JPH02500543A

JPH02500543A - 独立多重式免疫測定法診断システム

Info

Publication number: JPH02500543A
Application number: JP63507144A
Authority: JP
Inventors: アーノビツツ，ハワード・ビー．
Original assignee: カリプト・インコーポレイテツド
Priority date: 1987-08-05
Filing date: 1988-08-05
Publication date: 1990-02-22
Anticipated expiration: 2011-10-30
Also published as: EP0333801A4; DE3854603T2; KR970007080B1; NZ225711A; ATE129346T1; WO1989001158A1; EP0333801A1; DE3854603D1; ZA885777B; IL87393A; JP2549305B2; AU628293B2; CA1339006C; KR890702034A; AU2306788A; DK161689A; EP0333801B1; DK161689D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】法診断システム本願は１９８７年８月５日出願の米国特許出願筒０８１，８７４　＠の一部継続出願であり、その内容を、本文により、本願中に参考として引用する。

発明の分−野　区画本願は免疫診断学の分野に属する。より特定的には、本願は、水性液体中の分析物（ａｎａ　Ｉｙｔｅ）、特に血液、尿などのような生化学的検体の免疫学的検出に使用するための検査細片（ｔｅｓｔ３ｔｒｉｐ）、それを含むキット及びそれを用いる方法を提供する。

発明の背景近年、免疫学的試薬類との反応に基づいた分析物の検出、定量的測定又はこれらの双方が、特に臨床検査の分野において、かなり重要性を増している。一般に、これらの方法は、分析物を含有する疑いありと見られている検体を前記分析物と特異的な免疫学的反応性を示す物質、例えば前記分析物上に存在するエピトープに対する抗体と接触させることを含む。もし前記分析物が検体中に存在するならば、それは前記検体と結合して複合体を形成する。広範囲の「ディベロツバ−」機構又は「リポータ−」機構が提案されており、これらは、又、結合反応が起こるかどうかを示すために使用される（例えば、Ｎｅｕｍａｎｎらに１９８２年１２月２８日に発行された米国特許第４，３６６．２４２号明細書、Ｈａｒｒｉｓらに１９８１年７月１４日に発行された米国特許第４，２７８，６５３号明細書及び２ｕｋらに１９８０年６月１７日に発行された米国特許第４．２０８，４７９号明細書参照）。

このような方法は、モノクローナル抗体（Ｍ　Ａ　ｂｓ）の導入以来、ますます大衆的になっており、前記モノクローナル抗体は、にｏｈｌｅｒとＨｉｌｓｔｅｉｎ、「選択的特異抗体を分泌する融合ｉｔ胞の連続培養Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ、（１９７５年）第２５６巻、第４９５〜４９７真によって開発された技術を用いて産生じ得、かつこれらが結合する前記分析物に対して唯一の特異性を有している（例えば、Ｄａｖｉｄらに１９８３年３月８日に発行された米国特許第４，５７６、１１０号明細書参照）。

これらの方法が次第に発展すると、これらを日常的炭模で適用するためのより良い方法が並行して研究された。このことが検査Ｖｉ＠、検査キットなどの領域に導いた（例えば、Ｈｏｓｓｏｍらに１９８６年１１月１８日に発行された米国特許第４，６２３，４６１　＠明細書、ａａｇｓｈａｗｅに１９７５年６月１０日に発行された米国特許第３，８８８，６２９号明細書、Ｂｏｈｎらに１９８４年７月３日に発行された米国特許第４．４５８，０２０号明細書、ＫａｔＺらに１９８５年１月２９日に発行された米国特許第４．４９６．６５４号明細書及びＰｉａｓｉｋらに１９８１年１２月１５日に発行された米国特許第４，３０５，９２４号明細書参照）。

検査キット又は装置の望ましい特徴は、以下の事項を包含する。

（１）検査装置又はキットは保存及び使用が容易でなければならない。

（２）それは偽陽性又は偽陰性のない明瞭な結果を与えなければならない。

（３）それは多数の検査を短期間にふるい分けさせねばならない。

（４）理想的には、それは、誤った読みを得なかった確認としてそれが正しく使用されたという明確な指示を、使用者に提供すべきである。

（５）好ましくは、それは多数の検査を同時に実行させるべきである。

（６）好ましくは、全血又はその分画成分を用いて、前記検査を形成し得る。

これらの望ましい特徴を基本的に供与する検査細片及び検査キットを提供することが本発明の主たる目的である。

明細書本発明は、固体担体、前記固体担体上の別個の第１区画に結合した抗原物質、陽性対照として前記固体担体上の別個の第２区画に結合した抗−ヒト抗体、及び陰性対照として前記固体担体上の別個の第３区画に結合した抗体で、ヒト被験体内で自然に生起しない抗原に対する抗体から成る、ヒト被験体からの検体において抗原物質の存在を検出するための検査細片を提供する。

本発明は、更に、固体担体、前記固体担体上の別個の第１区画に結合した免疫複合体中の抗原物質に対する抗体をベースとする試薬及び前記抗原物質に対する生来のヒト抗体、陽性対照として固体担体上の別個の第２区画に結合した抗−ヒト抗体、並びに陰性対照として固体担体上の別個の第３区画に結合した抗体で、ヒト被験体内で自然に生起し得ない抗原に対する抗体から成る、ヒト被膜体からの検体において抗原物質の存在を検出するための検査細片を提供する。

本発明は、又、前記検査細片を用いて、抗原物質の存在をヒト被験体からの検体において検出するための方法も提供する。

従って、本発明は水性検体中の１種以上の分析物の存在を免疫学的に検出するための検査細片を提供する。前記細片装置は表面上に多数の別個の区画を有する固体担体を包含する。これらの区画の少なくとも１つが検査区画であり、前記検査区画は検出又は定量的に測定される分析物に対するモノクローナル抗体（又は、ボリクＯ−ナル抗体、−価若しくは二価の抗体断片、ハイブリッド抗体、異種二官能性抗体又は遺伝子操作した若しくはクローン化した抗体から選択した結合物）を保持する。この抗体若しくは結合物を、好ましくは、担体表面に結合するか又は固定化する。検査細片上の別個の区画の少なくとも１つが陽性対照、即ち前記検査区画が検体と接触したときだけ陽性信号を生じる対照物質、を保持する。

好適実施態様において、この陽性対照は免疫学的対照であるので、対照結果は検体中に常に存在する物質種と陽性対照ゾーン内に固定化した免疫学的に特異的なその相手物質との免疫学的反応を含む。

他の好適な実施態様において、この検査細片は陰性対照、即ち正常な検体内では検出可能な事象（ｅｖｅｎｔ　）を引き起こさないが、検体が異常であるときには検出可能な事象を引き起こす対照物質、を保持する少なくとも１つの区画を含む。

別の実施態様において、この検査細片は、検体中の１種以上の分析物を検出するために、異なる抗体又は抗体の結合物を含む多数の独立した検査区画を含有する。

別の実施態様において、この検査細片は異なる分析物を又は抗体を検出するための分析物の若しくは他の分析物の結合物を含む多数の独立した検査区画を含有する。

更に別の実施態様において、本発明は検査キットを提供する。

この検査キットは丁度記載したばかりの検査細片と多数の液体ホルダー（ｌｉｑｕｉｄ　ｈｏｌｄｅｒ）から成る検査板を含み、前記の各液体ホルダーは、検査細片を収容し、かつ前記検査区画と陽性対照ゾーンと陰性対照ゾーンとにホルダー内に予め添加される一連の各液体を及び検査検体を含む少なくとも１つの液体を同時に接触させるために、形状及び寸法が決定された。

このキットの目下好適な実施態様において、前記検査板（ｔｅｓｔ　ｐｌａｔｅ）は、多数の検査細片を使用して多数の検体を検査し得るように、多数の液体ホルダーを含んでいる。

図面の説明第１図は本発明に係る検査細片の斜視図であり、半図式的形態内の種々のゾーン又は区画を示している。

第２図は本発明の別の実施態様における検査細片の斜視図及び半略図であり、検体検査板と一緒に示している。

第３図は多重検体を同時に検査し得るように改造した検査板の斜視図である。

第４図は本発明に従って使用され得る典型的な検査プロトフールのブロック図である。

及里ｍ虹晟ｊ本発明は、被検者特にヒト被検者からの試料中に、抗原物質が存在することを検出するためのテストストリップを提供する。

このテストストリップは、固体支持体と、この固体支持体上の第一の区分域に結合された抗原物質と、陽性コントロールとして固体支持体上の第二の区分域に結合された抗ヒト抗体、及び陰性コントロールとして固体支持体上の第三の区分域に結合され、本来ヒト被検者においては生じない抗原に対して指向性の抗体とを含むものである。このようなテストストリップはまた、試料中に存在する抗原物質の量あるいは濃度を定量的に決定するように容易に改変しうるちのである。

本発明はまた、上記のテストストリップのすべての要素を含むと共に、さらに固体支持体上の第四の区分域に結合された生来のヒト抗体及び免疫複合物中の抗原物質に対して指向性の抗体由来反応剤（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｂａｓｅｄ　ｒｅａｇｅｎｔ）を含むテストストリップ明の一態様においては、抗原物質はウィルス又はウィルスタンパク質である。例えば、抗原物質としてＨＩＶ−１゜ＨＩＶ− １ＧＡＧタンパク質、ＨＩＶ−Ｉ　ＥＮＶ糖タンパク質、１（ｉｖ−ｉ　ＰＯＬ、タンパク質、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１Ｇ　Ａ　Ｇタンハク質、ＨＴＬＶ−Ｉ　ＥＮＶ糖タンパク質、ＨＴＬＶ−ＩＰＯＬタンパク質、又はこれらのエピトープを挙げうる。

本発明のテストストリップにおいて、固体支持体としては、ガラス繊維−紙、ニトロセルロース、焼結ガラス、プラスチック、合成ポリマー、セルロース、酢酸セルロース、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、又はポリフッ化ビニリデンを例示できる。

本発明の抗体由来反応剤を含む態様におけるその反応剤としては、モノクローナル抗体、ボリクＯ−ナル抗体、−価もしくは二価の抗体フラグメント、ハイブリッド抗体、ヘテロ官能性抗体、又ハ遺伝子的に操作された（ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ　ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ）もしくはクローン化された（ｃｌｏｎｅｄ）抗体を挙げうる。

本発明の好ましい態様においては、テストストリップ上の抗ヒト抗体はモノクローナル抗体である。

同様に、本発明の好ましい態様において、ヒト被検者において本来は発生せず、かつテストストリップ上に存在する抗原は、例えばジニトロフェノールのような合成右機化合物である。

本発明の好ましい態様においては、一つあるいはそれ以上の抗ヒト抗体、生来は生じない抗原に対して指向性の抗体、もしくは抗体由来反応剤は、例えば放射性同位体、発蛍光］、発色団、又は化学反応の触媒となって検出可能な生成物を生じさせる酵素によってラベルされる。

本発明はまた、ヒト被検者からの試料中の抗原物質の存在を検出づるための次のテストストリップをも提供するものである。

すなわち、このテストストリップは、固体支持体と、この固体支持体上の第一の区分域に結合された生来のヒト抗体及び免疫複合物中の抗原物質に対して指向性の抗体由来反応剤と、陽性コントロールとして固体支持体上の第二の区分域に結合された抗ヒト抗体もしくは他の適切な抗細胞構造体、及び陰性コントロールとして固体支持体上の第三の区分域に結合され、本来はヒト被検者に生じない抗原に対して指向性の抗体とを含むテストストリップをも提供する。

このようなテストストリップは、試料中に存在する抗原物質の量および濃度を定量的に決定するように容易に改変しうろことは当業者において理解されるであろう。

本発明はさらに、以下のステップからなる、ヒト被検者からの試料中の抗原物質の存在を検出する方法を提供するものである。すなわち、（１）テストストリップ上の抗体や組換え抗原を含むタンパク質に対して、試料中に存在する物質が非特異的に及び特異的に結合することを防止し、偽りの結果が生じることを防ぐように検査すべき試料を前処理し、（２）テストストリップに結合した抗原物質が試料中に存在するそれと反応する抗体と複合物を形成するような条件下で、また抗原物質と抗体由来反応剤の両方が結合したテストストリップの場合には、試料中に存在する抗原物質がテストストリップに存在するその抗体と結合しうるような条件下で、前処理した被検試料を上記のテストストリップに接触させ、（３）その後、抗原物質に対して指向性の非結合抗体を除去するためにテストストリップを処理し、（４）ラベルした抗ヒト抗体がテストストリップに結合したどのヒト抗体とも複合物を形成するような条件下で、上記の処理したテストストリップをラベルした抗ヒト抗体と接触させ、（５）テストストリップに結合した抗ヒト抗体の存在を検出し、これによって試料中の抗原物質もしくはそれに対する抗体の存在を検出し、（６）テストストリップ上の陽性及び陰性のフントロールにより検出の正当性を確認する。

本発明はさらに、以下のステップからなる、ヒト被検者からの試料中の抗原物質の存在を検出する方法を提供するものである。すなわち、（１）テストストリップ上の抗体を含むタンパク質に対して試料中に存在する物質が非特異的に結合すること及び抗原物質に対してヒト抗体が特異的に結合することを防止し、偽りの結果が生じることを防ぐように検査すべき試料を前処理し、（２）テストストリップに結合した抗体由来反応剤が、試料中に存在する抗原物質と複合物を形成しうるような条件下で前処理した試料を上記のテストストリップに接触させ、（３）ラベルした抗体がテストストリップに結合した抗原物質と複合物を形成しうる条件下で、上で処理したテストストリップを抗原物質に対し指向性のラベルした抗体と接触させ、（４）テストストリップに結合した抗原物質に指向性のラベルした抗体の存在を検出して、試料中の抗原物質の存在を検出し、（５）テストストリップ上の陽性及び陰性コントロールにより検出の正当性を確認する。

好ましい態様として、上記の方法においては、抗原物質としてウィルス又はウィルスタンパク質、また試料として血液、血清、尿などを挙げることができる。

本発明はまた、ラベルした抗ヒト抗体がテストストリップに結合したヒト抗体に結合しうるような条件下で、テストストリップとラベルした抗ヒト抗体とを接触させることにより正当性の確認を行なうことを含む上記の方法をも提供する。

このように、本発明は改良されたテストストリップデバイスを提供するものである。このデバイスの一態様を第１図の１０として示す。これは複数の読取可能領域１２．１４及び１５を有する固体支持体１１を含んでいる。支持体１１は固体の「浸漬棒（ｄｉｐｓｔｉｃｋ）Ｊ構造体として示しているが、本質的に立方体、ブロック、Ｏラド、円筒、プリズム、多面体、スパイラル、球、あるいはこれらの組合せた形を含むいがなる形状のものであってもよい。また、支持体は、プラスチック、金属、紙などの材料を有するキャリヤーデバイスであってもよい。

ポリスチレン等のプラスチック、金属、紙、ガラス繊維、Ｅ紙、ニド０セル口− ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリフッ化ビニリデン、その他の検査において使用しうる材料など広範な材料から作ることができる。一般に、その表面に固着される材料は、以下に述べるようにテストストリップの表面に吸着され、化学的にカップリングされ、あるいは結合される。

読取可能領域（ｒｅａｄａｂｌｅ　ａｒｅａ）　１２．１４及び１５は、そのストリップが分析方法に従って処理される際、複数の潜在的な信号を与えるように支持体上に別々に配置する。少なくとも一つの読取可能領域は、試験検体中の検査分析体（ｔｅｓｔ　ａｎａｔｙｔｅ）に対して免疫的に反応性の抗体を含んでいる。少なくとも一つの読取可能領域は、テストストリップが試験検体と正しく接触した際、試験検体と反応して検出可能な信号によって確認することが可能となる陽性のコントロールを含む。恐らく、この陽性コントロールは、検体中の非分析種と免疫反応をする免疫的に陽性のコントロールである。

読取可能領域はまた、陰性のコントロール、すなわちもし検体が正しく処理されたならば検体との間で読み取りうる反応を示さないが、もし検体が不備なものであったり、間違って処理された場合には反応して信号を生じるような一つあるいはそれ以上の反応剤を含む別個の領域を有することができる。

陽性コントロールの領域と抗体を含む領域との相対的な位置関係は重要である。

テストストリップ１０は「浸漬棒」として使用する。使用にあたっては、検査技師又は自動試験器は上端１６でストリップをつかみ（あるいは保持し）、最初に下端１７から液状検体あるいは他の反応剤に浸漬する。このことは、領域１２は領域１５より前に上記液体と接触することを意味する。従って、検体及び反応剤と正しく接触すると必ず陽性を示す陽性コントロールは、一番最後に接触する部位もしくは最上部、例えば第１図における１５に位置することが望ましい。逆に、陰性フントロールは、もし存在するならば、一番最初に接触する部位もしくは最下部、例えば第１図の１２に位置する必要がある。

陽性コントロール及び陰性コントロールは免疫によるものが好ましい。つまり、これらは免疫反応によって機能するものであることが好ましい。従って、例えば試験検体がヒト血清に基づくものであるときには、典型的な陽性コントロールは、血液やその分画成分中にいつも見出される一般の免疫グロブリンによって処理されるように考案された領域である。試験反応剤領域（第１図の１４）は、検査される分析体（ａｎａｌＶｔｅ）に対して特異的な少なくとも一つの抗体に基づくものであり、またその抗体を含むものである。広範な潜在的に重要な分析体に対して、広範囲の抗体が文菖上知られており、また使用されている。

第２図には、第１図のテストストリップの変形として２１が示されている。ストリップ２１は、検査プレート２２を含む全分析キット２０の一部として示されている。ストリップ２１は、上記と同じく支持体１１及び読取可能領域１２．１４．１５、並びに追加の読取可能鋼［２４を含んでいる。領域２４は追加のコントロール、分析体、又は追加の抗体含有試験部位であってもよい。領域２４は検査結果をさらに確認し、裏付けるように、領域１４と同じ抗原に対する第二の抗体を含むものであってもよく、また第二の抗原−分析体に対する抗体を含むものであってもよい。これらの種々の反応剤は、不明確な結果を与える交差汚染（（ｒｏｓｓ−ＣＯｎｔａｌｉｎａｔｉＯｎ）などを防止するために、通常その種々の部位で固定化される。抗体や多くの分析体は一般にプラスチック、炭水化物ポリマー、吸着性ｍ雑、ポリマー被覆金属ビーズ、シリカゲル、紙、ガラスフィルター等に直接吸着（一定の時間あるいは反応剤溶液が完全に乾固するまで培養する）、又は固相上の反応性基との化学結合により固定化する。最適条件は各々の反応剤により異なる。

典型的な適用においては、テストストリップ２１を、２２のようなテストプレートと合わせて使用する。テストプレート２２はいくつかの特徴を有している。１つは、２５．２６，２７．２８及び２９のような複数の液体貯蔵つ１ルを有していることである。実際の数は所望のアッセイ手順を行なうのに必要な擾々のステップに対応するように選択される。別の特徴は、それらのそれぞれのウェルのサイズがストリップを挿入し得るようなものとされていることである。また別の特徴は、ウェルが液体の深さｒ（ＩＪを収容し得る充分な深さを右１）でいることである。「ｄＪはテストストリップ上に存在する全ての読取可能領域１２．１４及び１５、あるいは１２，１４．２４及び１５を完全にカバーするのに適当な深さである。

使用に際しては、予め決定されたプロトコールに従い、テストプレート２２の１つ以上のウェルに所定温の試薬とサンプルを充填する。次にやはり予め決められたプロトコールに従いテストストリップをウェルに挿入する。これにより、陽性及び陰性フントロールの結果と共に読み取られる読取可能な検出結果が出現する。これらの読み取りに塁き、有効なテストが行われたか否か、及び試料中に分析物が存在したか否かを判定することができる。

例えば典型的なプロトコールでは、テストストリップをヒト血液中に存在し得る病原体に対する抗体により構成されたものとすることができる。陽性コントロール１５は共通の血液成分に対する抗体を有し、陰性コントロール１２は血液中に共通しては見られないが、汚染物に関連する物質に対する抗体等を有する。

ウェル２５に、予め測定された量の希釈剤、バッファーあるいは同様な水性媒体を充填する。所与の量の思考血液あるいはその他のソースをウェル２５の液体に加え、それと混合する。ストリップをウェル２５中の液体に予め決められた期間挿入（る。これによりストリップ２１上のテスト領域及びフントロール領域が液体及び希釈された血液成分と接触され得る。これにより、これらの領域中の抗体と血液中の任意の適当な成分との免疫学的反応の生起が可能となる。

試料ウェル２５及びその他の任意のウェルに、望ましくない反応を阻止する種々の試薬等を含有させることができる。試料の性質を変える物質、あるいは試料中の望ましくない交差反応性物質と反応するか又は除去する物質を含有させてもよい。

殆どの免疫診断アッセイに共通の問題は、試料成分と被覆固相との望ましくない相互反応（即ちバックグラウンド）である。

これらのタイプの相互反応は陰性試料を偽陽性と判定させることが多い。バックグラウンドは、望ましくない（特異的又は非特異的）反応物質を第２の固相（通常、試料をテスト固相にさらす前に予めインキュベートされる）上に分配することにより最小限にすることができる。抗体捕獲アッセイにおいては、第２の固相は試料あるいはテストに見られない分析物について特異的な抗体を結合させるものである（即ち、無関係な特異性）。

このタイプの第２の固相は、抗体、固相、ブロッキング試薬あるいはこれらの３つの任意の組合せに対する特異的及び非特異的両方のバックグラウンド成分を除去する。第２の固相はアッセイの任意の部分あるいは全ての部分において使用し得るが、好ましくは「現像剤（ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ）　Ｊ段階で除去する。ヒト由来のウィルス成分が分析物の場合、予備感染ヒト成分を第２同相分配の吸着剤試薬として使用し得る。

第２の相の形態は反応の機構に従って設計されなければならない。吸着剤試薬により、いくつかの溶液の試料トレイ隔室壁を被覆する。迅速な免疫アッセイにおいては、バックグラウンド制御の決定的な段階は固相と試料の最初の混合である。第２の固相は混合溶液中で自由に動けなければならない（任意の幾何学的形状の第２のストリップあるいは粒子）。好ましい方法としては、粒子ピーズ（約１〜１０ＩＪＪａの直径）の懸濁物、あるいはテストストリップを挿入する任意の又は全部の隔室からなる吸着手段を使用する。大きな総表面積は、迅速な反応動力学及び反応物質の最大の拡散に有利である。試料を吸着剤被覆粒子とブレインキュベートすることにより、テストストリップにさらす前にバンクグラウンド成分が迅速に除去される。これらのタイプの粒子製造は実施例に記載する。

次に、テストストリップをウェル２５から除去しつＩル２６に挿入する。ウェル２６は例えば、予め測定した量の阻害物質を除去するための洗浄溶液等を含むことができる。その後、例えば標識抗原、あるいは結合抗原に対する標識抗体等の検出系を含むウェル２７にテストストリップを移す。次にストリップをウェル２９に移して洗浄し、最後に基質（例えば色原体試薬）が加えられるか既に存在しているウェル３０に移すことができる。場合によっては、ストリップ上の過剰の液体を除去し、ストリップに基質を直接加えることができる。必要あるいは所望によりその他の試薬を含むウェルを用意してもよい。

第３図は、テストブロック２２が複数のウェルのセット（即ち４セツト）を備え、４つの試料ウェル２５．４つの洗浄ウェル２６等が存在するようにした本発明の態様を示す。

第４図は、記載した典型的テストプロトコールのブロック図を示し、テスト方法の連続的性質を示すものである。

本発明が、特定の抗体、試薬、特定の試料あるいは特定の使用、化学作用に限定されないこと、またその教示の範囲から逸脱することなく適当な変更を加え得ることは当業者に理解されよう。

テスト試薬領域での使用に適当な抗体は、モノクローナル抗体、−価又は二価抗体フラグメント、ハイブリッド抗体、ヘテロ二官能抗体、あるいは遺伝子的に操作されているかもしくはクローン化された抗体である。

上記した通り、テスト自体は試料中の１種又はそれ以上の分析物の存在を免疫学的に検出する方法である。典型的には、テストは結合あるいは非結合標識の検出あるいは定量に使用され、検出された標識の量は試料中の分析物の量に対応する。本明細書中で使用する、本発明の「免疫アッセイ手法」は、蛍光偏光の免疫電子顕微鏡分析法の性質を有するものでもよく、また免疫蛍光法あるいは蛍光イムノアッセイ、放射線分析アッセイ、酵素結合イムノアッセイ、あるいは光子計量生物発光もしくは化学発光法とすることができる。酵素結合イムノアッセイの場合、使用する酵素は通常、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、ホースラディツシュペルオキシダーゼ、ウレアーゼ、ルシフェラーゼ及びカラクトシダーゼから成る群から選択される。標識そのものは有効に検出できる任意の種類のものとすることができ、例えば色原体化合物、放射性同位体、酵素あるいは蛍光、発光、生物発光、化学発光、りん光または強磁性物質とすることができる。

分析物は、上記方法を使用して検出できるものであれば任意の有効な化合物あるいは生物であってよく、即ち、薬剤、ホルモン、ビタミン、酵素、リガンド、糖タンパク質及びリポタンパク質を含むタンパク質、抗体、ポリサッカライド、細 −もしくは組織抗原もしくはバクテリア、原生動物、寄生虫、真菌類、ウィルス、血液細胞物質、血液流体物質またはこれらのものの成分等である。好ましい態様においては複数の分析物が検出され、特に好ましい態様では天然単離物、組換体遺伝子操作または化学合成から精製されたＨＩＶ−Ｉ　ＧＡＧタンパク質、ＨＩＶ−１ＥＮＶ糖９ンバ’）質、ＨＩＶ−１ＰＯ１ｙ９ンバク質、ＨＴＬＶ−１ＧＡＧタンパク質及びＨＴＬＶ−１ＥＮＶ糖タンパク質及びＨＴＬＶ−１ＰＯＬタンパク質が含まれる。

別のアッセイ方法においては、前記の分析物を実際の検出試薬としてテストストリップに結合することもできる。

試料は、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、節足動物等由来の血液もしくはその分画化成分、尿、唾液、腟液、精液、粘膜、羊水、涙、胃腸管液及び排泄物、炎症液、胸膜浸出液、肺液、組織抽出物等とし得る。

別の実施態様では、テストする標本又は試料は工業的試料でもよく、例えば工業廃棄物化学物質もしくは排水とすることができ、分析物をその中に存在する工業的汚染物質あるいは有毒化学物質とすることができる。

本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、これらの実施例は後の請求の範囲により定義される本発明の範囲をいがなる意味においても限定することを意図するものではなく、またそのように解されるべきものでもない。

テストストリップの原型を９６−ウェル組織培養プレート（Ｃ０５ｔａｒ、カタログＮｏ、　３０９６）のふたから製造した。鋭いナイフアタッチメントを用いてはんだごての上でふたからストリップを切り出し、もり上った周辺部の輪により囲まれた８つの隣接する円を有するストリップを得た。ストリップは、高度に＠着性の固相（例えばナイロンメンブランあるいはニトロセルロースペーパー）を含むための支持部分としても使用することができる。ストリップをバッファー中で洗浄し、風乾させた。

ＤＮＰＩ　（ＣＢ６マウスＩ　ａＧｌ　、ジニトロフェノールに特異的）及び抗 −ＨＩ　ＱＧ　（ＣＢ６マウスＩｇＧ１、ヒト免疫グロブリンＧに特異的）と指称するモノクローナル抗体はＤｒ。

Ｐａｏ−Ｍｉｎ　Ｌｏｈ’ｓ　１ａｂｏｒａｔｏｒｙ　（υｎ１ｖｅｒｓｔｔｙ　ｏｒ　ｔｏｗａ＞から贈られたものである。抗−ＨＩＶ　ＧＡＧ（マウスＩＱＧ１、ヒト免疫不全ウィルス−１に特異的）はＥｐｉｔＯｐｅ　Ｉｎｃ、から購入したくカタログＮｏ、　５０００１　）。それぞれの分析物に特異性を有するＭＡｂの混合物を使用することができる。ここで、ＭＡｂはトリスバッファー化すリーン（Ｔ　Ｂ　Ｓ　、　０．１５８　Ｎａｐ！、０．０５８　Ｔｒｉｓ。

ｐＨ７，２）中１００４　／　、Ｈに調製し、１０成を目的とする円形部分に直接適用した。　ＨＩ　Ｖ　−１（Ｌｉｔｔｏｎ　Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ、　ＨＴＬＶ−３，カタログＮｏ、３７２２５．　ｌａｙ／　ａｄ！、ＮＰ４０不活性化）をＴＢＳ中２ｕｉ／−にＴＩ４製した。１０成を目的の円型部分に直接適用した。試薬の順は以下の通りである。

抗−ヒトＩｏＧ（陽性コントロール）［最上部］抗−ＨＴＶ　ＧＡＧ（ウィルス抗体複合体を検出する）ＨＩＶ−１（抗体を検出する）抗−ＤＮＰ（陰性コントロール）　［最下部］スティックを４５℃のオープン中に水平に起き（溶液側が上）、抗体及び抗原を３０分間乾燥させた。スティックをブロッキング溶液（０，３％ＴＷｅｅｎ含有のＴＢＳ、’ＩｊＩｙ／ｍ！ウシ血清アルブミン、ＢＳＡ及び０．１％ナトリウムアジド）中に最低１５分間装いた。

■、吸着剤ビーズの製造固体表面上の変性タンパク質に（あるいは固体表面に直接）結合する特定の試料のアフィニティーの影響を最小限にするために、ラテックスポリスチレン粒子にモノクローナル抗−ＤＮＰ抗体を共有結合させた（ウィルス分析物が直接に＠看されているか化学的に結合されている場合は、精製ヒトＴＩＥ胞原形質膜もラテックス粒子に結合することができる）。さらに、非特異的吸着剤をその他の任意の固相あるいは隔室壁土に直接被覆することができる。抗体はＰ　Ｂ　Ｓ　（０，１Ｍリン酸バッファー化サす−ン、ｐＨ７，２、Ｐａｎｄｅｘ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ発行Ｒｅ！１ｅａｒｃｈ　Ｒｅｐｏｒｔ。

Ｎｏ、４（１９８４）、　Ｈｉｃｈａｅｌ　Ｅ、Ｊｏｌｌｅｙ、Ｐｈ、Ｄ、　” Ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｏｆ　Ａｎｔｉｇｅｎｓｔｏ　Ｌａｔｅｘ　Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｗａｔｅｒ−３ｏｌｕｂｌｅ　ＣａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅＭｅｔｈｏｄ”）中に２００埒／　ｊｄ！にＩ製した。抗体溶液を加え、洗浄し、ラテックス粒子（Ｐａｕｄｅｘ、　Ｅｐｉｃｏｎカルボキシルポリスチレン粒子、カタログＮｏ、　３１−０１０−１　）をペレット化した。溶液を粉砕し、超音波水浴に２０秒間さらした。ビーズの最終濃度は０．５％であった。固体カルボジイミド（Ｓｉｇｍａ、　１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］−カルボジイミド、カタログＮｏ、Ｅ−７７５０）を加えて約５■／ｄの最終濃度とする。溶液を室温で１時間緩やかに回転させ、３回洗浄しくＰＢＳにより）、ペレット化する（１２０００ｘ　ｇ、３分、室温）。最終ビーズ溶液はプロ・ツキングバッフ？−中０．０１％〜０．５％（Ｗ／Ｖ）とする。

■、サンプルトレイプラスチックキュベツト（Ｅｌｋａｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、カタログ＃　１２７ −１０１０−４００）をブランドシアノクリレート接着剤を用いて溶媒溶接して、サンプルトレイを形成した。キュベツトの大きさは１Ｘ　１ｘ４．５　ｅｘであった。本実施例では、トレイに７個のくふた付き）キュベツトを配した。本実施例では、第一区画には、約０．１％吸着ビーズを含むブロッキングバッファー中の約１．０埒／ｄ濃度の不活性化ＨＩ　Ｖ　−１（Ｌｉｔｔｏｎ　Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ、　ＨＴＬＶ−３゜カタログ＃３７２２５　、　１１ＪＩ／ｄ、不活性化ＮＰ４０）　２．５ａｅを収容させた。第二区画には、洗浄溶液＜　ＴＢＳ／　Ｏ１３％Ｔｗｅｅｎ　）　２．５ｄを収容させた。第三区画には、ヒト血液検体を希釈するための混合溶液（約０．１％の吸着ビーズを含むブロッキング溶液２．５ｄ）を収容させた。第四区画には、洗浄溶液（ＴＢＳ／　０．３％Ｔｗｅｅｎ）　２．５ｄを収容させた。第五区画には、現像用接合溶液すなわち約０，１％の吸着ビーズを含むブロッキング溶液中で１：５００希釈したアルカリホスファターゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ　ｌ１ｉｕｎｏｒｅ−ｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｓ　、カタログ＃　１０９−５５７６）にカップリングさせたポリクローナルヤギ抗− ヒト免疫グロブリン２，５−を収容させた。

第六区画には、洗浄溶液（ＴＢＳ／　０．３％Ｔｗｅｅｎ　）　２．５ｄを収容させた。第七区画には、プレ基質洗浄溶液（ｐＨ１０のアルカリ性バッファー）２．５ａｄ！を収容させた。

■、アッセイチャンバ＃３のふたを取除いた。（夫々指に針を刺して採血した）血液１滴（血清１〜５Ｏ１１１を使用してもよい）を第三区画に滴下させた。各チャンバに夫々のふたをカバーした後、トレイ全体をゆっくり数回振盪し、血液とビーズ溶液とを混合した。

トレイを元の位置に戻してから、チャンバ＃１のふたを取除いた。血液をチャンバ＃３でインキュベートし、試験ストリップをチャンバ＃１に浸漬した。溶液を試験ストリップと共にゆっくり攪拌し、４２℃にて約２０分間インキュベートした。読取可能部分（ｒｅａｃｌａｂｌｅ）が最大限溶媒相に露されるように注意した。

ストリップを区画＃２に移し、約１０秒間洗浄した。ストリップを血液／吸着混合物を収容した区画＃３に移した。溶液をゆっくり混合し、ストリップを用いて４２℃にて約２０分間インキュベートした。ストリップを区画＃４に移し、約１０秒間洗浄した。

ストリップを区画＃５に移した。約５秒やさしく攪拌し、ストリップをインキュベートしたく１分毎攪拌）、約１０分間インキュベート後、ストリップを区画＃６に移し、約１０秒間ゆっくり攪拌した。ストリップを区画＃７に移し、約１０秒間洗浄した。

ストリップを取除き、軽く口を開いて過剰の液体を除去した。

基質（ｐＨ１０のアルカリ性バッファー中５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート、　Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｂ−０７６６）　１滴（約５０Ｉｉｌ）を各読取可能域に添加した。約１０分後、各読取可能域の呈色反応を陽性（ブルーカラー）又は陰性（無色）として記録抗−〇ＮＰ　１４Ａｂ（負のコントロール）を含有するセグメントが無色のままならば、アッセイは有効とみなされ得る。吸着ビーズは偽陽性反応を生ずる物質すべてを除去しなければならず、負のコントロール読取可能域はこの作用を確認するために使用された。抗−旧９セグメントは血液サンプル中に存在するヒト免疫グロブリンと結合しなければならない。この反応は陽性でなければならず、テスト試薬が作用しないときにはテストは無効とされる。ＨＬＶ−１セグメント中に陽性のブルーカラーが検出されたなら、血液サンプル中に旧ｖ−１に対する抗体が存在することが確認される。抗 −旧Ｖセグメントにおける陽性反応から、ウィルスがヒト抗−・旧Ｖ抗体と複合化して存在することが示唆される。

実施例２テストストリップの原型を、９６−ウェル細胞培養プレート（ｅｏｓｔａｒ、カタログ＃３０９６）のふたから構成した。ストリップを、ストリップが８個の隣接する円を含み各日を隆起した周辺リングが包囲するように、はんだごてＦで鋭いナイフ付属物を用いてふたから切り離した。ストリップを高＠看性の固体相（例えばナイロン膜又はニトロセルロース紙）を収容するための支持セグメントとして使用することもできるし、スティックをへこんだ反応域を含むように構成することもできる。ストリップをバッファー中で洗浄し、風乾させた。

ＤＮＰＩ　（ＣＢ６マウス１ＱＧ１　、ジニトロフェノールに対して特異的）及び抗−旧ｇＧ　（ＣＢ６マウスｌ１ＪＧ１．ヒト免疫グロブリンＧに対して特異的）と呼称されるモノクローナル抗体を使用した。各分析物に対して持具性を有するＨＡＢｓのカクテルを使用した。なお、ＨＡＢｓはＴｒｉｓバッファー食塩水（ＴＢＳ　、　０．１５ＭＮａｃ１．０．０５ＭＴｒｉｓ。

ｐＨ７，２）中で１００！４／−作成し、１０ｊ１１を指定の円形セグメントに直接適用したｅＨＩＶ−１（Ｌｉｔｔｏｎ　Ｂｉｏｎｅｔ［ｃｓ、旧ＬＶ−３，カタＯグ＃３７２２５　、　１埒／ａｔ！、不活性化ＮＰ４０　）は、ＴＢＳ中で２埒／ｄ作成した。１０／１ｌｌｊを指定の円形セグメントに直接適用した。

試薬の順序は次の通りであった。

抗−ヒトＩａＧ　（正のコントロール）　［上］ＨＩＶ−１（抗体を検出する）［中コ抗−ＤＮＰ　（負のコントロール）［下］スティックを４５℃オーブン中に水平に配置しく溶液サイドを上とする）、抗体を約３０分間乾燥した。スティックをブロッキング溶液（０，３％Ｔｗｅｅｎを含むＴＢＳ　、１＋ｙ／ａｄウシ血清アルブミン、　ＢＳＡ及び０．１％ナトリウムアジド）に最低１５分間入れた。

■、１１炙二区立立１成る種のサンプルの親和性により固体表面上の変性タンパク質に（又は固体表面に直接）結合する度合を最小限にするために、ラテックスポリスチレン粒子をモノクローナル抗−ＤＮＰ抗体に共役結合させた（ウィルス分析物が直接吸着されるか又は化学的に結合されるなら精製ヒトＴ−細胞血漿膜又はβ−ガラクトシダーゼのような組換えＤＮＡ関連タンパク質をラテックス粒子にカップリングさせることもできる）。更に、非特異的吸着剤を別の任意の固体相にコートしてもよく、或いはチャンバのウェル上に直接コー゛卜することもできる。抗体はＰＢＳ　（０，１Ｍリン酸！！！ｌｌｉ食塩液、　ＤＨ７，２、Ｐａｎｄｅｘ　ｔａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ｐｕｂｉｉｓｈｅｄＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｒｅｐｏｒｔ　、Ｎｏ、４　（１９８４）　Ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｏｆ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｔ。

ＬａｔｅＸ　ＰａｒｔｉＣｌｅＳ　ｌｌｙ　ｔｈｅ　Ｗａｔｅｒ−３ｏｌｕｂｌｅ　ＣａｒｂＯｄｉｉｌｉｄｅ　Ｍｅｔｈｏｄ”Ｈｉｃｈａｅｌ　Ｅｌｏｌｌｅｙ博士著）中で２００４　／　ｊｄ！作成した。抗体溶液を、洗浄しペレット化したラテックス粒子（Ｐａｎｄｅｘ、　Ｅｐｉｃｏｎカルボキシルポリスチレン粒子、カタログ＃　３１−０１０−１　）に添加した。溶液を粉砕し、超音波水浴に２０秒間露した。ビーズの最終濃度は０．５％であった。固体カルボジイミド（Ｓｉｇａ＋ａ　、　１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］−力ルポジイミド、カタログ＃　Ｅ−７７５０）を添加して、最終濃度を約５１４／ｄとした。溶液を空温でゆっくり１時間攪拌し、（ＰＢＳを用いて）洗浄し、３回ペレット化した（１２，０００ｘ　Ｑ　、　３分、室温）。最終のビーズ溶液をブロッキングバッファー中で０．０１〜０．５％（ｗ／Ｖ）作成した。

■、サンプルトレイプラスチックキュベツト（Ｅｌｋａｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、カタログ＃　１２７ −１０１０−４００）をシアノアクリレート接着剤を用いて溶媒溶接して、サンプルトレイを形成した。キュベツトの大きさは、１×１×４．５．であった。本実施例では、トレイに６個の（ふた付き）キュベツトを配した。第一チャンバには、ヒト血液検体を希釈するための混合溶液（約０．１％の吸着ビーズを含むブロッキング溶液２．５＋ｄ　）を収容させた。第二チャンバには、洗浄溶液（ＴＢＳ／　０．３％Ｔｖｅｅｎ　）　２．５ｄを収容させた。第三チャンバには、現像用接合溶液すなわちブロッキング溶液中で１　：　５００希釈したアルカリホスファターゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｉ＋ｎｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈＬａｂＳ、カタログａ　１０９−５５７６＞にカップリングさせたボリク〇−ナルヤギ抗−ヒト免疫グロブリン２．５ｍを収容させた。第四チャンバには、洗浄溶液（ＴＢＳ／　０．３％Ｔｗｅｅｎ　）　２．５ｄを収容させた。第五チャンバには、プレ基質洗浄溶液（ｐＨ１０のアルカリ性バッフｙ−）２．５ｄを収容させた。第六チャンバには、基質溶液（ｐＨ１０のアルカリ性バッファー中、５−ブロモ−４ −クロロ−３−インドリルホスフェート、　Ｓｉｇｍａカタログ＃　Ｂ−０７６６）　Ｉｄを収容させた。

■、アッセイサンプルトレイを４２℃水浴中で平衡化させた。面清若しくは血漿５成（５〜２００ハを使用することもできる）を第一チャンバに添加した。チャンバ１のサンプルを４２℃（２０〜４５℃でもよい）で３分間インキュベートした。、溶液をテストストリップと一緒にゆっくり攪拌し、４２℃で約４５分間インキュベートした。

読取可能域が最大限溶媒相に露されるように注意した。ストリップをチャンバ＃２に移し、約１〜１０秒間洗浄した。ストリ・ツブをチャンバ＃３に移した。約５秒間ゆっくり攪拌し、ストリップを４２℃で４５分間インキュベートした。ストリップをチャンバ＃４に移し、約１〜１０秒間ゆっくり攪拌した。ストリップをチャンバ＃５に移し、約１〜１０秒間洗浄した。サンプルトレイ全体を４２℃ 水浴から引き上げ、空温のベンチ上に置いた。ストリップをチャンバ＃６に移し、室温で１０〜２０秒間インキュベートした。各読取可能部分の呈色反応を陽性（ブルーカラー）又は陰性（無色）として記録した。

患者血清中の旧Ｖ−１に対する抗体の存在を調べるために、３つの二重富検試験を寅施した。

テストＡ：５０件の血清サンプル（カリフォルニア州オークランドのＰｅｒａｌｔａ　Ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｎｔｅｒ　）中の２５件のサンプルが、旧Ｖ−１抗体に対してウェスタンプロット（ＷＢ）陽性であった（主としてｇｐ４１のみ）。他の２５件のサンプルはＷＢ陰性ドナー血清プールのものであった。テストは、ＷＢ結果に比較して１００％のサンプルを陰性又は陽性として正確に同定した。

テストＢ：（マサチュセツツ州ボストンのＭａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓ−めスクリーンした）２１件のＨＩＶ−ＩＷＢＩ性血液サンプル及び７件の偽陽性血液サンプルを本テストで試験した。このテストでは、２１件の全てのＷＢ＠性サンプルが２３件のＷＢ陰性サンプルとともに確認された。７件の偽陽性サンプルはこのテストで陰性であった。

テストＣ：９件の旧Ｖ−ＩＷＢｌｉ性血液サンプル（ＮＹＵ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ）及び１０件のＷＢ陰性血液サンプルを本テストで正確に同定した。

２件の旧Ｖ−１抗体陽性精液サンプル、２件の唾液サンプル及び１件の尿サンプルも本テストで陽性であった。

実施例３患者血清中の旧Ｖ−Ｉ　Ｐ２４抗原の検出■、テストスティックの１％テストスティックは実施例１のものと同じである。このスティックに次のモノクローナル抗体、すなわち、ＩＦ８　（ｃａ＋ｙｐｔｅＢｉｏｃｈｅｍｉｃａ１社の抗−ＨＩＶ−Ｉ　ＧＡＧモノクローナル抗体、Ｉｐｃｉ）、抗−ＨｌｏＧ、および抗−ＤＮＰを吸着させる。ここで、これらのＨＡｂ（モノクローナル抗体）は、ＴｒｉＳで緩衝した生理食塩水で１００ＩＩＫ！／Ｉ！！、とじ、その１０成を円形の指定された部分に直接塗布した。

ＨＡｂの配列順は次の通りであった。

抗−ヒトＩ！；ＩＧ（正のコントロール）　［頂部］抗−ＨＩＶ　ＧＡＧ（Ｐ２４検出用）　［中央１１］抗−ＤＮＰ　（負のコントロール）［底部］このスティックを水平にして（溶液を上側にして）４５℃のオーブン中に入れ、約６０分間抗体を吸着させる。このスティックを最低１５分間ブロッキング溶液（ＴＢＳ、　５χウマ血清）中に入れた。

■・ｉｌ旦二Ｊある種のサンプルが示す、固体表面上の変性したタンパク質（または直接に固体表面）と結合して夾雑するヒト抗−ＧＡＧ　（可溶性または複合体として）の除去に影響を与える親和性の寄与を最小にするために、ポリスチレンラテックス粒子を組換えＨＩＶ−１ｐ２４　ＧＡＧタンパク質と共有結合させた。この組換え抗原はＰＢＳで１００〜２００４／ａｅとしである。洗浄してベレット化したラテックス粒子に抗原溶液を加えた。この溶液をすりつぶし、２０秒間超音波浴にざらした。ビーズの最終濃度は０．５％であった。

固体のカルボジイミドを加えて、最終濃度を約５ｑ／ｌｄとする。

この溶液を空温で１時間穏やかに回転し、洗浄しく　ＰＢＳ）、空温で三回ペレット化する（　１２．０ＯＯＸ　！？、３分）。最終的なビーズ溶液はブロッキング緩衝液で０．０１〜０．５％（ｗ／　ｖ）とする。

■、サンプルトレイ最初の区画には、上記の組換え抗原吸着ビーズを約０，１％含有するブロッキング緩衝液を２．５ｄ入れた。第二の区画には、洗浄用溶液（ＴＢＳ）を２．５ｔｅ入れた。第三の区画には、現像用の共役溶液、すなわちブロッキング溶液中で１　：　５００に希釈したアＪレカリ性ホスファターゼにカップルさせたポリクローナルのヤギ抗−旧Ｖ−Ｉ　ＧＡＧを２．５ｄ入れた。第四の区画には、洗浄用溶液（ＴＢＳ）を２．５−人れた。第五の区画には、プレ基質洗浄用溶液（ｐＨ１０のアルカリ性緩衝液）を２．５ｄ入れた。

■、アッセイ患者から得た試料（血液、血清、血漿）　１００／ＩＪを、解離緩衝液（ＩＭのＨＣｌ−グリシン緩衝液）を２０／ＪＪ！収容した浅いウェルに入れる。次に、この溶液をチャンバー＃１に移す。その溶液をテストストリップ（試験帯片）と共に穏やかに攪拌し、４２℃で約２０分間インキュベートした。読取可能な領域が溶媒相に確実かつ最大にさらされるように注意した。このストリップを区画＃２に移し、約１０秒間洗浄した。ストリップを区画：！：３に移【ノて約５秒間穏やかに攪拌した。このストリップを４２℃で約２０分間インキュベ−１＝　Ｌ、た１、ストリップを区画＃４に移し、約１０秒間穏やかに攪拌し７．′：。Ｃ ′、のストリップを区画＃５に移しτ約１０秒間洗浄した。ストリップを取り出し、軽くたたいて余分な液体を除去した。各々の読取可能領域に、基質（５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート、５ｉＱＩａ社カタログ＃Ｂ− ０７６６、アルカリ性緩衝液中、ｐＨ１０）３１滴（約５ｏＪｄ）加えた。

約１０分後、それぞれの読取可能領域の発色反応を陽性（青色）または陰性（無色）としで記録した。

１１表平２−５００５４３　（１２）第３図第今国国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．ヒト被検者から得た試料中の抗原性物質の存在を検出するための試験帯片であって、ａ）固体の支持体、ｂ）固体支持体上の第一の離散領域に固定された前記抗原性物質、ｃ）正のコントロールとして、固体支持体上の第二の離散領域に固定された抗− ヒト抗体、およびｄ）負のコントロールとして、固体支持体上の第三の離散領域に固定された、ヒト被検者中に自然には存在しない抗原に対する抗体からなる前記試験帯片。
２．さらに、固体支持体上の第四の離散領域に固定されていて免疫複合体および生来のヒト抗体の形態にある、前記抗原性物質に対する抗体ペースの試薬も含んでいる、請求項１の試験帯片。
３．前記抗原性物質がウィルスまたはウィルス性タンパク質である、請求項１の試験帯片。
４．前記抗原性物質が、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−１のＧＡＧタンパク質、ＨＩＶ− １のＥＮＶ糖タンパク質、ＨＩＶ−１のＰＯＬタンパク質、ＨＴＬＶ−１のＧＡＧタンパク質、ＨＴＬＶ−１のＥＮＶ糖タンパク質、ＨＴＬＶ−１のＰＯＬタンパク質、またはそれらのエピトープである、請求項３の試験帯片。
５．固体の支持体が、ガラス繊維濾紙、ニトロセルロース、焼結ガラス、プラスチック、合成ポリマー、セルロース、酢酸セルロース、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、またはポリフッ化ビニリデンからなる、請求項１の試験帯片。
６．抗体をペースとする試薬が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、一価もしくは二価の抗体断片、ハイブリッド抗体、ヘテロ官能性抗体、または遺伝子的に操作されたかもしくはクローン化された抗体からなる、請求項２の試験帯片。
７．抗ーヒト抗体がモノクローナル抗体である、請求項１の試験帯片。
８．ヒト被検者中に自然には存在しない抗原が、合成有機分子である、請求項１の試験帯片。
９．合成有機分子がジニトロフェノールである、請求項８の試験帯片。
１０．前記抗−ヒト抗体、または自然には存在しない抗原に対する前記抗体が標識されている、請求項１の試験帯片。
１１．抗体をベースとする試薬が標識されている、請求項２の試験帯片。
１２．ヒト被検者から得た試料中の抗原性物質の存在を検出するための試験帯片であって、ａ）固体の支持体、ｂ）固体支持体上の第一の離散領域に固定されていて免疫複合体および生来のヒト抗体の形態にある、前記抗原性物質に対する抗体ベースの試薬、ｃ）正のコントロールとして、固体支持体上の第二の離散領域に固定された抗− ヒト抗体、むよびｄ）負のコントロールとして、固体支持体上の第三の離散領域に固定された、ヒト被検者中に自然には存在しない抗原に対する抗体からなる前記試験帯片。
１３．ヒト被検者から得た試料中の抗原性物質の存在を検出するための方法であって、ａ）試験しようとする試料中に存在する物質が、試験帯片上に存在する抗体および組換え抗原などのタンパク質に非特異的および特異的に結合してしまわないようにし、こうして、誤った結果を回避するように、前記試料を予備処理し、ｂ）得られた予備処理済の試料を、請求項１または請求項２の試験帯片と接触させ（ただし、この試験帯片に固定されている前記抗原性物質が、この抗原性物質に対する抗体であって試料中に存在するいかなる抗体とも複合体を形成するような条件下で、かつ、請求項２の試験帯片の場合には、試料中に存在する抗原性物質がその試験帯片上に存在するそれに対する抗体に結合するような条件下で行なう）、ｃ）その後、前記抗原性物質に対する抗体であって複合体を形成しなかった抗体を除去するように試験帯片を処理し、ｄ）得られた処理済の試験帯片を、標識された抗−ヒト抗体と接触させ（ただし、この抗−ヒト抗体が、試験帯片に固定されているいかなるヒト抗体とも複合体を形成するような条件下で行なう）、ｅ）試験帯片に固定されている標識された抗−ヒト抗体の存在を検出し、それにより、試料中の前記抗原性物質の存在を検出し、ｆ）こうして得られた検出の正確さを、試験帯片上の正および負のコントロールによって確認することからなる前記方法。
１４．ヒト被検者から得た試料中の抗原性物質の存在を検出するための方法であって、ａ）試験しようとする試料中に存在する物質が試験帯片上に存在する抗体などのタンパク質に非特異的に結合したり、またヒト抗体が前記抗原性物質に特異的に結合したりしてしまわないようにし、こうして、誤った結果を回避するように、前記試料を予備処理し、ｂ）得られた予備処理済の試料を、請求項１２の試験帯片と接触させ（ただし、この試験帯片に固定されている抗体ペースの試薬が、試料中に存在するいかなる抗原性物質とも複合体を形成するような条件下で行なう）、ｃ）得られた処理済の試験帯片を、前記抗原性物質に対する標識された抗体と接触させ（ただし、この標識された抗体が、試験帯片に固定されているいかなる抗原性物質とも複合体を形成するような条件下で行なう）、ｄ）試験帯片に固定されている前記抗原性物質に対する標識された抗−ヒト抗体の存在を検出し、それにより、試料中の前記抗原性物質の存在を検出し、ｅ）こうして得られた検出の正確さを、試験帯片上の正および負のコントロールによって確認することからなる前記方法。
１５．前記抗原性物質がウィルスまたはウィルス性タンパク質である、請求項１３または１４の方法。
１６．試料が血液、血清または尿である、請求項１３または１４の方法。
１７．ステップ（ｅ）の確認が標識された抗−ヒト抗体と試験帯片を接触させることからなり、ただし、この接触はこの標識された抗−ヒト抗体が試験帯片に固定されているヒト抗体に結合するような条件下で行なう、請求項１３または１４の方法。