JPH04117392A - アスコルビン酸リン脂質誘導体及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アスコルビン酸リン脂質誘導体及びリン脂質
とアスコルビン酸をホスホリパーゼＤの存在下で反応さ
せることを特徴とするアスコルビン酸リン脂質誘導体の
製造方法に関するものである。

〔従来の技術〕

リン脂質は卵黄レシチンあるいは大豆レシチンのかたち
で従来より食用乳化剤として食品に広く用いられている
。また、高度に精製されたリン脂質はドラッグデリバリ
イーとして最近利用され始めており、食品、医薬なとの
分野でリン脂質あるいはその誘導体の利用が注目されて
いるところである。したかって、抗酸化活性などの特異
な機能を持つリン脂質誘導体を開発することは産業上非
常に意義あることと考えられる。

一方、アスコルビン酸は、水溶性の抗酸化活性物質であ
り、食品の劣化防止あるいは栄養強化のため広く食品に
利用されている。また、アスコルビン酸リン酸エステル
などの安定な水溶性誘導体の利用も見られるが、これら
は水溶性の高い物質であり、疎水的環境下での抗酸化活
性は期待できない。一方、疎水性のアスコルビン酸誘導
体としては、アスコルビン酸ステアリン酸エステルが食
品添加物として利用され、アスコルビン酸の２位あるい
は３位にエーテル結合て長鎖アルキル基を導入したもの
か医薬品として開発されている。しかし、これらの脂溶
性アスコルビン酸誘導体は疎水性部位として一本の長鎖
アルキル基を持つものであり、生体膜に対する親和性か
小さい。生体膜脂質の過酸化を抑制するためには、膜の
表層部位て抗酸化性を効果的に発現するものか有効であ
る。

生体膜脂質の過酸化は種々の疾病との深い関係か指摘さ
れており、生体膜に対する親和性か高く、かつ膜表層部
位で抗酸化性を発現する抗酸化剤の開発が強く望まれて
いる。

〔発明か解決しようとする課題〕

本発明の第一の目的は、アスコルビン酸にリン脂質の疎
水性と生体膜に対する高い親和性を付与することによっ
て、疎水的環境下あるいは生体膜界面において抗酸化活
性を効果的に発現する新規アスコルビン酸リン脂質誘導
体を提供することにある。また、第二の目的は上記のア
スコルビン酸リン脂質誘導体の製造方法を提供すること
にある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記の課題を解決するため鋭意研究を重
ねた結果、アスコルビン酸の６位にホスファチジル基を
持つリン脂質誘導体が疎水的環境下あるいはリン脂質か
らなる多重膜リポソームの界面で抗酸化活性を効果的に
発現することを見出した。また、リン脂質とＬ−アスコ
ルビン酸とをホスホリパーゼＤの存在下で反応させると
、ホスファチジル基転移反応が進行し、高い変換率で上
記アスコルビン酸リン脂質誘導体が生成することを見出
し、本発明に到達した。

すなわち、本発明は下記一般式（Ｉ）で示される新規ア
スコルビン酸リン脂質誘導体及び下記−般式（Ｉｔ）で
示されるリン脂質とアスコルビン酸をホスホリパーゼＤ
の存在下で反応させることを特徴とする該アスコルビン
酸リン脂質誘導体の製造方法に関するものである。

本発明の新規アスコルビン酸リン脂質誘導体は、一般式 ％式％ で示されるものであり、式中Ｒ１及びＲ２は、同一また
は異なるものであって、炭素数８〜２４の飽和または不
飽和脂肪酸残基である。

次に、本発明の新規アスコルビン酸リン脂質誘導体の製
造方法について説明する。

本発明に用いるリン脂質は、一般式 ％式％ で示されるもので、式中Ｒ１及びＲ２は、同一または異
なるものてあって、炭素数８〜２４の飽和または不飽和
脂肪酸残基てあり、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｎ”（ＣＨ３
）３゜−（ＣＨ２）２ＮＨ２，−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）
ＣＯＯＨ，−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２０Ｈのいずれか
または混合基である。

ホスホリパーゼＤとしてはホスファチジル基転移活性を
持つものであれば使用できる。例えば、ホーネンコーポ
レーション■製のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｙｄｉｃ
ｕｓ由来のホスホリパーゼＤ、東洋醸造■製のＳｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、由来のホスホリパーゼ゛Ｄが
あげられる。

反応に用いる溶剤としては、リン脂質を溶解もしくは分
散させるもので、酵素活性を著しく低下させないもので
あれば使用できる。例えば、ｎ−へキサン、シクロヘキ
サン、ジエチルエーテルクロロホルム、酢酸エチル、ア
セトニトリル、　ｔｅｒｔ−ブタノール及びこれらの混
合溶剤があげられる。

反応はホスホリパーゼＤを含むアスコルビン酸水溶液に
対しリン脂質を溶解もしくは分散させた溶剤を添加し、
１〜７２時間、好ましくは３〜２４時間、１０〜５０°
Ｃ１好ましくは２０〜４０°Ｃで攪拌することによって
行なわれる。アスコルビン酸水溶液のｐＨは合成反応に
大きな影響を与えるので、アスコルビン酸リン脂質誘導
体の生成量か多く、かつ副生成物であるホスファチジン
酸の生成量が少なくなるような＋１）（に調整すること
か望ましい。例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　１
ｙｄｉｃｕｓ由来のホスホリパーゼＤ（ホーネンコーポ
レーション製）を用いる場合は、アスコルビン酸水溶液
のｌ）Ｈを４．５に調整しておくことが望ましい。また
、アスコルビン酸の濃度は高いほどリン脂質に対するア
スコルビン酸リン脂質誘導体への転換率が高くなので、
アスコルビン酸の濃度は飽和濃度もしくはそれに近い濃
度にしておくことが望ましい。アスコルビン酸水溶液と
溶剤の量比は、攪拌によって両者が十分に混合するもの
であればよい。例えば、アスコルビン酸水溶液１０００
ｒＩＬｌに対し溶剤２００〜２００　Ｏｒ！ＬＩを用い
れば、攪拌によって両者を十分混合し、反応させること
ができる。

反応終了後、反応液から溶媒抽出によってアスコルビン
酸リン脂質誘導体を抽出し、次いて抽出物から常法、例
えばシリカゲルカラムクロマトグラフィーあるいは溶剤
分別によって高純度のアスコルビン酸リン脂質誘導体か
得られる。

このように本発明によれば、アスコルビン酸及びリン脂
質から、単純な反応行程により新規なアスコルビン酸リ
ン脂質誘導体か得られる。

〔実施例〕

次に、本発明を実施例により詳しく説明する。

試験例　１ 合成反応に用いる溶剤の反応に対する影響を調べた。ｐ
Ｈを４．５に調整した０、８Ｍのアスコルビン酸水溶液
１ｍＩ！に対し、４．５ＵのＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｌｙｄｉｃｕｓ由来のホスホリパーゼＤ（ホーネンコー
ポレーション製）及び１０μｍｏｌの卵黄ホスファチジ
ルコリンを溶解あるいは分散させた溶剤１ｍｊを添加し
、３０°Ｃで３０分振盪し反応させた。表１に７種類の
溶剤を用いた場合のアスコルビン酸リン脂質誘導体及び
ホスファチジン酸の生成量を示す。

表から明らかなように、ジエチルエーテルを用いた場合
、アスコルビン酸リン脂質誘導体の生成量が一番多く、
次いて酢酸エチルであった。また、アスコルビン酸リン
脂質誘導体と副生成物であるホスファチジン酸との生成
量比はジエチルエーテルを用いた場合が最大で、次いて
酢酸エチルであった。このことから、ジエチルエーテル
及び酢酸エチルが望ましい溶剤であることが分かる。

表１　合成反応に対する溶剤の影響 実施例１ ｐＨを４．５に調整した２、０Ｍのアスコルビン酸水溶
液ｌＯ−に対し、４５Ｕのｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌ
ｙｄｉｃｕｓ由来のホスホリパーゼＤ（ホーネンコーポ
レーション製）及び１００■のシミリストイルホスファ
チジルコリンを分散したジエチルエーテル溶液１０ｒＩ
Ｌｌを添加し、３０°Ｃて２４時間振盪し攪拌した。

この反応により約１０３■のアスコルビン酸リン脂質誘
導体を得た。反応混合液からクロロホルム：メタノール
（２：１、ｖ　／　ｖ　）で抽出し、抽出物をケイ酸カ
ラムで精製することによって高純度アスコルビン酸リン
脂質誘導体を得た。このアスコルビン酸リン脂質誘導体
の近赤外線スペクトルにおいて１７３８ａｎ−’（Ｃ＝
Ｏ）、　１６００ｃｍ−’（Ｃ＝Ｃ）、　１２３１ｃｍ
−’（Ｐ＝Ｏ）、　１１０９ｃｍ　−’　（Ｐ−０−Ｃ
）に吸収ピークか認メラした。また、質重スペクトル（
ＦＡＢ）では、ｍ／ｚ７４９に（Ｍ−Ｈ）−１ｍ／ｚ　
２２７に脂肪酸陰イオン、ｍ／ｚ５９１にホスファチジ
ン酸陰イオンが認められた。

本アスコルビン酸リン脂質誘導体の”Ｃ−ＮＭＲスペク
トルの帰属を表−２に示す。これらの結果よりこのアス
コルビン酸リン脂質誘導体かアスコルビン酸の６位の水
酸基にホスファチジル基かリン酸エステル結合したもの
であることか確認された。

表−２”Ｃ−ＮＭＲ化学シフトの帰属 ａ、　　３Ｊ、、＝７．３３Ｈｚ；　　ｂ、　　２Ｊ、
、＝５．５０Ｈｚｃ、　　３Ｊｐｃ＝８．２５Ｈｚ；　
　ｄ＋　　２Ｊｐｃ＝５．５０Ｈｚ実施例２ ｐＨを４．５に調整した０、８Ｍのアスコルビン酸水溶
液１−に対し、４．５ＵのＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌ
ｙｄｉｃｕｓ由来のホスホリパーゼＤ（ホーネンコーポ
レーション製）及び１０μｍｏｌの卵黄ホスファチジル
コリンを溶解したジエチルエーテル溶液ｌ−を添加し、
３０℃で５時間振盪し攪拌した。

この反応により約８μｍｏｌのアスコルビン酸リン脂質
誘導体が生成した。反応混合液からクロロホルム：メタ
ノール（２：１、ｖ／ｖ）で抽出し、抽出物をケイ酸カ
ラムで精製することによって高純度アスコルビン酸リン
脂質誘導体を得た。

参考例１ 実施例１によって得られたアスコルビン酸リン脂質誘導
体の抗酸化活性をリノール酸メチルのラジカル連鎖自動
酸化反応の抑制より評価した。

１００ｍＭのリノール酸メチル、１０ｍＭの脂溶性ラジ
カル発生剤（２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバ
レロニトリル））、　０．０９１ｍＭのアスコルビン酸
リン脂質誘導体を含むヘキサン／イソプロパツール（８
：３、Ｖ／Ｖ）を３７°Ｃでインキュベートし、経時的
にサンプリングし、高速液体クロマトグラフィーでリノ
ール酸メチルハイドロパーオキサイドの生成量を分析し
た。

表−３に示すように、アスコルビン酸リン脂質誘導体は
、有機溶媒中でリノール酸メチル／Ｓイドロバ−オキサ
イドの生成を抑制し、抗酸化活性を有することが明らか
となった。

参考例２ 実施例１によって得られたアスコルビン酸リン脂質誘導
体の抗酸化活性を多重層リポソームのラジカル連鎖自動
酸化反応の抑制より評価した。５ｍＭの卵黄ホスファチ
ジルコリン、０．５ｍＭのキレート剤（ジエチレントリ
アミンペンタアセテート）。

１０℃Ｍのアスコルビン酸リン脂質誘導体あるいはＬ−
アスコルビン酸、２０ｍＭの水溶性ラジカル発生剤（２
，２°−アゾビス（アミジノプロパン）塩酸塩）を含む
１０ｍＭ）’Ｊスス−酸緩衝液ｐＨ７，４を３７°Ｃで
インキュベートし、経時的にサンプリングし高速液体ク
ロマトグラフィーでホスファチジルコリンハイドロパー
オキサイドの生成量を分析した。

表−４に示すように、アスコルビン酸はほとんとホスフ
ァチジルコリンハイドロパーオキサイドの生成を抑制し
なかったか、アスコルビン酸リン脂質誘導体は顕著に抑
制し、効率的に抗酸化活性を発現することか明らかとな
った。

表−３有機溶媒中てのアスコルビン酸リン脂質誘導体の
抗酸化活性 表−４ 多重層リポソーム懸濁液でのアスコルビン酸リン脂質誘
導体の抗酸化活性 〔発明の効果〕 本発明により得られるアスコルビン酸リン脂質誘導体は
、疎水的環境下あるいはリン脂質膜界面においてアスコ
ルビン酸より優れた抗酸化性を有している。また、リン
脂質としての界面活性も期待される。したがって、アス
コルビン酸リン脂質誘導体は、食用酸化防止剤、化粧品
素材、医薬品等への利用が期待されるとともに、 リン脂質の用 途開発に寄与するところか大きい 特許出願人　農林水産省食品総合研究所長］・・−ゴコ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は、同一または異なるもので
   あって、炭素数８〜２４の飽和または不飽和脂肪酸残基
   である。〕で示されるアスコルビン酸リン脂質誘導体。
2. （２）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） 〔式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は、同一または異なるもので
   あって、炭素数８〜２４の飽和または不飽和脂肪酸残基
   であり、Ｒ＿３は−（ＣＨ＿２）＿２Ｎ＾＋（ＣＨ＿３
   ）＿３，−（ＣＨ＿２）＿２ＮＨ＿２，−ＣＨ＿２ＣＨ
   （ＮＨ＿２）ＣＯＯＨ，−ＣＨ＿２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ＿
   ２ＯＨのいずれかまたは混合基である。）で示される化
   合物とアスコルビン酸をホスホリパーゼＤの存在下で反
   応させることを特徴とする、請求項１記載の一般式（
   I ）で示されるアスコルビン酸リン脂質誘導体の製造方
   法。