JPH03263481A

JPH03263481A - 活性酸素消去剤

Info

Publication number: JPH03263481A
Application number: JP6175390A
Authority: JP
Inventors: Atsushige Taira; 淳誠平良
Original assignee: Kanebo Ltd
Current assignee: Kanebo Ltd
Priority date: 1990-03-13
Filing date: 1990-03-13
Publication date: 1991-11-22
Anticipated expiration: 2013-05-06
Also published as: JP2746453B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、コニフェリルベンゾエイト、オイゲノール、
デハイドロジイソオイゲノール、イソオイゲノールより
選択された化合物がら成る、生体内の活性酸素消去剤に
関する。

〔従来の技術〕

最近、活性酸素やフリーラジカルが生体膜１組織に障害
を与え、これが種々の疾病をはじめ、癌老化とも関連す
ることを示す多くの臨床報告がある。生体内での活性酸
素には３ｏ２の１，２３電子還元分子種である０７　（
スーパーオキサイドアニオンラジカル）、ＨｚＯｚ、・
ＯＨ（○Ｈラジカル）及び励起状態のＩＱ２がある。ま
た脂質の過酸化で生じるペルオキシラジカルやアルコキ
シラジカルが知られている。

一方、仕体は常に酸素に被曝されている状態であるため
、酵素的防御機構を持１ている。

例えば、スーパーオキザイドＹ、−オンラジカルに対し
て不均化反応を行・うスーパーオキサイドディスムター
ゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｊｄｅ　Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ、　Ｓ
ＯＤ　）があり、これを有効成分とする、生体内活性酸
素に由来する障害の予防及び治療剤も知られている。

またビタミンＣ４ビタミンＥが、抗酸化性のある点より
、活性酸素フリーラジカル査消去する物質として試験さ
れてきた。

しかし、スーパーオキサイドディスムターゼはその製造
法が困難で１．また原料の入手も制限があり、安定性及
び安全性にも問題が残る。

またビタミンＥやビタミンＣは、生体を用いた実験で、
安定性や活性酸素消去作用が十分ではない等の難点が残
る。

更に、ＯＨラジカルについては、特に活性酸素種として
の反応性が高くかつ上述酵素のような生体での特定の防
御機構を持っていない。

以−ヒのことから、活性酸素、特に、強力な生物作用を
するＯ　Ｈランカットζ、１対し、１つ接的４１′１Ｉ
Ｉｉ堤作用を・ｈ′Ｊる消去剤の要望が強く望まれ“で
いる１、〔発明が解決しよ・）、”ニーする課題］従、
７で、本発明の目的は、活性酸素、１１−に強力な生物
作用をす゛る０　１＋ンジカルに対し、直接的な捕捉作
用をイ１する′活性酸素消去剤を（に供ずＺｌことにあ
る。

〔課題を解決するだめの１段〕本発明は、下記構造式Ａ〜Ｉ）で表される、Ｃｏｎｉｆ
ｅｒｙｌ−ｈｅｎｚｏａｔｅ　（コニフェリルヘンゾエ
イ！・）１ｉｕｇｅｎｏｌ　　（オイゲノール）、Ｄｅ
ｈｙｄｒｏｄｉｉｓｏｅｕｇｐｎｏｌ（デバイ１゛ロジ
イソオイゲノール）、　１ｓｏ−［ｉｕｇｅｎ。

（イソオイゲノール）より’Ｍ　ＩＲされた化合物から
成る、活性酸素消去剤である。

（Ｂ）オ・イゲノール（Ｃ）　　デハイド１コシイソオイゲノール（Ｄ）　　
イソオ・イゲノール本発明で用いられるＪ１ニフエリルー・ンヅエイ＋−は
、−＼ンゾイン樹脂より得られる公知の化合物である（
Ｋａｒｌ　Ｆｒｅｕｄｅｎｂｅｒｇ　ｕｎｄ　Ｆｒ１ｅ
ｄｒｉＣ，ｈ　Ｒｉｔｔｎｅｒ　：　Ｃｏｎｉｆｅｒｙ
ｌ−ａｌｋｏｈｏｌ　ａｕｓ　Ｓｉａｍｂｅｎｚｏｅ、
　Ｅｉｎｇｅｇａｎｇｅｎ、　１２、Ｊｕｎｉ、　１９
５０　）。

本発明で用いられるオイゲノールは、クローブ油やＮｕ
ｔｍｅｇ（Ｊ−ツメグ）の精油を水蒸気蒸留し５．カラ
ムク１１′？）グラフィーにより精製して得られる公知
の化合物（Ａｋｉｒａ　ｌｓｏｇａｉ　ｅｔ　ａｌ、：
１ｓｏｌａ目ｏｎ　Ｆｒｏｍ　ＮｕＬ＋＊ｅｇ　ｏｆ　
Ｇｒｏｗｔｈ　１ｎｈｉｂｉＬｏｒｙＳｕｂｓｔａｎｃ
ｅｓ　　ｔｏ　　Ｓｉｌｋｗｏｒｍ　　１．ａｒｖａｅ
＋　　Ａｇｒ、　　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、、　３７（４）、　８８９−８９５．１９７
３　／藤１）他：［］本化学雑誌、８７巻、９号１．１
０−１１２．１９６６　）で、食用品着香料として用い
られている。

本発明で用いられるデハ・イドｒ８コシイソオイゲノー
ルは、Ｎｕ、ｔｍｅｇ（ナツメグ）を水蒸気蒸留し、カ
ラムクロマトグラフィーにより精製して得られる公知の
化合物である（Ａｋｉｒａ　Ｉｓｏｇａｉ　ｅｔ　ａｌ
。

：　　ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ　　ｆｒｏｍ　　Ｎｕｔｍｅ
ｇ　ｏｆ　　Ｇｒｏｗｔ、ｈ　　１ｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
Ｓｔ＋ｂｓｔａｎｃｅｓ　ｔｏ　Ｓｉｌｋｗｏｒｍ　Ｌ
ａｒｖａｅ、　Ａｇｒ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｌｌ、、　３７（４）、　８８９−８９５．１９
７３　）−本発明で用いられるイソオイゲノールは、オ
イゲノールを、メタノール又は水の存在下でカセイカリ
と加熱異性化して得る公知の化合物で、カーネーション
系調合香料の基調剤とし°Ｃ用いられる他、各種調合香
料及び食品香料として用いられている。

本発明の活性酸素消去剤の使用方法は、通常の活性酸素
消去剤が用いられている方法で良く、例えば医薬品・化
粧品等に適用することが可能である。

次に、実施例を挙げて、本発明を更に詳細に説明する。

（実施例〕実施例１．デオキシリボース法〈原理〉本方法は、フェントン系にてＯＨラジカルを発
生させ、そのＯＨラジカルとデオキシリボースとの反応
（３，Ｉ　Ｘ　１０９Ｍ−１３−’）　により生じるマ
ロンジアルデヒド（ＭＤＡ＞を、チオバルビッール酸と
反応させた時に生成する反応物を測定（ＴＢＡ法）し、
Ｔ　Ｂ　Ａ　（ｉ！！を求めるものである（Ｂａｒｒｙ
　Ｈａｌｌｉｗｅｌｌ、　Ｊｏｈｎ　Ｍ、　Ｃ，Ｇｕｔ
ｔｅｒｉｄｇｅＯｋｅｚｉｅ　ｒ、　Ａｒｕｏｍａ　：
　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｊｓｔｒｙ。

１６５、２１５−２１９．１９８７を改良〉。

即ち、この系にＯＨラジカルの捕捉物質（コニフェリル
ベンゾエイト、オイゲノール、デハイドロジイソオイゲ
ノール、イソオイゲノール）が存在するとＴ　Ｂ　Ａ　
（！が低下することを利用し、捕捉物質添加前のＴＢＡ
値に対し、添加後のＴＢＡ値から阻害率を求め、ＯＨラ
ジカル阻害活性値として示した。

く方法＞　０．２ＭのＫＨ，ＰＯ，−ＫＯＨ緩衝液（ｐ
　Ｈ７，４）　０．１　ｍ　ｌに、２８ｍＭのデオキシ
リボース０．１ｍｌ２．２０ｍＭの！１ｉ１重物質０．
１．　ｍ　１　。

１、０４　ｍ　ＮイのＥＤＴＡｏ、１ｍｆｆ１．１ｍＭ
のアスコルビン酸０．１ｍｊ！、１ｍＭのＦ　ｅ　Ｃｌ
　ｚ　０．１　ｍ　ｊ！　。

ｌｒｎＭの過酸化水素水０．１　ｍ　１２を順次添加し
、反応液が１．　Ｏｍ　Ｎになるように蒸留水にて調製
する。

反応液を３７°Ｃで６０分間インキュベーション後、Ｔ
ＢＡ法にてチオバルビッール酸−ＭＤＡアダクト（吸光
度５３２　ｎｍ）の測定をした。

捕捉物質のＯＨラジカル阻害率を、各々次式によって算
出し、第１表に示した。

Ａ１　：捕捉物質添加後の吸光度Ａ２　：捕捉物質添加前の吸光度また、添加する捕捉物質の濃度を２０ｍＭから２ｍＭに
変えても、同程度の阻害作用が認められることから、こ
れらの捕捉物質は、ＯＨラジカル阻害作用の極めて高い
物質であると言える。

実施例２．不飽和脂肪酸（リノール酸メチル）脂質の過
酸化抑制作用く原理、方法＞１．０ｍＭのヒボキサンチン３．０ｍｌ
１，２．ＯＵ／ｍＪのキサンチンオキシダーゼ（バター
ミルク製、和光製）０．１５ｍｊ！、蒸留水０．１５ｍ
ｊ！、０．１％のトリトンＸ１００を０、００６　ｍ　
ｔｒ　、　　リノール酸メチル０．３　ｍ　Ｉｔを順次
添加した反応組成液に、１００ｍＭの捕捉物質０、４　
ｍ　ｌを添加し、リノール酸メチルの過酸化抑制作用を
測定した。

尚、コントロールには、捕捉物質の代わりに蒸留水を添
加した。

反応液を３７°０．２４時間振とう後、ＴＢＡ法にて過
酸化物（ＴＢＡ−ＭＤＡアダクト）を測定し、次式によ
り過酸化抑制率を求め、第２表に示した。

ＡＩ　：捕捉物質添加時の吸光度Ａ２　；捕捉物質の代わりに蒸留水を添加したときの吸
光度Ａ、；キサンチンオキシダーゼの代わりに蒸留水を添加
したときの吸光度＝　９− −１０　＝第２表の結果から１、これらの捕捉物質は、スーパー第
４′−リ′イｌ′並びに脂質の過酸化によって生じるペ
ルオキシラジカル、アル−１キジラジカルを捕捉し、脂
質の過酸化を抑制し５ていることがわか−。

ブこ。

実施例３．ミグ１３ソ・ム膜脂質の過酸化抑制作用く原
理、方法＞０．１Ｍの燐酸緩衝液（１，５ｍ　Ｍ　ＫＣ
Ｘを含むｐｉ（７，４）　０．１５　ｍ、　ｊ！　、　
　２０　ｍ　Ｍの捕捉物質０．１５ｒｎ７！、２０ｍＭ
のＡ　Ｄ　Ｐ　Ｏ，１，５ｍ　ｔＪ。

１ｍＭの硫酸第一・鉄０．１５ｍ／、０．１５ｍＭの過
酸化水素水０．１５　ｍρからなるＯＨラジカル発生組
成液に、ラット肝臓より分画し７たミクｌ′１ソー１、
（３゜９ｍｇ　　ｐｒｏ　　ｅｉｎ／ｍｆｆ）懸濁液０
、１５　ｍ　ｆ！を）≦加ｊ７、蒸留本番こ（１，５ｍ
　（！の反応）ｉ弘’；、＃’Ａ製づる。

その溶液を、３７゛Ｃで６０分間・イン１ユニ△、−シ
コンし、０分及び６０分後のミツ１１ソー１．，１１９
脂質の過酸化抑制作用をＴ　Ｂ　Ａ法で測定し、抑制・
０４次弐υＳより求め、第３表にポした。

Ａ１　：ミクミ」ソーム、燐緩衝液の自動酸化系におけ
る吸光度Ａ２　：捕捉物質の代わりに蒸留水を添加１、た完全系
における吸光度Ａ、：捕捉物質を添加しまた完全系におｉＪる吸光度ミクロソーム膜脂質の過酸化抑制率（％）・・第３表の
結果から、これらの捕捉物質が、生体試料であるミクロ
ソーム膜脂質の過酸化に対し°Ｃも、高い抑制効果を示
すことがわかった。

実施例４．ＥＳＲ分析によるＯ　Ｈラジカル捕捉作用の
確認く原理、方法＞　０．１　Ｍの燐酸緩衝液（、Ｈ７，４
）０、１．ｍ　ｅ　、　　５　ｍ　Ｍのジエチレントリ
アミンペンタ酢酸（ＤＥＴＡＰＡＣ）０．１ｒｎｆ、０
．１ＭのＤＭＰＯ（５，５−ジメチル−１−ピロリン−
１−オキサイド）０．１ｍ！！、、１ｍＭの碕酸第−鉄
０．１　ｍ　１０、１５　ｍ　Ｍの過酸化水素水０．１
　ｍ　（２を順次添加し、○Ｈラジカルを発生させた。

この反応系に、２ｍＭの捕捉物質０．１　ｍ　ｌを添加
し、蒸留水にて１．０　ｍ　１．に調製した。

尚、コントロールは、ｈｌｆ捉物質物質わりに蒸留水を
添加した系を用いた。

測定は、ＩＥＳＲ（電子スピン共鳴袋百１日木霊７−　
Ｊ　Ｅ　ＯＬ　　ＰＥ−３Ｘ型製）を用い、反応開始後
１分目に行った。

その結果を第１図に示１″６３４コントロールに対するビークの抑制率をＦとし、１ｌｌ
ｉ堤物質とＯＨラジカルとの反応速度定数を次式により
求め、ＯＨラジカル捕捉能とし、第４表にボした。

Ｋｓ：捕捉物質−ＯＨラジカルの反応速度定数に、、、
ｏ：　ＤＭＰＯ−ＯＨラジカルの反応速度定数（３，４
ｘｌＯ９）ＣＤＭＰＯ）：ｐＭｐｏｎ度〔Ｓ〕　；捕捉物質濃度５＝１６〔発明の効果〕実施例の結果から、コニフエリルヘンソエイトオイゲノ
ール、デハイドロジイソオイゲノールイソオイゲノール
より選択された化合物から成る本発明の活性酸素消去剤
は、炎症１発癌、虚血障害、放射線障害、老化、白肉症
１　自己免疫障害の原因である活性酸素、なかでも最も
反応性が高く、生体での防御機構を持たないＯＨラジカ
ルに対し、直接捕捉、消去する極めて有用な薬剤である
ことは明らかである。

特に、本発明の活性酸素消去剤は、安全性、安定性に優
れており、他の活性酸素消去剤に比べて実用性が高い。

【図面の簡単な説明】

第１図は、捕捉物質添加前（コントロール）の、Ｆ、Ｓ
Ｒクロマトグラムを表す。第２〜５図は、捕捉物質添加後の、ＥＳＲクロマトグラ
ムを表す。＊捕捉物質第２図：コニフェリルベンゾエイト第３図：オイゲノール第４図：デハイドロジイソオイゲノール第５図：イソオ
イゲノール尚、標準物質としては、２価のマンガンイオンを用いた
。７８手続補正書く自発）平成　２年７月−’７′日

Claims

【特許請求の範囲】下記構造式（Ａ）〜（Ｄ）で表される、Ｃｏｎｉｆｅｒ
ｙｌ−ｂｅｎｚｏａｔｅ（コニフェリルベンゾエイト）
、Ｅｕｇｅｎｏｌ（オイゲノール）、Ｄｅｈｙｄｒｏｄ
ｉｉｓｏｅｕｇｅｎｏｌ（デハイドロジイソオイゲノー
ル）、ｉｓｏ−Ｅｕｇｅｎｏｌ（イソオイゲノール）よ
り選択された化合物から成る、活性酸素消去剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ａ）コニフェリルベンゾエイト ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｂ）オイゲノール ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｃ）デハイドロジイソオイゲノール ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｄ）イソオイゲノール