DK167640B1

DK167640B1 - Fremgangsmaade til formering af loegplanter

Info

Publication number: DK167640B1
Application number: DK669887A
Authority: DK
Inventors: Hikaru Yamagata; Waichirou Kawarabayashi; Shigeru Takahashi
Original assignee: Mitsui Petrochemical Ind
Priority date: 1986-12-18
Filing date: 1987-12-18
Publication date: 1993-12-06
Also published as: EP0275682B1; JPH0789804B2; KR880007714A; DE3774687D1; KR960013461B1; JPS63279721A; AU8269387A; EP0275682A1; CA1297294C; DK669887A; AU599733B2; DK669887D0

Description

i DK 167640 B1

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til formering af løgplanter, ved hvilken frøplanter af løgplanterne formeres ved anvendelse af vævsdyrkning til vævsstykker eller dyrkede celler af løgplanterne under anvendelse af flydende 5 kulturmedium.

Der er forskellige slags løgplanter, f.eks. Lilium, blandt hvilke L. longiflorum, L. speciosum, L. elegans osv. har vundet yndest til udsmykning som havebrugsplanter og endvidere L. laneifolium, L. auratum osv., der har været anvendt som foder 10 og fødeliljer. Løgplanterne har hidtil været formeret ved at dele løgplanteskæl, udnytte bulbiller, så frø osv. Disse formeringsmetoder kræver imidlertid store områder og meget arbejdskraft, og endvidere har der været problemer med henblik på reduktion af frøplanternes væksthastighed eller nedsættel-15 se af blomsterkvaliteten af planter på grund af udbredelsen af virussygdom i de senere år. For at overvinde disse problemer er der foretaget flere undersøgelser af formering af frøplanter ved vævsdyrkning af planter. F.eks. beskriver offentliggjort japansk patentansøgning nr. Sho 55-15734 en fremgangs-20 måde til at formere et stort antal Liliumplanter ved at danne og formere småløg fra vævsstykker af liljeplanter under anvendelse af et fast kulturmedium, omplante og derpå dyrke dem i flydende kulturmedium. Da et fast agarmedium har været anvendt på det første stadium af vævsdyrkningen ved denne metode, 25 kræver det imidlertid meget arbejdskraft til kulturen og effektiv udnyttelse af rummet til kulturbeholderen er vanskelig, hvilket fører til nedsættelse af effektiviteten af dyrkningen.

På baggrund af ovenstående har de foreliggende ansøgere allerede foreslået en fremgangsmåde til at formere liljefrøplan-30 ter ved at anvende et flydende kulturmedium fra begyndelsen af kulturen, i hvilket en oxygenholdig gas trænger igennem, således at kulturmediets kapacitetskoefficient for oxygenbevægelse (KLa) holdes på et niveau inden for et forud bestemt interval, jvf. japansk patentansøgning nr. Sho 60-128348. Denne 35 fremgangsmåde kan give en fordel ved, at frøplanterne kan for- DK 167640 Bl 2 meres med høj effektivitet sammenlignet med den sædvanlige metode. De foreliggende opfindere har endvidere forbedret denne metode og undersøgt en metode til at formere en stor mængde frøplanter, der ikke er begrænset kun til liljeplanter, men 5 også til løgplanter i almindelighed, og som er i stand til at formere frøplanterne mere effektivt og med mere udmærket form af småløgene og løgplanterne og med udmærket kvalitet og stabilitet.

Opfindelsen er baseret på den konstatering, at det foregående 10 formål kan opnås ved følgende metode. Det vil sige, at den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til formering af løgplanter, ved hvilken frøplanter af løgplanter formeres ved anvendelse af vævsdyrkning til vævsstykker eller dyrkede celler af løgplanter i et flydende kulturmedium, hvilken frem-15 gangsmåde er ejendommelig ved, at det osmotiske tryk af kulturopløsningen holdes på 2 til 8 atmosfærer i hovedsagen i hele vævsdyrkningsperioden ved, at det osmotiske tryk reguleres ved tilsætning af et middel til regulering af det osmotiske tryk.

20 Disse og andre formål og fordelagtige træk ved den foreliggende opfindelse vil fremgå nærmere af følgende beskrivelse i forbindelse med tegningen, hvor fig. 1 er et fotografi af løg af L. longiflorum fremkommet ved dyrkningsmetoden ifølge opfindelsen, 25 fig. 2 er et fotografi af løg af L. longiflorum fremkommet ved et sammenligningseksempel 1, i hvilket det osmotiske tryk af kulturmediet holdes på 0 atmosfære under dyrkningsperioden, fig. 3 er en kurve, der viser ældningsændringen af det osmotiske tryk af kulturmediet under dyrkning i eksemplerne ifølge 3 0 opfindelsen og i sammenligningseksempler.

DK 167640 Bl 3

De løgplanter, der anvendes til vævsdyrkningen ifølge opfindelsen, er de planter, der har skælagtige løg som organer, hvilke løg indbefatter løg med flagede skæl og laminare skæl. Løgplanterne indbefatter specielt Liliumplanter såsom L. lon-5 giflorum, L. speciosum, L. elegans, L. laneifolium, L. auratum osv. Fritillariaplanter, såsom F. camtschatcensis, F. imperialis, F. thunbergii, F. japonica osv. Hippeastrum hybridum (Hippeastrum-plante), Narcissusplanter, såsom N. pseudo-narci-susses, T. gesneriana med forskellige varieteter (tulipanplan-10 ter), H. orientalis (hyacintplanter), Alliumplanter, såsom A. schoneoprasum, A. ascalonicum, A. cepa, A. sativum, A. chinen-se, A. fitsulosum, A. giganteum osv., idet liljeplanterne er de foretrukne blandt disse.

Ifølge opfindelsen kan vævsdyrkningen for en løgplante udføres 15 ved at anvende vævsstykker eller dyrkede celler af planten. Vævsstykkerne kan indbefatte specielt de vævsstykker af løgplanter, der fremstilles ved fint at udskære skiver af væv af skudapex, stilke, blade, blomster, frø, løg, småløg, skæl, rødder osv. Disse vævsstykker anvendes i reglen efter steri-20 lisering med natriumhypochlorit, ethanol eller en flamme. Sådanne steriliseringsmetoder kan dog være unødvendige, hvis det drejer sig om aseptisk dyrkede løgplanter. Hvor det drejer sig om formering af frøplanter af løgplanter, der ikke lider af sygdomme og virus, kan endvidere som kulturmateriale 25 anvendes de førnævnte vævsstykker fremkommet af væv nær api-kalpunktet eller vævsstykker af løgplanterne fremkommet af væv nær apikalpunktet. De dyrkede celler, der kan anvendes til vævsdyrkningen for løgplanter ifølge den foreliggende opfindelse, er udifferentierede amorfe celler fremkommet af vævs-30 stykkerne ved vævsdyrkning på kendt måde.

Ifølge opfindelsen dyrkes vævsstykkerne eller de dyrkede celler af løgplanterne, der er beskrevet ovenfor, under betingelser, ved hvilke det osmotiske tryk af kulturopløsningen holdes i intervallet fra 2.til 8 atmosfærer i hovedsagen under hele 35 vævskulturperioden.

DK 167640 B1 4

Ved vævsdyrkningen under anvendelse af flydende kulturmedium, der hidtil har været anvendt, er det osmotiske tryk i det friske kulturmedium lige efter starten af dyrkningen i reglen så høj som fra 4 til 10 atmosfærer, men det osmotiske tryk 5 nedsættes gradvis, fordi vævsstykkerne eller de dyrkede celler forbruger næringsbestanddelene i kulturmediet under kulturdyrkningsforløbet. Ved den hidtil kendte vævsdyrkning for løgplanter lægges der ikke særlig vægt på det osmotiske tryk under dyrkningsperioden, og det osmotiske tryk på det senere 10 stadium af dyrkningen er ret nedsat sammenlignet med det ved det foregående stadium af dyrkningen, dvs. det nedsættes i reglen fra 0 til 1 atmosfære.

De foreliggende opfindere har foretaget en undersøgelse af dyrkningsbetingelserne, især relationen mellem det osmotiske 15 tryk af kulturmediet og vævsdyrkning af løgplanter, og antallet af løg, der dannes ved dyrkningen, eller kvaliteten, såsom formen af småløgene, vækststabiliteten osv., og har fundet, at kvaliteten af frøplanterne, der fås ved dyrkningen, påvirkes meget af det osmotiske tryk af kulturopløsningen under vævs-20 dyrkning. Det vil sige, at hvor det drejer sig om vævsdyrkning til løgplanter, især i det sidste trin af dyrkningen, når dyrkningen udføres på den sædvanlige måde, ved hvilken det osmotiske tryk af kulturmediet er så lavt som mindre end 2 atmosfærer, er formen af de fremkomne løg og småløg af løg-25 planter ikke ofte den ensartede kugleform, men har form som vist f.eks. på fig. 2, der er ringere både i form og med hensyn til kvalitet. Hvis dyrkningen udføres som tidligere under det osmotiske tryk af det flydende kulturmedium, har det endvidere også vist sig at vandindholdet af småløgene eller løge-30 ne i reglen er så høj som 80 til 95%.

Hvis endvidere løgplanteme anvendes til vævsdyrkning samtidig med, at man forøger det osmotiske tryk af kulturopløsningen til over 8 atmosfærer, reduceres antallet af dannede løg, og den følgende vækst er dårlig og giver kun dårlig kvalitet.

35 Hvor det drejer sig om dyrkning, der udføres samtidig med at DK 167640 B1 5 det osmotiske tryk af kulturopløsning holdes fra 2 til 8 atmosfærer i hovedsagen over hele dyrkningsperioden som ifølge den foreliggende opfindelse, har det på den anden side også vist sig, at vandindholdet i småløgene eller løgene, som frem-5 kommer, er så lavt som 70 til 80%.

Det antages, der er en relation mellem det osmotiske tryk af kulturopløsningen anvendt til vævsdyrkning af løgplanter og vandindholdet af småløgene eller løgene, som fås ved dyrkningen. Det formodes endvidere, at der også er en vis relation 10 mellem vandindholdet og kvaliteten, såsom formen af småløgene eller løgene, vækststabiliteten osv.

Af de ovenfor beskrevne grunde bliver der ved vævsdyrkning til løgplanter ifølge den foreliggende opfindelsen anvendt dyrkning samtidig med, at det osmotiske tryk af kulturopløsningen 15 holdes fra 2 til 8 atmosfærer i hovedsagen over hele vævsdyrkningsperioden. I hovedsagen hele vævsdyrkningsperioden vil i dette tilfælde blive nærmere beskrevet senere.

Det flydende kulturmedium, der anvendes ifølge opfindelsen, omfatter de kulturmedier, der indeholder uorganiske bestand-20 dele som næringsbestanddelene, carbonkilder og plantehormo-ner som væsentlige bestanddele samt additiver, såsom vitaminer, aminosyrer og midler til regulering af det osmotiske tryk.

Den uorganiske bestanddel til kulturmediet kan indeholde 25 f.eks. de uorganiske salte, der indeholder sådanne grundstoffer som nitrogen, phosphor, kalium, natrium, calcium, magnium, svovl, jern, mangan, zink, bor, molybdæn, chlor, jod og kobolt. De kan indbefatte specielt sådanne forbindelser som kaliumnitrat, natriumnitrat, ammoniumnitrat, ammoniumchlorid, 30 kaliumchlorid, calciumchlorid, kaliumhydrogenphosphat, natri-umdihydrogenphosphat, mangniumsulfat, magniumchlorid, natriumsulfat, ferrosulfat, ferrisulfat, mangansulfat, kobbersulfat, natriummolybdat, molybdæntrioxid, kaliumjodid, zinksulfat, DK 167640 B1 6 borsyre og koboltchlorid.

Carbonkilderne i kulturmediet kan indbefatte f.eks. kulhydrater såsom saccharose, glucose, fructose, maltose og derivater deraf.

5 Plantehormoner til kulturmediet kan indbefatte f.eks. auxiner såsom naphthaleneddikesyre, (NAA) , indoleddikesyre (IAA) , p-chlorphenoxyeddikesyre, 2,4-dichlorphenoxyeddikesyre, 2,4-di-chlorphenoxyeddikesyre (2,4-D), indolsmørsyre (IBA) og derivater deraf samt cytokinin såsom benzyladenin (BA) , kinetin og 10 zeatin.

Vitaminer til kulturmediet kan indbefatte f.eks. biotin, thiamin (vitamin Bl), pyridoxin (vitamin B6), pyridoxal, pyridox-amin, calciumpantotat, ascorbinsyre (vitamin C) , inosit, nikotinsyre, nikotinsyreamid og riboflavin (vitamin B2).

15 Aminosyren til kulturmediet kan indbefatte f.eks. glycin, ala-nin, glutaminsyre, cystein, phenylalanin og lysin.

Midlet til regulering af osmotisk tryk til kulturmediet kan indbefatte f.eks. uorganiske salte såsom natriumchlorid, kali-umchlorid, natriumsulfat, kaliumsulfat, calciumchlorid, calci-20 umsulfat, natriumnitrat, kaliumnitrat, calciumnitrat, ammoniumnitrat og ammoniumchlorid, salte af organiske syrer såsom natriumacetat, kaliumacetat, natriumpropionat, kaliumpropio-nat, natriumcitrat, kaliumcitrat, natriummaleat, kaliummaleat, natriummalonat, kaliummalonat, natriumtartrat, kaliumtartrat, 25 natriumsuccinat, kaliumsuccinat, natriumfumarat, kaliumfuma-rat, natriumcitrat og kaliumcitrat. Carbonhydrat, såsom saccharose, glucose, fructose, maltose, mannose, galactose, xylose, ribose, arabinose, maldose, lactose, sorbit, mannit, ga-lacturonsyre og gluconsyre og vandopløselige højere alkoholer, 30 såsom ethylenglycol, propylenglycol, polyethylenglycol og dextrin. Midlet til regulering af osmotisk tryk kan være det samme som de ovenfor beskrevne uorganiske bestanddele og kul- DK 167640 B1 7 hydraterne. Endvidere kan flere af dem anvendes i kombination.

Den mængde, hvori midlet til regulering af osmotisk tryk anvendes, er i reglen i intervallet fra 0 til 100 g/1 til at holde det osmotiske tryk af kulturmediet i intervallet fra 2 5 til 8 atmosfærer.

Det anvendte kulturmedium indeholder i reglen fra 0,1 μΜ til 100 μΜ uorganiske bestanddele, fra 1 g/1 til 150 g/1 carbon-kilde, fra 0,1 μΜ til 1000 μΜ plantehormoner, fra 0,1 mg/1 til 150 mg/1 vitaminer, fra 0 til 1000 mg/1 aminosyre og midlet 10 til regulering af osmotisk tryk i det ovenfor beskrevne interval .

Kulturmediet, der anvendes til vævsdyrkningen ifølge opfindelsen, kan specielt indbefatte de kendte kulturmedier, der anvendes til vævsdyrkning, f.eks. Murashige & Skoog ('62) kul-15 turmedium, Linsmaier og Skoog kulturmedium (RM-1965) , White kulturmedium ('63), Gamborg B-5 kulturmedium, Mitsui M-9 kulturmedium, Nitch & Nitch kulturmedium osv., hvori der fortrinsvis er inkorporeret efter behov carbonkilder og plante-hormoner som ovenfor beskrevet og endvidere vitaminer og ami-20 nosyrer, som ovenfor beskrevet. Sammensætningen af de kendte kulturmedier, der er nævnt ovenfor, er beskrevet f.eks. i "New Plant Tissue Culture", side 383 til 391 skrevet af Takeuchi, Jakajima, Furuya og offentliggjort af Asakura Shoten i 1979. Fortrinsvis er pH-værdien af kulturmediet fra 4,0 til 8,0.

25 Selv om lys ikke altid er nødvendigt under dyrkning, kan bedre resultater opnås, når dyrkning udføres under belysning af fra 100 til 10.000 lux. Temperaturen til dyrkningen er fortrinsvis fra 15 til 35°C.

Beskrivelsen vil blive foretaget specielt af fremgangsmåden 3 0 til udførelse af dyrkningen, medens det osmotiske tryk i hovedsagen i det første stadium af vævsdyrkningsperioden holdes inden for et interval fra 2 til 8 atmosfærer i kulturopløsningen omfattende det ovenfor beskrevne flydende kulturmedium.

DK 167640 B1 8

Ifølge opfindelsen fremstilles et flydende kulturmedium, hvori næringsbetanddele og middel til regulering af det osmotiske tryk, som ovenfor beskrevet, er indeholdt i de ovenfor beskrevne koncentrationsintervaller, og det osmotiske tryk er i 5 intervallet fra 2 til 8 atmosfærer. Det osmotiske tryk reguleres fortrinsvis ved at indstille koncentrationen af midlerne til regulering af osmotisk tryk først og fremmest kulhydrater såsom saccharose, galactose, fructose, maltose, sorbit og mannit. Når dyrkningen udføres under anvendelse af kulturopløs-10 ningen omfattende et frisk flydende kulturmedium fremstillet ved denne fremgangsmåde, og da det osmostiske tryk af kulturmediet nedsættes samtidig med forbruget af næringsbestanddelene, bliver ældningsændringen af det osmotiske tryk med dyrkningstiden overvåget, og det osmotiske tryk af kulturopløsnin-15 gen holdes inden for det ovenfor beskrevne interval i hovedsagen gennem hele dyrkningsperioden ved tilsætning af passende mængder af næringsbestanddele og/eller middel til regulering af osmotisk tryk inden for det koncentrationsinterval, der er beskrevet ovenfor. I dette tifælde betyder "i hovedsagen i 20 hele dyrkningsperioden" følgende: osmotisk tryk af kulturmediet uden for intervallet fra 2 til 8 atmosfærer kan tillades, hvis det inden for en periode fra begyndelsen af dyrkningen eller lige før afslutningen af dyrkningen eller i den mellemliggende dyrkningsperiode er således, at det ikke giver nogen 25 uønsket virkning på vævskulturen af løgplanter, dvs. at det inden for en periode inden for dette interval ikke skader virkningen af den foreliggende opfindelse, således at der kan fås en form af småløgene og løgene ved dyrkningen, som er udmærket og mange frøplanter med stabil vækst og høj kvalitet.

30 Den periode, inden for hvilken virkningen ifølge opfindelsen ikke skades af et osmotisk tryk af kulturmediet uden for intervallet fra 2 til 8 atmosfærer, er i reglen ca. M dag, omend den kan variere med arten af planterne.

Med hensyn til næringsbestanddelene, der sættes til kulturne-35 diet ifølge opfindelsen, da bliver de næringsbestanddele, som forbruges under vævsdyrkningsperioden, suppleret eller erstat- DK 167640 B1 9 tet med tilsætning af næringsbestanddele og/eller middel til regulering af osmotisk tryk i en mængde tilstrækkelig til at holde det osmotiske tryk af kulturopløsningen inden for det beskrevne interval.

5 Som fremgangsmåde til dyrkning under opretholdelse af det osmotiske tryk af kulturopløsningen i intervallet fra 2 til 8 atmosfærer i hovedsagen over hele vævsdyrkningsperioden ifølge opfindelsen, er det muligt at anvende en dyrkningsmetode under fornyelse af kulturopløsningen, der er beskrevet ovenfor, ved 10 siden af den beskrevne metode. Det vil sige, at på samme måde som dyrkningsmetoden under fornyelse af kulturopløsningen som vist i japansk patentansøgning nr. Sho 61-16838 af de foreliggende ansøgere, er det også muligt at anvende en fremgangsmåde til kontinuerlig eller diskontinuerlig tilførsel af frisk fly-15 dende kulturmedium med det osmotiske tryk fra 2 til 8 atmosfærer i kulturopløsningen i kulturtanken i hovedsagen i hele vævsdyrkningsperioden samtidig med, at der kontinuerligt eller diskonti'nuerligt udtages brugt kulturopløsning fra kulturtankene for at forny kulturopløsningen i kulturtanken og derved 20 dyrke løgplanterne under opretholdelse af det osmotisk tryk af kulturopløsningen i intervallet fra 2 til 8 atmosfærer i hele vævsdyrkningsperioden. .

Ifølge opfindelsen kan småløgene og løgene af løgplanter, der fås ved fremgangsmåden som ovenfor beskrevet, yderligere skil-25 les i flere skæl eller skiver, og det er muligt at formere en stor mængde småløg og løgene af planter med udmærket kvalitet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Ved fremgangsmåden til vævsdyrkning af løgplanter ved at holde det osmotiske tryk.af det flydende kulturmedium i intervallet 30 fra 2 til 8 atmosfærer i hovedsagen i hele dyrkningsperioden ifølge opfindelsen, er det muligt at opnå mange frøplanter af høj kvalitet, der har udmærket form af småløgene og løgene, og som er stabile i vækst, og som kan formeres mere effektivt sammenlignet med den sædvanlige metode.

DK 167640 B1 10

Opfindelsen beskrives nærmere under henvisning til eksemplerne.

Eksempel 1 Løgskæl af L. longiflorum blev steriliseret med 70% ethanol og 5 en vandig opløsning af natriumhypochlorit (effektiv chlorkon-centration 1%) og blev så vasket med aseptisk vand. Ab aseptic Linsmaier & Skoog kulturopløsning med pH 6,0 indeholdende 40 g/1 saccharose, 0,02 mg/1 naphthaleneddikesyre og 80 g/1 sor-bit som middel til regulering af det osmotiske tryk (sammen-10 sætningen er vist i tabel 1) blev fortyndet med 2 dele aseptisk vand til fremstilling af en dobbeltfortyndet opløsning.

Når det osmotiske tryk af kulturopløsningen blev målt ved den kryoskopiske metode, var det 7,5 atmosfærer. 50 stykker af skællene og 250 ml af kulturopløsningen som ovenfor beskrevet 15 blev anbragt i en kulturtank med et gastilførselsrør (500 ml rumfang) udstyret med glasfiltre og dyrket i mørke i 50 dage ved 25°C under luftning ved at tilføre aseptisk luft med en hastighed af 3 ml/min gennem et steriliseret filter.

Der fremkom 117 stykker små løg med udmærket form, som vist på 20 fig. 1. I løbet af kulturperioden faldt det osmotisk tryk af kulturopløsningen gradvis fra 7,5 atmosfærer til 5,3 atmosfærer som vist på fig. 3. Når 50 stykker løg blev tørret, ved 40°C for at undersøge vandindholdet, var det 77%. Resterende løg kan dyrkes til blomstring ved sædvanlig dyrkning og havde 25 udmærket vækststabilitet.

DK 167640 B1 11

Tabel 1 (kulturmediumsammensætning)

Bestanddel Koncentration__Bestanddel__Koncentration (mg/1) (mg/1) KN03 1900 NH4NO3 1650 m-inosit 100

CaCl3·2H2O 440 glycin 2

MgS04·7Η2θ 370 ni kot i nsyre 0,5 KH3PO4 170 pyridoxin-HC1 0,5

Na2EDTA 37,3 tFnamin-HCl 0,1-

FeS04-7H20 27,8

MnS04·4H20 22,3

ZnS04·7H20 8,6 H3BO3 6,2

Kl 0,83

Na2Mo04-2H20 0,25

CoC12·6H20 0,025

CuS04 ·5H20 . _0,25 __

Eksempel 2

Der udføres samme fremgangsmåde som i eksempel 1 med undtagelse af, at der tilsættes 25 g/1 sorbit. Som resultat blev der 5 uddifferentieret 120 stykker småløg med udmærket form ved kultur i 50 dage. I dyrkningsperioden blev det osmotiske tryk af kulturopløsningen gradvis nedsat fra 4,0 atmosfærer til 2,1 atmosfærer, som vist på fig. 3.

Eksempel 3 10 Der blev udført samme fremgangsmåde som i eksempel 1 med undtagelse af, at der tilsættes 50 g/1 sorbit og tilsættes sorbit i passende mængde, når det osmotiske tryk af kulturopløsningen i dyrkningsperioden nedsættes, således at det osmotiske tryk af kulturopløsningen holdes på 5,0 til 6,0 atmosfærer som 15 vist på fig. 3. Som resultat blev der uddifferentieret 120 småløg med stabil vækst og udmærket form ved 50 dages dyrkning.

DK 167640 B1 12

Eksempel 4

Der blev udført samme fremgangsmåde som i eksempel 1 med undtagelse af, at der tilsættes 33 g/1 sorbit og anvendes 50 ml af kulturopløsningen og tilføres sorbit i passende mængde og 5 frisk kulturopløsning, således at det osmotiske tryk af kulturopløsningen er fra 4,0 til 5,0 atmosfærer i dyrkningsperioden, som vist på fig. 3, medens kulturopløsningen udtages på passende måde af den anden af kulturtankene. Som resultat uddifferentieres 119 stykker småløg med udmærket form ved 10 dyrkning i 50 dage.

Eksempel 5

Der anvendes samme fremgangsmåde som i eksempel 1 med undtagelse af, at der tilsættes 8 g/1 sorbit og anvendes 50 ml af kulturopløsningen og tilføres sorbit og frisk kulturopløsning 15 kontinuerligt, således at det osmotiske tryk af kulturopløsningen holdes på 3,0 atmosfærer under dyrkningen samtidig med, at der kontinuerligt udtages kulturopløsning fra den anden af kulturtankene som i eksempel 1. Som resultat uddifferentieres 123 småløg med udmærket form ved dyrkning i 50 dage.

20 Eksempel 6

Skæl af L. longiflorumløg blev steriliseret med 70% ethanol og en vandig opløsning af natriumhypochlorit (effektiv chlorkon-centration 1%) og blev så vasket med aseptisk vand og skåret i en bredde på ca. 2 mm. Der blev udført samme fremgangsmåde som 25 i eksempel 5 med undtagelse af, at der blev anvendt 1 g udskårne skæl, og derved blev der uddifferentieret 120 til 150 småløg med udmærket form af 1 g udskårne skæl.

Eksempel 7

Dyrkningen blev udført på samme måde som i eksempel 1 med und-30 tagelse af, at kulturopløsningen i eksempel 1 blev erstattet DK 167640 B1 13 med en fortyndet opløsning fremstillet ved at fortynde lxl/3 gange Linsmaier & Skoog kulturopløsningen indeholdende 50 g/1 saccharose, 0,01 mg/1 naphthaleneddikesyre, 0,02 mg/1 benzyl-adenin og 35 g/1 sorbit som middel til regulering af det os-5 motiske tryk (osmotisk tryk 7,0 atmosfærer). Som reshltat blev der uddifferentieret 123 stykke småløg med udmærket form. Det osmotiske tryk af kulturopløsningen blev gradvis nedsat fra 7,0 atmosfærer til 3,7 atmosfærer.

Sammenligningseksemnel 1 10 Når dyrkningen udføres under anvendelse af steriliseret vand indeholdende 0,01 mg/1 naphthaleneddikesyre (osmotisk tryk 0 atmosfære) i stedet for kulturmediet i eksempel 1, blev der uddifferentieret 107 stykker småløg. Pig. 2 viser et fotografi af de fremkomne løg. Løgenes kvalitet var ringere.

15 Sammenlicningseksemnel 2

Dyrkningen blev udført på samme måde som i eksempel 1 med undtagelse af, at der blev anvendt sorbit som middel til regulering af det osmotiske tryk i en mængde på 100 g/1 i eksempel 1. Som resultat blev der uddifferentieret 73 stykker småløg 20 med uhensigtsmæssig form i hovedsagen som vist på fig. 2. Under dyrkningsperioden blev det osmotiske tryk af kulturopløsningen gradvis nedsat fra 8,8 atmosfærer til 7,4 atmosfærer, som vist på fig. 3. Antallet af dannede løg blev reduceret til 38% sammenlignet med eksempel 1.

25 Satnmenliqninqseksempel 3

Der blev anvendt samme fremgangsmåde som i eksempel l med undtagelse af, at der anvendes sorbit som middel til regulering af det osmotiske tryk i en mængde på 120 g/1. Som resultat blev der uddifferentieret 55 stykker småløg med uønsket form i 30 hovedsagen som vist på fig. 2. I dyrkningsperioden blev det osmotiske tryk af kulturopløsningen gradvis nedsat fra 10,0

Claims

1. Fremgangsmåde til formering af løgplanter, ved hvilken frøplanter af løgplanteme formeres ved anvendelse af vævsdyrkning til vævsstykker eller dyrkede celler af løgplanterne under anvendelse af flydende kulturmedium, kendeteg- 10 net ved, at det osmotiske tryk af kulturopløsningen holdes på 2 til 8 atmosfærer i hovedsagen i hele vævsdyrkningsperioden ved, at det osmotiske tryk reguleres ved tilsætning af et middel til regulering af det osmotiske tryk.

2. Fremgangsmåde til formering af løgplanter ifølge krav 1, 15 kendetegnet ved, at vævsdyrkningen udføres under fornyende betingelser for kulturopløsningen. 1 Fremgangsmåde til formering af 'løgplanter ifølge krav 1, kendetegnet ved, at næringsbestanddele forbrugt under vævs dyrkningsperioden suppleres eller erstattes ved til- 20 sætning af næringsbestanddele og/eller middel til regulering af det osmotiske tryk.