CN103314864A - 一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法 - Google Patents
一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103314864A CN103314864A CN2013102974827A CN201310297482A CN103314864A CN 103314864 A CN103314864 A CN 103314864A CN 2013102974827 A CN2013102974827 A CN 2013102974827A CN 201310297482 A CN201310297482 A CN 201310297482A CN 103314864 A CN103314864 A CN 103314864A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tulip
- seedling
- dedifferentiation
- medium
- sterilization
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000722921 Tulipa gesneriana Species 0.000 title claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 claims abstract description 34
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 25
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 22
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 claims abstract description 11
- 239000002363 auxin Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 29
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 claims description 28
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 18
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 claims description 7
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 239000005972 6-Benzyladenine Substances 0.000 claims description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 6
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims description 6
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 claims description 6
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 claims description 6
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 claims description 5
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 5
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 claims description 5
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 5
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 5
- YGGXZTQSGNFKPJ-UHFFFAOYSA-N methyl 2-naphthalen-1-ylacetate Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)OC)=CC=CC2=C1 YGGXZTQSGNFKPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims description 4
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 4
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 4
- GWEHVDNNLFDJLR-UHFFFAOYSA-N 1,3-diphenylurea Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)NC1=CC=CC=C1 GWEHVDNNLFDJLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XFNJVKMNNVCYEK-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetamide Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)N)=CC=CC2=C1 XFNJVKMNNVCYEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XXFACTAYGKKOQB-SSDOTTSWSA-N Dihydrozeatin Natural products OC[C@H](C)CCNC1=NC=NC2=C1NC=N2 XXFACTAYGKKOQB-SSDOTTSWSA-N 0.000 claims description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001354 calcination Methods 0.000 claims description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- XXFACTAYGKKOQB-ZETCQYMHSA-N dihydrozeatin Chemical compound OC[C@@H](C)CCNC1=NC=NC2=C1NC=N2 XXFACTAYGKKOQB-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 claims description 3
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 3
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 claims description 3
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- 238000010792 warming Methods 0.000 claims description 3
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RZCJYMOBWVJQGV-UHFFFAOYSA-N 2-naphthyloxyacetic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(OCC(=O)O)=CC=C21 RZCJYMOBWVJQGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GOSWTRUMMSCNCW-HNNGNKQASA-N 9-ribosyl-trans-zeatin Chemical compound C1=NC=2C(NC\C=C(CO)/C)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O GOSWTRUMMSCNCW-HNNGNKQASA-N 0.000 claims description 2
- POYYWDOFTRSMIX-UHFFFAOYSA-N FCC(=O)O.IC1=CC=CC=C1 Chemical compound FCC(=O)O.IC1=CC=CC=C1 POYYWDOFTRSMIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- -1 isopentenyl Chemical group 0.000 claims description 2
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical compound CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N trans-Zeatin Natural products OCC(/C)=C\CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N 0.000 claims description 2
- UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N trans-zeatin Chemical group OCC(/C)=C/CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N 0.000 claims description 2
- 229940023877 zeatin Drugs 0.000 claims description 2
- 229940064880 inositol 100 mg Drugs 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 abstract description 2
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-trichlorophenol Chemical compound OC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVDUVICZOKYOME-UHFFFAOYSA-N C(C)(=O)OCCCC.[O].ClC1=CC=CC(=C1)Cl Chemical group C(C)(=O)OCCCC.[O].ClC1=CC=CC(=C1)Cl AVDUVICZOKYOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- UQMRAFJOBWOFNS-UHFFFAOYSA-N butyl 2-(2,4-dichlorophenoxy)acetate Chemical compound CCCCOC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl UQMRAFJOBWOFNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，包括种球预处理和消毒灭菌、鳞片接种、脱分化培养、再分化形成脱毒幼苗以及幼苗的驯化及移栽，其中，所述种球预处理和消毒包括将选用的种球置于4℃下低温保存30天；所述脱分化过程采用蓝光照射；所述脱分化培养中所用的培养基，其中生长素类物质和细胞分裂素类物质浓度比为1:1；所述再分化过程中，愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T1-2ml。本发明解决了郁金香在培育过程中易受病毒、害虫等侵扰，导致其品质不断退化，甚至死亡等问题，同时培育周期大大缩短。
Description
技术领域
本发明涉及一种郁金香组织培养的方法，具体涉及一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法。
背景介绍
郁金香原产地中海南北沿岸及中亚细亚和伊朗、土耳其、东至中国的东北地区等地，其为百合科郁金香球根花卉。目前全世界约有2000多种郁金香品种，被大量生产的大约只有150种左右。由于郁金香的花色优美、高雅脱俗、清新隽永，令人百看而不厌，深受人们的厚爱，被视为园林观赏花卉的首选。传统苗圃工艺常采用分球繁殖法进行繁殖，但通过此种方法获得郁金香幼苗周期较长，同时由于郁金香球茎在生长过程中易被病毒、害虫侵食，培育得到的郁金香幼苗大多受到病毒、病害等因素的干扰，导致其品质不断退化，甚至死亡等现象，如何培育出品质不会退化、不受病毒侵害的郁金香育苗变得尤为重要，目前人们利用组织培养技术虽然能够获得郁金香脱毒幼苗，但周期相对较长，并且实验成功率较低。因此需要寻求一种高效高郁金香脱毒幼苗的培育方法。
发明内容
针对上述现有技术存在的问题，本发明的提供了一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，可很好的免受病毒、病害因素的干扰，且培养周期短，成功率高。
为解决上述现有技术存在的问题，本发明采取的技术方案为：一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，包括种球预处理和消毒灭菌、鳞片接种、脱分化培养、再分化形成脱毒幼苗以及幼苗的驯化及移栽，其中，所述种球预处理和消毒包括将选用的种球置于4℃下低温保存30天；所述脱分化过程采用蓝光照射；所述脱分化培养中所用的培养基，其中生长素类物质和细胞分裂素类物质浓度比为1:1；所述再分化过程中，愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T 1-2ml。
所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，具体步骤如下：
1）种球预处理和消毒灭菌
选用外表无损伤的种球，用保鲜膜包裹郁金香种球，置于4℃中预冷处理30天，将经过低温保存的种球自然升温至室温，剥去种球外层表皮，用无菌解剖刀切去黄化老死的部分，然后用洗洁精洗净表面污物，自来水冲洗20分钟，充分洗净残留的洗洁精，然后首先经过重量比为0.1%的升汞中消毒10分钟，再浸泡在体积比为75%的酒精中灭菌13秒，取出后用无菌水反复冲洗3次，每次4分钟；
2）鳞片接种
用无菌解剖刀切除种球尖端开口部分，再纵切种球，取内层鳞片为材料，用灼烧灭菌后的刀片将鳞片切割成按大小均为1mm2的小块，按凸面向上进行接种，将小碎片移入到灭菌后的培养基中；
3）脱分化培养
将接有小鳞片的培养基繁殖在人工气候箱中进行脱分化培养，具体培养条件：温度设定为27℃，相对湿度设定为80%，采用蓝光进行照射，光照强度设置为300lux，光照12h/d，处理8-12天后，形成愈伤组织；
4）再分化形成脱毒幼苗
将步骤3）脱分化培育出的愈伤组织转移到再分化培养基中培养，再分化培养在人工气候箱中进行，具体培养条件：温度设定为25℃，相对湿度设定为80%，光照强度设置为1700lux，光照12h/d；在再分化培养基中培养2周后，待愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T 1-2ml，继续在相同的条件下继续培养直至形成胚状体、幼苗。
5）幼苗的驯化及移栽
待郁金香幼苗形成后，将幼苗移栽在灭菌处理后的营养土中，从生态气候箱中移到无菌光照培养架上，再逐渐移到实验外环境中，待其能正常生长后，移栽到土壤中正常培养。
进一步地，所述的脱分化培养所用的培养基为MT培养基，其配方及配制方法为： NH4NO3 为780 mg/L，KNO3为1000 mg/L，CaCl2·2H2O为350 mg/L，MgSO4·7H2O为370 mg/L，KH2PO4为175 mg/L，KI为0.83 mg/L，H3BO3为6.2 mg/L，MnSO4·4H2O为22.3 mg/L，ZnSO4·7H2O为8.6 mg/L，Na2MnO4·2H2O为0.25 mg/L，CuSO4·5H2O为0.023 mg/L，CoCl2·6H2O为0.023 mg/L，FeSO4·7H2O为28.1 mg/L，Na2-EDTA·2H2O为37.3 mg/L，肌醇200 mg/L，烟酸0.5 mg/L，盐酸吡哆醇0.3 mg/L，盐酸硫胺素0.1 mg/L，维生素B6为0.5 mg/L，维生素B1为0.1 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L，生长素类物质1.0-2.5mg/L，细胞分裂素类物质1.0-2.5mg/L，蔗糖25g/L，琼脂条10g/L，pH为6.6。
进一步地，所述生长素类物质为吲哚乙酸、吲哚丙酸、吲哚丁酸，萘乙酸、萘乙酸钠、萘氧乙酸、萘乙酰胺、2,4-D、2,4,5-T、4-碘苯氧乙酸或2,4-D丁酯中的至少三种以上的组合。其中，所述的2,4-D即2,4-二氯苯氧乙酸，所述的2,4,5-T即2,4,5三氯苯酚代乙酸，2,4-D丁酯为2，4-二氯苯氧乙酸丁酯。
进一步地，MT培养基中所述生长素类物质为萘乙酸0.5mg/L，6-苄氨基嘌呤0.5mg/L和2,4-D 1.0mg/L的混合。
进一步地，所述细胞分裂素类物质为玉米素、还有玉米素核苷、二氢玉米素、异戊烯基腺嘌呤、激动素、6-苄基腺嘌呤、四氢吡喃苄基腺嘌呤、二苯脲或KT-30中的至少三种以上的组合。其中KT-30的化学名为1-(2-氯-4-吡啶基)-3’-苯基脲。
进一步地，MT培养基中所述细胞分裂素类物质为：四氢吡喃苄基腺嘌呤0.7mg/L，6-苄基腺嘌0.7mg/L和KT-30为0.6mg/L的混合物。
进一步地，所述的再分化过程所用的培养基配方为(mg/L)：NH4NO3 1700，KNO3 1900，CaCl2·2H2O 440，MgSO4·7H2O 400，KH2PO4 170，KI 0.83，H3BO3 6.2，MnSO4·4H2O 22.3，ZnSO4·7H2O 8.6，Na2MnO4·2H2O 0.25，CuSO4·5H2O 0.025，CoCl2·6H2O 0.025，FeSO4·7H2O 27.8，Na2-EDTA·2H2O 37.3，肌醇100，烟酸0.5，维生素B6 0.5，维生素B1 0.1，甘氨酸2.0，吲哚丁酸0.25，2,4,5-T 为0.2mg/L，6-苄基腺嘌呤0.7mg/L，蔗糖10g/L，丙酸1ml，琼脂条10g/L，pH为6.6。
本发明所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，与现有技术相比其有益效果为：
1、通过选用外表无损伤的种球，用保鲜膜包裹郁金香种球，用无菌解剖刀切去黄化老死的部分，然后用洗洁精洗净表面污物，以及利用0.1%升汞和70%-75%酒精联合使用对种球进行灭菌消毒处理，能够有效减少脱分化培养过程中受微生物污染的几率，提高实验成功率；
2、种球经过低温处理，并且脱分化是采用蓝光照射，大大缩短了愈伤组织形成时间，并提高了愈伤组织成功率；
3、设计了一种郁金香诱导脱分化培养基，通过改变生长素种类以及细胞分裂素的种类组合和浓度配比，将脱分化培养基中的生长素类物质和细胞分裂素类物质比例调为1:1，可以有效避免愈伤组织褐化、生根等现象，有效地提高了愈伤组织形成的成功率；
4、在诱导愈伤组织再分化形成脱毒郁金香小苗时，先控制再分化培养基中吲哚丁酸或2,4,5-T 0.25-0.5mg/L，6-苄基腺嘌呤0.5-1.0mg/L，到培养2周后，待愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T 1-2ml，有大大提高愈伤组织再分化形成脱毒小苗的成功率，平均成功率能达到90%；
5、通过改变诱导培养郁金香种球和愈伤组织再分化形成脱毒小苗的培养条件，能够有效获得愈伤组织和脱毒小苗，能够明显缩短郁金香组织培养培育周期，同时获得性状优良、无病毒害侵扰的郁金香幼苗。
具体实施方式
以下结合具体实施方式，对本发明进行详细说明。
实施例1
一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，具体步骤如下：
1）种球预处理和消毒灭菌
选用外表无损伤的种球，用保鲜膜包裹郁金香种球，置于4℃中预冷处理30天，将经过低温保存的种球自然升温至室温，剥去种球外层表皮，用无菌解剖刀切去黄化老死的部分，然后用洗洁精洗净表面污物，自来水冲洗20分钟，充分洗净残留的洗洁精，然后首先经过重量比为0.1%的升汞中消毒10分钟，再浸泡在体积比为75%的酒精中灭菌13秒，取出后用无菌水反复冲洗3次，每次4分钟；
2）鳞片接种
用无菌解剖刀切除种球尖端开口部分，再纵切种球，取内层鳞片为材料，用灼烧灭菌后的刀片将鳞片切割成按大小均为1mm2的小块，按凸面向上进行接种，将小碎片移入到灭菌后的培养基中；
3）脱分化培养
将接有小鳞片的培养基繁殖在人工气候箱中进行脱分化培养，具体培养条件：温度设定为27℃，相对湿度设定为80%，采用蓝光进行照射，光照强度设置为300lux，光照12h/d，处理8-12天后，形成愈伤组织；
4）再分化形成脱毒幼苗
将步骤3）脱分化培育出的愈伤组织转移到再分化培养基中培养，再分化培养在人工气候箱中进行，具体培养条件：温度设定为25℃，相对湿度设定为80%，光照强度设置为1700lux，光照12h/d；在再分化培养基中培养2周后，待愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T 1-2ml，继续在相同的条件下继续培养直至形成胚状体、幼苗。
5）幼苗的驯化及移栽
待郁金香幼苗形成后，将幼苗移栽在灭菌处理后的营养土中，从生态气候箱中移到无菌光照培养架上，再逐渐移到实验外环境中，待其能正常生长后，移栽到土壤中正常培养。
其中：所述的脱分化培养所用的培养基为MT培养基，其配方及配制方法为(mg/L)：NH4NO3 为780，KNO3为1000，CaCl2·2H2O为350，MgSO4·7H2O为370，KH2PO4为175，KI为0.83，H3BO3为6.2，MnSO4·4H2O为22.3，ZnSO4·7H2O为8.6，Na2MnO4·2H2O为0.25，CuSO4·5H2O为0.023，CoCl2·6H2O为0.023，FeSO4·7H2O为28.1，Na2-EDTA·2H2O为37.3，肌醇200，烟酸0.5，盐酸吡哆醇0.3，盐酸硫胺素0.1，维生素B6为0.5，维生素B1为0.1，甘氨酸2.0，萘乙酸0.5mg/L，6-苄氨基嘌呤0.5mg/L，2,4-D 1.0mg/L，四氢吡喃苄基腺嘌呤0.7mg/L，6-苄基腺嘌0.7mg/L，KT-30为0.6mg/L，蔗糖25g/L，琼脂条10g/L，pH6.6；
所述的再分化过程所用的培养基配方为(mg/L)：NH4NO3 1700，KNO3 1900，CaCl2·2H2O 440，MgSO4·7H2O 400，KH2PO4 170，KI 0.83，H3BO3 6.2，MnSO4·4H2O 22.3，ZnSO4·7H2O 8.6，Na2MnO4·2H2O 0.25，CuSO4·5H2O 0.025，CoCl2·6H2O 0.025，FeSO4·7H2O 27.8，Na2-EDTA·2H2O 37.3，肌醇100，烟酸0.5，维生素B6 0.5，维生素B1 0.1，甘氨酸2.0，吲哚丁酸0.25，2,4,5-T 为0.2mg/L，6-苄基腺嘌呤0.7mg/L，蔗糖10g/L，丙酸1ml，琼脂条10g/L，pH6.6。
实施例2
实施例2与实施例1的不同在于：所述的MT培养基中所述生长素类物质为萘乙酰胺0.4mg/L，吲哚丁酸0.6mg/L和2,4-D 1.0mg/L的混合。
实施例3
实施例3与实施例1的不同在于：所述的MT培养基中所述细胞分裂素类物质为：二氢玉米素0.6mg/L，激动素0.7mg/L和二苯脲0.7mg/L的混合物。
采用实施例1-3所述的由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，最终对愈伤组织形成的情况统计如表1所示。
表1愈伤组织形成情况统计
通过上表可得，通过本发明所述的由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，大大缩短了培养时间，且能够有效地提高了愈伤组织形成和幼苗移栽的成功率，幼苗移植存活率在95%以上。
Claims (8)
1.一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，包括种球预处理和消毒灭菌、鳞片接种、脱分化培养、再分化形成脱毒幼苗以及幼苗的驯化及移栽，其中，所述种球预处理和消毒包括将选用的种球置于4℃下低温保存30天；所述脱分化过程采用蓝光照射；所述脱分化培养中所用的培养基，其中生长素类物质和细胞分裂素类物质浓度比为1:1；所述再分化过程中，愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T 1-2ml。
2.根据权利要求1所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)种球预处理和消毒灭菌
选用外表无损伤的种球，用保鲜膜包裹郁金香种球，置于4℃中预冷处理30天，将经过低温保存的种球自然升温至室温，剥去种球外层表皮，用无菌解剖刀切去黄化老死的部分，然后用洗洁精洗净表面污物，自来水冲洗20分钟，充分洗净残留的洗洁精，然后首先经过重量比为0.1%的升汞中消毒10分钟，再浸泡在体积比为75%的酒精中灭菌13秒，取出后用无菌水反复冲洗3次，每次4分钟；
2)鳞片接种
用无菌解剖刀切除种球尖端开口部分，再纵切种球，取内层鳞片为材料，用灼烧灭菌后的刀片将鳞片切割成按大小均为1mm2的小块，按凸面向上进行接种，将小碎片移入到灭菌后的培养基中；
3)脱分化培养
将接有小鳞片的培养基繁殖在人工气候箱中进行脱分化培养，具体培养条件：温度设定为27℃，相对湿度设定为80%，采用蓝光进行照射，光照强度设置为300lux，光照12h/d，处理8-12天后，形成愈伤组织；
4)再分化形成脱毒幼苗
将步骤3）脱分化培育出的愈伤组织转移到再分化培养基中培养，再分化培养在人工气候箱中进行，具体培养条件：温度设定为25℃，相对湿度设定为80%，光照强度设置为1700lux，光照12h/d；在再分化培养基中培养2周后，待愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T 1-2ml，继续在相同的条件下继续培养直至形成胚状体、幼苗；
5)幼苗的驯化及移栽
待郁金香幼苗形成后，将幼苗移栽在灭菌处理后的营养土中，从生态气候箱中移到无菌光照培养架上，再逐渐移到实验外环境中，待其能正常生长之后，将其移栽到土壤中正常培养。
3.根据权利要求2所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，所述的脱分化培养所用的培养基为MT培养基，其配方及配制方法为： NH4NO3 为780 mg/L，KNO3为1000 mg/L，CaCl2·2H2O为350 mg/L，MgSO4·7H2O为370 mg/L，KH2PO4为175 mg/L，KI为0.83 mg/L，H3BO3为6.2 mg/L，MnSO4·4H2O为22.3 mg/L，ZnSO4·7H2O为8.6 mg/L，Na2MnO4·2H2O为0.25 mg/L，CuSO4·5H2O为0.023 mg/L，CoCl2·6H2O为0.023 mg/L，FeSO4·7H2O为28.1 mg/L，Na2-EDTA·2H2O为37.3 mg/L，肌醇200 mg/L，烟酸0.5 mg/L，盐酸吡哆醇0.3 mg/L，盐酸硫胺素0.1 mg/L，维生素B6为0.5 mg/L，维生素B1为0.1 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L，生长素类物质1.0-2.5mg/L，细胞分裂素类物质1.0-2.5mg/L，蔗糖25g/L，琼脂条10g/L，pH为6.6。
4.根据权利要求3所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，所述生长素类物质为吲哚乙酸、吲哚丙酸、吲哚丁酸，萘乙酸、萘乙酸钠、萘氧乙酸、萘乙酰胺、2,4-D、2,4,5-T、4-碘苯氧乙酸或2,4-D丁酯中的至少三种以上的组合。
5.根据权利要求4所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，MT培养基中所述生长素类物质为萘乙酸0.5mg/L，6-苄氨基嘌呤0.5mg/L和2,4-D 1.0mg/L的混合。
6.根据权利要求3所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，所述细胞分裂素类物质为玉米素、还有玉米素核苷、二氢玉米素、异戊烯基腺嘌呤、激动素、6-苄基腺嘌呤、四氢吡喃苄基腺嘌呤、二苯脲或KT-30中的至少三种以上的组合。
7.根据权利要求6所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，MT培养基中所述细胞分裂素类物质为：四氢吡喃苄基腺嘌呤0.7mg/L，6-苄基腺嘌0.7mg/L和KT-30为0.6mg/L的混合物。
8.根据权利要求1-7任一项所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，所述的再分化过程所用的培养基配方为：NH4NO3 为1700mg/L，KNO3为1900 mg/L，CaCl2·2H2O为440 mg/L，MgSO4·7H2O为400 mg/L，KH2PO4为170 mg/L，KI为0.83 mg/L，H3BO3为6.2 mg/L，MnSO4·4H2O为22.3 mg/L，ZnSO4·7H2O为8.6 mg/L，Na2MnO4·2H2O为0.25 mg/L，CuSO4·5H2O为0.025 mg/L，CoCl2·6H2O为0.025 mg/L，FeSO4·7H2O为27.8 mg/L，Na2-EDTA·2H2O为37.3 mg/L，肌醇100 mg/L，烟酸0.5 mg/L，维生素B6为0.5 mg/L，维生素B1为0.1 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L，吲哚丁酸0.25 mg/L，2,4,5-T 为0.2mg/L，6-苄基腺嘌呤0.7mg/L，蔗糖10g/L，丙酸1ml，琼脂条10g/L，pH为6.6。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310297482.7A CN103314864B (zh) | 2013-07-16 | 2013-07-16 | 一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310297482.7A CN103314864B (zh) | 2013-07-16 | 2013-07-16 | 一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103314864A true CN103314864A (zh) | 2013-09-25 |
| CN103314864B CN103314864B (zh) | 2015-05-06 |
Family
ID=49184154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310297482.7A Active CN103314864B (zh) | 2013-07-16 | 2013-07-16 | 一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103314864B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103947554A (zh) * | 2014-05-04 | 2014-07-30 | 重庆市城口县景之源苗木发展有限公司 | 百合通过体细胞胚胎发生途径脱毒的方法 |
| CN106105669A (zh) * | 2016-06-29 | 2016-11-16 | 无锡南理工科技发展有限公司 | 一种非洲菊移栽炼苗的基质及其应用 |
| CN107372123A (zh) * | 2017-09-13 | 2017-11-24 | 界首市家丰家庭农场 | 一种提高郁金香繁殖生长的方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6156022A (ja) * | 1984-08-23 | 1986-03-20 | 協和醗酵工業株式会社 | 植物組織培養による球根類の増殖法 |
| JPH04287623A (ja) * | 1991-03-15 | 1992-10-13 | Mitsui Petrochem Ind Ltd | 植物組織培養による球根類の増殖方法 |
| JPH0823806A (ja) * | 1994-07-19 | 1996-01-30 | Fuji Yakuhin Kogyo Kk | チューリップ属植物の増殖培養方法 |
| CN101554138A (zh) * | 2009-04-15 | 2009-10-14 | 云南省农业科学院花卉研究所 | 利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法 |
| CN102090332A (zh) * | 2010-11-10 | 2011-06-15 | 天津滨海国际花卉科技园区股份有限公司 | 郁金香的薄层培养方法 |
| CN102090249A (zh) * | 2010-11-10 | 2011-06-15 | 天津滨海国际花卉科技园区股份有限公司 | 郁金香鳞片扦插繁殖方法 |
| CN102754598A (zh) * | 2012-07-10 | 2012-10-31 | 中国长江三峡集团公司 | 百合试管小鳞茎诱导方法 |
-
2013
- 2013-07-16 CN CN201310297482.7A patent/CN103314864B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6156022A (ja) * | 1984-08-23 | 1986-03-20 | 協和醗酵工業株式会社 | 植物組織培養による球根類の増殖法 |
| JPH04287623A (ja) * | 1991-03-15 | 1992-10-13 | Mitsui Petrochem Ind Ltd | 植物組織培養による球根類の増殖方法 |
| JPH0823806A (ja) * | 1994-07-19 | 1996-01-30 | Fuji Yakuhin Kogyo Kk | チューリップ属植物の増殖培養方法 |
| CN101554138A (zh) * | 2009-04-15 | 2009-10-14 | 云南省农业科学院花卉研究所 | 利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法 |
| CN102090332A (zh) * | 2010-11-10 | 2011-06-15 | 天津滨海国际花卉科技园区股份有限公司 | 郁金香的薄层培养方法 |
| CN102090249A (zh) * | 2010-11-10 | 2011-06-15 | 天津滨海国际花卉科技园区股份有限公司 | 郁金香鳞片扦插繁殖方法 |
| CN102754598A (zh) * | 2012-07-10 | 2012-10-31 | 中国长江三峡集团公司 | 百合试管小鳞茎诱导方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| I. FAMELAER ET.AL.,: "The initiation of callus and regeneration from callus culture of Tulipa gesneriana", 《PLANT CELL,TISSUE AND ORGAN CULTURE》 * |
| 龚明霞等: "郁金香鳞片离体培养再生小鳞茎研究", 《广西农业科学》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103947554A (zh) * | 2014-05-04 | 2014-07-30 | 重庆市城口县景之源苗木发展有限公司 | 百合通过体细胞胚胎发生途径脱毒的方法 |
| CN106105669A (zh) * | 2016-06-29 | 2016-11-16 | 无锡南理工科技发展有限公司 | 一种非洲菊移栽炼苗的基质及其应用 |
| CN107372123A (zh) * | 2017-09-13 | 2017-11-24 | 界首市家丰家庭农场 | 一种提高郁金香繁殖生长的方法 |
| CN107372123B (zh) * | 2017-09-13 | 2019-06-11 | 界首市家丰家庭农场 | 一种提高郁金香繁殖生长的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103314864B (zh) | 2015-05-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105475130B (zh) | 一种红锥离体培养植株再生方法 | |
| CN102227976B (zh) | 山苍子无性快繁育苗方法 | |
| CN107047320B (zh) | 一种大花胡麻草组织培养方法 | |
| CN105165581B (zh) | 一种辣椒的水培方法 | |
| CN104885773B (zh) | 一种快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的方法 | |
| CN103314863B (zh) | 一种高效获得郁金香愈伤组织的方法 | |
| CN104041412B (zh) | 一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN109258460A (zh) | 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法 | |
| CN106212274A (zh) | 特丽海棠的组织培养方法 | |
| CN103385173A (zh) | 一种高效获得黄精灵百合纯合二倍体幼苗的方法 | |
| CN108293878A (zh) | 一种栝楼嫩叶的组培育苗方法 | |
| CN101502239B (zh) | 香石竹组培种苗快繁培养方法 | |
| CN106069543A (zh) | 一种猕猴桃脱毒组培苗移栽方法 | |
| CN106069755A (zh) | 一种茶树组培苗的壮苗生根培养方法 | |
| CN105941154A (zh) | 一种冬枣优质种苗综合繁育方法 | |
| CN103314864B (zh) | 一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法 | |
| CN105309312B (zh) | 一种中华石蝴蝶组织培养快速繁殖的方法 | |
| CN103385171B (zh) | 一种郁金香脱毒幼苗的培育方法 | |
| CN104488722B (zh) | 一种南美叉柱花的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN107087543B (zh) | 一种米兰花组培繁殖的种质保存方法 | |
| CN107018905B (zh) | 一种酒瓶兰试管苗种质保存方法 | |
| CN103548695B (zh) | 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 | |
| CN105230433A (zh) | 一种美国红枫的扦插繁殖方法 | |
| CN103563747A (zh) | 惠楼山药的脱毒快繁方法 | |
| CN105993963A (zh) | 一种苹果砧木组培繁殖技术 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Jia Dongling Inventor before: Li Feng |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170331 Address after: 221600 Peixian, Xuzhou, Pei Pei Town Village Patentee after: Xuzhou Jia Chang agricultural Polytron Technologies Inc Address before: 221600 Jiangsu province Xuzhou City estuary town of Peixian Li Ji Dong Ding Lou Patentee before: Li Feng |
|
| TR01 | Transfer of patent right |