JPH0276572A - ビフィズス菌プロトプラストの再生用培地及び該培地を用いた再生方法 - Google Patents
ビフィズス菌プロトプラストの再生用培地及び該培地を用いた再生方法Info
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- JPH0276572A JPH0276572A JP63228342A JP22834288A JPH0276572A JP H0276572 A JPH0276572 A JP H0276572A JP 63228342 A JP63228342 A JP 63228342A JP 22834288 A JP22834288 A JP 22834288A JP H0276572 A JPH0276572 A JP H0276572A
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Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
童栗上■肌即分亘
本発明は、人の健康維持に関与するとされる腸内細菌で
あって、発酵乳の製造にも利用されるビフィズス菌のプ
ロトプラストの融合のための再生に用いる培地、及び該
培地を用いたビフィドバクテリウム・シュードロンガム
、或いはビフィドバクテリウム・ロンガムのプロトプラ
ストの再生方法に関する。
あって、発酵乳の製造にも利用されるビフィズス菌のプ
ロトプラストの融合のための再生に用いる培地、及び該
培地を用いたビフィドバクテリウム・シュードロンガム
、或いはビフィドバクテリウム・ロンガムのプロトプラ
ストの再生方法に関する。
梗米反街
現在までに、色々な細菌類のプロトプラスト化が試みら
れており、ビフィズス菌のプロトプラスト化についても
以下のように報告されＣいる。
れており、ビフィズス菌のプロトプラスト化についても
以下のように報告されＣいる。
例えば、エクスチルカーテルらは、ビフィドバクテリウ
ム、ビフィダム・バー・ペンシルハニクス（Ｂｉｆｉｄ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ ｖａｒ、ｐｅ
ｎｎｓｙＬｖａｎｉｃｕｓ）に対し、ショ糖存在下で、
リヅチームを作用させることにより、プロトプラスＩ・
を調製したと報告している〔ビオヒミ力・エト・ビオフ
イジ力・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏ
ｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ） ２Ｌ９＋ １４１−１５
４． （１９７０） ）。
ム、ビフィダム・バー・ペンシルハニクス（Ｂｉｆｉｄ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ ｖａｒ、ｐｅ
ｎｎｓｙＬｖａｎｉｃｕｓ）に対し、ショ糖存在下で、
リヅチームを作用させることにより、プロトプラスＩ・
を調製したと報告している〔ビオヒミ力・エト・ビオフ
イジ力・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏ
ｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ） ２Ｌ９＋ １４１−１５
４． （１９７０） ）。
ウェブらは、ビフィドバクテリウム・ビフィダムにエン
ド−Ｎ−アセチルムラミダーゼを作用させて、プロトプ
ラストを調製したと報＠１している〔ジャーナル・オブ
・ジェネラル・アンド・アプライド・ミクロハイオロジ
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌａｎｄ Ａ
ｐｐｌｉｅｄ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ） ２９．５
０７ （１９８３））。
ド−Ｎ−アセチルムラミダーゼを作用させて、プロトプ
ラストを調製したと報＠１している〔ジャーナル・オブ
・ジェネラル・アンド・アプライド・ミクロハイオロジ
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌａｎｄ Ａ
ｐｐｌｉｅｄ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ） ２９．５
０７ （１９８３））。
森下らは、ビフィドバクテリウム属に属する微生物に対
し、ショ糖、乳糖、マルト−ス、ラクチュロース、Ｎ−
アセチルムラミダーゼを作用させることにより、プロト
プラストを製造する方法を特許出願している （特開昭
５９−１３５８８３）。
し、ショ糖、乳糖、マルト−ス、ラクチュロース、Ｎ−
アセチルムラミダーゼを作用させることにより、プロト
プラストを製造する方法を特許出願している （特開昭
５９−１３５８８３）。
ナカイらは、ビフィドバクテリウム・ビフィダムについ
て、ショ糖及びペニシリンＧを含有する培地で嫌気的に
生育させて、プｌ：ｌ ｌ−プラストを調製したと報告
している〔ジャーナル・オブ・ジェネラル・アンド・ア
プライド・ミクロハイオロジイ（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ
Ｇｅｎｅｒａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）３０．１８７ （１９８４）
）。
て、ショ糖及びペニシリンＧを含有する培地で嫌気的に
生育させて、プｌ：ｌ ｌ−プラストを調製したと報告
している〔ジャーナル・オブ・ジェネラル・アンド・ア
プライド・ミクロハイオロジイ（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ
Ｇｅｎｅｒａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）３０．１８７ （１９８４）
）。
小此木らは、ビフィドバクテリウム属に属する微生物に
対し、ラフィノース、メレジト−ス、あるいはマルトト
リオースの三糖類及びマグネシウムイオンの存在下で、
Ｎ−アセチルムラミダーゼを作用させることにより、プ
ロトプラストを製造する方法を特許出願している〔特開
昭６１−２８０２６７ ）。
対し、ラフィノース、メレジト−ス、あるいはマルトト
リオースの三糖類及びマグネシウムイオンの存在下で、
Ｎ−アセチルムラミダーゼを作用させることにより、プ
ロトプラストを製造する方法を特許出願している〔特開
昭６１−２８０２６７ ）。
しかし、フ゛ロ１−ブラスト化に当っては、それぞれの
菌種毎に、最適の条件設定が必要であり、また、プロト
プラストの再生についても同様に、最適の条件設定が必
要であり、したがって、高収率でビフィズス菌のプロト
プラストを製造し、かつ高率でビフィズス菌のプロＩ・
プラストを再生する方法については未だ確立されておら
ず、ビフィズス菌の育種及び改良に関しては、他の微生
物に比べて著しく遅れているという問題があった。
菌種毎に、最適の条件設定が必要であり、また、プロト
プラストの再生についても同様に、最適の条件設定が必
要であり、したがって、高収率でビフィズス菌のプロト
プラストを製造し、かつ高率でビフィズス菌のプロＩ・
プラストを再生する方法については未だ確立されておら
ず、ビフィズス菌の育種及び改良に関しては、他の微生
物に比べて著しく遅れているという問題があった。
因に、ビフィズス菌は発酵乳、乳酸菌飲料、菓子などの
食品、整腸剤、栄養剤あるいは飼料などに広く利用され
ている微生物である。
食品、整腸剤、栄養剤あるいは飼料などに広く利用され
ている微生物である。
明が解決しようとする課題
本発明は、軟土の状況に鑑みなされたものであって、ビ
フィズス菌のプロトプラス１が高頻度で再生させるため
に用いる再生用培地を提供することを課題とする。また
、本発明はビフィドバクテリウム・シェードロンガム、
或いはヒフイドバクテリウム・ロンガムを対象とし、そ
のプロトプラストを調製し、プロトプラストが高ルエ１
度で再生させるための再生方法を提供することを課題と
する。
フィズス菌のプロトプラス１が高頻度で再生させるため
に用いる再生用培地を提供することを課題とする。また
、本発明はビフィドバクテリウム・シェードロンガム、
或いはヒフイドバクテリウム・ロンガムを対象とし、そ
のプロトプラストを調製し、プロトプラストが高ルエ１
度で再生させるための再生方法を提供することを課題と
する。
すなわち、本発明は、上記ビフィズス菌のプロ］・プラ
ストを高頻度で再生することにより、その融合を可能に
するものである。
ストを高頻度で再生することにより、その融合を可能に
するものである。
課題を７′ｌするための手段
本発明の特徴は、ビフィズス菌のプロトプラストを再生
するに適した、下記に示した基本組成をもつ再生用ＭＮ
Ｍ−Ｇ培地にある。
するに適した、下記に示した基本組成をもつ再生用ＭＮ
Ｍ−Ｇ培地にある。
ＭＮＭ−Ｇ培地の基本組成： （／ｊりＫ２ＨＰＯ４
２，５ｇ ＣＩｌａＣＯＯＮａ １０ ｇト
リジ１−ン １０ ｇ酵母エキス
５．０ｇシステイン・ＨＣｌ・１１Ｃ
１・１１□０ ０．４ ｇグルコース
５、Ｏｇハクト寒天 １５ ｇ
ＣａＣｌ 、２１１ｚＯ５ｍＭ ＭｇＣ１２６Ｈ□０５ ｍＭ ｐｉ＋ ６．５ 更に、本発明の特徴は、ビフィドバクテリウム・シュー
ドロンガム、或いは、ビフイドバクテリラム・ロンガム
を、ラフィノースを浸透圧安定剤（Ｏｓｍｏｔｒｃ ５
ｔａｂｉｌｉｚｅｒ）として添加したＬ記のＭＮＭ−Ｇ
培地に塗沫して嫌気培養することにある。
２，５ｇ ＣＩｌａＣＯＯＮａ １０ ｇト
リジ１−ン １０ ｇ酵母エキス
５．０ｇシステイン・ＨＣｌ・１１Ｃ
１・１１□０ ０．４ ｇグルコース
５、Ｏｇハクト寒天 １５ ｇ
ＣａＣｌ 、２１１ｚＯ５ｍＭ ＭｇＣ１２６Ｈ□０５ ｍＭ ｐｉ＋ ６．５ 更に、本発明の特徴は、ビフィドバクテリウム・シュー
ドロンガム、或いは、ビフイドバクテリラム・ロンガム
を、ラフィノースを浸透圧安定剤（Ｏｓｍｏｔｒｃ ５
ｔａｂｉｌｉｚｅｒ）として添加したＬ記のＭＮＭ−Ｇ
培地に塗沫して嫌気培養することにある。
本発明では、ビフィドハクテリウ１、・シュートロンガ
ム（以下Ｂ、シュートロンガムと略記する）、或いは、
ビフィドバクテリウム・ロンガム（以下Ｂ、コロンムと
略記する）のプロ１〜プラストは、ビフィズス菌の公知
のプロトプラス１化の方法により調製し得るが、本発明
者らが開発した方法に従って調製することが好ましく、
安定なプロトプラストが得られる。
ム（以下Ｂ、シュートロンガムと略記する）、或いは、
ビフィドバクテリウム・ロンガム（以下Ｂ、コロンムと
略記する）のプロ１〜プラストは、ビフィズス菌の公知
のプロトプラス１化の方法により調製し得るが、本発明
者らが開発した方法に従って調製することが好ましく、
安定なプロトプラストが得られる。
なお、Ｂ、シュードロンガムのプｌｙ＋ ｌ・プラスト
の調製法に関しては、特願昭６３−２０１５９７に、Ｂ
。
の調製法に関しては、特願昭６３−２０１５９７に、Ｂ
。
ロンガムのプロトプラストの調製法に関しては、特願昭
６３−２０１５８０に、それぞれ詳しく記載されている
。
６３−２０１５８０に、それぞれ詳しく記載されている
。
本発明は、上述のようにして調製Ｕ７たＢ、シュードロ
ンガム、或いは、Ｂ、ロンガノ、のプロトプラストを、
ラフィノースを好ましく Ｉｔ ０．２〜０．３Ｍの濃
度に添加した前記の晶トＧ培地を再生培地として用いて
培養する。
ンガム、或いは、Ｂ、ロンガノ、のプロトプラストを、
ラフィノースを好ましく Ｉｔ ０．２〜０．３Ｍの濃
度に添加した前記の晶トＧ培地を再生培地として用いて
培養する。
ラフィノースを添加したＭＮＭ−Ｇ培地に、特願昭６３
−２０１５７９で開示した方法で調製したＢ、シュード
ロンガムのプロトプラスト懸濁液、或いは、特願昭６３
−２０１５８０で開示した方法で調製したＢ、ロンガム
のプロトプラス１−懸濁液を高張緩衝液で希釈したもの
を塗沫し、２８〜３０℃で嫌気培養し、６日乃至７日後
、プロトプラスト再生頬度（Ｆ Ｒ）を、有効プロトプ
ラスト出現頻度（ＦＡＰ）及び浸透圧安定細胞の出現頻
度（ＦＯ３）とともに計算する。
−２０１５７９で開示した方法で調製したＢ、シュード
ロンガムのプロトプラスト懸濁液、或いは、特願昭６３
−２０１５８０で開示した方法で調製したＢ、ロンガム
のプロトプラス１−懸濁液を高張緩衝液で希釈したもの
を塗沫し、２８〜３０℃で嫌気培養し、６日乃至７日後
、プロトプラスト再生頬度（Ｆ Ｒ）を、有効プロトプ
ラスト出現頻度（ＦＡＰ）及び浸透圧安定細胞の出現頻
度（ＦＯ３）とともに計算する。
上記高張緩衝液には３０ｍＭｌ−リス−１（ＣＩ（ｐｌ
＋ ８．０）、３ｍＭ ＭｇＣｌ、６８ｚＯ１０，３Ｍ
ラフィノースを含むＮ［Ｌ３ＴＨＭ Ｒバッファーを用
いるとよい。
＋ ８．０）、３ｍＭ ＭｇＣｌ、６８ｚＯ１０，３Ｍ
ラフィノースを含むＮ［Ｌ３ＴＨＭ Ｒバッファーを用
いるとよい。
以下に実施例を示して本発明を具体的に説明する。
実施例１
供試菌株としてＢ、シュードロンガムＳＢＴ ２９０８
（ＦＥＩ？Ｍ Ｐ−１０１３Ｅ１号）を用い、該菌株を
４０％のトマトジュース浸出液を含むＣＡＭ培地に３７
℃の温度に一夜培養した。
（ＦＥＩ？Ｍ Ｐ−１０１３Ｅ１号）を用い、該菌株を
４０％のトマトジュース浸出液を含むＣＡＭ培地に３７
℃の温度に一夜培養した。
次いで、培養により得られた菌体を、３ｍＭの塩化マグ
ネシウムと０．３Ｍのラフィノースを含む３０ｍＭのＴ
ｒｉｓ−１１ＣＩ （ｐＨ８，０）に懸濁させた。この
菌体懸濁液に８０ＣＩｇ／−のりゾチ〜ムと５００μＢ
／ｍｌのα−アミラーゼを同時に添加してプロトプラス
ト化を行った。
ネシウムと０．３Ｍのラフィノースを含む３０ｍＭのＴ
ｒｉｓ−１１ＣＩ （ｐＨ８，０）に懸濁させた。この
菌体懸濁液に８０ＣＩｇ／−のりゾチ〜ムと５００μＢ
／ｍｌのα−アミラーゼを同時に添加してプロトプラス
ト化を行った。
プロトプラストの形成は９０％以上であった。
上記のように形成したプロトプラストの懸濁液を、ラフ
ィノースを０．２Ｍの濃度に添加した前記組成のＭＮＭ
−Ｇ培地に塗沫し、２８°Ｃで７日間嫌気培養を行った
。
ィノースを０．２Ｍの濃度に添加した前記組成のＭＮＭ
−Ｇ培地に塗沫し、２８°Ｃで７日間嫌気培養を行った
。
再生頻度の計算結果を以下に示す。
０．５ １．５２Ｘ１０−’ ４．３１Ｘ１
０−’ ０．９９６１．０ １．９６Ｘ１０
−６ ６．８４Ｘ１０−３ ０．９９９ ＜１．
５ ２．１０Ｘ１０−７ ８．０３Ｘ］Ｏ−５０
，９９７注）ａ ：リゾチームとα−アミラーゼの処理
時間実施例２ 供試菌株としてＢ、ロンガムＳＢＴ ２９３３−１７（
ＦＥＲＭＰ−８７４３号）を用い、実施例１と同様に、
該菌株を４０％のトマトジュース浸出液を含むＣＡＭ培
地に３７℃の温度に一夜培養した。
０−’ ０．９９６１．０ １．９６Ｘ１０
−６ ６．８４Ｘ１０−３ ０．９９９ ＜１．
５ ２．１０Ｘ１０−７ ８．０３Ｘ］Ｏ−５０
，９９７注）ａ ：リゾチームとα−アミラーゼの処理
時間実施例２ 供試菌株としてＢ、ロンガムＳＢＴ ２９３３−１７（
ＦＥＲＭＰ−８７４３号）を用い、実施例１と同様に、
該菌株を４０％のトマトジュース浸出液を含むＣＡＭ培
地に３７℃の温度に一夜培養した。
次いで、培養により得られた菌体を、３ｍＭのＭｇＣｌ
。
。
と０．３Ｍのラフィノースを含む３０ｍＭのトリス−１
１ＣＩハソファ−（ｐＨ８，０）に懸濁させた。得られ
た菌体懸濁液にリゾチームを２ｍＢ７ｍｌの濃度に添加
して１時間処理した後、アクチナーゼＥをＩｍｇ／ｍｆ
の濃度に添加して３０分間処理した。
１ＣＩハソファ−（ｐＨ８，０）に懸濁させた。得られ
た菌体懸濁液にリゾチームを２ｍＢ７ｍｌの濃度に添加
して１時間処理した後、アクチナーゼＥをＩｍｇ／ｍｆ
の濃度に添加して３０分間処理した。
プロトプラストの形成は９０％以上であった。
上記のように処して形成したプロトプラストの懸濁液を
、ラフィノースを０．２Ｍの濃度に添加した前記組成の
ＭＮＭ−Ｇ培地に塗沫し、２８℃で７日間嫌気培養を行
った。
、ラフィノースを０．２Ｍの濃度に添加した前記組成の
ＭＮＭ−Ｇ培地に塗沫し、２８℃で７日間嫌気培養を行
った。
再生頻度の計算結果を以下に示す。
５ ２．０７ｘ１０−３２．４８ｘＨ１２０，９
２３１０９，８１Ｘ １０−’ １．５１ ｘ ｌ
（］−２０，９３９２０１，１８ｘｌＯ−’ ３．
８９ｘｌＯ−３０，９７１３０７，００ｘ１０−５９．
９３ｘｌＯ−’ ０．９３０６０ ８．５０
ｘｌＯ−６２，３７ｘｌＯ−’ ０．９６５注）ａ
：リゾチーム処理時間 アクチナーゼの処理時間は３０分 光皿ｑ肱果 以上述べたとおり、本発明によると、ＦＡＰばプロトプ
ラストを調製する際の細胞壁溶解酵素によるいずれの作
用時間でも９９％以上であり、したがって、上記溶解酵
素の作用時間を０．５時間乃至１．０時間に設定すれば
プロトプラスト化が十分進行し、１０−２の高頻度で再
生することが可能となる。
２３１０９，８１Ｘ １０−’ １．５１ ｘ ｌ
（］−２０，９３９２０１，１８ｘｌＯ−’ ３．
８９ｘｌＯ−３０，９７１３０７，００ｘ１０−５９．
９３ｘｌＯ−’ ０．９３０６０ ８．５０
ｘｌＯ−６２，３７ｘｌＯ−’ ０．９６５注）ａ
：リゾチーム処理時間 アクチナーゼの処理時間は３０分 光皿ｑ肱果 以上述べたとおり、本発明によると、ＦＡＰばプロトプ
ラストを調製する際の細胞壁溶解酵素によるいずれの作
用時間でも９９％以上であり、したがって、上記溶解酵
素の作用時間を０．５時間乃至１．０時間に設定すれば
プロトプラスト化が十分進行し、１０−２の高頻度で再
生することが可能となる。
Claims (3)
- （１）ビフィズス菌プロトプラストの再生に適した、下
記に示した基本組成を特徴とするビフィズス菌プロトプ
ラストの再生用ＭＮＭ−Ｇ培地。 ＭＮＭ−Ｇ培地の基本組成：（／ｌ） Ｋ＿２ＨＰＯ＿４：２．５ｇ ＣＨ＿３ＣＯＯＮａ：１０ｇ トリプトン：１０ｇ 酵母エキス：５．０ｇ システイン・ＨＣｌ・Ｈ＿２Ｏ：０．４ｇ グルコース：５．０ｇ バクト寒天：１５ｇ ＣａＣｌ＿２・２Ｈ＿２Ｏ：５ｍＭ ＭｇＣｌ＿２・６Ｈ＿２Ｏ：５ｍＭ ｐＨ：６．５ - （２）ビフィドバクテリウム・シュードロンガム或いは
、ビフィドバクテリウム・ロンガムのプロトプラストを
、請求項（１）に記載の再生用ＭＮＭ−Ｇ培地に浸透圧
安定剤としてラフィノースを添加した培地に塗沫して、
嫌気培養することを特徴とする上記プロトプラストの再
生方法。 - （３）ラフィノースを０．２〜０．３Ｍの濃度で培地に
添加する請求項（２）に記載のプロトプラストの再生方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63228342A JP2681495B2 (ja) | 1988-09-14 | 1988-09-14 | ビフィズス菌プロトプラストの再生用培地及び該培地を用いた再生方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63228342A JP2681495B2 (ja) | 1988-09-14 | 1988-09-14 | ビフィズス菌プロトプラストの再生用培地及び該培地を用いた再生方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0276572A true JPH0276572A (ja) | 1990-03-15 |
| JP2681495B2 JP2681495B2 (ja) | 1997-11-26 |
Family
ID=16874961
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63228342A Expired - Fee Related JP2681495B2 (ja) | 1988-09-14 | 1988-09-14 | ビフィズス菌プロトプラストの再生用培地及び該培地を用いた再生方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2681495B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0568535A (ja) * | 1991-09-10 | 1993-03-23 | Tochigi Pref Gov | 双子葉植物の病害防除に用いる共生微生物の分離選抜方法 |
| US5354512A (en) * | 1991-08-29 | 1994-10-11 | Sumitomo Chemical Company Limited | Dye-containing polarizing film |
| CN114181836A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-15 | 南京农业大学 | 一种麝香霉菌原生质体制备和再生方法 |
-
1988
- 1988-09-14 JP JP63228342A patent/JP2681495B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5354512A (en) * | 1991-08-29 | 1994-10-11 | Sumitomo Chemical Company Limited | Dye-containing polarizing film |
| JPH0568535A (ja) * | 1991-09-10 | 1993-03-23 | Tochigi Pref Gov | 双子葉植物の病害防除に用いる共生微生物の分離選抜方法 |
| CN114181836A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-15 | 南京农业大学 | 一种麝香霉菌原生质体制备和再生方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2681495B2 (ja) | 1997-11-26 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |