麦粉)
まで広範囲に使用されている強い高糖生地発酵力
と中程度の無糖生地発酵力を有する普通酵母に比
べ、製品保存中の発酵力活性低下が早く、保存性
に問題があつた。 <課題を解決するための手段> 本発明者らは、上記問題点を解決すべく鋭意研
究を行つた結果、現在一般に用いられている少な
くとも強い無糖生地発酵力を有する二倍体酵母菌
株(以下、二倍体株ということがある。)の胞子
を発芽させて得た一倍体酵母菌株(以下、一倍体
株ということがある。)と、強い冷凍耐性を有す
るが、無糖生地発酵力が強いために、リーンブレ
ツド等の冷凍生地での使用が困難であるサツカロ
ミセス・セレビシエに属する二倍体株の胞子を発
芽させて得た一倍体株との有性生殖交配により、
従来の無糖生地用パン酵母に比較し同等もしくは
同等以上の無糖生地から中糖生地(糖0〜20%対
小麦粉)における発酵力を有し、さらに強い冷凍
耐性とを兼ね備えた二倍体交雑株を得た。 さらに、該二倍体交雑株をパン生地組成物に含
有せしめることにより、通常の無糖生地ないし中
糖生地用のパン酵母としても利用できることを知
り、特に冷凍パン生地として利用することにより
フランスパン、パン粉等の糖を添加しない生地や
食パン等の無糖生地から中糖生地(糖0〜20%対
小麦粉)における冷凍パン生地製パンを提供でき
ることを知見した。 また、得られた二倍体交雑株は、市販の無糖生
地用パン酵母に比較して、製品保存中の発酵力活
性の低下が遅く、また低下率も小さく、保存性に
優れたものであつた。 本発明は以上の地見により完成されたものであ
り、少なくとも強い無糖生地発酵力を有するサツ
カロミセス・セレビシエに属する二倍体酵母菌株
の胞子を発芽させて得た一倍体酵母菌株と、無糖
生地発酵力は弱いが強い冷凍耐性を有するサツカ
ロミセス・セレビシエに属する二倍体酵母菌株の
胞子を発芽させて得た一倍体酵母菌株との有性生
殖交配により得られる、非冷凍下での無糖生地発
酵力(30℃、2時間の発酵で発生する炭酸ガス
量)が140ml以上であり、かつ冷凍後の発酵力残
存率(無糖生地を30℃で60分間発酵させた後、−
20℃で7日間冷凍し、30℃で30分間解凍後、38℃
で60分間の発酵で発生する炭酸ガス量を冷凍前の
発酵で発生する炭酸ガス量と比較したもの)が80
%以上の冷凍耐性を有する二倍体交雑株である。 本発明の二倍体交雑株は、2種の親株、即ち少
なくとも強い無糖生地発酵力を有するサツカロミ
セス・セレビシエに属する二倍体株の胞子を発芽
させて得た一倍体株と、強い冷凍耐性を有するサ
ツカロミセス・セレビシエに属する二倍体株の胞
子を発芽させて得た一倍体株との有性生殖に交配
による得られる二倍体交雑株であり、サツカロミ
セス・セレビシエSaccharomyces cerevisiae)
FTY−3、微工研条寄第2326号(FERM BP−
2326)として工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されているが、本発明の効果はこの菌株のみ
に限定されるものではない。 まず、本発明で用いられる親株の1つである少
なくとも強い無糖生地発酵力を有するサツカロミ
セス・セレビシエに属する二倍体株としては、市
販されている無糖生地用パン酵母またはそれと同
程度の無糖生地発酵力を有するが、冷凍耐性の弱
いパン酵母であればよい。例えば、無糖生地月酵
母として市販されているサツカロミセス・セレビ
シエKB−3(東洋醸造(株)製、商品名”45赤イー
スト”)が挙げられる。 また、もう一方の親株である強い冷凍耐性を有
するサツカロミセス・セレビシエに属する二倍体
株としては、通常リツチなパンの冷凍生地として
使用しているパン酵母と同程度の冷凍耐性をもつ
酵母であり、無糖生地発酵力は弱いが、強い冷凍
耐性を有するパン酵母であればよく、例えば、サ
ツカロミセス・セレビシエKTY(FRI−413)
(FERM P6363、FERM BP−2743)等が当該す
る。 このサツカロミセス・セレビシエの一般的な性
質は、以下に挙げる特徴を有するものであり、以
上に例示した3つの酵母菌株である、サツカロミ
セス・セレビシエFTY−3、サツカロミセス・
セレビシエKB−3、サツカロミセス・セレビシ
エFTYは、いずれもこのサツカロミセス・セレ
ビシエの特性を有するものである。 発酵性 グルコース(glucose) + ガラクトース(galactose) + サツカロース(sucrose) + マルトース(maltose) + ラクトース(lactose) − 資化性 グルコース(glucose) + ガラクトース(galactose) + サツカロース(sucrose) + マルトース(maltose) + ラクトース(lactose) − ラフイノース(raffinose) + 水溶性デンプン(soluble starch)”Certified”
(Difco社製Lot0178−15) + 硝酸塩(KNO3) − ビタミン要求性 ビオチン(biotin) + 葉酸(folic acid) − ニコチン(nicotinic acid) − チアミン(thiamin) − リボフラビン(riboflavin) − パントテン酸カルシウム(Ca−pantothenate)
+ イノシトール(inositol) ± ピリドキシン(pyridoxine) ± パラアミノ安息香酸(p−aminobenzoic
acis) − 次いで、上記2つの親株からそれぞれの一倍体
株を分離するに当たつては、例えば、まず各々の
親株を栄養培地で予備増殖せしめた前培養菌体を
酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウムを含む胞子形
成培地に接種し、20℃〜25℃で2日〜7日間放置
して胞子を形成せしめ、胞子形成菌体を細胞壁溶
解酵素液に懸濁し、30℃で30分〜1時間放置す
る。酵素処理後、マイクロマニピユレーターを用
いて子襄より胞子を分離する。分離した胞子は栄
養培地上に置き、30℃で培養して発芽せしめ一倍
体株を得る。得られた一倍体株の接合型は、例え
ば既知接合型一倍体株と混合し、接合の有無で決
定する。有性生殖交配に当たつては、「蛋白質・
核酸・酵素、Vol.12 No.12 P.1096−1099;群家
徳郎著(1967)」の交配法に従い、2つの親株よ
り分離したそれぞれの一倍体株を各々栄養培地中
で30℃で4〜8時間培養し、各々等量の培養液を
混合し、30℃で放置し、接合子を形成させる。形
成した接合子をマイクロマニピユレーターで分離
した後、培養し、上記2つの親株の性質を併せ持
つ二倍体交雑株の選別を繰り返した後、本発明の
二倍体交雑株であるサツカロミセス・セレビシエ
FTY−3株を取得する。さらに、本二倍体交雑
株をタンク培養した後、脱水集菌することによ
り、水分63〜73%の製パン用酵母を得ることがで
きる。 本発明の二倍体交雑株を上記の如く調製した製
パン用酵母を含有する冷凍パン生地を使用して製
造した製パンは、通常のパン酵母含有の冷凍パン
生地を使用して製造した製パンに比べて、外観、
比容積、内相、風味ともに優れている。 尚、本発明に係る製パン用酵母を含有する冷凍
パン生地は、食パン用、フランスパン用、パン粉
用、菓子パン用、ブドウパン用等種々の無糖生地
〜中等生地のパン生地に適用できる他、中華饅
頭、イーストドーナツ等にも適用できる。 次に本発明の実施例を挙げるが、本発明は何ら
これによつて限定されるものではない。 <実施例> 実施例 1 〔有性生殖交配〕 前培養 強い無糖生地発酵力を有するサツカロミセ
ス・セレビシエKB−3(東洋醸造(株)、製商品
名”45赤イースト”)菌体および強い冷凍耐性
を有するサツカロミセス・セレビシエFTY
(FRI−413)(FERM BP−2743)菌体をそれ
ぞれYPD寒天平板培地に接種し、30℃で24時
間前培養した。 YPD培地組成(PH5.5) 酵母エキス(Difco社製Lot012701) 5g ペプトン(Difco社製Lot018802) 10g グリコース(和光純薬社製特級) 40g KH2PO4(和光純薬社製Lot.CTJ3919)
5g MgSO4・7H2O(和光純薬社製Lot.
CTP2140) 2g 寒天(Difco社製Lot014001) 20g 蒸留水 1000ml 胞子形成 Sherman寒天平板培他にそれぞれの前培養
菌体を接種し、25℃で6日間の培養で胞子形成
が起きた。 Sherman培地組成(PH7.2) 酢酸カリウム(和光純薬社製特級) 1g 酵母エキス(Difco社製Lot012701) 0.1g グルコース(和光純薬社製特級) 0.05g 寒天(Difco社製Lot014001) 2g 蒸留水 100ml 胞子分離 胞子形成菌体をそれぞれ一白金耳、細胞壁溶
解酵素液(キリンビール(株)製、商品名”ザイモ
リエイス(Zymolyase)−20T”β−1.3−
glucan laminari pentaohydrolase;2〜3U/
ml)2ml中に懸濁し、30℃で30分〜1時間放置
した。酵素処理後、マイクロマニピユレーター
を用いて子襄より胞子を分離した。 発芽、一倍体株の取得 分離した胞子をYPD寒天平板培地上にそれ
ぞれ置き、30℃で培養し、発芽せしめ一倍体株
を得た。得られた一倍体株の接合型は、既知接
合型一倍体株と混合し、接合の有無で決定し
た。 有性生殖交配 〜で得られた、強い無糖生地発酵力を有
する二倍体株の胞子を発芽させて得た一倍体株
と、強い冷凍耐性を有する二倍体株の胞子を発
芽させて得た一倍体株のそれぞれの一倍体株
を、YPD液体培地(上記YPD培地組成から寒
天を除いた培地)中で30℃で4〜8時間培養
し、それぞれ等量の培養液を混合し、30℃で放
置し、接合子を形成せしめた。形成した接合子
をマイクロマニピユレーターで分離した後培養
し、次いでマルトースを糖源とする寒天平板培
地を用いてコロニーを形成させ、その上に同寒
天培地を重層して発酵せしめ、コロニーの周囲
の炭酸ガス発生量が優れたものを選別した。こ
の一次選別したコロニーを糖蜜を糖源とする液
体培地中で培養し、得られた全体を−20℃で7
日間冷凍し、解凍後、マルトースを糖源とする
液体培地中で発酵せしめ、炭酸ガス発生量の優
れた菌体を選別した。さらに、この二次選別し
た菌体を無糖生地に適用させて冷凍パン生地を
作り、解凍後、該パン生地の炭酸ガス発生量の
優れた菌体を選別し、これらの工程を経て、本
発明の二倍体交雑株であるサツカロミセス・セ
レビシエFTY−3株(以下単にFTY−3株と
いう)を取得した。 実施例 2 無糖生地発酵力 それぞれの菌株での下記配合生地における30℃
で2時間の発酵で発生する炭酸ガス量を測定し、
表1に比較した。また10分毎の炭酸ガス発生量を
第1図に示した。(普通生地用酵母−△−、無糖
生地用酵母−●−、FTY−3株−□−、FTY
(FRI−413)−▲−)。 表から明らかなように、本発明のFTY−3株
は、強い無糖生地発酵力の目安とされる140ml以
上の発酵力を有している。 (無糖生地配合) 小麦粉(日清製粉(株)製強力分”カメリア”)
20g 食 塩 0.3g 酵 母 0.4g 水 13ml 以降の実施例では同種の小麦粉を用いた。
強い冷凍耐性の特徴を有する二倍体交雑株に関す
るものである。 <従来の技術> 近年、冷凍パン生地は(1)新鮮パンの提供、(2)製
パン工程の節約(労働力の節約)・夜間作業の廃
止等の労務対策上の問題解決等の大きな長所から
製パン分野で注目されている。冷凍パン生地はパ
ン原料を混合、発酵、−20℃前後で凍結保存され、
必要に応じてホイロ発酵を行つて焼成される。通
常のパン酵母は凍結前の発酵により損傷を受けや
すいために、その使用は原料の砂糖、油脂、卵、
乳製品等が比較的多量に配合されるようなリツチ
な生地において、凍結前の発酵を行わないかある
いは短時間行つた場合にのみ限られている。凍結
前の発酵が短時間のパン酵母の使用の場合には、
解凍してホイロ発酵直後焼成すると、生地の焼成
が不充分となつてパン独特の風味や味覚が損なわ
れる欠点がある。また、解凍後に生地をホイロ発
酵させ熟成させるならば、製パン工程に長時間の
発酵工程を要し、冷凍パン生地の利点が失われ
る。 <発明が解決しようとする課題> そこで冷凍パン生地製造に際しては、発酵後凍
結保存しても損傷を受けにくい冷凍耐性の優れた
パン酵母が必要とされてきた。冷凍耐性の優れた
パン酵母として報告されているものとしては、サ
ツカロミセス・ロゼイ(特公昭59−25584号公
報)、サツカロミセス・セレビシエFTY(FRI−
413)(特公昭59−48607号公報)、サツカロミセ
ス・セレビシエIAM4274(特開昭和59−203442号
公報)等がある。サツカロミセス・ロゼイおよび
サツカロミセス・セレビシエFTY(FRI−413)
は何れもマルトース発酵力が弱く、フランスパン
や食パン等、すなわち無糖生地から中糖生地(糖
0〜20%対小麦粉)の冷凍パン生地に適しておら
ず、またサツカロミセス・セレビシエIAM4274
はマルトース発酵力は有しているものの、リーン
ブレツド等の無糖生地から中糖生地(糖0〜20%
対小麦粉)中での冷凍耐性が不充分であつた。ま
た、サツカロミセス・ロゼイは一般の酵母と比較
して菌の直径が小さいために、製造工程における
酵母の分離、洗浄、脱水操作に長時間を要すると
いう欠点があつた。また、マルトース発酵力を有
し、リーンブレツドの生地にも適用できる冷凍耐
性の優れたパン酵母として報告されているものと
しては、サツカロミセス・セレビシエKYF110
(特開昭62−208273号公報)、細胞融合法により得
た高いマルトース発酵力と強い冷凍耐性を有する
融合株サツカロマイセス・セレビシエ3−2−
6D(特開昭63−294778号公報)が挙げられるが、
いずれも充分に満足のできる効果を得られるもの
ではなかつた。 以上の通り、無糖生地ないし中糖生地に対して
強い生地発酵力を有し、かつ優れた冷凍耐性を備
えたフランスパンやパン粉等の糖を添加しない生
地や食パン等に適するパン酵母がなく、その冷凍
パン生地製パンの実施が困難であつた。 また、現在市販されている従来の無糖生地用パ
ン酵母は、糖含量の高い菓子パン(糖30%対小麦
粉)から糖含量の低い食パン(糖5%対小麦粉)
まで広範囲に使用されている強い高糖生地発酵力
と中程度の無糖生地発酵力を有する普通酵母に比
べ、製品保存中の発酵力活性低下が早く、保存性
に問題があつた。 <課題を解決するための手段> 本発明者らは、上記問題点を解決すべく鋭意研
究を行つた結果、現在一般に用いられている少な
くとも強い無糖生地発酵力を有する二倍体酵母菌
株(以下、二倍体株ということがある。)の胞子
を発芽させて得た一倍体酵母菌株(以下、一倍体
株ということがある。)と、強い冷凍耐性を有す
るが、無糖生地発酵力が強いために、リーンブレ
ツド等の冷凍生地での使用が困難であるサツカロ
ミセス・セレビシエに属する二倍体株の胞子を発
芽させて得た一倍体株との有性生殖交配により、
従来の無糖生地用パン酵母に比較し同等もしくは
同等以上の無糖生地から中糖生地(糖0〜20%対
小麦粉)における発酵力を有し、さらに強い冷凍
耐性とを兼ね備えた二倍体交雑株を得た。 さらに、該二倍体交雑株をパン生地組成物に含
有せしめることにより、通常の無糖生地ないし中
糖生地用のパン酵母としても利用できることを知
り、特に冷凍パン生地として利用することにより
フランスパン、パン粉等の糖を添加しない生地や
食パン等の無糖生地から中糖生地(糖0〜20%対
小麦粉)における冷凍パン生地製パンを提供でき
ることを知見した。 また、得られた二倍体交雑株は、市販の無糖生
地用パン酵母に比較して、製品保存中の発酵力活
性の低下が遅く、また低下率も小さく、保存性に
優れたものであつた。 本発明は以上の地見により完成されたものであ
り、少なくとも強い無糖生地発酵力を有するサツ
カロミセス・セレビシエに属する二倍体酵母菌株
の胞子を発芽させて得た一倍体酵母菌株と、無糖
生地発酵力は弱いが強い冷凍耐性を有するサツカ
ロミセス・セレビシエに属する二倍体酵母菌株の
胞子を発芽させて得た一倍体酵母菌株との有性生
殖交配により得られる、非冷凍下での無糖生地発
酵力(30℃、2時間の発酵で発生する炭酸ガス
量)が140ml以上であり、かつ冷凍後の発酵力残
存率(無糖生地を30℃で60分間発酵させた後、−
20℃で7日間冷凍し、30℃で30分間解凍後、38℃
で60分間の発酵で発生する炭酸ガス量を冷凍前の
発酵で発生する炭酸ガス量と比較したもの)が80
%以上の冷凍耐性を有する二倍体交雑株である。 本発明の二倍体交雑株は、2種の親株、即ち少
なくとも強い無糖生地発酵力を有するサツカロミ
セス・セレビシエに属する二倍体株の胞子を発芽
させて得た一倍体株と、強い冷凍耐性を有するサ
ツカロミセス・セレビシエに属する二倍体株の胞
子を発芽させて得た一倍体株との有性生殖に交配
による得られる二倍体交雑株であり、サツカロミ
セス・セレビシエSaccharomyces cerevisiae)
FTY−3、微工研条寄第2326号(FERM BP−
2326)として工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されているが、本発明の効果はこの菌株のみ
に限定されるものではない。 まず、本発明で用いられる親株の1つである少
なくとも強い無糖生地発酵力を有するサツカロミ
セス・セレビシエに属する二倍体株としては、市
販されている無糖生地用パン酵母またはそれと同
程度の無糖生地発酵力を有するが、冷凍耐性の弱
いパン酵母であればよい。例えば、無糖生地月酵
母として市販されているサツカロミセス・セレビ
シエKB−3(東洋醸造(株)製、商品名”45赤イー
スト”)が挙げられる。 また、もう一方の親株である強い冷凍耐性を有
するサツカロミセス・セレビシエに属する二倍体
株としては、通常リツチなパンの冷凍生地として
使用しているパン酵母と同程度の冷凍耐性をもつ
酵母であり、無糖生地発酵力は弱いが、強い冷凍
耐性を有するパン酵母であればよく、例えば、サ
ツカロミセス・セレビシエKTY(FRI−413)
(FERM P6363、FERM BP−2743)等が当該す
る。 このサツカロミセス・セレビシエの一般的な性
質は、以下に挙げる特徴を有するものであり、以
上に例示した3つの酵母菌株である、サツカロミ
セス・セレビシエFTY−3、サツカロミセス・
セレビシエKB−3、サツカロミセス・セレビシ
エFTYは、いずれもこのサツカロミセス・セレ
ビシエの特性を有するものである。 発酵性 グルコース(glucose) + ガラクトース(galactose) + サツカロース(sucrose) + マルトース(maltose) + ラクトース(lactose) − 資化性 グルコース(glucose) + ガラクトース(galactose) + サツカロース(sucrose) + マルトース(maltose) + ラクトース(lactose) − ラフイノース(raffinose) + 水溶性デンプン(soluble starch)”Certified”
(Difco社製Lot0178−15) + 硝酸塩(KNO3) − ビタミン要求性 ビオチン(biotin) + 葉酸(folic acid) − ニコチン(nicotinic acid) − チアミン(thiamin) − リボフラビン(riboflavin) − パントテン酸カルシウム(Ca−pantothenate)
+ イノシトール(inositol) ± ピリドキシン(pyridoxine) ± パラアミノ安息香酸(p−aminobenzoic
acis) − 次いで、上記2つの親株からそれぞれの一倍体
株を分離するに当たつては、例えば、まず各々の
親株を栄養培地で予備増殖せしめた前培養菌体を
酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウムを含む胞子形
成培地に接種し、20℃〜25℃で2日〜7日間放置
して胞子を形成せしめ、胞子形成菌体を細胞壁溶
解酵素液に懸濁し、30℃で30分〜1時間放置す
る。酵素処理後、マイクロマニピユレーターを用
いて子襄より胞子を分離する。分離した胞子は栄
養培地上に置き、30℃で培養して発芽せしめ一倍
体株を得る。得られた一倍体株の接合型は、例え
ば既知接合型一倍体株と混合し、接合の有無で決
定する。有性生殖交配に当たつては、「蛋白質・
核酸・酵素、Vol.12 No.12 P.1096−1099;群家
徳郎著(1967)」の交配法に従い、2つの親株よ
り分離したそれぞれの一倍体株を各々栄養培地中
で30℃で4〜8時間培養し、各々等量の培養液を
混合し、30℃で放置し、接合子を形成させる。形
成した接合子をマイクロマニピユレーターで分離
した後、培養し、上記2つの親株の性質を併せ持
つ二倍体交雑株の選別を繰り返した後、本発明の
二倍体交雑株であるサツカロミセス・セレビシエ
FTY−3株を取得する。さらに、本二倍体交雑
株をタンク培養した後、脱水集菌することによ
り、水分63〜73%の製パン用酵母を得ることがで
きる。 本発明の二倍体交雑株を上記の如く調製した製
パン用酵母を含有する冷凍パン生地を使用して製
造した製パンは、通常のパン酵母含有の冷凍パン
生地を使用して製造した製パンに比べて、外観、
比容積、内相、風味ともに優れている。 尚、本発明に係る製パン用酵母を含有する冷凍
パン生地は、食パン用、フランスパン用、パン粉
用、菓子パン用、ブドウパン用等種々の無糖生地
〜中等生地のパン生地に適用できる他、中華饅
頭、イーストドーナツ等にも適用できる。 次に本発明の実施例を挙げるが、本発明は何ら
これによつて限定されるものではない。 <実施例> 実施例 1 〔有性生殖交配〕 前培養 強い無糖生地発酵力を有するサツカロミセ
ス・セレビシエKB−3(東洋醸造(株)、製商品
名”45赤イースト”)菌体および強い冷凍耐性
を有するサツカロミセス・セレビシエFTY
(FRI−413)(FERM BP−2743)菌体をそれ
ぞれYPD寒天平板培地に接種し、30℃で24時
間前培養した。 YPD培地組成(PH5.5) 酵母エキス(Difco社製Lot012701) 5g ペプトン(Difco社製Lot018802) 10g グリコース(和光純薬社製特級) 40g KH2PO4(和光純薬社製Lot.CTJ3919)
5g MgSO4・7H2O(和光純薬社製Lot.
CTP2140) 2g 寒天(Difco社製Lot014001) 20g 蒸留水 1000ml 胞子形成 Sherman寒天平板培他にそれぞれの前培養
菌体を接種し、25℃で6日間の培養で胞子形成
が起きた。 Sherman培地組成(PH7.2) 酢酸カリウム(和光純薬社製特級) 1g 酵母エキス(Difco社製Lot012701) 0.1g グルコース(和光純薬社製特級) 0.05g 寒天(Difco社製Lot014001) 2g 蒸留水 100ml 胞子分離 胞子形成菌体をそれぞれ一白金耳、細胞壁溶
解酵素液(キリンビール(株)製、商品名”ザイモ
リエイス(Zymolyase)−20T”β−1.3−
glucan laminari pentaohydrolase;2〜3U/
ml)2ml中に懸濁し、30℃で30分〜1時間放置
した。酵素処理後、マイクロマニピユレーター
を用いて子襄より胞子を分離した。 発芽、一倍体株の取得 分離した胞子をYPD寒天平板培地上にそれ
ぞれ置き、30℃で培養し、発芽せしめ一倍体株
を得た。得られた一倍体株の接合型は、既知接
合型一倍体株と混合し、接合の有無で決定し
た。 有性生殖交配 〜で得られた、強い無糖生地発酵力を有
する二倍体株の胞子を発芽させて得た一倍体株
と、強い冷凍耐性を有する二倍体株の胞子を発
芽させて得た一倍体株のそれぞれの一倍体株
を、YPD液体培地(上記YPD培地組成から寒
天を除いた培地)中で30℃で4〜8時間培養
し、それぞれ等量の培養液を混合し、30℃で放
置し、接合子を形成せしめた。形成した接合子
をマイクロマニピユレーターで分離した後培養
し、次いでマルトースを糖源とする寒天平板培
地を用いてコロニーを形成させ、その上に同寒
天培地を重層して発酵せしめ、コロニーの周囲
の炭酸ガス発生量が優れたものを選別した。こ
の一次選別したコロニーを糖蜜を糖源とする液
体培地中で培養し、得られた全体を−20℃で7
日間冷凍し、解凍後、マルトースを糖源とする
液体培地中で発酵せしめ、炭酸ガス発生量の優
れた菌体を選別した。さらに、この二次選別し
た菌体を無糖生地に適用させて冷凍パン生地を
作り、解凍後、該パン生地の炭酸ガス発生量の
優れた菌体を選別し、これらの工程を経て、本
発明の二倍体交雑株であるサツカロミセス・セ
レビシエFTY−3株(以下単にFTY−3株と
いう)を取得した。 実施例 2 無糖生地発酵力 それぞれの菌株での下記配合生地における30℃
で2時間の発酵で発生する炭酸ガス量を測定し、
表1に比較した。また10分毎の炭酸ガス発生量を
第1図に示した。(普通生地用酵母−△−、無糖
生地用酵母−●−、FTY−3株−□−、FTY
(FRI−413)−▲−)。 表から明らかなように、本発明のFTY−3株
は、強い無糖生地発酵力の目安とされる140ml以
上の発酵力を有している。 (無糖生地配合) 小麦粉(日清製粉(株)製強力分”カメリア”)
20g 食 塩 0.3g 酵 母 0.4g 水 13ml 以降の実施例では同種の小麦粉を用いた。
【表】
尚、比較に用いた各々の酵母については以下の
通りであり、以降の実施例3〜実施例9における
酵母はこれらから適宜用いた。 ●普通生地用酵母…サツカロミセス・セレビシエ
237NG(東洋醸造(株)製、商品名”45イース
ト”)。 ●無糖生地酵母…サツカロミセス・セレビシエ
KB−3(東洋醸造(株)製、商品名”45赤イース
ト”)。 ●冷凍耐性酵母…市販冷凍耐性酵母。 ●FTY(FRI−413)…サツカロミセス・セレビ
シエFTY(FRI−413)(FERM P−6363、
FERM BP−2743)。 実施例 3 低糖、中糖生地発酵力 下記生地配合の低糖生地(糖5%対小麦粉)、
中糖生地(糖20%対小麦粉)における30℃で2時
間の発酵で発生する炭酸ガス量を測定し、表2に
比較した。
通りであり、以降の実施例3〜実施例9における
酵母はこれらから適宜用いた。 ●普通生地用酵母…サツカロミセス・セレビシエ
237NG(東洋醸造(株)製、商品名”45イース
ト”)。 ●無糖生地酵母…サツカロミセス・セレビシエ
KB−3(東洋醸造(株)製、商品名”45赤イース
ト”)。 ●冷凍耐性酵母…市販冷凍耐性酵母。 ●FTY(FRI−413)…サツカロミセス・セレビ
シエFTY(FRI−413)(FERM P−6363、
FERM BP−2743)。 実施例 3 低糖、中糖生地発酵力 下記生地配合の低糖生地(糖5%対小麦粉)、
中糖生地(糖20%対小麦粉)における30℃で2時
間の発酵で発生する炭酸ガス量を測定し、表2に
比較した。
【表】
【表】
尚、FTY−3株は、無糖生地〜中糖生地発酵
力と比べ高糖生地に対する発酵力は弱いものであ
つた。 実施例 4 冷凍耐性(無糖生地) 実施例2と同様の無糖生地を30℃で60分間発酵
させた後、−20℃で7日間冷凍し、30℃で30分間
解凍後、38℃で60分間の発酵で発生する炭酸ガス
量を測定し、表3に比較した。 表から明らかなように、本発明のFTY−3株
は、冷凍後の発酵力残存率が80%以上という強い
冷凍耐性を有している。
力と比べ高糖生地に対する発酵力は弱いものであ
つた。 実施例 4 冷凍耐性(無糖生地) 実施例2と同様の無糖生地を30℃で60分間発酵
させた後、−20℃で7日間冷凍し、30℃で30分間
解凍後、38℃で60分間の発酵で発生する炭酸ガス
量を測定し、表3に比較した。 表から明らかなように、本発明のFTY−3株
は、冷凍後の発酵力残存率が80%以上という強い
冷凍耐性を有している。
【表】
実施例 5
冷凍耐性(低糖生地)
実施例3と同様の低糖生地を30℃で60分間発酵
させた後、−20℃で7日間冷凍し、30℃で30分間
解凍後、30℃で120分間の発酵で発生する炭酸ガ
ス量を測定し、表4に比較した。
させた後、−20℃で7日間冷凍し、30℃で30分間
解凍後、30℃で120分間の発酵で発生する炭酸ガ
ス量を測定し、表4に比較した。
【表】
実施例 6
保存性
無糖生地用酵母とFTY−3株の各々の菌体に
おける製造直後と25℃で4日間の保存後の発生す
る炭酸ガス量を測定し、表5に比較した。
おける製造直後と25℃で4日間の保存後の発生す
る炭酸ガス量を測定し、表5に比較した。
【表】
実施例 7
胞子形成および発芽率
YM寒天平板培地(85mm径減菌シヤーレに10
ml)に火炎減菌した白金耳を用いて実施例2に示
した各酵母菌体を薄く塗り付け、30℃で24時間の
前培養後、さらに火炎減菌した白金耳を用いてそ
れぞれの菌体を上記のSherman寒天平板培地
(85mm径減菌シヤーレに10ml)に薄く塗り付け25
℃で7日間放置した。 放置後、菌体をMoller氏法により染色(「酵母
の分類同定法(第2版)」、p.17−18、1969.3.21発
行、(東大出版会、飯塚廣、後藤昭二著)し、顕
微鏡を用いて細胞100個当たりの胞子形成子襄数
を確認し、計測した。 その後、減菌試験管(18mm径)に注入した減菌
濾過した細胞壁溶解酵素液(ザイモリエイス−
20T30mg/ml、0.05Mトリスー塩酸緩衝液、PH
7.5)2mlに胞子形成菌体を1白金耳懸濁し、30
℃で1時間放置後、3000rpmで10分間遠心分離
し、さらに減菌水で2回洗浄後、減菌水2mlに懸
濁した。 次に、マイクロマニピユレーターを用い、酵素
処理菌体より胞子分離を行い、酵母用合成培地で
あるYNB寒天平板培地上において30℃で発芽さ
せた。胞子は子襄中に4個形成しているものから
100胞子を分離した。 YM培地組成(PH5.6) 酵母エキス(Difco社製Lot012701) 0.3g グルコース(和光純薬社製特級) 1g 麦芽エキス(Difco社製Lot0186015) 0.3g ペプトン(Difco社製Lot018802) 0.5g 寒天(Difco社製Lot014001) 2g 蒸留水 100ml YNB培地組成〔「遺伝学実験法講座、微生物
遺伝学研究法」、p.186−188、1982.3.10発行、(共
立出版、石川辰夫編)のBacto−Yeast Nitogen
Baseを参照〕 (PH5.6) YEAST NITROGEN BASE(Difco社製
Lot760960) 0.67g グルコース(和光純薬社製特級) 2g 寒天(Difco社製Lot014001) 2g 蒸留水 100ml 上記実験による各酵母菌体の胞子の形成率およ
び胞子の発芽率を表6に示す。
ml)に火炎減菌した白金耳を用いて実施例2に示
した各酵母菌体を薄く塗り付け、30℃で24時間の
前培養後、さらに火炎減菌した白金耳を用いてそ
れぞれの菌体を上記のSherman寒天平板培地
(85mm径減菌シヤーレに10ml)に薄く塗り付け25
℃で7日間放置した。 放置後、菌体をMoller氏法により染色(「酵母
の分類同定法(第2版)」、p.17−18、1969.3.21発
行、(東大出版会、飯塚廣、後藤昭二著)し、顕
微鏡を用いて細胞100個当たりの胞子形成子襄数
を確認し、計測した。 その後、減菌試験管(18mm径)に注入した減菌
濾過した細胞壁溶解酵素液(ザイモリエイス−
20T30mg/ml、0.05Mトリスー塩酸緩衝液、PH
7.5)2mlに胞子形成菌体を1白金耳懸濁し、30
℃で1時間放置後、3000rpmで10分間遠心分離
し、さらに減菌水で2回洗浄後、減菌水2mlに懸
濁した。 次に、マイクロマニピユレーターを用い、酵素
処理菌体より胞子分離を行い、酵母用合成培地で
あるYNB寒天平板培地上において30℃で発芽さ
せた。胞子は子襄中に4個形成しているものから
100胞子を分離した。 YM培地組成(PH5.6) 酵母エキス(Difco社製Lot012701) 0.3g グルコース(和光純薬社製特級) 1g 麦芽エキス(Difco社製Lot0186015) 0.3g ペプトン(Difco社製Lot018802) 0.5g 寒天(Difco社製Lot014001) 2g 蒸留水 100ml YNB培地組成〔「遺伝学実験法講座、微生物
遺伝学研究法」、p.186−188、1982.3.10発行、(共
立出版、石川辰夫編)のBacto−Yeast Nitogen
Baseを参照〕 (PH5.6) YEAST NITROGEN BASE(Difco社製
Lot760960) 0.67g グルコース(和光純薬社製特級) 2g 寒天(Difco社製Lot014001) 2g 蒸留水 100ml 上記実験による各酵母菌体の胞子の形成率およ
び胞子の発芽率を表6に示す。
【表】
以上の通り、本発明のFTY−3株は、上記の
酵母用合成培地であるYNB培地において、その
胞子の発芽率が極めて低率である特性がみられ、
他の菌株と区別して認識し得た。 実施例 8 FTY−3株の血清学的性質 FTY−3株を抗原として得られた家兎の抗血
清について、実施例2に示した各酵母菌体に対す
る免疫特性を調べた。 また、抗原、抗体、交叉吸収法による特異抗体
の作製法、および凝集反応の検出方法については
次の通りである。 抗原:FTY−3株を生理食塩水に約1010細胞/
mlの濃度になるように懸濁し、80℃で30分間加
熱殺菌し、次いで1000rpmで5分間遠心分離
し、上清50mlを得た。 抗体:6週齢日本白色種家兎5匹に対し、上記の
抗原1mlを各々耳静脈から注射器により投与し
た。さらに、4日間隔で2mlを1回、5mlを3
回投与し、最終免疫の日から8日目に頚動脈よ
り採血した。全血を3000rpmで15分間遠心分離
し、各々約20mlの抗血清を得た。この抗血清10
mlに飽和硫安液5mlを加え、5℃で1晩放置
後、5000rpmで15分間遠心分離し、得られたγ
グロブリンの沈澱を生理食塩水に溶解透析後、
蛋白質濃度を20mg/mlに調製し、抗体液(A)とし
た。 交叉吸収法による特異抗体:抗体液(A)の各々2ml
に普通生地用酵母(サツカロミセス・セレビシ
エ237NG)を300mgづつ加え、5℃で15分間反
応せしめた後、遠心分離し、上清を得た。得ら
れた上清と普通生地用酵母との凝集反応を行
い、凝集反応を起こさなくなるまでこの操作を
繰り返した後、生理食塩水で希釈し、蛋白質濃
度を10mg/mlに調整して夜叉吸収抗体液(B)を得
た。 また、普通生地用酵母の代わりに無糖生地用
酵母(サツカロミセス・セレビシエKB−3)
を用いて同様の操作を行い、さらに蛋白質濃度
を10mg/mlに調整して交叉吸収抗体液(C)を得
た。 次いで、(C)の抗体液をFTY−3株で吸収処
理し、蛋白質濃度を10mg/mlに調整して交叉吸
収抗体液(D)を得た。 凝集試験方法:各々の酵母菌体を生理食塩水に約
109細胞/mlになるように懸濁し、96穴マイク
ロタイタープレートに40μづつ分注し、各々
抗体液(A)、交叉吸収抗体液(B)〜(D)を各々40μ
加え、5分間振盪した後、30分間放置し、凝集
塊の生成の有無を調べた。交叉吸収処理を行わ
ない抗体液(A)の凝集試験の結果を表7、交叉吸
収抗体液(B)の結果を表8、交叉吸収抗体液(C)の
結果を表9、交叉吸収抗体液(D)の結果を表10に
それぞれ示した。尚、正常血清は未処理家兎か
らの血清である。 (+:凝集塊を生成、−:凝集塊を生成しない)
酵母用合成培地であるYNB培地において、その
胞子の発芽率が極めて低率である特性がみられ、
他の菌株と区別して認識し得た。 実施例 8 FTY−3株の血清学的性質 FTY−3株を抗原として得られた家兎の抗血
清について、実施例2に示した各酵母菌体に対す
る免疫特性を調べた。 また、抗原、抗体、交叉吸収法による特異抗体
の作製法、および凝集反応の検出方法については
次の通りである。 抗原:FTY−3株を生理食塩水に約1010細胞/
mlの濃度になるように懸濁し、80℃で30分間加
熱殺菌し、次いで1000rpmで5分間遠心分離
し、上清50mlを得た。 抗体:6週齢日本白色種家兎5匹に対し、上記の
抗原1mlを各々耳静脈から注射器により投与し
た。さらに、4日間隔で2mlを1回、5mlを3
回投与し、最終免疫の日から8日目に頚動脈よ
り採血した。全血を3000rpmで15分間遠心分離
し、各々約20mlの抗血清を得た。この抗血清10
mlに飽和硫安液5mlを加え、5℃で1晩放置
後、5000rpmで15分間遠心分離し、得られたγ
グロブリンの沈澱を生理食塩水に溶解透析後、
蛋白質濃度を20mg/mlに調製し、抗体液(A)とし
た。 交叉吸収法による特異抗体:抗体液(A)の各々2ml
に普通生地用酵母(サツカロミセス・セレビシ
エ237NG)を300mgづつ加え、5℃で15分間反
応せしめた後、遠心分離し、上清を得た。得ら
れた上清と普通生地用酵母との凝集反応を行
い、凝集反応を起こさなくなるまでこの操作を
繰り返した後、生理食塩水で希釈し、蛋白質濃
度を10mg/mlに調整して夜叉吸収抗体液(B)を得
た。 また、普通生地用酵母の代わりに無糖生地用
酵母(サツカロミセス・セレビシエKB−3)
を用いて同様の操作を行い、さらに蛋白質濃度
を10mg/mlに調整して交叉吸収抗体液(C)を得
た。 次いで、(C)の抗体液をFTY−3株で吸収処
理し、蛋白質濃度を10mg/mlに調整して交叉吸
収抗体液(D)を得た。 凝集試験方法:各々の酵母菌体を生理食塩水に約
109細胞/mlになるように懸濁し、96穴マイク
ロタイタープレートに40μづつ分注し、各々
抗体液(A)、交叉吸収抗体液(B)〜(D)を各々40μ
加え、5分間振盪した後、30分間放置し、凝集
塊の生成の有無を調べた。交叉吸収処理を行わ
ない抗体液(A)の凝集試験の結果を表7、交叉吸
収抗体液(B)の結果を表8、交叉吸収抗体液(C)の
結果を表9、交叉吸収抗体液(D)の結果を表10に
それぞれ示した。尚、正常血清は未処理家兎か
らの血清である。 (+:凝集塊を生成、−:凝集塊を生成しない)
【表】
【表】
【表】
【表】
参考例
製パン試験
フランスパン
配 合
小麦粉(同上) 100g
酵 母 4g
イーストフード(東洋醸造(株)製”アミラ”)
0.1g モルトエキス(三共フーズ(株)製”三共モルト
エキスB2”) 0.3g 食 塩 2g 水 63ml 操作(直捏法) 発酵時間 60分 分 割 100g ベンチタイム 20分 冷 凍 成型冷凍−20℃ 解 凍 30℃・60分 ホイロ 30℃・60分 焼 成 230℃・15分
0.1g モルトエキス(三共フーズ(株)製”三共モルト
エキスB2”) 0.3g 食 塩 2g 水 63ml 操作(直捏法) 発酵時間 60分 分 割 100g ベンチタイム 20分 冷 凍 成型冷凍−20℃ 解 凍 30℃・60分 ホイロ 30℃・60分 焼 成 230℃・15分
【表】
食パン(糖5%対小麦粉)
配 合
小麦粉(同上) 100g
酵 母 4g
イーストフード(同上) 0.1g
油 脂 5g
砂 糖 5g
食 塩 2g
水 65ml
操作(直捏法)
発酵時間 40分
分 割 50g
冷 凍 成型冷凍−20℃
解 凍 30℃・90分
ホイロ 38℃・40分
焼成 200℃・35分
【表】
バターロール(糖10%対小麦粉)
配 合
小麦粉(同上) 100g
酵母 4g
イーストフード(同上) 0.1g
油 脂 10g
砂 糖 10g
全 卵 10g
食 塩 1.5g
水 48ml
操作(直捏法)
発酵時間 45分
分 割 50g
第一ベンチタイム 10分
第二ベンチタイム 10分
成 型
冷 凍 成型冷凍−20℃
解 凍 30℃・30分
ホイロ 38℃・40分・湿度80%
焼 成 200℃・10分
【表】
菓子パン(糖15%対小麦粉)
配 合
小麦粉(同上) 100g 脱粉 3g
酵母 4g 全卵 8g
イーストフード(同上) 0.1g 油脂 8
g 砂糖 15g 食塩 1.3g 水 50ml 操作(直捏法) 発酵時間 40分 分 割 50g ベンチタイム 15分 冷 凍 成型冷凍−20℃ 解 凍 30℃・30分 ホイロ 38℃・50分 焼 成 200℃・10分
g 砂糖 15g 食塩 1.3g 水 50ml 操作(直捏法) 発酵時間 40分 分 割 50g ベンチタイム 15分 冷 凍 成型冷凍−20℃ 解 凍 30℃・30分 ホイロ 38℃・50分 焼 成 200℃・10分
【表】
菓子パン(糖20%対小麦粉)
配 合
小麦粉(同上) 100g 脱粉 3g
酵母 5g 全卵 8g
イーストフード(同上) 0.1g 油脂 8
g 砂糖 20g 食塩 1.3g 水 48ml 操作(直捏法) 発酵時間 60分 分 割 50g ベンチタイム 15分 冷 凍 成型冷凍−20℃ 解 凍 30℃・30分 ホイロ 38℃・50分 焼 成 200℃・10分
g 砂糖 20g 食塩 1.3g 水 48ml 操作(直捏法) 発酵時間 60分 分 割 50g ベンチタイム 15分 冷 凍 成型冷凍−20℃ 解 凍 30℃・30分 ホイロ 38℃・50分 焼 成 200℃・10分
【表】
<発明の効果>
本発明によりフランスパン、パン粉等の糖を添
加しない生地や食パン等の無糖生地から中糖生地
(糖0〜20%対小麦粉)における品質の優れた冷
凍パン生地製パンの実施を可能とした。 また、本発明の二倍体交雑株を通常の無糖生地
用パン酵母として使用する場合、従来の無糖生地
用パン酵母に比較し、保存性に優れ、製品の保
管、輸送面でのメリツトも提供し得る。
加しない生地や食パン等の無糖生地から中糖生地
(糖0〜20%対小麦粉)における品質の優れた冷
凍パン生地製パンの実施を可能とした。 また、本発明の二倍体交雑株を通常の無糖生地
用パン酵母として使用する場合、従来の無糖生地
用パン酵母に比較し、保存性に優れ、製品の保
管、輸送面でのメリツトも提供し得る。
第1図は、実施例2の無糖生地における10分毎
の炭酸ガス発生量を示す。
の炭酸ガス発生量を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 少なくとも強い無糖生地発酵力を有するサツ
カロミセス・セレビシエに属する二倍体酵母菌株
の胞子を発芽させて得た一倍体酵母菌株と、無糖
生地発酵力は弱いが強い冷凍耐性を有するサツカ
ロミセス・セレビシエに属する二倍体酵母菌株の
胞子を発芽させて得た一倍体酵母菌株との優性生
殖交配により得られる、非冷凍下での無糖生地発
酵力(30℃、2時間の発酵で発生する炭酸ガス
量)が140ml以上であり、かつ冷凍後の発酵力残
存率(無糖生地を30℃で60分間発酵させた後、−
20℃で7日間冷凍し、30℃で30分間解凍後、38℃
で60分間の発酵で発生する炭酸ガス量を冷凍前の
発酵で発生する炭酸ガス量と比較したもの)が80
%以上の冷凍耐性を有する二倍体交雑株。 2 二倍体交雑株がサツカロミセス・セレビシエ
(Saccharomyces cerevisiae)FTY−3、微工
研条寄第2326号(FERM BP−2326)である請
求項第1項記載の二倍体交雑株。
Priority Applications (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1059638A JPH02238876A (ja) | 1989-03-14 | 1989-03-14 | 新規パン酵母 |
DE69012860T DE69012860T2 (de) | 1989-03-14 | 1990-03-09 | Backhefe. |
EP90400634A EP0388262B1 (en) | 1989-03-14 | 1990-03-09 | Novel Bakers' yeast |
AT90400634T ATE112307T1 (de) | 1989-03-14 | 1990-03-09 | Backhefe. |
CA002012090A CA2012090C (en) | 1989-03-14 | 1990-03-13 | Bakers' yeast |
AU51261/90A AU632096B2 (en) | 1989-03-14 | 1990-03-14 | Novel bakers' yeast |
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