JPH0322931A - アスパラガス属植物のクラウン形成及び増殖方法、並びに、種苗増殖方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はアスパラガス属植物のクラウン形或及び増殖方
法、並びに、植物体及び種苗増殖方法に関する。

〔従来の技術〕

アスパラガス属植物の増殖は、従来、播種もしくは株分
けによって行われてきた。アスパラガス属植物は、ＩＩ
ＩｆＩｊ１異株であり、雄株の方が品質や栽培管理の点
で良いとされている．さらに、遺伝的に変異の大きな作
物であるため播種による増殖は、雌株の混入を招き、又
、株毎の収量及び品質の差異を招き、栽培上著しい問題
となっている．また、株分けによる増殖は多くの人手と
長い年月を必要とし、効率が非常に悪く、ウイルス病な
どが伝染していく危険性も非常に高い． 以上のような問題点を改善する目的で、近年、組織培養
による優良株クローンの大量増殖が注目されている．通
常、アスパラガスの大量増殖は、組織片を培養し、多量
の苗条（ｓｈｏｏｔ）を増殖させた後、各々を発根培地
に移植し、不定根の分化を経て幼苗となす。しかし、発
根率が一般的に低いために、増殖効率が低いという問題
点がある．また、，ｔｉｎａ片を培養し、カルスを形成
させたのち、カルスより生じる不定胚を用いて大量増殖
の手法とするための試みがなされている（例えば、昭和
６１年度園芸学会秋季大会研究発表要旨Ｐ２１０〜２１
１、昭和６１．１１．２３〜２５、於琉球大学、昭和６
２年度園芸学会研究発表要旨Ｐ２５４〜２５５、昭和６
２．１０．７〜９、於九州大学）．不定胚を生長させる
ことにより、発根率が低いという問題は解決するものの
、単離した不定胚はほとんどが培養の途中でカルス化あ
るいは奇形化を引き起こすことが問題となっている。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明者らは従来のアスパラガス属植物の組織培養方法
には前記した問題点のあることを認知した上で、従来法
とは異なる新規な方法によって組織培養してアスパラガ
ス属植物の種苗を効率よく増殖する方法について検討し
た。

〔課題を解決するための手段〕

その結果、本発明者等はアスパラガス属植物を組織培養
して増殖するに際し、通気条件下で液体培地を間欠的に
供給しながら組織培養してクラウンを形成させ植物体と
することにより上記従来技術の問題点を良好に解消し得
ることを見出し、この新知見に基づいてさらに研究を重
ねることにより本発明を完或するに至ったものである。

したがって、本発明の方法によれば、 ■　アスパラガス属植物の組織又はカルスを支持材上に
置床するとともに、液体培地を間欠的に供給・排出する
ことにより前記支持材上に置床されたアスパラガス属植
物の組織又はカルス乃至それから形成されるクラウンの
少なくとも一部を間欠的に液体培地に浸漬状態とし、か
つ、通気条件下で培養してクラウンを形成させることを
特徴とするアスパラガス属植物のクラウン形成方法、 ■　■の方法で形成させたクラウンを切断して得た切片
をさらに支持材上に置床するとともに、液体培地を間欠
的に供給・排出することにより前記支持材上に置床され
たクラウンの切片乃至それから肥大するクラウンの少な
くとも一部を間欠的に液体培地に浸漬状態とし、かつ、
通気条件下で培養してクラウンを肥大させ、さらに必要
に応じて同様のクラウン切断→切片培養→クラウン肥大
の増殖プロセスを繰り返すことを特徴とするアスパラガ
ス属植物のクラウン増殖方法、 ■　■又は■の方法で得られたクラウンを支持材上に置
床した状態で、液体培地を間欠的に供給・排出すること
により前記支持材上に置床されたクラウン乃至それから
生育する植物体の゛少なくとも一部を間欠的に液体培地
に浸漬状態とし、かつ、通気条件下で培養して植物体を
生育させることを特徴とするアスパラガス属植物の植物
体の増殖方法、 ■　■の方法で得られた植物体を馴化せしめて種苗とす
ることを特徴とするアスパラガス属植物の種苗増殖方法
、 が提供される． 本発明では、アスパラガス属に属する植物であればすべ
て使用できる。該植物として具体的には食用アスパラガ
スであるＡｓｐａｒａｇｕｓ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ
Ｌ．ｖａｒ．ａｌｔｉｌｉｓ　Ｌ．を例示でき、本発明
ではこれを用いるのが好ましい。

本発明ではアスパラガス属植物の組織又はカルス（ｃａ
ｌｌｕｓ）が組織培養されてクラウン（ｃｒｏｗｎ）が
形成される。この場合の組織培養に用いられる組織とし
ては胚、茎頂、茎、擬葉、地下茎等の組織を例示できる
。カルスについては、本発明では該＆ＩｌｖＩ＆を例え
ば公知の培養方法〈例えば、園芸学会雑誌　第４０巻　
第４号　ｌ１頁〜１７頁，　１９７１年）によって培養
して得られるカルスを用いることができる． 本発明のクラウン形成において使用される培地は、無機
或分及び炭素源を必須戒分とし、これに植物ホルモン類
、ビタくン類を添加し、更に必要に応じてアミノ酸類を
添加した培地である．該培地の無機戒分としては、窒素
、リン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシ
ウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブデ
ン、塩素、ヨウ素、コバルト等の元素を含む無機塩をあ
げることができ、具体的には、硝酸カリウム、硝酸ナト
リウム、硝酸アンモニウム、塩化カリウム、塩化カルシ
ウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素ナトリウム
、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウ
ム、硫酸第１鉄、硫酸第２鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、
モリブデン酸ナトリウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カ
リウム、硫酸亜鉛、ホウ酸、塩化コバルト等の化合物を
例示できる。

該培地の炭素源としては、庶糖やグルコースなどの炭水
化物、その誘導体、脂肪酸などの有機酸及びエタノール
等の１級アルコールなどを例示できる。

該培地の植物ホルモンとしては、例えば、ナフタレン酢
酸（ＮＡＡ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）、ｐ一クロロ
フェノキシ酢酸、２．４−ジクロロフエノキシ酢酸（２
．４−Ｄ）、インドール酪酸（ＩＢＭ）、及びこれらの
誘導体等のオーキシン類及びペンジルアデニン（Ｂ＾）
、カイネチン、ゼアチン等のサイトカイニン類を例示で
きる。

該培地のビタミン類としては、ビオチン、チアミン（ビ
タミンＢ．）、ピリドキシン（ビタξンＢ．）、ビリド
キサール、ビリドキサ主ン、バントテン酸カルシウム、
アスコルビン酸（ビタミンＣＬイノシトール、ニコチン
酸、ニコチン酸アミド及びリボフラビン（ビタミンＢ．
）などを例示できる。

該培地のア≧ノ酸類としては、例えばグリシン、アラニ
ン、グルタミン、システィン、フエニルアラニン及びリ
ジンなどを例示できる。

本発明の前記培地は、通常は、前記無機或分を約０。１
μＨないし約１００ｄ　、前記植物ホルモン類を約０．
０１＋ａｇ／　ｌないし約１５Ｏｎ＋ｇ／／！及び前記
アξノ酸類を０ないし約１０００’ｍｇ／ｆｆｉ含ませ
て使用されることが望ましい。

本発明に係わる組織培養に用いられる前記培地として具
体的には、従来から知られている植物の組織培養に用い
られている培地、例えば、ムラシゲ・スクーグ（’６２
）　［Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ　＆　Ｓｋｏｏｇ］の培地、
リンスマイヤー・スクーグ（ＲＭ４９６５）　［Ｌｉｎ
ｓｍａｉｅｒ＆　Ｓｋｏｏｇ］の培地、ホワイト　（’
６３）　［Ｗｈｉｔｅｌの培地、ガンボルグ［Ｇａｍｂ
ｏｒｇ］のＢ−５培地、三井のト９培地、ニッチ・ニッ
チの培地［Ｎｉｔｃｈ　＆　Ｎｉｔｃｈ］等に前記した
炭素源及び植物ホルモンを添加し、更に必要に応じて前
記したビタミン類、アミノ酸類を添加して調整された培
地を例示できるが本発明ではこの中でも特にニッチ・ニ
ッチ、リンスマイヤー・スクーグ、ムラシゲ・スクーズ
の培地を用いて調整される培地が好ましい。上記した従
来公知の培地の組威に関しては、例えば、竹内、中嶋、
古谷著の「新植物組織培養ｊ　ｐ３８６〜ｐ３９１、朝
倉書店、１９７９年に記載されている．本発明のクラウ
ン形或方法において使用できる前記培地は、液体培地で
あり、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリオレフィン
、ポリビニルクロライド、ポリビニリデン、ポリアクリ
ルニトリルアセテートアルコールなどのボリマー類、ロ
ックウール、バーミキュライト、パーライトなどの人工
土壌、プラスチック網、ステンレス網、木綿、濾紙等の
支持体に含浸して用いる。

本発明では通気条件下で前記液体培地を間欠的に供給す
ることにより、支持材上に置床された組織又はカルス乃
至それから形成されるクラウンの少なくとも一部を間欠
的に液体培地に浸漬状態として組織培養してクラウンを
形成させるものである。

この場合の本発明で言うところのクラウンとは全植物体
中の地下茎に相当し形態的には短縮茎にあたる貯蔵組織
であり、ａｍ又はカルスを組織培養して得られる、塊状
ないしは冠状の形状をした細胞の塊であって幼芽あるい
は幼芽の基になる幼芽原基を含んでいるものをさす。

通気の方法としては、エアーポンプ、ガスボンベ、ファ
ンなどを用いた強制通気とフィルターをつけた培養器に
風をあてる、温度変化による空気の膨張、収縮を利用す
るなどの自然換気などがあげられる。使用する気体とし
ては酸素、二酸化炭素、窒素、空気などのうち２種類以
上の気体を混合した気体を用いることができる。本発明
では、酸素を５〜２０ｖｏｌ％、二酸化炭素を４００〜
１０００ｐｐｍ含む混合気体が特に望ましい。通気速度
は培養容器の形状や大きさにより異なるが、培養容器内
気相部分の換気回数が１〜２０回／ｈが望ましいクラウ
ン形成に使用する培養装置としては、組織又はカルスを
置床し、液体培地を供給した際に含浸させるための支持
材を有し、気相部の通気を行い、かつ液体培地を間欠的
に供給、排出できるようにしたものであれば、何ら限定
されない。具体的には、第２図に示すような装置が使用
できる。

第１図は、本発明の方法によるアスパラガス属植物のク
ラウン形成、増殖、植物体の増殖等のプロセスを示す図
である。図の上部には、苗条の茎を切断した得られた切
片を組織培養してクラウンが形成される経路が示されて
おり、図の下部の左側には、前記クラウンからクラウン
を増殖する増殖サイクルが示され、図の下部の右側には
、このようにして増殖されたクラウンから発根、再生さ
せた植物体が示されている。

本発明においてクラウンを形成させるための培地として
は前述のような培地を使用できるが、特にシーＪ糖を初
期Ｉ！濃度として３％以上含有する培地を用いた場合に
クラウン形成率を高めることができる。

本発明では、クラウン形成の際通気条件を採用すること
により、維管束系の発達した良質のクラウンを形成でき
、かつ形或速度を向上させることができる。得られたク
ラウンは、発根しやすく、またビトリフィケーションを
避けることができる。

本発明ではまた、液体培地を間歇的に供給することによ
り、クラウンの形或速度を高め、シュートの形成を促進
できる。

本発明では、上記のようにして形成させたクラウンを切
断し、好ましくは少なくともｌ個の芽を含むように切断
し、得られた切片をさらに支持材に含浸させた液体培地
を用い通気条件下でかつ液体培地を間欠的に供給しなが
ら培養することによりクラウンを肥大戒長させることが
できる。

上記クラウンの肥大、増殖を行うための液体培地はクラ
ウン形或に使用するのと同様のものが使用でき、特にシ
ヨ糖を３％（初期濃度）以上含有する培地を用いた場合
に、クラウンの増殖率を向上させうる。通気条件は前述
と同様でよい。

本発明では、クラウンの肥大において通気条件を採用す
ることにより、良質のクラウンを得る、即ち、発根しや
すいクラウンを得て、ビトリフィケーシゴン防止するこ
とができる。また、液体培地の間欠的供給によりクラウ
ンの質を維持しながらクラウンの成長を速めることがで
きる。

さらに必要に応じて、同様のクラウン切断一切片組織培
養一クラウン肥大の増殖プロセスを繰り返すことにより
クラウンの増殖を行うことができる。

次いで上記のようにして増殖されたクラウンの中から適
宜量のクラウンを抜き取って発根培地で培養して発根さ
せ、前記芽を適宜大きさの植物体に生育させる。この植
物体への生育工程も、前述のクラウン形或に用いたと同
様の液体通気培養によれば、貯蔵根の発根率及び発根速
度を高め、良質の苗をうることかできる。

発根は培地中に抗ジベレリン剤を添加した場合に特に促
進される。抗ジベレリン剤としては具体的にはアンシミ
ドールが挙げられる。

さらに本発明では、上記植物体を馴化することによって
種苗とすることができ、以上の方法を繰り返すことによ
りアスパラガス属植物の種苗を大量に増殖させることが
できる。

以下、本発明の方法を実施例によって具体的に示す。

実施例１ アスパラガスの品種“北海１００”の無菌系で維持して
いるシュートを節を含む長さ７〜１０ＩＩＩＩｌ１に調
整したものを材料とした．培地は、無機要素をＭＳ培地
、有機要素をニッチ・ニッチを基本とし、ＮＩｌ．ＮＯ
．を１／２倍に、ＣａＣ１．を２倍とし、グルタミン１
０−’Ｍを添加したものを基本培地（以後、ＡＳＰ培地
と略記）とした。

培地は、ＡＳＰ培地を基本とし、シヨ糖６０ｇ／　ｆ、
ｐＨ５．８の液体培地を用い、オーキシンとしてＩＢＭ
１０−６Ｍ　、サイトカイニンとしてＢＡを３×１０一
物、抗ジベレリンとしてアンシミドールを１０−’Ｍを
添加した。これを培養装Ｗ（容積約３００ｄ）に支持材
としてステンレス網をしき、各２００ｄ分注した後、上
記アスパラガス茎切片を各２５個、計１００個置床して
、２５゜Ｃ，　３０００１ｕｘ　，空気通気速度３０ｄ
／１’ｌｔｎ　、培地中浸漬時間３０分、非浸漬時間２
時間の繰り返し条件下で４週間培養したところ表１に示
す結果を得た。

比較例１ 実施例ｌにおいて、間欠浸漬もしくは空気通気を行わな
いこと、培地液面はステンレス網にふれる程度にして培
地を循環させる以外は実施例１と同様にして行った結果
、表１に示す結果を得た。

実施例２ 実施例１の手法により得られたアスパラガスの品種“北
海１００”のクラウンを２〜３芽を含むように切り分け
たものを材料とした。培地はＡＳＰ培地を基本とし、シ
ー！糖６０ｇ／ｌ，　　ｐＨ５．７とし、これにオーキ
シンとしてＩＢＭを１０−’Ｍ　、サイトカイニンとし
てＢＡを１０−’Ｍ　、抗ジベレリンとしてアンシミド
ールを１０””Ｍ添加した。これを培養装置（容積約３
００ｄ）に支持材としてステンレス網をしき、各２００
一分注した後、上記アスパラガスクラウンを各１０個、
計５０個置床して、２５゜ｃ，３０００ｌｕｘ　、空気
通気速度３０ｄ／ｎ＋ｉｎ、培地中浸漬時間３０分、非
浸漬時間２時間の繰り返し条件下で４週間培養したとこ
ろ表２に示す結果を得た。

比較例２ 実施例２において、間欠浸漬もしくは空気通気を行わな
いこと、培地液面はステンレス網にふれる程度にして培
地を循環させる以外は実施例２と同様にして行った結果
、表２に示す結果を得た。

実施例３ 実施例２の手法により維持しているアスパラガスの品種
“北海１００”の゛クラウンを２〜３芽を含むように切
り分けたものを材料とした。培地はＡＳＰ培地を基本と
し、シヨｔＪ！６０ｇ／ｊ２，　　ｐＨ５．　７とし、
これにオーキシンとしてＩＢ＾を１０−”Ｍ　、サイト
カイニンとしてＢ＾を１０−’Ｍ　、抗ジベレリンとし
てアンシ５ドールを１０４Ｍ添加した。これを培養装置
（容積約３００ＩＩＩｌ．）に支持材としてステンレス
網をしき、各２００　ｄ分注した後、上記アスパラガス
クラウンを各１０個、計５０個置床して、２５“Ｃ、３
０００１ｕｘ　、空気通気達度３０Ｉｄ／ｗｉｎ、培地
中浸漬時間３０分、非浸漬時間２時間の繰り返し条件下
で４週間培養したところ表３に示す結果を得た。

比較例３ 実施例３において、間欠浸漬もしくは空気通気を行わな
いこと、培地液面はステンレス網にふれる程度にして培
地を循環させること以外は実施例３と同様にして行った
結果、表３に示す結果を得た。

（本頁以下余白） 表 ■ 実施例１ クラウン形成率　Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ率１００
％　　　　　　　　０％ 実施例３ ８５％ ３１０ｍｇ 表２ クラウン増殖率 実施例２　　　５．４倍 比較例２ 間欠浸漬無し３．８倍 通気無し　　３．５倍 Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ率 ０％ ３５％ ５０％ 供試した切片数 ４ 〔発明の効果〕 本発明の方法によれば、組織培養により、アスパラガス
属植物からクラウンを形成させ、また、これを効率的に
大量増殖することができ、さらに、得られたクラウンを
経由して植物体及び種苗を大量に効率良く増殖させるこ
とができる．

【図面の簡単な説明】

第１図は、アスパラガス属植物のクラウン形成、増殖、
植物体の増殖等のプロセスを示す図である。 第２図はクラウン形成に使用された培養装置を示す図で
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アスパラガス属植物の組織又はカルスを支持材上に
   置床するとともに、液体培地を間欠的に供給・排出する
   ことにより前記支持材上に置床されたアスパラガス属植
   物の組織又はカルス乃至それから形成されるクラウンの
   少なくとも一部を間欠的に液体培地に浸漬状態とし、か
   つ、通気条件下で培養してクラウンを形成させることを
   特徴とするアスパラガス属植物のクラウン形成方法。 ２、請求項１記載の方法で形成させたクラウンを切断し
   て得た切片をさらに支持材上に置床するとともに、液体
   培地を間欠的に供給・排出することにより前記支持材上
   に置床されたクラウンの切片乃至それから肥大するクラ
   ウンの少なくとも一部を間欠的に液体培地に浸漬状態と
   し、かつ、通気条件下で培養してクラウンを肥大させ、
   さらに必要に応じて同様のクラウン切断→切片培養→ク
   ラウン肥大の増殖プロセスを繰り返すことを特徴とする
   アスパラガス属植物のクラウン増殖方法。 ３、請求項１又は請求項２記載の方法で得られたクラウ
   ンを支持材上に置床した状態で、液体培地を間欠的に供
   給・排出することにより前記支持材上に置床されたクラ
   ウン乃至それから生育する植物体の少なくとも一部を間
   欠的に液体培地に浸漬状態とし、かつ、通気条件下で培
   養して植物体を生育させることを特徴とするアスパラガ
   ス属植物の植物体の増殖方法。 ４、植物体の生育工程に発根工程を含むことを特徴とす
   る請求項３記載のアスパラガス属植物の植物体の増殖方
   法。 ５、請求項１乃至請求項４のいずれかの項記載の方法で
   得られた植物体を馴化せしめて種苗とすることを特徴と
   するアスパラガス属植物の種苗増殖方法。