JPH03251537A - マクロファージ及び好中球活性化剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は卵白を含有する免疫増強・感染防御剤に関する
。更に詳しくは、生体の免疫能力の低下に基づくと考え
られる各種疾患、各種病原微生物感染症の予防・治療に
有効な、卵白を含有する免疫増強・感染防御剤に関する
。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕近年、
抗菌性物質の開発が多くなされているにもかかわらず、
生体側の宿主防御機能の低下が原因と考えられる日和見
感染症や癌などの疾病が重要な課題となっている。

生体の免疫能力の低下に基づくと考えられる各種疾患、
例えば癌、各種病原微生物感染症などに対する免疫増強
剤あるいは癌の免疫療法剤は種々あるが、いずれも発熱
などの重篤な副作用が多く、決定的な免疫療法がないの
が現状である。

また、健康に対する人間の願望が高まり、個々の疾病予
防を特異目的とした食品、即ち、新しい概念に基づく食
品の栄養・喝好の機能に加え、生体調節機能を有する“
機能性食品”の研究が進められ、食品産業活性化の大き
な駆動力となりつつあり、今後の課題でもある。

一方、畜水産業界においても、国民の食生活における健
康志向に対応し、消費量が増大している中、家畜、家禽
又は養殖魚は集約化され、大規模経営が行われ、増殖或
いは過密飼育によって市場への需要に対応している。

しかしながら家畜などの過密飼育によるストレスや幼若
期における免疫不全による日和見感染症が多発している
。また、養殖魚の感染症の被害も増大傾向にある。

このような現状の中で免疫不全感染防御のために近年、
抗生物質の使用が多くなっている。

しかし、大量の抗生物質投与により畜水産物への残留の
問題また耐性菌の増加などが大きな社会問題となってい
る。

これに伴い、畜水産物の品質確保のための食鳥検査制度
など法的規制が厳しくなり、抗生物質の投与は適当でな
いとの気運が高まりつつある。このため抗生物質に代わ
る免疫不全・感染防御剤を有する予防方法の開発が望ま
れている。

免疫機構は異種の抗原を識別し、処理排除するという生
体に備わった重要な機構であり、微生物などの病原性物
質の生体内への侵入あるいは癌細胞などの生体内で住し
た異物に対して防御機構として働いている。

従って、宿主が本来持っている宿主防御能を増強する安
全性の高い免疫増強剤が期待されている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは免疫増強・感染防御剤について鋭意検討し
た結果、卵白が免疫増強・感染防御作用を有することを
見出し、本発明を完成した。

即ち、本発明は、卵白を含有することを特徴とする免疫
増強・感染防御剤を提供するものである。

以下、本発明の詳細な説明する。

本発明者らは生体防御系の増強を目的として感染防御に
主要な役割を果たすマクロファージの活性化を指標とし
て、生薬、食品など天然物質の生理活性成分につき、探
索した。

即ち、マクロファージには多様な機能がある（マクロフ
ァージの機能と機能測定法；日本細菌学会教育委員会線
、薬根出版、　１９８５）。その基本は異物・老廃組織
・微生物を貧食し、処理することにあるが、細胞増強因
子などのモノ力インを産出し、組織の修復を図り、自己
及び好中球、リンパ球の細胞分裂の補助やそれら細胞を
活性化させる働きを有する。

具体的には次の１）〜９）に示すような作用を有する。

１）異物・老廃物の処理 ２）貧食・殺菌作用・ウィルスの不活化３）炎症反応惹
起 ４）抗腫瘍作用 ５）リンパ球機能の補助 ６）免疫抑制 ７）生体防御物質の産出 ８）組織修復 ９）脂質代謝への関与 本発明者らは卵白を用いてマウス、モルモット及び豚の
マクロファージ活性化作用、並びに豚好中球の活性化作
用を検討したところ、各種動物由来のマクロファージを
活性化することが判明した。また、卵白を経口投与させ
、マウスでの細菌感染に対する感染防御効果を検討した
ところ、大腸菌、黄色ブドウ球菌等、各種細菌感染に対
して感染抵抗性を著しく増強させることが明らかとなっ
た。

従って卵白が免疫増強・感染防御作用を有することを見
出した。

本発明の作用機構は必ずしも明らかではないが、卵白の
摂取により消化管内で分解され、何らかの免疫増強物質
が生産されることによるものであると推定され、この免
疫賦活によって癌をはじめ広く細菌感染症、その他免疫
機能不全に基づく疾患（自己免疫疾患）に有用であると
推定される。

本発明で使用される卵白としては、生卵白、全卵束、卵
白束あるいは消化酵素で処理した画分や卵白を構成する
成分が入っているものであれば、特に制限はなく使用可
能である。

本発明の免疫増強・感染防御剤を投与する対象としては
、特に制限はない。例えば、食品の栄養・嗜好機能に加
えて個々の疾病の予防を特異目的としている生体調節機
能を存する食品、いわゆる“機能性食品”として用いる
ことができる。

更に、抗生剤にみられる耐性菌の影響がなく、残留性の
問題もなく、安全かつ生体防？１１調節機能を有する飼
料、即ち、“機能性飼料”として、豚、鶏、牛、馬、羊
などの家畜や魚類、ペット（犬、猫）などに使用するこ
ともできる。

卵白の投与量は、卵白末の場合、体重１ｋｇ当たり、１
日１■以上で、好ましくは１０■〜２ｇ程度である。

投与は通常経口的に摂取される。投与期間は各種病原微
生物感染症や癌などの疾病の予防・治療の時期に使用す
る。

本発明を実施する際は卵白又はその両分・成分を通常の
製剤化方法を用いて経口用の錠剤・カプセル剤・散剤・
顆粒剤・シロップ剤などとすることもできる。

即ち、経口投与用固形製剤を調製する場合には、主薬に
賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を添加し、常法によ
り錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤とする。

また、経口液状製剤を調製する場合は、生薬に緩衝剤、
矯味剤、安定剤を増加して常法によりシロップ剤等とす
る。また、卵白又はその両分・成分と抗菌剤又は抗悪性
腫瘍剤とを一併用する際はそれぞれ別個に投与してもよ
いし、必要によりこれらを合剤としてもよい。

また、水、牛乳、人工乳、健康食品など機能性食品など
の食物又は飼料に添加して投与してもよい、飼料の場合
は、飼料用原料やプレミックス素材としても利用できる
。

〔発明の効果〕

以下、本発明の効果を実験例により説明する。

実験例１ マウスマクロファージの調整法： マウスをエーテル麻酔し、頚動脈切断による脱血後、冷
ハンクス液を５Ｍｉ腹腔内に注入する。３０秒間腹壁を
マツサージしたのち、常在マクロファージを含むハンク
ス液を回収した。遠心洗浄し１５％マウス血清加ＭＥＭ
培地にて２．５　Ｘ　１０６／ｄに調整した。

モルモットマクロファージ調整法： ４日前に１％カゼインＮａ生食水１０Ｉｄを腹腔内に注
射したモルモット（ハートレイ系雌二体重３００ｇ　）
をエーテル麻酔し、頚動脈切断による脱血後、冷ハンク
ス液を５０ｄ腹腔内に注入する。３０秒間腹壁をマツサ
ージしたのち腹腔浸出細胞を含むハンクス液を回収する
。遠心洗浄し、１５％モルモット血清加ＭＥＭ培地にて
２．５　Ｘ　１０”／ｄ　Ｌこ８周整した。

豚マクロファージ（末梢血単球）及び好中球の調整法： 豚の腋下大静脈より末梢血１０−（ヘパリン２５単位／
＠！含有）を採血し６％（Ｗ／Ｖ）デキストラン生食水
（分子量６６９００）を３ｄ混和し３７°Ｃ３０分間放
置して白血球層を分離する。これをフィコールバック１
０Ｍ１の上層に静かに注ぎ１９００ｒｐＨｌ、　４０分
間遠心して単球及び好中球分画を得た。単球分画は、非
付着細胞（リンパ球）を除き２．５Ｘ１０６／ａｉ１に
調整してマクロファージとした。好中球分画は０．８５
％塩化アンモニウム液で赤血球を破壊し遠心洗浄して好
中球を採取した。１５％豚血清加ＭＥＭ培地にて２．５
×１０ｂ／Ｉｄｌに調整した。

マウス、モルモット及び豚マクロファージの活性化測定
： マクロファージが活性化するとグルコース代謝が光道す
る。それ故、培養液中のグルコースの消費を測定するこ
とによってマクロファージの活性化を測定できる。

卵白末を１００．１０．１μｇ／ｍの割合でマクロファ
ージ培養液にｉｎ　ｖｉｔｒｏで添加し５％ＣＯ２下、
３７°Ｃ５４８時間インキュベーション後、培養液中の
グルコース含量をグルコース測定試薬（グルコース−Ｂ
−テストヮコー：和光純薬）を用いて測定した。

すなわち培養上清２０１ｔｌを小試験管にとりグルコー
ス測定用酵素液１．５　ｄを加え、３７°Ｃ９３０分間
インキュベート後、５０５　ｎ＋ｗで比色した。

マクロファージの活性化ｉｎｄｅｘ（ＭＡＩ）は次の式
で計算した。

ス重（比色値） 結果を表１に示す。

費が著しく光道し各種動物由来マクロファージを活性化
させた。

豚好中球の活性化測定法ニ ラブチックチャンバー＠（４チヤンバー）に豚好中球（
２，５ｘ　１０６／ｊｌｉ２）を０．５ｄ入れ卵白末を
１００μｇ／Ｗ１１の割合で添加し５％ＣＯ□下、３７
°Ｃ，３時間培養した。反応終了後、オプソニン化した
ラテックス粒子（０，８１虜）を０．０５ｉ添加し４５
分間貧食させた。上滑を捨てよく洗浄しメタノール固定
しギムザ染色した。鏡検にて貧食率が光道しているかど
うか検討した。

貧食率（％）＝ 表１から明らかな如く、卵白末を１００．１０゜１μｇ
／ｄの割合でマウス、モルモット及び豚マクロファージ
に添加するとグルコースの消結果を表２に示す。

表２ のｉｎ　ｖｉｔｒ。

に　　る 表２から明らかな如く、卵白末を１００μｇ／威の割合
で豚好中球に添加した結果、好中球のラテックス粒子に
対する貧食能を著しく光道させた。

上記のように卵白は住体防御機構において重要な役割を
担うマクロファージ及び好中球を活性化させ免疫増強効
果を有することがここに新しく発見された。

実験例２ 〜３３ｇ）に卵白又は卵白画分或いは成分の表３に示す
量を１日３回経日没与し、２４時間後に臨床由来大腸菌
（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）を５．ＯＸ　１
０’／マウスの菌量で静脈内接種し怒染後７日目の生存
数より生残率を求めた。また比較として大豆蛋白及びス
キムミルクを経口投与した場合についても同様に生残率
を求めた。結果を表３に示す。

また臨床由来大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌ
ｉ）に代えて臨床由来黄色ブドウ球菌（牌並す旦並匹旦
ａｕｒｅｕｓ　）を３．８　Ｘ　１０’／マウスの菌量
で静脈内に接種し感染後の延命効果及び１４日後までの
生残率を求めた。結果を図１に示す。

Ｉｎ　ｖｉｖｏでマウスに卵白を経口投与し各種細菌感
染に対する感染防御効果を検討した。

ｓｌｃ：ＩＣＲ系雄性マウス（５〜６週令、体重２５表
３ の に　るマウス・の 表３及び図１の結果より卵白及び卵白画分または成分は
各種細菌感染に対して感染抵抗性を著しく増強すること
が明らかとなった。

また、抗生物質オキシテトラサイタリン（ＯＴＣ）ある
、カーボン（ペリカン社製）を１６０■／ｋｇの割合で
尾静脈に注入した。注入後３，６，９゜１２、１５分後
に後眼窩静脈叢より２０ｐ１を採血し小試験管中で２ｍ
の０．１％炭酸ナトリウムと混合した。これを６６０　
ｎｍの波長で吸光度を測定した。

横軸に時間（分）を、縦軸に吸光度の対数値をとり３分
ごとの値をプロットする。この直線の勾配（貧食指数Ｋ
）を求め肝、牌の重量を補正して訂正貧食指数（α）を
算出した。

結果を表４に示す。

との併用実験を行った。即ち、卵白を投与して一日後に
大腸菌を感染させ、感染と同時に抗生物質オキシテトラ
サイクリンを経口投与して併用効果を検討した。結果を
図２に示す。

図２に示した如く、卵白と抗生物質との併用は、抗生物
質の少量でも著しい生残率の上昇を示し、抗生物質の量
を減らすことができ、かつ相乗効果が認められた。

このような例は他になく新しい発見である。

実験例３ ｓｌｃ：ＩＣＲ系雄性マウス（５〜６週令、体重２５〜
３３ｇ）に卵白末の表４に示す量を１日３回経口投与し
、２４時間後にカーボンクリアランステストを行いマク
ロファージの活性化の有無を見た。

カーボンクリアランステストはコロイドカーボンの血中
からのクリアランスを指標として、肝、牌のマクロファ
ージ機能を測定するもので表４に示すように卵白投与群
はいずれも貧食指数Ｋ及び訂正貧食指数α値が対照に比
べ大きくなり、卵白の経口投与によってマウスマクロフ
ァージの貧食能が光道し活性化されていることが明らか
となった。

実験例４ 卵白末５００■／ｋｇを豚（体重的２０ｋｇ）　４頭に
飼料添加して１日後の末梢血好中球のラテックス粒子に
対する貧食能が光道するかどうか検討した。

末梢血好中球の分離はフィコールパンク比重遠心法によ
り分離し、ラテックス粒子に対する貧食能は実験例１で
述べた方法により実施した。

結果を表５に示す。

表５ の に の ブドウ球菌に対する感染防御効果を示す図であり、図２
は卵白の経口投与によるマウスでの大腸菌に対する抗生
物質オキシテトラサイクリンとの併用効果を示す図であ
る。

表５に示すように豚に卵白を飼料添加して摂取させるこ
とにより末梢血好中球の貧食能が著しく亢進し活性化し
ていることが明らかとなった。

以上の実験例の結果より、鶏卵卵白の免疫増強・感染防
御効果が明らかとなり生体の免疫能力の低下に基づくと
考えられる各種疾患や各種病原微生物感染症（細菌、マ
イコプラズマ、ウィルス、真菌、原虫など）、癌などの
予防、治療剤、また機能性食品及び機能性飼料（飼料添
加）素材として期待される。

【図面の簡単な説明】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、卵白を含有することを特徴とする免疫増強・感染防
   御剤。