JPH04198193A - 新規酵素阻害物質ベナルチンならびにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規な酵素阻害物質ベナルチンあるいはその
塩、ならびにその製造方法に関する。

さらに詳しくは、本発明はピログロタミールペプチダー
ゼに対し酵素阻害活性を有する新規物質ベナルチン、な
らびにストレプトミセス属に属する微生物の培養による
ベナルチンの製造法に関するものである。

〔従来の技術および発明が解決しようとする課題〕本発
明による酵素阻害物質ベナルチンと理化学的性状が類似
する化合物として、バノキソニン［Ｆ、Ｋａｎａｉ　ｅ
ｔ　ａｌ　、　ｒＪ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ」３６
巻、　６５６−６６０頁（１９８３））及びいくつかの
ペプチド系抗生物質があげられるが、これらとベナルチ
ンは理化学的性状及び生物学的性状が明らかに異なり、
新規物質であることが確認された。

本物質ベナルチンが阻害活性を示すピログルタミナール
ペプチダーゼは、生体内において、ノイロテンシン、黄
体形成ホルモン放出ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出
ホルモン等の多様な生理機能を有するペプチドホルモン
（生理活性ペプチド）を基質として分解、代射し、そし
てペプチドホルモンの機能調節あるいは新しい生理活性
の発現に関係していることが知られる。

従来、数多くの酵素阻害物質が報告され、そのうちのい
くつかのものは薬剤として実用化されている。しかし、
ピログルタミールペプチダーゼに対する阻害物質は未だ
報告されていない。したがって、ピログルタミールペプ
チダーゼに対する特異性の高い阻害物質が望まれている
。本発明の目的は、特異性の高いピログルタミールペプ
チダーゼ阻害活性を有する生理活性物質ベナルチン及び
その製造法を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、多数の微生物を土壌より分離し。

その産生ずる物質を探索したところ、ある種の微生物が
ピログルタミールペプチダーゼに対し阻害作用を示す生
理活性物質を生産している事を見出した。研究の結果、
この物質を単離することに成功して、また後記の式（１
）で表わされる構造をもつことを認めた。さらに詳細に
検討したところ、該生理活性物質は新規な抗生物質であ
ることを見出し、ベナルチンと命名した。

本発明は上記の知見にもとずいて完成されたものである
。

従って、第１の本発明によると、式（１）で表わされる
酵素阻害物質ベナルチン、あるいはその塩が提供される
。

本発明にかかる酵素阻害物質ベナルチンは下記の特性を
有する。

１）ベナルチンの理化学的性状 （１）外　　ｆＲ：白色粉末 （２）融　　　点　　：１７８〜１８０℃（３）分子式
：　ｃｌＪＺｓＮＳｏ７ （４）元素分析値：　Ｃ１，）１２．Ｎ、Ｏ，・ＨＣＩ
・１／２Ｈ２０Ｃ４４，４６％、Ｈ６，２８％ Ｎ　　１４．５４％、　　０　２６．０８％（５）マス
スペクトル：　ＦＡＢ−阿Ｓ　（ｐｏｓ、）　ｍ／ｚ　
４１２　（Ｍ＋Ｈ）”（ｎｅｇ、）　ｍ／ｚ　４１０　
（Ｍ−Ｈ）−（６）比旋光度　：［αコ２Ｇ　−２，５
°（ｃ　１．０．　Ｈ２０）（７）紫外部吸収スペクト
ル：添付図面の第１図に示す。

λＩＩＩＩＸＩ　ｎ”（ε）（水溶液中）：　２４６（
８２００）、　３０８（２４００）λｍａｘ＋　ｎｍ（
ｓ　）　（ＮａＯＨ水溶液中）：　２５２（ｓｈ）、　
３３４（３８００）（８）赤外部吸収スペクトル：添付
図面の第２図に示す。

（９）　１Ｈ−ＮＭＲスヘクト／喧４００ＭＨｚ、　Ｄ
ＭＳＯ−ｄ、）　：添付図面の第３図に示す。

（１０）　”Ｃ−ＮＭＲスヘクｈ＃（１００ＭＨｚ、　
ＤＭＳＯ−ｄ、）　：添付図面の第４回に示す。

δ（ｐｐｍ）：　１７３．４（ｓ）、　１７０．６（ｓ
）、　１６８．１（ｓ）、　１５７．０（ｓ）。

１４９．９（ｓ）、　１４６．５（ｓ）、　１１８．５
（ｄ）、　１１７．５（ｄ）。

１１６．４（ｄ）、　１１５．９（ｓ）、　　６６．３
（ｄ）、　　５７．８（ｄ）。

５２．４（ｄ）、　　４０．８（ｔ）、　　２８．９（
ｔ）、　　２４．５（ｔ）。

ｔ９．６（ｑ） （１１）溶解性　：水、メタノール、ジメチルスルホキ
シドに溶け、クロロホ ルム、酢酸エチル、ｎ−ヘキサ ンに溶けない。

（１２）薄層クロマトグラフィー（シリカゲル；メルク
社製）：（１３）呈色反応　：１０％硫酸、坂口、ヨー
ド、モリブデン酸試薬に陽性である。

２）　ベナルチンの酵素阻害活性 ピログルタミールペプチダーゼ阻害活性の測定は、ｒＡ
ｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ　５３巻、３２１頁（１
９７３）に記載の方法の改良法で行なった。

即ち、５ｍＭＬ−ピログルタミル酸ナフチルアミド０．
０２ｍｕ、緩衝液Ｃ０，２Ｍカリウム燐酸緩衝液（ｐＨ
８，０）　−０，ＩＭ　ＥＤＴＡ−０，ＯＩＭ　ＤＴＴ
　（５：　１　：　１））　０．１ｎＱ、検体（ベナル
チン）を含む水溶液０，６ｎＱを加えた混合液に、ピロ
グルタミールペプチダーゼ（Ｓｉｇｍａ社製）溶液０．
０２＋＋９を加え、３７℃、８００分間反応せ、１６ｍ
Ｍ　ＮａＩＯ４０，ＯｌｍＱを加え、３７℃、１５分間
反応させた。反応後、２　ＩＩＩｇ／ｍＱファーストガ
ーネットＧＢＣ（Ｓｉｇｍａ社製）の０．５Ｍ　クエン
酸ナトリウム緩衝液０．１ｍＱを加え５２５　ｎｍにお
ける吸光度（ａ）を測定した。

同時に検体を含まないで同様に反応した時の対照の吸光
度（ｂ）を測定した。なお、この時、それぞれに対する
盲検の吸光度（ａ′）、（ｂ′）を測定した。

ピログルタミールペプチダーゼ阻害率を計算式［１−（
ａ−ａ′）／（ｂ−ｂ’））　Ｘ　ｔｏｏにより計算し
た。５０％阻害率を示す検体の濃度をＩＣ６゜の値とし
た。

ベナルチンのピログルタミールペプチダーゼに対する阻
害活性を示すＩＣ，。値は２μｇ／ｍＱであった。

３）ベナルチンの抗菌活性 本発明のベナルチンは１００Ｎ、／ｍＱの濃度で細菌お
よび真菌類に対し抗菌活性を示さなかった。

４）　ベナルチンの毒性 本発明によるベナルチンはマウスに対し、１００ｍｇ／
ｋｇの量で静脈内投与した場合のマウスを２週間観察し
た結果、毒性は認められなかった。

第２の本発明は、ストレプトミセス属に属する式（１）
のベナルチンの生産菌を培養し、その培養物から酵素阻
害物質ベナルチンを採取することを特徴とする酵素阻害
物質ベナルチンの製造法に関する。

本発明の方法に使用される酵素阻害物質ベナルチン生産
菌の一例としては、東京部品用区の土壌より分離された
放線菌で、ＭＪ２４４−５ＦＩの菌株番号が付された菌
株がある。

ＭＪ２４４−５ＦＩ株の菌学的性状は下記の通りである
。

■、形態 ＭＪ２４４−　ＳＦＩ株は、顕微鏡下で分枝した基土菌
糸より、直状の気菌糸を伸長し、らせん形成、輪生枝お
よび胞子のうは認めない。成熟した胞子鎖は５０個以上
の胞子の連鎖を認め、胞子の大きさは０．６　Ｘ　Ｏ，
７〜１．２　Ｘ　１．３ミクロン位である。なお、胞子
の表面は平滑である。

■、各種培地における生育状態 色の記載に付いて（）内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニ
ー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｐｏｒａｔｉ
ｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ　のＣｏ１ｏｒ　ｈａｒｍ
ｏｎｙ　ｍａｎｕａｌ）を用いた。

（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無
色からうす黄の発育上に、明るい藁灰（２ｄｃ。

Ｎａｔｕｒａｌ）の気菌糸を着生する。溶解性色素は認
められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養
） 黄色（２ｅａ、　Ｌｔ　Ｗｈｅａｔ）の発育上に明るい
灰（２ｉｇ。

５ｌａｔｅｔａｎ）の気菌糸を着生する。溶解性色素は
わずかに黄色味を帯びる程度である。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ〜培
地５，２７℃培養） 黄色（２ｎａ、　Ｂｒ１ｔｅ　Ｙｅｌｌｏｔ＋＋）の発
育上に明るい灰（３ｆｅ、　５ｉｌｖｅｒ　Ｇｒａｙ）
　の気菌糸を着生し、黄（１１／２ｎａ、　Ｂｒ１ｔｅ
　Ｙｅｌｌｏｗ）の溶解性色素を産生ずる。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ＝培地４，２
７℃培養） うす黄の発育上に明るい灰（２ｆｅ、　Ｃｏｖｅｒｔ　
Ｇｒａｙ）の気菌糸を着生する。溶解性色素はわずかに
黄色味を帯びる程度である。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７，２７℃培養
）うす茶（３１ｇ、　Ａｄｏｂｅ　Ｂｒｏｗｎ）の発育
上に明るい灰色（３ｆｅ　５ｉｌｖｅｒ　Ｇｒａｙ）〜
明るい藁灰（３ｉｇ、　ＢｅｉｇｅＢｒｏｔｙｎ）の気
菌糸は着生する。溶解性色素は認められない。

（６）栄養寒天培地（２７℃培養） 発育はうす茶（３１ｅ、　Ｃｉｎｎａｍｏｎ）、気菌糸
は着生せず、溶解性色素も認められない。

（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２，２７
℃培養） にぶ黄（２ｐｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄ　Ｇｏｌｄ）の発育
上に明るい藁灰（３ｉｇ、　Ｂｅｉｇｅ　Ｂｒｏｔｇｎ
）の気菌糸を着生し、黄色（１１／２ｐａ、　Ｂｒ１ｔ
ｅ　Ｙｅｌｌｏｗ）の溶解性色素を産生ずる。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３，２７℃
培養）うす黄の発育上に明るい藁灰（３ｉｇ、　Ｂｒｉ
ｇｅＢｒｏｗｎ）の気菌糸を着生し、うす黄（Ｉｇａ、
　ＬｔＬｅｍｏｎ　Ｙｅｌｌｏｗ）の溶解性色素を産生
ずる。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）発育
はうす黄茶（２ｉｃ、　Ｈｏｎｅｙ　Ｇｏｌｄ）、気菌
糸は着生しない。溶解性色素はわずかに黄色味を帯びる
程度である。

（ｌＯ）スターチ寒天培地（２７℃培養）うす黄の発育
上に明るい藁灰（３ｇｅ、　Ｂｅｉｇｅ）の気菌糸を着
生する。溶解性色素はわずかに黄色味を帯びる程度であ
る。

（１１）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）うす黄の
発育上に白の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素は
認められない。

（１２）セルロース（２７℃培養） 培養後、３週間観察したが生育を認めなかった。

（１３）ゼラチンせん刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育はうす黄、
気菌糸は着生しない。溶解性色素は、黄色〜茶色味を帯
びる。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）で
は１発育は、初めはうす黄〜うす黄だいだい（５ｎａ、
　Ｂｒ１ｔｅ　Ｙｅｌｌｏｗ）であり、培養後１６日目
頃から発育はうす黄を呈し、気菌糸は着生せず、黄色（
ｌｐａ、　Ｌｅｍｏｎ　Ｙｅｌｌｏｗ）の溶解性色素を
産生する。

（１４）脱脂牛乳（３７℃培養） うす黄茶（２ｎｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄ　Ｇｏｌｄ）の発
育を認めるが、気菌糸は着生しない。溶解性色素は、黄
色味を帯びる。

■、生理的性質 （１）生育温度範囲 イースト・スターチ寒天培地（可溶性デンプ、ン１．０
％、イーストエキス０．２％、ひも寒天３．０％、ｐＨ
７，０）を用い、１４℃、２０℃、２７℃、３０℃、３
７℃。

５０℃、の各温度で試験した結果、５０℃を除いていず
れの温度でも生育したが、至適温度は２７〜３０℃付近
である。

（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、２０
℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７℃
培養） １５％単純ゼラチン培地、グルコース・ペプトン・ゼラ
チン培地のいずれの培地においても培養後２１日間の観
察では液化は認められなかった。

（３）スターチの加水分解（スターチ無機塩寒天培地お
よびスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） いずれの培地でも培養後４日目には氷解性を認め、その
作用は強い方である。

（４）脱脂牛乳の凝固、ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 培養後１０日目頃より凝固状を呈し、２日間で完了後、
ただちにペプトン化が始まる。ペプトン化は極めてゆっ
くり進行し、培養後３０日を経過しても未完了である。

（５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス、ｌ５Ｐ−培地１；ペプトン・イースト鉄寒天培
地、ｌ５Ｐ−培地６；チロシン寒天培地、ｌ５Ｐ−培地
７；いずれも２７℃培養）トリプトン・イースト・ブロ
ス、ペプトン・イースト鉄寒天培地およびチロシン寒天
培地のいずれの培地でも陽性である。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、ｌ５Ｐ−培地９；２７℃培養）グルコースのみを利
用し、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、フラクトー
ス、シュクロース、イノシトール、ラムノース、ラフィ
ノース、Ｄ−マンニトール、ラクトースを利用しない。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地。

２７℃培養） 培養後１０日目頃より発育の周辺のリンゴ酸石灰を溶解
する。その作用は弱い方〜中等度である。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ｌ５Ｐ−培地８；２７℃培養）陽性である。

（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２７℃培
養） ３週間の観察で生育しない。

以上の性状を要約すると、ＭＪ２４４−５ＦＩ株は、そ
の形態上、直状の気菌糸を伸長し、らせん形成、輪生技
および胞子のうけ認められない。胞子の表面は平滑であ
る。種々の培地で、うす黄〜黄色の発育上に明るい灰〜
明るい藁灰の気菌糸を着生し、黄色の、溶解性色素を産
生ずる。メラニン様色素の生成はいずれの培地において
も陽性である。澱粉氷解性は強い方であり、蛋白分解力
は、弱い方である。

尚、この菌株の菌体の細胞壁に含まれる、２，６−ジア
ミノピメリン酸は、ＬＬ−型であり、上記の性状と考え
合わせると、ＭＪ２４４−　ＳＦＩ株はストレプトミセ
ス（Ｓ打印μ地竺特）属に属することは明らかである。

これらの性状より、ＭＪ２４４−　ＳＦＩ株に近縁の既
知菌株を検索すると、つぎの４種があげられる。

すなわち、ストレプトミセス・シネレオルーバー（Ｓｔ
ｒｅ　ｔｏｗ　ｃｅｓ　ｃｉｎｅｒｅｏｒｕｂｅｒ　；
　ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　
１８巻、　９８頁、１９６８）　、ストレプトミセス・
キサントフェラス（Ｓｔｒｅ　ｔｏｗ　ｃｅｓ　ｘａｎ
ｔｈｏ　ｈａｅｕｓ　：　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　１８巻。

１８０頁、　１９６８）、ストレプトミセス・フラボト
リシニ（Ｓｔｒｅ　ｔｏｍｃｅｓ　ｆｌａｖｏｔｒｉｃ
ｉｎｉ　：　ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａ
ｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ、　１８巻。

１１４頁、　１９６８及び３０巻、３８２頁、　１９８
０）および、ストレプトミセス・ザオマイセティカス（
Ｓｔｒｉ　ｔｏｗ　ｃｅｓ　ｚａｏｍ　ｃｅｔｉｃｕｓ
　；　ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
、　２２巻、３７４頁、　１９７２）である。現在これ
らの種とＭＪ２４４−５ＦＩ株とを実地に比較検討中で
ある。

ＭＪ２４４−５ＦＩ株をストレプトミセス・エスピー（
針胆蛙９圧匹ｓｐ、　）　ＭＪ２４４−５ＦＩ　とする
。なお、ＭＪ２４４−５ＦＩ株を工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託申請し、平成２年１０月１２日、微工
研菌寄第１１７６９号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１１７６９）と
して受託された。

ＭＪ２４４−５ＦＩ株は他の放線菌に見られるように、
その性状が変化しやすい５例えば、ＭＪ２４４−　ＳＦ
Ｉ株の、またはこの株に由来する突然変異株（自然発生
または誘発性）、形質接合体または遺伝子組み替え体で
あっても、新酵素阻害物質ベナルチンを生産するものは
全て本発明に使用できる。

本発明の方法では、前記のベナルチン生産菌を通常の微
生物が利用しつる栄養物を含有する培地で培養する。栄
養源としては、従来、放線菌の培養に利用されている公
知のものが使用できる。例えば、炭素源として、グルコ
ース、ガラクトース、デキストリン、澱粉、糖みっ、動
・植物油等を使用しつる。また窒素源として、大豆粉、
小麦胚芽、コーン・ステイープ・リカー、綿実粕、肉エ
キス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸
ソーダ、尿素等を使用しうる。その他、必要に応じて、
ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コ
バルト、塩酸、燐酸、硫酸及びその他のイオンを生成す
ることができる無機塩類を添加することは有効である。

また菌の発育をたすけ、ベナルチンの生産を促進するよ
うな有機および無機物を適当に添加することができる。

培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温徳は１５−３７℃
であるが、多くの場合、２６−３０℃付近で培養する。

ベナルチンの生産は培地や培養条件により異なるが、振
どう培養、タンク培養とも通常２−７日の間でその蓄積
が最高に達する。培養中のベナルチンの蓄積量が最高に
なったときに培養を停止し、培養液から目的物質ベナル
チンを単離して精製する。

本発明によって得られるベナルチンの培養物からの採取
に当たっては、その性状を利用した通常の分離手段、例
えば、濾過、吸着または分配カラムクロマト法、ゲルろ
適法、透析法、沈澱法等を単独でまたは適宜組み合わせ
て精製することができる。例えば、ベナルチンは、活性
炭、ダイアイオンＨＰ−２０（三菱化成社製）等の吸着
剤に吸着させ、有機溶剤と水の混合液で溶出される。例
えば、５０％メタノール、５０％アセトン等でベナルチ
ンは吸着剤より溶出される。

ベナルチンをさらに精製するには、シリカゲル（ワコー
ゲルＣ−２００、和光純薬工業社製等）、ＤＥＡＥ−セ
ファデックス（ファルマシア社製）等の吸着剤やセファ
デックスＧ−１０（ファルマシア社製）等を用いるクロ
マトグラフィーまたは向流分配法を行なうとよい。

ベナルチンの培養行程、並びに精製行程での追跡は先に
記した抗ピログルタミールペプチダーゼ活性の測定、お
よびシリカゲル薄層クロマトグラフィーで展開溶媒をＢ
ｕＯＨ−ＡｃＯＨ−Ｈ２Ｏ（４：　１　：　２　）とし
た場合にヘナルチンのＲｆ値が０．３４であることに基
づいて行なった。

以下に本発明の実施例を示すが、これらは単なる一例で
あって本発明を限定するものではない。

ここに例示しなかった多くの変法あるいは修飾手段を用
いうろことは勿論のことである。

災り孤−上 種培地及び生産培地として、ガラクトース２．０％、デ
キストリン２．０％、バタトソイトン（デイフコ社製）
　１．０％、コーンステイープリカー（イッキ社製）０
．５％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシウム０
．２％を含む培地を用いた。なお滅菌前のｐＨは７．４
に調整して使用した。

前記培地を５００ｍ１容三角フラスコに１１０ｍ１ずつ
分注し１２０°Ｃで２０分間滅菌し、これにストレプト
ミセス・エスピー　ＭＪ２４４−５ＦＩ株（ＦＥＲ呂Ｆ
’−１１７６９）の斜面培養の１〜２白金耳を接種し、
２７°Ｃ，１８０回転／分の回転にて、２日間培養した
。二の種培養液２ｍｌを前記培地１１０ｍ１を分注滅菌
した５００ｉの三角フラスコへ移植し、前記と同じ条件
下で２日間培養した。培養終了後、培養液に珪藻土を加
えろ過し、培養ろ液を得た。

実施例　２ 実施例１で得られた培養ろ液２Ｌを活性炭２５０ｍ１の
カラムにかけ、水で洗浄し、５０％アセトン水（７５０
ｍｌ）にて溶離した。活性画分を含む溶離液を減圧濃縮
後、凍結乾燥し活性粗粉末の約３．２ｇを得た。前記粉
末１ｇを少量の水に溶解し、ダイアイオンＨＰ−２０（
三菱化成社製）　２００ｍ１のカラムにかけ、水で洗浄
したのち、５０％アセトン水で溶離した。この溶離液を
濃縮、凍結乾燥し、灰色の活性粉末５７３■を得た。

この粉末を少量の水に溶解し、水で充填したセファデッ
クスＧ−１，０（ファルマシア・ファインケミカル社製
）７００ｍｌのカラムにかけ、水を展開液とするクロマ
トグラフィーを行い、活性画分を濃縮し、凍結乾燥する
と、活性白色粉末１１７■を得た。

さらに、この白色粉末を、セントリフイガル・パーティ
ション・クロマトグラフ−Ｌ、Ｌ、　Ｎ（Ｃｅｎｔｒｉ
ｆｕｇａｌ　　Ｐａｒｔｉｔｉｏｎ　　Ｃｈｒｏｍａｔ
ｏｇｒａｐｈｙ−Ｌ、Ｌ、Ｎ　　）モデルＮＭＦ　（三
鬼エンジニアリング社製）を用いた、ブタノール−酢酸
−水（７５０：　５０　：　７５０）の溶媒系による遠
心液液分配クロマトグラフィにより精製した。溶媒系の
上層を固定相液とし、下層を移動相液として２０℃、　
１．０００　ｒｐｍ、　４０＋１／分で展開し、得られ
た活性画分を濃縮、凍結乾燥することにより、ベナルチ
ンの白色粉末６６■が得られた。

炎直五−旦 ベナルチン白色粉末２０■を０．ＩＮ　ＨＣｌ　５ｍｌ
に溶解し、濃縮、凍結乾燥してベナルチンの塩酸塩の白
粉末２２■を得た。

〔発明の効果〕

本発明の新規物質ベナルチンは、生体内で多様な生理機
能を有するペプチドホルモン（生理活性ペプチド）を基
質して分解、代謝し、ペプチドホルモンの機能調節ある
いは新しい生理活性の発現に関係しているピログルタミ
ールペプチダーゼに対し阻害活性を有することから、新
しい生理作用を有する薬剤としての有用性が期待される
。ベナルチン又はその酸付加塩、例えば塩酸塩、硫酸塩
。

等は免疫調整剤として、また各種の下垂体ホルモン分泌
不全症の治療に有効な医薬としての用途が期待できる。

【図面の簡単な説明】

第１図はベナルチンの水溶液中での紫外部吸収スペクト
ルを示す。 第２図はベナルチンの臭化カリウム錠中での赤外部吸収
スペクトルを示す。 第３図はベナルチンの重ジメチルスルホキシド中での４
００ＭＨｚの’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。 第４図はベナルチンの重ジメチルスルホキシド中での１
００ＭＨｚの”　Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。 手続補正書動創 平成３年４月５日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表わされる酵素阻害物質ベナルチンあるいはその塩。 ２、ストレプトミセス属に属するベナルチン生産菌を培
   養し、その培養物から請求項１に記載の酵素阻害物質ベ
   ナルチンを採取することを特徴とする酵素阻害物質ベナ
   ルチンの製造法。