JPS6156022A - 植物組織培養による球根類の増殖法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 一１１υ針Ｕ圏！一 本発明は組織培養による球根類の増殖において、アブサ
イジン酸含有培地で培養することにより、不定芽および
球根の分化、肥大、土壌移植時の活着を促進する方法に
関する。かかる本発明方法は安価な球根類の大量供給を
可能にする。

一旦迷至蕉菫一 近年植物組織培養による球根類の増殖に関する研究が活
発に行われ（Ｂ、　Ｖ、　ＣｏｎｇｅｒＪｊｌ　：　Ｃ
ｌｏｎｉｎｇ＾ｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｐｌａｎｔｓ
　ｖｉａ　Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ。

ＣＲＣＰｒｅｓｓ、　１９８１年を参照）、一部は工業
的生産の手段として実用化している（　Ｊ、Ｂ、　Ｊｏ
ｎａｓ著。

Ｃｏｍ＊ａｒｃｉａｌ　ｕｓａ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｒｏ−ｄｕｃｔｉ
ｏｎ　ｏｒ　ｄｉｓｅａｓｅ−ｆｒｅｅ　ｐｌａｎｔｓ
、、　　Ｉｆ、Ｉｔ、　５ｈａｒｐ。

Ｐ、０．　Ｌａｒｓａｎ、　　Ｂ、Ｆ、　Ｐａｄｄｏｃ
ｋおよびＶ、　ＲａｎｇａｎＡｍ。

ＰｌａｎｔＣｅｌｌａｎｄＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅ
：Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏ
ｎｓ、　０ｈｉｏ　５ｔａｔｅ　ｔｌｎｉｙｅｒｓｊｔ
ｙ　Ｐｒｅｓｓ。

１９７９年）。これらの報告および工業的生産では、ム
ラシゲとスクーグの培地、エリックソンの培地、ホワイ
トの培地等の各種植物組織培養用培地に炭素原素よび植
物ホルモンを添加した培地が利用さている。植物ホルモ
ンの種類としては、オーキシン頚、サイトカイニン類、
ジベレリン類、アブサイジン酸等が知られており、植物
組織Ｊεε出用培地は通常はオーキシン類とサイトカイ
ニン類が添加されている。アブサイジン酸については、
組織培養による球根類の増殖用培地に添加されることは
なかった。下記文献にはアブサイジン酸によって不定胚
分化が促進されることを報告しているが、これはオレン
ジの胚カルスを用いた実験の結果であり、組織培養によ
る球根類の増殖に関する知見は現在までのところ存在し
ない（Ｊ、にｏｃｈｂａ、　　Ｐ。

Ｓｐｅｇｅｌ−Ｒｏｙ、　　Ｈ，Ｎｅｕｓａｎｎ、　　
Ｓ、　５ａａｄ著、　　Ｓｔｉｍｕｌａ−ｔｉｏｎ　ｏ
ｆ　Ｂ＋ｓｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　Ｃ１ｔｒｕ
ｓ　０ｖｕｌａｒ　Ｃａ１ｌｕｓｂｙ　ＡＢ＾、　［１
ｔｈｅｐｈｏｎ、　ＣＣＣａｎｄ　Ａｆａｒ　ａｎｄ　
＋ｔｓ　５ｕｐｐｒｅ−ｓｓｉｏｎ　ｂｙ　Ｇ＾３１Ｚ
ｅｉｔｓｃｈｒｉｆＬ　ｆｕｒ　Ｐｆｌａｎｚｅｎｐｈ
ｙｓｉｏ−１ｏｇｉｅ　８９　：　４２７−４３２．１
９７８　　）ｅ発騒が　　しよ°と　る問題点 従来の組織培養法による球根類の増殖法の多くは、実用
技術として利用するためには培養方法を改良して、増殖
効率ならびに技術の安定化を達成することが必要である
。−邪には、すでに実用技術として工業的生産に利用さ
ているものもある。

しかし、これらの実用技術においてもさらに増殖効率な
らびに技術の安定化を高めることができれば、生産性を
さらに高めることができる。例えば、ユリ利ユ！１ｌｉ
ｉｉ植物の球根をａｌ織Ｊｇ養で増殖する場合、多数の
不定芽や球根を分化させることができても、培養を継続
する過程で葉の生育が顕著となり、球根の肥大が抑制さ
れる現象が観察される。

このような現象は、他の球根植物でも観察されており、
特に、スイセン、チューリップ、１：ヤンンス、タマネ
ギ、アリウム・ギガンチウムなどでは不定芽の分化が観
察されても、組織培養で球根を肥大させることは容易で
はない。球根の肥大を誘起する手法としては、分化させ
た不定芽を低温処理することによってチューリップの球
根を肥大させる試み（Ｙ、　Ｎ１５ｈｉｕｃｈｉ著、５
ｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ＶｅｇｅｔａＬ＋ｖｅＰｒｏｐａ
ｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｕｌｉｐｓ、　ＩＶ、　Ｒｅｇ
ｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｒＢｕｌｂｌｅｔａ　ｉｎ　Ｂ
ｕｌｂ　５ｃａｌｅ　Ｓａｇａ＋ａｎｔｓ　Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅｄ　１ｎｖ１ｔｒｏ、　　Ｊ、　Ｊａｐａｎ、　　
Ｓｏｃ、　　Ｈａｒｔ、　　Ｓｃｉ、　　４９　：２３
５−２４０．１９８０　）などが知られているにすぎな
い。

また、組織培養によってカルスが発生し、不定芽あるい
は球根の形成が抑制される現象も、テッポウユリ、オト
メユリ、ササユリをはじめとするユリ属植物の多くでは
良く観察される。勿論、このような現象は、他の球根植
物でも一般的な現象である。以上のようなｍ＆１培養過
程における問題点は、土壌移植の効率にも影響する。即
ち、球根が肥大せずに、不定芽が伸長生長した葉状の植
物体は、球根と比較して日照や乾燥に対する抵抗性が弱
いので、土壌への移植にはミスト処理、ビニール膜によ
る被覆、遮光処理等特別の配慮が必要である。

間　点　　゛　るための　役 本発明者らは、以上の問題点の解決を目的として、組織
培養による各種球根植物の増殖方法についてｉｎｉな検
討を行った結果、培地にアブサイジン酸を添加すること
により、以上の問題点を著しく改善することができるこ
とを見出した。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明は次のＡ−Ｃ工程からなる組織培養法による球根
類の増殖法である。

（＾）無菌培養系の確立 球根植物体の種子、茎頂１葉、茎、花器１球根１機など
あるいはそれらを切断した組織切片を、例えば次亜塩素
酸ソーダ、エチルアルコールなどで殺菌処理したのち、
無菌水で良（洗う。

このようにして表面殺菌した植物体あるいは組織切片を
、滅菌した固体培地あるいは液体培地に培地２−１０ｍ
ｌ当り１個の割合で置床する。

固体培地あるいは液体培地としては通常植物の組織培養
に用いられる培地であればいかなるものも使用できる。

たとえばムラシゲとスクーグの培地、エリ７クソンの培
地、ホワイトの培地、リンスマイヤー・スクーグの培地
など、あるいはこれらを基本培地としてこれらに種々の
改変を加えたものなどが用いられる。固体状にするため
には寒天などが用いられる。またオーキシン類２サイト
カイニン類などの植物ホルモンの濃度を種々組み合せて
培地に添加することが多い。これら植物ホルモンの添加
量は、ｌＩｉ物ホルモンの種類、植物の種類、培養段階
などによってそれぞれ異なるが、一般に０．１−５０ｍ
ｇ／ｉ’程度でよい。培地のｐＨｌ二４．０−８．０が
好適である。培養中光は必ずしも必要ではないが、照明
することもある。照明下で培養を行う場合は２００−１
０．０００ルクスの光度で行うと良い。

以下Ｂ−Ｃに初ける培養においても上記培地、植物ホル
モンは適宜用いられ、照明も適宜行われる。置床後、１
０−３５℃で２０−１００日間固体培地の場合には静置
培養、液体培地の場合には振とう＊ａあるいは通気攪拌
培養を行うと、それらの表面あるいは切口から不定芽あ
るいは球根が分化し、さらに育成して茎２葉あるいは球
根を形成する。このとき、培地にサイトカイニン類を添
加しておくと、多数の不定芽が分化し、培養を継続する
と茎１葉あるいは球根に生育する。以上のようにして球
根植物の１１１（閑１ｇ養系が確立される。

（８）　アブサイジン酸による不定芽および球根分化な
らびに球根の肥大促進 上記（Ａ）で表面殺菌された植物体あるいは組織切片、
あるいはそれらを培養して生じた茎。

葉あるいは球根を、切断し、分割し、あるいは多数の切
れ目をいれた後、アブサイジン酸を含有する固体培地あ
るいは液体培地に培地２−１ＯＩ１１１当り１個の割合
で置床後、１０−３５℃で２０−１００日間、固体培地
の場合には静置培養、液体培地の場合には振とう培養あ
るいは通気攪拌培養を行うと、それらの表面から不定芽
あるいは球根が分化し、移植継代せずに同一の培地で培
養を継続すると、茎１葉および根の発生および生育が抑
制されて効率良（球根を肥大させることができる。この
とき、カルスを形成し易い球根植物であれば、カルスの
形成が抑制。

され、球根の分化および肥大が促進される。培地に添加
するアブサイジン酸の量は、０．１−１０■／ｌの範囲
が適している。なお、この工程を繰り返し実施すること
により、組織培養による球根増殖を安定かつ急速に行う
ことができる。

（Ｃ）土壌移植過程における１占着ｆＪ＋！進上記（ロ
）でれシられた球根から固体培地あるいは液体培地を流
水で完全に洗い流した後、土壌に移植する。土壌として
圃場の土壌は勿論のこと、砂、バーミキニライト、ピー
トモス、＊沼土１ｗ４葉土、水苔埴土。単独あるいは適
宜混合して利用できる。移植した球根は、上記（Ｂ）の
方法により培養したことによって乾爆抵抗性ガ高まって
おり、ミスト処理、ビニール膜による被覆あるいは遮光
処理等の処理を行わなくても容易に土壌に活着させる二
とができる。

尚本発明が適用できる球根植物としては下記ものが例示
される。

単子葉植物網（Ｍｏｎｏｃｏｔ７１ｅｄｏｎｅａｅ）サ
トイモ目（＾ｒａｌａｓ） サトイモ科（＾ｒｉｃａａｅ） サトイモ（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ　ｅｓｃｕｌａｎｔａ）
カラジウム（Ｃａｌａｄｉｕｓ　ｂ＋ｃｏｌｏｒ）ユリ
目（Ｌｉｌｉｆｌｏｒａｅ） ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ） タマネギ（＾１ｌｉｕａ　ｃｅｐａ） ヤマユリ（Ｌｉｌｉｕａ　ａｕｒａｔｕｓ＋）オニユリ
（Ｌｉｌｉｕｓ　Ｉａｎｃｉｆｏｌｉｕｓ＋）カッコユ
リ（Ｌｉｌｉｕｓ　５ｐｅｃｉｏｓｕｓ）テラポウユリ
（Ｌｉｌｉｕｍ　ｌｏｎｇｉｆｌｏｒｕｉ）スカシユリ
（Ｌｉｌｉｕａ　ａｌａｇａｎｓ）チェーリップ（Ｔｕ
ｌｉｐａ　Ｂｅ５ｎａｒｉａｎａ）ヘメロカリス（Ｈｅ
ｍｅｒｏｃａｌｌｉｓ　ｓｐ、）ヒヤシンＸ（Ｈｉａｃ
ｉｎＬｈｕｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ヒガンバナ科（
＾１ａｒｙｌｌｉｄａｃｅａｅ）アルストロメリア（＾
１ｓｔｔｏｅａ＋ａｒｉａ　ｓｐ、　）アマリリス（ｔ
ｌｉｐｐｅａｓＬｒｕｉ　ｓｐ、）スイセン（Ｎａｒｃ
ｉｓｓｕｓ　ｓｐ、）ネリネ（Ｎｅｒｉｎｅ　ｓｐ、） アヤメ科（Ｉｒｉｄａｃａａａ） クロッカス（Ｃｒｏｃｕｓ　ｓｐ、） フリージア（Ｆｒｅｅｓｉａ　ｓｐ、）グラジオ５　Ｘ
　（Ｇｌａｄｉｏｌｕｓ　ｓｐ、　）ダッチアイリス（
Ｉｒｉｓ　ｇｅｒ＋５ａｎｉｃａ）次に実施例について
説明する。

実施例１ テラポウユリの球根を１０％次亜塩素酸ソーダ（を効塩
素ｆｉｔ１％）および７０％エチルアルコールで表面殺
菌後、５ＩＩＩＩｌ−１５ＩＩＩＩＩ四方に切り、下記
第１表の組成を有する固体寒天培地１０ｍｌを含む直径
２．５（Ｊ深さｌ　２．５　ｃｓの試験管に試験管１本
当り１個置床させ、２５℃、２５００ルクスの照明下で
４５日間培養する。

第　　　１　　　表 ｉ１４酸アンモニウム　　　　　　１．６５０報硝酸カ
リウム　　　　　　　　１．９０Ｑｑ塩化カルシウム・
２水塩　　　　４４０■硫酸マグネシウム・７水塩　　
　３７０■リン酸第−カリウム　　　　　　　１７０報
Ｎａ＊　ＥＤＴＡ　・２水塩　　　　　３７．３　ｍｇ
硫酸第一鉄・７水塩　　　　　　　２７．８■ホウ酸　
　　　　　　　　　　　　６．２　＠ｇ硫酸マンガン・
４水塩　　　　　　２２．３　ｑ硫酸亜鉛・７水塩　　
　　　　　　　１．０３　ｍｇショウカリウム　　　　
　　　　　　　０．８３ｍｇモリブデン酸ソーダ・２水
塩　　　　０．２５　ｍｇ硫酸第一銅　　　　　　　　
　　　　０．０２５　ｍｇ塩化コバルト　　　　　　　
　　　　０．０２５■ビタミンＢ＋　　　　　　　　　
　　　　０．４（１＋ｇイノシトール　　　　　　　　
１００ｍｇ塩酸ピリドキシン　　　　　　　　　０．５
０■ニコチン酸　　　　　　　　　　　０．５０■グリ
シン　　　　　　　　　　　　　２．００−ｇシコーク
ロース　　　　　　　　　　３０．０　ｇ寒天　　　　
　　　　　　　　　　　８．０ｇナフタレン酢酸　　　
　　　　　　　０．１錫ｇ上記成分を脱イオン水に溶か
してＩＲとし、ｐＨ６，２に調整し、殺菌する。

この培養によって球根が分化し、１切片につき１−５個
の球根が分化した塊が帰られる。このようにして得られ
た球根を滅菌したメスとピンセットでリン片を分割し、
アブサイジン酸を含存し、シコークロース濃度を９０ｇ
／ｌに変更した上記第１表の寒天培地１００＋１を含有
する３５０１容のガラス容器に移植する。これを２５℃
、　２５００ルクス連続照明下６０日間培養すると、ア
ブサイジン酸を０＝３−１＋＋＋ｇ／ｊの濃度で添加し
た培地で培養した球根は、アブサイジン酸を添加しなか
った培地で培養した球根と比べ、葉、根およびカルスの
形成が抑制され、球根の肥大が著しく促進された（１１
図−第４図）。また、球根の乾燥抵抗性を調べた結果、
アブサイジン酸を添加した培地で形成された球根は、ア
ブサイジン酸を添加しない培地で形成された球根と比較
し、著しく蒸散が抑制されることが明らかになった（箪
５図）。以上のようにして帰られたテラポウユリの球根
を、ガラス容器から取り出し、流水によって固体寒天培
地を洗い流す。このようにして辱た球根を、黒土とバー
ミキュライトをそれぞれ５０％の容量で混合した土壌に
移植してガラス温室内で栽培した。

移植した時期は６月末であったため、ガラス温室内は日
照が強く、室温も著しく高まった。このような瓜境で栽
培した結果、アブサイジン酸を添加しなかった培地で培
養して辱た球根の生存率は３０個体中２個体（６，７パ
ーセント）であったのに対し、アブサイジン酸をＩｇｑ
＋／ｊｍ加した培地で培養して得た球根の生存率は３０
個体中１３個体（４３，３パー噌ント）であり、アブサ
イジン駿添加によって生存率が著しく高められた。

実施例２ アマリリスの球根をｌθ％次亜塩素酸ン−ダ（有効塩素
量１％）右よび７０％エチルアルコールで表面膜！１後
、球根の底盤部を付けてリン片を１−２ｃｍ大きさに分
割し、上記第１表の＠成を有する個体寒天培地Ｉ　Ｑｓ
ｌを含む直［ｉ２．５ｃｍ、深さ１２、５　ｃｍの試験
管に試験管１本当り１個置床させ、２５℃、　２５００
ルクスの照明下で６０日間培養する。

この培養によって球根が分化し、１切片につき１−５個
の球根が分化した塊が得られる。このようにして得られ
た塊を無菌的に取り出し、各球根の最下部に滅菌したメ
スを用いて縦方向に多数の刻みをいれた後、Ｍ１表の組
成にさらにアブサイジン酸を０．３■７１の濃度で添加
した寒天培地に移植し、２５℃、２５００ルクス連続照
明下１５０ＬｌｌＩＩｊ培養した。その結果、１培養当
り２−１Ｏ個の球根が形成され、しかも、葉および根の
形成が抑制された結果、球根の肥大が退部されて葉と根
を除去した１球根当り平均重量は１．１ｇに達し、アブ
サイジン酸を添加しない培地で培養した球根の葉と根を
除去した平均重量０．７ｇと比較し効率の良い球根形成
を達成できた。詔なしく、各球根の最下部に縦方向に多
数の刻みを入れた球根を、第１表の組成にアブサイジン
酸０．３■／１を添加した寒天培地から寒天を除去した
液体培地に移植して培養した結果、形成された球根は寒
天培地を用いた培養と同様に菓右よび根の形成が抑制さ
れたばかりでなく、寒天培養に比べ球根の肥大が著しく
促進された結果、葉と根を除去した球根の平均重量は　
２．１　ｇに達し、アブサイジン酸を添加しない培地で
培養した球根の平均重量１．６　ｇと比較しても顕著な
生育促進となった。

実施例３ 休眠中のグラジオラス球根の茎頂部を実体顕微鏡の視野
の下で０−２−０．３ｓ＋ａの大きさに切出し、第１表
の組成を有する培地からナフタレン酢酸と寒天を除去し
た液体培地１０１１を含む直径２．５　ａｍ。

深さ１２．５１の試験管に試験管１本当り１（１！Ｉ床
し、２５℃、２５００ルクスの照明下で１００日間培養
すると、通常１個の球根が１１）られる。このようにし
て得られた球根を１ＩＩＩ的に取り出し、滅菌したメス
を用いて縦方向に４−１０個に分割した後、上記第１表
の組成ををする培地からナフタレン酢酸を除去し、サイ
トカイニン類の一種であるＮ−（２−クロロ−４−ピリ
ジル）Ｎ−フェニルウレアを３ｔｔ、／１の濃度で添加
した寒天培ｆｔｈｔ（１１を含む直径２．５　ａｓ　、
深さ１２．５　ＣＩの試験管に試験管１本当り１個置床
し、２５℃、２５００ルクスの照明下で６０日間培養す
ると、５−７０個の不定芽が分化した塊が得られる。こ
の塊を上記第１表の組成を有する培地から寒天を除去し
、新たにアブサイジン酸を０．２ｕ／１の濃度で含有し
た液体培地　１００１１＋を含有する３００１容のエル
レンマイヤーフラスコに移植する。これを２５℃。

７００ルクス連続照明下毎分ｉｓｏ＠転の速度で１００
日間回転培養すると、葉、根右よびカルスの形成が抑制
され、球根の肥大が誘起された結果、培養当り平均２６
１Ｉ！の球根を形成させることができた。これに対し、
アブサイジン酸を含有しない液体培地で同様に回転培養
した場合、一部には球根形成するものも見られたものの
、不定芽の多くは葉として伸長するものが多く、培養当
り平均１２個の球根形成を見たにすぎなかった。

発明の効果 本発明によれば、球根類のカルスの形成が抑制され、不
定芽あるいは小球根の分化および肥大を促進することが
できる。また球根類の葉の伸長生長が抑制され球根の肥
大を促進することができる。

さらに本発明によれば、形成された球根の乾燥抵抗性を
増加し、土壌への移植を容易にすることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、組織培養によるテラポウユリの球根分化に対
するアブサイジン酸の効果を示す。 第２図は、組織培養によって分化したテラポウユリ球根
の葉の形成に対するアブサイジン酸の効果を示す。 第３図は、組織培養によって分化したテラポウユリ球根
の肥大に対するアブサイジン酸の効果を示す。 第４図は、組織培養によるテラポウユリの培養における
カルスの形成に対するアブサイジン酸の効果を示す。 第５図は、組織培養によって形成したテラポウユリ球根
の乾燥抵抗性に対するアブサイジン酸の効果を示す。測
定条件は、温度４０℃、ａ度２０％、風速１ｍ／秒とし
た。 笑　１　口 ７ブサイワ＞＠　　　　　ｍ　ｓ　／１第　　２　図 ７ブプイジン＊　　　　ｒｎｅ／ｘ 」　３　口 ７ブブイジンａ　　　　ｍｇ／Ｊｌ アブブイジンｅＬ　　　　司８／ＪＬ 叢　５　図 ８奇問 手続補正書（方式） 昭和５９年１２月Ｉ＋＋日 ｌ、事件の表示 昭和５９年特許ＩＩＩ第１７５６３９号２、発明の名称 植物組織培養による球根類の増殖法 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住　所　　東京都千代田区大手町−丁目６番１号昭和５
９年１１月７日（発送日：５９年１１月２１日）５、補
正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、補正の内容 （１）明細書第２頁第１１〜２０行目の「（［１，ｖ、
　Ｃｏｎｇｅｔ＾ｇｒｉｃｕｌＬｕｒａｌ　Ｐｌａｎｔ
ｓ　ｖｉａ　Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
）。 シーアールジー・プレス（ＣＲＣＰｒｅｓｓ）、　１９
８１年を参照〕、一部は工業的生産の手段として実用化
している〔フォー・ビー・ジＢ−ンズ（Ｊ、Ｂ。 Ｊｏｎｅｓ）　著、　　コマーシャル・ユース・オブ・
ティッシュ・カルチエアー・フォー・ザ・プロダクショ
ン・オブ・ディシーズ・フリー・プラノン（ＣｏＩｌｌ
ｍｅｒｃｉａｌ　ｕｓａ　ｏｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌ
ｔｕｒｅ　Ｆｏｒ　ｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
　ｄｉｓｅａｓａ−ｆｒａｅ　ｐｌａｎｔｓ）　、　　
ダブリュ・アール・シャープ（！１．Ｒ，５ｈａｒｐ）
、　　ビー・オー・ラルセン（Ｐ、口、　Ｌａｒｓｅｎ
）、イー・エフ・バトック（［！、Ｆ、　Ｐａｄｄｏｃ
ｋ）およびブイ・ランガン（１／、　Ｒａｎｇａｎ）　
ＨｒＭ、　　プラント・セル・アンド・ティシュ・カル
チ＋　−（Ｐｌａｎｔ　Ｃａ１ｌ　ａｎｄ　Ｔｉ５ｓｕ
ｅＣｕｌｔｕｒｅ）　：　プリンシプルス・アンド・ア
プリケーションズ（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ＾ｐ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）。 オハイオ・ステート・ユニバーシティ・プレス（Ｏｈｉ
ｏ　５ｔａｔｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ）
、　　１９７９年〕。」（２）明細書第３頁第１０−１
５行目の「（Ｊ、にｏｃｈｂａ。 ・　１９７ｇ）。」を次のとおり訂正する。 「〔シェイ・コチバ（Ｊ、にｏｃｈｂ耐、　　ビー・ス
ペゲルーロイ（Ｐ、　Ｓｐａｇｅｌ−Ｒａｙ）、　　エ
イチーニューマン（）１．　　Ｎｅｕａ＋ａｎｎ　）、
　ニス・サアアド（Ｓ、　５ａａｄ）　　著。 ステイミコレイシ薦ン・オブ・エンブリオゲネシス・イ
ン・シトラス争オブラー・カルス・パイ・ニービーニー
、エテフｔン、シーシーシーψアンド・アラ−・アンド
・イッツ・サブレッシーン・パイ・ジー・エイ・スリー
（Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆ　　８ｍｂｒｙｏｇｅｎ
ａｓｉｓ　　ｉｎ　　Ｃ１ｔｒｕｓ　　ロｖｕｌａｒ　
　Ｃａ１ｌｕ＋ｂｙ　ＡＢ＾、　［１ｔｈｅｐｈｏｎ、
　ＣＣＣａｎｄ　Ａｌａｒ　ａｎｄ　１ｔｓＳｕｐｐｒ
ａｓｓｉｏｎ　ｂｙ　Ｇ＾３）、ツァイトシュリフト・
フェア・プランツェンフィジオロジー（Ｚｅｉｔｓｃｈ
ｒｉｆｔｆｕｒ　Ｐｆｌａｎｚｅｎｐｈｙｓｉｏｌｏｇ
ｉａ）　８９　　：４２１　４３２゜１９７８）　、　
Ｊ（３）　　明細書第４頁第１２〜１６行目の「（Ｙ。 Ｎ１５ｈｉｕｃｈｉ　ｔ　　　１９８０）　Ｊを次のと
おり訂正する。 「〔ブイ・ニシウチ（Ｙ、　Ｎ１５ｈｉｕｃｈｉ）著、
スタディーズ・オン・ペジタテイプ・プロパゲーション
・オブ・チュリップス（Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　Ｖｅｇ
ｅｔａｔｉｖａＰｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｕｌ
ｉｐｓ　）、　ＩＶ　　レジェネレーシフン・オブ・バ
ルブレッツ・イン・パルプ・スケール・セグメンツ・カ
ルチヤード・イン・ビトａ（Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
　ｏｆ　Ｂｕｌｂｌｅｔｓ　ｉｎ　Ｂｕｌｂ　Ｓｃａｌ
ｅＳｅｇｍｅｒ＋Ｌｓ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉ
ｔｒｏ、）、　　ジエイｅジャパニーズ・ソサイエティ
・フォー・ホーティカルチュラルφサイエンス（Ｊ、　
Ｊａｐａｎ、　　Ｓａｃ、　Ｈｏｒｔ。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）植物組織培養による球根類の増殖法において、ア
   ブサイジン酸含有培地を用いることを特徴とする方法。
2. （２）該球根類の増殖法が、殺菌した球根植物の種子、
   葉、茎、球根、根、花器あるいはそれらの切片、または
   培養の結果得られた無菌の葉、茎、球根、根あるいはそ
   れらの切片を無菌的に切断し、または多数の切れ込みを
   入れたのち、アブサイジン酸を含有する固体培地または
   液体培地に移植し、静置培養、振とう培養、または通気
   攪拌培養することによって、それらの表面または切口か
   ら不定芽または小球根を分化させる方法であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の球根類の増殖法。
3. （３）該球根類の増殖法が、アブサイジン酸を添加しな
   い培地で切片を培養することにより不定芽あるいは小球
   根を分化させ、ついでアブサイジン酸を添加した培地に
   継代移植して培養する方法であることを特徴とする特許
   請求の範囲第１項記載の球根類の増殖法。