JPH0371438B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 黄体形成ホルモン（LH）及び卵胞刺激ホルモ
ン（FSH）は，視床下部に生成する黄体形成ホ
ルモン放出ホルモンLH−RHの支配下に脳下垂
体前葉から放出される。LH及びFSHは生殖線に
作用して、ステロイドホルモンの合成を刺激する
と共に生殖体熟成を刺激する。LH−RHの脈動
的放出及びそれに伴うLH及びFSHの放出によつ
て家畜及びヒトの生殖周期は制御される。さら
に、LH−RHは胎盤に作用し、ヒト絨毛ゴナド
トロピン（HCG）の放出に作用し、さらに生殖
線に直接作用する。LH−RHの活性同族体は２
つの作用機構によつて妊娠率の制御に有用であ
る。LH−RH同族体の投与量が小さいと排卵を
刺激し、視床下部及び排卵不妊症の治療に有用で
ある。さらに、性機能不全状態及び陰萎の治療並
びに雄に於ける精子形成及びアンドロゲン生成を
刺激するのに用いることができる。反対に、効力
が大きく且つ持続するLH−RH同族体を比較的
多量に投与すると逆の作用を示し、雌に於ける排
卵を妨げると共に雄に於ける精子形成を抑制す
る。雄及び雌に於ける副臓器の重量減少を含め、
生殖線からの性ステロイドの正常な循環量が低減
することも上述の効果に関連する。家畜は、この
逆効果によつて、飼料が充分な状態では体重増加
が促進され、妊娠動物においては流産しやすくな
り、また、一般にこの逆効果は化学的不妊剤とし
て作用する。 天然ホルモン放出性ホルモンLH−RHは天然
アミノ酸（アキラル・アミノ酸グリシンを除いて
Ｌ配置を示す）からなるデカペプチドである。そ
の配列は次の通りである。（ピロ）Glu−His−
Trp−Ser−Tyr−Gly−Leu−Arg−Pro−Gly−
NH₂。この天然物質の多くの同族体がこれまで
研究対象に取り上げられてきたが、それらの大多
数は生物学的活性が低く、臨床的使用には適当で
ないことが判明している。ある選択された態種が
生物学的活性に有用な効果を及ぼすことがわかつ
ている。特に意義のある態種は６位残基をGlyか
らＤ−アミノ酸に代えることにより得られる。例
えば、６位に於いてGly残基をＤ−Ala、Ｄ−
Leu、Ｄ−PheまたはＤ−Trpで置換するとLH−
RHに比較して活性の増大した一連のLH−RH同
族体が得られる。［Ｄ−Ala⁶］LHRHについては
M.Monahan，et al，Biochem．，12、4616
（1973）；［Ｄ−Leu⁶］LHRH及びdesGly¹⁰［Ｄ−
Leu⁶， Pro NHEt⁹］LHRHに対しては J.A.Vilchez−Martinez，et al，Biochem.
Biophys.Res.Comm．，59、1226（1974）；［Ｄ−
Phe⁶］LHRHに対してはD.H.Coy，et al，J.
Med.Chem．，19、423（1976）；並びに ［Ｄ−Trp⁶］LHRHに対してはW.Vale，et al，
Clinical Endocrinology，5th Supp．，
Blackwell Scientific Publications，Oxford，
England（1976）、P.2615及びD.H.Coy，et al；
Biochem.Biophys.Res.Comm．，67、576（1979）
にそれぞれ記載されている。 上述のように、６位における置換によつて活性
が実質的に増大するのみならず、さらに、10位に
おけるGly−NH₂を除去してアルキル−、シクロ
アルキル−もしくはフルオロアルキル−アミドの
形態のノナペプチドとすることによつて、また
は、Gly−NH₂をα−アザグリシンアミドで置換
することによつて活性を増大させることができ
る。例えば、M.Fujino，et al，Biochem.
Biophys.Res.Comm．，49、863（1972）、D.H.
Coy，et al，Biochem．14、1848（1975）及びA.
S.Dutta，et al，J.Chem.Soc.Perkin Ｉ，1979、
379を参照されたい。 ７位のロイシン残基をＮ−メチル−ロイシンで
置換すると酵素分解に対する安定性が増大する。
例えば、N.Ling，et al，Biochem.Biophys.Res.
Comm．，63、801（1975）を参照されたい。 ３位のトリプトフアン残基を３−（１−ナフチ
ル）−Ｌ−アラニンで置換すると生物学的効力が
増大する。例えば、K.U.Prasad，et al，J.Med.
Chem．，19、492（1976）およびY.Yabe，Chem.
Pharm.Bull．，24（12）、3149（1976）を参照され
たい。 実質的に生物学的活性を維持したまま、５位の
チロシン残基をフエニルアラニンまたは３−（１
−ペンタフルオロフエニル）−Ｌ−アラニンで置
換することができる。例えば、N.Yanaihara，et
al，Biochem.Biophys.Res.Comm．，52、64
（1973）、およびD.Coy，et al，J.Med.Chem．，
16、877（1973）を参照されたい。 上述のLH−RHの生物学的活性よりもさらに
一層高度の生物学的活性を有し且つ動物及びヒト
に臨床的に使用できる別のLH−RH同族体が望
まれる。 本発明は６位にある種の好脂性Ｄ−アミノ酸を
有するLH−RHの新規なノナペプチド及びデカ
ペプチド誘導体を提供する。さらに、本発明はそ
の様な化合物の医薬組成物としての利用に関す
る。さらに、本発明は上記新規化合物の製造方法
及びその製造に有用な中間体をも提供する。 本発明に係るLH−RHの新規なノナペプチド
及びデカペプチド誘導体は、６位に好脂性炭素環
残基を含む特定の非天然Ｄ−アミノ酸残基、特に
２もしくはそれ以上の炭素環アリール（もしくは
パーヒドロアリール）環または高度にアルキル置
換されたフエニル（もしくはシクロヘキシル）環
を含む残基を持つ非天然Ｄ−アミノ酸残基を有す
る。 さらに具体的に言えば、本発明に係る化合物は
次式（）で表わされるノナペプチド及びデカペ
プチド並びにそれらの医薬的に許容され得る塩で
ある。 （ピロ）Glu−His−Ｖ−Ser−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Arg
−Pro−Ｚ
（） 上記式（）に於いて、Ｖはトリ
プトフイル、フエニルアラニルまたは３−（１−
ナフチル）−Ｌ−アラニルであり、Ｗはチロシル
であり、Ｘは式 （式中、Ｒはナフチル、フルオレニル、ビフエ
ニリル、トリ−低級アルキル置換フエニルまたは
ジ−フエニルメチルである）で表されるＤ−アミ
ノ酸残基であり、ＹはロイシルまたはＮ−メチル
ロイシルであり、そしてＺはグリシンアミドまた
は【式】 （R¹は水素または低級アルキルである）であ
る；但し、Ｖがトリプトフイルであり、Ｗがチロ
シルであり、Ｘが３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラ
ニルであり、Ｙがロイシルであり、Ｚがグリシン
アミドである化合物を除く。 本発明を説明するに際し便宜上前述のように、
生化学命名法（Biochemistory），11、1726
（1972）に記載されているIUPAC−IUBコミツシ
ヨンが推奨しているペプチド分野に於いて一般に
認められている種々のアミノ酸に対する慣用略号
を使用する。但し、アキラルアミノ酸グリシンお
よび６位のＸで表わされるアミノ酸を除きＬ−ア
ミノ酸を表わす。本明細書に於けるすべてのペプ
チド配列は一般的に受け入れられている規約に従
つてＮ−末端アミノ酸を左手にまたＣ−末端アミ
ノ酸を右手にそれぞれ記載することにより表わ
す。 本明細書に於いて使用する用語「医薬的に許容
され得る塩」とは、親化合物の所望生物学的活性
を維持し、好ましからざる毒性作用を示さない塩
を指す。かかる塩の例としては(a)無機酸、例え
ば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸から
形成される酸付加塩；有機酸、例えば、酢酸、酒
石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコ
ン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安
息香酸、タンニン酸、パモイン酸、アルギニン
酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、
ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクトロン酸か
ら形成される塩；(b)多価金属カチオン、例えば、
亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネ
シウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニツケ
ル、カドミウム等の塩、またはＮ，N′−ジベン
ジルエチレン−ジアミンもしくはエチレンジアミ
ンから形成される有機カチオンの塩；または(c)上
記(a)及び(b)の組み合わせ、例えば、亜鉛タンネー
ト塩などがある。 本明細書で使用する用語「低級アルキル」とは
炭素原子数１乃至４の直鎖または分岐鎖飽和炭化
水素基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピ
ル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、
sec−ブチル及びtert−ブチルを指す。「シクロア
ルキル基」とは炭素原子数３乃至６の環状飽和炭
化水素基、例えば、シクロプロピル、シクロブチ
ル、シクロペンチル及びシクロヘキシル等を指
す。用語「フルオロ低級アルキル」とは、１また
は２以上の水素原子が弗素で置換された低級アル
キル基、例えば、トリフルオロメチル、ペンタフ
ルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル
等を指す。 本明細書に於いて「ナフチル」は１−及び２−
ナフチルを含み、「アントリル」は１−、２−及
び９−アントリルを含み、「フルオレニル」は２
−、３−、４−および９−フルオレニルを含み、
「フエナントリル」は２−、３−、および９−フ
エナントリルを含み、また「アダマンチル」は１
−及び２−アダマンチルを含む。 本発明に係る好ましい化合物は上記式（）中
のＸが３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニルまたは
３−（２，４，６−トリメチルフエニル）−Ｄ−ア
ラニルであり、Ｚがグリシンアミドであり、Ｖが
トリプトフイルまたはフエニルアラニルであり、
Ｗがチロシルであり、ＹがロイシルまたはＮ−メ
チル−ロイシルである。特に好ましい化合物は （ピロ）Glu−His−Trp−Ser−Tyr−３−（２
−ナフチル）−Ｄ−アラニル−Ｎ−メチル−Leu
−Arg−Pro−Gly−NH₂、 （ピロ）Glu−His−Phe−Ser−Tyr−３−（２
−ナフチル）−Ｄ−アラニル−Leu−Arg−Pro−
Gly−NH₂、 （ピロ）Glu−His−Trp−Ser−Tyr−３−
（２，４，６−トリメチルフエニル）−Ｄ−アラニ
ル−Leu−Arg−Pro−Gly−−NH₂並びにそれ
らの医薬的に許容される塩である。 本発明に係る化合物、特に塩はこれまで最も大
きなLH−RHアゴニスト活性を示すとされてい
る（ピロ）Glu−His−Trp−Ser−Tyr−Ｄ−
Trp−Ser−Arg−Pro−Gly−NH₂及びそれに対
応するプロリルエチルアミドに比べて、驚くほど
大きく且つ長く持続するLH−RHアゴニスト活
性を示す。効力の第１の目安は、正常の周期を持
つ雌ラツト成体に１日２回皮下注射することによ
り観察される（２週間に亘つて測定）発情を部分
的または完全に抑制する能力である。 LH−RH同族体及び本発明の化合物について
行つたその他の生物検査は次の通りである。 (a) 発情静止期または発情前期にある雌ラツトへ
の皮下注射による排卵誘発（Rippel，et al，
Proc.Soc.Exp.Biol.Med．，148、1193（1975））、 (b) 分散せる脳下垂体前葉細胞培養によるLH及
びFSH放出を放射線免疫検査により測定
（Vale，et al，Endocrinology，91、562
（1972））、及び (c) 卵巣削除ステロイド処理せるラツトに静脈注
射した際観察されるLH及びFSHの末梢循環系
への放出を放射線免疫検査により測定
（Arimura，et al，Endocrinology，90、163
（1972））。 さらに進んだレベルでは、これらの化合物の活
性は、良性前立線肥大症の犬に見られる前立線の
大きさの大きな減少、精子形成の低下及び循環系
及び睾丸のテストステロン水準の低下による生体
内検査により説明することができる。 従つて、本発明の化合物はLH及びFSHの制御
または直接の生殖線作用が重要で広範囲の状況に
於いて使用することができる。それらの用途には
次のものが挙げられる。 生理学的利用（低投与効果） 雌の哺乳動物の無排卵不妊症に於ける排卵誘発
及び排卵調節、 婦人の黄体機能不全に原因する不妊の治療、 両性の生殖線刺激物減退または生殖線不全に原
因する不妊の治療、 家畜のノウ胞性卵巣／ニンフオマニア症候群の
治療、 性行動の誘発及び増進あるいは陰萎、冷感症の
治療。 逆利用（高投与効果） 雌の避妊、 排卵の抑制あるいは遅延、 分娩の誘発、 排卵の調節、 発情抑制、 雌動物における成長の促進、 黄体ホルモン分泌、月経の誘発、 妊娠初期３ケ月期に於ける堕胎剤、 子宮内膜症の治療、 哺乳動物の腫瘍及びホウ腫の治療、 多ノウ胞性卵巣症候群の治療、 （Stein−Leventhal） 子宮癌の治療、 良性前立線肥大症及び前立線癌の治療、 雄の避妊、 両性の、生殖線ホルモン生成過剰に原因する疾
病の治療、 雄の食肉動物の機能的去勢、 発状前期の分泌の抑制。 さらに、これらの化合物及び従来のLH−RH
化合物は、HCGの循環水準を抑制すると共に胎
盤に直接作用するみかけの堕胎剤として驚くべき
程の新しい有用性を示す。この胎盤作用は絨毛膜
癌に対する利用性を示唆する。 本発明は、他の一面に於いて、上述の化合物の
特定の使用（LH−RH同族体について上記には
説明していない使用を含む）、即ち雌に於ける排
卵抑制（即ち避妊）、子宮内膜症の処置、良性前
立線肥大症の治療及び雄に於ける精子形成の抑制
（即ち避妊）に関する。即ち、本発明は上述のよ
うな本発明に係る化合物またはそれを含む医薬組
成物の有効量を哺乳類に投与することからなる排
卵抑制、子宮内膜症処置、前立線大きさの低減ま
たは精子形成抑制の為の方法に関する。 本発明方法の実施に於いては本発明に係る化合
物またはそれを含む医薬組成物の有効量を、治療
を必要とするまたは治療が望まれている個体に投
与する。これらの化合物または組成物は最終用途
に応じて種々の経路で投与することができ、例え
ば経口的、非経口的（皮下、筋肉内及び静脈内投
与）、膣内（特に避妊用）肛門内、口腔内（舌下
を含む）または鼻内投与することができる。最も
適当な投与経路は用途、活性成分の種類非投与動
物及び医者の判断に依存するであろう。 本発明の化合物または組成物はまた後に詳しく
述べるように緩徐放出、沈着または充填調剤によ
つて投与することができる。 一般に、「逆利用」または高投与利用と呼ばれ
る上記用途に対しては、活性成分を１日当たり体
重キログラム当たり約0.01乃至100μｇ、好ましく
は約0.1乃至5.0μｇ投与すれば良い。この投与は
１日１回の投与、１日数回の投与またはより有効
な結果を得る為に緩徐放出によつて投与すること
ができる。 これらの化合物及び組成物の正確な投与量及び
投与方法は治療すべき非投与固体、治療の種類、
疾患の程度及び当然のことながら、医者の判断に
依存するであろう。一般に、非経口的投与では、
吸収に大きく依存する他の投与方法に比べて低い
投与量でよい。 本発明に係る化合物は耐容性に優れ、比較的非
毒性である。代表的化合物をマウスに皮下注射し
た場合LD₅₀は40mg／Kgより大きく、上述の治療
投与量に比べて非常に安全性が高い。 本発明はさらに他の一面に於いて前記本発明に
係る化合物に医薬的に許容され得る非毒性担体を
配合してなる、活性成分として上記化合物を含む
医薬組成物を提供する。上述のように、かかる組
成物は、非経口的（皮下、筋肉内または静脈内）
投与に対しては特に液状溶液もしくは懸濁液の形
態、膣内もしくは肛門内投与に対しては特にクリ
ーム及び坐薬のような半固形の形態、経口もしく
は口腔投与に対しては特に錠剤もしくはカプセル
の形態、鼻内投与に対しては特に粉末、点鼻液も
しくはエアロゾルの形態でそれぞれ適用すること
ができる。 本発明の組成物はいかなる単位投与形態で投与
してもよく、また、例えば、Remington′s
Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing
Company，Easton，PA.，1970に記載される製
薬業界で周知のいかなる方法によつて調製するこ
ともできる。非経口投与調剤は普通の賦形剤、無
菌水もしくは食塩水、ポリエチレングリコールそ
の他のポリアルキレングリコール、植物油、水素
化ナフタレンを配合することができる。膣内もし
くは肛門内投与用調剤、例えば坐薬には、例えば
ポリアルキレングリコール、ワセリン、ココアバ
ターなどの賦形剤を配合することができる。吸入
投与用調剤は固形であつてもよく、賦形剤として
例えばラクトーズを配合することができ、また点
鼻液の形態の調剤は水性もしくは油性の溶液であ
つてよい。口腔内投与に対して使用される代表的
賦形剤には砂糖、ステアリン酸カルシウム、ステ
アリン酸マグネシウム、あらかじめゲル化せる澱
粉などがある。 本発明に係る化合物は長期間に亘つて、例え
ば、１週間乃至１年に亘つて単一投与を続けるこ
とが望ましい。種々の緩徐放出沈着もしくは充填
投与形態を利用することができる。例えば、体液
に対する溶解度が低い化合物の医薬的に許容され
得る非毒性塩を配合することができる。そのよう
な塩とては、例えば(a)リン酸、硫酸、クエン酸、
酒石酸、タンニン酸、パモン酸、アルギニン酸、
ポリグルタミン酸、ナフタレン、モノ−もしくは
ジ−スルホン酸、ポリガラクトロン酸等のような
多塩基酸の酸付加塩；(b)亜鉛、カルシウム、ビス
マス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、
銅、コバルト、ニツケル、カドミウム等の多価金
属カチオンの塩または、例えば、Ｎ，N′−ジベ
ンシルエチレンジアミンまたはエチレンジアミン
から形成される有機カチオンの塩；または(c)上記
(a)及び(c)の組み合わせ例えば亜鉛タンネート塩が
挙げられる。さらに、本発明の化合物または、好
ましくは、上述のような比較的不溶性の塩をゲル
の形態、例えばゴマ油を用いて注射に適当なアル
ミニウムモノステアレートゲルの形態に調製する
ことができる。特に好ましい塩は亜鉛塩、亜鉛タ
ンネート塩、パモン酸塩等である。他の注射用緩
徐放出調剤には、例えば米国特許3773919に記載
されるようにポリ乳酸／ポリグリコール酸重合体
のような緩徐減成性非毒性非抗原性重合体に化合
物または塩を分散または封入したものである。 本発明の化合物または、好ましくは、上述のよ
うな比較的不溶性の塩または、特に動物に投与す
る場合にはコレステロールマトリツクスシラスチ
ツクペレツトの形態に調剤することができる。さ
らに他の緩徐放出性沈着または充填調剤、例えば
細胞内脂肪粒子は文献に記載されよく知られてい
る。例えば、“Sustained and Controlled
Release Drug Delivery Systems”J.R.
Robinsoned.，Marcel Dekker，Inc.，New
York，（1979）を参照されたい。LH−RH型化
合物に関する記録は例えば米国特許4010125に見
られる。 本発明にかかるポリペプチド類はポリペプチド
技術分野に於いて知られている技法により合成す
ることができる。利用される技法は、 J.M.Stewart及びJ.D.Young「固相ペプチド合
成」、W.H.フリーマン社、サンフランシスコ
（1969）、及びJ.マインフオーフアー「ホルモン性
たん白及びペプチド」第２巻、P.46、アカデミツ
クプレス（ニユーヨーク）、1973、（固相ペプチド
合成）並びにE.Schroder及びK.Lubke「ザ・ペプ
チド」第１巻、アカデミツクプレス（ニユーヨー
ク）、1965（従来の溶液状合成）に記録されてい
る。 一般にこれらの方法は１または２以上のアミノ
酸または適当に保護されたアミノ酸を成長しつつ
あるペプチド鎖に順次加えることからなる。通常
は、第１アミノ酸のアミノ基もしくはカルボキシ
ル基のいずれかを適当な保護基で保護する。次い
で、保護されたもしくは誘導体化されたアミノ酸
は不活性個体支持体に付着せしめるかまたは溶液
状態のまま、適当に保護された補完的（アミノま
たはカルボキシル）基を有する次のアミノ酸をア
ミド結合を形成するのに適当な条件下に加えるの
に利用する。次いで、保護基をこのように新たに
加えたアミノ酸残基から除き次のアミノ酸（適当
に保護された）を加える。すべての所望アミノ酸
を適正な順序で結合せしめた後、残留保護基（及
び固体支持体）は順次または同時に取除いて最終
ポリペプチドとする。この一般的手法の単純な変
形態様として、成長しつつある鎖に２種以上のア
ミノ酸を１度に加えることができる。例えば、キ
ラル中心をラセミ化しない条件下に保護されたポ
リペプチドを適切に保護されたジペプチドでカプ
リングして、ペンタペプチドを形成する（保護基
の脱離後）ことができる。 本発明にかかる化合物の特に好ましい製法は固
相ペプチド合成である。 この特に望ましい方法に於いてはアミノ酸のα
−アミノ酸官能基を酸または塩基感応基で保護す
る。このような保護基はペプチド結合形成条件下
に安定であるべきである、と同時に成長しつつあ
るペプチド鎖の破壊またはその中に含まれるキラ
ル中心のラセミ化を伴うことなく容易に除去でき
るものでなければならない。適当な保護基には、
ｔ−ブチルオキシカルボニル（Boc）、ベンジル
オキシカルボニル（Cbz）、ビフエニルイソプロ
ピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボ
ニル、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−
ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカ
ルボニル、ｏ−ニトロフエニルスルフエニル、２
−シアノ−ｔ−ブチルオキシカルボニル、９−フ
ルオレニルメチルオキシカルボニルなどがあり、
中でも特にｔ−ブチルオキシカルボニル（Boc）
が好ましい。 特に好ましい側鎖保護基には、アルギニンに対
して：ニトロ、ｐ−トルエンスルホニル、４−メ
トキシベンゼンスルフオニル、Cbz、Boc及びア
ダマンチルオキシカルボニルがあり、チロシンに
対して：ベンジル、ｏ−ブロモベンジルオキシカ
ルボニル、２，６−ジクロロベンジル、イソプロ
ピル、シクロヘキシル、シクロペンチル及びアセ
チルがあり、セリンに対して：ベンジル、テトラ
ヒドロピラニルがあり、ヒスチジンに対して：ベ
ンジル、ｐ−トルエンスルホニル及び２，４−ジ
ニトロフエニルがある。 Ｃ−末端アミノ酸は適当は固体支持体に付着せ
しめる。上述の合成に有用な適当な固体支持体
は、反応試薬及び多段縮合−保護基脱離反応の反
応条件に不活性であり且つ使用媒体に不溶性の物
質である。適当な固体支持体にはクロロメチルポ
リスチレン−ジビニルベンゼン重合体、ヒドロキ
シメチル−ポリスチレン−ジビニルベンゼン重合
体などがあり、中でもクロロメチル−ポリスチレ
ン−１％ジビニルベンゼン重合体が望ましい。Ｃ
−末端がグリシンアミドである特別な場合にはP.
Rivaille，et al，Helv.Chim.Acta．，54、2772
（1971）に記載されるベンズヒドリルアミノ−ポ
リスチレン−ジビニルベンゼン重合体が特に有用
な支持体である。クロロメチルポリスチレン−ジ
ビニルベンゼン型樹脂への付着は、N〓−保護ア
ミノ酸、特にBoc−アミノ酸のセシウム、テトラ
メチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、
４，５−ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデセ
ン−５もしくは同様な塩をエタノール、アセトニ
トリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（DMF）
などの溶媒に溶解した形態で、特にそのセシウム
塩をDMFに溶解した形態で、高温たとえば約40
乃至60℃、好ましくは約50℃に於いて約12乃至48
時間、好ましくは約24時間クロロメチル樹脂と反
応させることにより達成される。N〓−Boc−ア
ミノ酸のベンズヒドリルアミン樹脂への付着は、
温度約10乃至50℃、好ましくは25℃に於いてジク
ロロメタンまたはDMFのような溶媒、好ましく
はジクロロメタン中で約２乃至約24時間Ｎ，
N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド
（DCC）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
（HBT）を介在したカプリングを行うことにより
達成される。引続く保護アミノ酸のカプリングは
業界に於いて広く知られている自動ポリペプチド
合成器を用いて行うことができる。N〓−保護基
の除去は、例えば、トリフルオロ酢酸の塩化メチ
レン溶液、塩化水素のジオキサン溶液、塩化水素
の酢酸溶液もしくはその他の強酸溶液、好ましく
はトリフルオロ酢酸のジクロロメタン50％溶液の
存在下ほぼ常温で達成することができる。それぞ
れの保護されたアミノ酸は好ましくは約2.5モル
過剰量用いられ、またカツプリングはジクロロメ
タン、ジクロロメタン／DMF混合物、DMF等、
好ましくは塩化メチレン中でほぼ常温に於いて行
うことができる。カツプリング剤は通常DCCの
ジクロロメタン溶液であるが、Ｎ，N′−ジ−イ
ソ−プロピルカルボジイミドまたはその他のカル
ボジイミドを単独でまたはHBT、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミド、その他のＮ−ヒドロキシイミ
ド類もしくはオキシム類の存在下に用いてもよ
い。あるいは、保護されたアミノ酸活性エステル
類（例えばｐ−ニトロフエニル、ペンタフルオロ
フエニル等）または対称無水物を用いることもで
きる。 固相合成の最終段階に於いて完全に保護された
ポリペプチドを樹脂から除去する。樹脂支持体に
対する結合がベンジルエステル型である時は、温
度約10乃至50℃、好ましくは25℃に於いて約12乃
至24時間、好ましくは約18時間プロリンＣ−末端
を有するポリペプチドに対してはアルキルアミン
またはフルオロアルキルアミンを用いてまたグリ
シンＣ−末端を有するペプチドに対しては例えば
アンモニア／メタノールまたはアンモニア／エタ
ノールを用いてそれぞれアミノリシスすることに
より開裂することができる。あるいは、例えばメ
タノールを用いてエステル交換し、次いでアミノ
リシスによつてポリペプチドを樹脂から除くこと
もできる。保護されたポリペプチドはこの段階で
シリカゲルクロマトグラフイーにより精製するこ
とができる。ポリペプチドからの側鎖保護基の除
去は、温度約−10乃至＋10℃、このましくは約０
℃に於いて約15分乃至１時間、このましくは約30
分間、アニソールまたはその他のカルボニウムス
カベンジヤーの存在下にアミノリシス生成物を例
えば無水液体弗化水素で処理することにより、弗
化水素／ピリジン複合体で処理することにより、
トリス（トリフルオロアセチル）ホウ素及びトリ
フルオロ酢酸で処理することにより、炭素もしく
はポリビニルピロリドンに担持せるパラジウム及
び水素を用いて還元することにより、又はナトリ
ウムの液体アンモニア溶液、好ましくは液体弗化
水素とアニソールを用いた還元によつて達成する
ことができる。 ベンズヒドリルアミン樹脂に付着せるグリシン
末端ペプチドの場合には樹脂の開裂及び保護基脱
離工程は前述のように液体弗化水素とアニソール
を用いて単一工程で達成することができる。完全
に保護基が脱離せるポリペプチドは次いで次の技
法の一部またはすべてを含む一連のクロマトグラ
フイー技法により生成する。アセテート形態の弱
塩基樹脂上でイオン交換；未誘導体化ポリスチレ
ン−ジビニルベンゼン（例えばアンバ−ライト
XAD）を用いた疎水性吸着クロマトグラフイ
ー；シリカゲル吸着クロマトグラフイー；カルボ
キシメチルセルローズを用いたイオン交換クロマ
トグラフイー；例えばセフアデツクスＧ−25を用
いた分配クロマトグラフイーまたは交流分配；高
性能液体クロマトグラフイー（HPLC）特にオク
チル−もしくはオクタデシルシリル−シリカ結合
相カラム充填剤を用いた逆相HPLC。 ６位にラセミアミノ酸を使用するならば、ジア
ステレオマーノナペプチドまたはデカペプチドが
最終的に分離され、６位にＤ−アミノ酸を含む所
望ペプチドは好ましくは上述のクロマトグラフイ
ー過程で分離及び精製される。 Ｃ−末端アザグリシンアミドを有するペプチド
の調製は既知のペプチド中間体を用いて旧来のペ
プチド溶液合成法に従つて行うことが好ましい。
この方法は実施例３に詳しく述べることとする。 本発明は他の一面に於いて下記式（）で表わ
される化合物及びその医薬的に許容され得る塩を
製造する方法に関する。 （ピロ）Glu−His−Ｖ−Ser−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Arg
−Pro−Ｚ （） 〔上記式（）において、Ｖはトリプトフイ
ル、フエニルアラニルまたは３−（１−ナフチル）
−Ｌ−アラニルであり、Ｗはチロシルであり、Ｘ
は式 （式中、Ｒはナフチル、フルオレニル、ビフエ
ニリル、トリ−低級アルキル置換フエニルまたは
ジ−フエニルメチルである）で表わされるＤ−ア
ミノ酸残基であり、ＹはロイシルまたはＮ−メチ
ルロイシルであり、そしてＺはグリシンアミドま
たは【式】 （R¹は水素または低級アルキルである）であ
る；但し、Ｖがトリプトフイルであり、Ｗがチロ
シルであり、Ｘが３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラ
ニルであり、Ｙがロイシルであり、かつ、Ｚがグ
リシンアミドである化合物を除く。 この製造方法は、 (i) 固相法により製造された、固体支持体にＣ末
端アミノ酸が共有結合していてもよい、上記式
（）で表わされる化合物の保護された化合物
から保護基を除去し、そして場合により固体支
持体を除いて式（）で表わされる化合物また
はその塩を得；あるいは 上記式（）で表わされる化合物を構成しう
るペプチド フラグメントをペプチド合成手段
によりカツプリングさせることにより、または
式（）のポリペプチド化合物の保護された化
合物から、保護基を除去することによつて、上
記式（）で表わされる化合物またはその塩を
得、さらに必要に応じて (ii) 上記式（）で表わされる化合物を医薬的に
許容され得る塩に変換し、 (iii) 上記式（）で表わされる化合物の塩を医薬
的に許容され得る塩に変換し、または (iv) 上記式（）で表わされる化合物の塩を分解
して上記式（）で表わされる遊離ポリペプチ
ドとすることを特徴とする。 本発明の理解及び実施を容易ならしめる為に、
以下に例をあげて説明する、これらの例は本発明
の範囲を限定するものではなく、単に代表例を掲
げるものである。 調製例 Ａ 炉中で乾燥せるフラスコにマグネシウムエトキ
シドを用いて蒸溜した無水エタノール0.1を入
れ、これにナトリウム金属1.52gを加えた。水素
の発生が止まつた時、この溶液に２−アセトアミ
ド−２−シアノ酢酸エチル10.21g及び２−ブロモ
メチルナフタレン13.26gを加えた。溶液を１時間
加熱還流し、次いで冷却した。減圧下にエタノー
ルを除去し、残渣を酢酸エチルで取り出した。有
機層は水50mlで２回飽和塩化ナトリウム水溶液50
mlで１回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し
た。溶液を濾過し、溶剤を減圧下に放逐し、さら
に残渣を還流下に濃塩酸100ml中で２時間加水分
解した。 加水分解混合物を冷却し、粗生成物の沈殿を濾
別した。粗生成物を、活性炭で処理した濃塩酸５
mlを含む熱水0.5に再溶解し、溶液のPHを濃水
酸化アンモニウムを用いて６に調節した。沈殿を
濾別し、減圧乾燥して純粋な３−（２−ナフチル）
−Ｄ，Ｌ−アラニン11.3gを得た。融点230−232
℃。 ２−ブロモメチルナフタレンに代えて等化学量
論量の １−ブロモメチルナフタレン、 ９−ブロモメチルアントラセン、 ９−ブロモメチルフルオレン、 ２−ブロモメチルフルオレン、 ２−ブロモメチルアントラセン、 １−ブロモメチルアントラセン、 α−クロロイソジユレン、 ４−ブロモメチルビフエニル、 １−ブロモメチルアダマンタン、 ３−ブロモメチルフエナントレン、 １−クロロメチル−２，４，６−トリ−（ｎ−
ブチル）ベンセン及び １−クロロメチル−２，３，４，５，６−ペン
タメチルベンゼンをそれぞれ用いて上記手法を繰
り返し次のアミノ酸を得た。 ３−（１−ナフチル）−Ｄ，Ｌ−アラニン，m.
p.185−187℃、 ３−（９−アントリル）−Ｄ，Ｌ−アラニン，
m.p.290℃ （Hcl塩）、 ３−（９−フルオレニル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 ３−（２−フルオレニル）−Ｄ，Ｌ−アラニン，
m.p.264−269℃、 ３−（２−アントリル）−Ｄ，
Ｌ−アラニン、 ３−（１−アントリル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 ３−（２，４，６−トリメチルフエニル）−Ｄ，
Ｌ−アラニン，m.p.235−237℃、 ３−（４−ビフエニリル）−Ｄ，Ｌ−アラニン，
m.p.290℃、 ３−（１−アダマンチル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 ３−（３−フエナントリル）−Ｄ，Ｌ−アラニ
ン、 ３−（２，４，６−トリ（ｎ−ブチル）フエニ
ル）−Ｄ，Ｌ−アラニン及び ３−（２，３，４，５，６−ペンタメチルフエ
ニル）−Ｄ，Ｌ−アラニン。 調製例 Ｂ １，１−ジフエニルエチレン18.2ｇ、メチル・
α−メトキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグ
リシネート25.3ｇ及び２−ナフタレンスルホン酸
1.5ｇを乾燥ベンゼン300mlに溶解した溶液を２日
間還流した。粗生成物は CH₂Cl₂−CH₂Cl₂／EtOAC（18：１）の密度勾配
を用いてけい酸コラム中で精製した。精製たメチ
ル・２−［１−（２，２−ジフエニルエチレニル）］
−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシネート
を、KOH10.9ｇの10％メタノール水溶液350ml溶
解液を用いて加水分解し、対応する酸を得た。得
られた粗酸を濃HCl3mlを含む95％エタノール100
mlに溶解し、さらに炭素上に担持せる10％Pd2ｇ
の存在下に24時間水素添加して３−（２，２−ジ
フエニルメチル）−Ｄ，Ｌ−アラニン2.4ｇを得
た。m.p.235−237℃。 調製例 Ｃ ３−（２−ナフチル）−Ｄ，Ｌ−アラニン 12.9ｇの１Ｍ NaOH120ml溶解液に０℃に於い
て無水酢酸6.23ml及び１Ｍ NaOH60mlを30分間
に亘つて加えた。濃塩酸を用いてPHを２に調節
し、得られた沈殿を濾別した。固形分を60％エタ
ノール水溶液から再結晶してＮ−アセチル−３−
（２−ナフチル）−Ｄ，Ｌ−アラニン12.2ｇを得
た。 このＮ−アセチルアミノ酸15ｇの乾燥メタノー
ル240ml溶解液に三弗化硼素エーテラート15.8ml
を加えて、混合物を１時間還流した。アルコール
を蒸発し、水200mlを加え、溶液を酢酸エチルで
抽出した。有機層を塩基水溶液及び酸で洗浄し、
MgSO₄上で乾燥し、濾過し、揮発分を放逐して
油状物を得た。この油状物を酢酸エチル／ヘキサ
ンから結晶化してメチル・Ｎ−アセチル−３−
（２−ナフチル）−Ｄ，Ｌ−アラニネート14.2ｇを
得た。m.p.79−80℃。 ３−（２−ナフチル）−Ｄ，Ｌ−アラニンに代え
て等化学量論量の ３−（１−ナフチル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 ３−（２−フルオレニル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 ３−（２−アントリル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 ３−（１−アントリル）−Ｄ，Ｌ−アラニン及び ３−（２，２−ジフエニルメチル）−Ｄ，Ｌ−ア
ラニンを用いて上記手法を繰り返し次の化合物を
得た。 メチル・Ｎ−アセチル−３−（１−ナフチル）−
Ｄ，Ｌ−アラニネート、m.p.97.5−98℃、 メチル・Ｎ−アセチル−３−（２−フルオレニ
ル）−Ｄ，Ｌ−アラニネート，m.p.170−171℃、 メチル・Ｎ−アセチル−３−（２−アントリル）
−Ｄ，Ｌ−アラニネート及び メチル・Ｎ−アセチル−３−（２，２−ジフエ
ニルメチル）−Ｄ，Ｌ−アラニネート，m.p.113−
114℃。 調製例 Ｄ メチル・Ｎ−アセチル−３−（２−ナフチル）−
Ｄ，Ｌ−アラニネート６，６ｇをジメチルスルホ
キシド300ml、１Ｍ KCl120mlと水780mlからな
る混合物の溶解し、溶液を酵素スブチリシン33.6
mgを０、１ＭKCl3mlに溶解した溶液で処理した。
ラジオメータPH調節器を用いて0.2ＭNaOHの自
動滴定によりPHを７に保持した。30分後に
NaOH溶液70mlを消費した時加水分解を停止し
た。溶液にNaHCO₃12ｇを加え酢酸エチルで抽
出した。有機層はメチル・Ｎ−アセチル−３−
（２−ナフチル）−Ｄ−アラニネートを含有してい
た。酢酸メチル／ヘキサンから結晶化して黄色個
体を得た。m.p.80−81℃。 上記化合物を次のように遊離アミノ酸、さらに
Ｎ−Bocアミノ酸に変換した。 メチル・Ｎ−アセチル−３−（２−ナフチル）−
Ｄ−アラニネート2.5ｇの６Ｎ HCl60ml溶液を
120−130℃に３時間加熱し、室温に冷却した。生
成した白色沈殿を集め、12Ｎ HCl1mlを含む水
50mlにNH₄OHを加えてPHを６にすることにより
再結晶し、真空乾燥して、３−（２−ナフチル）−
Ｄ−アラニン1.2ｇを得た。m.p.242−244℃，
［α］25D 26.6°（C0.5、CH₃CO₂Ｈ）。 ３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニンを１Ｎ
NaOH55ml、H₂O10mlとジオキサン20mlの混合
物に溶解し、この溶液を攪拌しながら０℃に於い
てジ−tert−ブチルジカーボネート1.48ｇと酸化
マグネシウム0.22ｇを加えた。1.5時間後、さら
にジ−tert−ブチルジカーボネート0.3ｇを加え、
混合物を室温まで冷却せしめた。固形分を濾別
し、濾液を濃縮して50mlとした、この水溶液を
NaHSO₄でPH2.5とし、酢酸エチルで抽出した、
有機層を５％NaHSO₄、水次いで飽和食塩水で
洗浄した。酢酸エチル抽出液を硫酸マグネシウム
上で乾燥し、濃縮して油状物質を得た。この油状
物質をエーテル／ヘキサンから結晶化してＮ−
Boc−３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニン1.3ｇ
を得た。m.p.90−91°、［α］25D−32.6°（C0.8、
MeOH）。 メチル・Ｎ−アセチル−３−（２−ナフチル）−
Ｄ，Ｌ−アラニネートに代 えて等化学量論量の メチル・Ｎ−アセチル−３−（１−ナフチル）−
Ｄ，Ｌ−アラニネート、 メチル・Ｎ−アセチル−３−（２−フルオレニ
ル）−Ｄ，Ｌ−アラニネート、 メチル・Ｎ−アセチル−３−（２−アントリル）
−Ｄ，Ｌ−アランネート及び メチル・Ｎ−アセチル−３−（２，２−ジフエ
ニルメチル）−Ｄ，Ｌ−アラニネートをそれぞれ
用いて上記手法を繰り返し、対応する遊離アミノ
酸を経由して次のN〓−Bocアミノ酸を得た。 Ｎ−Boc−３−（１−ナフチル）−Ｄ−アラニ
ン，m.p.92−93℃、［α］25D 54.8°
（C0.5MeOH）、 Ｎ−Boc−３−（２−フルオレニル）−Ｄ−アラ
ニン，m.p.161−163℃。 Ｎ−Boc−３−（２−アントリル）−Ｄ−アラニ
ン、及び Ｎ−Boc−３−（２，２−ジフエニルメチル）−
Ｄ−アラニン，m.p.153−154℃。 調製例 Ｅ パ−水素添加用壜の中に３−（２−ナフチル）−
Ｄ−アラニン0.85ｇ、２Ｍ塩酸100ml及びアダム
ス触媒（PtO₂）0.85ｇを入れた。溶液をパー水素
添加用壜中で60ポンド／インチ²のH₂ガスで20時
間処理した。混合物を加熱して白色沈殿を溶解
し、けい藻土を用いて濾過した。溶液を減圧下に
濃縮し、水を用いて凍結乾燥して３−（２−パ−
ヒドロナフチル）−Ｄ−アラニン0.8ｇを得た。白
色固体，m.p.230−232℃。 この物質を１Ｎ−NaOH3.2ml、水５ml及びジ
オキサン15mlの混合物に溶解し、MgO0.14ｇ及
びジ−tert−ブチルジカーボネート0.85ｇで処理
した。０℃で１時間さらに25℃で２時間保持した
後、懸濁液を濾過し、減圧下に蒸発乾涸し、残渣
を水に溶解し、ジエチルエーテルで洗浄し、
NaHSO₄を加えてPH２とした。この酸性化した
水層を酢酸エチルで３回抽出し、抽出物を集め、
MgSO₄上で乾燥し、濾過しさらに濃縮して白色
油状Ｎ−Boc−３−（２−パーヒドロナフチル）−
Ｄ−アラニン0.75ｇを得た。上記物質の一部
（0.1ｇ）をテトラヒドロフラン５mlに溶解し、調
製したてのジアゾメタンを用いて完全に鮮かな黄
色になるまで０℃に於いて滴定した。反応混合物
を酢酸１mlで冷却し、溶剤を蒸発し、残渣を酢酸
エチル75mlと水75mlに分画した、有機層を５％
NaHCO₃、水、５％NaHSO₄、水及び飽和NaCl
溶液で洗浄し、さらにMgSO₄上で乾燥した。溶
液を濾過し、減圧下に濃縮し、溶液を濾過し、減
圧下に濃縮し、分取薄層クロマトグラフイー板
（750μ厚、シリカゲル、20×20cm）に装填して。
クロマトグラフイー板をジクロロメタン／酢酸エ
チル（18／１）で展開し、生成物のバンドを取り
除いた。生成物バンドからのシリカゲルをガラス
濾過器でジクロロメタン／酢酸エチル（９：１）
で洗浄し、濾液を濃縮して淡黄油状メチル・Ｎ−
Boc−３−（２−パーヒドロナフチル）−Ｄ−アラ
ニネート0.1ｇを得た。 この物質は、パーヒドロナフタレン核の２位置
に於いて２種の異性体の混合物として得られた。
これらのジアステレオマー化合物を溶離液として
酢酸エチル／ヘキサン（１：９）を用い高性能液
体クロマトグラフイーカラム（リクロソルブ
（Lichrosorb，商品名）シリカゲル60、５ミクロ
ン）で分離し、加水分解して遊離酸Ｎ−Boc−３
−（２−パヒドロナフチル）−Ｄ−アラニンを得
た。 ３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニンに代えて等
化学量論量の ３−（１−ナフチル）−Ｄ−アラニン、 ３−（２，２−ジフエニルメチル）−Ｄ−アラニ
ン、 ３−（２，４，６−トリメチルフエニル）−Ｄ，
Ｌ−アラニン、 ３−（４−ビフエニリル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 ３−（２，４，６−トリ（ｎ−ブチル）フエニ
ル−Ｄ，Ｌ−アラニン及び ３−（２，３，４，５，６−ペンタメチルフエ
ニル）−Ｄ，Ｌ−アラニンをそれぞれ用いて上記
手法を繰り返し次のＮ−Bocアミノ酸を得た。 Ｎ−Boc−３−（１−パーヒドロナフチル）ー
Ｄ−アラニン、 Ｎ−Boc−３−（パーヒドロ−２，２−ジフエ
ニルメチル）−Ｄ−アラニン、 Ｎ−Boc−３−（２，４，６−トリメチルシク
ロヘキシル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 Ｎ−Boc−３−（パーヒドロ−４−ビフエニリ
ル）−Ｄ，Ｌ−アラニン、 Ｎ−Boc−３−（２，４，６−トリ（ｎブチル）
シクロヘキシル）−Ｄ，Ｌ−アラニン及び Ｎ−Boc−３−（２，３，４，５，６−ペンタ
メチルシクロヘキシル）−Ｄ，Ｌ−アラニン。 例 １（参考例） ベツクマン990ポリペプチド合成用反応器中に
前記Rivalleについて述べたようなベンズヒドリ
ルアミノ−ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂
（ラブ・システムズ・インコーポレーテツド）0.8
ｇ（0.8mmol）を装入した。続いて、以下の合成
手順に従つてアミノ酸をこの樹脂に加えた。 工程１ CH₂Cl₂洗浄 １回1.5分 ２ 50％CF₃CO₂Ｈ／CH₂Cl₂… 脱保護基 １回1.5分 ３ 50％CF₃CO₂Ｈ／CH₂Cl₂… 脱保護基 １回30分 ４ CH₂Cl₂洗浄 ３回1.5分 ５ 10％トリエチルアミン／CH₂Cl₂ ２回1.5分 ６ CH₂Cl₂洗浄 ３回1.5分 ７ N〓−Boc−アミノ酸溶液 １回に添加 ８ Ｎ，N′−ジシクロヘキシル カルボジイミド溶液 １回に添加 ９ CH₂Cl₂すすぎ及び保持… カツプリング １回カツプリング 反応２時間 10 CH₂Cl₂…すすぎ １回1.5分 11 CH₂Cl₂洗浄 ３回1.5分 12 エタノール洗浄 ３回1.5分 13 CH₂Cl₂洗浄 ３回1.5分 工程１−13に依り、１つのアミノ酸に対するカ
ツプリングサイクルが完了する。反応の完了はE.
Kaiser等、Anal.Biochem．，34、595（1970）の
ニンヒドリン法により検証される。 樹脂は引続いて、それぞれ保護されたアミノ酸
及びDCCの2.5モル過剰量を用いてカツプリング
した。即ち、樹脂は継続したカツプリングサイク
ルの間に次の化合物で処理した。 0.433ｇ Boc−Gly−OH、 0.432ｇ Boc−Pro−OH， 0.857ｇ Boc−Arg（トシル）−OH、 0.462ｇ Boc−Leu−OH、 0.504ｇ Boc−３−（２−ナフチル）−Ｄ−ア
ラニン及び0.272ｇ１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール 0.724ｇ Ｎ−Boc−０−２−ブロモベンゾイ
ルオキシカルボニル−Ｌ−チロシン 0.59ｇ Boc−Ser（ベンジル）−OH、 0.608ｇ Boc−Trp−OH、 0.654ｇ Boc−His（トシル）−OH及び 0.524ｇ ピログルタミン酸 樹脂を反応容器から取り出し、CH₂Cl₂で洗浄
し、真空乾燥して保護されたポリペプチド樹脂
2.0ｇを得た。 ポリペプチド生成物を同時に樹脂から取り出
し、無水液体HFで処理して完全に保護基を脱離
した。保護されたポリペプチド樹脂2.0ｇとアニ
ソール（脱除剤）２mlの混合物をケルーＦ反応器
中に入れ、CoF₃を用いて再蒸溜した無水液体
HF20mlで０℃に於いて30分間処理した。HFを
減圧下に蒸発し、（ピロ）−Glu−His−Trp−Ser
−Tyr−３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニル−
Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂（HF塩）をエーテ
ルで洗浄した。次いで、残渣を氷酢酸で抽出し
た。酢酸抽出物を凍結乾燥して粗生成物0.8ｇを
得た。 粗ポリペプチドを４×40cmアンバーライト（商
品名）XAD−４カラム（ポリスチレン−４％ジ
ビニルベンゼン共重合体で処理し、水（0.5）
からエタノール（１）への凹型勾配を利用して
溶離した。流出液容量690mlから1.470mlの分画を
含む管を集め、ストリツプして乾涸し、中程度に
精製せるポリペプチド490mgを得た。 セフアデツクス（Sephadex、商品名）Ｇ−25
カラム（３×50cm）及び１−ブタノール／トルエ
ン／酢酸／1.5％ピリジン含有体（10：15：12：
18）からなる溶剤系を用いて上記中程度に精製せ
る生成物150mgを分配クロマトグラフイーに服し
た。純粋の分画を薄層クロマトグラフイー（シリ
カゲル、BuOH／H₂Ｏ／HOAc／EtOAc＝１：
１：１：１）及びHPLC（５ミクロン、逆相、オ
クタデシルシリル充填剤、40％0.03M NH₄
OH／60％アセトニトリル）により集めた。所望
生成物を溶離溶量1000ml乃至1400mlRf0.1）の分
画としてコラムから得た。純粋の分画を集め、ス
トリツプ乾涸し水で抽出し凍結乾燥して、純粋の
ピロ−グルタミル−ヒスチジル−トリプトフイル
−セリル−チロシル−３−（２−ナフチル）−Ｄ−
アラニル−ロイシル−アルギニル−プロリル−グ
リシンアミドを酢酸付加塩の形で得た。収量57
mg、［α］²⁵ _D−27.4°（C0.9、HOAc）、m.p.185−193
℃（分解）。 例 ２ Ｃ−末端Pro−NH−CH₂CH₃を有する同族体
の合成に対し、実施例１に述べたプログラムと同
一の合成プログラムを用いた。ベツクマン990合
成反応容器に、Boc−Pro−OHの乾燥セシウム
塩のクロロメチル−ポリスチレン／１％ジビニル
ベンセン（Lab Systems，Inc.）と当モル反応さ
せて得られるBoc−Pro−Ｏ−樹脂2.13ｇを装入
した。採取された量のBoc−Pro−Ｏ−樹脂はプ
ロリン1.4mmolを含有していた。 樹脂を、それぞれ保護されたアミノ酸および
DCCの2.5モル過剰で連続的に結合させた。かく
して、樹脂は連続カツプリングサイクル中で1.61
ｇのBoc−Arg（トシル）−OH、0.93ｇのBoc−
Leu−OH H₂Ｏ、0.94ｇのBoc−３−（２−ナフ
チル）−Ｄ−アラニンおよび0.49ｇの１−オキシ
ベンゾトリアゾール、1.75ｇのＮ−Boc−Ｏ−２
−ブロモベンジルオキシカルボニル−Ｌ−チロシ
ン、並びに1.11ｇのBoc−Ser（ベンジル）−OHと
反応させた。 合成のこの点において、保護されたポリペプタ
イド樹脂を二分割しそしてその２分の一を、0.57
ｇのBoc−Trp−OH、0.77ｇのBoc−His（トシ
ル）−OH，および0.21ｇピログルタミン酸と連続
的に反応させて完結に至らしめた。 樹脂を反応容器から除去し、塩化メチレンで洗
浄し、次いで真空で乾燥し保護されたポリペプチ
ド樹脂2.26ｇを得た。 保護されたポリペプチドを、エチルアミン25ml
で18時間２℃でアミノリシスを行い樹脂から開裂
させた。エチルアミンを蒸発せしめそして樹脂を
メタノールで抽出した。メタノールを蒸発して、
ピロ−Glu−His（Tosyl）−Trp−Ser（ベンジル）
−Tyr（２−ブロモベンジルオキシカルボニル）−
３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニル−Leu−Arg
（トシル）−Pro−NH−CH₂CH₃1.39ｇを得た。 粗ポリペプチドを、Kel−Ｆ反応容器中でアニ
ソール３ml及び再蒸溜した（CoF₃から）無水液
状弗化水素30mlの混合液を用い０℃で30分間処理
することによつて保護を解除した。弗化水素を真
空下蒸発しそして残渣をエーテルで洗浄した。残
渣を2M酢酸中で溶解しそして凍結乾燥し、その
酢酸塩として粗（ピロ）−Glu−His−Trp−Ser
−Tyr−３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニン−
Leu−Arg−Pro−NH−CH₂CH₃0.82ｇを得た。 40〜50μのオクタデシルシルシレートシリカ
（Merck、LichroprepC₁₈）を充填シタ0.9×550mm
カラムを用い試料20mgの分取高精能液体クロマト
グラフイ操作を行つて、最終精製を行つた。溶離
液は、0.03M NH₄OAc64％／アセトニトリル36
％であつた。４回の操作で、粗物質の総量61ｇを
精製した。水を用いて３回凍結乾燥させた後、そ
の酢酸付加塩として純粋なピログルタミル−ヒス
チジル−トリプトフイル−セリル−チロシル−３
−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニル−ロイシル−ア
ルギニル−プロリンエチルアミド15mgをえた。融
点180〜190℃、［α］²⁵ _D−57.2°（1.1，HOAc）。 エチルアミンを等化学量論量のｎ−ブチルアミ
ン、シクロプロピルアミン、シクロヘキシルアミ
ン、トリフルオロメチルアミン、ペンタフルオロ
エチルアミン、および２，２，２−トリフルオロ
エチルアミンで置換して上記開裂を繰返し、前述
のノナペプチドの対応するｎ−ブチルアミド、シ
クロプロピルアミド、シクロヘキシルアミド、ト
リフルオロメチルアミド、ペンタフルオロメチル
アミド、および２，２−トリフルオロエチルアミ
ドを得た。 例 ３ 式（式中、Ｚは【式】 である）で表わされる化合物を典型的な溶液合成
によつて製造した。 遊離ペプチドもしくは塩として、例えば次の手
順（図中、“AzaGlyNH₂”は
【式】である）による得ること ができた。 【表】 個々のフラグメントのカツプリングは、アシル
アジド法（J.Honzel，et al Coll.Czech・
Chem.Comm、26、2333頁（1971）により、−20
℃〜４℃において、たとえば約６当量のHClおよ
び1.4当量の亜硝酸ｔ−ブチルを含有するDMF中
の10％モル過剰量のアシルアジド成分を使用する
ことによつて、あるいはDCC／HBTカツプリン
グ法により。10％モル過剰量のＮ−末端ペンタペ
プチド酸およびＨ−３−（２−ナフチル）−Ｄ−
Ala−Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂またはＨ−３
−（２−ナフチル）−Ｄ−Ala−Leu−Arg−Pro−
azaGly−NH₂およびまた、10％モル過剰量のカ
ツプリング剤を使用することによつて、あるいは
その他のラセミ化していないフラグメントのカツ
プリング技法により行なう。化合物(1)および(2)は
公知である｛それぞれＭ・Fujino et al，
Biochem.Biophys.Res.Comm．，57、1248（1974）
およびA.S.Dutta，et al，J.Chem.Soc.Perkin
Ｉ，1979、379｝。化合物(3)は、化合物(2)から、
Cbzの除去およびニトロ基の水素添加分解、続い
て10％モル過剰量のDCC／HBTまたは当業者に
公知の他のカツプリング剤を用い、10％モル過剰
量のＮ−BOC−３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラ
ニンとカツプリングさせることにより製造した。
同様のLHRH類似体の合成については、Dutta等
による上記文献を参照することができる。 別法として、〔３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラ
ニル⁶、azaGly¹⁰〕−LHRHは、pGlu−His−Trp
−Ser−Tyr−Gly−Leu−Arg−Pro−OH（これ
は前記のごとく、慣用のMerrifield樹脂上におけ
る固相ペプチド合成法によつて製造される）を、
10％モル過剰量のセミカルバジド塩酸塩
【式】およびDCC／ HBTと、同様にカツプリングさせることによつ
て製造することができる。上記いずれの場合に
も、DMFが好適溶媒である。例１に記したよう
な、分離用高性能液体クロマトグラフイによつて
精製した後に、所望の生成物である、〔３−（２−
ナフチル）−Ｄ−アラニル⁶〕LHRH （［α］²⁵ _D−27.4°〔C0.9、HOAc〕）および〔３−
（２−ナフチル）−Ｄ−アラニル⁶、azaCly¹⁰−
NH₂〕LHRH（［α］²⁵ _D−34.3°〔C0.3、HOAc〕が
得られた。 例 ４ 実施例１の手順をくりかえしそして６位のＤ−
アミノ酸もしくはＤ，Ｌアミノ酸（後者の場合、
クロマトグラフイー法によりジアステレオマーの
ペプチドを分離する）のいずれかを使用し、固相
合成において適当なアミノ酸を置換し、単離する
ことによつて以下のデカペプチドを酢酸付加塩と
して得ることができた： ピロ−グルタミル−ヒスチジル−トリプトフイ
ル−セリル−チロシル−３−（２−ナフチル）Ｄ
−アラニル−Ｎ−メチルロイシル−アルギニル−
プロリル−グリシン−アミド、［α］²⁵ _D−26.6（Ｃ
＝１、HOAc）； ピロ−グルタミル−ヒスチジル−トリプトフイ
ル−セリル−チロシル−３−（１−ナフチル）−Ｄ
−アラニル−ロイシル−アルギニル−プロリル−
グリシンアミド、m.p.173〜５℃、［α］²⁵ _D−28.1°
（Ｃ＝0.8HOAc）； ピロ−グルタミル−ヒスチジル−トリプトフイ
ル−セリル−チロシル−３−（２−フルオレニル）
−Ｄ−アラニル−ロイシル−アルギニル−プロリ
ル−グリシンアミド、［α］²⁵ _D−25.8°（Ｃ＝１、
HOAc）； ピロ−グルタミル−ヒスチジル−トリプトフイ
ル−セリル−チロシル−３−（４−ビフエニリル）
−Ｄ−アラニル−ロイシル−アルギニル−プロリ
ル−グリシンアミド、［α］²⁵ _D−35 7°（Ｃ＝１、
HOAc）； ピロ−グルタミル−ヒスチジル−トリプトフイ
ル−セリル−チロシル−３−（２，４，６−トリ
メチルフエニル）−Ｄ−アラニル−ロイシル−ア
ルギニル−プロリル−グリシンアミド、［α］²⁵ _D−
42.1°（Ｃ＝１ HOAc）。 例 ５ 実施例２の手順をくり返しそして６位にＤ−ア
ミノ酸もしくはＤ，Ｌ−アミノ酸のいずれか（後
者の場合、クロマトグラフイーでジアストマー体
のペプタイドを分離する）を利用し、固相合成技
法において適当なアミノ酸を置換することによ
り、以下のペプチドを酢酸付加塩として単離取得
した。 ピロ−グルタミル−ヒスチジル−フエニルアラ
ニルーセリル−チロシル−３−（２−ナフチル）−
Ｄ−アラニル−ロイシル−アルギニル−プロリン
のエチルアミド ｛m.p.180〜190℃［α］²⁵ _D−57.2°（Ｃ＝１，10％
HOAc）｝； ピロ−グルタミル−ヒスチジル−３−（１−ナ
フチル）−Ｌ−アラニル−セリル−チロシル−３
（２−ナフチル）−Ｄ−アラニル−ロイシル−アル
ギニル−プロリンのエチルアミド ｛m.p.160〜170℃、［α］²⁵ _D−45.3℃（Ｃ＝１、
HOAc）｝； ピロ−グルタミル−ヒスチジル−トリプトフイ
ル−セリル−チロシル−３−（２，２−ジフエニ
ルメチル）−Ｄ−アラニル−ロイシル−アルギニ
ル−プロリンのエチルアミド ｛m.p.176〜206℃、［α］²⁵ _D33.7°（Ｃ＝１、10％
HOAc）｝； ピロ−グルタミル−ヒスチジル−トリプトフイ
ル−セリル−チロシル−３−（２−ナフチル）−Ｄ
−アラニル−Ｎ−メチルロイシル−アルギニル−
プロリンのエチルアミド ｛m.p.170〜185℃、［α］²⁵ _D−81.1℃（Ｃ＝0.7、10
％HOAc）｝。 例 ６ Ａ （ピロ）Glu−His−Trp−Ser−Tyr−３−
（２−ナフチル）−Ｄ−Ala−Leu−Arg−Pro−
Gly−NH₂（実施例１参照）のフツ化水素塩0.1
ｇの溶液を、水50mlに溶解し次いで予め酢酸で
平衡にしそして脱イオン水で洗浄したDowex3
（商品名）アニオン交換樹脂を充填したカラム
を通過させた。カラムを脱イオン水で溶離しそ
して流出液を凍結乾燥し（ピロ）Glu−His−
Trp−Ser−Tyr−３−（２−ナフチル）−Ｄ−
Ala−Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂の対応する
酢酸塩、［α］²⁵ _D−27.5°（C0.9、HOAc）を得た。 上記をくりかえし、樹脂の平衡中酢酸を他の
酸で置き代え、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫
酸、燐酸、硝酸、安息香酸等の対応する塩を得
た。 同様に式の他の化合物の酸付加塩が製造で
きる。 Ｂ 水に対する溶解性が低い塩の場合には、それ
らは好ましい酸を用いて水から沈殿することに
よつて製造できた。例えば： 亜鉛タンネート塩−水0.1ml中の（ピロ）Glu
−His−Trp−Ser−Tyr−３−（２−ナフチル）
−Ｄ−Ala−Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂酢酸
塩10mgの溶液を、0.25M NaOHの0.08ml中の
タンニン酸８mgの溶液で処理した。水0.1mlに
溶解したZnSO₄７水塩の５mgの溶液に、直ちに
LH−RH同族体の溶液を添加した。 生成した懸濁液を１mlの水で希釈しそして遠
心分離した。上澄み液をデカントし、そして沈
殿物を遠心分離し次いで上澄み液をデカントす
ることによつて残渣を１mlの水で２回洗浄し
た。沈殿物を減圧乾燥し、先に命名されたLH
−RH同族体の混合亜鉛タンネート塩15mgを得
た。 パモエート塩−エタノール1.6mlおよび0.25
Ｍ NaOH 0.1mlの混合液に溶解した50mgの
（ピロ）Glu−His−Tyr−３−（２−ナフチル）
−Ｄ−Ala−Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂酢酸
塩の溶液に、0.25Ｍ NaOH 0.3mlに溶解した
パモン酸11mgの溶液を加えた。溶剤を減圧下で
除きそして残渣を水２mlに懸濁させ、遠心分離
しそして上澄み液をデカントした。沈殿物を
1.5mlのH₂Ｏで洗浄し、遠心分離し、そして上
澄み液をデカントした。沈殿物を真空下で乾燥
し上に命名したLH−RH同族体のパモエート
54mgを得た。 同様の方法で水に対する溶解性が低い他の塩
が製造できる。 Ｃ 遊離ペプチドから酸付加塩の製造。遊離塩基
として（ピロ）Glu−His−Trp−Ser−Tyr−
３−（２−ナフチル）−Ｄ−Ala−Leu−Arg−
Pro−Gly−NH₂の50mg溶液にIN酢酸30mlを添
加した。得られた溶液を凍結乾燥した先に命名
したLH−RH同族体の酢酸塩50mgを得た。 同様に、酢酸を他の酸（ペプチドに対し化学
量論的当量で）を置き代えることによつて、式
（）の他の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素
酸、硫酸、燐酸、硝酸の塩を得た。 Ｄ 金属カチオンの塩、例えば亜鉛塩の製造 0.25MのNaOH ４ml、水0.3ml、およびエタノ
ール１mlの混合液に溶解した（ピロ）Glu−
His−Trp−Ser−Tyr−３−（２−ナフチル）−
Ｄ−Ala−Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂50mg溶
液に、水0.2mlに溶解したZnSO₄７水塩の溶液
を添加した。沈殿物を遠心分離しそして上澄み
液をデカントした。遠心分離および上澄み液の
デカントにより、沈殿物を水１mlで洗浄した。
沈殿物を乾燥し、上に命名したLH−RH同族
体の亜鉛塩48mgを得た。 同様の方法で、他の多価カチオンの塩、例え
ばカルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシ
ウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニツケ
ル、カドミニウム等の塩が製造できる。 例 ７ 水25mlに溶解した（ピロ）Glu−His−Trp−
Ser−Tyr−３−（２−ナフチル）−Ｄ−Ala−Leu
−Arg−Pro−Gly−NH₂酢酸50mgの溶液を、交
換イオン（水酸イオン）を得るためにNaOHで
平衡にしたDowex1（商品名）（強塩基、第四級ア
ンモニウムアニオン交換樹脂）を充填した50ｇカ
ラム内を通過させた。水150mlでカラムを溶離し
そして溶離液を凍結乾燥し、遊離塩基として対応
するポリペプチド45mgを得た。 同様に、式（）の化合物の他の酸付加塩、例
えば実施例６で述べた如き塩を対応する遊離塩基
に変換しうる。 例 ８ 活性成分として、本発明のLH−RH同族体例
えば（ピロ）Glu−His−Trp−Ser−Tyr−３−
（２−ナフチル）−Ｄ−alanyl−Leu−Arg−Pro
−Gly−NH₂それ自信もしくは医薬として許容さ
れ得る塩、例えば酢酸付加塩、亜鉛塩、亜鉛タン
ネート塩等を含有する典型的な医薬としての組成
物を次に示す。 Ａ 口腔（例えば舌下）投与用錠剤： １ LH−RH同族体 50.0μｇ 圧縮可能な糖（Compressible
Sugar）、 USP 90.0mg ステアリン酸カルシウム 4.0mg ２ LH−RH同族体 30.0μｇ 圧縮可能な糖（（Compressible
Sugar）、 USP 98.5mg ステアリン酸マグネシウム 1.5mg ３ LH−RH同族体 25.0μｇ マニトール、USP 88.5mg ステアリン酸マグネシウム、USP 1.5mg 前もつてゼラチン化した澱粉USP 10.0mg ４ LH−RH同族体 200.0μｇ ラクトース、USP 83.3mg 前もつてゼラチン化した澱粉USP 15.0mg ステアリン酸マグネシウム、USP 1.5mg 製造方法 ａ LH−RHを、賦形剤の糖の部分と混合す
る時、湿潤顆粒を形成するための十分な量の
水に溶解する。完全に混合した後、顆粒をト
レーもしくは流動床乾燥機内で乾燥る。次い
で乾燥した顆粒を、大きな凝結体を粉砕する
ため篩分けする。次いで特定の錠剤重量に、
顆粒を標準錠剤機で圧縮する。 ｂ この製造において、全ての製剤は0.01％ゼ
ラチン（USP）を含む。ゼラチンは、最初
に水溶性の顆粒用溶剤に溶解し、続いてLH
−RH同族体を処理する。残りの工程は上記
(a)の如くである。 製剤４はまた経口投与用錠剤として使用で
きる。 Ｂ 作用の長い筋肉内注射可能な製剤 １ 作用の長い筋肉内注射可能−ゴマ油ゲル LH−RH同族体 1.0mg モノステアリン酸アルミニウム、
USP 20.0mg ゴマ油を適量加えて1.0mlとする モノステアリン酸アルミニウムをゴマ油
と一緒にしそして清明な黄色溶液を形成す
るまで攪拌下125℃までに加熱する。次い
でこの混合物を殺菌のために圧熱滅菌し次
いで放冷する。次いでLH−RH同族体を
砕解し無菌状で添加する。特に好ましい
LH−RH同族体は、例えば、亜鉛塩、亜
鉛タンネート塩、パーモエート等の如き低
溶解性の塩である。これらは、非常に作用
期間が長い。 ２ 作用が長い筋肉内注射可能−生物学的減成
可能ポリマーマイクロカプセル LH−RH同族体 １％ 25／75グリコリド／ラクチドコポリ
マー 極限粘度数0.5 99％ 上記製剤を以下に組成物： デキストロース 5.0％ CMC，ナトリウム塩 0.5％ ベンジルアルコール 0.9％ Tween80（商品名） 0.1％ 精製水を適量加えて 100％ に懸濁させたマイクロカプセル（０〜
150μ）、そのマイクロカプセル25mgをビヒ
クル1.0mlに懸濁させる。 Ｃ 筋肉内注射用水溶液 LH−RH同族体 25mg ゼラチン、非抗原性 ５mg 注射用水を適量加えて100ml。 ゼラチンおよびLH−RH同族体を、注射用水
に溶解し、次いで濾液を滅菌する。 Ｄ 経鼻投与用水溶液 LH−RH同族体 250mg デキストロース ５ｇｍ ベンジルアルコール 0.9ｇｍ 精製水を適量加えて100ml。 LH−RH同族体、デキトロース、ベンジルア
ルコールを精製水に溶解しそして精製水を適量加
えて100mlとする。 Ｅ 直腸内投与用坐約ビヒクル LH−RH同族体 500μｇ Witepsol H15（商品名） 20.0ｇｍ LH−RH同族体を、溶融したWitepsol H15と
一緒にし、十分混合しそして２ｇｍ坐剤型に注
ぐ。 例 ９ ラツトにおける発情抑制 手順：雌ラツト（Hillotop、Sprague
Dawley，約200ｇ、膣を開いたもの）を１ケー
ジ５匹に重量分けしそして１群２ケージに分け
る。 ラツトを14日間、１日２回（以下の注の場合を
除く）、皮下注射する。毎日膣内容物塗布によつ
て、発情周期の段階を測定し、次いで０、１およ
び２週目に体重を記録する。４日目からの部分的
発情抑制（すなわち発情静止期および発情前期の
みであつて発情期でない）を示す雌のパーセント
並びに４日目からの完全は発情抑制（すなわち発
情静止期のみ）を示す雌のパーセントを記録す
る。発情抑制のパーセントデーターの最もよく適
合する直線から、ED₅₀が導かれる。LH−RH同
族体は、牛血清アルブミン（BSA）0.1％を含有
する生理食塩水に溶解したそれらの酢酸塩として
投与する。注射量は0.2mlでありそして同族体投
与量は0.05、0.1、0.2もしくは0.4μｇである。コ
ントロール（BSAを含有する生理食塩水）は発
情抑制を示さなかつた。 部分的発情抑制および完全な発情抑制を合せた
ED₅₀は以下のとおりである。 【表】 例10（参考例） それぞれ約25ｇの体重を有する六匹のスイス−
ウエブスターマウスに、（ピロ）Glu−His−Trp
−Ser−Tyr−３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニ
ル−Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂（酢酸塩）の水
溶液25mlを皮下注射した。投与量は40mg／Kgもし
くは約１Kg／マウスであつた。致死効果は観察さ
れなかつた。従つてLD₅₀は40mg／Kgより大であ
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式（） （ピロ）Glu−His−Ｖ−Ser−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Arg
   −Pro−Ｚ （） 〔式中、Ｖはトリプトフイル、フエニルアラニ
   ルまたは３−（１−ナフチル）−Ｌ−アラニルであ
   り、Ｗはチロシルであり、Ｘは式 （式中、Ｒはナフチル、フルオレニル、ビフエ
   ニリル、トリ−低級アルキル置換フエニルまたは
   ジ−フエニルメチルである）で表わされるＤ−ア
   ミノ酸残基であり、ＹはロイシルまたはＮ−メチ
   ルロイシルであり、そしてＺはグリシンアミドま
   たは【式】 （R¹は水素または低級アルキルである）であ
   る；但し、Ｖがトリプトフイルであり、Ｗがチロ
   シルであり、Ｘが３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラ
   ニルであり、Ｙがロイシルであり、かつＺがグリ
   シンアミドである化合物を除く〕で表わされる化
   合物およびその医薬として許容される塩。 ２ Ｖがトリプトフイルまたはフエニルアラニル
   であり、Ｗがチロシルであり、Ｘが３−（２−ナ
   フチル）−Ｄ−アラニル又は３−（２，４，６−ト
   リメチルフエニル）−Ｄ−アラニルであり、Ｙが
   ロイシルまたはＮ−メチル−ロイシルであり、Ｚ
   がグリシンアミドである特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。 ３ Ｘが３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニルであ
   る特許請求の範囲第２項記載の化合物。 ４ （ピロ）Glu−His−Trp−Ser−Tyr−３−
   （２−ナフチル）−Ｄ−アラニル−Ｎ−メチル−
   Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂及びその医薬的に
   許容され得る塩である特許請求の範囲第３項記載
   の化合物。 ５ （ピロ）Glu−His−Phe−Ser−Tyr−３−
   （２−ナフチル）−Ｄ−アラニル−Leu−Arg−
   Pro−Gly−NH₂及びその医薬的に許容され得る
   塩である特許請求の範囲第３項記載の化合物。 ６ Ｘが３−（２，４，６−トリメチルフエニル）
   −Ｄ−アラニルである特許請求の範囲第２項記載
   の化合物。 ７ （ピロ）Glu−His−Trp−Ser−Tyr−３−
   （２，４，６−トリメチルフエニル）−Ｄ−アラニ
   ル−Leu−Arg−Pro−Gly−NH₂及びその医薬
   的に許容され得る塩である、特許請求の範囲第６
   項記載の化合物。 ８ 下記式（）で表わされる化合物またはその
   医薬的に許容され得る塩に、医薬的に許容され得
   る非毒性担体を配合してなる黄体形成ホルモン放
   出ホルモン（LHRH）様医薬組成物： （ピロ）Glu−His−Ｖ−Ser−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Arg
   −Pro−Ｚ （） 〔式中、Ｖはトリプトフイル、フエニルアラニ
   ルまたは３−（１−ナフチル）−Ｌ−アラニルであ
   り、Ｗはチロシルであり、Ｘは式 （式中、Ｒはナフチル、フルオレニル、ビフエ
   ニリル、トリ−低級アルキル置換フエニルまたは
   ジ−フエニルメチルである）で表わされるＤ−ア
   ミノ酸残基であり、ＹはロイシルまたはＮ−メチ
   ルロイシルであり、そしてＺはグリシンアミドま
   たは【式】 （R¹は水素または低級アルキルである）であ
   る；但し、Ｖがトリプトフイルであり、Ｗがチロ
   シルであり、Ｘが３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラ
   ニルであり、Ｙがロイシルであり、かつＺがグリ
   シンアミドである化合物を除く〕。 ９ 式（） （ピロ）Glu−His−Ｖ−Ser−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Arg
   −Pro−Ｚ （） 〔式中、Ｖはトリプロフイル、フエニルアラニ
   ルまたは３−（１−ナフチル）−Ｌ−アラニルであ
   り、Ｗはチロシルであり、Ｘは式 （式中、Ｒはナフチル、フルオレニル、ビフエ
   ニリル、トリ−低級アルキル置換フエニルまたは
   ジ−フエニルメチルである）で表わされるＤ−ア
   ミノ酸残基であり、ＹはロイシルまたはＮ−メチ
   ルロイシルであり、そしてＺはグリシンアミドま
   たは【式】 （R¹は水素または低級アルキルである）であ
   る；但し、Ｖがトリプトフイルであり、Ｗがチロ
   シルであり、Ｘが３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラ
   ニルであり、Ｙがロイシルであり、かつＺがグリ
   シンアミドである化合物を除く〕で表わされる化
   合物およびその塩の製造方法であつて、 (i) 固相法により製造された、固体支持体にＣ末
   端アミノ酸が共有結合していてもよい、上記式
   （）で表わされる化合物の保護された化合物
   から保護基を除去し、そして場合により固体支
   持体を除いて式（）で表わされる化合物また
   はその塩を得、 そして所望により、 (ii) 式（）で表わされる化合物を医薬として許
   容される塩に変換し、 (iii) 式（）で表わされる化合物の塩を医薬とし
   て許容される塩に変換し、または (iv) 式（）で表わされる化合物の塩を式（）
   で表わされる遊離ポリペプチド化合物に変換す
   ることを特徴とする、上記式（）で表わされ
   る化合物およびその塩の製造方法。 １０ 式（） （ピロ）Glu−His−Ｖ−Ser−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Arg
   −Pro−Ｚ （） 〔式中、Ｖはトリプトフイル、フエニルアラニ
   ルまたは３−（１−ナフチル）−Ｌ−アラニルであ
   り、Ｗはチロシルであり、Ｘは式 （式中、Ｒはナフチル、フルオレニル、ビフエ
   ニリル、トリ−低級アルキル置換フエニルまたは
   ジ−フエニルメチルである）で表わされるＤ−ア
   ミノ酸残基であり、ＹはロイシルまたはＮ−メチ
   ルロイシルであり、そしてＺはグリシンアミドま
   たは【式】 （R¹は水素または低級アルキルである）であ
   る；但し、Ｖがトリプトフイルであり、Ｗがチロ
   シルであり、Ｘが３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラ
   ニルであり、Ｙがロイシルであり、かつＺがグリ
   シンアミドである化合物を除く〕で表わされる化
   合物およびその塩の製造方法であつて、 (i) 上記式（）で表わされる化合物を構成しう
   るペプチド フラグメントをペプチド合成手段
   によりカツプリングさせることにより、または
   式（）のポリペプチド化合物の保護された化
   合物から、保護基を除去することによつて、上
   記式（）で表わされる化合物またはその塩を
   得、 そして所望により、 (ii) 式（）で表わされる化合物を医薬として許
   容される塩に変換し、 (iii) 式（）で表わされる化合物の塩を医薬とし
   て許容される塩に変換し、または (iv) 式（）で表わされる化合物の塩を式（）
   で表わされる遊離ポリペプチド化合物に変換す
   ることを特徴とする、上記式（）で表わされ
   る化合物およびその塩の製造方法。