JPH03103192A - キラルアミン類のエナンチオマー豊富化及び立体選択的合成 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はキラルアミン類のエナンチオマー豊富化及び立
体選択的合成に関する。

発明の背景 キラル中心を有する医薬のような化学製品及び農業産品
の生物学的活性は可能なキラル形の一方に主に存在する
ことが多く判明している。ほとんどの化学合成は本質的
に立体選択的でないことから、これは深刻な化学的処理
問題を提起する。このため一方のキラル形にとって好ま
しい豊富化はある段階、即ち同一のキラル中心を有する
最終キラル化合物又は化学的前駆体のいずれかの段階で
必要とされる。どんな段階が豊富化に選択されても、望
ましくないエナンチオマーの再利用方法の不存在のせい
で、その方法は本質的に望ましいエナンチオマーに関し
て最大理論収率５０％に制限される。

このタイプのキラル化合物の多くはアミン類である。更
にそれらの合成多様性のせいでアミン類は分割にとって
よい候補でもあり、その後でキラル化合物への立体選択
的変換が行われる。以前そのエナンチオマーを含まない
キラルアミンの化学的製造は、キラル酸との塩のような
ジアステレオマー誘導体の形成を介する２種のキラル体
の混合物の分割、立体選択的合成又はキラルクロマトグ
ラフィーカラムの使用に大部分依存していた。例えば米
国特許第３，９４４，６０８号及び欧州特許出願第３６
，２６５号明細書参照。

ある構造タイプのアミン類は酵素分割に向いている。α
−アミノ酸に関与する酵素反応は周知であって、それら
の使用は立体特異的製逍のために提案された。例えば米
国特許第３，８７１，９５８号明細書では大腸菌種由来
トレオニンアルドラーゼの存在下でアルデヒドをグリシ
ンとカップリングさせることによるα−アミノ酸セリン
誘導体の酵素的製造及びエタノールアミンを用いるセリ
ノールの関連合成について開示している。

アミノ基がカルボン酸基に隣接していないアミノ酸の酵
素反応に関しては比較的わずかしか報缶されていない。

ヨナハら，アグリ力ルチュラル◆アンド◆バイオロジカ
ル●ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ
　Ｂ１ｏｌｏｇ１ｃａｌ　ＣｈｃＩＩｌ１ｓｔｒｙ）　
，第４２巻，第１２号．第２３６３−２３６７頁，１９
７８年ではビルビン酸が唯一のアミノアクセブターであ
るシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種でみら
れるω−アミノ酸：ピルビン酸トランスアミナーゼにつ
いて記載している。以前結晶化されかつ特徴付けられた
この酵素〔ヨナハら，アグリ力ルチュラル・アンド・バ
イオロジカル・ケミストリー，第４１巻，第９号，第１
７０１−１７０６頁，１９７７年参照〕はヒボタウリン
、３−アミノブ口パンスルホン酸、β−アラニン、４−
アミノ酪酸及び８−アミノオクタン酸のようなω−アミ
ノ酸並びに一級アミノアルカン類及びピルビン酸間の触
媒アミノ基転移に関して低い基質特真性を有していた。

ナカノら，ジャーナル・オプ・バイオケミストリ−（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　
，第８１巻，第１３７５−１３８１頁．１９７７年では
Ｂ，セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）中において２種のω
−アミノ酸トランスアミナーゼ、即ちヨナハらのω−ア
ミノ酸：ピルビン酸トランスアミナーゼに相当するβ−
アラニントランスアミナーゼ及びアミノ酪酸トランスア
ミナーゼについて同定した。その２８は各々β−アラニ
ン（１００対３）及びアミノ酪酸（４３対１００）に関
してそれらの劇的に叉なる活性並びにそれらの叉なるア
ミノアクセブター要求によって区別される。

バーネット（Ｂｕｒｎｅｔｔ）ら，ジャーナル・オブ・
ケミカル・ソサエティ・ケミカル・コミュニケーション
（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｃｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉ
ｃｔｙ．ＣｈｃｍｉｃａｌＣｏａＩＩｌｕｎｉｃａｔｉ
ｏｎ），第８２６−８２８頁，１９７９年ではω−アミ
ノ酸：ピルビン酸トランスアミナーゼ及びアミノ酪酸ト
ランスアミナーゼがトリチウム標識アミノ醋酸中の２つ
の木端水素原子に関して異なる優先性を示すことを示唆
した。

タニザワら，バイオケミス１・リー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
−ｓｔｒｙ）　，第２１巻，第１１０４−１１０８ＴＴ
．，１９８２年では細菌性Ｌ−リジンーａ−アミノトラ
ンスフエラーゼ及びＬ−オルニチンー６−アミノトラン
スフェラーゼについて試験し、双方はＬアミノ酸に関し
て特λ的であると同時にそれらはバーネットら，前掲で
研究されたアミノ酪酸トランスアミナーゼと同様の立体
特λ性で末端において作用することを示した。

その後ヨナハら，アグリカルチュラル・アンド・バイオ
ロジカル・ケミストリー，第４７巻．第１０号，第２２
５７−２２６５頁，１９８３年ではω−アミノ酸：ビル
ビン酸トランスアミナーゼ及びアミノ醋酸トランスアミ
ナーゼ（ＥＣ２。６．１．１８及びＥＣ２．６．１．１
９）について特徴付け、様々な生物中におけるそれらの
分布について明らかにした。

Ｐ．アエルギノサ（Ｐ．ａｃｒｕｇｉｎｏｓａ）による
β−アラニン及びβ−アミノイソ酩酸の完全異化に関し
て報告するウォーターズ（ＷａｔｃｒＳ）ら，ＦＥＭＳ
７イクロ・レタ（ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏ．　Ｌｃｔｔ．
）　，第３４巻，第２７９−２８２頁，１９８６年では
、最初のステップがβ＝アラニン：ピルビン酸アミノト
ランスフェラーゼによるアミノ基転移であることを示し
た。

酵素方法は例えば２−アミノブタノールのようなアミノ
酸以外のキラルアミン類の混合物を分離する方法として
も考えられていた。これらのほとんどでは分離を行うた
め分子中で特にアミノ基の誘導及びこの保護基又は他の
基の利用を要する。

例えば欧州特許出願第２２２，５６１号明細書では、ラ
セミ２−アミノブタノールがＮ一カルバモイル誘導体に
変換されしかる後リバーゼ酵素の存在下でアルキルアル
カン酸と接触せしめられるプロセスについて記載してい
る。遊離ヒドロキシ基のエステル化は明らかにＮ一カル
バモイル誘導体のＳ一エナンチオマーに限定され、しか
る後加水分解される。このプロセスは勿論エステル化可
能なヒドロキシ基を有するアミン類に必ず限定され、更
に特に酵素反応で立体特異性を得るため一ＮＨ−ＣＯ−
カルバモイル基の形成を介してアミノ基の事前保護を要
する。

欧州特許出廟第２３９，１２２号明細書では広範な種類
の２−アミノー１−アルカノール類に適用しうる同様の
プロセスについて記載している。

日本特許公開５５年第１３８，３８９号明細書ではアル
キル又はアラルキル置換エチレンイミンをバチルス（Ｂ
ａｃｉ　Ｉ　Ｉｕｓ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｃｕｓ）
、エルウィニア（Ｅｒｖｉｎｉａ）又はクレビシエラ（
Ｋｌｃｂｓｌｃｌ　ｌｉｌｌ）属の微生物にさらすこと
による隣接アミノアルコール類の製造について記載して
いる。

日本特許公開５８年第１９８，２９６号明細書では、ｄ
ｉ！−Ｎ−アシルー２−アミノブタノールがｄ−Ｎ−ア
シルー２−アミノブタノールのみを加水分解するアスペ
リギルス（Ａｓｐｅｒｌｇｉ　Ｉ　Ｉｕｓ）、ペニシリ
ウム（Ｐｅｎｉｃｉ　Ｉ　Ｉ　ｌｕｌＩ１）及びストレ
プトミセス（ＳｔｒｅｐＬｏｍｙｃｅｓ）の様々な種に
由来したアミノアシラーゼの作用に付されるプロセスに
ついて開示している。

１コ本特許公開５９年第３９，２９４号明細書では、ミ
クロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）アシラーゼで
処理して１１−２−アミノブタノール及びｄ−Ｎ−アセ
チルー２−アミノブタノールを得、しかる後後者が化学
的に加水分解されてｄ−２−アミノブタノールを与える
ようなＮ−アセチル誘導体の形成を介したラセミ２−ア
ミノブタノールの分割プロセスについて記載している。

日本特許公開６３年第２３７，７９６号明細書では、Ｒ
，Ｓ−１−メチル−３−フエニルプロビルアミンが様々
な具体的微生物中で好気的に培養されＳ形が優先的に代
謝されるプロセスについて記載している。最高収率及び
最適純度は酵母柾カンジダ・ヒュミコラ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ　Ｉ＋ｕｍｉｃｏｌａ）及びトリコスボロン・メリビ
オサセウム（ＴｒｌｃｈｏｓｐｏｒｏｎＩＩｅｔ　ｉｂ
ｌｏｓａｃｅｕｍ）の場合に報告されている。これらの
好気的培養中に生じるＳ形の代謝の酵素的性質、例えば
オキシダーゼ、デヒドロゲナーゼ、アンモニアリアーゼ
等については示されていない。

日本特許公開６３年第２７３，４８６号明細書のアブス
トラクトでは、サルシナ・ルテア（Ｓａｒｃｌｎａ　Ｉ
ｕｔｅａ）による１−　（４−メトキシフェニル）−２
−プロパノンから２つのキラル中心の一方においてＲ配
置の１−　（４−メトキシフェニル）−２−アミノブ口
バンの微生物合成について開示している。

具体的な説明 その最広義の意味において、本発明では、アミノ基が非
末端のキラル的に置換された炭素原子に結合されたキラ
ルアミン類の混合物を、エナンチオマー的に翌富化させ
、又はキラルアミン類を立体選択的に合成するためにア
ミノアクセプターの存在下でω−アミノ酸トランスアミ
ナーゼの使用を要する。このように、本発明は、ω−ア
ミノ酸トランスアミナーゼがω位以外のアミノ基で立体
選択的に機能しかつこの作用がキラルアミン類の混合物
のエナンチオマー豊富化及び一方のみの配置のキラルア
ミンの立体選択的合成の双方に用いうるという発見に基
づいている。

ω−アミノ酸トランスアミナーゼという用語は、ω−ア
ミノ酸の末端−ＣＨ　　−ＮＨ２基を２ ＣＨ−０基に変換する性質を示すのであればいかなる酵
素であっても意味する。

本発明に関与する酵素平衡反応は下記のように表示する
ことができる： 上記式中Ｒ１及びＲ２は各々独立している場合非置換で
あるか又は１以上の酵素的非阻害基で置換されたアルキ
ル又はアリール基であって、Ｒ１は構造又はキラリティ
に関してＲ２とは異なるか、あるいはＲ１及びＲ２は一
賭になってキラル中心を有する炭素原子４以上の炭化水
素鎖である。

本明細書で用いられる“アミノアクセブターとは、以下
で更に詳細に説明されるようにω−アミノ酸トランスア
ミナーゼの影響下で表記アミンからアミノ基を受容しう
る様々なカルボニル化合物に関する。“アミノドナー゛
とは、以下で更に詳細に説明されるように同じω−アミ
ノ酸トランスアミナーゼの影響下で表記ケトンにアミノ
址を供与してカルボニル種になりうる様々なアミノ化合
物に関する。

上記酵素反応は、第一に、アミノ基がω（又は末端）位
に存在しない一級アミンでω−アミノ酸トランスアミナ
ーゼが機能するという事実で特徴付けられる。第二に、
トランスアミナーゼは必ずしもアミノ酸でなくてよいア
ミンで機能することである。第三に、酵素変換で消費さ
れるアミン産物は不可逆的に代謝されないが、但しキラ
リテイが一律の出発アミンに立体選択的に再変換されう
ろことである。

第一の態様において、本発明はアミノアクセプターの存
在下においてω−アミノ酸トランスアミナーゼの作用を
介した下記式のキラルアミン類：Ｈ　　　　　　　　　
　　　　　Ｈ ＩＡ　　　　　　　　　　　　ＩＢ （上記式中Ｒ１及びＲ２の各々は前記と同義である）の
混合物のエナンチオマー豊富化のための方法を提供する
。明らかなように、式ＩＡ及びＩＢの化合物はＲ１が構
造又はキラリテイに関してＲ２とは異なるという理由か
らエナンチオマ−１ （あるいはＲ　又はＲ２のいずれかが第二のキラル中心
を有する場合にはジアステレオマー）かつキラルである
。

第二の態様において、本発明は下記式のケトン：０ ＩＩ （上記式中Ｒ　及びＲ２は前記と同義である）を１ アミノドナーの存在下でω−アミノ酸トランスアミナー
ゼの作川に付すことによる式ＩＡ又はＩＢのアミンの一
方のキラル形の他方よりも実質的多量での立体選択的合
成のための方法を提供する。

双方の態様は、ω−アミノ酸トランスアミナーゼの作用
がω−アミノ基に限定されず、しかも限定的種類のアミ
ン類に関して非常に又は排他的に立体選択的であって一
方のキラル形のアミンのみを（少なくとも力ルボニル炭
素原子に関して）もはやキラルでない対応ケトンに変換
しかつ逆にそのケトンを一方のキラル形のアミンのみに
変換するという発見に基づいている。

本明細書で用いられる“エナンチオマー豊富化゛という
用語は、他方と比較して一方のエナンチオマーの量が多
いことに関する。これは（１）他方と止較した一方のキ
ラル形の量に関する減少、（２）他方と比較した一方の
キラル形の量に関する増加又は（３）一方のキラル形の
瓜に関する減少及び他方のキラル形の量に関する増加を
含んでいる。エナンチオマー豊富化を表す上で好都合な
方法は、下記式： （上記式中Ｅ１はアミンの第一のキラル形の量であり、
Ｅ２は同様のアミンの第二のキラル形の量である）で示
されるエナンチオマー過剰、即ちｅｅ”の概念である。

このため２種のキラル形の初期比率が５０　：　５０で
あって５０　：　３０の最終比率を得るために十分なエ
ナンチオマー豊富化が達成されるのであれば第一のキラ
ル形に関するｅｅは２５％であり、一方最終比率が７０
　二３０であれば第一のキラル形に関するｅｅは４０％
である。典型的には本発明のプロセスの場合、９０％以
上のｅｅが達成可能である。

アミンの一方のキラル形の立体選択的合成に関して本明
細書で用いられる他方よりも“尖質的多量”とは少なく
とも約３：１の比率に関し、少なくとも約５０％のｅｅ
を表す。

本プロセスで用いられる式ＩＡ及びＩＢのキラルアミン
類はいくつかの構造的制約を有している。

第一に、アミノ基は一級アミンであるが、それは二級炭
素原子、即ち１つの水素原子及び水素以外の２つの置換
基（Ｒ　及びＲ２）を有した炭素原１ 子に結合されていなければならない。第二に、Ｒ　及び
Ｒ２は同一タイプの構造から選択される１ が、これらの基は分子キラルを示さねばならず、即ちＲ
１は構造又はキラリティに関してＲ２とは必ず異なるか
又はＲ１及びＲ一は一賭になった場合キラル基でなけれ
ばならない。通常各々独立している場合、Ｒ１及びＲ２
はアルキル、アラルキル又はアリール基、好ましくは炭
素原子１〜６の直鎖もしくは分岐鎖アルキル基、炭素原
子７〜１２の直鎖もしくは分岐鎖フェニルアルキル基又
はフエニルもしくはナフチル基である。例としてはメチ
ル、エチル、ｎ−プロビル、イソブロビル、ｎ−ブチル
、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、フエニル、ベンジル、
フェネチル、１−フエネチル、２−フエニルプロビル等
がある。更に、本発明の酵素反応は表記アミノ基及びそ
の関連炭素原子に関与するため、各Ｒ　及びＲ２は場合
により１以上の基１ で置換されていてもよいが、但しそれは酵素阻害基であ
ってはならず、即ちその基を有するキラルアミン又はケ
トンが実際の濃度下で存在する場合にトランスアミナー
ゼの作川に有意に影響を与えたりしない又はその作用と
競合しない基でなければならない。これは簡単な阻害ア
ッセイで容易に調べることができる。阻害が検出される
場合の多くは、それは更に低い濃度のその反応剤で反応
を行うことにより最少に抑制できる。典型的置換基とし
では格別限定されないがクロロ、フルオロ、プロモ及び
ヨードのようなハロ、ヒドロキシ、低級アルキル、低級
アルコキシ、低級アルキルチオ、シクロアルキル、カル
バモイル、モノ及びジ（低級アルキル）置換力ルバモイ
ル、トリフルオロメチル、フェニル、ニトロ、アミノ、
モノ及びジ（低級アルキル）置換アミノ、アルキルスル
ホニル、アリールスルホニル、アルキルカルボキサミド
、アリールカルボキサミド等がある。

Ｒ　及びＲ２が一緒になった場＾の與型的な基１ は２−メチルブタン−１，４−ジイル、ペンタン＝１，
４−ジイル、ヘキサン−１，４−ジイル、ヘキサン−１
，５−ジイル及び２・メチルベンタンー１．５−ジイル
である。

本プロセスに適した典型的アミン類としては洛別限定さ
れず２−アミノブクン、２−アミノー１−ブタノール、
１−アミノー１−フエニルエタン、１−アミノー１−　
（２−メトキシ＝５−フルオロフェニル）エタン、１−
アミノ−１−フエニルプロパン、１−アミノ−１−　（
４−ヒドロキシフエニル）プロパン、１−アミノー１−
（４−プロモフエニル）プロパン、１−アミノー１−（
４−ニトロフェニル）プロパン、１−フエニル−２−ア
ミノブロパン、１−（３−｝リフルオ口メチルフエニル
）−２−アミノブロバン、２−アミノブロバノール、１
−アミノー１−フエニルブタン、１一フェニルー２−ア
ミノブクン、１−　（２．５−ジメトキシー４−メチル
フエニル）−２−アミノブタン、１−フェニル−３−ア
ミノブクン、１−（４−ヒドロキシフエニル）−３−ア
ミノプクン、１−アミノ−２−メチルシクロベンクン、
１−アミノー３−メチルシクロペンクン、１−アミノー
２−メチルシクロヘキサン及び１−アミノー１一（２−
ナフチル）エタンがある。

その最広義の意味において、第一の態様のプロセスでは
キラルアミン類の混合物をアミノアクセプターの存在下
で（少なくとも一方の上記キラルアミン類の表記アミノ
基に関して）酵素的に活性なω−アミノ酸トランスアミ
ナーゼの作用に付す。

上記式中Ｒ　及びＲ２は前記の場合と同義である；１ 式■においてＲ３はＲ１でＲ４はＲ２てあるか又はＲ３
はＲ２でＲ４はＲ１である。

一般に、酵素プロセスは一方のキラル形のみに機能する
か又は他方よりもはるかに高レベルで一方のキラル形に
機能する。例えばＲ，Ｓ−１−アミノー１−フエニルエ
タン（Ｒ１−フェニル、Ｒ２−メチル）の場合、Ｓ形の
みが各々の非キラルケトンのアセトフエノンに変換され
、Ｒ−’１−アミノー１−フェニルエタンは未変化のま
まである。同様にＲ，Ｓ−１−アミノー１−　（４−プ
ロモフェニル）エタン（Ｒ　１−４−プロモフエニル、
Ｒ２−メチル）の場合、Ｓ形は非キラルケトンの４−プ
ロモアセトフェノンに変換されるが、Ｒ−１−アミノー
１−（４−プロモフェニル）エタンは未変化のままであ
る。Ｒ，Ｓ−１−フエニル−３−アミノブタン（Ｒｌ−
フェネチル、Ｒ２−メチル）の場合、Ｓ形は非キラルの
１−フェニルブタン−３−オンに容易に変換されるが、
一方Ｒ形の１−フエニルー３−アミノブクンはＳ形の場
合よりも０．０５以下の率で１−フエニルブタン−３−
オンに変換される。

ある場合には、Ｒ１及びＲ２配置をキラルアミンにあて
はめて、いずれがケトンに変換されいずれが変換されな
いかについて確認することは可能である。しかしながら
Ｒ及びＳ命名の選定はキャンーインゴールドープレログ
（Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ）法に従い行
われ、順序規則（ＳｅｑｕｃｎｃｅＲｕｌｅ）における
Ｒ１及びＲ２の前選定値に依存している。酵素が作用す
るキラルアミンに関したＲ又はＳキラリティ命名の前選
定はいつも可能なわけではない。式■のキラルアミンに
おけるＲ又はＳ配置の選定は順序規則によるＲ３及びＲ
４のランキングに依存しているが、式■のキラルアミン
の配置は一方のみとは限らないがエナンチオマーＩＡ及
びＩＢの一方と同一である。例えば前記のように、Ｓ形
の１−アミノー１−フエニルエタンは非キラルケトンの
アセトフェノ４ンに変換されるが、Ｒ一エナンチオマー
は未変化のままである。

１−アミノ−１−フエニルエタンの場合とＩ．ｉ１様の
絶対配置を有するエナンチオマーのＲ，Ｓ−１−アミノ
ー１−フェニル−２−ヒドロキシエタン（フェニルグリ
ンノール）は変換されるが、但し順序規則のためこれは
Ｒ形と命名される。

反応は平衡であるため、進行又は逆行反応のいずれかは
出発物質の追加又は反応生成物の除去で偏向させること
ができる。例えば２種のキラル形のアミンのエナンチオ
マー比を豊富化させようとする場合には、追加量のアミ
ンアクセプターが（飽和まで）加えられ及び／又は形成
されるケトンが反応混合物から連続的に除去される。逆
に一方のキラル形のアミンを立体選択的に合成する場合
には、ケトンが（飽和まで）辺加され及び／又は形戊さ
れるアミンが除去される。

望ましくないキラル形のアミンがケトンに変換されかつ
望ましいキラル形が変換されない場合には、後者は営法
で容易に単離することができる。

このため部分的分離は酸性化、ケトンを除去するためへ
ブタンのような炭化水素での抽出、水相の塩基性化及び
ヘブタンのような炭化水素での再抽出によって行いつる
。

こうして単離される副生成物はそれ自体有用な物質であ
ることが多い。例えば本プロセスがＲ−２−アミノブタ
ン及びＳ−２−アミノブクン（Ｒｌ−エチル、Ｒ２＝メ
チル）の混合物をＲキラル形でエナンチオマー的に豊富
化させるよう行われる場合には、Ｓキラル形はそれ自体
が有用な有機溶媒であるメチルエチルケトンに変換され
る。

他方双方のキラル形のアミンが望まれる場合には、ケト
ンに変換される形は反応混合物から（又は二相混合物中
水相から）除去され、各々独立して最初ケトンに変換さ
れたのと同様のキラル形を得るためアミノドナーの存在
下でω−アミノ酸トランスアミナーゼの作用に付される
。例えばＲ，Ｓ−１−アミノー１−フェニルエタン（Ｒ
ｌ−フエニル、Ｒ２−メチル）の混合物がら出発する場
合、Ｓ形はω−アミノ酸トランスアミナーゼによって各
々非キラル形のケトン、即ちアセトフエノンに変換され
るが、Ｒ−１−アミノー１−フェニルエタンは未変化の
ままである。Ｒ−１−アミノ１−フエニルエタンは前記
のように反応混合物から容易に単離され、次いでアセト
フエノン副生成物はＲ形よりも実質的高率でｓ−１−ア
ミノー１−フェニルエタンを得るためアミノドナーの存
在下でトランスアミナーゼの作用に付される。

前記プロセスの第二の面では第一とは異なって行われる
。下記式のアミン： Ｈ Ｈ ＩＡ １Ｂ の一方のキラル形の他方よりも実質的多量での立体選択
的合成は、下記式のケトン： ＩＩ （上記式中Ｒ　及びＲ２は前記と同義である）を１ アミノドナーの存在下でキラルアミン類の一方の実質的
量が形威されるまでω−アミノ酸トランスアミナーゼの
作用に付すことにより行うことかできる。上記例におい
て、例えばアセトフエノンはＲ−１−アミノー１−フエ
ニルエタンを除いて又はそれよりも実質的高率でＳ−１
−アミノー１ーフエニルエタンを得るためアミノドナー
の存在下で１・ランスアミナーゼの作用に付される。

アミノアクセプターはケトカルボン酸類、アルカノン類
又はその場でそれに変換される物質である。ケトカルボ
ン酸類の典型例はグリオキサール酸、ピルビン酸、オキ
サロ酢酸等のようなα−ヶトカルボン酸類並びにそれら
の塩である。典型的アルカノンはブタン−２−オンであ
る。

加えて、他の酵素又は全細胞プロセスでアミノアクセブ
ターに変換される他の物質を用いてもよい。これらのア
ミノアクセブターに変換される物質の代表例はフマル酸
（その場でオキサロ酢酸に速やかに変換される）、グル
コース（ピルビン酸に変換される）、乳酸、マレイン酸
等である。

アミノドナーは非キラルアミノ酸グリシン及びＬ−アラ
ニン又はＬ−アスパラギン酸のようなＳ配置を有するキ
ラルアミノ酸を含めたアミン類である。Ｓ−２−アミノ
ブタン、プロビルアミン、ペンジルアミン等のようなア
ミノ酸以外のキラル及び非キラル双方のアミン類も使用
可能である。

本発明で有用なω−アミノ酸トランスアミナーゼはシュ
ードモナス、エシエリヒア（Ｅｓｃｈｃｒｌｅｈｊａ）
、バチルス、サヅカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ）　、ハンセニュラ（Ｉｌａｎｓｅｎｕｌａ）　、
カンジダ、ストレブトミセス、アスベルギルス（Ａｓｐ
ｅｒｇｉ　Ｉ　Ｉｕｓ）及びニュロスポラ（Ｎｅｕｒｏ
ｓｐｏｒａ）を含めた様々な微生物中に存在する公知の
リン酸ピリドキサール依仔酵索である。本発明で特に有
用な２種のω−アミノ酸トランスアミナーゼＥＣ２．６
．１．１８及びＥＣ２．６．１．１９はヨナハら，アグ
リ力ルチュラル・アンド●バイオロジカル・ケミストリ
ー，第４７巻，第１０号，第２２５７−２２６５頁，１
９８３年で結晶化かつ特徴付けられた。

望ましい活性を有する微生物はケモスタツ１・培養、即
ち一定の但し限定された化学的環境下におけるアミノア
クセブター及び唯一の窒素源たるアミンと一緒の培養で
容易に単離することができる。

正常環境下でω−アミノ酸トランスアミナーゼが一級ア
ミン類を代謝することから、アミンは必ずしもキラルア
ミンである必要はない。ω−アミノ酸トランスアミナー
ゼを生じさせるためうまく用いられた非キラルアミン類
としてはｎ−オクチルアミン、シクロヘキシルアミン、
１，４−ブタンジアミン、１．６−ヘキサンジアミン、
６−アミノヘキサン酸、４−アミノ酪酸、チラミン及び
ペンジルアミンがある。２−アミノブクン、α−フェネ
チルアミン及び２−アミノー４−フエニルブタンのよう
なキラルアミン類もＬ−リジン、Ｌ−オルニチン、β−
アラニン及びタウリンのようなアミノ酸を有するためう
まく用いられた。

このような操作により、培養では望ましいω−アミノ酸
トランスアミナーゼを産生ずる微生物に関して豊富化さ
れる。例えば具体的なアミン接触歴を有さないランダム
土壌サンプルで行われる１つのこのようなケモスタット
において約１月間続けられた。しかる後優勢生物は各々
独立して公知株と有意に区別されずかつ表現型的に類似
したバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅ
ｇａｔｅｒｉｕｍ）としてアメリカン・タイプ●カルチ
ャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃ
ｕｌＬｕｒｅ　ＣｏｌｌｅｃＬＩｏｎ）により同定され
た。

こうして単離された生物はいくつかの方法で増殖させる
ことができる。第一に、リン酸緩衝液、炭素源として酢
酸ナトリウム、アミノアクセプターとして２−ケトグル
タミン酸及びｎ−プロビルアミン、ｎ−オクチルアミン
、２−アミノブクン、２−アミノへブタン、シクロヘキ
シルアミン、１，６−ヘキサンジアミン、プトレシン、
６−アミノヘキサン酸、４−アミノ酪酸、Ｌ−リジン、
Ｌオルニチン、β−アラニン、α−フエネチルアミン、
１−フェニルー３−アミノブタン、ペンジルアミン、チ
ラミン、タウリン等のような窒素含有化合物で補充され
た標準塩培地が使用可能である。

一方、微生物は唯一の炭素源としてアミンを用いて増殖
させてもよいが、このため増殖は炭素を１４るためアミ
ンを異化作用することができる生物に限定される。

第三に、微生物はコハク酸ナトリウム、酢酸ナトリウム
又は他のいずれかの炭素源及び主窒素源としてアンモニ
ウム塩又はタンパク質加水分解産物を用い、しかる後望
ましいトランスアミナーゼ活性の産生を誘導するため開
始時又は増殖時のいずれかで２−アミノブタン、１−フ
ェニル−３−アミノブタン、α−フエネチルアミン等の
ようなアミンを加えて増殖させることができる。

丈際の酵素変換はキラルアミンの（／：在下で単離され
た但し非増殖性の細胞による慣用的培養技術によるか又
はキラルアミン類を可溶性ω−アミノ酸トランスアミナ
ーゼ調製物と接触させることにより行われる。

ω−アミノ酸トランスアミナーゼは前記のように無細胞
抽出物又は全細胞調製物′として遊離形であってもある
いは架橋デキストランもしくはアガロース、シリカ、ボ
リアミド又はセルロースのような適切な支持体又はマト
リックスに固定させてもよい。それはポリアクリルアミ
ド、アルギネート、繊維等中に包んでもよい。このよう
な固定法は文献に記載されている〔例えばメソッズ・オ
ブ●エンザイモロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ’　Ｅｎ
ｚｙａ＋ｏｌｏｇｙ）　．第４４巻．１９７６年参照〕
。後者の態様が特に有用であるが、その理由は固定化酵
素が得られれば望ましい豊富化を達成するため固定化酵
素にアミノアクセブター及びキラルアミン類の混合物を
単に供してしかる後形成されたケトンを前記方法で除去
するだけでよいからである。

必要ではないが、リン酸ビリドキサールのようなピリド
キサミン源が反応組成物中に含まれる場合には変換速度
を最大化させることが通常有利である。

本発明で用いられる操作及び物質は以下及びその後の典
型例で記載されている。

操作及び物質 酵素活性：酵素活性はここでは単位／■で表される。酵
素活性の単位はケトン１μｎ＋ｏｌ／ｗｉｎを産生ずる
場合として定義される。統一のため、これはＲ，Ｓ−１
−フエニル−２−アミノブクンから形成される１−フェ
ニルブタン−３−オンのμＩｌｏｌとして＋１１定され
る。下記の標準アツセイが下記例で記載されたω−アミ
ノ酸トランスアミナーゼの活性を測定するために用いら
れた。

試験される既知容量・の酵素調製物は下記組成を有する
溶液中３７℃かつｐＨ７でインキユベートされる： ピルビン酸ナトリウム　　　　　　　　　１００　ａＭ
Ｒ，Ｓ−１−フエニル−２−アミノブタン３０ＩＩＭリ
ン酸ピリドキサール　　　　　　　　　　０．５ｍＭサ
ンプルは除去され、１２％水性トリクロロ酢酸２０容量
％が加えられる。沈澱したタンパク質は遠心除去され、
上澄中の１−フエニルブタン−３−オンの濃度が１００
Ｘ８ｍｍの４μノボパツク（Ｎｏｖｏｐａｋ）フェニル
カラムで液体クロマトグラフィーにより水中４０％イソ
ブロパノール及び０．０９％リン酸で溶出させて測定さ
れる。これらの条件下、１−フエニルブタン−３−オン
は５．３分で溶出する。

アミン類の純度：産生されたアミン類の純度は１００／
１２０メッシュ支持体上１０％ＳＥ−３０の６フィート
（約１８０ｃｍ）Ｘ２開クロム（Ｃｈｒｏｓ）　Ｑカラ
ムでのガスクロマトグラフィーによ−り２１０℃キャリ
アガス流速１０ｍｌ／ｍｉｎで測定された。

エナンチオマー豊富化の測定二所定産物のｅｅは（−）
α−　（トリフルオロメチルフエニル）メトキシアセチ
ルクロリドとの反応〔ガル（Ｇａｌ）　．ジャーナル●
オブ●ファーマキューテイカル●サイエンス（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｒＰｈａｒｍａｃｅｕＬｌｃａｌ　ＳｃＸｅ
ｎｃｅ）　，第６６巻，第１６９頁，１９７７年及びモ
シャー（Ｍｏｓｈｅｒ）ら，ジャーナル・オブ・オーガ
ニツク・ケミストリ−（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’　Ｏｒ
ｇａｎＩｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），第３４巻，第２５
４３０頁，１９６９年参照〕しかる後クロムパック溶融
シリカカラムによる誘導産物のキャビラリーガスクロマ
トグラフィーによって測定された。

標準塩培地：下記例で記載された微生物変換に適した塩
培地は下記組成を有している：Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ　４１．
ＯＯｇ＃） Ｃ　ａ　Ｃ　１　２　　　　　　　　０．０２１　ｇｌ
！ＩＺ　ｎ　Ｓ　０　　・７　Ｈ　２　０　　　　０　
−　２０ｍｇ／（１４ Ｍ　ｎ　Ｓ　Ｏ　　・４　Ｈ　２　０　　　　０．ｌＯ
ｍｇ／　Ｄ４ Ｈ　３Ｂ　Ｏ　３０．０２■／ｇ Ｃ　ｕ　Ｓ　０　　・５　Ｈ　２　０　　　　０．１０
１１１ｇ／　Ｒ４ Ｃ　ｏ　Ｃ　１　　◆６　Ｈ　２　０　　　　０．０５
ａ＋ｇ／　ＩＩ２ ＮｔＣ１　　−６Ｈ２０　　　　０．ＯＬｍｇ／１２ Ｆ　ｅ　Ｓ　０　４　　　　　　　　１　．　５０ｍｇ
／　ｊ’Ｎ　ａ　Ｍ　ｏ　０　４２．００ｍｇ／ｊ？Ｆ
　ｅ　　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ　　　　　　　　５．ＯＯｍｇ
／＃Ｋ　Ｈ　２　Ｐ　Ｏ　４２０．ＯＯｍＭＮａＯＨ　
　　　　　　　　　　　ｐＨ７まで紹成は重要でないが
、但しそれを可変要素から除くためすべての操作に関し
標準化された。

微生物：培養物は指定寄託所から得たか又は記載に従い
単離後各々独立して同定された。

ω−アミノ酸トランスアミナーゼ産生微生物の豊富化二
ヶモスタットは標準塩培地中希釈速度０．０３／ｈで０
．　５％（ｖ／ｖ）　Ｒ，　Ｓ　−　２−アミノプクン
及び２−ケトグルタミン酸１０ｍＭにより維持される。

ケモスタットに播種され、３７℃かつｐＨ６．８〜７．
０で約１月間ランされる。成長する株は単離され、２−
ケトグルタミン酸１０１ＩＭ及びＲ，Ｓ−１−フェニル
−３−アミノブタン５ｎ＋Ｍで補充された標準塩培地含
脊最少寒天上で増殖される。

酵素回収：他に指摘のないかぎり、培養物からの細胞は
１０，ＯＯＯＧで１０分間遠心され、ｐＨ７のリン酸緩
衝液１０ｍＭ及びリン酸ピリドキサール０．５ｍＭに再
懸濁され、１５，　　０００ｐｓｌ（約１　０　５　０
　ｋｇ／　ｃｄ）で冷却フレンチ（Ｆｒｅｎｃｈ）プレ
スに２回通過させて破壊される。細胞砕片は１０．ＯＯ
ＯＧでＩＩＪ′！１間遠心除去され、酵素含有上澄が回
収される。

下記例は本発明の性質を更に類型化する上で役立つが、
但しその範囲に関する制限として解釈されるべきでなく
、これは前記特許請求の範囲によってのみ唯一規定され
る。

例１ ＼ 下記操作は唯一の窒素源としてアミノドナーを用いたω
−アミノ酸トランスアミナーゼ産生微生物の増殖法につ
いて例示している。

バチルス・メガテリウムを３ｆＩシェークフラスコ（　
２　０　Ｏ　ｒｐｍ）内において３０℃で１７時間にわ
たり酢酸ナトリウム６０ｍＭ、リン酸緩衝液３０ｄ、２
−ケトグルタミン酸ニナトリウム３０ＩＩＩＭ及び窒素
源ｎ−プロビルアミン１００ＩＩＭ含有の上記塩溶液１
ｇ中で増殖させた。培養物が密度０，６ｇ（乾燥重量）
／１に達したとき、細胞を回収し、酵素を前記のように
単離した。こうして得られたω−アミノ酸トランスアミ
ナーゼの比活性は前記のように試験した場合０．４９’
ｌ１位／■であった。

前記操作で用いられたバチルス・メガテリウム株は前記
ケモスタットに播種して優勢坐物（Ｒ，Ｓ−１−フエニ
ル−３−アミノブ才ン上で増殖可能な生物）をＩ１１離
することによりアミンとの具体的接触歴のない土壌サン
プルから得た。本株は各々独立して公知株ＡＴＣＣＮｏ
．１４５８１と有意差がなくかつＡＴＣＣ４９０９７Ｂ
と表現型が類似したバチルス・メガテリウムとしてアメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクションにより同定
された。

例２ 下記操作は唯一の炭素源としてアミノドナーを用いたω
−アミノ酸トランスアミナーゼ崖生微生物の増殖法につ
いて例示している。

シュードモナス・アエルギノサＡＴＣＣ１５６９２をウ
ェイ（Ｍａｙ）ら，ＦＥＭＳｖイクｏ−レタ，ｆｆｉ３
４巻，第２７９頁，１９８６年で記載されたように唯一
の炭素源としてβ−アラニン上で増殖させ、しかる後ω
−アミノ酸トランスアミナーゼ含有細胞抽出物を前記の
ように得る。前記のように試験した場合、ω−アミノ酸
トランスアミナーゼの比活性は０．０４０単位／■であ
った。

例３ シュードモナス・ブチダ（Ｐｓｃｕｄｏｍｏｎａｓ　ｐ
ｕｔｉｄａ）ＡＴＣＣ３９２１３を例１で記載されたよ
うに培養し、しかる後酵素抽出物を前記のように得た。

ω−アミノ酸１・ランスアミナーゼの比活性は０．０４
５ｒｌｉ位／■であった。

例４ 下記操作はアミノアクセプターに関する必要性について
証明している。

上記で得られたＰ，ブチダ、Ｂ，メガテリウム及びＰ．
アエルギノサからの酵素抽出物をトリス／ＭＣＩ　　５
０ａＭ中ｐＨ９でピルビン酸ナトリウム１００ｍＭ存在
下又は非存在下Ｒ，Ｓ−１−フェニル−３−アミノブタ
ン３０ＩＩＩＭを用いて前記のように試験した。下記の
相対的変換率を蜆察した。

酵素作用のトランスアミナーゼ性質はトランスアミナー
ゼに特與的であることが知られた“自殺不活性化物質”
の効果から明白であり〔例えば、バーネット（Ｉ３ｕｒ
ｎｅｔＬ）ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリ−（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’Ｂｌｏｌｏｇ！ｃ
ａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　，第２２５巻，第４２８
＝４３２頁，１９８０年参照〕、不活性化物質（　０　
．　５　ｍＭ）をＲ，Ｓ−１−フエニル−３−アミノプ
クンの添加前アッセイ培地と共にプレインキω−アミノ
酸トランスアミナーゼの立体選択性はＲ−１−フェニル
ー３−アミノブクン１５ｍＭ（ピルビン酸存在）を用い
た対応アッセイから判明する。

下記操作は唯一の窒素源としてアンモニウムを用いしか
る後アミンの添加でω−アミノ酸トランスアミナーゼ産
生を誘導させる微生物の増殖法について例示している。

バチルス・メガテリウムをｌｉ）培養物中下記炭素源４
０ａ＋Ｍ、塩化アンモニウム５　ｍＭ，リン酸緩衝液８
０＋ａＭ及び下記アミンインデューサ−２＋ａＭで補充
された標準塩培地で増殖させた。３０〜４０時間後、酵
素を回収し、前記のように試験した。

例６ 下記操作はタンパク質豊富源を用いしかる後アミンの添
加でω−アミノ酸トランスアミナーゼ産生を誘導させる
微生物の増殖法について例示している。

バチルス・メガテリウムを１２１１醗酊槽内のカサミノ
酸１０ｇ／ρで補充された前記塩培地中通気及び攪拌下
でｐＨ７及び３０℃にて増稙させた。酢酸ナトリウムを
凝集濃度１２０１ＩＭまで徐々に加えた。この特点で細
胞密度は３ｇ（乾燥重量）／ＩＩであった。１−フェニ
ル−３−アミノブタンを凝集濃度１０ａ＋Ｍまで加えた
。１２時間後酵素を回収し、前記のように試験した。比
活性は０．４９単位／■であった。

例７ 下記操作はキラルアミンのラセミ体のエナンチオマー豊
富化を行うための可溶性酵素調製物の使用法について例
示している。

ω−アミノ酸トランスアミナーゼを例１に記載された方
法でバチルス・メガテリウムから得た。

前記アッセイでは比活性０．３７５単位／■を示した。

リン酸ピリドキサール０．４ＩＩＩＭ及びリン酸ナトリ
ウム４０ｍＭを更に含有したこの酵素調製物２６．４■
の溶液２５ｍｌにアミノアクセプターとしてＲ，Ｓ−１
−アミノー１−フエニルエタン２０ｍＭ及びピルビン酸
ナトリウム１００ＩＩＩＭを加えた。溶液をｐＨ７かつ
３０℃で１５０分間インキユベートし、しかる後２Ｎ水
酸化ナトリウム２．５ｍｌの添加でアルカリ性（ｐＨ＞
１２）にした。溶液をｎ−へブタンで抽出し、抽出液を
蒸発させて、ｅｅ９６．４％のＲ−１−アミノー１ーフ
ェニルエタン３０．８■（変換率４９％）を得た。

例８ 下記操作はキラルアミンのラセミ体のエナンチオマー豊
富化を行うための可溶性酵素調製物の使用法について例
示しているが、各場合において下記ラセミ体が例７の操
作でＲ，Ｓ−１−アミノー１−フエニルエタンに代わり
用いられた。

（ａ）　Ｒ， （ｂ）　Ｒ， （ｃ）　Ｒ， （ｄ）　Ｒ， （ｅ）　Ｒ， （ｆ）　Ｒ， 出発物質 Ｓ−１−フエニル−３−アミノブクン Ｓ−１−アミノー１−（４−プロモフエニル）エタンＳ
−１−フェニル−２−アミノブロパンＳ−１−アミノー
１−フエニルエタン Ｓ−４−（４−メトキシフエニル）−２−アミノブタン
Ｓ−５−（３−ピリジル）−２−アミノペンタン生成物 Ｒ−１−フエニル−３−アミノブタン Ｒ−１−アミノー１−（４−プロモフエニル）エタンＲ
−１−フエニル−２−アミノブロパンＲ−１−アミノー
１−フエニルエタン Ｒ−４−（４−メトキシフェニル）−２−アミノブタン
Ｒ−５−（３−ビリジル）−２−アミノペンタンｅｅ ９８．４ ９７，６ ９８．６ ９９ ９９ ９９ 例９ 下記操作はキラルアミンのラセミ体のエナンチオマー豊
富化を行うための非増殖細胞の使用法について例示して
いる。

例１に記載された方法に従い唯一の窒素源としてＲ，Ｓ
−１−フエニル−３−アミノブクン６１ＷＭ上で３３時
間増殖された３つのバチルス・メガテリウム１ρ培養物
からの細胞を遠心により回収し、１０＋ｎＭリン酸緩衝
液（ｐＨ６．８）２５０ｍｌへの再懸濁及び遠心により
洗浄した。

細胞ペレットをＲ，Ｓ−１−フェニル−３−アミノブタ
ン１０ｍＭ及びアミノアクセプターとしてオキサロ酢酸
５０ａ＋Ｍを含有した１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．
８）０．６１１に再懸濁した。オービタルインキュベー
ター上３０℃で４時間のインキュベート後、溶液をアル
カリ性にし、例７に記載されたようにヘプタンで抽出し
た。こうしてＲ−１−フエニル−３−アミノブタンをｅ
ｅ９５．８％に相当する光学純度９７．９％で得た。

例１０ 下記操作はキラルアミンのラセミ体のエナンチオマー豊
富化を行うための増殖細胞の使用及びアミノアクセブタ
ー前駆体の使用について例示している。

実質上例１で記載されたように但しＲ，Ｓ−１−フエニ
ル−３−アミノプタン１０ＩＩＩＭを用いて調製された
バチルス・メガテリウム播種原６Ｄをアミノアクセプタ
ー前駆体としてフマル酸３０ＩＩＩＭで補充された前記
塩培地１２０４！：Ｊｆｆｉ中で培養した。

播種２２時間後、フマル酸３０ｉＭを追加し、６時間後
ロミコン（Ｒｏｍｉｃｏｎ）　Ｐ　Ｍ　１　０　０膜に
よる限外濾過で細胞を除去することにより培養物を回収
した。溶液をアルカリ性にし、例７に記載されたように
ヘプタンで抽出した。こうしてＲ−１−フエニル−３−
アミノブクンをｅｅ９６．４％の純度９９．５％で得た
。

例１１ 下記操作は前記アッセイを用い但し下記キラルアミンを
代用した場合に可溶性酵素調製物による具なるキラルア
ミン類の直接ｉ１Ｐ＋定された又は動力学的データから
計算された相対的変換率について例示している。

例１２ 下記操作は前記アッセイにおいてピルビン酸の代わりに
異なるアミノアクセプターを用いた場合の１−フエニル
−３−アミノブクンに関する相対的変換率について例示
している。

アセトフェノンは著しく低いけれども（相対的変換率一
＜１０）、アミノアクセプターとして有効であることも
判明した。

例１３ 下記操作は可溶性酵素調製物を用いて豊富化産物を連続
抽出した場合のエナンチオマー豊富化について例示して
いる。

可溶性酵素調製物を例１に記載された方法でバチルス・
メガテリウムから得た。前記アッセイでは比活性０．７
０１１１位／ＩＩｌｇを示した。この抽出液４５０■、
ピルビン酸ナ，トリウム０．１２Ｍ，Ｒ，Ｓ−１−フエ
ニル−３−アミノブクン０．２Ｍ，リン酸ピリドキサー
ル１ｏ＋Ｍ及びリン酸塩０．５Ｍ（ｐＨ７．５）を含有
した水相を調製した。ｎーへブタン５００ｍｌを加え、
二相混合物を２２℃で７時間貯蔵した。次いでｐＨを塩
酸の添加で４．５に調整し、水相を有機相から分離した
。水相を水酸化ナトリウムの添加でアルカリ性にし、ヘ
プタンで抽出した。ヘブタンの除去後、残渣はＲ−１−
フエニルー３−アミノブクン９６％を含有することが分
析された。

例１４ 下記操作はキラルアミンの合成について例示している。

可溶性酵素調製物を例１に記載された方法でバチルス・
メガテリウムから得た。前記アッセイでは比活性０．５
８単位／■を示した。この調製液３５０■、リン酸ピリ
ドキサール０．４ｍＭ及びリン酸ナトリウム４０ｍＭの
水溶液２００ｍｌにアミノドナーとして１−フエニルブ
タン−３−オン４．２＋Ｍ及び２−アミノブタン１００
ｍｌを加えた。

混合物をｐＨ７かつ３０℃で４時間インキユベートした
が、その時点でＲ−１−フエニル−３−アミノプクンは
３．３５ＩＩＩＭの濃度で反応ａｉａ物中に存在してお
り、これは変換率８０％に相当した。

生成物をＩＯＮ水酸化ナトリウム４０ｍｌの添加及びｎ
−ヘブタン２５０ｍｌによるアルカリ性水溶液の、抽出
で！■離した。ヘプタン抽出波の蒸発後、生威物１００
．５ｇを得たが、これは前記のように分析したところ、
Ｓ−１−フエニル−３−アミノブタン９６．４％を含Ｈ
していることが判明した。

同様に、Ｓ−１−フエニル−２−アミノブ口パンは１−
フエニルプロパン−２−オンからｅｅ９６．４及び収率
９４．８％で得た。Ｓ−ｔ−アミノー１−フエニルエタ
ンはアセトフエノンからｅｅｌ００％及び収率４４％で
得た。

例】５ この操作は酵素分離並びにＲ及びＳ一エナンチオマーの
各々の単離について例示している。

例７で記載されたＲ，Ｓ−１−アミノー１−フェニルエ
タンのＲ一エナンチオマーを得るための操作をインキュ
ベートまで続ける。しかしながらインキュベート溶液を
アルカリ性にする前、それをｎ−ヘブタンで抽出し、抽
出液をとっておく。

次いで水相を例７に従い処理して、前記のようにＲ−１
−アミノー１−フエニルエタンをＩｌｌ離する。

アセトフエノンを残ったヘプタン抽出液から蒸発により
回収する。例１４で記載された場合と実質的に同様の操
作に従い、但し１−フェニルブタン−３−オンの代わり
にアセトフエノン２．　　３ａ＋Ｍを用いて、Ｓ−１−
アミノー１−フエニルエタン５６■（１００％）を得た
。

例１６ この操作は固定化酵素の使用法について例示している。

固定化：４７ｍ＋＊径アクチディスク（ＡＣＴＩＤＩＳ
Ｋ）（ＦＭＣ社（ＦＭＣ　Ｃｏｒｐ．）　）支持マトリ
ックス（０．４ｇ）を出入チューブ、嬬動ポンブ及びリ
ザーバー装備ハウジング〔ミリボア・スウィーネックス
（Ｍｉｌｌｌｐｃｒｅ　Ｓｗｃｃｎｅｘ）　）中にいれ
た。マトリックスを環境温度下速度３ｍｌ／ＩＩｌ１ｎ
で連続的に（１）０．５ｍＭリン酸ビリドキサール含有
５０ｌＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）２００ｍｌで２０分間
、（２）例１の方法で得られた酵素の４．６■／ｍｌ溶
液１１ｍｌで１２０分間、（３）　０．　　５ｍＭリン
酸ビリドキサール含有５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ　Ｈ　
７）中０．３Ｍ塩化ナトリウム１５０ｍｌで３０分間、
及び（４）０、５ＩＩＩＭリン酸ピリドキサール含有５
０關リン酸緩衝液（ｐＨ７）２００ｍｌで２０分間洗浄
した。

豊富化：Ｒ，Ｓ−１−フエニル−３−アミノブタン１０
ＩＩＩＭ、ピルビン酸ナトリウムＩＯＯＭ，リン酸ピリ
ドキサール０．　　１ｍＭ及びリン酸カリウム２５ＩＩ
ＩＭ（ｐＨ７）の溶液１４０ｍｌを環境温度下速度５ｍ
ｌ／ＩＩｌｉｎで上記マトリックスに循環させた。２時
間後、循環液を装置から除表した。形成された１−フエ
ニルブタン−３−オンの濃度は５．　　２ａ＋Ｍであっ
たが、一方Ｒ−１−フエニルー３−アミノブタンの濃度
は４．８ｄであった。ｐＨを１２．５に調整し、Ｒ−１
−フェニルー３−アミノブタンをヘブタンによる抽出で
定量的に単離した。ヘプタンの蒸発除去後、生成物はＲ
−１−フエニル−３−アミノブタン９２．８％として分
析された。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記式の２種のエナンチオマーキラルアミン類： ▲数式、化学式、表等があります▼及び▲数式、化学式
   、表等があります▼ （上記式中Ｒ＾１及びＲ＾２の各々は非置換であるか又
   は酵素的非阻害基で置換されたアルキル又はアリール基
   であるが、Ｒ＾１は構造又はキラリティに関してＲ＾２
   とは異なる）の混合物のエナンチオマー豊富化のための
   方法であって、 水性媒体中及びアミノアクセプターの存在下でキラルア
   ミン類の上記混合物を、少なくとも上記キラルアミン類
   の一方の実質的量が下記式のケトン： ▲数式、化学式、表等があります▼ （上記式中Ｒ＾１及びＲ＾２は上記アミンの場合と同義
   である）に変換されるまで上記キラルアミン類の一方の
   表記アミノ基に関して酵素的に活性なω−アミノ酸トラ
   ンスアミナーゼと接触させることを特徴とする方法。 ２、少なくとも、ケトンに変換されないキラルアミンの
   エナンチオマー過剰率が他方のキラルアミンと比較して
   少なくとも約９０％となるまで接触が維持される、請求
   項１に記載の方法。 ３、ケトンに変換されないキラルアミンが反応混合物か
   ら回収される、請求項１に記載の方法。 ４、ケトンの実質的量が水性媒体から回収される、請求
   項１に記載の方法。 ５、水性媒体から回収されたケトンが、少なくとも最初
   ケトンに変換された場合と同一のキラル形が他方のキラ
   ル形が形成されるよりも実質的に多量に形成されるまで
   、アミンドナーの存在下でω−アミノ酸トランスアミナ
   ーゼと独立して接触せしめられる、請求項４に記載の方
   法。 ６、アミノアクセプターがα−ケトカルボン酸、脂肪族
   もしくは環式脂肪族ケトン、脂肪族もしくは環式脂肪族
   アルデヒド又は反応媒体中その場でα−ケトカルボン酸
   に生化学的に変換される物質である、請求項１に記載の
   方法。 ７、アミノアクセプターがグリオキサール酸、ピルビン
   酸、オキサロ酢酸、それらの塩又はヘプタアルデヒドで
   ある、請求項６に記載の方法。 ８、Ｒ＾１及びＲ＾２が各々独立して炭素原子１〜６の
   直鎖もしくは分岐鎖アルキル基、炭素原子７〜１２の直
   鎖もしくは分岐鎖フェニルアルキル基又はフェニルもし
   くはナフチル基であって、上記基の各々は非置換である
   か又は酵素的非阻害基で置換されている、請求項１に記
   載の方法。 ９、Ｒ＾１及びＲ＾２が各々独立してメチル、エチル、
   ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル
   、ｓｅｃ−ブチル、フェニル、ベンジル又はフェネチル
   である、請求項８に記載の方法。 １０、キラルアミン類及びアミノアクセプターの混合物
   がω−アミノ酸トランスアミナーゼを産生する微生物の
   全細胞と接触せしめられる、請求項１に記載の方法。 １１、キラルアミン類及びアミノアクセプターの混合物
   がω−アミノ酸トランスアミナーゼの無細胞水性調製物
   と接触せしめられる、請求項１に記載の方法。 １２、キラルアミン類及びアミノアクセプターの混合物
   が支持体に固定されたω−アミノ酸トランスアミナーゼ
   と接触せしめられる、請求項１に記載の方法。 １３、下記式のアミン： ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式
   、表等があります▼ （上記式中Ｒ＾１及びＲ＾２の各々は非置換であるか又
   は酵素的非阻害基で置換されたアルキル又はアリール基
   であるが、Ｒ＾１は構造又はキラリティに関してＲ＾２
   とは異なる）の一方のキラル形の他方よりも実質的に多
   量の立体選択的合成のための方法であって、 下記式のケトン： ▲数式、化学式、表等があります▼ （上記式中Ｒ＾１及びＲ＾２は上記アミンの場合と同義
   である）をアミノドナーの存在下で少なくとも上記キラ
   ルアミン類の一方の実質的量が形成されるまでω−アミ
   ノ酸トランスアミナーゼと接触させることを特徴とする
   方法。 １４、アミノドナーが２−アミノブタン、グリシン、ア
   ラニン又はアスパラギン酸である、請求項１３に記載の
   方法。 １５、Ｒ＾１及びＲ＾２が各々独立して炭素原子１〜６
   の直鎖もしくは分岐鎖アルキル基、炭素原子７〜１２の
   直鎖もしくは分岐鎖フェニルアルキル基又はフェニルも
   しくはナフチル基であって、上記基の各々は非置換であ
   るか又は酵素的非阻害基で置換されている、請求項１３
   に記載の方法。 １６、Ｒ＾１及びＲ＾２が各々独立してメチル、エチル
   、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチ
   ル、ｓｅｃ−ブチル、フェニル、ベンジル又はフェネチ
   ルである、請求項１５に記載の方法。 １７、ケトン及びアミノドナーがω−アミノ酸トランス
   アミナーゼを産生する微生物の全細胞と接触せしめられ
   る、請求項１３に記載の方法。 １８、ケトン及びアミノドナーがω−アミノ酸トランス
   アミナーゼの無細胞水性調製物と接触せしめられる、請
   求項１３に記載の方法。 １９、ケトン及びアミノドナーが支持体に固定されたω
   −アミノ酸トランスアミナーゼと接触せしめられる、請
   求項１３に記載の方法。 ２０、大モル過剰のアミノドナーが用いられる、請求項
   １３に記載の方法。