JPH03103195A - 血栓及び凝固亢進状態の診断及び検査のための生物学的試料からのｄ―ダイマーの直接化学結合的方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血液凝固系の障害の指標であることができる７
イブリンの破壊生産物である、Ｄ−ダイマーを検出する
方法に関し、より詳細には本発明は生物学的試料中で直
接化学的にＤ−ダイマーに結合する、新規な７ラグメン
｝Ｅ試薬、及び該方法を実施するためのキットに関する
。

本発明を要約すれば、本発明により生物学的試料からの
Ｄ−ダイマーの直接的な化学的結合を用いた、固体相に
付着したヒト　フィプリノーゲンの精製したフラグメン
トＥを利用する、フィブリン分解生産物であるＤ−ダイ
マーの簡単な検出アッセイを実施する方法及び試験キッ
トが提供され、本発明のＤ−ダイマーをアッセイするた
めのこの直接結合法は多数の方式で実施することができ
、本発明の一つの具体化においては、フラグメントＥは
ラテックス担体粒子にコンジュゲート（ｃｏｎｊｕ−ｇ
ａｔｅ）され、凝集アッセイが実施されることである。

既往技術の記載 最も普通なヒトの血液凝固系の障害は，心臓のような血
管中で形戊された時に血流を制限し、重大な心臓の病気
を招く血栓、血餅の形戊である。

更に血栓又はその一部の循環器系内での移動は突然に血
流を妨げることにより、血栓塞栓症をもたらすことがあ
る。凝固充進状態によりフィブリン溶解治療を受けてい
る患者は、血塊の破壊を注意深く検査することが必要で
ある。そのためフィブリン溶解、血栓の破壊を検出する
鋭敏且つ特異的な手段を有することが重要である。

７イブリンはそれが懸濁している全血を凝固する力を有
する接着性の性質の分校状繊維のウエブから成る。フィ
ブリン溶解は凝集過程に対して補完的な系であり、通常
はフィブリンの沈着を防いで、それと平衡状態にある。

酵素プラスミンによるフィブリンの消化はＤ−ダイマー
を含む分解生産物を生じる。

病的なフィブリン溶解においては、フィブリノーゲン及
び７イブリンのプラスミン分解生産物の血漿濃度が増大
している。それ故ヒトの血液又は尿巾における７イプリ
ノーゲン分解生産物（ＦＤＰ）の存在は血栓的障害の指
標である。ＦＤＰは伝統的に凝集アッセイにより測定さ
れてきた。例えば：葡萄球菌凝集により；血球凝集免疫
アッセイにより；抗血清が付着しているラテックス粒子
の使用による等である。

ホーウィガー（Ｈａｗｉｇｅｒ）等、“Ｍｅａｓｕｒｅ
ｍｅｎＬ　ｏｆＦｉｂｒｉｎｏｇｅｎ　ａｎｄ　Ｆｉｂ
ｒｉｎ　Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓｉ
ｎ　Ｓｅｒｕｍ　ｂｙ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ
　Ｃｌｕｍｐｉｎｇ　Ｔｅｓｔ”、Ｊ．Ｌａｂ．　ＣＩ
ｉｎ．　Ｍｅｄ、７５：９３−１０８（１９７０）、は
葡萄球菌の特異菌株は単量体的フィブリン又はより高分
子量のＦＤＰの存在において凝集するという事実に基づ
いた試験法を開示している。この方法においては、血清
又は尿試料の逐次的希釈物を葡萄球菌細胞の懸濁液と混
合して凝集の存在又は不存在に留意している。

マースキー（Ｍｅｒｓｋｅｙ）等、“Ａ　Ｒａｐｉｄ，
　Ｓｉｍｐｌｅ　Ｍｅ−ｔｈｏｄ　ｆｏｒ　Ｍｅａｓｕ
ｒｊｎｇ　Ｆｊｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ　Ｓｐｌｉｔ　Ｐ
ｒｏｄｕｃｔｓ　ｉｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｓｅｒｕｍ”、Ｐ
ｒｏｃ．　Ｓｏｃ．　Ｅｘｐ．　Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．　
１３１：８７１−８７５（１９６９）、は二段法血液凝
集一抑制試験法を開示している。第一段階において、試
験血清試料の希釈物をヒト　フィブリノーゲンに対する
抗体の希釈溶液でインキュベートする。第二段階におい
て．ヒトの血漿で被覆された褐色（ｔａｎｎｅｄ）の赤
血球を添加することにより未反応の抗体が検出される。

凝集が起こらないならば、試料は抗体を中和するのに充
分なＦＤＰを含んでいたということである。

カーネー（Ｃａｒｎｅｙ）等、“Ａ　Ｓｅｎｓｉｔｉｖ
ｅ　Ｌａｔｅｘ　Ｓｌｉ−ｄｅ　Ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　
Ｆｉｂｒｉｎ（ｏｇｅｎ）　Ｆｒａｇｍｅｎｔ　Ｅ”、
Ｃｌｉｎｉｃ−ａｌ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ　１４
７：１７３−１７７（１９８５）、はラテックス粒子が
直接血清中のＦＤＰと反応する抗体で被覆されたラテッ
クス凝集試験を開示している。

Ｄ−ダイマーに対しモノクローン性抗体ＤＤ−３８　６
／２　２を使用することにより、フィブリンとフィブリ
ノーゲン分解生産物の間の差異を認めることを必要とす
る特異性を導入した。Ｄ−ダイマ、フィブリン分解生産
物の検出は、凝集の存在に対し一層特異的であるから、
従来他の技術で可能であったよりも、血栓症又は凝固亢
進状態の検出を一層大きい感度及び特異性を以て可能と
するこの方法は重要な改善であった。エルムズ（Ｅｌｍ
ｓ）等、”Ｒａｐｉｄ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃ
ｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｅｄ　Ｆｉｂｒｉｎ　Ｄｅｇｒａ−
ｄａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｉｎ　Ｐｌａｓｍａ
　Ｕｓｉｎｇ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄ
ｙ　Ｃｏａｔｅｄ　Ｌａｔｅｘ　Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ”
、Ａ．　Ｊ．　Ｃ．ｐ．　８５（３）３６０−３６４（
３月１９８６）により記載されているように、フィブリ
ノーゲンのフィブリンへの転化、及びその凝集形戊の過
程におけるＸＩ［ｌａ因子による架橋の際の形態的及び
構造的変化の検出は、プラスミン溶解性開裂生産物の間
の区別を可能とする新抗原決定基の開発をもたらした。

特に、Ｄ−ダイマー形態を含む架４ｎフィブリン誘導体
に特異的である、モノクローン性抗体（ＤＤ−３Ｂ６／
２２）は、血漿又は血清のいずれかにおけるフィブリン
分解生産物を検出できるラテックス凝集手法の開発に使
用された。このアッセイの感度はＤ一ダイマー約２５０
ｎｇ／＋＋＋Ｑであるように思われる。

グリーンバーグ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ）等は、論文”Ｍ
ｅａｓ−ｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｌａｓｍａ　Ｆｉｂ
ｒｉｎ　Ｄ−ｄｉｍｅｒ　Ｌｅｖｅｌｓ　ｗｉｔｈｔｈ
ｅ　Ｕｓｅ　ｏｒ　ａ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ　Ｃｏｕｐｌｅｄ　ｔｏＬａｔｅｘ　Ｂｅａ
ｄｓ”、Ａ．　Ｊ．　Ｃ．　Ｐ．　８７（１）９４−１
００（１月１９８７）、において、フィブリン分解に対
する特異的試験（ダイマー試験）を提供するために、ラ
テックス　ビーズにカップリングされたフィブリンＤ−
ダイマ一対モノクローン性抗体（ＤＤ−３Ｂ６）を開示
している。ダイマーアッセイは７イブリノーゲン欠乏血
に添加された２μｇ／ｍＱの精製フィブリンＤ−ダイマ
ー又はフィブリンＤ−ダイマー／フラグメントーＥ複合
体を検出した。

Ｄ−ダイマーを含むＦＤＰのための凝集アッセイ技術は
開発されたが、これらの技術の安定性及び感度はまだ最
適化されていない。

本発明の総括 本発明はＤ−ダイマー　フラグメントを含む可能性のあ
る、血漿、尿、又は他の組織又は体液のような生物学的
試料からのＤ−ダイマーの直接結合のために、固体相に
付着したフラグメントーＥを用いるＤ−ダイマー用の簡
単な検出アッセイである。従って新規フラグメントーＥ
試薬を用いる血栓崩壊及び凝固亢進状態を診断し、検査
するために生物学的試料中のＤ−ダイマーを検出する直
接的方法を提供することが本発明の目的である。

アッセイを実施するためのキットを提供することが本発
明の他の目的である。

本発明のこれら及び他の目的は下記のより詳細な記述か
ら明らかになるであろう。

本発明の詳述 血餅又は血栓のマトリックスはフィブリンにより形威さ
れる。フィブリンはＸＩＩ［ａ因子により架橋され、安
定した塊を形戊する。ヒトの架橋したフィブリンは酵素
プラスミンにより分解される。

Ｄ−ダイマー／フラグメントＥ複合体、（ＤＤ）Ｅは架
橋したフィブリンから放出される主要な可溶性プラスミ
ン分解生産物である。この複合体はプラスミンによって
更に分解されることができる。

初期の（ＤＤ）Ｅ複合体はフラグメンｌ−Ｄ−ダイマー
及びＥ１を含んでいる。更に酵素により分解される際に
、フラグメントＥ１はＤ−ダイマーフラグメントに結合
する能力を失うことなくフラグメントＥ２に開裂する。

フラグメントＥ２からＥ，への分解は、結果としてフィ
ブリンの末端分解生産物がフラグメントＤＤ及びＥ，で
あるという複合体の解離をもたらす。フラグメントＥ１
及びＥ２は架橋したフィブリンからのフラグメントーＤ
Ｄに結合する能力を有するが、ＤＤ−Ｅ複合体、７イブ
リノーゲン、又はフィブリノーゲン又は非架橋フィブリ
ンのブラスミン分解生産物のいずれとも結合しない。

本発明は生物学的試料から直接化学的にＤ−ダイマーを
結合するために、固体相に付着した精製されたフラグメ
ントＥを用いてフィブリンのプラスミン分解を検出する
方法を提供する。

精製されたフラグメントＥはオレキサ（Ｏｌｅｘａ）及
びブジンスキー（Ｂｕｄｚｙｎｓｋｉ）により、Ｂ　ｉ
ｏｃｈｅｍ　ｉｓ−ｔｒｙ　１９、９９１（１９７９）
及びＪ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　２５４、４９２５
（１９７９）に記載された方法により製造できる。これ
らの報告に記載された基礎的方法は、Ｘ■因子の多いフ
ィブリノーゲンからフィブリン塊の形戊を以て開始する
。塊をプラスミンで加水分解し、得られる分解物を遠心
して大きい塊粒子を除去する。（ＤＤ）Ｅ複合体を含む
可溶性分解生産物を含有する上澄液を次いでアガロース
ゲル力ラム上で分離する。分離した（ＤＤ）Ｅ複合体を
次いで濃厚な塩溶液中でインキュベートし、Ｄ−ダイマ
ー及びＥ１又はＥ２フラグメントを解離する。フラグメ
ントを次いでアガロースゲル力ラム上で分離し、フラグ
メントＥ１又はＥ２を精製する。

本発明のＤ−ダイマーをアッセイするための直接結合法
は多数の方法で実施することができる。

本発明の一つの具体化において、精製されたフラグメン
トＥをラテックス担体粒子にコンジュゲートシ、凝集す
るアッセイが実施される。本発明の説明の中で使用され
るように、ラテックス担体粒子は水に不溶性であり、約
０．２ないしｌ　．Ｏ　ｔｔｍの範囲の粒径（直径）を
有し、免疫学的反応に関して不活性であるラテックス重
合体を含む。典型的な適当なラテックス担体粒子は、通
常約１ないし２０％の固体濃度の水性ラテックス分散物
として商業的に供給されているものである。それらが上
記に示す判断基準に合致する限り、多くの種類のラテッ
クスが本発明で使用するのに適当である。

一般に適当なラテックス担体重合体はカルポキシル化ポ
リスチレン、アクリル酸重合体、メタクリル酸重合体、
アクリロニトリル　ブタジエン　スチレン、ポリ酢酸ビ
ニルアクリレート、ポリビニルピリジン及び塩化ビニル
アクリレートである。

フラグメントＥ−ラテックス試薬のラテックス濃度は０
、５ないし２％の範囲にある。

本発明の好適な具体化において、精製されたフラグメン
トＥは、等量部のアミジン改質ラテックス　ビーズ（イ
ンターフエーシャル・ダイナミックス［ｌｎｔｅｒｆａ
ｃｉａｌ　Ｄｙｎａｍｉｃｓｌ社；２．４％固体）と、
精製されたフラグメントＥとを０．１ないし１　０　ｍ
ｇ／　ｍＱ、及び最も好適には２ｍｇ／ｍαの最終濃度
まで混合することによって、アミジン改質ラテックス　
ビーズ（ＡＭＬ）にコンジュゲートされる。

混合物を４℃で一夜インキュベートシ、次いで燐酸塩緩
衝溶液（ＰＢＳ）中で洗浄する。得られるフラグメント
Ｅ−アミジン改質ラテックス試薬を次いでＰＢＳのよう
な適当な生理学的緩衝液中で牛血清アルブミン（ＢＳＡ
）と共に又はグリシンとＢＳＡと共に再分散する。

ラテックス凝集アッセイは、約２５μａのフラグメント
Ｅ−ＡＭＬ試薬を約ｌＯμＱのＤ−ダイマーを含む可能
性のある、血漿、尿又は他の組織と共にスライド　グラ
ス上で一緒にすることにより、この試薬を用いて実施す
ることができる。スライドを約２分間回転した後、凝集
の観察を行うことができる。凝集が起こるならば、試料
中にＤダイマーが存在する。凝集は又例えばマイクロタ
イター（ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ）ウェル（ｗｅｌｌ）　
、７ロ−（ｆｌｏｖ）血球計算法（ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ
）を用いる血球凝集技術のような当業界周知の技術を用
いて検出することもできる。

本発明の他の具体化において、フラグメントＥ１好適に
はフラグメントＥｌｓただしＥ２／又はＥ，を含んでい
るＥ１にコンジュゲートを結合することにより非抗体ア
ッセイが実施される。コンジュゲートーフラグメントＥ
試薬を次いで血漿、尿、血清のような生物学的試料と共
にインキュベートし、洗浄して試料に結合していない過
剰のフラグメントＥを除去し、結合したフラグメントＥ
−Ｄダイマー生産を測定するためにコンジュゲートを定
量する。この方法はＤ−ダイマーの検出のための濾過装
置系上で実施でき、又は結合したＤ−ダイマ一対未結合
のＤ−ダイマーを分子排除（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｘ
ｃｌｕｓｉｏｎ）技術又はイオンー共有結合技術により
分離することができ、次いで液体状態で検出することが
できる。適当なコンジュゲートはペルオキシダーゼ、ウ
レアーゼ、ベーターグルコシダーゼを含む。

本発明の他の具体化においては、Ｄ−ダイマーの捕捉（
ｃａｐｔｕｒｅ）分子として使用された、フラグメント
Ｅ，／Ｅ，の濃度を定量するために、変形ＥＬＩＳＡ技
術を使用することができる。この方法においては、フラ
グメントＥ＋／Ｅｘは固体支持体に吸着される。Ｄ−ダ
イマーを含む血漿、尿又は他の体液のような生物学的試
料を次いで７ラグメン｝Ｅ＋／Ｅｘへの結合のために添
加する。Ｄ−ダイマーに対し特異的なモノクローン性又
はポリクローン性抗体が次いでペルオキシダーゼ、ウレ
アーゼ、ベーターグルコシダーゼのような酵素にコンジ
ュゲートされる。コンジュゲート（抗−Ｄーダイマー／
酵素）は次いでフラグメントＥ＋／Ｅｘに直接結合して
いるＤ−ダイマーに結合する。使用された酵素に対する
特異的な基質の添加はＤ−ダイマーの定量を可能とする
。

本発明を概略的に説明したが、或特定の実施例を参照す
ることにより一層完全な理解を得ることができる。下記
の実施例は説明の目的のためにのみ本文に記載されたも
ので、本発明を限定するものではない。

実施例　ｌ ラテックス試薬の製造： ２ｍｇの精製したフラグメントＥ１を０．０２ＭＰＢＳ
のアリコート３Ｘ５ＱＱｍＱに対し６時間、即ち各３×
２時間透析した。ジルフォード（Ｇｉｌｆ−ｏｒｄ）分
光光度計を用いて吸光度Ａ２８０を測定した。透析され
た試料容積ｌｍＱに対する始めの読みは３．３３３吸光
度単位であった。ｌｉＱ（０−４８９μ）のアミジン改
質ラテックスビーズ（ＡＭＬ）（ロフト番号１０−４３
−５７Ａ１インター７ェーシャル・ダイナミックス社）
をポリプロピレンのｌＸ７５ｍｍのチューブに入れ、３
．００Ｏｒｐｍで遠心してビーズをペレットとした。ペ
レットとしたＡＭＬビーズから上澄液を傾斜法で捨て、
ｌｍＱの透析されたフラグメントＥ１を添加した。

チューブを穏やかに回転し、ビーズを再分散させた。フ
ラグメントＥ，／ＡＭＬビーズ混合物を４℃で１２時間
インキュベートした。次いでチューブを遠心し、ＡＭＬ
ビーズをペレットとした。上澄液は捨てた。２．９２０
吸光度単位で吸光度が測定（吸光度２８０）された。２
１８μ９のフラグメントＥ，がＡＭＬ　ｌ一当たり結合
した、即ち１０．９％が結合したことである。

実施例　２ Ｄ−ダイマー試験方法： ２５μＱのＡＭＬ−フラグメントＥ，ラテックスビーズ
試薬をＬＯｐＱの試料（血漿）、標準物（精製Ｄ−ダイ
マー）又は対照（緩衝液又は食塩水）のいずれかとスラ
イドグラス上で混合した。

スライドグラスを２分間回転し、凝集を親察した。

下記の結果が得られた： 試　　　料　　　　　　　　　　ロフト番号　　　　反
　応食塩水　　　　　　　　　　　　　　８６２１　　
　　　陰　性ＰＢＳ０．０１Ｍ　　　　　　　　　　陰
性情製Ｄ−ダイ？−（８０μｇ／ｍＱ）　　１０１５８
２　　　　陽　性アメリカ診断用陽性対照品　　　　　
９２ｏ３　　　　　陽　性スタゴ（Ｓｔａｇｏ）陽性対
照品 （Ｄ−ダイマーキット）　　　　　　Ｃ２１１Ｋ２５　
　　陽　性陰性対照品用スタゴ緩衝液 （Ｄ−ダイマーキット）　　　　　　　Ｃ２１１Ｋ２５
　　　陰　性ウェルカム（Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）Ｆ　Ｄ　
Ｐ陽性対照品（Ｄ−ダイマーには非特異性）　　　　Ｋ
Ｏ７６９２１Ａ　　陰　性ウェルカム陰性対照品 （ＦＤＰキット）　　　　　　　　　ＫＯ７６９２１Ａ
　　陰　性精製フィプロゲン（Ｆｉｂｒｏｇｅｎ）　（
シグマ［Ｓｉｇｍａｌ牛分画Ｉ）　　　　　　　　　　
　　　３９ＢＯ７１０　　　陰　性ヒト　７イブリノー
ゲン （オーン［Ｏｒｔｈｏ］にて精製）　　　　　　ＣＨ２
８７　　　　　陰　性実施例　３ フラグメントＥ，／ＡＭＬ試薬の感度の評価：試　料　
　　　スタゴＤ−ダイマーキット　フラグメントＥ，／
ＡＭＬ試薬 ８０μｇ／ｍＱＤ−ダイマー陽性　　　陽性８μｇ／ｍ
ＱＤ〜ダイマー陰性　　　陽性本発明を充分説明したか
らには、本文に開示したような本発明の精神又は範囲か
ら逸脱することなく本発明を変更又は変形することがで
きることは、当業者には明白であろう。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、Ｄ−ダイマーを含む可能性のある生物学的物質の試
   料を、固体支持体に化学的に結合したヒトフィブリノー
   ゲンの精製されたフラグメントＥを含む試薬と混合する
   ことを含んで成る、血栓及び凝固亢進状態の診断及び検
   査のための、Ｄ−ダイマーを含む可能性のある生物学的
   試料中のフィブリン分解生産物であるＤ−ダイマーを直
   接検出する非−抗体アッセイ方法。 ２、該固体支持体がラテックス担体粒子を含有して成る
   、特許請求の範囲１項に記載の方法。 ３、ラテックス試薬を製造する方法が： 該フラグメントＥを透析すること； 該ラテックス担体粒子を濃縮すること； 該透析されたフラグメントＥを該ラテックス担体粒子と
   混合すること； 該混合物をインキュベートすること； ラテックス担体粒子に結合したフラグメントＥを含む得
   られたラテックス試薬を分離すること、 を含んで成る、特許請求の範囲２項に記載の方法。 ４、該ラテックス担体粒子がアミジン改質ラテックス粒
   子から成る、特許請求の範囲２項に記載の方法。 ５、該試薬中の該フラグメントＥの最終濃度が０．１ｍ
   ｇ／ｍｌないし１０ｍｇ／ｍｌである、特許請求の範囲
   １項に記載の方法。 ６、該試薬中の該フラグメントＥの最終濃度が２ｍｇ／
   ｍｌである、特許請求の範囲５項に記載の方法。 ７、該フラグメントＥがフラグメントＥ＿１から成る、
   特許請求の範囲５項に記載の方法。 ８、該フラグメントＥがフラグメントＥ＿１から成る、
   特許請求の範囲６項に記載の方法。 ９、ラテックス担体粒子に結合した精製されたフラグメ
   ントＥを含むラテックス試薬； 該試料中にＤ−ダイマーが存在する時に生 起する凝集を観察するのに適当した、該ラテックス試薬
   と該試料とを一緒にするための表面、を含んで成るヒト
   の生物学的試料中のＤ−ダイマーを検出するためのキッ
   ト。 １０、該フラグメントＥがフラグメントＥ＿１から成る
   、特許請求の範囲９項に記載のキット。 １１、精製されたフラグメントＥとコンジュゲートした
   アミジン改質ラテックスビーズを含有して成る、血栓及
   び凝固亢進状態の診断及び検査のための、Ｄ−ダイマー
   を含む可能性のある生物学的試料中のフィブリンの分解
   生産物であるＤ−ダイマーを直接結合することができる
   ラテックス試薬。 １２、該フラグメントＥがフラグメントＥ＿１である、
   特許請求の範囲１１項に記載の試薬。 １３、該固体支持体が蛋白質コンジュゲートから成る、
   特許請求の範囲１項に記載の方法。 １４、該蛋白質コンジュゲートがペルオキシダーゼから
   成る、特許請求の範囲１３項に記載の方法。 １５、 フラグメントＥを固体支持体に吸着すること； Ｄ−ダイマーを含む可能性のある生物学的試料を該固体
   支持体に添加すること； 該固体支持体に結合した該フラグメントＥに直接付着で
   きる該試料中のＤ−ダイマーと結合可能な酵素にＤ−ダ
   イマーに特異的な抗体をコンジュゲートすること；及び 該生物学的試料中のＤ−ダイマーが定量できるように該
   抗体にコンジュゲートした該酵素に特異的な基質を添加
   すること、 を含んで成る、血栓及び凝固亢進状態の診断及び検査の
   ための、Ｄ−ダイマーを含む可能性のある生物学的試料
   中のフィブリンの分解生産物であるＤ−ダイマーを直接
   検出する方法。 １６、該フラグメントＥがフラグメントＥ＿１から成る
   、特許請求の範囲１５項に記載の方法。 １７、精製されたフラグメントＥとコンジュゲートされ
   たラテックスビーズ； 該試料中にＤ−ダイマーが存在する時に 生起する凝集を観察するのに適当した、該コンジュゲー
   トされたラテックスビーズを該試料と一緒にするための
   表面、 を含んで成るヒトの生物学的試料中のＤ−ダイマーを検
   出するためのキット。 １８、精製されたフラグメントＥとコンジュゲートされ
   た酵素； 該試料中にＤ−ダイマーが存在する時に生起する凝集を
   観察するのに適当した、該コンジュゲートされた酵素を
   該試料と一緒にするための表面、 を含んで成るヒトの生物学的試料中のＤ−ダイマーを検
   出するためのキット。 １９、該酵素がペルオキシダーゼである、特許請求の範
   囲１８項に記載のキット。 ２０、該フラグメントＥがフラグメントＥ＿１から成る
   、特許請求の範囲１７項に記載のキット。 ２１、該フラグメントＥがフラグメントＥ＿１から成る
   、特許請求の範囲１８項に記載のキット。 ２２、該フラグメントＥがフラグメントＥ＿１から成る
   、特許請求の範囲１９項に記載のキット。