JPH03127798A

JPH03127798A - 生理活性物質シリンゴスタチン及びその製造法

Info

Publication number: JPH03127798A
Application number: JP1264571A
Authority: JP
Inventors: Akinori Suzuki; 鈴木　昭憲; Akira Isogai; 磯貝　彰; Shuichi Yamashita; 修一山下; Kazuo Suyama; 陶山　一雄
Original assignee: Kumiai Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Kumiai Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1989-10-11
Filing date: 1989-10-11
Publication date: 1991-05-30

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業−にの利用分野）本発明は酵母類に対し優れた抗菌力を有し食品添加物及
び医薬品等として有用な生理活性物質シリンゴスタチン
及びその製造法に関するものである。

（従来の技術）これまでシュードモナス・シリンガニ・ピーブイ・シリ
ンガニ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｙｒｉｎｇａｅ　
ｐｖ、　ｓｙｒｉｎｇａｅ）の各種の株の生産する毒素
として、シリンゴマイシンが知られている。シリンゴマ
イシンはいくつかの成分からなるが、その主成分である
シリンゴフイシンＥは分子量１２２４のリボ４１プチド
で・構成成分としてはβ−ハイドロキシデカン酸、セリ
ン、２゜４−ジアミノ酪酸、アルギニン、フェニルアラ
ニン、デヒドロスレオニン、β−ハイドロキシアスパラ
ギン酸、γ−クロロスレオニンの合計１０残基からなる
。そのアミノ酸の配列として下記の構造が提示されてい
る〔ファイ１−トキシンズ・アンド・プラント・ファン
ゲネシス（Ｐｈｙｏｔｏｘｉｎｓ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ）第３６７頁、シュプリンガ
ー出版１９８９年発行〕。

ｓｐ（発明が解決しようとする課題）本発明は新規な天然生理活性物質を提但することを「］
的とする。

（課題を解決するための手段）本発明者らはシュードモナス・シリンガニの生産する新
規でかつ有用な物質を採取すべく研究を続けた結果、こ
れまでの知見にない新規生理活性物質を単離、採取する
ことに成功した。

すなわち、本発明の生理活性物質は一般式］（但しｎは７〜１２の整数を示し、Ｘ及びＸ′は水素原
子又は水酸基を示す。）にて表される。

本発明の生理活性物質シリンゴスタチンとは実施例に記
載したように少なくとも７種類の類縁化合物の総称であ
り、各物質ごとにＡ−Ｇまでを釘孔して命名した。質量
分析ａ１による測定から各々分子量は次の通りである。

シリンゴスタチンＡ：　　１１７８シリンゴスタチンＥ：　　１１９４シリンゴスタチンＣ：　　１２１０シリンゴスタチンＤ：　　１１７６シリンゴスタチンＥ：　　１１５０シリンゴスタチンＦ：　　１１６０シリンゴスタチンＧ：　１２王Ｏ次にシリンゴスタチンＢを代表例としてその化学構造の
詳細を記載する。

シリンゴスタチンＢは脂肪酸と９個のアミノ酸からなる
環状デプシペプチトであり、その各々の連結はＮＭＲの
ＨＭＢＣスペク１〜ルの解析及びアルカリ処理により得
られた鎖状化合物のＭＳスペクトルのフラグメントイオ
ンの解析により決定された。また脂肪酸及びアミノ酸の
化学構造の解析は’Ｈ−ＮＭＲ，”Ｃ−ＮＭＲ，アミノ
酸分析等の手段により行われた。

■分子１ｋ　　　：ｌＩ９４ ■分子式　　”　５ｏＨｓｖＣＱ　Ｎ１２０１９■’Ｈ
−ＮＭＲスペクトル：第１図に示す。

■”Ｃ−ＮＭＲスペクトル：第２図に示す。

■紫外線吸収：エンド吸収 ’　ｌ−１−Ｎ　Ｍ　Ｒピークと１３（’ニーＮＭＲピ
ークと化学構造との関連は第１表に示した通りであり、
ＮＭＲの測定溶媒にはＣ１，）ａＣＮ　：　ｌＩ２０（７：　　２ｖ／ｖ）を使用した。

尚。

表に示したシリンゴスタチンＢの構造の各ユニットは次
の通りである。

（Ｃ）（Ｄ）（Ｅ）（Ｊ）（１）（Ｈ）（Ｇ）各ユニットの炭素番号は次の通りである。

Ａユニット：１１Ｂユニット：Ｃユニット：１１Ｃユニット：Ｄユニット：Ｆユニット：Ｃユニット：４ＣＨ，ＣＱ −７ ψニブロードシグナル（生産菌）本発明のシリンゴスタチンの生産菌の一例としては東京
農業大学陶山等により分離されたシュードモナス・シリ
ンガニ・ピーブイ・シリンガニが使用できる。尚、シリ
ンゴスタチンの生産菌株はこの株に由来する突然変異株
（自然発生又は誘発性）５形質融合体又は遺伝子組換え
体であっても１本菌株にその形質起源を依存しシリンゴ
スタチンを生産するものは総て本発明に使用出来る。

本株の細菌学的性質は次の通りである。

（１）形態的性質本細菌はダラム陰性、好気性、桿状、１〜４の接電を有
し。

運動性で芽胞、莢膜、ポリーβ−ヒドロキシ酪ｍ顆粒は
観察されず５普通寒天培地上では４８時間で径１ｍの集
落を形威し、集落は乳白色、円形、金縁、中高、混光を
帯び平滑、半透明で牛酪質である。またラフ型集落を形
成する菌株も見られる。

（２）各種培地における生育状態ブイヨン、ペプトン水では発育良好で混濁し、沈殿を生
じるが皮膜は形成しない。ウシンスキー氏液、フイルミ
氏液には良好に発育するが、コーン氏液には不良である
。

（３）生理的性質 ■発育適温は２７℃で、４１℃では１５！育しない。致
死温度は５２℃である。

■グルコースを酸化的に分解する。

■緑色蛍光色素及びレバンを産生じたが、ビオシアニン
は産生じない。

■リドマス牛乳は還元し消化する。

■オキシダーゼ、アルギニンジヒドラーゼ、フェニルア
ラニン・デアミナーゼ、レシチナーゼ、チロシナーゼの
各活性、硝酸塩の還元、硝酸呼吸、硫化水素及びインド
ールの加水分解、ｖｐ反応、ＭＲ試薬、ジャガイモ塊茎
の腐敗はそれぞれ陰性である。

■カタラーゼ活性、アンモニアの産生、スクロースより
還元物質の生成、ゼラチン、エスクリン、アルブチン、
ツイーン８０の加水分解、タバコ葉の過敏反応はそれぞ
れ陽性である。

■デンプンの加水分解及びチトクロムオキシダーゼ活性
は弱陽性を示す。

■硝酸塩の還元、硝酸呼吸、硫化水素及びインドールの
加水分解、ｖＰ反応、ＭＲ試薬、ジャガイモ塊茎の腐敗
はそれぞれ陰性である。

（４）各炭素源の同化性キシロース、アラビノース、゛グルコース、フルクトー
ス、ガラク１〜−ス、マンノース、スクロース、ラフィ
ノース、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、イ
ノシトール、マロン酸クエン酸、コハク酸を利用し、ラ
ムノース、セロビオース、フル１〜−ス、ラクトース、
１〜レバロース、デキス１−リン、デンプン、イヌリン
、７１−ニトール、ズルシトール、すリシン、エスクリ
ン、Ｄ　Ｌ−酒石酸は利用しない。アルギニン、バリン
の利用は弱い。

同株については日本植物病理学会報５５巻、２′；ｆ、
２４２〜２４４頁（平成１年４月）にその菌学的同定が
記載されている。尚本菌株は植物病原菌のため工業技術
院微生物工業技術研究所への寄託は拒絶されている。

また、本発明の製造法はシリングスタチン生産株の培養
と培養物からの生理活性物質の抽出、精製からなる。

シリングスタチン生産のための培養は細閉の一般的培養
広に増して行うことができる。

すなわち、保存培地より直接又は前倍養を経て、生産用
培地に植菌し、好気的に２〜１０日培養することにより
培地中にシリングスタチンを′ｊｌ積させることができ
る。培地としては天然、半合成１音威の細菌用各種培地
を用いることができるが、代表的なものとしてはボテ１
〜・デキス１−ロース（Ｄｉｔｃｏ）２．４５％、カザ
ミノＮＩ０．４％を含有する生産培地が挙げられる。

その他、必要に応じて、ナトリウム、カリウム、カルシ
ウム、マグネシウム、コバル１−１塩素、燐酸、ａ酸及
びその他のイオンを生成することが出来る無機塩類を添
加することも有効である。また菌の発育を助け、シリン
グスタチンの生産を促進するような有機物及び無機物を
Ｍ２！１に添加することも出来る。

培養は２５〜３０℃の温度条件で静置又は振どう培養に
よ１り行われる。

培養物からのシリングスタチンの分離、ＮＭは通常の天
然物からの分離、精製手段を用いることができる。すな
わち。

培養物中のシリングスタチンをイオン交換樹脂、多孔性
吸着樹脂、活性炭等に吸着溶出した濃縮し、イオン交換
クロマドグフィー、ゲルろ過、転溶、透析等の精製手段
に加えて、各種担体を用いたカラムクロマトグラフィー
を行うことにより。

精製品として回収することができる。尚、シリングスタ
チンはアルカリ性の条件では著しく不安定のため、精製
は酸性条件下で行わなくてはならない。

次に、実施例を挙げて具体的に説明するが本物質の製造
法はこれに限定されるものではない。

（実施例）大型試験管にブイヨン０．５％、ペプ１−ン１．５％、
塩化ナトリウム０．５％及びＫＪ■ＰＯ４０，５％より
なる栄養培地］Ｏｍｆｉを入れたものに、本菌を１白金
耳接種し、１晩振どう培養した。この培養液を５００ｍ
Ｍ三角フラスコに入れた本培養液〔ポテト、デキストロ
ース培地（ＰＤＢ）にカザミノｍｏ、４％、Ｍａｌｔ抽
出物ｏ、６％添加、ＰＨ６，１）２５０ｍ悲に約０　、
２　ｍ　Ｑを加え、２６．５℃で５〜７日間静置培養し
た。

得られた培養波音３−１６．９を４℃、８０００ｒｐ川
で遠沈し。

上清をあらかじめ０．２％トリフルオロ酢酸（Ｔ　Ｆ　
Ａ）で洗浄したｘｐ、Ｄ−７（直径３．６Ｘ４０ｃｍ）
に吸着させ、２２０％エタノール１．５ｆｉ、８０％エタノール９００ｍ
Ａで順次溶出した。８０％エタノール区は３００　ｍ　
Ｑずつ３区別に分けて取ると、活性は８０％エタノール
溶出区の２番目の区分に回収された。活性区をエバポレ
ーターを用いて濃縮し、凍結乾燥したあと、０．２％Ｔ
ＦＡ約１０ｍ１２に溶かした。

遠沈により不溶物を除いた上清を、０．２％ＴＦΔを溶
媒とした５ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−２５（直径２．８
Ｘ５０ｃｒｎ）にかけた。

１０　ｍ　Ｑずつフラクションを取ると、活性は１８〜
２３＆目のフラクションに回収された活性区をエバポレ
ーターで濃縮後、凍結乾燥し、０．５％Ｉｖ酸を含む４
５％エタノール５ｍ氾に溶かした。この溶液を同溶媒を
用いた５ｅｐｈａｄｃｘ　　Ｌ　１４２０（直径２．２
Ｘ５０ｃｍ）にかけた。

この活性区をエバポレーターで濃縮し乾燥したあと、高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて精製し
た。

まず、５ＳＣ−Ｈ−３２０王　（直径０．８Ｘ２０ｃｍ
）のカラムを用いて０．１％ＴＦＡを含む、２５〜５０
％アセトニトリルの直線的濃度勾配法（２０分）により
シリングスタチンＡ、ＢとＣ，Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇを分取し
く第３図）、さらにシリングスタチンＢ及びＣは５ＳＣ
−ＣＮ’−４２５１Ｎ　（直径１．ＯＸ２５ｃｍ）のカ
ラムを用いて、０．１％ＴＦＡを含む、２０〜２５％ア
セトニトリルの直線的濃度勾配Ｍ（１０分）により（第
４図）、それぞれ分離した。このようにしてシリングス
タチンＡ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ、Ｆ及びＧをそれぞれ約２．
５ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、Ｑ、５■、１■、０．５■及
び０．５■を得た。

次にシリングスタチンの抗菌活性につき試験例を挙げて
説明する。

試験例試験は所定濃度液を浸漬させたペーパーデスクをサツカ
ロミセス・セルビシアエを入れたボテ１〜デキストロー
ス培地を用いた重層寒天法により４０時間後の抗菌円の
出現を判定した。第２表に抗菌力ありを＋、抗菌力なし
を−で表示した。

（発明の効果）本発明のシリングスタチンは酵母類に対し優れた抗菌力
を示す。本発明により食品添加物及び医薬品等として有
用な生理活性物質を提供することができた。

【図面の簡単な説明】

第１図は’　Ｈ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル、第２図は”Ｃ
−ＮＭＲスペクトル、第３図は５ＳＣ−Ｈ−３２０１カ
ラムによるＨ１）　Ｌ　Ｃクロマ１〜チヤト、第４図はＳＳＣＮ４２５１ＮカラムによるＨＰＬＣクロマ１−チャートを示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （但しｎは７〜１２の整数を示し、Ｘ及びＸ′は水素原
子又は水酸基を示す。）にて表される生理活性物質シリ
ンゴスタチン。
（２）シュードモナス属に属する生理活性物質シリンゴ
スタチンの生産菌を培養し、培養物から当該化合物を採
取することを特徴とする生理活性物質シリンゴスタチン
の製造法。