JPH03128380A

JPH03128380A - Ｎ↑５，ｎ↑１↑０―メチレン―５，６，７，８―テトラヒドロ葉酸の塩およびその製造方法

Info

Publication number: JPH03128380A
Application number: JP2191854A
Authority: JP
Inventors: Fabrizio Marazza; ファブリィジオ　マラッツァ; Attilio Melera; アッティリオ　メレーラ; Rene Viterbo; ルネ　ヴィテルボ; Nando Toderi; ナンド　トデーリ
Original assignee: Sapec Fine Chemicals SA
Current assignee: Sapec Fine Chemicals SA
Priority date: 1989-07-21
Filing date: 1990-07-19
Publication date: 1991-05-31
Also published as: BR9003527A; NO903211D0; CA2021042A1; AU619124B2; FI903692A0; EP0409125A1; IE902656A1; NO903211L; AU5905990A; ES2083983T3; EP0409125B1; PT94782A; DE59010025D1; ATE132498T1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〈産業上の利用分野〉本発明は、Ｎ　６　、　Ｎ　１０−メチレン−５，６゜
７．８−テトラヒドロ葉酸の塩、その製造方法、ならび
に制癌化合物の効果を協力的に発現させたり、モして／
または制癌化合物の毒性を低減させたり、そして／また
はヒトおよび／または動物の細胞を保護したりする薬剤
の製造へのその使用に関する。

〈発明の背景〉式ＩＩのＮＳ、！ｔＪｌｏ−メチレンー５，６゜７．８
−テトラヒドロ葉酸（ＣＨ２Ｔ　ＨＦと略称）は、酵素
であるチミジル酸シンセターゼ（ＴＳと略称）を阻害す
る際に、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）および／ま
たはそのプロドラッグ、たとえばフロクスウリジン（Ｆ
ｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ　）　　テガファ−（Ｔｅｇａｆ
ｕｒ）の−種とともに、補因子として作用する化学種で
ある。５−ＦＵまたはそのプロドラッグの一種は、代謝
によって５Ｆ−デオキシウリジン−燐酸（５Ｆ　−ｄ　
ｕ　Ｍ　Ｐと略称）に変化し、これはＣＨ２−ＴＨＦの
存在下で、ＴＳと共有重合によって不可逆的に結合して
、５Ｆ−ｄＵＭＰ／ＴＳ／ＣＨ，−ＴＨＦと記載される
三元錯体が形成する。

５−ＦＵおよびそのプロドラッグは、結腸癌、直腸癌、
および膵臓癌、ならびに他の形態の癌、たとえば乳癌お
よび胃癌を治療する際の化学療法剤として広く使用され
ている。癌細胞に対する細胞毒性を増大させるには、Ｔ
Ｓの阻害率をできるだけ高くする必要がある。そのため
には、これらの細胞に５−ＦＵ　（またはそのプロドラ
ッグの一種）および補因子ＣＨ。

ＴＨＦの双方を適切に供給してやる必要がある。５−Ｆ
Ｕ　（またはそのプロドラッグ）は体外由来の化合物で
、患者に任意所望の量を投与することができるが、ＣＨ
２−ＴＨＦは通常、体内の葉酸プールから数多くの代謝
による変化を経て形成される。しかしこ゛うして形成さ
れたＣＨ，−ＴＨＦの量は、ＴＳを効率的かつ完全に阻
害するうえで十分でない可能性がある。

したがって、ＣＨ，−ＴＨＦの代謝前駆物質である葉酸
カルシウム（ＣａＦと略称）を、５−ＦＵと同時に患者
に大量に投与する臨床治療プロトコールを使用するのが
慣例となっている。トラップ（Ｒ，Ｊ、　ＤｅＬａｐ）
　　エール大学生物学医学雑誌（Ｔｈｅ　Ｙａｌｅ　Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｙａｎｄ　Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ）　６１　、２３　（１９８８）を参照のこと
。こうしたＣａＦの大量投与の結果、下痢や口内炎とい
った副作用が生じる。マリニ（Ｇ、　Ｍａｒｉｎｉ　）
ら、オンコロジー（Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）４４．３３６　
（１９８７）を参照のこと。患者に、それ自体が三元錯
体を形成する種であるＣＨ”−ＴＨＦを適当な量投与す
ることは、純度が十分高く、水に溶けやすく、かつ安定
な化合物の大規模な製造方法が見つかっていないので、
現在に至るまで不可能なままである。

〈従来技術の説明〉ＣＨ，−ＴＨＦを遊離酸として小規模に製造することは
、何人かの著者によって記載されている。プレークレー
ら（Ｒ，Ｌ、　Ｂｌａｋｌｅｙ）　　生化学雑誌（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、　Ｊｏｕｒｎａｌ）　　７２．７０７（１
９５９）；オズボーンら（Ｍ、Ｊ、　０ｓｂｏｒｎ。

Ｐ、Ｔ、Ｔａ１ｂｅｒｔ、Ｆ、Ｍ、Ｈｕｅｎｎｅｋｅｎ
ｓ）　、アメリカ化学会報（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、
　Ｓａｃ、　）　８２．４９２１　　（１９６０）；カ
レンら（Ｒ，Ｇ、　Ｋａｌｌｅｎ。

Ｗ、Ｐ、　　Ｊｅｎｋｓ　　）　　、生物化学雑誌（Ｊ
、　　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、）　２４１．５８５１　（１９６６）；ファ
ノナら（Ｐ、Ｒ，Ｆａｒｉｎａ、　　Ｌ、Ｊ、　　Ｆａ
ｒｉｎａ、　　Ｓ、Ｊ。

Ｂｅｎｋｏｖｉｃ　　）　　アメリカ化学会報（Ｊ、　
　Ａｍ。

Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　）　９５．５４０９　（１９７
３）；ノーリーら（Ｒ，Ｐ、Ｌｅａｒｙ、Ｙ、Ｇａｕｍ
ｏｎｔ、Ｒ。

Ｌ、Ｋ１５ｌｉｕｋ）　　生化学生物物理研究通信（Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍ
ｍ、　）　５６．４８４　（１９７４）：キスリューク
ら（Ｒ，Ｌ。

Ｋ１５ｌｉｕｋ、　Ｄ、　Ｓｔｒｕｍｐｈ、　Ｙ、　Ｇ
ａｕｍｏｎｔ、　Ｒ，Ｐ。

Ｌｅａｒｙ、　Ｌ、　Ｐａ１ｎｔｅ）、医学化学雑誌（
Ｊ、　Ｍｅｄ。

Ｃｈｅｗ、　）　２０．１５３１　　（１９７７）、ボ
ーら（Ｍ、　　Ｐｏｅ、　　Ｌ、Ｍ、　　Ｊａｃｋｍａ
ｎ、　　Ｓ、Ｔ、　　Ｂｅｎｋｏｖｉｃ　　）生化学（
Ｂｉｏｃｈｅｍｆｓｔｒｙ）　１８．５５２７（１９７
９）；およびカルバ−マツテンら（Ｒ。

Ｋａｌｂｅｒｍａｔｔｅｎ、　Ｗ、　５ｔａｅｄｅｌｉ
、　Ｊ、Ｈ，Ｂｉｅｒｉ。

Ｍ、　　Ｖｉｓｃｏｎｔｉｎｉ　　）、ヘルプ・ヒム・
アクタ（Ｈｅｌｖ、　Ｃｈｉｍ、　Ａｃｔａ、　）　６
４．２６２７　（１９８１）を参照のこと。

ザローら（Ｃ，Ｚａｒｏｗ、　Ａ、Ｍ、　Ｐｅ１ｌｉｎ
ｏ、　Ｐ、Ｖ。

Ｄａｎｅｂｅｒｇ　）　　ブレン・バイオケム（Ｐｒｅ
ｐ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、）　１２．２８１　（１９８３）には
、酵素を用いた還元工程を含む「大規模な」製造方法が
記載されている。

しかしいずれの場合でも、生成物を凍結乾燥の形態、ま
たは非晶質粉末以外の形態で単離することはできず（タ
トム・ジュニアら（Ｃ，Ｍ。

Ｔａｔｕｍ　Ｊｒ、、　Ｐ、Ａ、　Ｂｅｎｋｏｖｉｃ、
　Ｓ、Ｔ、　Ｂｅｎｋｏｖｉｃ。

Ｒ，Ｐｏｔｔｓ）　　生化学（Ｂｉｏｃｈｅｒｎｉｓｔ
ｒｙ）　１６．１９０３　（１９７７）を参照のこと）
　また、純度も８０％以下でしか単離できなかったので
、これらの生成物はヒトの治療の用途には不適当であっ
た。

ＣＨ２−ＴＨＦを遊離酸として得る２種の合成方法が記
載されている。

第一の方法式工■：の５，６，７．８−テトラヒドロ葉酸を、ｐＨ７の水溶
液中で過剰のホルムアルデヒドと反応させる。ボーら（
Ｍ、　Ｐｏｅ、　Ｌ、Ｍ、　Ｊａｃｋｍａｎ、　Ｓ、Ｔ
。

Ｂｅｎｋｏｖｉｃ　）　　生化学（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ）　ｌ　８．５５２７　（１９７９）；カルバ−
マツテンら（Ｒ，Ｋａｌｂｅｒｍａｔｔｅｎ、　Ｗ、　
５ｔａｅｄｅｌｉ、　Ｊ、Ｈ。

Ｂｉｅｒｉ、　Ｍ、　Ｖｉｓｃｏｎｔｉｎｉ　）　　ヘ
ルプ・ヒム・アクタ（Ｈｅｌｖ、　Ｃｈｉｍ、　Ａｃｔ
ａ、　）　６４．２６２７（１９８１）；ザローら（Ｃ
，Ｚａｒｏｗ、　　Ａ、ｈｌ。

Ｐｅ１ｌｉｎｏ、　Ｐ、Ｖ、　Ｄａｎｅｂｅｒｇ　）　
　プレ１・バイオケム（Ｐｒｅｐ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　）　ｌ　２．２８１　（１９８３）を参照されたい。

この方法は、式ＩＩ：の遊離酸をミリグラムの単位で製
造する場合にのみ適当で、ＣＨ２ＴＨＦはｐＨ７の水溶
（夜中では不安定な性質を有するので低純度（８０％未
満）の生成物しか得られない。カレンら（Ｒ，Ｇ、　Ｋ
ａｌｌｅｎ、　Ｗ、Ｐ、　Ｊｅｎｋｓ　）　　生物化学
雑誌（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）　２４１．５８
５１　（１９６６）を参照されたい。

第二の方法式■ の塩化物の形態のＮｓ、Ｎ＋ａ−メテニル−５゜６．７
．８−テトラヒドロ葉酸を、無水溶剤中でＮ　ａ　Ｂ　
Ｈ４を用いて還元する。さきに示した式ＩＩの遊離酸で
あるＣＨ２−ＴＨＦが、純度が７５−８０％非晶質固形
分として単離される。フアラデら（Ｐ、　Ｒ，Ｆａｒｉ
ｎａ、　Ｌ、　Ｊ、　Ｆａｒｉｎａ。

Ｓ、Ｊ、　Ｂｅｎｋｏｖｉｃ　）　、アメリカ化学会報
（Ｊ、　Ａｍ。

Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　）　９５．５４０９　（１９７
３）；タトム・ジュニアら（Ｃ，Ｍ、　Ｔａｔｕｍ　Ｊ
ｒ、、　Ｐ、Ａ。

Ｂｅｎｋｏｖｉｃ、　Ｓ、Ｔ、　Ｂｅｎｋｏｖｉｃ、　
Ｒ，Ｐｏｔｔｓ）　、生化学（ＢＬｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ）　１６，１９０３（１９７７）を参照されたい。遊
離酸の形態のＣＨ２ＴＨＦは水に実質的に不溶で、その
点で、非経口製剤には不適当である。

本発明者は驚くべきことに、大規模な製造に適しており
、新規かつ安定で治療上許容できるＣＨ２−ＴＨＦの水
溶性の塩の製造に適した方法を見いだした。しかも、こ
の塩は患者に投与するのに十分な程度に純度が高かった
。

〈発明が解決しようとする課題〉したがって、本発明の一般的な目的は、Ｎ５．Ｎｌ０−
メチレン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の新規な
塩を提供することにある。

本発明のさらなる目的は、これらの塩の製造方法を提供
することにある。

本発明のさらに別の目的は、これらの塩を含有する薬剤
を提供することにある。

これらの塩は、制癌化合物の効果を協力的に発現させた
り、モして／または制癌化合物の毒性を低減させたり、
モして／またはヒトおよび／または動物の細胞を保護し
たりする薬剤の製造に使用することができる。

本発明は、独立クレームに記載された特徴をその特徴と
している。好適実施態様は従属クレームに定義しである
。

〈課題を解決するための手段〉以下に本発明をさらに詳細に説明する。

第１表に、本発明の好適な化合物のいくつかをまとめて
示す。

第 ■ 表Ｈ（既知）Ｎａ＋、　　ピリジニウム［ＨＯ（ＣＨ２）　２ＮＨ３］　” （［ＨＯ（Ｃｔ（ｚ）−］　３ＮＨ１”［ＨＯ（ＣＨ２
）２ＮＨ（ＣＨ３）２］“［（ＣＨ３）３ＣＮＨ３］　
３［（Ｌ）−リジン１゛［（Ｌ）−アルギニンド１／２Ｃａ”” １／２Ｍｇ” １ＲＮａ″″ ｍ１ｎｉ０第１Ｉ表に、本発明のいくつかの好適な化合物の製法を
模式的に示す。

第Ｉ表ｂａＲ＝Ｎ’　、　Ｎ”−Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ　−５，６，
７，８−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｔｅｒｏｙｌ　−本発
明の種々の塩は、式３ａの化合物から直接製造すること
も（方法Ａ）　また、アルカリ土類金属塩、たとえば式
３１のカルシウム塩を、対応する陽イオンまたはアミン
の蓚酸塩と反応させることによって製造することもでき
る（方法Ｂ）この方法で得られたＣＨ，−ＴＨＦの塩のＨＰＬＣで測
定した純度は、８３．８−９２．４の範囲である。この
調製物の主要な「混入物」は周知かつ治療上有用な（６
Ｒ３）−Ｎ’−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ
葉酸であり、したがって、調製物中の還元葉酸の総量は
平均して９５％である。

方法Ａ式３ａの化合物の製造を、式Ｖの化合物の溶剤、たとえ
ばＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）への溶液を、塩基
、たとえばピリジンの存在下で、所定量のＮ　ａ　Ｂ　
Ｈ４と反応させることにより式３ｂの化合物を得、これ
をさらに低温のＫＯＨ溶液に溶解し、酸性化することに
より式３ａの化合物を得ることによって行う。

次にこの式３ａの化合物を製剤上許容できる塩基、たと
えばエタノールアミン、トリエタノールアミン、２−ジ
メチルアミノエタノール、ｔ−ブチルアミン、またはア
ミノ酸、たとえばリジン、アルギニンと反応させること
により、水溶性の塩を形成する。式３ａの化合物を、陽
イオン、たとえばＣａ”“　Ｍｇ２“Ｌｉ″″　Ｎａ”
　　Ｋ”と反応させることによって対応する水溶性の塩
を形成し、この塩を水溶液から有機溶剤、たとえばエタ
ノール、アセトンを添加することにより沈殿させること
によって単離することもできる。第１Ｉ表を参照された
い。

方法Ｂ方法Ａによって得られたアルカリ土類金属の塩、たとえ
ば式３１の化合物を、選ばれたアミンあるいは対応する
アミノ酸または対応する陽イオンの蓚酸塩と反応させる
。水に不溶性の蓚酸アルカリ土類金属が／ｆ：殿するの
で、それと対応して誘導された塩は溶液中に残存し、こ
の塩は水溶性有機溶剤、たとえばエタノール、アセトン
を添加してはじめて沈殿する。第１Ｉ表を参照されたい
。

方法Ｃきわめて驚くべきことに、本発明者は、大規模な製造に
適した、Ｎ’　、Ｎ’−メチレン−５，６，７，８−テ
トラヒドロ葉酸のアルカリ土類金属塩のさらに別の第三
の製造方法を見いだした。

この第三の本発明の方法を用いると、アルカリ土類金属
塩が高収率かつ高純度で得られる。

さらに、この本発明の方法は水性溶媒中で実施されるの
で、所望のアルカリ土類金属塩の単離が極めて単純にな
る。

この本発明の方法では、５，６，７．８−テトラヒドロ
葉酸の水溶性の塩の水溶液を用意し次にこれをホルムア
ルデヒドと反応させる。

次にこの反応混合物にアルカリ土類金属塩の水溶を夜を
加えることにより、対応するアルカリ土類金属塩が沈殿
する。

ＮＳ　　Ｎｌ０−メチレン−５，６，７，８−テトラヒ
ドロ葉酸のカルシウム塩およびマグネシウム塩が好適で
ある。

５．６，７．８−テトラヒドロ葉酸は、たとえばカリフ
ァら（Ｅ、　Ｋｈａｌｉｆａ、　Ａ、　Ｎ、　Ｇａｎｇ
ｕｌｙ。

Ｊ、Ｈ，Ｂｉｅｒｉ、　Ｍ、　Ｖｉｓｃｏｎｔｉｎｉ　
）　　ヘルプ・ヒム・アクタ（Ｈｅｌｖ、　Ｃｈ、　Ａ
ｃｔａ）　　（１９８０）６３．２５５４の教示内容に
したがって製造することができる。

本発明の塩は、制癌化合物の効果を協力的に発現させた
り、そして／または制癌化合物の毒性を低減させたり、
そして／またはヒトおよび／または動物の細胞を保護し
たりする薬剤の製造に使用することができる。この薬剤
は通常、少なくとも１種の活性の塩を、単位投与量あた
り１　ｍｇ　−５００ｍｇ、特に５ｍｇ−１５０ｍｇの
量含有する。この薬剤は、好ましくは非経口および／ま
たは経口製剤の形態である。

以下の実施例は本発明を例示するものである。これらの
化合物の臨床での結果、治療への適用についても説明す
る。

〈実施例〉実施例１式３ａの（６Ｒ８）−Ｎ’　、Ｎ”−メチレン−５，６
，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造２４．６ｇの式Ｖの
化合物（テンプルら（Ｃ，Ｔｅｍｐｌｅ、　Ｒ，Ｄ、　
Ｅｌｌｉｏｔ、　Ｊ、Ｄ、　Ｒｏｓｅ、　Ｊ、Ａ。

Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ）　　医学化学雑誌（Ｊ、　Ｍｅ
ｄ、　Ｃｈｅｍ）２２．７３１　（１９７９））にした
がって製造）の３００ｍＩ２の乾燥ＤＭＳＯとｌｏｏｍ
ｊ２の乾燥ピリジンの混合物への溶液に、酸素を除去し
つつ室温でかきまぜながら、２．０ｇのＮ　ａ　Ｂ　Ｈ
４の１００ｒｒ＋Ｊ２のＤＭＳＯへの溶液を１時間にわ
たって滴下して加えた。次にこの混合物を２βのアセト
ンで２０分にわたって希釈した。混合物を１時間にわた
って＋４℃の温度でかきまぜた後、沈殿した式３ｂの塩
の混合物を濾過によって集め、新鮮なアセトンで３回洗
浄した。減圧下で乾燥したところ、１６．１７ｇの式３
ｂの未精製化合物が単離された。

ＨＰＬＣによって分析したところ、この生成物の純度は
８７，１％であった。

上述の生成物を４２０ｍＩ２．の脱気した水に加え、酸
素を除去しつつ＋４°Ｃの温度でかきまぜた。０．５Ｍ
の低温のＫＯＨをこの懸濁’ｔ（ｌに、完全に溶解する
のが観察されるまで、かきまぜながら滴下して加えた。

このようにして得られた溶液のｐＨの値は７．５で、こ
れに低温のＩＮＨＣｌを上澄のｐＨの値が３．９５の値
となるまで滴下して加えることにより、式３ａの遊離酸
を沈殿させた。さらに＋４°Ｃにて１０分間かきまぜた
後、式３ａの遊離酸を濾過によって集め、冷水で１回、
アセトンで１回、そして過酸化物を含有しないジエチル
エーテルで１回洗〆争した。

減圧下で乾燥したところ、１１．３８ｇの式３ａの非晶
質化合物が単離された。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度８６，５％／Ｎ５−メチ
ルーＴＨＦ、７．６％この生成物をこれ以上精製することはしなかったが、以
下に説明するようにして、いくつかの塩に転化した。

実施例２式３ｃの（６Ｒ３）−Ｎ５．Ｎ”−メチレン−５，６，
７，８−テトラヒドロ葉酸のエタノールアミン塩の製造
（方法Ａ）１１．３６ｇの式３ａの化合物を１７０ｔｒ＋Ｊ２の乾
燥ＤＭＳＯに溶解した溶液に、酸素を除去しつつ室温で
かきまぜながら、３．０ｍ℃のエタノールアミン（２当
量）の５０ｍβのＤＭＳＯへの溶液を滴下して加えた。

次にこの混合物をわずかな濁り度から濾別し、６００ｍ
（ｌの酢酸エチルにかきまぜながら徐々に加えた。室温
で２０分間さらにかきまぜた後、沈殿した生成物を濾過
によって集め、酢酸エチルで２回、ジエチルエーテルで
１回洗浄した。減圧下で乾燥したところ、１４．２２ｇ
の式３ｃの化合物が単離された。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度８３．８％／Ｎ８−メチ
ルーＴＨＦ、７．１％ＵＶ　（ｃ＝２０ｍｇ／ｐＨ７，３のＯ，ＩＭ燐酸緩衝
液ＩＩ２．）：んｍａｘ　＝　２９３　ｎｍ　（ｅ　　＝　４３０００
）ルｍｉｎ　＝　２４７　ｎｍＡｍａｘ　／　Ａｍ１ｎ　＝　３．９［α］　Ｄ　＝　＋１０．４°　（ｃ＝１／ｐＨ７，３
の０．１Ｍ燐酸緩衝液）ＮＭＲ（２２０ＭＨｚ／ＤＭＳＯ−ピリジン９：１中）
：　５．０５ｐｐＭ　（ＩＨ）に２つの特徴的なダブレ
ット（Ｊ＝４Ｈ２）／Ｃ−１１メチレンプロトンに対し
て３．８５ｐｐＭ（ＩＨ）実施例３式３ｄ（７）（６ＲＳ）−Ｎ’　、Ｎ”−メチｌｚ：／
−５．６，７．８−テトラヒドロ葉酸のトリエタノール
アミン塩の製造（方法Ａ）４．３５ｇの式３ａの化合物の５０ｍβの乾燥ＤＭＳＯ
への溶液に、アルゴン雰囲気中で室温にてかきまぜなが
ら、２．８４ｇのトリエタノールアミン（２当量）の１
４ｍｊ２のＤＭＳＯへの溶液を滴下して加えた。少量の
白色沈殿物を濾過によって除去した後、溶液を２２０ｍ
Ｉ２のエタノールと１１０ｍＩ２のジエチルエーテルの
混合物にかきまぜながら滴下して加えた。

懸濁液を＋４℃の温度でさらに３０分かきまぜた。固形
分を濾過によって集め、２：１のエタノール／ジエチル
エーテルで１回、ジエチルエーテルで１回洗浄し、そし
て減圧下で乾燥したところ、４．８８ｇの式３ｄの化合
物が得られた。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度９０．３％／Ｎ’−ｙｔ
チ）Ｉ、−ＴＨＦ、５．８％ＵＶ　（ｃ＝２０ｍｇ／ｐ
Ｈ７，３のＯ，１Ｍ燐酸緩衝液１り：んｍａｘ　＝　２９５　ｎｍ　（ε　＝　３７８００）
んｍｉｎ　＝　２４６　ｎｍＡ　ｍａｘ　／　Ａ　ｍｉｎ　＝　４．９［α］　Ｄ　
＝　＋１１．７”　（ｃ＝１／ｐＨ７，３の０．１Ｍ燐
酸緩衝液）Ｎ　Ｍ　Ｒ（２２０Ｍ　Ｈｚ　／　Ｄ　２０　／　Ｎ　
　ａ　ＯＤ中）：５．０３ｐｐＭ　（ＬＨ）に２つの特
徴的なダブレット（Ｊ＝４Ｈｚ）／Ｃ−１１メチレンプ
ロトンに対して３　、　９０　ｐ　ｐ　Ｍ　（Ｌ　Ｈ）
実施例４式３ｅの（６Ｒ３）−Ｎ５．Ｎ’−メチレン−５，６，
７，８−テトラヒドロ葉酸の２−ジメチルアミンエタノ
ール塩の製造（方法Ａ）４．０ｇの式３ａの化合物の４
６ｍ尼の乾燥ＤＭＳＯへの溶液に、酸素を除去しつつ室
温にてかきまぜながら、１．７６ｍｊ２の２−ジメチル
アミンエタノール（２当量）の１３ｍｊ２のＤ　Ｍ　Ｓ
　Ｏへの溶液を滴下して加えた。少量の沈殿物を濾過に
よって除去した後、溶液を２００ｍ４のエタノールと１
００ｍｇのジエチルエーテルの温度が＋４℃の混合物に
かきまぜながら滴下して加えた。同じ温度でさらに３０
分かきまぜた後、固形分を濾過によって集め、２：１の
エタノール／ジエチルエーテルで１回、ジエチルエーテ
ルで１回洗浄した。減圧下で乾燥したところ、３．９３
ｇの式３ｅの化合物が単離された。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度９１％／　Ｎ　５−メチ
ル−ＴＨＦ、５．７％ＵＶ　（ｃ＝２０ｍｇ／ｐＨ７，３のＯ，１Ｍ燐酸緩衝
液１℃）：Ｌｍａｘ　＝　２９５　ｎｍ　（ε＝　３１２００）χ
ｍｉｎ　＝　２４６　ｎｍＡ　ｍａｘ　／　Ａ　ｍｉｎ　＝　４．５［ａ］　Ｄ　
＝　＋１２．１　”　　（ｃ＝１／ｐＨ７，３の０．１
Ｍ燐酸緩衝液）Ｎ　Ｍ　Ｒ（２２０Ｍ　Ｈｚ　／　Ｄ　ｚ　Ｏ／　Ｎ　
ａ　ＯＤ中）：５．０３ｐｐＭ　（ＩＨ）に２つの特徴
的なダブレット（Ｊ　＝　４　Ｈｚ　）　／　Ｃ−１１
メチレンプロトンに対して３．９０ｐｐＭ　（Ｌ　Ｈ）
実施例５式３ｆの（６ＲＳ）−Ｎ’　、Ｎ”−メチレン−５，６
，７，８−テトラヒドロ葉酸のｔ−ブチルアミン塩の製
造（方法Ａ）４．３ｇの式３ａの化合物の６０ｍＩ２の乾燥ＤＭＳＯ
への溶液に、アルゴン雰囲気中で室温にてかきまぜなが
ら、１．９７ｒｒ＋ｊ２のｔ−ブチルアミン（２当量）
の１７ｒｒ＋４２のＤＭＳＯへの溶液を滴下して加えた
。２．３分かきまぜたところ、濃厚な沈殿物が形成した
。混合物を＋１８℃の温度でさらに１時間かきまぜた。

生成物の単離な、繰返し３５００ｒｐｍにて遠心し、ま
ず１００ｒｒ＋ｊ２のエタノールと５０ｍβのジエチル
エーテルの混合物に、次に純粋なジエチルエーテルに再
度懸濁することによって行った。

減圧下で乾燥したところ、４．６３ｇの式３ｆの化合物
が単離された。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度８９％／　Ｎ　Ｓ−メチ
ルーＴＨＦ、７．１％ＵＶ　（ｃ＝２０ｍｇ／ｐＨ７，３の０．１Ｍ燐酸緩衝
液ｌｌ２）：えｍａｘ　＝　２９５　ｎｍ　（ε　＝　３２７００）
Ｌｍｉｎ　　＝　　２４６　　ｎｍＡ　ｍａｘ　　／　Ａ　ｍｉｎ　　＝　　４．５［ａ］
　Ｄ　＝＋１１．０°　（ｃ＝１／ｐＨ７，３の０．１
Ｍ燐酸緩衝液）Ｎ　Ｍ　Ｒ（２２０Ｍ　Ｈｚ　／　Ｄ　、　Ｏ／　Ｎ　
ａ　ＯＤ中）：　５．０３ｐｐＭ　（ＬＨ）に２つの特
徴的なダブレット（Ｊ＝４Ｈｚ）／Ｃ−１１メチレンプ
ロトンに対して３．９０ｐｐＭ　（Ｌ　Ｈ）実施例６式３ｇの（６Ｒ３）−Ｎ’　、Ｎ”−メチレン−５，６
，７，８−テトラヒドロ葉酸の（Ｌ）−リジン塩の製造
（方法Ａ）４．０５ｇの式３ａの化合物の５５ｍｆｆの乾燥ＤＭＳ
Ｏへの溶液に、アルゴン雰囲気中で室温にてかきまぜな
がら、２．６０ｇの（Ｌ）リジン（２当量）の１５ｍβ
のＤＭＳＯへの溶液を滴下して加えた。２．３分かきま
ぜたところ、濃厚な沈殿物が形成した。混合物を＋１８
℃の温度でさらに１時間かきまぜた。生成物の単離を、
繰返し３５００ｒｐｍにて遠心し、まず１００ｒｒ＋４
２のエタノールと５０ｍｊ２のジエチルエーテルの混合
物に、次に純粋なジエチルエーテルに再度懸濁すること
によって行った。

減圧下で乾燥したところ、５．０３ｇの式３ｇの化合物
が単離された。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度９０％／　Ｎ　８−メチ
ル−ＴＨＦ、６．１％ＵＶ　（ｃ＝２０ｍｇ／ｐＨ７，３のＯ，１Ｍ燐酸緩衝
液ｌｌ２）：んｍａｘ　＝　２９５　ｎｍ　（Ｅ　　＝　２９５００
）Ｌ　ｍｉｎ　＝　２４６　ｎｍＡ　ｍａｘ　／　Ａ　ｍｉｎ　＝　４．４［α］　Ｄ　
＝　＋１１．５　＠　（Ｃ＝１／ｐＨ７，３の０．１Ｍ
燐酸緩衝液）Ｎ　Ｍ　Ｒ（２２０Ｍ　Ｈｚ　／　Ｄ　ｚ　Ｏ／　Ｎ　
ａ　ＯＤ中）：　５．０３ｐｐＭ　（ＬＨ）に２つの特
徴的なダブレット（Ｊ＝４Ｈｚ）／Ｃ−１１メチレンプ
ロトンに対して３．９０ｐｐＭ　（ＩＨ）実施例７式３ｈの（６ＲＳ）−Ｎ’　　Ｎ”−メチレン−５，６
，７，８−テトラヒドロ葉酸の（Ｌ）−アルギニン塩の
製造（方法Ａ）式３ｈの（Ｌ）−アルギニン塩を、実施例６に説明した
のと類似した方法で製造した。

実施例８式３ｉの（６ＲＳ）−Ｎ’　　Ｎ’−メチレン−５，６
，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の製造（方
法Ａ）１．０ｇの式３ｂの原料化合物を少量ずつ、１６ｍｇの
脱気した水と１滴のｌＮＮａＯＨの混合物に添加し、＋
４℃の温度で激しくかきまぜた。添加の間、ｌＮＮａＯ
Ｈをときどき加えることにより、混合物のｐＨの値を約
９．０に保った。次に０．９２ｍＩ２の２Ｍ塩化カルシ
ウム溶液を混合物に加えた。１０分間かきまぜた後、溶
液を濾過によって不溶性の沈殿物から分離した。最後に
、混合物を＋４℃の温度でかきまぜながら、２０ｒｎｊ
２のアセトンを滴下して希釈したところ、黄色味を帯び
た沈殿物が得られ、これを濾過によって単離し、無水エ
タノールで１回、アセトンで１回洗浄し、減圧下で乾燥
した。このようにして、６７３ｍｇの式３１のカルシウ
ム塩が単離された。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度９１％／Ｎ’−メチルー
ＴＨＦ、６％ＵＶ　（ｃ＝２０ｍｇ／ｐＨ７，３のＯ，ＬＭ燐酸緩衝
液ｌβ）：んｍａｘ　＝　２９６　ｎｍ　（ｅ　　＝　２８９００
）Ｌｍｉｎ　＝　２４５　ｎｍＡ　ｍａｘ　／　Ａ　ｍｉｎ　＝　３．６８［ａｌ　Ｄ
　　＝＋１２．６　　　（ｃ＝１１０．０１ＮＮａＯＨ
）８２０含量（カール・フィッシャーの方法による）：８
．９％ＣＨｚ−ＴＨＦ　−Ｃａ　ｘ　３．５　Ｈ，Ｏについて
の元素分析計算値　　　　実験値％Ｃ４３，０２４３，２７％Ｈ５，０５４，８４％Ｎ　　　１７．５６　　１７．５７％Ｃａ　　　７．１８　　　６．９９実施例９式３にの（６Ｒ３）−Ｎ’　　Ｎ”−メチレン−５，６
，７，８−テトラヒドロ葉酸のマグネシウム塩の製造（
方法Ａ）１．０ｇの式３ｂの原料化合物を少量ずつ、１６ｍＪ２
の脱気した水と１滴のＩ　ＮＮａＯＨの混合物に添加し
、＋４℃の温度で激しくかきまぜた。添加の間、ｌＮＮ
ａＯＨをときどき加えることにより、混合物のｐＨの値
を約９．０に保った。次に０．９２ｍｊ２の２Ｍ塩化マ
グネシウム溶液を混合物に加えた。１０分間かきまぜた
後、溶液を濾過によってわずかに不溶性の沈殿物から分
離した。混合物を＋４℃の温度でかきまぜながら、２０
ｍ１２のアセトンを滴下して希釈した。黄色味を帯びた
沈殿物が得られ、これを濾過によって単離し、Ｈ２Ｏで
１回、エタノールで１回、アセトンで１回洗浄し、減圧
下で乾燥した。このようにして、５３７ｍｇの式３にの
マグネシウム塩が単離された。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度９２．４％／Ｎ５−メチ
ルーＴＨＦ、３．４％ＬＩ　Ｖ　（ｃ　＝　２０　ｍ　ｇ　／　ｐ　Ｈ７、３
のＯ，ＬＭ燐酸緩衝液ｉ℃）：んｍａｘ　＝　２９６　ｎｍ　（ε＝　２７６００）え
ｍｉｎ　　＝　２４４　　ｎｍＡ　ｍａｘ　　／　Ａ　ｍｉｎ　　＝　　３．６８［α
］’Ｄ　　＝　　＋１２．１　　　　（ｃ＝１１０．　
　ＩＮＮ　ａ　Ｏｌ（）Ｈ２０含量（カール・フィッシャーの方法による）＝８
．９％ＣＨ，−ＴＩＩＦ・Ｍｇ　ｘ　５　Ｈ□０についての元素分析＊計算値　
　　　実験値％Ｃ４２，１７４２，２６％Ｈ５，４９５，５１％Ｎ　　　１７．２１　　１６．３０％Ｍｇ　　　４．２７　　　５．０２＊サンプルは空気中で乾燥：１５．８％Ｈ２０＝五水和
物実施例１０式３１の（６Ｒ３）−Ｎ５．Ｎ”−メチレン−５，６，
７，８−テトラヒドロ葉酸のナトリウム塩の製造（方法
Ｂ）１．０ｇの式３１のカルシウム塩を、蓚酸ナトリウムの
Ｈ２Ｏへの０．１３３Ｍ溶液１５ｍ尼に加え、酸素を除
去しつつ＋４℃の温度でかきまぜた。同じ温度で３０分
間かきまぜた後、沈殿した蓚酸カルシウムを混合物から
遠心によって除去したところ、透明な上澄が得られ、こ
れを＋４℃の温度でかきまぜながら７５ｍ℃のアセトン
で徐々に希釈した。得られた沈殿物な濾過によって単離
し、新鮮なアセトンで１回洗浄し、減圧下で乾燥したと
ころ、式３１の化合物が黄色粉末として７３７ｍｇ得ら
れた。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度８８．６％／Ｎ５−メチ
ルーＴＨＦ、４．５％ＵＶ　（ｃ＝２０ｍｇ／ｐＨ７，３の０．１Ｍ燐酸緩衝
液Ｍ２）：んｍａｘ　＝　２９６　ｎｍ　（ε＝　２９６００）九
ｍｉｎ　＝　２４５　ｎｍＡ　ｍａｘ　／　Ａ　ｍｉｎ　＝４．００［αＩＤ　　
＝　　＋１２．５　　　（ｃ＝１１０．０ｆＮＮａＯＨ
）実施例１１式３ｆの（６Ｒ３）−Ｎ’　、Ｎｌ０−メチレン−５，
６，７，８−テトラヒドロ葉酸のｔ−ブチルアミン塩の
製造（方法Ｂ）１．０ｇの式３１のカルシウム塩を、ｔ−ブチルアミン
の確酸塩の０．１３３Ｍ溶戚１５ｍ℃に加え、アルゴン
雰囲気中で＋４℃の温度でかきまぜた。同じ温度で３０
分間かきまぜた後、沈殿した蓚酸カルシウムを遠心によ
って除去し、得られた透明な上澄を＋４℃の温度でかき
まぜながら７５ｍｎのアセトンで徐々に希釈した。得ら
れた沈殿物を濾過によって単離し、新鮮なアセトンで１
回洗浄し、減圧下で乾燥して、黄色粉末の式３ｆの化合
物を９６５ｍｇ得た。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度８７．２％／Ｎ５−メチ
ルーＴＨＦ、５．１％［これ以外の分析データについては、実施例５を参照さ
れたい。］実施例１２式３にの（６ＲＳ）−Ｎ５．Ｎ”−メチレン−５，６，
７，８−テトラヒドロ葉酸のマグネシウム塩の製造（方
法Ｃ）６５ｇの５．６，７．８−テトラヒドロ葉酸を４００ｍ
βの水に懸濁し、濃アンモニアを加えることにより、ｐ
Ｈの値を９．０の値に調整したところ、透明な溶液が得
られた。次に、１３ｒｎｊ２の３６％ホルムアルデヒド
水溶液を滴下して加え、混合物を室温にて１０分間静置
した。

５０ｇのＭｇＣ１，・６Ｈ，Ｏの５０ｍｆｆの水への溶
液を加えた後、得られた混合物を室温にて３０分間かき
まぜ、次に２時間静置した。

次に、目的の生成物を吸引濾過し、水で１回、エタノー
ルで１回洗浄した。５０℃にて減圧下で乾燥したところ
、２７ｇの純粋なＮ５、Ｎ１０−メチレン−５，６，７
，８−テトラヒドロ葉酸のマグネシウム塩が単離された
。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度９８．８％ＵＶ　（ｃ＝
２０ｍｇ１０．０ＩＮＮａＯＨ１旧　：んｍａｘ　＝２９６　ｎｍ　（ｃ　　＝　３０２００）
九ｍｉｎ　＝　２４５　ｎｍＡ　ｍａｘ　／　Ａ　ｍｉｎ　＝　４．８２［ａ］Ｄ　
　＝　　＋９．４°　（ｃ＝１１０．０ＩＮＮａＯＨ）実施例１３式３１の（６ＲＳ）−Ｎ’　　Ｎ”−メチレン−５，６
，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の製造（方
法Ｃ）１９０ｇの５．６，７．８−テトラヒドロ葉酸を１２５
０ｍＩ２の水に懸濁した。次に、９０ｍβの濃アンモニ
アと５０ｍβのピリジンを加えることにより、ｐＨの値
を８．５とした。

４０ｍβの３６％ホルムアルデヒド水溶液を加えた後、
混合物を活性炭とセライトの層を通して濾過した。

こうして得られた透明な溶液に、２００ｍβの３０％塩
化カルシウム溶液をかきまぜながら加え、ｐＨの値を濃
アンモニアの添加により９．０の値に調整した。

混合物を＋５℃の温度に冷却し、２時間静置した。次に
、濾別し、得られた生成物を水で１回、エタノールで１
回洗浄した。５０℃にて減圧下で乾燥したところ、１８
０ｇの純粋なＮ’、Ｎ１０−メチレン−５，６，７，８
−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩が単離された。

ＨＰＬＣによる分析結果：純度９６．５％／Ｎ５−メチ
ルＴＨＦ、０．６％ＵＶ　（ｃ＝２０ｍｇ１０．０ＩＮＮａＯＨ１ｊ２）：んｍａｘ　＝　２９６　ｎｍ　（ε　＝　２６４００）
尤ｍｉｎ　　＝　　２４５　　ｎｍＡｍａｘ　　／　Ａｍ１ｎ　　＝　　４．８７［ａ］　
　Ｄ　　＝　　＋１７．３　　　　（ｃ＝１１０．　０
１ＮＮａＯＨ）実施例２−１１に対応する（６Ｒ）−および（６Ｓ）−
Ｎ’　、Ｎ”−メチレン−５，６゜７．８−テトラヒド
ロ葉酸の塩も、それぞれ（６Ｒ）および（６Ｓ）遊離酸
から出発することにより、同様にして製造した。

式３ｃ、３ｄ、３ｅ、および３ｆの化合物の０．１Ｍ燐
酸緩衝液中での安定性標記の各化合物の０．１Ｍ燐酸緩衝液／ｐＨ９，０への
０．１％溶液を、０．６０゜１２０．３００分経過時に
、いずれも２．５μβを注入して、ＨＰＬＣによって分
析した。

時間Ｘ経過後の回収率（％）（Ｒｘ）を次式によって求
めた。

Ｒｘ　＝　（Ｂ／Ａ）　　　１００式中のＡは、時間Ｏの時点でのＣＨ２−Ｔ　ＨＦのピー
クの合計面積、そしてＢは、時間Ｘの時点でのピークの合計面積を示す。

時間０２０００Ｒｘ（３ｃ）　　　Ｒｘ（３ｄ）１００　　　　　１００９６．７　　　　９５．７９３．３　　　　９２．１８５．１Ｒｘ（３ｅ）　　　Ｒｘ（３ｆ）１００　　　　　１００９７．６　　　　９７．０９４．２　　　　９４．３８８．３　　　　８７．５注射剤ａ）液体刺入アンプル５−１５０ｍｇの量の実施例２−１３の化合物を、製剤
上許容できる緩衝液、たとえば０．１Ｍ燐酸緩衝液に溶
解し、溶液のｐＨの値を９．０とした。

溶、・夜を滅菌されるまで濾過し、暗色のガラス製アン
プルに充填し、これを滅菌条件下で封入した。

実施例実施例２−１３の化合物：５　１５０ｍｇｐＨ９，０に
調整した緩衝ｉ？！：１−５０ｍ氾ｂ）凍結乾燥製剤５０−２５０ｍｇの量の実施例２−１３の化合物を、製
剤上許容できる緩衝液、たとえば０．１Ｍ燐酸緩衝７夜
、あるいは生理食塩水に溶解した。溶液を滅菌されるま
で濾過し、バイアル瓶に充填し、当業者に周知の方法で
凍結乾燥した。必要時には、投与に先だって、凍結乾燥
粉末を滅菌水を添加することにより復元することができ
る。

実施例実施例２−１３の化合物：５０−２５０ｍｇ緩衝液または生理食塩水：３−２３−２Ｏ滅菌溶ｌ夜の
凍結乾燥経口投与製剤経口製剤の例として、内服用コーティング錠の配合を記
載するが、それ以外の経口製剤、たとえば内服用コーテ
ィングカプセルも同様の方法で製造することができる。

内服用コーティング錠実施例２−１３の成分を５−３０ｍｇ含有することがで
きる内服用コーティング錠の製造を、以下の当業界でそ
れ自体公知の方法で行った。その際、内服用コーティン
グは、「レミントン製剤科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ　　
ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｒ＋ｃｅｓ）　
Ｊ　、第１６１４頁、第１５版、１９７５、および「産
業調剤の理論と実践（Ｔｈｅｏｒｙ　ａｎｄ　Ｐｒａｃ
ｔｉｃｅ　ｏｆ　ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＰｈａｒｍａｃ
ｙ）　Ｊ　　ラックマン（Ｌａｃｋｍａｎ　）　　リバ
ーマン（Ｌｉｂｅｒｍａｎ）　　カニッヒ（Ｃａｎｉｇ
　）第１１６．３７１　４７０頁、第２版、１９７６に
したがって行った。

実施例実施例１−１３の化合物：５−３０ｍｇラクトースＵＳ
Ｐ　：１５０−１２５ｍｇデンプンＮＦ　：　３５−３
０ｍｇステアリン酸マグネシウムＮＦ　：　３ｍｇユードラギ
ット　（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）　Ｎ　Ｆ　：　４　ｍ　ｇ
タルクＮＦ　：　４ｍｇプロ・ピレングリコール６００ＯＮＦ＋０．　４ｍｇｕｓｐ　：　　米国薬局方ＮＦ：　国民医薬品処方集Ｎ’　　Ｎ’−メチレン−５，６，７，８−テトラヒド
ロ葉酸の塩の臨床での結果および治療への適用上述の化合物の治療への適用例としては、以下の臨床で
の結果を挙げることができる。

患者Ａ性別二女性年齢＝１９診断：呼吸困難と言語障害を伴う前原性肉腫治療：５−フルオロウラシルを静注により投与しく３０
０−７５０ｍｇ／週）　それと並行してＮ’　　Ｎ’−
メチレン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシ
ウム塩を静注により投与（ｌＯＯｍｇ／週）５週間の治療後の臨床所見ニー腫瘍体積の目にみえる減少一呼吸困難および言語障害の消失患者Ｂ性別二男性年齢：５２診断：肝臓への転移を伴う直腸癌治療：５−フルオロウラシルを静注により投与しく３０
０ｍｇ／週）　それと並行してＮ５．Ｎ”−メチレン−
５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩を静
注により投与（ｌｏｏｍｇ／週）５週間の治療後の臨床所見ニー腫瘍の壊死および壊死組織の排出一患者の体重の増加なお、これに先立つ、同等量の５−フルオロウラシルお
よびロイコボリン−カルシウムを用いたこの患者の治療
では、臨床状態に目だった改善は見られなかった。

患者Ｃ性別：女性年齢：５３詮断：左側の乳癌治療＝５−フルオロウラシルを静注により投与しく３週
間にわたって２ｘ５００ｍｇ／週、そして次に２週間に
わたって２ｘ２５０ｍｇ／週）　それと並行してＮ５．
Ｎ１０−メチレン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸
のカルシウム塩を静注により投与（１００ｍ　ｇ　／　
５−フルオロウラシルの投与）８週間の治療後の臨床所見ニー腫瘍が視診および触診では検知不能となる一線維性廠痕の治癒本発明の化合物の治療への適用は、Ｎ６Ｎ１０−メチレ
ン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の塩を５−フル
オロウラシルと併用した上述の腫瘍の治療に限定される
ものではなく、上記以外の種類の腫瘍の、Ｎ　’　、　
Ｎ　”−メチレン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸
の塩を５−フルオロウラシルまたは他の化学療法剤、た
とえば具体的には、フロクスウリジン（ＦＵＤＲ）　　
メトトレキサート、シスプラチン、アドリアマイシン、
ビンクリスチンなどと併用した治療も包含される。

以上に本発明の現在の時点での好適な態様を示し、説明
したが、本発明がこれらの態様に限定されることはなく
、特許請求の範囲の範囲内でこれら以外にもさまざまな
態様で用いられ実施されうることを、はっきり理解され
たい。

〈発明の効果〉上記の詳細な説明および実施例から明らかなように、本
発明は高純度で大量に生産可能な方法を提供し、これに
より得られる化合物は薬剤として使用でき、薬剤として
使用したとき制癌化合物の効果の助長、毒性の低下、細
胞の保護を効果的に行うことができる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）（６ＲＳ）−ジアステレオ異性体の混合物の形態
、または単一の（６Ｒ）または（６Ｓ）ジアステレオ異性体の形態の、式 I ａおよび
I ｂ： ▲数式、化学式、表等があります▼ I ａ ▲数式、化学式、表等があります▼ I ｂ（式中のＲは、多価の有機および／または無機陽イオン
で、Ｒ＾１およびＲ＾２は、一価の有機および／または無機
陽イオンで、Ｒ＾１とＲ＾２は同じでも異なっていても
よく、そしてＡは式： ▲数式、化学式、表等があります▼ の残基である）のＮ＾５、Ｎ＾１＾０−メチレン−５，６，７，８−テ
トラヒドロ葉酸の塩。
（２）上記塩が、製剤上、そして／または治療上許容で
きる塩であることを特徴とする請求項１に記載の塩。
（３）上記無機陽イオンが、アルカリ金属の陽イオンま
たはアルカリ土類金属の陽イオン、好ましくはＬｉ＾＋
、Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋、Ｃａ＾２＾＋、Ｍｇ＾２＾＋であ
ることを特徴とする請求項１または２に記載の塩。
（４）上記有機陽イオンが、エタノールアミン、トリエ
タノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、ｔ−
ブチルアミン、塩基性アミノ酸、たとえばリジン、特に
（Ｌ）−リジンまたはアルギニン、特に（Ｌ）−アルギ
ニンよりなる群から選ばれることを特徴とする請求項１
または２に記載の塩。
（５）（６ＲＳ）−ジアステレオ異性体の混合物の形態
、または単一の（６Ｒ）または（６Ｓ）ジアステレオ異
性体の形態の、式II： ▲数式、化学式、表等があります▼（II）のＮ＾５、Ｎ＾１＾０−メチレン−５，６，７，８−テ
トラヒドロ葉酸を用意し、そして次にこれを有機および
／または無機塩基、または無機陽イオンの塩とともに反
応させることを特徴とする請求項１ないし４のいずれか
に記載の塩の製造方法。
（６）上記反応を、好ましくはジメチルスルホキシド、
ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
、Ｎ−メチルピロリドン、および水から選ばれる少なく
とも一種の溶剤中で行うことを特徴とする請求項５に記
載の方法。
（７）式III： ▲数式、化学式、表等があります▼（III）（式中のＲ′は、アルカリ土類金属の陽イオン、好まし
くはＣａ＾２＾＋、Ｍｇ＾２＾＋）のアルカリ土類金属
塩を請求項５または６に記載の方法にしたがって製造し
、そして次にこれを対応する蓚酸の塩と反応させること
により、蓚酸のアルカリ土類金属塩を沈殿させ、同時に
対応する式 I の化合物の有機および／または無機塩を
生成させ、次に、沈殿したアルカリ土類金属の蓚酸塩を
分離し、そして次に、少なくとも一種の水混和性有機溶
剤、たとえばアセトン、メタノール、またはエタノール
とともに加えることにより、溶液から式 I の所望の塩
を沈殿させることを特徴とする請求項１ないし４のいず
れかに記載の塩の製造方法。
（８）（６ＲＳ）−ジアステレオ異性体の混合物の形態
、または単一の（６Ｒ）または（６Ｓ）ジアステレオ異
性体の形態の、式 I ′： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ′）（式中のＲ′は、アルカリ土類金属の陽イオン、好まし
くはＣａ＾２＾＋、またはＭｇ＾２＾＋）のＮ＾５、Ｎ
＾１＾０−メチレン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉
酸のアルカリ土類金属塩を製造するにあたり、式IV： ▲数式、化学式、表等があります▼（IV）の５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の水溶性の塩の水
溶液を用意し、そして次にこれをホルムアルデヒドと反
応させ、そして次にアルカリ土類金属塩の水溶液を加え
ることにより、対応する式 I ′のアルカリ土類金属塩
を沈殿させる方法。
（９）ホルムアルデヒドを添加する前に、ピリジンおよ
び置換ピリジン、たとえば、ピコリン、ルチジン、エチ
ルピリジンよりなる群から特に選ばれ、ピリジンである
のが好ましい、水溶性の芳香族窒素含有塩基を加えるこ
とを特徴とする請求項８に記載の方法。
（１０）５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の水溶性の
塩の製造を、水への遊離酸の溶液を、水酸化アルカリ、
炭酸アルカリ、炭酸水素アルカリ、アンモニア、および
有機窒素含有塩基、たとえばピリジン、トリエチルアミ
ン、トリエタノールアミンよりなる群から選ばれる化合
物と反応させることによって行うことを特徴とする請求
項８または９に記載の方法。
（１１）アルカリ土類金属塩溶液を加えた後に、好まし
くはアンモニア水溶液を加えることにより、ｐＨの値を
８．５−９．５の範囲の値、特に９．０に調整すること
を特徴とする請求項８ないし１０のいずれかに記載の方
法。
（１２）反応を１０℃−３０℃の範囲の温度、好ましく
は室温で行うことを特徴とする請求項８ないし１１のい
ずれかに記載の方法。
（１３）Ｎ＾５、Ｎ＾１＾０−メチレン−５，６，７，
８−テトラヒドロ葉酸のマグネシウム塩の製造を、５，
６，７，８−テトラヒドロ葉酸の水への溶液を、水酸化
アルカリ、炭酸アルカリ、炭酸水素アルカリ、アンモニ
ア、および有機窒素含有塩基、たとえばピリジン、トリ
エチルアミン、トリエタノールアミンよりなる群から選
ばれる化合物と室温で反応させ、次にこうして得られた
塩溶液をホルムアルデヒドと反応させ、そして次にマグ
ネシウム塩の水溶液を加えることにより、Ｎ＾５、Ｎ＾
１＾０−メチレン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸
のマグネシウム塩を沈殿させることによって行うことを
特徴とする請求項８ないし１２のいずれかに記載の方法
。
（１４）Ｎ＾５、Ｎ＾１＾０−メチレン−５，６，７，
８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の製造を、５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の水への溶液を、水
酸化アルカリ、炭酸アルカリ、炭酸水素アルカリ、アン
モニア、および有機窒素含有塩基、たとえばピリジン、
トリエチルアミン、トリエタノールアミンよりなる群か
ら選ばれる化合物と室温で反応させ、次にこうして製造された塩溶液に、ピリジンおよび置換
ピリジン、たとえば、ピコリン、ルチジン、エチルピリ
ジンよりなる群から特に選ばれ、ピリジンであるのが好
ましい、水溶性の芳香族窒素含有塩基を加え、次にこうして製造された塩溶液をホルムアルデヒドと反
応させ、そして次にこれにカルシウム塩の水溶液を加え
ることにより、Ｎ＾５、Ｎ＾１＾０−メチレン−５，６
，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩を沈殿させ
ることによって行うことを特徴とする請求項８ないし１
２のいずれかに記載の方法。
（１５）請求項１ないし４のいずれかに記載の少なくと
も１種の塩を、少なくとも１種の活性化合物として、好
ましくは単位投与量あたり１ｍｇ−５００ｍｇ、特に５
ｍｇ−１５０ｍｇの量含有し、そして好ましくは非経口
および／または経口製剤の形態であることを特徴とする
、制癌化合物の効果を協力的に発現させたり、そして／
または制癌化合物の毒性を低減させたり、そして／また
はヒトおよび／または動物の細胞を保護したりする薬剤
。
（１６）請求項１ないし４のいずれかに記載の塩の、制
癌化合物の効果を協力的に発現させたり、そして／また
は制癌化合物の毒性を低減させたり、そして／またはヒ
トおよび／または動物の細胞を保護したりする薬剤の製
造への使用。
（１７）塩が薬剤中に、単位投与量あたり、１ｍｇ−５
００ｍｇ、特に５ｍｇ−１５０ｍｇの量存在することを
特徴とする請求項１６に記載の塩の使用。
（１８）薬剤が、非経口および／または経口製剤の形態
であることを特徴とする請求項１６または１７のいずれ
かに記載の塩の使用。