JPH03160086A - ポリペプチド薄膜 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は配向性の分子重合体から成る超薄膜に関するも
のであり、特に生体適合性の点で優れたベプチド結合を
有するアミノ酸リン脂質重合体の超薄膜に関するもので
ある。

（背景技術） 分子配列を持った単分子膜（ｍｏｎｏｌａｙｅｒ）およ
び単分子膜が複数積層されてなる累積膜（ｍｏｎｏｌａ
ｙｅｒｓ＝ａ＋ｕｌｔｉｌａｙｅｒ）などの分子集合体
（ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｓｓｅｍｂｌｙ）はその超薄性
と緻密性を利用し、エレクトロニクスデバイス用素材、
表面保護用素材の他、気体分子やイオンの選択的透過性
を利用した超濾過膜やセンシング用薄膜あるいはマテリ
アルデリバリー用透過制御膜としての広範囲な応用が期
待されている。

また、リン脂質は細胞の生体膜の成分として存在してお
り、生体膜では２分子構造を有する二重層構造を形成し
、種々の生命現象に欠くことのできない機能を果してい
る。

そして、天然及び人工のリン脂質は水中に分散させるこ
とによって、リポソームと呼ばれる分子配列を持った二
分子膜による閉鎖小胞体を形成することが知られ、医学
、薬学分野においては、薬剤運搬体、人工血液として、
工学的分野においては、人工細胞、マイクロカプセルへ
の応用展開が図られている。

さらに先に述べた単分子膜、累積膜としての応用以外に
も、生体適合性を利用した医用剤料への展開も図られて
いる。

一方、気一液界面に形成される両親媒性分子の単分子膜
を支持体上に累積する方法としてはラングミュアープ口
ジェット（Ｌ　Ｂ）法が一般に知られ、この方法で作製
された各種のＬＢ膜は有機超薄膜として近年用途が広が
っている〔固体物理ｌ７　（１２）４５　（１９８２）
等参照〕。

ＬＢ膜やリポソームを含む分子集合体は分子の配向と超
薄性に基づく様々な機能性を発揮するものの、一方では
物理的にデリケートなため膜構造が破壊されやすく、ま
た化合物によっては膜の構造欠陥が多く高緻密性が得ら
れないといった欠点を持っている。これらの分子集合体
の膜構造を物理的に強化し、緻密性にすぐれた膜を提供
することはあらゆる目的に要求される課題である。

分子集合体の膜構造を物理的に強化するための有効な手
段の一つは分子の架橋または重合である。

ＬＢ膜やリポソームなどの分子集合体の重合については
従来の重合性化合物と重合様式が、Ｈ．Ｂａｄｅｒ　ら
、Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ，第６４巻、ｌ頁（１９８５年）およびＲ．　Ｂ
ｕｓｃ旧ら、Ｍａｃｒｏｍｏ　ｌ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｕ
ｐｐ　ｌ．　，第６巻、２４５頁（１９８４年）にまと
められている。

重合性の両親媒性化合物の研究が活発となったのは１９
８０年代に入ってからであり、当初は重合性化合物とし
てビニル系及びジエン、ジアセチレン系の不飽和化合物
を用い、紫外線（ＵＶ）あるいはγ線等の放射線によっ
て不飽和結合を開裂して重合する方法が広く採用された
。しかしこれらの方法による重合の多くは膜の堅牢性は
向上するものの重合によるひずみによって分子配列の秩
序性を維持させることが困難であった。Ａ，　Ｌａｓｃ
ｈｅｗｓｋｙとＨ．　Ｒｉｎｇｓｄｏｒｂ著、Ｍａｃｒ
ｏｍｏｌｅｃｕｌｅ．第２ｌ巻、１９３６頁（１９８８
年）に指摘されるように、膜の配向はアルキル鎮の長さ
と末端親水基の種類に大きく影響される結果、秩序性の
良好な重合膜を与える化合物は少数に限られるのである
。

Ａ．　ＬａｓｃｈｅｗｓｋｙらはＪ．　Ａｍ．　Ｃｈｅ
ｍ．　Ｓｏｃ．　，第１０９巻、７８８頁（１　９　８
　７年）において、放射線重合等に有用な各種の不飽和
結合を有する両親媒性化合物について、秩序性維持のた
めに重合基がスペーサーグループを介して担持されてい
ることの必要性を開示している。さらに特開昭５７−１
５９５０６号には、放射線重合による不飽和化合物（界
面活性剤）の単分子膜および累積膜の重合フィルムを超
濾過膜として利用する例が示されている。

これらの不飽和結合をもつ化合物は放射線によって重合
させる従来の技術では次のような諸問題が欠点となる。

すなわち、第１に重合による配列構造の乱れあるいは分
子の無秩序な凝集・析出が起こりやすく、これを避ける
目的でスペーサー基の挿入などの特殊な分子設計を必要
とする。第２に紫外線やγ線の照射は重合性両親媒性分
子としばしば共存する種々の添加物質の分解や変戊をも
たらすことが問題となる。第３にこの種の重合で得られ
た膜は通常生体適合性に極めて乏しく薬物等の透過制御
膜等としての生体組織への応用は制限される。

そこで放射線を用いない重合法として例えばジチオール
の酸化重合によってジスルフィド結合を形成する方法が
例えば、Ｊ，　Ａｍ，　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．　，第１
０９巻、４４１９頁（１９８７年）に示されており、あ
るいは上述の不飽和結合をもつ化合物を開始剤存在下で
ラジカル重合させる方法が有用である。

しかしながらこれらの方法では、重合時に開始剤を必要
とするため、これを重合完了後に膜系から除去する工程
を必要とするほか、酸化還元剤などを含める開始剤が共
存物質へ与える影響も問題となる。

さらに重合形態を改善し生体適合性を向上させたものと
してアミノ酸長鎖アルキル誘導体の分子膜を自己縮合重
合させる方法がＭａｃｒｏｍｏ　ｌ．　Ｃｈｅｍ．Ｒａ
ｐｉｄ　Ｃｏｍｍｕｎ．．第３巻、１６７頁（１９８２
年）、Ｔｈｉｎ　Ｓｏｌｉｄ　Ｆｉｌｍｓ，第１３３巻
、３９頁（ｌ９８５年）、また同様な誘導体をカルポジ
イミドを縮合剤に用いて縮合重合させる方法が、Ｊ．　
Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．　，第１０８巻、４８７頁
（１　９　８　６年）に開示されている。しかし、これ
らの方法は自己縮合重合においては縮合反応の進行が極
めて遅く、また縮合剤を用いる方法では縮合剤や副生物
の残存が問題となる。

その他に生体適合性リン脂質類似膜として、メタクリル
酸エステルより誘導した、リン酸ジエステルモノマーを
重合開始剤により、重合する方法や、合成ポリペプチド
側鎖にリン脂質類似物を連結する方広が、例えばＭａｋ
ｒｏｍｏ　ｌ．　Ｃｈｅｍ．，第１７８巻、２９６３頁
（　１　９　７　７　）　、Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，第１７９巻、２３４９頁（　１　９　７　８　）
　、Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．　Ｒａｐｉｄ．Ｃｏ
ｍｍｕｎ．．第６巻、２８５頁、（１９８　５）　、Ｊ
．Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｃｈｅｍ．，第Ａ２５巻
、ｌ１５頁、（１　９　８　８）に示されている。しか
しながら、これらの方法では、生体膜に類似した配向、
配列を有した膜を得ることは困難である。さらに生体膜
を構或するリン脂質とは、その構造を大きく異にしてい
る。

〔発明が解決しようとする課題〕

従って本発明の目的は以上の従来法の問題点を解決し、
第１に放射線や重合開始剤を用いることなく重合される
分子配列性の良い重合薄膜およびそれを担持した材料の
製造方法を提供することを目的とし、第２に重合が自己
重合によって自然自発的に高収率で進行する重合薄膜と
それを担持した材料の製造方法を提供することを目的と
し、第３には、リン脂質側鎖が生体膜に類似した配向、
配列を持ち、生体適合性の点でも優れた重合性薄膜を提
供することを目的とすることである。

（課題を解決するための手段） 本発明の目的は、一分子中に疎水部とアミノ酸エステル
構造を持つ親水部を有し、該エステルの離脱基の共役酸
のｐＫａが１６以下である両親媒性のリン脂質化合物を
含む単分子膜またはその累積膜を重合することによって
得られる。リン脂質を側鎖に有するポリベプチド膜によ
り達成された。

本発明の重合単分子膜または累積膜は重合の主鎖がリン
脂質を側鎖に有するポリペプチドすなわちアミノ酸のア
ミド結合の連鎖によって構成されることを特徴とする。

これらの超薄膜はＬＢｍを含む単分子被膜広によって支
持体に担持することができる。

なお、本発明において累積膜とは２分子膜による閉鎖小
胞体（リポソーム）の２分子膜も含む。

従って、本発明においてポリペプチド薄膜とは、本発明
のリン脂質化合物の閉鎖２分子膜が重合して形成された
リポソームを包含する。

本発明の重合膜は、下記の反応によって反応活性すなわ
ち求電子性のエステル基を有する両親媒性のアミノ酸誘
導体が縮合重合してアミド結合の骨格を形成したもので
ある。

ここでｎは２以上の整数を表わし、Ｒはリン脂質残基を
表わす。Ｒ’について後述する。

本発明の重合薄膜の形成方法について説明する。

重合薄膜の形成には気一液界面での重合と支持体上での
重合の２種のいずれも用いることができる。

気一液界面で重合を行うためには、本発明の両親媒性の
アミノ酸エステルより誘導したリン脂質七ノマーの単分
子膜を単分子膜製造用トラフの水相（ｓｕｂｐｈａｓｅ
）上に適当な有機溶媒より展開して作製し、水面上で重
合に必要な時間放置しておけばよい。水相は純水もしく
は緩衝液等の塩溶液が使用でき、好ましくはそのｐＨを
、用いるモノマ一のエステル分解の平衡定数に依存し５
〜９の範囲内で制御する。

水相の温度は室温から６０℃までの範囲が好ましく、反
応速度を促進するためには高い温度が選ばれる。反応中
の単分子膜の表面圧力は５〜４ｏｄｙｎｅ／ａｎに保つ
ことが好ましく、１０〜２５ｄｙｎｅ／ｃｍに保つこと
がより好ましい。表面圧力は通常一定値に制御されるが
、反応の進行とともに増加もしくは減少させてもよい。

反応終了後に水面上の重合膜をＬａｎｇｍｕｊｒ−Ｂｌ
ｏｄｇｅｔｔ法（垂直浸漬法）、水平付着法などの方法
によって親水性もしくは疎水性の支持体上に１層ないし
多数層を順次移し取ることにより、重合単分子膜あるい
は重合累積膜が形成される。

第２の方法は前記両親媒性のアミノ酸エステル誘導体モ
ノマーの単分子膜を水面上に形成しこれを上述の方法で
支持体上に移し取った後、この支持体上で累積膜を放置
することにより重合を進行させる方法である。この方法
において単分子膜を反応に先立って支持体上に累積する
ためには、水相を重合反応を制御するような条件、例え
ばｐＨ６以下の低いｐＨや低ｄの条件に保つことが必要
となる。支持体上に累積されたモノマーは、重合を促進
させる処理、例えば加熱やアルカリ性ガス（例えばＮＨ
．など）へさらしたりアルカリ性水溶液に浸漬すること
によって重合させることができる。

これらの２種の重合方法のうち、反応の許容性の点で好
ましいのは前者の気一液界面上重合の方法である。しか
しながら反応の効率や重合度の点では必ずしもこの限り
でなく、用いるモノマーの安定性によって使い分けるこ
とができる。

本発明で用いる両親媒性のアミノ酸エステルより誘導し
たリン脂質は下記の一般式（Ｉ）で表わされる。

（Ｉ） Ｏ １１ Ｈ２Ｎ−ＣＨ−Ｃ−Ｒ ＣＨ２ 式中、Ｒｌはその共役酸のｐＫａが１６以下の離脱基を
表わし、Ｒ２は炭素数が１以上の有機基を表わす。Ｍは
水素イオンを含む陽イオンを表わす。

０ ｌ１ −ＣＨ２−０−Ｐ−０−Ｒ”部分は先の式のＲにＯＭ 相当する。

さらに詳しく説明すると、Ｒ１は好ましくは−Ｘ−Ｒ”
一で表わされる。Ｘは一〇−　　−Ｓ−−ＮＣＲ’）一
を表わす。（Ｒ’は水素原子、アルキル基、アリール基
。Ｒ４はＲ！と連結して、環を形成してもよい。この環
は、更に窒素などのへテロ原子を含んでいてもよく、ま
た不飽和結合を有していてもよい。）一ｘ一としては一
〇一が好ましい６Ｒ３としては、例えばアリール基（置
換アリール基を含む。例えばフエニル、ナフチル。

置換基としては例えば、ニトロ基、ノ＼ロゲン原子）；
アルキル基（置換アルキル基を含む。例えばメチル基、
ベンジル基、ハロアルキル基、ハロアルキル基としては
例えばモノクロルエチル、ジクロルエチル、トリクロル
エチル基）；アシルアミノ基（例えばＮ−メチルアセチ
ルアミノ基、Ｎ−メチルベンゾイルアミノ基）；−Ｎ＝
ＣＲ’（Ｒ’）（ここで、Ｒ’　，Ｒ＠は水素原子、ア
ルキル基、アリール基を表わす。このアルキル基、アリ
ール基は置換基を有するものを含む）；アルケニル基；
アルキニル基が挙げられる。中でも置換アリール基、置
換アルキル基を含むアリール基、アルキル基が好ましい
。

Ｒ２は好ましくは炭素数１０以上のアルキル基を表わす
。このアルキル基は置換アルキル基を含む。不飽和基で
連結されたアルキル基でもよい。

例えばｎ−ドデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−オク
タデシル基、さらに好ましくは、−ＣＨ．　　　　　　
　　　−Ｃ｝ｌ−ＣＨ．Ｏ−Ｒ，ＣＲｔ、Ｒｅは炭素数
１以上の有機基を示す。

好ましくはアルキル基（置換アルキル基を含む。

不飽和基で連結されたアルキル基でもよい。）さらに好
ましくは炭素数１０以上のアルキル基を示す。〕である
。

また、本発明で用いる両親媒性のアミノ酸エステルより
誘導されるリン脂質のアミノ酸エステル部位及びＲ．は
光学活性体が好ましい。

以下に本発明のアミノ酸エステルの好ましい具体例を挙
げるが、 これらに限定されるものではな い。

Ｉ−１ ０＝Ｐ−○Ｈ ○ Ｃ ｌＨ．７ Ｉ−２ ０＝Ｐ ０°Ｎａ０ １−３ ０＝Ｐ−ＯｅＮａ● Ｉ ０ Ｃ ４Ｈ！． Ｉ−４ ０ Ｉ−５ ○＝Ｐ−ＯｅＮａΦ Ｏ ０ Ｃ １Ｈ，７ Ｃ ８Ｈ，， Ｉ−６ ０＝Ｐ−○Ｈ Ｃ ６　Ｈ　Ｉｓ Ｃ ａ　Ｈ　ｓ　ｓ １−７ Ｉ−８ Ｉ Ｏ＝Ｐ−ＯＨ Ｏ １ ０＝Ｐ−ＯｅＮａ● ■ ９ ０＝Ｐ−○Ｈ ０ Ｏ ０＝Ｃ Ｃ＝Ｏ Ｃ ，Ｈ，７ Ｃ ｒ　Ｈ　，ｔ Ｉ−ｔｏ ０＝Ｐ−○ｅＮａΦ ○ ０ ０ Ｃ ！Ｈ２５ し ２旧５ Ｉ−１５ Ｏ ○＝Ｐ−ＯｅＮａΦ ０ Ｉ−１６ ０＝Ｐ−ＯＨ Ｏ 以下に代表的な、合成方法の例を挙げるが本発明はこれ
らに限定されるものではない。

本発明の上記一般式（Ｉ）で表わされる化合物は以下の
合成経路により合成できる。但し、本発明はこれらに限
定されるものではない。

Ｏ Ｒ！ ０＝Ｐ−ＯＭ ０ （Ｉ） 以下に好ましい化合物の合威例として 〔Ｉ〕式 で表わされる化合物７においてＲ．＝ＯＣＲ．、Ｒ！＝
ＣＨ！　　　　　　　　、Ｍ＝Ｎａｅ　（具体例ＣＨＯ
−Ｃ ？Ｇ■ ＣＨ２０−Ｃ ，Ｇ，７ ■−５）の例を示す。

合成例１　　（Ｂｏｃ−ｎ−セリンメチルエステル之の
合ｆＡ） 水酸化カリウム（８５％含量）　６．６ｇ　（０．１ｍ
ｏｌ）をメタノール１５０−に溶解した。これにｌ−セ
リンメチルエステル塩酸塩１５．６ｇ　（０．１ｍｏｌ
）を加えて４５分攪拌した。次にトリエチルアミン１０
．　　１ｇ　（０．　　１ｍｏｌ）次いでジーｔｅｒｔ
　−プチルージーカーポネート２１．　　８ｇ　（０．
　　１ｍａｔ）ＴＨＦ溶液１００−を加えた。一晩放置
の後ＴＨＦを減圧留去した。残査に酢酸エチルを加え、
有機層を水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した後溶媒留
去した。残査をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサ
ン／酢酸エチル−７／３）により精製して、無色液体と
し工２を１８．　　９ｇ　（０．　　０８６ｍｏｌ）を
得た。　（８６％） 合成例２　（リン酸トリエステル体４、Ｒ”＝○ＣＨ，
Ｃ　Ｈ．Ｏ　Ｃ　．．Ｈ．， の合成） フェニルホスホ口ジクロリデート２．５ｇ（１２ｍｍｏ
！）をＴＨＦ３０−に溶解した。次にＢｏａ−ｌ−セリ
ンメチルエステルｇ　２．２　ｇ　（　ｌ　Ｏｍｍｏｌ
）メチルイミダゾール１．　　０　ｇ　（　１　２ｍｍ
ｏｌ）　ＴＨＦ混合液５０−を滴下して加えた。３時間
の攪拌の後１，２−ｏ−ジステアリルーＳｎ−グリセロ
ール５．　　９　ｇ　（　１　０＋ｎｍｏｌ）　、メチ
ルイミダゾール１，　　Ｏ　ｇ　（１　２ｍｍｏｌ）　
ＴＨＦ混合液１５０Ｔ！を滴下して加えた。６時間攪拌
した後、ＴＨＦを減圧留去し、残査に酢酸エチルを加え
、水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去した。

残査をシリカゲルクロマトにより精製して４を白色固体
（ロウ状）として３．　　８ｇ　（４．　　０ｍｍｏｌ
）得た。

（４０％） ＩＲ　（ＫＢ　ｒ）　３　４　０　０ｃｍ−’、２９２
５ｃｍ−’、２８５０ｃｍ−’、１　７　５　５ｃｍ−
’、ｌ　７　２　０ａｎ１６００ｃｍ””　　１４７０
ｃｍ−、１２８０ｃｍ１０６０ａａ−、１０３０Ｑ！！
−’、９６０ｃｍ−７７０ＣＩ１１−、７２０Ｃ１１１
−、６９０ｃ１１１Ｍａ　Ｓ　Ｓ　　（Ｍ＋Ｎａ）＋９
　２　６合成例３（１．２−ｏ−ジステアリルーＳｎ−
グリセロホスファチジルセリンメチルエステル７の合威
） 合成例２における４ｏ．５ｇを酢酸エチル５〇一に溶解
した。アダムス触媒（ＰｔＯｘ）をＯ．ｌｇ加え、常圧
において加水素分解を行ない定量的に５　（Ｒ．　＝Ｏ
ＣＲ．、 Ｒｌ＝ＣＨ２　　　　　　）を白色固体（ロウ状）ＣＨ
ＯＣ．．Ｈ，， ＣＨ．ＯＣ．．Ｈ．， として得た。

５をジクロロメタン８−に溶解した後にトリフロオロ酢
酸８１ｄを加え、３０分間攪拌した。溶媒留去して６　
（　Ｒ　，＝　ｏ　ｃ　Ｈｓ、ＣＨ． Ｒ，＝−ＣＨＯＣ．Ｈｓ＋　　）を定量的に得た。

Ｃ　ＨｔＯ　Ｃ　．．Ｈ．， ６をクロロホルムに溶解して、これに飽和炭酸水素ナト
リウム水溶液を加えて、脱塩を行なった。

有機層を水で洗った後、硝酸ナトリウムで有機層を乾燥
して、’ｔ　（Ｒ．＝ＯＣＲ＋、Ｒ　ｔ　＝　Ｃ　Ｈ　
ｔ　　　　　　　）を２５０■得た。

Ｃ　Ｈ　Ｏ　Ｃ　．Ｈ　ｓ　７ ＣＨ２０Ｃ．．Ｈ，， Ｉ　Ｒ　（ＫＢ　ｒ）　３　４　０　０ｃｍ””、２９
２５ｃｍ−’、２８５０ｃｍ−、１７５０ｃｍ−、１４
７０ｃｍ−１２４０ｃｍ−、１１００ｃ１１１−’Ｓ　
１０８０ＣＩＩ１−８　４　０ａｎ−　、７　２　０ｃ
ｍ−ＭＡＳＳ　　Ｍ＋　８００ ＣＩ］式で表わされる化合物７においてＣＨＯＣ．．Ｈ
．， Ｃ　Ｈ　ｔ　Ｏ　Ｃ　．Ｈ　ｓ　ｔ Ｍ＝Ｎａ● （具体例■−７） の例を示す。

合成例４ （Ｂｏｃ−ｊ７−セリンーフエニルエステル３Ｂｏｃ−
　１−セリンメチルエステル３０ｇ（０．１４ｍｏｌ）
、ジヒドロピラン５　８　ｇ　（０．　　６　９ｍｏｌ
）クロロホルム６０〇一混合液にパラトルエンスルホン
酸２５０■ＴＨＦ液２−を加えて、室温で３時間攪拌し
た。溶媒留去後クロロホルムを加え、有機層を水洗した
。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留
去した。次に残査にメタノール８００−を加えＩＮ−水
酸化ナトリウム水溶肢を１５０一加えて一晩攪拌した。

メタノールを減圧留去した後に酢酸エチルと水を加え不
純物を抽出した。水層に１５％クエン酸水溶液を加えて
ｐＨ３にし酢酸エチルで抽出した。有機層を水洗、硫酸
ナトリウムで乾燥して酢酸エチルを減圧留去した。

残査をＴＨＦ４００−に溶解して、カルボニルジイミダ
ゾール２　６．　　６　ｇ　（０．　　１　６ｍｏｌ）
を加えた。一時間攪拌した後にフェノール１３ｇ（０．
１４ｍｏｌ）、トリエチルアミン１３．８ｇ　（０．１
４　ｍｏｌ）Ｔ　Ｈ　Ｆ混合液５０−を滴下した。

４時間攪拌して溶媒を減圧留去し、残査に酢酸エチルと
水を加えて抽出した。有機層の水洗硫酸ナトリウム乾燥
を行ない酢酸エチルを減圧留去した。残査をシリカゲル
クロマトにより精製して、（ヘキサン／酢酸エチル＝８
／２）白色固体を３２ｇ得た。

この白色固体３２ｇをＴＨＦ　４　０　０−に溶解し、
バラトルエンスルホン酸ピリジウム塩（ＰＰＴＳ）４．
　　６　ｇ　（０．　　０　１　８ｍｏｌ）水溶液４０
１ｒＩを加えて、６時間６０℃で攪拌した。溶媒留去後
クロロホルムと水を加えて抽出して、有機層を硫酸ナト
リウムにより乾燥し、クロロホルムを減圧留去した。

残査をシリカゲルクロマトにより精製して３　（Ｒさら
にクロロホルムーヘキサンにより再結晶をを１　２．　
　６　ｇ　（０．　　０　４　５ｍｏｌ）得た。（Ｂｏ
ｃ−ｆ　−セリンメチルエステルから３３％） ＩＲ　（ＫＢ　ｒ）　３　３　７　５ｃｍ−’、３２７
５ｃｍ−’、２９　６　０ｃ＋ｎ−　、２　９　２　５
ａｎ−’、１７７０側一１　７　０　０ｃｍ−’、１６
００ｃｍ−’、１４９０ａｎ−’１４００ｃ＋ｎ−’、
７４０ｃｍ−’、６９０国合成例５（リン酸トリエステ
ル４の合成Ｒ”　　＝−ＣＨ２ＣＣｌ，） トリクロ口エチルホスホロジクロリデートｌ．３ｇ　（
０．　　５ｍｏｌ）をＴＨＦ　１　０−に溶解した。こ
れにＢｏｃ−　１−セリンフェニルエステル１．４ｇ（
０．　　５０ｍｏｌ）メチルイミダゾール０．４２ｇ（
０．５　１ｍｏｌ）ＴＨＦ混合液１０ｄを滴下した。

１時間室温で攪拌した後に、１．２−ｏ−ジステアリル
−Ｓｎ−グリセロール２．　９５ｇ　（０．　　５０ｍ
ｏｌ）メチルイミダゾール０．　　４２ｇ　（０．　　
５１ｍｏｌ）を加えて、４時間攪拌した。ＴＨＦを減圧
留去してクロロホルムを加え水洗し、有機層を硫酸ナト
リウムで乾燥してクロロホルムを減圧留去した。残渣を
シリカゲルクロマトにより精製し（ヘキサン／酢酸エチ
ル＝８／２）０．９８ｇのＲ”　＝−ＣＨ．ＣＣｌ！）
を得た。　（２０％）Ｉ　Ｒ　（ＫＢ　ｒ）　　３　４
　０　０ｃＩＩＩ１−’、２９２５ｃｍ−’、２８５０
ｃｍ−’、１７８０ｃｍ−’、１７２０ｃｍ−１６００
ｃｍ−’、１５００ｃａ−’、１４６０ｃｍ−１３００
ａｏ−’、１２００ＣＩｌ＋−’、１　１　６　０ａｎ
１１２０ａａ−　、１０３５ｃｍ−’、９００ａｎ７２
０ａｌ−’、６９５ｃｍ ＭＡＳＳ　　　（Ｍ＋Ｎａ）”　　　１　０　９　２合
成例６（１．２−ｏ−ジステアリル−Ｓｎ−グリセロホ
スファチジルセリンフエニルエステルの合成） Ｒ”　＝−ＣＨｔＣＣ１．）０．２６ｇ，（０．２４ｍ
ｍｏｌ）をＴＨＦ　１　０ｙｄに溶解して酢酸９−、水
ｌ一を加えて、亜鉛粉末ｔｇを加えた。

一時間攪拌ののちセライト濾過を行ない、濾液を濃縮し
てからクロロホルムと水を加えた。有機層を硫酸ナトリ
ウムで乾燥しクロロホルムを減圧留去して、得られた白
色固体をアセトンで洗いこの固体Ｑ．１６ｇを、ジクロ
口メタン２−に溶解してトリフルオロ酢酸２−を加えて
３０分攪拌した。溶媒留去後クロロホルムに溶解して飽
和炭酸水素ナトリウム水溶液で脱塩処理を低温で行Ｒ”
　＝−ＣＨ．　　　　　　　　）５　０■を白色固体Ｃ
ＨＯＣ，．Ｈ．， ＣＨ２０Ｃ．．Ｈ，， （ロウ状）として得た。

Ｉ　Ｒ　（ＫＢ　ｒ）　３　４　０　０ｃ＋ｎ−’、２
９２５ａｎ−、２８５０ｃｍ−’　　１７６０ｃｒｎ−
’、１６００ａｎ１４７０ＣＩｌ１−’、１　２　４　
０ａｎ−’，　　１　１　０　０ｃｍ−１　０　６　０
ｃｍ−’，　７　６　０ａｎ−’、７２０ｃｍ−’Ｒ”
　　＝−ＣＨ． において） ＣＨＯＣ．．Ｈ．， ｔ ＣＨＯＣ．．Ｈ．， ＋ （Ｍ−ＣＦ３ＣＯＯ＋Ｎａ）”　　８　６　２その他の
化合物も同様の方法で合或できる。

［Ｉ］で示される化合物はすべて反応性を有しているた
め７０℃前後において序々に分解した。

本発明において単分子膜または累積膜を被覆する支持体
（基板）としては親水性または疎水性の表面をもつ各種
の有機樹脂材や無機材料が用いられる。これらは平坦な
ものであってもよいし、多孔性あるいは繊維状の三次元
網目構造をもつものであってもよい。

平坦な材料としては、各種金属等の導電材料ガラス状無
機物（ガラス、石英など）やその他の無機絶縁体、各種
の無機および有機の結晶、無機半導体（Ｓｎｏ！、Ｉ　
ｎｔｏｓ　、ＺｎＯ，Ｔｉｌｔ、ＷＯ＋　、ＧａＡｓ，
Ｓ　ｉなど）、有機半導体、有機伝導体、有機重合体、
および上記素材の複合材料など各種の材料が用いられる
。材料は外部の電気的回路に接続された電極やその他の
センサー（電界効果トランスジューサーなど）であって
もよい。

多孔質の材料は主に透過膜やフィルターとして用いると
きの支持体として有用であり、これらは例えば有機、無
機のミクロボーラスフイルターセルロース樹脂系のフィ
ルム、その他各種の多孔性ポリマーフィルムが含まれる
。

本発明に使用する単分子膜用展開溶媒としては、クロロ
ホルム、ジクロルメタン、ベンゼン、トルエン、エーテ
ルなどの常用の揮発性非極性有機溶媒の他、これらとア
ルコール、水などの極性親水性溶媒との混合物も用いら
れる。

水面上の単分子膜や基板や支持体の表面上へ被覆するに
は、ＬＢ法を含める種々の累積方法を用いることができ
る。垂直式付着法であるＬＢ法については例えば、ジャ
ーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエテ４　（
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）第５７巻、１００７頁
（１９３５年）、ゲインズ（Ｇ．Ｌ．　Ｇａｉｎｓ．　
Ｊｒ）著「インソルブル・モノレーヤーズ・アット・リ
キッドーガス・インターフェイス」（Ｉｎｓｏｌｕｂｌ
ｅ　Ｍｏｎｏｌａｙｅｒｓ　ａｔ　Ｌｉｑｕｉｄ−Ｇａ
ｓ　Ｉｎｔｅｒｆ−ａｃｅｓ）　Ｊ、（Ｉｎｔｅｒｓｃ
ｉｅｎｃｅ）　、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　（　１　９　６６
年）、あるいは福田清成著、材料技術、第４巻、２６１
頁（１９８６年）などに説明されている。

被覆の方法としては、この他水平付着法、回転付着法（
例えば特開昭６０−１８９９２９号、同６１−４２３９
４号など）等の様々な方法が適用される。累積膜は、単
分子膜を基板上に被覆する操作を繰り返し行うことによ
って得られる。

効率のよい累積のためには特願昭６　３−５　４　６８
０号に記載される改良型水平付着法や特開昭６０−２　
０　９　２　４　５号などに記載の連続式累積法を用い
ることもできる。

本発明をリポソームに応用するためには従来からよく知
られているリポソームの製造法（調製法）例えばボルテ
ックスイング法、超音波法、界面活性剤法、逆相蒸発法
（ＲＥＶ法）、エタノール注入法、エーテル注入法、プ
レーペジクル（ＰｒｅＶｅｓｉｃｌｅ）法、フレンチプ
レスエクストルージョン（Ｆｒｅｎｃｈ　Ｐｒｅｓｓ　
Ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）法、Ｃａ２＋融合法、アニーリン
グ（Ａｎｎｅａｌｉｎｇ）法、凍結融解融合法、Ｗ／Ｏ
／Ｗエマルジョン法等の方法や、最近、Ｓ，　Ｍ．Ｇｒ
ｕｎｅｒら　（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　　２　４
．　　２　８　３　３（１９８５））により報告された
Ｓｔａｂｌｅ　Ｐｌｅｒｉｌａｍｅｌｌａｒ　ｖｅｓｉ
ｃｌｅ法（ＳＰＬＶ法）などの方法が全て適用可能であ
る。

これらについては野島庄七、砂本順三、井上圭三編集「
リポソームＪ南江堂発行第二章２１ぺ一ジ〜（１　９　
８　８年）の記載を参考にすることができる。

リポソームの製造にあたっては、本発明の化合物を単独
で用いることもできるし、また従来公知のリポソーム構
成素材と適宜混合することができる。

次にリポソームに内包させる物質であるが、親水性、水
溶性特に制限はないが、例えばアドリアマイシン、アク
チノマイシン、マイトマイシン、１−β−アラビノフラ
シルシトシン、プレオマイシン、シスプラチン等の抗が
ん剤インターフェロン等の抗ウィルス剤、アミノ配糖体
（例えばゲンタマイシン）、β−ラクタム系（スルペニ
シリン、セフォチアム、セフメノキシム）等の抗生物質
、ＴＲＨ，リュウブロライド、インスリン等のべブチド
ホルモン剤、リゾチーム、アスパラギナーゼ、グリコシ
ダーゼ等の酵素剤、ムラミルジペプチド、ムラミルトリ
ペプチド等の免疫賦活剤、イムノグ口プリン、各種トキ
シン等の蛋白質が挙げられるが、これらに限定されるも
のではない。

以下に実施例を示すが、本発明はこれに限られるもので
はない。

実施例ｌ 両親媒性のアミノ酸メチルエステルリン脂質として具体
例におけるＩ−５をクロロホルムｌｍＭの濃度に溶解し
て展開溶液とした。ラングミュアフィルムバランスを用
い、この溶液を３７℃のｐＨ７．４の１０−”Ｍリン酸
緩衝溶液の水相上に展開して単分子膜を作製した。ベル
トドライブ式バリアーによってこの単分子膜を１５ｄｙ
ｎｅ／ａｎの一定表面圧力下において、１５時間放置す
ることによって、重合を行なった。

重合後の単分子膜をシリコンウェハー基板上にＬＢ法で
累積し、透過法により累積膜のＦＴ−ＩＲ吸収スペクト
ルを測定した結果、エステルの特性吸収（１　７　５　
０ｃｍ−’）が低下し、アミドの特性吸収（１６５０ｃ
１１１−’、１　５　５　０　ｃｍ−’）が出現するこ
とにより確認した。

反応率は４０％前後と考えられる。（第一図）実施例２ 両親媒性アミノ酸フェニルエステルリン脂質として具体
例（Ｉ−７）を用いて実施例ｌの方法により重合させた
。２時間放置によりほぼ完全に反応が進行した。

実施例３ 本発明を用いて薄膜法によりリポソームを調製した例を
示す。

両親媒性のアミノ酸メチルエステルリン脂質として具体
例（Ｉ−５）１０■をナス型フラスコに入れクロロホル
ム５ｄを加えて溶解した。クロロホルムをロータリーエ
バボレーターを用いて減圧留去して薄膜を生成した。減
圧乾燥後純水３−を加えて７０℃の水溶に３０秒っけ、
ポルテックスミキサーでｌ分間振とうした。これを３回
つづけて粒径１０００ｎｍ前後のリボンームを得た。さ
らにバス型ソニケーターにより６０℃で超音波処理して
粒径３００ｎｍ以下のリポソームを得た。

これらの形態は電子顕微鏡により観察しリポソームであ
ることを確認した。

実施例４ 具体例（Ｉ−５）の化合物を実施例３の方法で５（６）
一カルポキシルフルオレセイン（ＣＦ）２００ｍＭのｐ
Ｈ７．４リン酸緩衝液で分散してリポソームがＣＦ緩衝
液を内包していることをゲル濾過法によって確認した。

【図面の簡単な説明】

第ｌ図Ａは例示化合物ＣＩ）（Ｒ’　＝ＯＣＨ３、■ ク ＣＨ２０Ｃ　＋　ｇ　Ｈ　ｓ　ｔ ５）の単分子膜の重合過程における（３７°Ｃ、５時間
）赤外吸収スペクトルを示す。 Ｂは重合前のモノマー単分子膜の赤外吸収スペトルを示
す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）一分子中に疎水部とアミノ酸エステル構造を持つ
   親水部を有し、該エステルの離脱基の共役酸のｐＫａが
   １６以下である、両親媒性のリン脂質化合物を含む単分
   子膜または、その累積膜を重合することにより得られる
   ポリペプチド薄膜。