JPH0269181A - スーパーオキシドディスムターゼの製造方法 - Google Patents
スーパーオキシドディスムターゼの製造方法Info
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- JPH0269181A JPH0269181A JP21839788A JP21839788A JPH0269181A JP H0269181 A JPH0269181 A JP H0269181A JP 21839788 A JP21839788 A JP 21839788A JP 21839788 A JP21839788 A JP 21839788A JP H0269181 A JPH0269181 A JP H0269181A
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野]
本発明はスーパーオキシドディスムターゼの製造方法に
関し、詳しくは藻類を処理してその菌体内スーパーオキ
シドディスムターゼを増加させて大量に効率よくスーパ
ーオキシにディスムターゼを製造する方法に関する。
関し、詳しくは藻類を処理してその菌体内スーパーオキ
シドディスムターゼを増加させて大量に効率よくスーパ
ーオキシにディスムターゼを製造する方法に関する。
スーパーオキシドディスムターゼ(以下、SODと略記
する。)は超酸化物不均化酵素とも称され、生体内で脂
質、不飽和脂肪酸などの細胞内成分の自動酸化や外部か
らの可視光線、紫外線、放射線などの影晋により生じた
スーパーオキシドアニオンラジカル(0−)の不均化反
応を触媒する酵素である。SODは動物、植物、微生物
に存在することが知られており、その用途に関する研究
が行われ、食品等の被酸化性物質の酸化抑制(特開昭5
O−40785) ;化粧料の1成分として皮膚1毛髪
の保護や皮膚への色素沈着抑制、皮膚に対する抗炎症作
用、さらには化粧料組成物を構成する成分の変改防止(
特開昭51−63949.同55−87712)などの
作用が見出されている。さらに、抗炎症剤として慢性関
節リウマチ、変形性関節症、放射線照射による副作用、
ある種の泌尿器疾患などの治療に用いることも提案され
ている。
する。)は超酸化物不均化酵素とも称され、生体内で脂
質、不飽和脂肪酸などの細胞内成分の自動酸化や外部か
らの可視光線、紫外線、放射線などの影晋により生じた
スーパーオキシドアニオンラジカル(0−)の不均化反
応を触媒する酵素である。SODは動物、植物、微生物
に存在することが知られており、その用途に関する研究
が行われ、食品等の被酸化性物質の酸化抑制(特開昭5
O−40785) ;化粧料の1成分として皮膚1毛髪
の保護や皮膚への色素沈着抑制、皮膚に対する抗炎症作
用、さらには化粧料組成物を構成する成分の変改防止(
特開昭51−63949.同55−87712)などの
作用が見出されている。さらに、抗炎症剤として慢性関
節リウマチ、変形性関節症、放射線照射による副作用、
ある種の泌尿器疾患などの治療に用いることも提案され
ている。
そこで、SODを工業的に大量に生産する技術の開発が
望まれている。
望まれている。
[従来の技術、発明が解決しようとする課題]SODを
大量生産する方法として微生物の利用が考えられ、現在
までにホトバクテリウム属(特開昭5O−40785)
、セラチア属(特開昭57−29285) 。
大量生産する方法として微生物の利用が考えられ、現在
までにホトバクテリウム属(特開昭5O−40785)
、セラチア属(特開昭57−29285) 。
などの細菌やアスペルギルス属、ペニシリウム属トリコ
デルマ属などのカビ(特公昭6O−12024)サツカ
ロミセス腐などの酵母(特開昭82−79717)など
を用いてSODを製造する方法が提案されている。
デルマ属などのカビ(特公昭6O−12024)サツカ
ロミセス腐などの酵母(特開昭82−79717)など
を用いてSODを製造する方法が提案されている。
しかしながら、例えば大腸菌などの菌体に含まれるSO
Dを採取して食品や化粧品等の素材として用いる場合、
安全性の問題が心配とされる。
Dを採取して食品や化粧品等の素材として用いる場合、
安全性の問題が心配とされる。
これに対して藻類は蛋白質、β−カロチン、ビタミン類
等を多量に含み栄養バランスが良いため、従来より食品
、飼料等の原料として用いられており、大腸菌等に比べ
てSODの供給源として優れていると考えられる。しか
るに、藻類にSODが含まれていることは知られている
ものの該藻類の菌体内SODを増加させてSODを大量
に生産する方法に関しては全く知られていない。
等を多量に含み栄養バランスが良いため、従来より食品
、飼料等の原料として用いられており、大腸菌等に比べ
てSODの供給源として優れていると考えられる。しか
るに、藻類にSODが含まれていることは知られている
ものの該藻類の菌体内SODを増加させてSODを大量
に生産する方法に関しては全く知られていない。
[課題を解決するための手段]
本発明者らは藻類によるSODの生産方法について検討
を重ね、藻類の培養方法を改善することによって藻類の
菌体内SODを増加させ、効率よ< SODを製造する
方法を見出し、本発明を完成するに至フたのである。
を重ね、藻類の培養方法を改善することによって藻類の
菌体内SODを増加させ、効率よ< SODを製造する
方法を見出し、本発明を完成するに至フたのである。
すなわち、本発明は以下のSODの製造方法を提供する
ものである。
ものである。
(1)スーパーオキシドディスムターゼを含有するに頚
を鉄イオンおよび/またはマンガンイオンを50μM以
上の濃度で含有する処理液で処理し、次いで該藻類から
スーパーオキシドディスムターゼを採取することを特徴
とするスーパーオキシドディスムターゼの製造方法。
を鉄イオンおよび/またはマンガンイオンを50μM以
上の濃度で含有する処理液で処理し、次いで該藻類から
スーパーオキシドディスムターゼを採取することを特徴
とするスーパーオキシドディスムターゼの製造方法。
(2)スーパーオキシドディスムターゼを含有する藻類
を酸素濃度22容量%以上の気体と接触させて処理し、
次いで該藻類からスーパーオキシドディスムターゼを採
取することを特徴とするスーパーオキシドディスムター
ゼの製造方法。
を酸素濃度22容量%以上の気体と接触させて処理し、
次いで該藻類からスーパーオキシドディスムターゼを採
取することを特徴とするスーパーオキシドディスムター
ゼの製造方法。
(3)スーパーオキシドディスムターゼを含有する藻類
を100〜400μmEinsteins/m’/se
c、の光照射処理し、次いで該藻類からスーパーオキシ
ドディスムターゼを採取することを特徴とするスーパー
オキシドディスムターゼの製造方法。
を100〜400μmEinsteins/m’/se
c、の光照射処理し、次いで該藻類からスーパーオキシ
ドディスムターゼを採取することを特徴とするスーパー
オキシドディスムターゼの製造方法。
(4)スーパーオキシドディスムターゼを含有する藻類
を鉄イオンおよび/またはマンガンイオンを50uM以
上の濃度で含有する処理液中で酸素濃度22容量%以上
の気体と接触させ、かつioo〜400μ・Einst
eins/m2/sec、の光照射処理し、次いで該藻
類からスーパーオキシドディスムターゼを採取すること
を特徴とするスーパーオキシドディスムターゼの製造方
法。
を鉄イオンおよび/またはマンガンイオンを50uM以
上の濃度で含有する処理液中で酸素濃度22容量%以上
の気体と接触させ、かつioo〜400μ・Einst
eins/m2/sec、の光照射処理し、次いで該藻
類からスーパーオキシドディスムターゼを採取すること
を特徴とするスーパーオキシドディスムターゼの製造方
法。
本発明が適用される藻類としてはSOD生産能を有する
ものであれば、いずれの属に属する藻類でもよい。この
ような藻類の具体例としてM%のシネココツカス(Sy
nechococus)属、スピルリナ(Spirul
ina)属、アナベナ(Anabana)属、アナシス
タス(Anacystis)属等や緑藻のクロレラ(C
hlorella)属、ドナリエラ(Dunaliel
la)属等を挙げることができる。そのほか、これら藻
類を通常の微生物突然変異誘導法、たとえば紫外線。
ものであれば、いずれの属に属する藻類でもよい。この
ような藻類の具体例としてM%のシネココツカス(Sy
nechococus)属、スピルリナ(Spirul
ina)属、アナベナ(Anabana)属、アナシス
タス(Anacystis)属等や緑藻のクロレラ(C
hlorella)属、ドナリエラ(Dunaliel
la)属等を挙げることができる。そのほか、これら藻
類を通常の微生物突然変異誘導法、たとえば紫外線。
X線、γ線などを照射する物理的処理、ニトロソグアニ
ジンなどの薬剤を用いる化学的処理等によって得られた
SOD高生産性突然変異株や遺伝子組換え技術によって
SOD遺伝子を導入して作成されたSOD高生産株等も
本発明に使用することが出来る。
ジンなどの薬剤を用いる化学的処理等によって得られた
SOD高生産性突然変異株や遺伝子組換え技術によって
SOD遺伝子を導入して作成されたSOD高生産株等も
本発明に使用することが出来る。
本発明によって得られるSODの食品、化粧品等への利
用を考慮すると、使用する藻類としては既に食品、飼料
などとして用いられ、安全性が確認されているスピルリ
ナやクロレラ等が好適である。しかも、これら藻類は屋
外での大量培養法が確立されており、大量のSODを得
るための原料として通している。
用を考慮すると、使用する藻類としては既に食品、飼料
などとして用いられ、安全性が確認されているスピルリ
ナやクロレラ等が好適である。しかも、これら藻類は屋
外での大量培養法が確立されており、大量のSODを得
るための原料として通している。
SODを含有する藻類のSOD含有量を増加させるため
の処理とは、該藻類が生育または生存できる組成物、た
とえば該藻類の培地(SOT培地、BG−11培地など
)、リン酸緩衝液(特にpH7,8に調整したもの)(
以下、処理液と称する。)に該藻類を接種または懸濁し
、下記の条件にて所定期間培養または放置することを意
味する。
の処理とは、該藻類が生育または生存できる組成物、た
とえば該藻類の培地(SOT培地、BG−11培地など
)、リン酸緩衝液(特にpH7,8に調整したもの)(
以下、処理液と称する。)に該藻類を接種または懸濁し
、下記の条件にて所定期間培養または放置することを意
味する。
本発明に用いられる処理液としての培地は藻類が良好に
生育できるものであればよく、特に制限はないが、一般
的にはスピルリナ・プラテンシス(Spirulina
platensis)培地(SOT培地)やBG−1
1培地などが好適である。また、リン酸緩衝液について
はp)17.8に調整したものが好適である。
生育できるものであればよく、特に制限はないが、一般
的にはスピルリナ・プラテンシス(Spirulina
platensis)培地(SOT培地)やBG−1
1培地などが好適である。また、リン酸緩衝液について
はp)17.8に調整したものが好適である。
上記の処理液に■鉄イオンおよび/またはマンガンイオ
ンを5OaM以上の濃度、通常は50〜1500μM1
好ましくは100〜1000μMとなるように加える、
■酸素濃度22容量%以上の気体を導入する、■100
〜400μmEinsteins/m2/sec、の光
を照射する、■これら条件■〜■のすべてを組合せるの
うちのいずれかの条件を採用し、藻類を処理液中で培養
または放置する。ここで、鉄イオンやマンガンイオンの
供給源としてはFeSO4・7 H20やMn5Oa・
7H20などがあり、酸素濃度22容量%以上の気体と
藻類を接触させる方法としては、培地等に酸素通気した
り、気相を酸素で置換する方法や加圧下に通気する方法
などが考えられる。また、光源としては太陽光のばか蛍
光灯、陽光ランプなどを処理液表面で100〜400μ
・Einsteins/m’/sec、の光強度となる
ように直接もしくは集光して用いる。
ンを5OaM以上の濃度、通常は50〜1500μM1
好ましくは100〜1000μMとなるように加える、
■酸素濃度22容量%以上の気体を導入する、■100
〜400μmEinsteins/m2/sec、の光
を照射する、■これら条件■〜■のすべてを組合せるの
うちのいずれかの条件を採用し、藻類を処理液中で培養
または放置する。ここで、鉄イオンやマンガンイオンの
供給源としてはFeSO4・7 H20やMn5Oa・
7H20などがあり、酸素濃度22容量%以上の気体と
藻類を接触させる方法としては、培地等に酸素通気した
り、気相を酸素で置換する方法や加圧下に通気する方法
などが考えられる。また、光源としては太陽光のばか蛍
光灯、陽光ランプなどを処理液表面で100〜400μ
・Einsteins/m’/sec、の光強度となる
ように直接もしくは集光して用いる。
上記■〜■のいずれかの条件下で藻類を処理するにあた
り、効率よく、かつ経済的に行うには、たとえば従来法
により屋外で太陽光の下にて大量に培養した菌体を集め
、最初から高濃度の菌体懸濁液を調製して処理すること
が望ましい。このようにすれば、使用する処理液量、光
量1通気量などが少量で足り、設備的にも小さな発酵槽
を用いて効率的な処理が可能である。また、藻類の培養
は温度20〜35℃、好ましくは28〜30℃で、2〜
7日、好ましくは4〜6日間好気的に行えばよい。一方
、緩衝液に藻類を懸濁させて放置する場合も、上記培養
と同様にして行えばよい。
り、効率よく、かつ経済的に行うには、たとえば従来法
により屋外で太陽光の下にて大量に培養した菌体を集め
、最初から高濃度の菌体懸濁液を調製して処理すること
が望ましい。このようにすれば、使用する処理液量、光
量1通気量などが少量で足り、設備的にも小さな発酵槽
を用いて効率的な処理が可能である。また、藻類の培養
は温度20〜35℃、好ましくは28〜30℃で、2〜
7日、好ましくは4〜6日間好気的に行えばよい。一方
、緩衝液に藻類を懸濁させて放置する場合も、上記培養
と同様にして行えばよい。
上記処理を施すことによって藻類菌体中のSOD含量は
著しく増加する。このようにして得られた藻類からのS
ODの採取は、たとえば培養物などから?濾過、遠心分
離等の常法によって菌体な集め、オートリシス法または
溶菌酵素を用いる方法、ガラスピーズを加えグラインデ
ィングによる破砕法あるいはフレンチプレスを用いる方
法、さらには超音波破砕法などの既知の物理的方法等を
適用して行うことができる。
著しく増加する。このようにして得られた藻類からのS
ODの採取は、たとえば培養物などから?濾過、遠心分
離等の常法によって菌体な集め、オートリシス法または
溶菌酵素を用いる方法、ガラスピーズを加えグラインデ
ィングによる破砕法あるいはフレンチプレスを用いる方
法、さらには超音波破砕法などの既知の物理的方法等を
適用して行うことができる。
SODの精製を行うに際しても既知の分離精製手段を適
宜利用することによって所望の純度のSODを得ること
ができる。すなわち、硫酸アンモニウム等による塩析法
、有機溶媒による沈澱法1等電点沈澱法、電気透析等に
よる膜処理法。
宜利用することによって所望の純度のSODを得ること
ができる。すなわち、硫酸アンモニウム等による塩析法
、有機溶媒による沈澱法1等電点沈澱法、電気透析等に
よる膜処理法。
リン酸カルシウムやアルミナ等による吸着法。
ジエチルアミノエチルやカルボキシメチルセルロース等
によるイオン交換クロマトグラフ法、セファデックス(
ファルマシア製)やウルトラゲル(LKB製)等による
ゲルを濾過クロマトグラフ法などを適宜組合せることに
よって精製することができ、使用目的に応じた精製酵素
標品を得ることができる。
によるイオン交換クロマトグラフ法、セファデックス(
ファルマシア製)やウルトラゲル(LKB製)等による
ゲルを濾過クロマトグラフ法などを適宜組合せることに
よって精製することができ、使用目的に応じた精製酵素
標品を得ることができる。
し実施例]
次に、本発明を実施例により詳しく説明する。
なお、SOD活性の測定はチトクロームC法(J、MJ
lcCord and 1.Fr1dortch
X J、Biol、(:hem、。
lcCord and 1.Fr1dortch
X J、Biol、(:hem、。
244.6049〜6055 (1969))により行
った。すなわち、光路1 cmセルに最終濃度が50m
Mリン酸緩衝液(pH7,8) 、 O,Imklエチ
レンジアミン四酢酸ナトリウム、10μMフェリチトク
ロームC,5uMキサンチンとなるように反応液(0,
4++l)を調1し、コレニリン酸緩衝液(pH7,8
)で測定可能な範囲に稀釈した酵素′a、50tt!!
を加え、キサンチンオキシダーゼ溶液50μpを添加し
、全量を0.51とし、25℃において分光光度計によ
る550nmにおけるフェリチトクロームCの還元に基
づく吸収増加の初速度(V)を測定する。SOD活性は
上記反応条件下において、フェリチトクロームC還元に
基づく吸収増加速度を50%阻害する酵素量を1ユニツ
トとすると、V/V−1の式から求めることができる。
った。すなわち、光路1 cmセルに最終濃度が50m
Mリン酸緩衝液(pH7,8) 、 O,Imklエチ
レンジアミン四酢酸ナトリウム、10μMフェリチトク
ロームC,5uMキサンチンとなるように反応液(0,
4++l)を調1し、コレニリン酸緩衝液(pH7,8
)で測定可能な範囲に稀釈した酵素′a、50tt!!
を加え、キサンチンオキシダーゼ溶液50μpを添加し
、全量を0.51とし、25℃において分光光度計によ
る550nmにおけるフェリチトクロームCの還元に基
づく吸収増加の初速度(V)を測定する。SOD活性は
上記反応条件下において、フェリチトクロームC還元に
基づく吸収増加速度を50%阻害する酵素量を1ユニツ
トとすると、V/V−1の式から求めることができる。
比較例1
3℃フラスコに滅菌ずみスピルリナ・プラテンシス(S
pirulina platensis)培地(SOT
培地)112を入れ、これにスピルリナ・サプサルサI
AMト183を植菌した。なお、SOT培地の組成を下
表に示す。
pirulina platensis)培地(SOT
培地)112を入れ、これにスピルリナ・サプサルサI
AMト183を植菌した。なお、SOT培地の組成を下
表に示す。
第 1 表
NaHCO3168(l mg
K2HPO450vag
NaN0. 250 mg
K2SO4100mg
NaCj! 100 mg
ugso4−71(2o 20 mgCuCj!z
−2H204mg FeSO4−78゜0 1 mg Na2EDTA・2H208mg A、溶液 0.1+nj)蒸留水
99.9mR 幸八、へY夜の組成 )I、BO32B8 mg MnSO41820250mg ZnS044H2022,21ng CuSO4”5H207,9m3 Na2MoO42,1mg 蒸留水 100 m41 次いで、蛍光灯40Wを用い、処理液表面で光強度50
μ4insteins/m’/sec 、の光を上記フ
ラスコに照射しながら30℃で6日間空気による通気培
養を行った。培養終了後、遠心分離法により洗浄し、集
菌した。得られた菌体の乾燥重量を測定したところ14
gであった。
−2H204mg FeSO4−78゜0 1 mg Na2EDTA・2H208mg A、溶液 0.1+nj)蒸留水
99.9mR 幸八、へY夜の組成 )I、BO32B8 mg MnSO41820250mg ZnS044H2022,21ng CuSO4”5H207,9m3 Na2MoO42,1mg 蒸留水 100 m41 次いで、蛍光灯40Wを用い、処理液表面で光強度50
μ4insteins/m’/sec 、の光を上記フ
ラスコに照射しながら30℃で6日間空気による通気培
養を行った。培養終了後、遠心分離法により洗浄し、集
菌した。得られた菌体の乾燥重量を測定したところ14
gであった。
得られた湿菌体に65mMリン酸緩;酸液(pH7,8
1を加え、超音波発生装置(トミー精工製)を用いて菌
体を破砕した。破砕の確認は顕微鏡観察により行った。
1を加え、超音波発生装置(トミー精工製)を用いて菌
体を破砕した。破砕の確認は顕微鏡観察により行った。
この破砕菌体懸濁液を遠心分離し、得られた上澄のSO
D活性および蛋白質含量を測定した。SOD活性は11
5単位/g乾燥菌体であった。
D活性および蛋白質含量を測定した。SOD活性は11
5単位/g乾燥菌体であった。
実施例1
比較例1と同様にしてスピルリナ・サブサルサIAM
M−183を培養し、対数後期に菌体を集め、滅菌ずみ
65mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁し、リン酸緩衝液
で109個/ra1となるように調整した。
M−183を培養し、対数後期に菌体を集め、滅菌ずみ
65mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁し、リン酸緩衝液
で109個/ra1となるように調整した。
上記菌体懸濁液HmJ!に所定の鉄イオン濃度となるよ
うにFeSO4・7H20溶液を加えた。この懸濁液1
00mA+を三角フラスコに入れ、ブチルゴム栓で密栓
し、気相をアルゴン置換して暗条件下30℃で48時間
放置した。48時間後に菌体のSOD活性を測定した。
うにFeSO4・7H20溶液を加えた。この懸濁液1
00mA+を三角フラスコに入れ、ブチルゴム栓で密栓
し、気相をアルゴン置換して暗条件下30℃で48時間
放置した。48時間後に菌体のSOD活性を測定した。
結果を第2表に示す。
第2表
実施例2
実施例1において鉄イオンの代りにマンガンイオンが所
定濃度となるようにMnSO4・7 H20溶液を加え
たこと以外は実施例1と同様にして行った。結果を第3
表に示す。
定濃度となるようにMnSO4・7 H20溶液を加え
たこと以外は実施例1と同様にして行った。結果を第3
表に示す。
第 3 表
実施例3、比較例2,3
比較例1と同様にしてスピルリナ・サブサルサIAM
M−183を培養し、対数後期に菌体を集め、滅菌ずみ
55mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁し、リン酸緩衝液
で109個/mβとなるように調整した。
M−183を培養し、対数後期に菌体を集め、滅菌ずみ
55mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁し、リン酸緩衝液
で109個/mβとなるように調整した。
上記菌体懸濁液801uJを100mf!三角フラスコ
に入れ、ブチルゴム栓で密栓し、気相をアルゴン、空気
または酸素で置換した。これらフラスコを暗条件下30
℃で48時間県とうしつつ放置した。48時間後に菌体
のSOD活性を測定した。結果を第4表に示す。
に入れ、ブチルゴム栓で密栓し、気相をアルゴン、空気
または酸素で置換した。これらフラスコを暗条件下30
℃で48時間県とうしつつ放置した。48時間後に菌体
のSOD活性を測定した。結果を第4表に示す。
第 4 表
比較例2
〃 3
実施例3
実力五個4
比較例1と同様にしてスピルリナ・サブサルサIAM
M−183を培養し、対数後期に菌体を集め、滅菌ずみ
85mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁し、リン酸緩衝液
で10”個/mRとなるように調整した。
M−183を培養し、対数後期に菌体を集め、滅菌ずみ
85mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁し、リン酸緩衝液
で10”個/mRとなるように調整した。
上記菌体懸濁液80mA+を100mf三角フラスコに
入れ、処理液表面で光強度0〜400μmEinste
ins/m2/アルゴン 空 気 酸 素 SeC,の光を照射しながら30℃で2日間通気培養し
た。2日後に集関し、SOD活性を測定した。結果を第
5表に示す。
入れ、処理液表面で光強度0〜400μmEinste
ins/m2/アルゴン 空 気 酸 素 SeC,の光を照射しながら30℃で2日間通気培養し
た。2日後に集関し、SOD活性を測定した。結果を第
5表に示す。
!00 156実
施例5,6、比較例4 比較例1と同様にしてスピルリナ・サブサルサIMA
M−1f13を培養し、対数後期に菌体を集め、滅菌ず
み65mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁し、リン酸緩衝
液で109個/m1となるように調整した。
施例5,6、比較例4 比較例1と同様にしてスピルリナ・サブサルサIMA
M−1f13を培養し、対数後期に菌体を集め、滅菌ず
み65mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁し、リン酸緩衝
液で109個/m1となるように調整した。
上記菌体懸濁M80mzを100m1!三角フラスコに
入れ、ブチルゴム栓で密栓し、酸素置換を行ないフラス
コ内の気相を酸素にしたものと、綿栓をし、空気通気ま
たは酸素通気したものを作った。これらのフラスコを処
理液表面で光強度400μ・Einsteins/m2
/sec、の光を照射しながら30℃で12時間県とう
培養を行なった。12時間後に菌体のSOD活性を測定
した。結果を第6表に示す。
入れ、ブチルゴム栓で密栓し、酸素置換を行ないフラス
コ内の気相を酸素にしたものと、綿栓をし、空気通気ま
たは酸素通気したものを作った。これらのフラスコを処
理液表面で光強度400μ・Einsteins/m2
/sec、の光を照射しながら30℃で12時間県とう
培養を行なった。12時間後に菌体のSOD活性を測定
した。結果を第6表に示す。
第 6 表
比較例4 空気通気 126
実施例5 酸素置換 302
〃 6 酸素通気 400
実施例7
比較例1において、スピルリナ・プラテンシス■へM
M−135、スピルリナ およびスピルリナ・マキシマについてはSOT培地を用
い、シネココッカス・エスピーATCC27144 、
アナベナ・シリンドリカIAM M−1 、アナシスタ
ス・ニドランスIAM M−6 、クロレラ・ブルガリ
ス八T(:C 30581およびクロレラ・エリプソイ
デアATCC 11466についてはBG−11培地を
用いたこと以外は同様の条件で培養し、対数後期に菌体
を集め、滅菌ずみ65mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁
し、リン酸緩衝液で109個/mρどなるように調整し
た。なお、8G−11培地の組成を第7表に示す。
M−135、スピルリナ およびスピルリナ・マキシマについてはSOT培地を用
い、シネココッカス・エスピーATCC27144 、
アナベナ・シリンドリカIAM M−1 、アナシスタ
ス・ニドランスIAM M−6 、クロレラ・ブルガリ
ス八T(:C 30581およびクロレラ・エリプソイ
デアATCC 11466についてはBG−11培地を
用いたこと以外は同様の条件で培養し、対数後期に菌体
を集め、滅菌ずみ65mMリン酸緩衝液に滅菌的に懸濁
し、リン酸緩衝液で109個/mρどなるように調整し
た。なお、8G−11培地の組成を第7表に示す。
第7表
NaN0, 1.5 g
K2+(PO4 30
mgMgSQ4・7t(、Q
75 +n3CuCI!2’2H20
36 111gクエン酸
6 mgNa2・EDTA
1 mgN82C0320 mg 微量金属As l mj’クエン酸
アンモニウム 6II1gH3BO3
2.86 gMnCj!2・4820
1.81 gZnSO4・7H
20 222 mgNa,MoO
4’2H,0 0.39 g(:uS
O4・5H20 79 mg
Cll(N03)z・6)120 49
.4mg脱水イオン水 Ifl 上記菌体懸濁9i80m+!を1001三角フラスコに
入れ、ここに鉄イオンおよびマンガンイオンがそれぞれ
500〃Mになるように加えたのち、ブチルゴム栓で密
栓し、気相を酸素に置換した。
K2+(PO4 30
mgMgSQ4・7t(、Q
75 +n3CuCI!2’2H20
36 111gクエン酸
6 mgNa2・EDTA
1 mgN82C0320 mg 微量金属As l mj’クエン酸
アンモニウム 6II1gH3BO3
2.86 gMnCj!2・4820
1.81 gZnSO4・7H
20 222 mgNa,MoO
4’2H,0 0.39 g(:uS
O4・5H20 79 mg
Cll(N03)z・6)120 49
.4mg脱水イオン水 Ifl 上記菌体懸濁9i80m+!を1001三角フラスコに
入れ、ここに鉄イオンおよびマンガンイオンがそれぞれ
500〃Mになるように加えたのち、ブチルゴム栓で密
栓し、気相を酸素に置換した。
これらのフラスコを処理液表面で光強度400μ・Ei
nsteins/m2/sec、の光を照射しながら3
0℃で48時時間上うしつつ放置した。48時間後に菌
体のSOD活性を測定した。結果を第8表に示す。なお
、コン]・ロールは鉄イオンおよびマンガンイオンな0
にし、かつ気相を空気に置換して、上記と同様に培養し
た。
nsteins/m2/sec、の光を照射しながら3
0℃で48時時間上うしつつ放置した。48時間後に菌
体のSOD活性を測定した。結果を第8表に示す。なお
、コン]・ロールは鉄イオンおよびマンガンイオンな0
にし、かつ気相を空気に置換して、上記と同様に培養し
た。
第8表
[発明の効果]
本発明によればSODを大量に効率よく製造することか
できる。得られるSODは安全性が高いので、食品、化
叫品、医薬品の素材として有用である。
できる。得られるSODは安全性が高いので、食品、化
叫品、医薬品の素材として有用である。
特許出頭人
松 永 是
出光石油化学株式会社
スピルリナ・マキシマ
Claims (4)
- (1)スーパーオキシドディスムターゼを含有する藻類
を鉄イオンおよび/またはマンガンイオンを50μM以
上の濃度で含有する処理液で処理し、次いで該藻類から
スーパーオキシドディスムターゼを採取することを特徴
とするスーパーオキシドディスムターゼの製造方法。 - (2)スーパーオキシドディスムターゼを含有する藻類
を酸素濃度22容量%以上の気体と接触させて処理し、
次いで該藻類からスーパーオキシドディスムターゼを採
取することを特徴とするスーパーオキシドディスムター
ゼの製造方法。 - (3)スーパーオキシドディスムターゼを含有する藻類
を100〜400μ・Einsteins/m^2/s
ec.の光照射処理し、次いで該藻類からスーパーオキ
シドディスムターゼを採取することを特徴とするスーパ
ーオキシドディスムターゼの製造方法。 - (4)スーパーオキシドディスムターゼを含有する藻類
を鉄イオンおよび/またはマンガンイオンを50μM以
上の濃度で含有する処理液中で酸素濃度22容量%以上
の気体と接触させ、かつ100〜400μ・Einst
eins/m^2/sec.の光照射処理し、次いで該
藻類からスーパーオキシドディスムターゼを採取するこ
とを特徴とするスーパーオキシドディスムターゼの製造
方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP21839788A JPH0269181A (ja) | 1988-09-02 | 1988-09-02 | スーパーオキシドディスムターゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP21839788A JPH0269181A (ja) | 1988-09-02 | 1988-09-02 | スーパーオキシドディスムターゼの製造方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0269181A true JPH0269181A (ja) | 1990-03-08 |
Family
ID=16719270
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP21839788A Pending JPH0269181A (ja) | 1988-09-02 | 1988-09-02 | スーパーオキシドディスムターゼの製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0269181A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0628629A1 (fr) * | 1993-06-11 | 1994-12-14 | Heliosynthese S.A. | Procédé de production et d'extraction de superoxyde-dismutases thermostables à partir d'une culture de micro-organismes photosynthétiques |
CN105331588A (zh) * | 2015-02-02 | 2016-02-17 | 鄂尔多斯市疾病预防控制中心 | 一种重组螺旋藻超氧化物歧化酶制备工艺 |
US11473065B2 (en) * | 2015-05-06 | 2022-10-18 | Fitoplancton Marino, S.L. | Method for obtaining a biomass of a microalga of the species Tetraselmis chuii enriched in superoxide dismutase (SOD) |
-
1988
- 1988-09-02 JP JP21839788A patent/JPH0269181A/ja active Pending
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0628629A1 (fr) * | 1993-06-11 | 1994-12-14 | Heliosynthese S.A. | Procédé de production et d'extraction de superoxyde-dismutases thermostables à partir d'une culture de micro-organismes photosynthétiques |
FR2706465A1 (fr) * | 1993-06-11 | 1994-12-23 | Heliosynthese Sa | Procédé de production et d'extraction de superoxyde-dismutases thermostables à partir d'une culture de micro-organismes photosynthétiques. |
US5536654A (en) * | 1993-06-11 | 1996-07-16 | Heliosynthese S.A. Centre D'affaires Actimark Bureau | Process for the production and extraction of thermostable superoxide-dismutases from a photosynthetic microorganism culture |
CN105331588A (zh) * | 2015-02-02 | 2016-02-17 | 鄂尔多斯市疾病预防控制中心 | 一种重组螺旋藻超氧化物歧化酶制备工艺 |
US11473065B2 (en) * | 2015-05-06 | 2022-10-18 | Fitoplancton Marino, S.L. | Method for obtaining a biomass of a microalga of the species Tetraselmis chuii enriched in superoxide dismutase (SOD) |
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