JPH03223201A

JPH03223201A - 臓器保存液及び臓器保存法

Info

Publication number: JPH03223201A
Application number: JP33550390A
Authority: JP
Inventors: Yoshikazu Kuroda; 黒田　嘉和; Yoichi Saito; 洋一斎藤; Ryoichiro Murashima; 村島　良一郎; Koichi Yamauchi; 山内　紘一
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1989-12-13
Filing date: 1990-11-29
Publication date: 1991-10-02
Anticipated expiration: 2014-09-20
Also published as: JP2949843B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、パーフルオロカーボン化合物原液又はその高
濃度含有乳剤を有効成分とする臓器保存液及び臓器保存
法に関する。

〔従来技術〕

臓器（移植器官）の保存法には単純冷却保存法と低温潅
流保存法かある。単純冷却保存法は特別な保存装置等を
必要とせず、手技か簡便て安価てあり臓器の輸送も容易
である（文献ｌ）。

一般的に、臓器、特に膵臓の保存には単純冷却保存法の
方か低温潅流保存法よりも優れていると報告されている
（文献２）。

しかし、低温潅流保存法は保存中に臓器に連続的に酸素
を供給できるという利点がある。このため単純冷却保存
法と低温潅流保存法の両者の利点を組み合わせて酸素を
充分に供給てきる二相冷却保存法（エーロ・コリンズ液
／パーフルオロカーボン化合物）か確立された（文献３
．４）。

文献Ｉ　　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｃ、、　６．
２７９−２８２（１９７４）文献２　　Ｓｕｒｇ、Ｃｌ
１ｎ、ｏｆ　Ｎｏｒｔｈ　Ａｍ、、　６６、６１７（１
９８６）文献３　　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、
、　４６．４５７（＋９８８）文献４　　Ｔｒａｎｓｐ
ｌａｎｔ　Ｐｒｏｃ、、　２１．１３７６（１９８９）
〔発明か解決しようとする課題〕本発明の目的は、新たな臓器保存液を提供することであ
る。

本発明の他の目的は、新規な臓器保存法を提供すること
である。

上記の事情に鑑み、本発明者らはさらに検討を重ねた結
果、単にパーフルオロカーボン化合物の原液又はその高
濃度含有乳剤中に、酸素の存在下、臓器を浸漬すること
によって、臓器（特に膵臓、肝臓）の保存か存効に行わ
れることを見出し本発明を完成した。

〔課題を解決するための手段〕

即ち、本発明はパーフルオロカーボン化合物原液又はそ
の高濃度含有乳剤を磁動成分とする臓器保存液である。

本発明は、またパーフルオロカーボン化合物原液又はそ
の高濃度含有乳剤に臓器を接触させることよりなる臓器
保存法である。

パーフルオロカーボンは酸素溶解性に優れており、人工
血液として注目を集めている。パーフルオロカーボンは
常温で液状のものが多く、その性質は無色澄明、無臭で
比重は１．７〜１．９、化学的に極めて安定（即ち、不
活性）で疎水性か大きいのか特徴である。また、沸点は
大部分のパーフルオロカーボンで１００〜２００°Ｃを
示し、酸素溶解性はパーフルオロカーボンの種類によっ
て若干異なるが、通常的３０〜６０　（Ｖ／Ｖ）％を示
す。

本発明の臓器保存液においては、パーフルオロカーボン
原液中又は高濃度乳剤中、好ましくは酸素をバブリング
させたパーフルオロカーボン原液中又は高濃度乳剤中に
臓器（例えば膵臓、肝臓）を浸漬することにより酸素を
臓器に供給し、それをもって臓器を保存しようというも
のである。

従って、本発明で用いられるパーフルオロカーボンは化
学的に不活性で、酸素溶解性に優れ、また室温で液状の
ものであれば特に限定されないことは容易に理解されよ
う。かかるパーフルオロカーボン化合物の好適な例とし
ては、炭素数９〜１２のパーフルオロ炭化水素、炭素数
９〜１２のパーフルオロ第三級アミンか例示される。パ
ーフルオロカーボン化合物の具体例としては、例えばパ
ーフルオロシクロアルカン、パーフルオロアルキルシク
ロアルカン、パーフルオロシクロヘキサン、パーフルオ
ロデカリン、パーフルオロアルキルデカリン、パーフル
オロアルキルテトラハイトロピラン、パーフルオロアル
キルテトラハイドロフラン、パーフルオロアルカン、パ
ーフルオロターシャルアルキルアミン、パーフルオロＮ
、Ｎ−ジアルキルシクロヘキシルアミン、パーフルオロ
アルキルピペリジン、パーフルオロアルキルモルホリン
、パーフルオロアダマンタン、パーフルオロアルキルア
ダマンタン等（特開昭５０−６９２１９号公報参照）か
例示される。また、パーフルオロＮ−メチルパーヒドロ
キノリン、パーフルオロ−Ｎ−メチルデカハイドロイソ
キノリン、パーフルオロ−４−メチルオクタハイドロキ
ノリジン、パーフルオロ−３−メチルオクタハイドロキ
ノリジン、パーフルオロ−２−メチルオクタハイドロキ
ノリジン、パーフルオロ−１−メチルオクタハイドロキ
ノリジン、パーフルオロ−９ａ−メチルオクタハイドロ
キノリジン、パーフルオロ−４−エチルオクタハイドロ
キノリジン等も好ましいパーフルオロカーボン化合物と
して例示される。

なお、本発明にて使用されるパーフルオロカーボン化合
物の酸素溶解性は、一般に液温３６°Ｃにおいて４０〜
６０（Ｖ／ｖ）％、好ましくハ４５〜５５　（Ｖ／Ｖ）
％である。

当該パーフルオロカーボン化合物は、酸素を高濃度に含
有する状態て臓器保存用に供せれる。従って、パーフル
オロカーボン化合物は予め高濃度に酸素を溶解せしめて
おくが、より好ましくは使用時酸素をバブリングした状
態で使用に供される。

パーフルオロカーボン化合物は、その原液または高濃度
乳剤の形態で使用に供される。乳剤は既知の方法で調製
すればよく、例えば特開昭５８−２２５０１３号等に記
載のものが例示される。本発明に関して、乳剤は、パー
フルオロカーボン化合物か水中に分散した水中油型乳剤
であり、パーフルオロカーボン化合物の濃度は５０％（
Ｗ／Ｖ）以上であり、より好適には７０％（Ｗ／Ｖ）以
上である。

乳剤の調製にあたって乳化剤としては高分子系非イオン
性界面活性剤、リン脂質などが用いられ、その添加量は
１〜５ｗ／ｖ％である。

ここに高分子非イオン系界面活性剤とは分子量２０００
〜２００００であり、例えばポリオキシエチレンーポリ
オキシブロビレンコボリマー、ポリオキンエチレン脂肪
酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体なとか
あけられ、またリン脂質としては卵黄リン脂質、大豆リ
ン脂質なとかあげられる。さらに所望により乳化剤とし
て、例えば炭素数８〜２２、就中１４〜２０の脂肪酸、
これらの生理的に受は入れられる塩〔例、アルカリ金属
塩（ナトリウム塩、カリウム塩なと）、モノグリセライ
ドなと〕を加えてもよい。かかるものの例としては、例
えばカプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン
酸、バルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、パルミト
レイン酸、オレイン酸、リノール酸、アラキドン酸及び
それらのナトリウム又はカリウム塩及びそれらのモノグ
リセライドなとかあげられる。それらの添加量は０．０
０１〜０．０１ｗ／Ｖ％である。

媒質としては生理的に受は入れられる水溶液、例えば生
理食塩又は乳酸加リンゲル液なとが用いられる。

要すれば、さらにグリセロールの如き等張化剤、コロイ
ド浸透圧調整のためにＨＥＳ、デキストランのような血
漿増量剤を添加してもよい。

当該乳剤は各成分を任意の順序に混合して粗乳化し、適
当な乳化機（例えば、マントンゴーリン型乳化機）によ
って粒子径か０．３μ以下となるように均質化すること
によって調整される。

本発明の臓器保存液は、そこに臓器を接触させること、
特に臓器を当該液に浸漬することによって、臓器を長期
間保存することかできる。

〔効果〕

本発明の保存液を用いることにより、臓器（特に膵臓、
肝臓）の単純表面冷却保存時に０〜３０°Ｃ１好ましく
は０〜ｌＯ°Ｃの低温て、７２〜１２０時間の保存が可
能になる。また、温阻血障害か加わった場合でも良好な
結果を示しうる。

従って、本発明の臓器保存液は、ヒトを含む哺乳動物に
ついて臓器移植時の保存液、特に温阻血障害を受ける可
能性のある臓器用の保存液とじて臨床上極めて存用であ
る。

〔実施例〕

実施例１パーフルオロデカリン（原液）を本発明の保存液として
用いた。

実施例２卵黄リン脂質３０ｇを注射用蒸留水５００ｒＩＬｌに添
加し、ミキサーで攪拌して粗乳化液を調製した。

パーフルオロ−Ｎ−メチルデカハイドロイソキノリン５
００ｇを加え、さらにミキサーで攪拌した後に、リン酸
緩衝液１５−を添加、攪拌し、全量をＩＡに調整した。

この粗乳化液を噴射式乳化機（マントンゴーリン社製）
の液槽に入れて循環させ、窒素ガス気流下、圧力１００
〜６００ｋｇ／ａｌｒの条件で、液温を６５〜７０°Ｃ
に保ちながら乳化を行った。

乳化製剤は注射用バイアルに分注して窒素ガス置換を行
い、施栓し、加熱滅菌した。乳化製剤は冷所て保存した
。

パーフルオロカーボン化合物の濃度としては５０％（Ｗ
／Ｖ）であった。

光散乱法によって測定した乳化製剤の粒子径は０．２μ
ｍであった。

実験例１実験動物としては雑種犬（体重１２〜１８ｋｇ）を、パ
ーフルオロカーボン化合物としてはパーフルオロデカリ
ンを用いた。

手術手順ベントパルビタールナトリウム（投与量２５■／ｋｇ体
重）により麻酔を導入、維持した。膵臓の左葉を付髄し
ている膵臓動脈および静脈とともに、細心の注意を払っ
て摘出し、さらに膵臓を摘出した。部分膵臓切片は膵臓
動脈を通じて冷やしたヘパリン加ユーロ・コリンズ液（
１０００単位１５０ｍｌ）５０ｍｌで洗浄し、すぐにあ
るいは保存後に首に移植した（文献５．６）。そして、
自己移植時に残りの膵臓を刺激した。術後、３日間にわ
たり、１０％ブドウ糖（投与量３０ｄ／ｋｇ体重）およ
び注射用ペニシリン（投与量２５■／ｋｇ体重）を生理
食塩水に溶解して犬に投与した。３日後からは標準食餌
とした。

文献５　　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｃ、、　１９
．３５０１（１９８７）文献６　　Ｔｒａｎｓｐｌａｎ
ｔａｔｉｏｎ、、　４４．５８３（＋９８７）保存法膵臓切片は保存期間中、ワイヤーネットコンプレッサー
を用いたパーフルオロカーボン化合物中に浸漬した。コ
ンプレッサーを利用しない場合、膵臓切片は比重が異な
るためにパーフルオロカーボン化合物中に浮いてしまう
。酸素　二酸化炭素（９５％　５％）を保存期間中、パ
ーフルオロカーボン化合物中にフリットガラス（ガラス
を細粉にしたフリットをガラス器に塗布して焼付けた器
具）を通して５０〜１００ｙｄ／分の流速で連続的に供
給した。

機能的検討血糖値は自己移植後の術後第１週は毎日、それ以降は週
２回測定した。静注糖耐性試験は自己移植２週間後に行
った。静注糖耐性試験はブドウ糖（投与量０゜５ｇ／ｋ
ｇ体重）をワンショットで静注し、血糖を１．　５．　
１０．　２０．　３０．６０．９０゜１２０分後に測定
した。Ｋ値は５〜６０分時の測定から得た血糖から算出
した。移植後、少なくとも５日間、正常血糖か維持され
れば、臓器保存か成功したものとみなした。

組織学的検討膵臓切片の生検は手術時、４８時間保存後、自己移植の
２週間後及び部検時に行った。組織はザンポニ（Ｚａｍ
ｂｏｎ　ｉ’　　ｓ）溶液に浸漬し、パラフィンで固定
した後にヘモトキシリン及びエオシンで染色した。

実験手順実験動物は３群に分けて検討された。実験群としては単
純酸素バブリングを用いてパーフルオロカーボン化合物
中、４°Ｃて保存した部分切片を犬に移植した群（第１
群５匹）及び単純酸素バブリングを行うことなく、同様
に処理した群（第２群５匹）の計２群を設けた。また、
新鮮な（保存を行っていない）部分膵臓切片を犬に移植
したものを対照群（第３群５匹）とした。

統計統計的分析はステニープントのｔ−検定を用いてなされ
た。

単純酸素バブリングを行うことなく、パーフルオロカー
ボン化合物中で４８時間、膵臓を単純冷却保存した（第
２群）後には機能的な成功率は０％（０１５）てあった
。対照的に単純酸素バブリングを行いなからパーフルオ
ロカーボン化合物中で４８時間、膵臓を単純冷却保存し
た（第１群）後には機能的な成功率は８０％（４１５）
であった。

第１群のに値の平均は自己移植２週間後で１．８７±０
．２８であった。一方、第３群（対照群）ては１、９０
±０゜３４てあった。

保存後になされた生検から第１群の組織学的検討では、
はぼ正常な外分泌および内分泌組織の構築か観察された
。さらに自己移植の２力月後に第１群の切片を生検した
ところ外分泌組織中にわずかな線維形成の変化を伴った
、はぼ正常な膵臓の構築か観察された。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）パーフルオロカーボン化合物原液又はその高濃度
含有乳剤を有効成分とする臓器保存液。
（２）酸素を溶解せしめたパーフルオロカーボン化合物
原液又はその高濃度含有乳剤に臓器を接触することを特
徴とする臓器保存法。
（３）酸素の溶解が、パーフルオロカーボン化合物原液
又はその高濃度含有乳剤に酸素をバブリングすることに
よって行われることを特徴とする請求項（２）記載の臓
器保存法。