JPH0256496A - 免疫促進性グアニン誘導体、その組成物及びその使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は、免疫応答を増加させる化合物（免疫促進剤）
、より特定して言うと、グアニン環の７位及び８位が置
換したグアニンヌクレオシド誘導体、それらの誘導体を
含む組成物及びそれらの使用法に関するものである。

（発明の背景） 動物の免疫系は、その動物宿主には異物として、その系
により認識される物質を攻撃、排除又は中和するために
、別々に、そして、または協力して作用する多くの要素
から成り立っている。必ずしも必要ではないが、一般に
、この免疫系により異物と認識された物質は、その宿主
とは異なる起源を有している。このような外来物質の代
表的例には、感染性細菌及びそれらの細胞活性副産物、
ウィルス粒子及びそのタンパク質、昆虫の前針から注入
されたタンパク質及びそれらに類するものがある。リュ
ーマチ関節炎などの自己免疫障害においては、その宿主
免疫系が、宿主製タンパク質あるいは自家製タンパク質
を異物として認識してしまう。

この免疫系の基本的エフェクターは、胸腺由来の白血球
（Ｔ細胞）、骨髄で作られるリンパ球（Ｂ細胞）、なか
でも細菌に対して細胞毒性効果をもつ過酸化水素などの
酸化剤を作る酵素を生産する好中球及びＴ細胞にその外
来物質又は抗原を送り込み、また、Ｔヘルパー細胞への
Ｔ細胞の転換を助けるインターロイキン−１と呼ばれる
タンパク質を生産するマクロファージを含む、白血球で
ある。外来物質に対し、順序よく、連続して作用する複
雑なタンパク質混合物である補体も免疫応答において重
要な役割を果たす。

Ｂ細胞は、とりわけその膜表面にイムノグロブリンが存
在することでＴ細胞と区別することができる。このイム
ノグロブリンは、抗体として機能する。

イムノグロブリンには、そのイムノグロブリン分子の一
部をなしている５種の抗原的に異なる重鎮タンパク質に
基づきＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭと同
定される５種のクラスに分類される。またＢ、！［１胞
は、補体レセプター（ＣＲ）　、イムノグロブリンのＦ
ｃｊＪ域のレセプター（ＦＣＲ）、１　’Ｉｆ域関連抗
原（Ｉａ）及び全ての抗血清により同定され、かつ、Ｂ
細胞の成熟及び活性化の種々の特徴と相関をもつ、−群
の分化抗原（Ｌｙｂｌ−７）を含む、非イムノグロブリ
ン細胞マーカーを保有している。これらのマーカーは、
Ｂ細胞を表現型で同定するのに有用である。

Ｂ細胞のイムノグロブリンは、外来物質又は抗原に作用
する一方、Ｔ細胞、及び特にヘルパーＴ細胞はＢ細胞を
刺激し、体液性免疫のために抗体分泌性細胞へと分裂及
び分化させるのに必要であると考えられている。サプレ
ッサーＴ細胞は、体液性免疫の制御に寄与しており、一
方、細胞毒性Ｔ細胞及び遅延型過敏症のＴ細胞仲介体は
細胞性免疫の重要なエフェクターである。

Ｔ細胞は、Ｔ細胞の機能に関係するＬｙｔｌ、２及び３
、及びＬ３Ｔ４と命名される抗原を含んでいる。通常、
Ｂ細胞の活性化及び制御に関与しているのはこれらの細
胞である。

ヘルパーＴ細胞は、第１のメツセージをＢ細胞が、活性
化する抗原から受けた後、イムノグロブリン分泌Ｂ細胞
を活性化及び分化するのを助けることが知られている。

しかし、Ｔ細胞がＢ細胞に、Ｂ細胞の活性化及び分化へ
の増殖をうながす第２のメツセージを提供する様式は、
議論のある所である。

グアノシン−３’、５’−サイクリック−リン酸（ｃＧ
ＭＰ）ば、Ｂ細胞増殖に必要な第２のメツセージを提供
する天然の試薬と考えられてきている。８−ブロモグア
ノシン−３’、５’−サイクリック−リン酸（８−Ｂｒ
ｃＧＭＰ）は、弱い合成細胞内リンパ球マイトジェンで
あることが分っている。

免疫応答は、人工的抑制（免疫抑制）又は増強（免疫強
化又は免疫促進）により修正することができる。免疫抑
制、すなわち、人工的に誘導される応答性の減少は、６
種の一船的方法、（１）抗原の投与、（２）特異的抗血
清または抗体の投与、（３）抗リンパ球抗血清などの他
の生物学的試薬の使用、（４）薬剤又はホルモンの使用
、（５）照射、及び（６）リンパ組織の外科的除去によ
り行うことができる。免疫強化には、免疫応答が発現す
る速度の増加、応答の強度又はレベルの増加、応答の延
長、又は他の非免疫性物質に対する応答の発現に効果を
発揮する試薬の投与を包括することができる。

免疫応答を増加することが知られている試薬は、一般に
アジュバントと呼ばれ、そして、一般に２つのカテゴリ
ー（１）−船釣免疫強化を提供するもの、すなわち広範
囲の抗原に対し、細胞性及び体液性免疫応答両方を増加
させる物質、及び特別な免疫強化を提供するもの、すな
わち、特定の抗体のみに対する特異的応答を増カゴさせ
るもの、に分類することができる。

アジュバントとして作用しうる物質は、次のカテゴリー
に分類することができる。（１）水及び油エマルジョン
、例えばフロインドアジュバント、（２）合成ポリヌク
レオチド、（３）ホルモン、薬剤、及びサイクリックヌ
クレオチド、（４）内毒素、（５）インターロイキンの
ようなタンパク質性リンフ才力イン及びモノカイン類。

特異的に免疫応答を強化する物質は、ヒトの末梢リンパ
球から得られる透析可能リンパ球抽出物である、トラン
スファーファクターである。トランスファーファクター
は、免疫不全の患者にいくらかの効果を示し、がん患者
及び限定される免疫不全患者に対しては、おそらく効果
があると報告されている。しかし、この特別な物質に関
しては知られていないことがたくさんある。

エイズ、Ｘ染色体性態γ−グロブリン血症、老化及び薬
剤誘導性免疫抑制のようないくつかの疾病及び生理状態
の場合、Ｂ細胞の活性化及び分化が欠乏、そして、また
は、低いレベルでのみ存在しており、それにより、その
宿主の免疫応答を低下させている。これらの疾病及び症
状は、免疫抑制状態の代表例である。ここで、もし、効
果をあげることができるなら、その活性化及び分化の増
加は、うまくその病気の症状を軽減し、そして、または
、その患者の状態を改善することができる。

免疫強化した状態は、ワクチン化後の身体状態で示すこ
とができる。ここで、免疫応答はすでに、抗原性応答に
より強化されているが、なお、免疫程度そして、または
その期間を改善するよう有益な強化を起こすことも可能
である。

グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）及びウェイグル（Ｗｅｉ
ｇｌｅ）に共同譲渡された米国特許第４，５３９，２０
５号は、アルドース鎖（環）中に、５又は６個の炭素原
子を有するアルドースに９−１′結合した８位置換グア
ニン誘導体による動物の細胞性応答の調節を記述してい
る。この特許に述べられている細胞性調節は、はとんど
−次及び二次免疫応答におけるアジュバンティシティー
のような免疫調節に関係している。特定の悪性状態に対
する活性も、Ｔ細胞置換活性、胸腺リンパ球に関するＩ
Ｌ−１様活性、及び好中球由来のりソソーム酵素の放出
同様公開されている。これらの分子中の８位置換基は、
水素と比較して、電子吸引誘導効果を有している。

従って、ハロゲン、メルカプト又はそのチオクツ互変異
性体、アシルメルカプト、アルキルスルフィド、ニトロ
、シアノ、ケト、ハロメチル及びメチレンオキシアルキ
ル及びこれらに類するものが有効であると公開されてお
り、一方、アミノ基のような電子供与性置換基は、不活
性であることが分った。

さらに共同譲渡された米国特許第４，６４３，９９２号
及びこれに対応して公表されたヨーロッパ特許出願第８
３３０６７９１．１号は、動物の細胞性応答の調節にお
ける、８−ヒドロキシグアノシン（８−オクソグアノシ
ン）、７−メチル−８−オクソグアノシン及び７−メチ
ル−８−チオクツグアノシンの誘導体の使用を公開して
いる。さらに、米国特許第４，５３９．２０５号に公開
されているグアニン誘導体を用いた結果は、この特許で
最初に公開されたグアニン誘導体を用いた結果と同様で
あった米国特許第４．６４３，９９２号にも公開されて
いる。

さらに、米国特許第４．６４３．９９２号で公開及び特
許請求されている化合物の効果に関しても、本発明者及
び共同研究者により、いくつかの報文及び著書が公表さ
れてきている。

その公表された報文の代表例には、グツドマン（Ｇｏｏ
ｄｍａｎ）　、プロシーディング・イン・ソサイアティ
ー・オブ・エクスベリメンタル・バイオロジー・アンド
・メティシン（Ｐｒｏｃ、　Ｓｏｃ、　Ｐｅｐ、　Ｂｉ
ｏｌ。

Ｍｅｄ、）１７９，４７９　（１９８５）　、グツドマ
ン（Ｇｏｏｄｍａｎ）　、ジャーナル・オプ・イムノロ
ジー（Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、　１３６．３３３５　（１９８
６）　、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）及びウェイグル
（Ｗｅｉｇｌｅ）“ヒトにおけるプリン代謝”、パート
３、ナイハン（Ｎｙｈａｎ）及びトンプソン（Ｔｈｏｍ
ｐｓｏｎ）　編、　プレナムプレス版、ニューヨーク、
４５１及び４４３頁（１９８６）、グツドマン（Ｇｏｏ
ｄｍａｎ）及びウェイグル（Ｗｅｉｇｌｅ）　　ジャー
ナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、　ｒｍｍｕｎｏｌ、）
　、１３５．　３２８４　（１９８５）、グツドマン（
Ｇｏｏｄｍａｎ　）及びウォルファート（Ｗｏｌｆｅｒ
ｔ）　＋イムノロジカル・リサーチ（Ｉｍｍｕｎｏｌ、
　Ｒｅｓ、）　、　　５゜７１（１９８６）、グツドマ
ン（Ｇｏｏｄｍａｎ）　、ジャーナル・オブ・イムノロ
ジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　１３６゜３３３５　
　（１９８６）　、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）　ｒ
ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕ口ｏ１
．）。

１３７．３７５３　（１９８６）　、及びグツドマン（
Ｇｏｏｄｍａｎ）及びヘンネン（Ｈｅｎｎｅｎ）、セル
ラー・イムノロジー（［ｌ’ｅｌｌ、　　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、）、　　１０２．　３９５（１９８６）。

（本発明の概要） ヒト及び動物細胞における免疫応答を増加するのに、７
．８位二置換グアニンヌクレオシド（グアノシン誘導体
）が使用される。この置換したグアニンヌクレオシド類
は、一般式 （式中、Ｘは０．Ｓ、Ｓｅ又はＮＣＮであり、Ｒ１はエ
チル基よりも長く、かつデシル基よりも短かい長さでか
つ生理的ｐＨ値でイオン電荷を特だないヘテロ原子置換
炭化水素基であり、Ｒ２及びＲ３は、水素、水酸基、低
級アルコキシ基、低級アルカノイロキシ基及びベンゾキ
シ基からなる群から選ばれる、同じ、もしくは異なる基
であるか、もしくは、Ｒ２及びＲ３が共に、低級アルキ
リデンジオキシ基を構成し、及びＲ４は、水素、低級ア
ルカノイル基及びベンゾイル基からなる群から選ばれる
ものである）、 で表わされる構造を有している。本発明の好ましいグア
ノシン誘導体は、Ｘが０またはＳで、かつ、Ｒ１がエチ
ル基より長く、ヘプチル基のおよその長さより短かい全
長（そのヘテロ原子置換置を含む）をもつものである。

特に好ましいグアノシンＰ導体Ｌ！、？−（２−クロロ
エチル）−８−オクソグアノシン、７−カルプエトオキ
シメチルー８−オクソグアノシン、８−カルバモイルメ
チル−８−オクソグアノシン、７−メトキシエチル−８
−オクソグアノシン、？−（４−ニトロベンジル）＝８
−オクソグアノシン、７−（４−メトキシベンジル）−
８−オクソグアノシンである。このような化合物の、医
薬的に許容される、非毒性塩基付加塩も考案されている
。

活性成分として、上述のヘテロ原子置換グアニンヌクレ
オシド誘導体の強化（又は免疫促進）効果量とともに、
希釈量の生理的に許容しうるキャリヤーを含む免疫反応
増強組成物も、本発明で考案されている。

免疫応答、特に抗原特異的免疫応答を増加する方法も考
案されている。ここでは、白血球を、水性媒体中、すな
わち、培養液（インビトロ）中又はインビボで免疫促進
量の上述グアニンヌクレオシド誘導体を含む組成物と接
触させる。組成物と白血球との接触は、接触を受けた細
胞が、免疫応答の増加を示すのに十分な時間維持する。

接触させる白血球は、Ｂリンパ球であることが好ましい
。

本発明はいくつかの利点及び長所を有している。

本発明の１つの暗黙の利点は、この化合物が一般に従来
から知られているグアノシン免疫促進剤よりも効果的、
すなわち、より低い投与量で同様の応答を提供するか、
もしくは、ある所定の投与量でより大きい応答を提供す
ることである。

本発明の長所には、この組成物の１つの使用は、第１の
（抗原性）メソセージに応答して、Ｂリンパ球の活性化
及び分化に必要な第２のメソセージを提供しうろことが
ある。

本発明の別の利点には、免疫応答の増加は、Ｔヘルパー
細胞活性の有無にかかわらず行なわれることがある。従
って、免疫応答の増加は、Ｔ細胞依存系及びＴ細胞独立
系の両方で行なわれることがン主目される。

本発明の別の長所には、本発明の使用により、特定の免
疫抑制又は免疫不全状態及び疾患症状を改善、そして、
または減少させることができることがある。

本発明のさらに別の利点及び長所は、以下の議論から当
業者には明らかであろう。

ここで用いている化学物質及び細胞による、及びそれら
へのメツセージの授受のような擬人的記述は、観察され
た現象の理解を助ける上の、説明を目的としたものであ
る。

（発明の詳細な説明） ■、序文 本発明は、細胞培養物中の白血球を刺激すること及び投
与された宿主ホ乳類の免疫系を刺激する、免疫応答増強
剤（免疫促進剤）を考案している。

特に考案されている免疫促進は、主に免疫抗原に対する
抗原特異的なものである。

報告されている、あるマイトジェン、グアノシン誘導体
、例えばグアノシン３’、５’−サイクリック−リン酸
及びその８−ブロモ誘導体の研究において、希釈量の生
理的に許容されるキャリヤーを含む組成物の活性成分と
して効果量存在する新しいクラスの低分子量グアニンヌ
クレオシド誘導体は、ホ乳類細胞の応答の調節に著しい
効果を提供することが発見された。強いアジュバンテイ
シティ、Ｔ細胞置換因子様活性及び免疫再構成活性を生
ずる、抗原特異的体液性免疫応答の増加は、特に、調節
されることが分った細胞性応答の例である。これらの化
合物及びその使用法は、米国特許第４，５３９，２０５
号及び第４，６４３，９９２号に公開されている。

本発明の化合物は、上述の２つの特許の化合物よりも、
驚（はど活性が高いことが発見された。

この増加した活性の発見は、いくつかの理由で驚くべき
ものである。

上記米国特許で公開されている最も活性のある化合物は
、白血球マイトジェン及び抗原特異的アジュバントの両
方に関して、７−メチル−８−オクソグアノシン（７ｍ
　８　ｏＧｕｏ）であった。以下に議論されるように、
マイトジェネシティー及びアジュバンティシティーは、
必ずしも関連しない現象である。

つづいて得られたデータから、７　ｍ　８　ｏＧｕｏが
８−ヒドロキシグアノシン（その互変異性体、８−オク
ソグアノシン、Ｂ　ｏＧｕｏとも呼ばれる）又は８−メ
ルカプトグアノシン（８ＭＧｕｏ又は、その互変異性体
８−チオクツグアノシンとも呼ばれる）のような化合物
以上の活性を示すことは驚くべきことであった。特に、
以後にそのいくつかを示す、引きつづくデータは、一連
の８位置換グアノシンの活性（マイトジェニシティ及び
アジュバンティシティの両方共）は、８位置換基のサイ
ズの増加とともに減少することを明らかにした。

従って、７　ｍ　８　ｏＧｕｏのメチル基がその置換基
のサイズ効果がみられる８位に隣接するアアノシン環上
に結合しているので、従来置換基がなかった７位へのそ
の基又は他の基の付加は、単に、その問題の分子がサイ
ズ感受的環上位置に隣接する位置にあり、より大きいと
いう理由で、活性の減少を引き起すと予想されよう。７
　ｍ　８　ｏＧｕｏに比べ、グアノシン環上７位により
大きい置換基を有する本発明の化合物のアジュバンティ
シティーの増加は、なおのこと驚くべきことである。

■、化合物 ここで考案されている免疫促進性化合物は、７゜８位二
置換グアニンヌクレオシド誘導体（また、ここでは、グ
アノシンもしくはグアノシン誘導体とも呼ばれる）であ
る。これらの化合物は、以下に示す一般式 （式中、Ｘは○、Ｓ、Ｓｅ又はＮＣＮであり、Ｒ１はエ
チル基より長く、かつデシル基よりも短かい長さでかつ
生理的ｐＨ値でイオン電荷をもたない、ヘテロ原子置換
した炭化水素基であり、Ｒ２及びＲ３は、水素、水酸基
、低級アルコキシ基、低級アルカノイロキシ基及びベン
ゾキシ基からなる群から選ばれる、同じかもしくは異な
る基であるか、もしくは、Ｒ２及びＲ３が共に、低級ア
ルキリデンジオキシ基を構成し、及び、Ｒ４は、水素、
低級アルカノイル基及びベンゾイル基からなる群から選
ばれる基である。） で表わされる構造を有する。

上記式中のリボシル基は、β−配位で結合する、環上の
１位での結合を意図して示しであることを確認する。さ
らに、リボシル基のＤ型を意図していることを理解すべ
きである。

好ましいグアノシン誘導体は、ＸがＯ又はＳであり、Ｒ
１がエチル基より長く、かつヘプチル基のおよその長さ
よりも短かく、かつ、Ｒ２及びＲ３が低級アルキリデン
ジオキシ基以外のものである場合である。特に好ましい
態様では、Ｘは０であり、Ｒ１は、２−クロロエチル（
−Ｃ１１２Ｃ１１２Ｃ１，）。

カルブエトキシメチル（−ＣＨ２ＣＯ□Ｃｚｌｌｓ）ｌ
　カルバモイルメチル（−ＣｔｂＣＯＮＨｚ）　、メト
キシエチル（−ＣＩｌ□ＣＩＩｚＯＣｔｈ）　、　　４
−ニトロベンジル、４−メトキシベンジル及び２，３−
ジヒドロキシプロピルからなる群から選ばれるものであ
り、Ｒ２及びＲ３は水酸基で、かつＲ４が水素である。

Ｘが０、Ｒ′が４−ニトロベンジル又は２−クロロエチ
ル、Ｒ２及びＲ″が水酸基、かつＲ４が水素であること
が最も好ましい。

先に記したように、Ｒ１は、エチル基より長いので、そ
の置換基がハロゲン原子より太き・い、ヘテロ原子置換
エチル基を含む。また、Ｒ１ラジカルはデシル基よりも
短かい。すなわち、Ｒ１は、飽和した２個の炭素鎖より
も長く、かつ、飽和した１０個の炭素鎖よりも短かい最
長鎖をもち、置換基を含み、また適当に水素原子を含む
、ヘテロ原子置換炭化水素基である。ヘテロ原子置換プ
ロピル、ブチル、ヘキシル又はデシル等のように簡略的
に呼ばれる、ヘテロ原子置換炭化水素基は、通常の直鎖
炭化水素基であると理解すべきである。

ヘテロ原子置換分枝鎖基は、通常、２−プロピル又はイ
ソプロピルのように各々数字又は、略した接頭語を用い
て示される。

ヘテロ原子置換炭化水素基鎖の長さは、その置換基の最
長鎖に沿って測定される。その最長鎖は、ヘテロ原子置
換基を含んでも、含まなくてもよい。

これらの長さは公表されている結合角、結合長及び原子
半径を用い、その基を形成する一連の鎖の長さを描き、
長さを測ることにより、又は、公認の公表された値に従
った、結合角、結合長及び原子半径をもつ、市販のキッ
トを用いてモデルを組立てることにより容易に計算する
ことができる。

さらに、上述の測定様式の方が好ましいが、およその置
換基の長さは、不飽和の結合長、結合角及び原子半径さ
らにヘテロ原子置換基の原子の結合長、結合角及び原子
半径を、飽和炭素原子のデータと同一と仮定して見積る
ことができる。

Ｒ１は生理的ｐＨ値でイオン電荷をもたない、特定の長
さのヘテロ原子置換炭化水素基である。従って、７位ヘ
テロ原子置換基は、生理的ｐＨ値でその分子がイオン電
荷をもつようなｐＫａ値を有するアミン、カルボン酸塩
基あるいは他の塩基性又は酸性基ではない。

炭化水素及び炭化水素基それ自体は、大きく、脂肪族及
び芳香族基に分類できる。有用な脂肪族基には、各々、
（ｉ）飽和アルカン（アルキル基）及び（ｉｉ）−不飽
和アルケン及びアルキン（アルケニル及びアルキニル基
）が含まれる。環状、直鎖及び分枝基は、各タイプの脂
肪族基に存在する。

有用な芳香族基は、脂肪族基に結合する芳香族環を含む
アラルカン基である。これら各炭化水素基はさらに考案
されたＲ１基においては、１つのヘテロ原子（非炭素又
は非水素）で置換されている。

Ｒ１基はエチル基よりも長く、かつデシル基より短かい
長さのものである。Ｒ１ラジカルかヘテロ原子置換した
アルキル基の場合、これらのアルキル基は、ヘテロ原子
置換低級アルキル基と呼ばれる。ヘテロ原子置換０２　
Ｃａアルキル基には、以下に説明するヘテロ原子置換ア
ルキル基に有用な、ここで“低級アルキル”基と呼ばれ
るクラスのいくつかのメンバーが含まれている。従って
、ここで低級アルキル基について議論しておくのが適当
である。

ここで“低級”と呼ばれる基は、それらが１乃至約６個
の炭素原子、好ましくは１乃至約３個の炭素原子を含む
ことを意味している。この定義は、Ｒ’　、Ｒ”、Ｒ’
及びＲ４の全てに用いている“低級“という言葉につい
て適用される。

例えば、低級アルキル基には、メチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ｎ−ブチル、５ｅｃ−ブチル、ｔ−
７”チル、ｎ−ペンチル、３−メチル−２−ブチル、１
−メチルブチル、２−メチルブチル、ｎｅｏ−ペンチル
、ｎ−ヘキシル、■−メチルペンチル、３−メチルペン
チル、■−エチルブチル、２−エチルブチル、２−ヘキ
シル、３−ヘキシル及びそれに類するものが含まれる。

Ｒ′のヘテロ原子置換Ｃ２Ｃａアルキル基のグループに
は、低級アルキル基のグループの適当にヘテロ原子置換
したメチル基が含まれ、また、さらに、ヘテロ原子置換
アルキル置換低級アルキル基である、ヘテロ原子置換２
−メチルヘプチル基同様、ヘテロ原子置換ヘプチル、オ
クチル及びノニル基を含む。より好ましいＲ１基は、エ
チル基より長く、かつヘプチル基のおよその長さより短
かいので、Ｒ１に対するより好ましい低級アルキルラ基
には、置換したプロピル、ブチル、ペンチル、１−メチ
ルブチル、２−メチルブチル及びそれに類するものの他
に、適当なヘテロ原子置換メチル基も含まれる。

置換アルキルＲ１基には、ハロゲン置換Ｃｚ　Ｃｎアル
キル、ヒドロキシ及びポリヒドロキシｃ２Ｃｂアルキル
、Ｃ２−ｃ６アルキレン低級アルキルカルボキシレート
、ジー低級アルキルエーテル（低級アルコキシ低級アル
キル、及び未置換の低級アルコキシＣ，−Ｃ，アルキル
カルボニル基の他に、基のカルボキサミド基部分が一般
式ＣＯＮＲ’Ｒ６の形をしている、ジー及びモノー低級
アルキル低級アルキルカルボキサミドが含まれる。以下
にこれらＲ１基について説明する。

ヒドロキシＣ２−Ｃ，アルキル基には、２−ヒドロキシ
エチル、２−ヒドロキシプロピル、３ヒドロキシプロピ
ル、３−ヒドロキシ−２−ブチル、３−ヒドロキシ−２
，２−ジメチルプロピル、６−ヒドロキシヘキシル及び
これに類するものが含まれる。置換アルキルＲ１基のそ
の他のグループは、エーテル及びチオエーテル基が約３
個までの炭素原子を含むチオエーテル、エーテル及びア
ジドからなるグループから選ばれる別の置換基から２個
の炭素のスペースを置いた水酸基を含むＣ，−Ｃ，基で
あるヒドロキシＣｚ　　Ｃｂアルキル基のサブグループ
である。このサブグループは、エポキシド及び親核試薬
との反応産物と見ることができる。エポキシド及び親核
試薬から生成した水酸基は、エビクロロヒドリン、又は
、エビブロモヒドリンと適当なグアノシンとの反応と、
それにつづく生成したエポキシドと、親核試薬との反応
により提供されるような、３個の炭素原子鎖に最もうま
く結合している。

ポリヒドロキシＣ，−Ｃ６アルキル基には、２゜３−ジ
ヒドロキシプロビレ、３．４−ジヒドロキシブチル、ソ
ルビチル及びそれに頻するものが含まれる。当業者には
、この考案されたポリオールが、その低級アルキル基の
各炭素原子上に１個の水酸基のみ含むことを理解されよ
う。

ハロゲン置換Ｃｚ　−Ｃａアルキル基には、Ｃｚ　−Ｃ
ｓアルキル基に１個以上の塩素、臭素、フッ素又はヨウ
素が含まれている。代表的ハロゲン置換基には、２−ク
ロロエチル、２，２．２−）リフルオロエチル、２−ブ
ロモブチル、２−クロロヘキシル、２．３−ジクロロオ
クチル、過ハロゲン置換炭化水素及びこれに類するもの
が含まれる。

低級アルキルカルボキシ基には、置換基として、さらに
カルボキシ（−Ｃ（ｈＨ）基を含む、先に示した低級ア
ルキル基が含まれる。従って、７−ＣＩｌ□ＣＯ□Ｈ基
はカルボキシ置換メチル基と考えられる。低級アルキル
カルボキシ基は、それ自体生理的ｐＨ値でグアニン誘導
体にイオン電荷を与えることから、Ｒ１置換基として考
えられていない。しかし、低アルキルカルボキシ基のエ
ステル及びアミド誘導体は考えられている。

低級アルコキ、シ低級アルキルアルボニル基は、メチル
、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル及びｎｅｏ−ペン
チルアルコールなどの低級アルキルアルコールと、低級
アルキルカルボキシ基とのエステルと見ることができる
。代表的低級アルキルカルボキシ基には、カルボキシメ
チル、２−カルボキシエチル、２−カルボキシヘキシル
及びこれに類するものが含まれる。代表的低級アルコキ
シ低級アルキルカルボニル基には、カルボキシエチル（
または、カルボエトキシメチルとして知られている）、
３−イソプロポキシカルボニルプロビル、４−へキシロ
キシカルボニルペンチル及びこれに類するものが含まれ
る。

未置換、モノ−及びジー低級アルキル置換アミノ低級ア
ルキルカルボニル（そのラジカルのカルボキサミド基部
分が一般式ＣＯＮＲ５１？６で表わされる低級アルキル
カルボキサミド）基は、低級アルキル基が先に説明した
ものであり、かつ、Ｃ２−Ｃ５アルカノール部分が、２
−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル又は、２
−ヒドロキシプロピルの場合、各々モノ−低級アルキル
又はｃ２Ｃ３アルカノールアミンもしくは、ジー低級ア
ルキル又はジーＣｚ　　Ｃｘアルカノールアミン同様ア
ンモニアと７位置換低級アルキルアルボキシ基とから生
成したものと見ることができる。そのようなアミンの代
表例は、メチルアミン、プロピルアミン、５ｅｃ−ブチ
ルアミン、ヘキシルアミン、ジメチルアミン、メチルエ
チルアミン、ブチルヘキシルアミン、２−ヒドロキシエ
チルアミン（エタノールアミン）、２−ヒドロキシプロ
ピルアミン（イソプロパツールアミン）、ジェタノール
アミン、ジイソプロパツールアミン、メチルエタノール
アミン、３−プロパツールアミン及びそれに類するもの
である。環中に５又は６個の原子を有する環状二級アミ
ンのアミド類は、低級アルキルアルボキシ基と、ピロリ
ジン、モルホリン、ピペリジン、ビロール又は４−メチ
ルピペラジンのような環状２級アミンから生ずるものと
見ることができる。

上述のような低級アルキルカルボキサミド基のカルボキ
サミド基部分は、一般弐ＣＯＮＲ５Ｒ’　　（式中、Ｒ
５及びＲ６は、水素、低級アルキル及びｃ２Ｃ３アルカ
ノールからなる群から選ばれる、同じか、もしくは、異
なるもの）で表わされる。別の場合、ＮＲ’Ｒ６はとも
に、環内に、５又は６個の原子を有するヘテロ環を形成
しうる。従って、これらの７位置換基は、そのカルボキ
サミド基部分が一般弐〇〇ＮＲ’Ｒ’で表わされる低級
アルキルカルボキサミド基と記述することができる。

Ｃｚ　　Ｃｂアルキレン低級アルキルカルボキシレート
基は、置換基、ヒドロキシＣ，−Ｃ，アルキル又はポリ
ヒドロキシＣ３Ｃｂアルキル基と、低級アルキルカルボ
ン酸とのエステルと見なすことができる。代表的ＣＺ−
ｃ、アルキル置換基は先に議論が行なわれた。そのよう
なエステル中に存在しうる低級アルキルカルボン酸の低
級アルカノイル（低級アシル）部分には、ホルミル、ア
セチル、プロピオニル、２−メチルプロピオニル、ブチ
リル、３−メチルバレリル及びそれに類するものが含ま
れる。２′−そして、または３′−水酸基と上述のよう
なカルボン酸とのエステル化によって形成する低級アル
カノイロキシ基は、Ｒ３及びＲ４基として考えられてい
る。

Ｃ，−Ｃ，アルキレン低級アルキルカルボキサミド基も
、ヘテロ原子置換７位炭化水素置換基として考えられて
いる。このような基は、−級又は二級アミノ置換Ｃ，−
Ｃ６アルキル基と、低級アルキルカルボン酸から生ずる
アミドとみることができる。−次及び二次アミノ置換Ｃ
ｚ　　Ｃｂアルキル基（同様に置換した三級アミン同様
）もそれ自体では、生理的ｐ＋＋値でグアニン誘導体に
アミノ基がイオン電荷を与えてしまうのでここで考えら
れていない。このようなアミド中に存在する、有用な低
級アルキルカルボン酸は、先に議論されたものである。

代表的−級及び二級アミン置換Ｃ２−Ｃ６アルキル基に
は、２−アミノエチル、２−アミノプロピル、２−（イ
ソプロピル）アミノエチル（３−アザ−４−メチルペン
チル）基及びそれに頻するものが含まれる。

先のバラグラフで示されたエステル又はアミドは、理論
的には、デシル基よりも長くなることが注目される。し
かし初めに記したとおりＲ１基は、デシル基よりも短か
い長さを有したものである。

従って、６個の炭素原子を有するアルキルカルボキシレ
ート及び６個の炭素原子を有する低級アルキルアルコー
ルから生ずるエステルは、それがデシル基よりも長いの
で排除される。また、好ましいＲ１基は、ヘプチル基の
およその長さよりも短かく、また、この選択性は、先に
述べたエステル及びアミドにも通用するものであること
にも注意せよ。

さらに、置換７位炭化水素置換基のその他のグループは
、低級アルコキシ低級アルキル基とも呼ばれるジ低級ア
ルキルエーテルである。このようなジ低級アルキルエー
テルは、１個以上のメチレン基（ＣＩ＋２　　）が１個
の酸素により置換されたアルキル基と考えることができ
る。代表的な有用エーテル基には、メトキシメチル、メ
トキシエチル、エトキシエチル、エトキシ−２−プロピ
ル基及びこれに類するものが含まれる。

先の議論では、ヘテロ原子置換直鎖及び分枝鎖アルキル
（脂肪族）基を取扱った。また、本発明の化合物は、置
換シクロ脂肪族、エチレン様不飽和脂肪族及びアラルキ
ル基も含んでいる。これらの基の各々は、直鎖及び分岐
鎖アルキル基同様、ヘテロ原子置換を受けることができ
る。

例えば、シクロペンタンカルボン酸又はシクロブタンカ
ルボン酸のようなヘテロ原子置換環状脂肪族基は、先に
述べた７位置換低級アルキルアルコール又はアミンと、
それぞれ、エステル又はアミドを作るのに利用すること
ができる。同しことが、２−シクロペンテン−１−酢酸
のような、エチレン様不飽和環状カルボン酸についても
言える。

同様に、シクロヘキサノール又は２−シクロヘキセン−
１−オール、シクロプロピル、カルビノールのような環
状アルコール、又は、シクロブチルアミン又はシクロヘ
キシルアミンのような環状アミンは、先に説明した、カ
ルボキシメチル基のような７−アルキルカルボキシ基と
、各々、エステル又はアミドを形成するのに利用するこ
とができる。３−ブチン−１−オール及び３．３−ジメ
チルアクリル酸のようなエチレン様不飽和アルコール及
びカルボン酸も、先に説明したように、エステル及びア
ミドの合成に使用することができる。

置換アラルキル基は、特に、Ｒ１基として考えられてい
る。代表的アラルキル基には、ベンジル及びフヱネチル
基が含まれ、またこれらの基は、フェニル環上に、ニト
ロ、シアノ、カルボキサミド（−ＣＯＮＲ５Ｒ６、式中
、Ｒ５及びＲ６は、先に説明されたとおりである）、ハ
ロゲン、低級アルコキシ、低級アルコキシカルボニル、
水酸基及び低級アルカノイロキシ基からなる群から選ば
れる１個又は２個、好ましくは１個のヘテロ原子置換基
で置換されている。Ｒ１基に対する全長の要請は維持さ
れることを再確認しておく。

シアノ、ニトロ及びハロゲンなどの、バイン（Ｉｌｉｎ
ｅ）　（“物理有機化学”第２版、マクロ−ヒル・ブッ
ク（ＭｃＧｒａｗ−旧１１　Ｂｏｏｋ）版、ニューヨー
ク、ｐ８５−９３　　（１９６２））により議論されて
いる誘導効果又は共役により、水素に比べ電子吸引基で
あるベンジル基上の置換基が好ましい。４−ニトロベン
ジルラジカルは、７−（４−ニトロベンジル）−８−オ
クソグアノシンが本発明の特に好ましいグアニン誘導体
であることから、特に好ましいものである。

上述のヘテロ原子置換炭化水素基のうち、エチルよりも
長く、かつヘプチルのおよその長さよりも長い、置換直
鎖アルキル及びベンジル炭化水素基が好ましい。好まし
い基のうち、ハロゲン置換アルキル、低級アルコキシ低
級アルキルカルボニル、カルボキサミド部分が一般式Ｃ
ＯＮＲ’Ｒ６で表わされる低級アルキルカルボキサミド
、低級アルコキシ低級アルキル、及びフェニル環が、水
素と比較して電子吸引性の官能基で置換したベンジルが
特に好ましい基である。

Ｒ２及びＲ３は、同じか又は異なるもので、水素、水酸
基、低級アルコキシ、低級アルカノイロキシ及びベンゾ
キシからなる群から選ばれるものである。また、Ｒ２及
びＲ３は、２’、３’　−環状低級アルキリデンジオキ
シ基を形成することもできる。代表的Ｒ２及びＲ３基を
以下に議論する。

低級アルコキシ基は、糖の酸素原子を介して、グアニン
糖（リボース）環に結合する低級アルキル基である。代
表的低級アルコキシ基には、メトキシ、エトキシ、イン
プロポキシ、ブトキシ、ヘキシロキシ、及びそれに類す
るものが含まれる。

低級アルカノイロキシ基は、グアニン糖環水酸基と、低
級アルキルカルボン酸の間に形成されるエステルである
。低級アルカノイロキシ基の代表例には、ホルモキシ、
アセトキシ、プロビオノキシ、ヘキサノイロキシ及びこ
れに類するものが含まれる。

その２′−及び３′−水酸基の低級アルキルアセタール
及びケタール誘導体は、２′、３′−環状低級アルキリ
デンジオキシ、またはより簡単に低級アルキリデンジオ
キシ基と呼ばれる。これらの基はホルムアルデヒド、ア
セトアルデヒド又はそれに類するもののようなアルデヒ
ド、あるいは、アセトン又はメチルエチルケトンのよう
なケトンと、置換グアノシンリボシル基の２′−及び３
′水酸基との反応により生成する。

Ｒ２及びＲ３は、水酸基、低級アルカノイロキシ又はベ
ンゾキシ基であることが好ましく、また、水酸基又はア
セトキシ基であることがより好ましい。Ｒ２及びＲ３が
低級アルカノイロキシ又はベンゾキシ基である場合、こ
れらのラジカルは、本方法の白血球接触ステップ中又は
その直後に失われる。従ってこれは、グアニン誘導体の
“プロドラッグを提供しつる。最も好ましいＲ２及びＲ
３は水酸基である。

Ｒ４は、水素、低級アルカノイル及びベンゾイルからな
る群から選ばれる基である。Ｒ４には水素が最も好まし
い基である。Ｒ４が低級アルカノイル又は、ベンゾイル
の時くカルボキシル基含有基は、上述のように切断され
、これも“プロドラッグを提供すると考えられている。

有用なグアノシンは、生理的ｐＨ値、すなわち、ｐＨ約
７．０〜約７．５で、相対的に酸性の１位環内窒素原子
のイオン電荷以外、実質的イオン電荷をもたない。従っ
て、有用な分子は、グアノシン中に存在しない酸及び塩
基含有領域を含んでいない。

酸性及び塩基性基がないことは、Ｒ１基から、グアノシ
ン分子全体にまで及んでいる。

グアニン類は酸であり、従って、塩基付加塩を形成しう
る。このような塩は、保存安定性を提供する上で有用で
あり、宿主血液及びリンパ液系、又は、培養培地のバッ
ファにより提供される緩衝効果により、本発明の方法に
おいて用いられるグアニン誘導体に付加的イオン電荷を
与えることばない。

グアニン誘導体の、医薬的に許容される、非毒性塩基付
加塩は有用であり、水又は、メタノール又はエタノール
などの低級アルキルアルコールのような適当な溶媒中、
適当な塩基で、この免疫応答増強剤を処理することによ
り生成することができる。代表的無機塩基には、水酸化
ナトＩＪウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム及
びこれに類するものが含まれる。代表的有機塩基には、
トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（ＴＲＩ
Ｓ）　、４−　（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラ
ジン−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）及びこれに類す
る塩基が含まれる。逆に、この塩基付加塩型は、酸での
処理により遊離型のグアノシンに戻すことができる。

ここで有用な、置換グアニンヌクレオシド誘導体は、化
学文献に公表されている操作、又は、それに類する操作
により、容易に合成することができる。いくつかの代表
的合成法は、材料と方法のセクションに述べられている
。７，８位二置換グアニンヌクレオシド誘導体の合成は
、一般に、すでに形成されている９−１′−β−アルド
グリコシド結合から始めるが、その結合を始めに形成す
る必要は必ずしもない。

後に述べられる代表的合成に加え、ここに、三種の一般
的な合成様式を節単に説明する。これらの様式は、文献
によって提供される合成様式の代表例であり、合成する
化合物として、本発明の７＝ヘテロ原子置換炭化水素−
８−チオクツグアノシンを用いて説明する。

第１様式では、７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−チオ
クツグアニンを適当な溶媒中、α−１−クロロ（又はブ
ロモ、又はアセトキシ）−２，３゜５−トリベンジオイ
ル−Ｄ−リポースのような、α−１＝脱離基置換リボー
ス誘導体と反応させて、β−リボシル誘導体を作る。こ
の反応産物を回収し、ＨＰＬＣで分画して、目的とする
グアノシン誘導体を得る。

第２様式では、７−アリル−８−チオクツグアノシン（
２２４４４、例２０）を酸化して、対応するアルデヒド
とする。その後、この生成した７−（２−エタナール）
−８−チオクツグアノシンを、ライティング（Ｗｉｔｔ
ｉｎｇ）、クライゼン（Ｃ１ａｉｓｅｎ）、リフオルマ
ドスキー（Ｒｅｆｏｒｗａｔｓｋｉ）またはそれに類す
る反応を介して、縮合し、使用するために、存在する他
の産物と分離するか、もしくは、使用前に還元又はハロ
ゲン化することができる、不飽和７−ヘテロ原子置換グ
アノシンを作る。

７−（２−エタナール）誘導体も、還元的にアルキル化
し、Ｃ２−Ｃ，アルキレン低級アルキルカルボキサミド
基が生成しうる、低級アルキルアミン置換基を生成させ
る。さらに、７−（２−エタナール）誘導体は、それ自
体有効である、対応する７−（２−エタノール）誘導体
に還元することができ、またエステル化して、Ｃ２Ｃ６
アルキレン低級アルキルカルボキシレートとすることも
できる。

第３様式では、チオホスゲンと、適当に置換した２、５
．６−）リアミノ−４−ヒドロキシピリドミジンによる
閉環を利用する。より特定して言うと、２−アミノ−４
−ヒドロキシ−５−ヘテロ原子置換炭化水素−６−β−
Ｄ−リボシルピリミジンを、酸捕捉塩基存在下、チオホ
スゲンと反応させ、使用するため、他の反応産物と分離
できる７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−チオグアノシ
ン誘導体を得る。

■８組成物 本発明の組成物は、本発明の免疫強化（免疫応答増強又
は免疫促進）効果量の置換グアニンヌクレオシド＝ｉ体
又は先に述べたその塩を混合した、希釈量の生理的に許
容されるキャリヤー（ここではビヒクル又は希釈剤とも
呼ばれる）を含んでいる。

インビボ投与のための組成物は、一般に、通常の単位投
与量組成物の形で、経口、もしくは非経口的投与を目的
として提供される。ここで用いている“単位投与”とい
う言葉及び文法的に等価なものは、必要とされる生理的
に許容されるキャリヤー、例えば希釈剤又はヒビクルと
合せて、目的とする治療効果を生むと計算された、所定
の効果量のグアノシン活性成分を含む、ヒトの患者及び
他の動物用の単一投与に適した物理的に分離した単一を
意味する。本発明の新しい単位投与型の処方は、ｆａ）
その活性グアノシン誘導体成分の独特の性状及び達成す
べき特定の治療効果、及び（ｂｌヒト及び他の動物に対
するインビボ同様、インビトロで治療的に使用するため
の、そのような活性成分を調合する技術に内在する制限
により記述され、かつ直接的に依存している。

本発明に従かう適当な単位投与型の例には、多数のもの
が分離した形で存在する、錠剤、カプセル、丸薬、粉末
袋、顆粒、ウェハ及びそれに頚するもの、及び液体溶液
、エマルジョン及びサスペンションがある。液体組成物
は、皮下、腹腔内筋肉注射、経口あるいはそれに類する
通常の方法で投与できる。

効果的に免疫促進する量として、インビボに投与される
活性成分量は、患者の年令及び体重、治療を受ける特定
の状態、投与頻度及び投与ルートに依存する。１日の総
投与範囲は、体重キログラム当り約０．０１から約２０
０ミリグラムとすることができ、より好ましくは、体重
キロダラム当り、約０．１から約２５ミリグラム、最も
好ましくは、体重キロダラム当り、約１から約１５ミリ
グラムである。ヒトの成人に対する投与は、単一投与又
は、３又は４回に分けて与えられる、１日当り、約５か
ら約１４００ミ！Ｊグラムの範囲にある。家畜に対する
投与は、ヒト成人と比較した動物の体重及び代謝速度に
比例させて投与する童を決定する、ヒトの投与に対応し
ている。

インビボで有効な濃度は、動物の種によって変りうろこ
とは、当業者には明らかであろう。また当業者は、適当
な濃度が容易に決定されることも分っている。

動物細胞のインビトロでの接触に必要な濃度は、ミリリ
ットル当り約１０６〜１０７細胞の細胞濃度のものに対
し、約ｌＸｌ０−６から約３Ｘ１０−’モルの濃度であ
る。この濃度は、約ｌＸＩＯ３から約ｌＸｌ０−’モル
濃度であることがより好ましい。後に示す結果のセクシ
ョンから分るように、所定のグアノシンに対するピーク
濃度すなわち、最も大きいアジュバンティシティーを提
供する濃度は、マウス及びヒトのリンパ球システムで実
験したとき、１０倍以上も変化する。

組成物は、固体又は液体とすることができる。

生理的に許容されるキャリヤーは、当分野ではよく知ら
れている。液体キャリヤーの代表的には、活性成分グア
ノシン誘導体と水塩外は、何も含まないか、もしくは、
リン酸緩衝液のような、生理的ｐＨ１生理的イオン強度
あるいは両方の、リン酸ナトリウムのようなバッファを
含む無菌的水性溶液がある。さらに、水性キャリヤーは
、ナトリウム及びカリウム塩化物のような塩、デキスト
ロース及び他の溶質同様、１種以上のバッファ塩を含む
ことができる。後者のキャリヤーは、リンガーズ・イン
ジェクション、デキストロースインジェクション、デキ
ストロース・アンド・ソディウムクロライド・インジェ
クション及びラフティティド・リンガーズ・インジェク
ションに代表される。

また液体組成物は、水に加えて、水を排除する液相も含
むことができる。このような付加的相の代表例には、グ
リセリン、綿実油、ゴマ油のような植物油及び水−油エ
マルジョンがある。

代表的固体キャリヤーには、丸薬又は錠剤の製造に通常
用いられる物質、コーンスターチ、ラクトース、リン酸
二カルシウム、トラガカントゴム及びメチルセルロース
Ｕ、Ｓ、Ｐ、のようなシックナー、微粉ＳｉＯ２、ポリ
ビニルピロリドン、ステアリン酸マグネシウム及びそれ
に類するものが含まれる。さらに、この固体キャリヤー
には、生分解性及び非生分解性ポリマー類、ポリペプチ
ドキャリヤー、ＡＦＦＩ−ＣＦ、Ｌ６０１　　（カルホ
ルニア、リッチモンド、バイオラドラボラトリーズ社か
ら市販のフェニルポロレート樹脂）のような親和性キャ
リヤー、リポソーム及び合成ポリマーなど当分野でよく
知られているものが含まれる。メチルパラベン及びプロ
ピルパラベン等のような酸化防止剤は、ショ糖又はテン
サイ糖、サッカリンナトリウム、チクロナトリウム及び
Ｇ、Ｄ、サール社から商標Ｎ０ＴＲＡＳＷＥＥＴ　（ア
スパルテーム）で販売されているジブペプチドアスパラ
ギン酸−フェニルアラニンメチルエステル甘味料などの
甘味料同様に固体及び液体組成物中に存在させることが
できる。

■、免疫促進の方法 白血球の免疫応答を増加する方法も考案されている。こ
の免疫応答は抗原特異的応答であることが好ましい。本
方法に従がい、リンパ球調製物、Ｂ細胞、Ｔ細胞、好中
球及びマクロファージなどの白血球を、水性媒体中、先
に述べた、免疫促進量のグアニンヌクレオシド誘導体を
含む組成物と、個別に、もしくは、−緒に接触させる。

この方法は、ヒト、マウス、ラット及びモルモットなど
の実験動物、又は、豚、午、牛、犬及び猫などの家畜及
びペットに対し、インビボで行うことができる。また、
この方法は、モノクローナル抗体産生のためのハイブリ
ドーマ培養におけるような細胞培養物に対し、インビト
ロでも行うことができる。

白血球を、水性媒体中、グアノシン誘導体自身が固体か
液体かにかかわらず、あるいは、その組成物の液体が水
性か否かにかかわらず接触させる。

インビボ法において、水性媒体は、少なくともその一部
が、血液やリンパ液の水から供給される。

インビトロ法において、水性媒体は、少なくともその一
部が、使用した培養培地から供給される。

組成物及び白血球の接触は、その接触を受ける細胞が、
その免疫応答の増加を示すのに十分な時間維持する。こ
の免疫促進は、それ自身、細胞増殖、抗体分泌増加、Ｔ
ヘルパー活性増加、Ｔ細胞及びマクロファージ由来のサ
イト力イン生産増加、好中球由来の酵素分泌及びそれに
類するものに表われてくる。

以後議論する特定の結果は、Ｔサプレッサー細胞が欠乏
したヒト末梢血液リンパ球及びネズミＢ細胞の好ましい
抗原特異的応答ばかりでなく、ネズミ牌細胞の非特異的
分裂促進的応答を示している。さらに、本発明の方法を
用いて達成することができる、例示的抗原特異的免疫増
強には、Ｔ細胞の増殖、ネズミ免疫不全Ｂ細胞における
一次免疫応答のインビトロ再構成、ネズミＢ細胞におけ
るＴ細胞置換活性及びネズミ抗体産生のインビボにおけ
る増加が含まれる。

インビボで使用する場合、一般に白血球と組成物の接触
はその動物が代謝、排泄又はその両プロセスで身体から
そのグアノシン誘導体を一掃するのに十分な時間維持す
る。この時間は免疫促進が表われるのに必要な時間より
も長くすることができる。−船釣に、個々の単位投与に
よる接触は、所定の化合物に対し、使用するキャリヤー
又はビヒクルに依存して時間のオーダーから、約１週間
かそれ以上の間維持される。免疫不全動物宿主に対して
は継続的接触が有効となりうる。

インビトロでの接触は、先に述べた免疫促進が標準的検
定技術で明らかになるまで維持することができる。この
ような維持時間は、一般に、約１日から約−週間、より
普通には約２日から約６日間を要する。

■、結果 本発明の化合物、組成物及び方法を使用した独特の結果
が得られた。そして、これらの結果は、しばしば、米国
特許第４，６４３，９９２号に述べられている化合物、
組成物及び方法を使用して得られた同様の結果と比較さ
れている。米国特許第４．６４３，９９２で使用してい
る化合物のいくつがは、比較の目的で、ここでも使用し
ている。これらの化合物は、８−メルカプトグアノシン
、７−メチル−８−オクソグアノシン及び８−ブロモグ
アノシンであり、それらはここで８　ＭＧｕｏ　７　ｍ
　８　ｏＧｕｏｓ及び８　ＢｒＧｕｏとそれぞれ略記さ
れる。

以下に議論している結果は特に断わらないかぎり本発明
の方法で用いている、本発明の組成物中の１つ又はそれ
以上の本発明の化合物を使用して得たものである。以後
、説明の簡潔さ及び簡便さのため、化合物のみでも、そ
の化合物は、本発明の組成物及び方法において使用され
ていることを意味している。

ここで活性を議論され、または比較されている、各所し
い化合物も、５桁の認識番号が与えられている。これら
の番号は、化合物の合成を説明している例の表題中にリ
ストされている。この５桁番号そして、または、例番号
は、これらの化合物を認識するため以下の表及び議論の
中で用いられている。

Ａ、８位置換グアノシンの活性 先に述べたように、種々の長さの千オニーチルを有する
、本発明のものではない、一連の８位置換グアノシンの
アジュバンティシティ及びマイトジェニシティーをテス
トした。その実験の結果を以下の第１表及び第２表に示
した。そこで裏全体を横切る線で各実験を区切っている
。

第１表 ３ｘｌＯ−’ ５２７±２５ １１．０００±１４０ 第２表 １．　マウス株由来のリンパ球細胞培養当りの、直接的
プラーク形成培養物で測定した、羊赤血球（Ｓ　ＲＢ　
Ｃ）に対するアジヱバンティシ１イー ２、　ヌクレオシドは、５桁番号で認識され、かつその
合成法を示した例番号がカッコ内に書かれている。

３、　白血球を接触させる水性媒体中の、リットル当り
のモル数で表わした、ヌクレオシドの濃度。

４、近交系マウスＣＢＡ／ＣａＪ又はＣ５７Ｂ　Ｌ　６
／Ｊ由来のリンパ球を用いた。

８ＭＧｕ。

フンドロー）Ｌ ヌクレオシドなし ４１、１００±３９０ ２１００±６０ ８ＭＧｕ。

コントロール １０−３２５２００±９５０ ヌクレオシドなし　　　　　　　２４００±９０１、細
胞培養当りの計数値（ｃｐｍ）を測定する、材料と方法
のセクションで議論している条件を使用した［’Ｈ″１
ＴｄＲ（）ＩＪチウムラベル化チミジンデオキシリボヌ
クレオシド）の取込みにより測定したマイドジエニシテ
ィー。標準偏差が第１表のように示されている。

２．３．第１表の脚注参照。

上記結果は、置換基の長さが増すにつれ、８位硫黄原子
が水素原子に結合している８　ＭＧｕｏと比較して、８
位置換グアノシン誘導体の活性が減少することを示して
いる。従って、８−（２−ブテニル）誘導体（２２４３
５）の抗原特異的アジュバンティシティーは、８−メル
カプト化合物（８ＭＧｕｏ）よりは少ないが、より長い
８−シンナミル誘導体（２２３５９）よりき大きい。８
−アリル誘導体（２２３００）は、示された濃度で、８
　ＭＧｕｏとほぼ等しいアジュバンティシティを有して
いた。同様の化合物に対するマイトジェニシティの結果
は、より長い８位置換基をもつものの活性はそれにつれ
て徐々に活性が低くなるという結果となる、より顕著な
傾向を示した。

Ｂ、必ずしも関連しないアジュバンティシティーとマイ
トジェニシティ 本発明の化合物、組成物及び方法は分裂促進性及びポリ
クローナルな応答及び第１及び第２表でその活性を示さ
れた化合物のアジュバンティシティの増加に有効である
。本化合物の分裂促進性及びアジュバント性は、マイト
ジェネシス及び、ポリクローナル応答はしばしば一致し
た結果を示すが、一方アシユパンテイシテイ−の結果が
頻繁に異なることから、少なくとも２つの異なる経路に
由来すると考えられている。例えば、グツドマン（Ｇｏ
ｏｄｍａｎ）等、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタ
ル・メディシ７　（Ｊ、　　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）、　
　１４７゜８００　（１９７８）及びマツキンタイヤ−
（Ｍｃｌｎｔｉｒｅ）等、ジャーナル・オプ・イムノロ
ジー〇、　１ｍ翔ｕｎｏ１．）＋１１７．６７４　（１
９７６）参照。い（つかの同様の差異が、米国特許第４
，６４３，９９２号で議論されている。

この活性の非共役性も、以下の第３表及び第４表の結果
に見ることができるように、ここで議論されているいく
つかの化合物に対しても示されている。

ヒト系におけるいくつかの７−ヘテロ原子置換炭化水素
−８−オクソグアノシン類の抗原特異的アジュバンティ
シティ１ 化合物２　　　濃度３ ＰＦＣ／培養 コントトル　　　　ヌクレオシＦなし　　　　　　１５
０８　＋　１２５１．２．３．　　第２表の脚注１．２
及び３参照。

１、　ヒトのリンパ球調製物を使用したこと以外は第１
表と同様の方法で実験を行った。

２．３．第１表の脚注２及び３参照。

第４表 上述の結果は、７−（３−ジメチルアミノ）プロピル−
８−オクソグアノシン（２２９４３）は、７−カルベラ
キシメチル−８−オクソグアノシン（２２９３５）と比
較されるように、ネズミ系において分裂促進性である（
第４表）ことを示している。しかし、アミン含有化合物
（２２９３４）は、同化合物をヒトリンパ球を用いてア
ジュバンティシティを試験した時（第３表）、コントロ
ール（ヌクレオシドなし、抗原あり）の１つで示される
ものとほぼ等しい活性を示した。

さらに上述の結果は、マイトジエニシティ及びアジュバ
ンティシティが必ずしも結合しておらず、また異なる経
路で進行しうろことを確認している。

また、これらの結果はアジュバンティシティーの欠除は
有用な構造要素、例えばグアノシン環、８−オクソ基及
びエチル基よりは長いが、デシル基より短かい、７位ヘ
テロ原子置換炭化水素ラジカルを含むが、ジメチルアミ
ノ基のため、生理的ｐＨ値でイオン電荷をもつ化合物に
よって示されていることを表わしている。

さらに、マウス系インビトロで、マイトジェニシティー
及びアジュハンティシティを示すことができるにもかか
わらず、ヒト系インビトロでは、アジュバンティシティ
ーのみしか観察されないことが、ここで議論した化合物
を用いて示されていることが注目される。

Ｃ，アジュバンティシティー実験 白血球源としてヒト及びネズミ白血球を用い、５ＲＢＣ
に対するアジュバンティシティーの多くの比較が、本発
明の範囲からはずれる新しい化合物の他に本発明の化合
物を用いて行なわれた。不幸なことに、達文系ヒト集団
はもちろんであるが、近文系マウス由来のリンパ球応答
においてさえも生ずる差異のため、これらの結果は互い
に正確に比較するのは、非常に難しい。むしろ、それら
は所定の実験内で、その実験で用いた化合物及び各実験
のコントロールを比較するのが最もよい。以後、第５表
及び第６表はピーク濃度における活性のみが各化合物に
ついて示されている、実験の代表的データを提供してい
る。各実験は、表を横切る水平線で互いに区切られてい
る。

第５表 ネズミ系におけるアジュバンティシティ実験１８ＢｒＧ
ｕ。

１０”３ ２４５０±３２５ ７ｍ８ｏＧｕ。

３ｘｌＯ−’ １８０９±３９ １．２．第１表の脚注１及び２参照。

３、報告されている値は所定の実験中、もっとも高い培
養当りのプラーク数を与える濃度。

ａ、ｂ、　　２回の実験（“ａ”及び“ｂ”）が行なわ
れ、　ａ”及び“ｂ”とラベルされた結果をそれぞれ与
えた。

上述の表の結果は、いくつかの特長を示している。第１
に一般に本発明の化合物は、米国特許第４．６４３，９
９２号で公開された化合物に比べより活性がある。この
活性の改善は、その特許の化合物で示されるものより、
ピークアジュバンテイシティが観察される濃度（ピーク
濃度）が、約０．５から１対数単位（１０倍）低いこと
、又は、所定のピーク濃度でのアジュバンテイシティが
有意に高い、通常中なくとも約１００パーセント増とな
ることに表われてくる。例えば、この改善されたアジュ
バンティシティは、３　ＢｒＧｕｏ及び７−（２−クロ
ロエチル）−８−オクソグアノシン（２４５９９）が培
養当り同数のプラーク数を与える際の再化合物を比較し
、そのクロロエチル誘導体は濃度が１．５対数単位（約
３０倍）より低い場合にその値を示すことで見ることが
できる。

７　ｍ　３　ｏＧｕｏ及び７−（２−ビトロキシ−３−
アジド）プロピル誘導体（２４６７０）に対する上述の
データは少なくとも２個の異常性を含んでいる。７　ｍ
　８　ｏＧｕｏのピークは、異常に低い濃度のようであ
るし、また、ＰＦＣ／培養値は通常観察される値よりも
いくぶん高いように思える。化合物２４６７０のＰＦＣ
／培養値もいくぶん低いようである。

また、第５表の結果は、本発明から除かれる新しくかつ
不明確な化合物について得られた納得できない結果を示
している。代表的な排除化合物には、生理的ｐＨ値でそ
の分子にイオン電荷が与えられる、７−　（２−（１−
ピペリジノ）エチル〕８−オクソグアノシン（２３０９
０）　、７−　（３−（３，４−ジメトキシフェニルア
ミノ）２−ヒドロキシ〕プロピルー８−オクソグアノシ
ン（２４３６４）　、７−　（３−（ジメチルアミノ）
プロピル）−８−オクソグアノシン（２２９４３）及び
７−カルポキシメチルー８−オクソグアノシン（２３６
４２）が含まれる。

後者の２つの化合物（２２９４３及び２３６４２）はネ
ズミ系において明らかに高いプラーク数を与えることが
注目される。しかし、それらの比較的高いプラーク数は
使用するには比較的高すぎる濃度（３Ｘ　１０−’モル
濃度）で提供され、そしてそれはおそらく、平衡して存
在するこれら分子の非イオン化部分によるものである。

さらに、第６表のデータから分るように、化合物２２９
４３はヒト系において、同様に比較的高い濃度で実質的
に不活性であった。

また、先に議論した化合物２４３６４同様、７（３−（
４−フルオロフェニル）ピペラジニル−２−ヒドロキシ
プロピル〕−８−オクソグアノシン（２４４５５）の結
果も注目される。これら２つの化合物の各々はデシル基
よりも長い、７位ヘテロ原子置換炭化水素置換基ラジカ
ルを含んでいる。また、これら２つの化合物は生理的ｐ
Ｈ値でイオン電荷を示すアミノ基も含んでいる。オクチ
ル基よりもわずかに長い、７−ヘテロ原子置換基ヲモつ
、７−〔２−ヒドロキシ−３−（フェニルチオ）プロピ
ルツー８−オクソグアノシン（２４３３１）は比較的少
量の活性を示した。

以下第６表で示した結果はマウスの白血球よりむしろヒ
トのリンパ球を用い、第５表と同様のものが得られた。

第６表 ヒト系におけるアジュバンティシティ実験１化合物２　
ピーク濃度　　　　直接的抗５ＲＢＣＰＦＣ／培養 １．２．３．　　第５表の１．２及び３の脚注参照。

ａ、ｂ、ｃ、　　ａ、　ｂ及びＣと命名した三人に由来
するリンパ球調製物に、７　ｍ　８　ｏＧｕｏを用いた
３種の実験に由来する代表的結果。それゆえ、化合物の
比較は、与えられたリンパ球調製物内で行う。

ａ”とラベルされた結果は、それ自身内で比較される。

ｂ”　　Ｃ”についても同様である。

再度、第６表の結果はヒト系において、７−メチル−８
−オクソグアノシンと間接的に比較した、本発明の化合
物の効率の増加を示している。再びこれらの結果は、生
理的ｐ）Ｉ値でイオン電荷を提供する化合物たとえば７
−（３−ジメチルアミノ）プロピル−８−オクソグアノ
シン（２２９４３）は、本発明の他の化合物と比較して
実質的に不活性であることを示している。

さらに、応答の強度及びその応答を生ずるのに必要な少
ない投与量の両方に関して、ヒト系において７　ｍ　８
　ｏＧｕｏ以上に本発明の化合物（２２９３５，２３７
５６及び２３８９０）の間接的であるが、非常に高いア
ジュバンティシティの増加は、その置換基長さがエチル
より長くデシル基より短かい、７位ヘテロ原子置換炭化
水素置換基使用の効果を示している。

また別のより好ましい化合物、すなわちＲ１がエチルよ
り長くデシルより短かい場合で、リボシル基が未置換の
場合の予期できない性質は、この投与一応答曲線は、７
　ｍ　８　ｏＧｕｏで得られる同様の曲線よりも、ピー
ク濃度付近でよりブロードであることである。このブロ
ードの応答は上述の単一値の表からは見てとることはで
きない。

相対的中の測定値はピーク濃度におけるＰＦＣ−０／培
養値とピーク値を生ずる濃度から０．５対数単位の濃度
のところの平均プラーク数（Ｐ　ｉ；’　Ｃ／培養）を
加えることにより得ることができる。このようにして得
た合計を、２（合計した値の数）で割って平均１／２対
数プラーク値を得る。

より特定して言うと、個々の平均プラーク値を選択し、
そして、５ＲＢＣのみ存在する場合のバックグランド値
をそれを合計する前に、各値から差し引き、“正味”の
値を得る。各正味の値を１ｍｌ培養物中に存在するヌク
レオシドのマイクロモル数で割り、ＰＦＣ／培養／マイ
クロモル値を得る。そのようにして得た、ピーク濃度値
及び隣り合う１／２対数対数値を含む２つの最大値を選
択し、加算してから２で割って、平均１／２対数／マイ
クロモル値を得る。

上述のような計算を、第６表の別の無関係な実験に対し
て行ったとき、本発明の化合物に対する平均１／２対数
プラ一ク／マイクロモル値は、７　ｍ　８　ｏＧｕｏの
値より非常に大きいことが分る。このように計算した値
を第７表に示す。同様の結果はネズミ系においても得ら
れている。

第７表 ヒト系における平均１／２対数プラ一ク値１化合物２　
　　　　　　値 ３００ｃ １、値は、第６表で示した結果の基になるデータを用い
て上述のように得た。

２、第１表の脚注２参照。

ａ、ｂ、ｃ、　　第６表参照。

第７表で示されている結果は、それらが別々の実験から
得られたものなので直接比較することばできないか、計
算値の差は、それらが有意であると考える程大きい。

投与一応答曲線は狭すぎるので、特定の受容体の適当な
投与ができない。例えば、第６表で示されているヒト系
のデータは、異なるリンパ球調製物を比較するとき、実
験した化合物のピーク濃度において３から１０倍（０，
５から１対数単位）はどの差を示している。もしこの投
与応答曲線が狭すぎる場合は、一般に受容者に用いる選
ばれた投与量は、特定の受容者には高すぎるか、又は低
すぎる。従って好ましい化合物のブロードな投与応答曲
線は、７　ｍ　８　ｏＧｕｏと比較してより存利となる
。

Ｄ、Ｔ細胞置換活性 本発明の組成物は、Ｔ依存抗原に対する抗体応答におい
てＴ細胞の代用として用いることができる。ここではモ
ノクローナル抗ｔｈＶ１．２＋補体による処理により、
インビトロで生ずるネズミのＢ細胞を種々の濃度で７位
ヘテロ原子置換炭化水素置換グアノシン誘導体を含む組
成物存在下、抗原としての５ＲＢＣ存在下、又は非存在
下で培養する。

このような条件下、本発明のグアノシン誘導体が補なわ
れない場合、単離したＢ細胞培養物は抗原に対してほと
んど応答を示さない。グアノシン仲介応答は、抗原依存
であるだけでなく、投与量依存でもある。従って、イン
ビトロでＢ細胞を、本発明の組成物と接触させることは
接触した細胞に対するＴ細胞様シグナルを提供する。

Ｅ、−成体液性免疫応答のインビトロ再構成ＣＢ　Ａ／
Ｎマウスは、Ｘ染色体性（Ｘ性）−次Ｂ細胞免疫不全性
を有しており、それにより、性染色体性免疫不全に対す
るネズミのモデルを提供することができる。ＣＢ　Ａ／
Ｎ株は、Ｌｙｂ３１５／７抗原を有する成熟７３１Ｊン
パ球の亜集団の機能活性に欠陥があると考えられている
。ツーバー（）ｌｕｂｅｒ）等、ジャーナル・オブ・エ
クスペリメンタル・メディシン（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅ
ｄ、）、　　１４５．１（１９７７）、アーメド（Ａｈ
ｍｅｄ）等、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシン（Ｊ、　Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、）、　　１４５、ｌｏｔ　　（１９７７）、及
びスバロ（Ｓｕｂｂａｒｏ）　、ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　１２２．２２
７９　（１９７９）参照。

雄及び雌の同型接合性ＣＢ　Ａ／Ｎマウス及びｘｉｄ遺
伝子と呼ばれる、ＣＢ　Ａ／Ｎ遺伝子に対する異型接合
性の雄マウス（雄マウスはＸ染色体を有している）由来
の肺細胞の培養物を、材料と方法のセクションで述べら
れているように調製する。

０、１パーセント（ｖ／ｖ）ＳＲＢＣサスペンションの
み、あるいは、段階的量の本発明のグアノシンをプラス
した５ＲＢＳサスペンション０．１ミリリツトルを５Ｘ
１０６細胞／ｍｌの培養物に添加する。培養４日後、培
養当りの直接的抗５ＲＢＣプラーク形成培養物を検定す
る。

免疫能保有ＣＢＡ／ＣａＪマウス由来の肺細胞の同様の
調製物を用いて、グアノシン誘導体濃度ゼロで、免疫能
保有ＣＢＡ／ＣａＪ細胞に対する正のＰＦＣ／培養応答
と比較して、ＣＢ　Ａ／Ｎ細胞に対しては、実質的に応
答はなかった。

グアノシン誘導体濃度約１０−’−１０−’モル濃度で
、免疫能保有ＣＢＡ／ＣａＪ細胞及び本来免疫不全ＣＢ
　Ａ／Ｎ細胞の両方とも有意なＰＦＣ／培養値を与える
ことができる。従ってＸ染色体性免疫不全肺細胞を本発
明の組成物に接触させることで、その免疫不全細胞の５
ＲＢＣに対する一次体液性免疫応答を再構成することが
できる。

他の動物同様マウスの免疫不全は、先に議論した遺伝的
欠陥同様、老令又は老化から生ずることもありうる。従
って、若年又は成人の時に免疫能保有の動物が老年とな
ったときに免疫不全となることがある。これは近交系マ
ウスＣＢＡ／ＣａＪ株の場合である。

ざらに、５ＲＢＣに対する一次体液性抗体応答の再構成
の研究を老令により免疫不全となった、老化した退会１
５６のＣＢＡ／ＣａＪマウス由来の肺細胞を用いて行っ
た。プラーク形成検定で示した５ＲＢＣに対するこれら
の肺細胞のインビトロでの応答を、健康で成熟した退会
８のＣＢΔ／ＣａＪマウスのグループ由来の細胞の同様
な応答と比較した。

５ＲＢＣを含むがグアノシン誘導体を含まない場合の健
康で成熟したマウスコントロールに対するＰＦＣ／培養
の値は５ＲＢＣ及びグアノシン両方を含まない場合の値
の数倍である。老化マウスに対するコントロールのＰＦ
Ｃ／培養の値は両コントロールのものとほぼ等しくまた
、健康で成熟したものと比較すると高い値であった。こ
れらの相対的に高い、及び同様の応答は、自己抗体産生
クローンの形成によるものと考えられる。

５ＲＢＣに対するグアノシン誘導体投与関連応答も観察
される。この応答は、免疫不全健康成熟肺細胞及び以前
に免疫不全であったが、現在−成体液性応答が再構成し
た老化肺細胞の両方に観察される。それによりこれらの
結果は、免疫不全老化肺細胞の本発明の組成物との接触
はこの免疫応答不全を再構成することができる。

Ｆ、インビボ抗体応答 ＣＢＡ／ＣａＪマウスを０．２８モル濃度のカコジル酸
バッファ　（ｐＨ６，９）中、２．４６−トリニトロベ
ンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）及びウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）を反応させることにより合成する結合体（Ｔ
ＮＰ−ＢＳＡ）を用いて腹腔的注射（ｉ、　　ｐ、　）
により免疫化する。各動物は免疫化結合体５０マイクロ
グラム（μｇ）を含む腹腔内（ｉ、　　ｐ、　）注射を
受ける。その後、■グループのマウスは（３０分以内）
に１００パーセントゴマ油又は、食塩水と超音波処理し
た２パーセントのゴマ油を含む水性組成物中、本発明の
グアノシン誘導体を含む別のｉ、　　ｐ、注射を受ける
。

各々の動物は、グアノシン誘導体濃度が５ｍｇ／ｍβで
ある組成物からグアノシン誘導体０．２ｍｌを受ける。

第３のマウスのグループは、免疫化は受けるが本発明の
組成物は受けず、コントロールとして使われる。その後
各グループからの抗ＴＮＰ−ＢＳＡ抗体分泌を抗原とし
てＴＮＰ−ＢＳＡを用いた標準的酵素結合免疫吸着検定
法（ＥＬＩＳＡ）により約３０日間に渡ってモニターす
る。

この実験の結果は、本発明のグアノシン誘導体を受けた
動物はグアノシン誘導体を受けない動物に比べ抗ＴＮＰ
−ＢＳＡ抗体値が増加していることを示している。

この発明を一般的に説明してきたので、以下に示す説明
を目的として提供される合成及び操作を参考にしてより
明確な理解を得ることができる。

■、材料及び方法 Ａ１合成 例１．７位ヘテロ原子置換炭化水素−８−オクソグアノ
シンの合成の一般的操作 １−アミノ−８−オクソグアノシン（以後化合物Ａ）は
２ステップ操作を用いるいくつかの合成において出発物
質として使用した。この物質は基本的にリズカラ（Ｒｉ
ｚｋａｌｌａ）等（バイオヒム・バイオフィズ・アクタ
（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ）。

１９５．２８５−２９３　　（１９６９））の方法によ
り合成した。

ステップ１ ジメチルホルムアミド（ＤＮＦ）に熔かした化合物ＡＣ
９，５グラム（ｇ）、３０ミ、リモル濃度（ｍＭ）溶液
に、ソディウム・メトキシドのＤＭＦ溶液（３３ｍＭ）
２５０ミリリツトルを加えた。

この反応混合物を３０分間、室温（約１８〜２２℃）で
攪拌した。化合物Ａよりわずかにモル過剰量（例えば３
３ｍＭ対３０ｍＭ）の７位置換基を形成するのに用いる
アルキル化剤を含むＤＭＦ溶液（１０ｍ１）を加え、さ
らにこのアルキル化反応混合物を約２０〜約４０℃の温
度で約１６時間攪拌した。

その後、この溶媒を減圧下で除き、その残金を蒸留水又
は脱イオン水（１５０ｍＡ）及び塩化メチレン（１５０
ｍＡ）で処理した。得た固体を濾過し、適当な溶媒から
再結晶して１−アミノ−７−置換−８−オクソグアノシ
ンを得て、これで通常用いられている２ステップ合成操
作の“ステップ１”を完了する。

ステップ２ その後、ステップｌの産物を、濃１（Ｃｊ’に溶かしく
例えば１５ｍ　ｌ　ＨＣＩｌ中４．６５　ｍＭ）　、こ
の溶液に亜硝酸ナトリウム水溶液（例えば、５ＩＩ１１
水中、４．１９ｍＭ）を０℃で添加した後、約１時間攪
拌する。生成した脱アミノ産物は、特に断わらないかぎ
り、標準的再結晶技術により得た。

上述の２ステツプ法及びその他の方法を用いた特定の代
表的化合物の合成は、その他のものの合成と同様に以下
に公開する。

例２７−カルベンキシ−８−オクソグアノシン表題化合
物を、ステップ１のアルキル化剤として、エチルブロモ
アセテートを用いた例１の２ステップ操作に従って合成
し、ｍｐ１６７〜１７２℃の白色粉末として、対応する
１−アミノ化合物から１０パーセントの収率で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ）　＋　１０．９　（ｂｓ、　Ｌ
Ｈ）　；　　６．５　（ｂｓ。

２Ｈ）　；　　５．６　（ｄ、　Ｊ＝５　Ｈｚ、　１Ｎ
）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６８０．１６２０及び１４２
０ｃｍ−’。

Ｃ１４旧９Ｎ、０．−１／２Ｈ２０から゛計算した理論
値Ｃ，４２，６４；　　Ｈ，５，１１；　　Ｎ、　１７
．７６実験値 Ｃ，４２，４４，Ｈ，４，７１；　　Ｎ、　１７．７３
上述の反応中、エチルブロモアセテートの、２−クロロ
アセトアミド又はＮ−炭化水素又はＮ−アルカノー′し
置換２−クロロアセトアミドでの置換えは、対応する７
−カルボキサミドメチル−８オクゾグアノシン（又は、
一般式（：０ＮＲ５Ｒ’　（式中Ｒ５及びＲ６は先に説
明したもの）で表わされるカルボキサミド基を有する、
対応する置換アミド）を提供する。

同様に、エチルブロモアセテートの、２−ブロモエチル
メチルエーテル又は、２−ブロモエチルフェニルエーテ
ル（β−プロモフエネトール）のような適当なへロエー
テルによる置換は、各々、対応する７−メドキシエチル
及びフェノキシエチル誘導体を提供する。

例３　７−カルポキシメチルー８−オクソグアノシン（
２３６４２） ７−カルベンキシメチル−８−オクソグアノシ（１ｇ、
　２．６ｍＭ　Ｈ例２）、メタノール（５ｍＩｌ）及び
Ｉ　Ｎ　Ｎａ０１１　（５ｍｌ）の混合物を窒素雰囲気
下、室温で４時間撹拌した。大部分のメタノールを減圧
下で除去した後、その残金を水（５０＋ｙ＋ｊりととも
に加熱した。この溶液を０℃でＩＮＨＣ，ｆ！を用いｐ
’Ｈ５まで酸性化した。この反応産物は分取用のＣ−１
８カラムによる逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
　Ｌ　Ｃ）を用いて精製し、ｍｐ２３０℃以上、白色粉
末として、３１パーセントの収率で表題化合物が得られ
た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）　　：δ１０．９　（ｂｓ、
　１）１）　；　　６．５　（ｂｓ。

２）１）　　５．６　（ｄ、　Ｊ＝５　Ｈｚ、　ＩＩＩ
）　；　　４．４　（ｂｓ、　２Ｈ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）：　　１６４０．１６００及び１４６０
ｃｍ−’Ｃ，□Ｈ＋５ＮｓＯｅから計算した理論値Ｃ，
４０，３４；　　１１．４．２３；　　Ｎ、　１９．６
０実験値 Ｃ，３５，７１；　　＋＋、　３．５２；　　Ｎ、　１
７．３７例４　　７−（３−（ジメチルアミノ）プロピ
ルツー８−オキソグアノシン−塩酸塩 二水和物（２２９４３） アルキル化剤として、３−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノプロ
ピルクロライド塩酸塩を用い、塩基として炭酸カリウム
を用い、及び脱アミノ化産物を２プロパツ一ル中等モル
量のＨＣｌで処理する、例１の２ステップ操作に従った
。表題化合物はｍｐ１８０℃（分解）、白色粉末として
１−アミノ化合物から４０パーセントの収率で回収され
た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）　　：δ２．７　（Ｓ、　６
Ｈ）　；　　５．５７　（ｄ。

Ｊ＝５　Ｈｚ、　ＬＨ）　；　　６．９１　（ｂｓ、　
２Ｈ）　；　　１０．７０　（ｂｓ、　ＩＨ）：１１．
３１　（ｂｓ、　ＩＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　　：　１６７０．１６２５及び１５９
０ｃｍ−’［：、、Ｈ，、ＬＯｓ−ＨＣ１’　−２８２
０から計算した理論値Ｃ，３９，４３：　　Ｈ，６，４
０；　　Ｎ、　１８．４０実験値 Ｃ，３９，３１；　　Ｈ，６，１５；　　Ｎ、　１８．
０７例５　　７−［：２−（ピペリジノ）エチル〕−８
−オクソグアノシンー塩酸塩−水 和物（２３０９０） アルキル化剤として２−ピペリジノエチルクロライドを
用いること以外、例４の操作に従がい、表題化合物を、
ｍｐ１５７℃（分解）淡黄色粉末として、■−アミノ化
合物から３４パーセントの収率で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）　：δ６，６５　（ｂｓ、　
２Ｈ）　：　　９．９７（ｂｒ、　１ｔｌ）　；　１１
．２２　（ｂｓ、　１ｔｌ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１７００．１６７０．１６２０
及び１５９０ｃｍ−’Ｃ＋　ＪｌｚｂＮｂＯｂ　　ＩＩ
ｃ　Ｉ　　ＨｚＯから計算した理論値Ｃ，４３，９２；
　　Ｈ，６，２９；　　Ｎ、　１８．０８実験値 Ｃ，４３，９９；　　Ｈ，６，３９；　　Ｎ、　１７．
９３例６　　８−（２−プロペニルメルカプト）グアノ
シン（２２３００） アリルプロミド（８ｇ、６３．５ｍＭ）を、８−チオク
ツグアノシン（８ＭＧｎｏ、　　２０　ｇ、６３．５ｍ
Ｍ）及び炭酸カリウム（ｌ　Ｏｇ、７２ｍＭ）のジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）（３００ｍ１）溶液に加え、
この混合物を４５℃に加熱し、９０分間攪拌した。

その後、この混合物を室温まで冷却し、ジエチルエーテ
ル（１，４１）及び酢酸（５ｍｊりの溶液中に注いだ。

生成した固体を濾過し、水（２５０ｍｌ）、アセトン（
２００ｍＡ）及びジエチルエーテルで洗浄した後、６０
℃のオーブンで乾燥して表題のチオエーテル（１４，７
ｇ、６７バーセント収率）を、ｍｐ２２５℃（分解）白
色粉末とじて得た。

Ｃ＋３Ｈ＋ＪｓＯｓＳから計算した理論値Ｃ，４３，９
３；　　Ｈ，４，８２；　　Ｎ、　１９．７１実験値 Ｃ，４４，１０；　　Ｈ，４，８２；　　Ｎ、　１９．
６９例７　　８−（２−ブテニルメルカプト）グアノシ
ン（２２４３５） アリルプロミドの代りに２−ブテニルクロリドを用いる
こと以外、８−（２−プロペニルメルカプト）グアノシ
ンの合成のための上述の操作に従って、表題化合物を、
ｍｐ　２１０℃（分解）、白色粉末として、４８パーセ
ント収率で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）　　：δ６．３　（ｂｓ、　
２Ｈ）　；　　５．６　（ｄ。

Ｊ＝５　Ｈｚ、　１Ｂ）、　１．６　（ｄ、　Ｊ＝６　
Ｈｚ、　３８）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６９０．１６３０．１６００
．１５１０及び１３６５　ｃｍ　− Ｃ＋３Ｈ＋ＪｓＯｓＳから計算した理論値Ｃ，４５，５
２；　　Ｈ，５，１８ｉ　　Ｎ、　１８．９６実験値 Ｃ，４５，３８；　　Ｈ，５，３２；　　Ｎ、　１８．
７９例８　　８−（シンナミルメルカプト）グアノシン
（２２３５９） アリルプロミドの代りにシンナミルプロミドを用いる以
外は、８−　（２−プロペニルメルカプト）グアノシン
（例６）の合成操作に従がい、表題化合物を、ｍｐ−１
７２℃（分解）、にぶい白色粉末として、３３パーセン
トの収率で得た。

Ｎｌ、ＩＲ（ＤＭＳＯ−ｄＢ）　　：δ７．２５　（ｂ
ｒ、　５Ｈ）　：　　６．７−６．２（ｍ、　４Ｈ）　
；　　５，７　（ｄ、　Ｊ＝５　Ｈｚ、　ＬＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６９０．１６４０及び１６０
０　ｃｍ−’Ｃ，，ｌＨ２，Ｎ５０．Ｓから計算した理
論値Ｃ，５２，８９：　　Ｈ，２，９１；　　Ｎ、　１
６．２３実験値 Ｃ，５３，２６；　　Ｈ，４，９０，Ｎ、　１６．０８
例９　１−アミノ−？−（２，３−エポキシプロピル）
−８−オクソグアノシン アルキル化剤としてエビブロモヒドリンを用い、例１の
ステップ１の一般的操作に従がい、粗生成物として表題
化合物を得た。精製は行なわなかった。

例１０　７−（２−ヒドロキシ−３−（フェニルチオ）
プロピル〕−８−オクソグアノシン半水和物（２４３３
１） ＤＭＦ　（１５０ｍｊ２）中、例９の粗生成物（３ｇ、
５．４ｍＭ）及びチオフェノール（５ｇ、４５．４ｍ　
Ｍ　）の混合物を、８０℃の湯浴中、４時間加熱した。

冷却、大部分の溶媒の減圧除去、残渣の水への溶解及び
分取用逆相ＨＰＬＣ（Ｃ−１８）による精製の後、表題
化合物のＩ−アミン誘導体が、ｍｐ１３５〜１３７℃の
にぷい白色粉末として、収率５２パーセントで得られた
。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３　（ｍ、　５１１
）　；　　７．１５　（ｂｓ。

２Ｈ）、　５．６　（ｄ、　Ｊ＝５　Ｈ２，ＩＨ）　；
　　５．３５　（ｓ、　２）１）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１７００及び１５８０ｃｍ−’
上で合成したＩ−アミノ誘導体を用い、例１のステップ
２の脱アミン化操作に従がい、表題化合物を、ｍｐｌ　
８０〜１８２℃褐色固体として、４５パーセントの収率
で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３　（ｂｓ、　５Ｈ
）　；　　５．６（ｂｓ、　２Ｈ）　；　　５．７　（
ｄ、　Ｊ＝５　Ｈｚ、　１８）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６９０．１６３５．１６００
及び１１００ｃｍ−’Ｃｌ９Ｈ２３ＮＳＯ７Ｓ　　１／
２Ｈ２０から計算した理論値Ｃ，４８，０９；　　１１
．５．１０；　　Ｎ、　１４．７６実験値 Ｃ，４８，１６ｉ　　Ｈ，５，１１；　　Ｎ、　１５．
０４例ＩＩ　　７−　（３−（３，４−ジメトキシフェ
ネチルアミノ）−２−ヒドロキシ〕プロピルー８−オク
ソグアノシンー塩酸塩−水和物（２４３６４） チオフェノールの代りに３．４−ジメトキシフェネチル
アミンを用いることにより、例１０の１アミノ誘導体と
同様の方法で、１−アミノ−７−（３−（３，４−ジメ
トキシフェネチルアミノ）−２−ヒドロキシプロピルク
ー８−オクソグアノシン（２４３３０）を合成した。こ
の１−アミノ誘導体は、ｍｐ　１５６〜１５８℃、にぶ
い白色粉末として、４０パーセントの収率で合成された
。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｂ）：δ７．０　（ｂｓ、　３１
１）　；　６．９−６．４（ｍ、　３１１）　；　　５
．３　（ｓ、　２８）　；　　３．７　（ｓ、　６１１
）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６７０．１６１５及び１５８
０ｃｍ−’上で合成した１−アミノ誘導体を用い、例１
（及び例１０）のステップ２の脱アミノ操作に従がい、
表題化合物を、ｍｐ　１６３〜１７０　（分解）、淡褐
色粉末として、５５パーセントの収率で合成した。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）　　：δ８．９　（ｂｒ、　
ＬＩＤ　；　　６．８（Ｍ、　５Ｈ）　；　　５．６　
（ｄ、　Ｊ・５　）１ｚ、　ＩＨ）　；　　５．５９及
び５．６２　（両ｓ、　３Ｈ各々）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６８０．１６４０．１６００
及び１０３１０３Ｏ’Ｃ２３Ｈ３□Ｎ、０９−　ＨＣＮ
　−１１ｚｏから計算した理論値Ｃ，４６，７４；　　
Ｈ，５，９７，Ｎ、　１４．２２実験値 Ｃ，４６，８５；　　Ｈ，６，０１；　　Ｎ、　１４．
２５例１２　７−（３−アジド−２−ヒドロキシプロピ
ル）−８−オクソグアノシン−水和物例１０及び例１１
の操作に従がい、例９の粗エポキシドとアジ化ナトリウ
ムを反応させることにより、１−アミノ−７−（３−ア
ジド−２−ヒドロキシプロピル）−８−オクソグアノシ
ン（２４３３２）を合成した。その１−アミノ誘導体は
、ｍｐ１８０〜１８２℃（分解）、白色結晶として、３
５パーセント収率で合成された。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．１　（ｂｓ、　２１
１）　；　５．６（ｄ。

Ｊ・５　Ｈｚ、　ＩＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　　：　　２１４０．１６９０及び１５
５０ｃｍ−’すぐ上で述べた１−アミノ誘導体（２４３
３２）を用い、例１　（及び例１０及び例１１）のステ
ップ２の脱アミノ化反応操作に従がい、表題化合物を得
た。この表題化合物は、ｍｐ１３８〜１４１℃（分解）
、にぶい白色粉末として、３０パーセント収率で得られ
た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）　：δ６．４　（ｂｓ、　２
Ｈ）　；　　５．６（ｄ。

Ｊ＝５　Ｈｚ、　ＬＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　３６００−３０００．２１１０
．１６９０及び１６００ｃｍ−’ Ｃｌ５Ｈ１８Ｎ１１０７　　ＬＯから計算した理論値Ｃ
，３７，５０、Ｈ，４，４８；　　Ｎ、　２６．９１実
験値 Ｃ，３８，０６；　　Ｈ，４，７９；　　Ｎ、　２６．
６７例１３　７−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−
８−オクソグアノシンー永和物 例１０〜１２の操作に従がい、例９の粗エポキシドと水
を反応させることにより、１−アミノ−７−（２，３−
ジヒドロキシプロピル）−８−オクソグアノシン（２４
４５７）を合成した。この１−アミノ誘導体は、ｍｐ　
２１０〜２１２℃（分解）、にぶい白色粉末として、５
５パーセントの収率で得られた。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：δ６．９　（ｂｓ、　２
Ｈ）　；　　５．５５（ｄ。

Ｊ＝４．５　Ｈｚ、　ＬＨ）、　５．３　（ｂｓ、　２
Ｈ）ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１７００．１６７０及び１
６００ｃｍ−表題化合物は、直前に述べた１−アミノ誘
導体（２４４５７）を用い、例１　（及び例１Ｏ〜１２
）のステップ２の脱アミノ化反応操作に従がって得られ
た。この表題化合物は、ｍｐｌ　９５〜１９６℃、白色
粉末として、３５パーセントの収率で得られた。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｉ）　：δ　１０．７　（ｂｓ、
　１ｌｌ）　’；　　６．５（ｂｓ。

２Ｈ）　；　　５．６　　（ｄ、　　Ｊ・５　Ｈｚ、　
　ＩＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６８０．１６４０及び１６６
０ｃｍ−’Ｃ＋　：＋Ｌ　９ＮＳＯ８Ｉｔ□０から計算
した理論値Ｃ，３９，９０、Ｈ，５，４１ｉ　　Ｎ、　
１７．９０実験値 Ｃ，３９，６７、Ｈ，５，３２；　　Ｎ、　１７．５２
例１４　７−　（３−［４−（４−フルオロフェニル）
ピペラジニル〕−２−ヒドロキシプロピル〕−８−オク
ソグアノシン半水和物（２４４５５） この表題化合物は、例１０〜１３の操作に従がい、４−
（４−フルオロフェニル）ピペラジンと例９の粗エポキ
シドを反応させ、ついで生成した７−ヘテロ原子置換炭
化水素−１−アミノ誘導体を、例１Ｏ〜１３で議論され
ているように脱アミノ化することにより合成した。この
表題化合物は、ｍｐ　１７３〜１８１℃白色粉末として
、総酸率２５パーセントで得られた。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：δ６．８−７．１　（ｍ
、　４Ｈ）　　；　　６．３（ｂｓ、　２８）　；　　
５．２　（ｄ、　Ｊ＝５１１ｚ、　１ｌｌ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６９０．１６００及び１３９
０ｃｍ−’Ｃ２３）１３０ＦＮ７０７１／２Ｈ２０から
計算した理論値Ｃ，５０，７３；　　Ｈ，５，７４；　
　Ｎ、　　１８．００実験値 Ｃ，・５０．９４；　　Ｈ，５，７６；　　Ｎ、　１７
．７４例１５７−Ｃ２−（４−クロロフェニル）−２オ
クソエチル〕−８−オクソグアノシ ン（２３８８０） アルキル化剤として、２−ブロモ−４′−クロロアセト
フェノンを用いた、例１の２ステップ操作に従がい、表
題化合物を、ｍｐ２３０℃以上、淡褐色粉末として、３
５パーセントの収率で得うれた。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：δ　１０，７　（ｂｓ、
　ＬＨ）　　；　　８．１（ｄ。

Ｊ＝１０　Ｈｚ、　２Ｈ）、　７．７　（ｄ、　Ｊ＝１
０　Ｈｚ、　２８）、　６．５　（ｂｓ。

２Ｈ）　；　　５．６　（ｄ、　Ｊ＝５　ｆｉｚ、　Ｉ
Ｈ）、　５Ｊ　（ｓ、　２Ｈ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１７００．１６８０及び１６３
０ｃｍ−Ｃ，、Ｈ，、ＣＩ　Ｎ、０．から計算した理論
値Ｃ，４７，８５；　　Ｈ，４，０２；　　Ｎ、　１５
．５０実験値 Ｃ，４７，３２；　　）Ｉ、　　３．９８；　　Ｎ、　
　１５．４０例１６　７−（４−ニトロベンジル）−８
−オクソグアノシン（２３７５６） アルキル化剤として、４−ニトロベンジルプロミドを用
いて、例１の２ステップ操作に従がい、表題化合物を、
ｍｐ　２３０℃以上、黄色粉末として、１０パーセント
の収率で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）　：δ１０．８　（ｂｓ、　
ＩＨ）　；　　８．３（ｄ。

Ｊ＝１０　Ｈｚ、　２Ｈ）；　７．６　（ｄ、　Ｊ＝１
０　Ｈｚ、　２Ｈ）、　６．５　（ｂｓ。

２１（）　；　　５．６　（ｄ、　Ｊ・５　ｔ（ｚ、　
１１（）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　　：　　１６８０．１６４０．１６０
０及び１５２０ｃｍ−’Ｃｌ７ＨＩｌｌＮｌ、０１１　
１／２Ｈ２０から計算した理論値Ｃ，４６，１１；　　
Ｈ，４，３２；　　Ｎ、　１８．９８実験値 Ｃ，４６，４８；　　Ｈ，４，０４；　　Ｎ、　１８．
７２例１７　７−（４−メトキシベンジル）−８−オク
ソグアノシン（２３８９０） アルキル化剤として４−メトキシベンジルクロリドを用
いて、例１の２ステップ操作に従がい、表題化合物を、
ｍｐ２３０℃以上、ベージュ色粉末として、７パーセン
ト収率で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）　：δ　１０．８　（ｂｓ、
　ＬＨ）　；　　７．２（ｄ。

Ｊ４０　Ｈｚ、　２Ｈ）、　　６．８　（ｄ、　Ｊ＝ｌ
Ｏ）＋２．２）１）、　６．４（ｂｓ。

２Ｈ）；　５，５　（ｄ、　Ｊ＝５　Ｈｚ、　ＬＨ）、
　３．７　（ｓ、　３ｔｌ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６７０．１６００．１５１０
．１４５０及び１２５０ｃｍ−’ Ｃ，、Ｎ２．ＬＯｆｆ−１／２８．０から計算した理論
値Ｃ，５０，４７；　　Ｈ，５，１８；　　Ｎ、　１６
．３５実験値 Ｃ，５０，８５；　　Ｈ，５，１２；　　Ｎ、　１６．
２０例１８　７−（２−クロロエチル）−８−オクソグ
アノシン（２４５９９＞ 表題化合物は、アルキル化剤として、クロロエチルプロ
ミドを用いた、例１の一般的な２ステップ合成に従がい
、ｍｐ　１９２℃（分解）、にぶい白色粉末として、収
率２７パーセントで得た。

ＮＭＲ（ＯＭＳＯ−ｄ、）　：δ　（ｂｒ、　ＩＨ）　
；　　６．９　（ｂｓ、　２Ｈ）；５．８　（ｄ、　Ｊ
＝５　Ｈｚ、　ＩＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１６８０及び１６４０ｃｍ−’
ＣＩ□旧６ＣＩ　Ｎ、０．−３／２１１２０から計算し
た理論値Ｃ，３７，０７；　　Ｈ，４，９３；　　Ｎ、
　　１８．０２実験値 Ｃ，３６，６５；　　Ｈ，４，６７；　　Ｎ、　１８．
１８例１９７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−セレノク
ツグアノシン誘導体 ７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−セレノクツグアノシ
ン誘導体は、先にその合成を論議した、適当に保・護し
た、対応する７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−チオク
ツ誘導体から合成した。従って、７−ヘテロ原子置換炭
化水素−８−チオクツグアノシンを、ＤＭＳＯのような
溶媒中、ヨウ化メチルのようなＳ−アルキル化剤と反応
させる。

それからこのようにして得られたＳ−アルキル化産物を
セレン化ナトリウムと反応させ、７−ヘテロ原子置換炭
化水素−８−セレノクツグアノシン誘導体を生成する。

それから、この目産産物は、逆相ＨＰＬＣにより、この
反応混合物から得ることができる。

例２０　７−（２−アリル）−８−チオクツグアノシン
（２２４４４） 表題化合物は、転位操作を用い、８−（２−プロペニル
メルカプト）グアノシン（２２３００；例６）から合成
した。

ビストリメチルシリルアセトアミド（７２ｇ。

３５４、７　ｍＭ）を、クロロホルム中（５００ｍｆｆ
）、出発物質としての８−（２−プロペニルメルカプト
）−グアノシンのサスペンション（２０ｇ。

５６．３ｍＭ）に添加し、この混合物をＮ２雰囲気下、
１６時間還流した。冷却後、溶媒の大部分を減圧下で除
去し、その残香を減圧下で、６時間、４０℃に保温した
。

この油状残香をテトラヒドロフラン（５００ｍＭ）　、
ＰｄＣｊ！ｚ　　（１０，３ｇ、５８．３ｍＭ）及びベ
ンゾニトリル（１２，１ｇ、１１７ｍＭ）と混合し、生
成した混合物をＮｔ雰囲気下、３時間還流した。

その後、この混合物を室温まで冷やし、さらにピリジン
（２５ｍ１）を加えて、−晩（約１６時間）攪拌した。

この混合物をシリカゲルに通して濾過し、ついで塩化メ
チレン（２Ｘ　３００＋＋１１）を用いて洗浄した。合
せた濾液を減圧下で濃縮し、その残香を水、メタノール
及び酢酸の混合物（５００ｍｌ、１０：１０：１）と混
合して、さらに約１６時間攪拌した。

添加した溶媒の大部分を減圧下で除去し、その残香をＤ
ＭＦ（ＩＮ）に溶解してから、活性炭で処理した。この
ようにして得たサスペンションを、セライト床を通して
濾過し、その濾液を減圧下で濃縮した。この残香をメタ
ノールで処理し、生成した固体を濾過し、アセトンで洗
浄してから、６０°Ｃのオーブンで乾燥してから、ｍｐ
　２３０℃以上のにぷい白色粉末として、７−アリル−
８−チオクツグアノシン（８，５ｇ、収率４２，５パー
セント）を得た。

）ＪＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：δ５．９０　（ｍｔ　
ＩＨ）　；　　６．３２（ｄ。

Ｊ＝５　Ｈｚ、　１）１）；　６．５６　（ｂｓ、　２
ｔ（）；　１０．６０　（ｂｓ、　１旧。

ＩＲ（ＫＢｒ）　：　　１７００．１６３５．１６０５
及び１４５０ｃｍ−’Ｃｌ５ＨＩ７ＮＳＯ５Ｓから計算
した理論値Ｃ，４３，９３；　　Ｈ，４，８２；　　Ｎ
、　１９．７１実験値 Ｃ，４３，９６；　Ｈ，４，８７，Ｎ、　１９．６２例
２１７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−ジアミノイミノ
−グアノシン誘導体 これら誘導体の出発物質として、対応する７−ヘテロ原
子置換炭化水素−８−チオクツグアノシン誘導体を使用
する。典型的合成においては、ジメチルスルホキシド（
ＤＭＳＯ）に溶かした２８ｍＭの原料チオクツグアノシ
ンに、ヨウ化メチル（４２ｎ＋Ｍ）を添加する。この添
加は、室温及び窒素雰囲気下で行なう。生じた混合物を
約３時間攪拌してから、約０℃に冷却する。これにシア
ナミド（約５７ｍＭ）を加え、つづいて水素化ナトリウ
ム（６０％油サスペンション、５ｍＭ）を加える。この
反応混合物を室温まで温め、約１時間攪拌する。

その後、この反応混合物を約１．５リツトルのジエチル
エーテルに注ぎ、約１０分間攪拌する。このエーテル層
をデカンテーションし、残留分をさらに約５　Ｏｎ＋ｊ
！の酢酸を含む１．５リツトルのジエチルエーテルで抽
出する。このエーテル層を再びデカンテーションし、そ
の残留分を水に溶解する（約５００ｍｊ２）。目的とす
る化合物は、その水層から、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ−１８）
を用いて精製する。

例２２　　低級アルキリデンジオキシ誘導棒先の述べた
化合物の１つの低級アルキリデンジオキシ誘導体は、次
に示すイソプロピリデン誘導体の合成で例示される。

７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−オフソグアノシン（
１７ｍＭ）　、２．　２−ジメトキシプロパン（４１ｍ
Ｍ）　、アセトン（２００ｍｌ及び濃硫酸（１０滴）の
混合物を、室温でＮ２雰囲気下、５２時間攪拌する。こ
の混合物をＯ′Ｃまで冷やしてから濃アンモニア水（５
ｍｎ）で処理する。液体の大部分を減圧下で除去し、生
成した固体を濾過する。この濾過した固体を水、アセト
ン及びジエチルエーテルで洗浄してから、６０℃の真空
オーブンで乾燥し、目的の誘導体を得る。同様の操作を
、８−チオクツ、８−セレノクツ及び８−シアノイミノ
誘導体についても行った。

例２３７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−オフソー２′
、３′−Ｄ−イソプロピリデン−５′−ベンゾイルグア
ノシン 例２２で述べたイソプロピリデン誘導体（３ｍＭ）、ト
リエチルアミン（３ｍＡ）　、ベンゾイルクロリド（３
ｍＭ）及び塩化メチレン（１００ｍｌ）を含む混合物を
、室温で１６時間攪拌する。その後この混合物を水中に
注ぎ、塩化メチレン層を分離してから、その水層をさら
に塩化メチレン（２×１５．０ｍｌで抽出する。

塩化メチレン層を合せて、Ｎａ２５Ｏ，で乾燥した後、
その溶媒を減圧下で除去する。その残香をシリカゲルの
カラムクロマトグラフィーで精製する。

５′−アセチル誘導体はベンゾイルクロリドの代りに無
水酢酸を用いることで合成する。８−チオクツ、８−セ
レノク゛へ及び８−シアニミノ誘導体も同様に合成する
。

例２４７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−チオクツ−２
’、３’、５’−）リアセチルグアノシン この合成は、リボシル環のアシル化操作の代表例である
。

４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１０ｍｇ）を、
７−ヘテロ原子置換炭化水素−８−チオクツグアノシン
（３ｍＭ）、トリエチルアミン（２ｍｌ）、無水酢酸（
１５ｍＭ、代用物として低級アシルクロリド又はベンゾ
イルクロリドを用いることができる）及び塩化メチレン
（５０ｍ／）の混合物に加える。生成した反応混合物を
室温、窒素雰囲気下、１６時間攪拌する。

その後さらに塩化メチレン（５０ｍ１）を加え、この溶
液をｌＮＨＣｌ、プライン及び水で洗浄する。その後こ
の溶液をＮａｚｓＯａで乾燥する。溶媒を減圧下で除去
した後、この残香をシリカゲルのカラムクロマトグラフ
ィーで精製する。

同様な操作を８−オクソ、８−セレノクツ及び８−シア
ニミド誘導体に対して行う。

Ｂ、投与用の代表的組成物 本発明の化合物を投与するのに適している代表的固体及
び液体組成物を代表的活性成分として、より好ましいグ
アノシンヌクレオシド誘導体５個を用いて以下に説明す
る。

望−■ 錠剤は以下の成分から調合する。

重量比 ７−（２−クロロエチル）−８−２，５オクソグアノシ
ン ラクトース粉末　　　　　　　　　　３６．４コーンス
ターチ、乾燥型　　　　　　３４．５微粉末５ｉＯｚ　
　　　　　　　　　　　　５．６ポリビニルピロリドン
　　　　　　　　０．６ステアリン酸マグネシウム　　
　　　　０．４８０．０ グアノシン誘導体をラクトース、２５重量部のコーンス
ターチ及び４．０重量部のＳｉＯ□と完全に混合する。

この混合物をさらに均一になるように、ポリビニルピロ
リドンの５％エタノールｉ８　？＆で湿潤化する。この
湿潤化物を１ミリメートルメツシュスクリーンに通して
粒状化する。生成した粒状物を６０℃の乾燥室で約２４
時間かけて乾燥する。

乾燥した粒状化物を再び１ミリメートルメソシュスクリ
ーンに通す。７０．０部の得られた粒状物を予め１ミリ
メートルメツシュスクリーンに通した、５ｉｎ２の残分
、コーンスターチの残分及び全てのステアリン酸マグネ
シウムを含む混合物と、適当なミキサー内で混合する。

このようにして得た混合物を、各々８００ミリグラムで
、グアノシンを２５ミリグラム含む錠剤に成型する。

スタニチカブセル カプセル内容物は以下の成分から調合する。

重量部 鍍−剋 各々５０ミリグラムの７−（４−ニトロベンジル）−８
−オクソグアノシンを含む１００００錠からなるロフト
を、次に示すタイプ及び量の成分から調製する。

リン酸二カルシウム ０００ｇ コーンスターチ ５０ｇ ラクトース ４５０．０ グアノシン誘導体を徐々にラクトースと混合する。全て
のラクトースを混合したとき、この得られた混合物をコ
ーンスタチと混合する。それからこの混合物、１０グラ
ムをカプセルに納める。各カプセルは、グアノシン誘導
体１．０ミリグラムを含んでいる。

グアノシン誘導体及びリン酸二カルシウムをよく混合し
、水中７．５パーセントのメチルセルロースで粒状化し
たのち、１ｌｈ８スクリーン（米国標準ふるいシリーズ
）を通してから、注意深く乾燥する。乾燥した粒状物を
１１ｈ１２スクリーン（米国標準ふるいシリーズ）に通
し、タルク、スターチ及びステアリン酸マグネシウムと
完全に混合してから錠剤に成型する。

往Ｊｕｌ！Ｌ赳 皮下又は腹腔内注射に適し、かつ５ミリリットル成分中
、５０ミリグラムの７−カルポキサミドメチルー８−オ
クソグアノシンを含む無菌製剤は、以下のタイプ及び量
の成分から調合する。

生理食塩水　　　　　　　　　　　　　９８ｍ！ゴマ油
　　　　　　　　　　　　　　　　　２ｍ！グアノシン
誘導体及び食塩水を混合し、十分超音波処理を行ない実
質的に均一な分散物を作る。

その後、ゴマ油を混合し、ついでこの混合物を同様に均
一化してエマルジョンを得る。このエマルジョン化の後
、本無菌製剤の最終容積の５から１５パーセントを週に
１回の皮下又は原腔内注射により体液性免疫を増加させ
る。

経口用の水性製剤 ５ミリリツトル（ティースプーン１杯）中２５ミリグラ
ムの７−（４−メトキシベンジル）−８＝オクソグアノ
シンを含む経口用水性製剤は以下の成分から調合する。

メチルパラベン、ＩＩ、　Ｓ、　Ｐ、　　　　　　　０
．７５ｇプロピルパラベン、ＩＩ、　Ｓ、Ｐ、　　　　
　　　０．２５ｇサッカリンナトリウム　　　　　　　
　１．２５ｇチクロナトリウム　　　　　　　　　０．
２５ｇグリセリン　　　　　　　　　　３００　ｍｌｌ
ｌｌトラントガム　　　　　　　　　　１．０ｇオレン
ジオイルフレーバー　　　　　１．０ｇＦ、　Ｄ、及び
Ｃ，オレンジ色素　　　　　　０．７５ｇＣ６方法 リンパ球培養 血清含有培養培地を１００ミ’Ｊ’Ｊットル当り次に示
すものを含むよう調製する；　９１．９　ミＩＪ　！Ｉ
ットルＲＰＭ１１６４０　　（フローラボラトリーズ社
、ＭＤ州ロックビル）、０．１ミリリツトルの１００×
グルタミン、１．０ミリリツトルのＩＯＸピルビン酸ナ
トリウム、１．０ミリリツトルの５０Ｘ非必須アミノ酸
、１ミリリツトルのペニシリン６１０４ユニツト及び１
０４マイクログラムのストレプトマイシンを含む水溶液
及び５．０ミリリツトルのウシ胎児血清（ＦＣＳ）の認
定ロフト。これらの成分を明確に均一となるよう混合す
る。肺細胞サスペンション及び肺臓Ｂ細胞濃縮物は、グ
ツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）等（ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、１２１．１９０
５　（１９７８））の方法により調製する。

羊赤血球（Ｓ　ＲＢ　Ｃ）に対する一時体液性免疫応答
の評価のため、５Ｘ１０’〜１０’個のネズミ肺臓細胞
を免疫原存在下、５％ＦＣ３含有培地１、０ミリリット
ル中４〜５日間培養する。細胞は、毎分７サイクルの頻
度で振盪する組織培養箱（ＣＡ州、デルマー、ＣＢＳサ
イエンティフィック製）を用い、１０％ＣＯｚ含有空気
の加湿雰囲気下、３７°Ｃで培養トレー（ＭＡ州、ケン
ブリッジ、コスタ−社製）中で培養する。プールした５
ＲＢＣはｃｏ州、デンバー、コロラド・セラム社から入
手できる。

ヒトの末梢血液リンパ球（Ｐ　Ｂ　Ｌ）はフィコールジ
アドリゾエート密度勾配遠心により正常ヘパリン化静脈
血液から調製する。ウィソクキ（Ｗｙｓｏｃｋｉ）及び
サトー（Ｓａｔｏ）　（プロシーディング・イン・ナシ
ョナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、）Ｕ、Ｓ、八、７
　５．　２　８　４　４　　（１９７８））により報告
され、また、カバグナロ（（：ａｖａｇｎａｒｏ）及び
オスバンド（Ｏｓｂａｎｄ）　（バイオテクニクス（Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、　１月／２月、３０　（
１９８３）により修正されたように、ＰＢＬをヒスタミ
ン・ウサギ血清アルブミンコートしたプラスチックペト
リ皿（セレクト（Ｃｅｌｌ−ｅｃｔ）　１１ｋＬ２キフ
ト、ＭＡ州、ボストン、セラゲン社）表面に付着させ、
かつ非粘着性細胞をパンニングにより回収することで、
ヒスタミンのタイプ２レセプターをもつサプレッサーＴ
細胞をＰＢＬから除去する。

これらの実験で使用する組織培養培地は次のように調製
する。８７．９ｍｊ２　ＲＰＭ　Ｉ　１６４０（ＭＤ州
、ロックビル、フローラボラトリーズ社）、０．１ｍｌ
の１００×グルタミン、１．ＯｍＡの１．ＯＭＨＥＰＥ
Ｓバッファ（ＭＤ州、ベセスダ、マイクロバイオロジ力
ルアソシエーツ）、１．０ＩＩｌβのペニシリンＧ１０
’Ｕ及び１０４マイクログラムのストレプトマイシン水
溶液及びＩ　Ｏｍｌの新鮮なオートロガス熱失活化血漿
が１００ミリリツトル（ａｌ）中に含まれている。５Ｒ
ＢＣに対する一次体液性免疫応答を評価するため、リン
パ細胞をＩＬ−２（インターフェロンＴ活性を含まない
ヒトのＩＬ−２の部分精製調製物は、ＭＤ州、シルバー
スプリング、エレクトローヌクレオニクス社から入手さ
れた）及びグアニンヌクレオシド誘導体とともに、抗原
としての５Ｘ１０６個の５ＲＢＣを含む１．Ｏｍ！容積
中、２Ｘ１０６／ｍ１の密度で培養する。

プラーク　　　胞（Ｐ　Ｆ　Ｃ） ＳＲＢＣに対する抗体を分泌するＰＦＣを、シャーン（
Ｊｅｒｎｅ）及びノージン（Ｎｏｒｄｉｎ）　（サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１４０．　４０５　（１９６
３）　）の溶血プラーク検定法の修正法を用いて４又は
５日の培養後評価する。この細胞はプラーク化する前に
完全な培地に移す。すなわち、それらを標準低Ｍｒアガ
ロース（ＣＡ州、リッチモンド、バイオラドラボラトリ
ーズ社）中でプラーク化し、５ＲＢＣ吸着化したモルモ
ット補体なしで１．５時間インキュベーションした後、
補体存在下でインキュベーションする。

ｍ１性 ５Ｘ１０６個の生存可能ＣＢＡ／ＣａＪマウスのＢ細胞
を培養する。これらの細胞は牌細胞をまずＴ細胞のｔｂ
ｙｌ、２抗原に対する補体固定化モノクローナル抗体で
処理し、つづいて第２に補体で処理して存在するＴ細胞
を溶解することにより生ずる（ＭＡ州、ボストン、ニュ
ーイングランドニュクリア社）。このように処理した細
胞を０から１０−４モル濃度範囲の段階酌量のグアノシ
ン誘導体を含む血清培地中、免疫原としての０．１パー
セント（ｖ／ｖ）ＳＲＢＣｏ、１ｎｌの有無の条件下で
生育させる。その４日後に、５ＲＢＣに対する直接的Ｐ
ＦＣを測定する。

マウス 退会８−１６のＣＢＡ／ＣａＪマウスは、ＭＥ州、バー
ハーバ−、ジャクソンラボラトリー社から購入する。Ｃ
Ｂ　Ａ／Ｎマウスの育種核は、ＭＤ州、ベセスダ、ナシ
ョナル・インスチチュート・オブ・ヘルス、アンマルプ
ロダクションセクションから提供される。全てのマウス
は、ウニイン・ラブ・ブロソクス（Ｗａｙｎｅ　Ｌａｂ
　Ｂｌｏｘ）　Ｆ、　６ペレツト（ＩＬ州、シカゴ、ア
ライドミルス社）及び）ＩＣＥでｐＨ３，０に酸性化し
た塩素化水で維持する。

狙寮囲製皇 肺臓及び胸腺細胞サスペンションを、グツドマン（Ｇｏ
ｏｄｍａｎ）等（ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ
、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、　　１２１．　１９０５　
（１９７８））の方法により調製する。Ｂ細胞濃縮物は
１０’個の牌細胞を、モノクローナル抗ｔｈｙ１．２抗
体（Ｍへ州、ボストン、ニューイングランド・ニューク
リア社）の１０００倍希釈物で４℃、３０分間処理する
ことにより調製する。処理した細胞を２８０×ｇ、１０
分間遠心することにより抗体を除き、その細胞は、ＣＢ
Ａ　　ＲＢＣ吸着化モルモット補体の６倍希釈物中、３
７℃で、４５分間再懸濁する。その後、細胞を洗浄し、
先に述べたように培養する。

庄−肚 マウスは、５０μｇのＴＮＰ−ＢＳＡを含む溶液の腹腔
的注射を受ける。この免疫化注射の約３０分以内、６匹
のマウスの２グループは各々５ｍｇ／ｍｆで存在するグ
アノシンを含む、１００パーセントゴマ油又は生理食塩
水中で超音波処理した２パーセント（Ｖ／Ｖ）ゴマ油溶
液中の、本発明のグアノシンの０．２ｍ１ｉ、ｐ、注射
を受ける。６匹のマウスの第３のグループは免疫化は受
けるがグアノシン誘導体は受けない。抗ＴＮＰＢＳＡ抗
体値は、その後、標準的技術を用いて測定する。

本発明は好ましい態様に関して説明してきた。

公開された事項の修正、そして、または変化が本発明の
範囲を逸脱することなしに行なうことができることは、
当業者にとって明白なものであろう。

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｘはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＣＮであり、Ｒ＾１は
   エチル基よりも長く、かつデシル基より短かいヘテロ原
   子置換炭化水素ラジカルで、かつ、生理的ｐＨ値でイオ
   ン電荷を持たないものであり、 Ｒ＾２及びＲ＾３は水素、水酸基、低級アルコキシ基、
   低級アルカノイロキシ基及びベンゾキシ基からなる群か
   ら選ばれる、同じもしくは異なる基であるか、又は、Ｒ
   ＾２及びＲ＾３が共に低級アルキリデンジオキシ基を構
   成し、 Ｒ＾４は水素、低級アルカイイル基及びベンゾイル基か
   らなる群から選ばれる基である）で表わされる、置換グ
   アニンヌクレオシド誘導体、及びその医薬的に許容され
   る、非毒性の塩基付加塩。
2. （２）上記Ｒ＾１基がおよそヘプチル基の長さよりも短
   かい、請求項（１）記載の、置換グアニンヌクレオシド
   誘導体。
3. （３）Ｒ＾１基がハロゲン置換アルキル基、低級アルコ
   キシ低級アルキルカルボニル基、カルボキサミド部分が
   一般式ＣＯＮＲ＾５Ｒ＾６（式中、Ｒ＾５及びＲ＾６は
   、水素、低級アルキル基及びＣ＿２−Ｃ＿３アルカノー
   ル基からなる群から選ばれる、同じもしくは異なるもの
   か、もしくはＮＲ＾５Ｒ＾６が共に環内原子５又は６個
   のヘテロ環を形成している） で表わされる低級アルキルカルボキサミド基、低級アル
   コキシ低級アルキル基、及び水素原子に比べ電子吸収性
   の一官能基でフェニル環が置換を受けたベンジル基から
   なる群から選ばれたものである、請求項（２）記載の置
   換グアニンヌクレオチド誘導体。
4. （４）Ｒ＾１が２−クロロエチル、４−ニトロベンジル
   、４−メトキシベンジル、メトキシエチル、カルブエト
   キシメチル、及びカルボキサミドメチル基からなる群か
   ら選ばれるものであり、かつ、ｘがＯである、請求項（
   １）載の、置換グアニンヌクレオシド誘導体。
5. （５）Ｒ＾２及びＲ＾３が水酸基であり、かつ、Ｒ＾４
   が水素である、請求項（４）記載の、置換グアニンヌク
   レオシド誘導体。
6. （６）上記グアノシンヌクレオシド誘導体が、７−カル
   ボエトキシメチル−８−オクソグアノシン、７−（４−
   ニトロベンジル）−８−オクソグアノシン、７−（４−
   メトキシベンジル）−８−オクソグアノシン、７−（２
   −クロロエチル）−８−オクソグアノシン、７−アルバ
   モイルメチル−８−オクソグアノシン、７−（２，３−
   ジヒドロプロピル）−８−オクソグアノシン及び７−メ
   トキシエチル−８−オクソグアノシンからなる群から選
   ばれるものである、請求項（１）記載の置換グアノシン
   ヌクレオシド誘導体。
7. （７）請求項（１）記載の、免疫増強性の置換グアニン
   ヌクレオシド誘導体を、免疫強化効果量混合した、希釈
   量の生理的に許容されるキャリヤーを含む組成物。
8. （８）ｘがＯ又はＳである、請求項（７）記載の組成物
   。
9. （９）Ｒ＾２及びＲ＾３が水酸基であり、かつ、Ｒ＾４
   が水素である、請求項（８）記載の組成物。
10. （１０）水性媒体中、白血球を、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｘはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＣＮであり、Ｒ＾１は
    エチル基よりも長く、かつ、デシル基よりも短かいヘテ
    ロ原子置換炭化水素ラジカルであり、かつ生理的ｐＨ値
    でイオン電荷をもたないものであり、 Ｒ＾２及びＲ＾３は、水素、水酸基、低級アルコキシ基
    、低級アルカノイロキシ基及びベンゾキシ基からなる群
    から選ばれる、同じか又は異なる基であるか、もしくは
    、Ｒ＾２及びＲ＾３が共に、低級アルキリデンジオキシ
    基を構成し、 Ｒ＾４は水素、低級アルカノイル基及びベンゾイル基か
    らなる群から選ばれる基である）で表わされる構造を有
    する、免疫強化効果量の、置換グアニンヌクレオシド誘
    導体を混合した、希釈量の生理的に許容されるキャリヤ
    ーを含む組成物と接触することを含む、免疫応答を増加
    する方法。
11. （１１）上記白血球を培養培地中、インビトロで接触さ
    せる、請求項（１０）記載の方法。
12. （１２）接触される白血球がＢ細胞を含む、請求項（１
    ２）記載の方法。
13. （１３）上記免疫応答が抗原特異的応答である、請求項
    （１２）記載の方法。
14. （１４）上記白血球がヒトのＢ細胞、Ｔ細胞及び好中球
    からなる群から選ばれる、請求項（１０）記載の方法。
15. （１５）上記接触を、上記組成物の単位投与量を、ホ乳
    動物に投与することにより、インビボで行う、請求項（
    １０）記載の方法。