JPH02295986A - 細胞生長阻害性の大環状ラクトン - Google Patents

細胞生長阻害性の大環状ラクトン

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JPH02295986A
JPH02295986A JP2067412A JP6741290A JPH02295986A JP H02295986 A JPH02295986 A JP H02295986A JP 2067412 A JP2067412 A JP 2067412A JP 6741290 A JP6741290 A JP 6741290A JP H02295986 A JPH02295986 A JP H02295986A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、予期せぬ細胞生長阻害作用をもつことが見出
されたところのコンブレタスタチンＤ−１（Ｃｏｍｂｒ
ｅｔａｓｔａｔｉｎ）及びコンブレタスタチン０−２と
命名された新規なカフラン（Ｃａｆｆｒａｎｅ）大環状
ラクトンの単離と解明に関するものである。
（従来の技術） シクンシ科（Ｃｏｍｂｒｅ　ｔａｃｅａｅ）に属する熱
帯及び亜熱帯の潅木や樹木は、有用な生物活性をもつ新
規物質の実用的に未開拓の源泉である。
例えば、シクンシ属の２５種（全体の１０％）は、アフ
リカやインドで、ハンセン病治療の原始療法として用い
られており（ゼー・エム・ワットＪ１Ｍ、Ｗａｔｔほか
“南部及び東部アフリカの薬用及び毒性植物”、リビン
グストン・リミテッド、ロンドン、１９６２年ｐ、１９
４）　（シクンシ属の根）、また癌に対しても用いられ
ている（シー・ラティフオリウム）。しかし、主として
シ・シフランツムのほか、極めて少数のものしか科学的
に研究されていない（Ａ、Ｕ、Ｏｇａｎ：プランタ・メ
ゾイカ、１９７２、■、２１０：ニス・ニー・マルコル
ムＳ、Ａ、Ｍａｌｃｏｍほか：ロイディア、１９６９、
共、５１２；シー・ゼイリア〔さそりによる中毒〕　；
及びケー・ムヮルカに、ＭｗａｕｌｕｋａほかＢｉｏｃ
ｈｅ＊、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｐｆｌａｎｚｅｎ、１９
７５、罠、１５）。
アメリカの国立癌研究所（ＮＣＩ）の世界的規模での植
物探査の結果としての、コンプレタム・カフラムＣｏｍ
ｂｒｅｔｕｓ　Ｃａｆｆｒｕｍ　（及びＣ，Ｓａｌｉｃ
ｉｆｏｌｉｕｍ）のネズミＰ３８８リンパ細胞白血病（
ＰＳ系）阻害成分について研究が行われた。南アフリカ
では、この樹木は、ズール族によって　Ｍｄｕｂｕ”（
お護りとして用いる）として知られている。また、到る
ところで「叢林柳」　「潅木柳」又は「ローイルブラー
ル」と呼ばれている。その材部は、アフリカの農場で、
主として燃料などに用いられている。面白いことには、
この樹木の果料からの蜜は、極めて苦いが、人間が摂取
しても大丈夫であると記録されている。
（発明の構成） 南アフリカ産のシクンシ科の樹木であるところのコンプ
レタムカフラム（Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ　ｃａｆｆｒｕｍ
）から、新しい細胞生長阻害物質を単離し、構造を決定
した。これらの物質はここにコンプレタスクチン０−１
及びコンプレタスクチンＤ−２と命名されるが、予想外
のそして尋常でない大環状ラクトンであって、ＢＤｓｏ
がそれぞれ３．３および５．２μｇ／ｍ６に相当するＰ
Ｓ細胞系活性をもっている。
これらの物質の構造は次のとおりである。
（コンプレタスクチンＤ−１） これらは何れも次のようにして抽出する。
まず、コンプレタムカフラム（Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ　Ｃ
ａｆ−ｆｒｕｓ）の幹を１：１の比でメチレンクロリド
で抽出し、抽出液をヘキサンとメタノール−水で分配し
、次いで３：２のメタノール−水にｖａｖｔ、、、メチ
レンクロリドで抽出する。これを、セファデックスＬＨ
−２０による立体排除クロマトで分離して対応する両分
とする。これから特定物質を単離するため、下記に例示
するように処理を行う。
従って、本発明の主な目的は、コンプレタムカフラム（
Ｃ，Ｃａｆｆｒｕｍ）の新規な細胞生長阻害性物質を単
離し、解明し、そして合成手段によって、効果的かつ信
頼のおける同等品を提供することである。
本発明の他の目的は、この新規な細胞生長阻害性物質の
一つを必要な医薬活性成分として含有するところの、新
規かつを用な医薬製剤を提供することにある。
（好ましい実施態様の説明） 本発明は、コンブレータスタチンＤ−１及びＤ−２と呼
ぶカフラン大環状ラクトンの単離と解明に関するもので
、両物質はそれぞれＥＤｓ。＝３．３及び５．２μｇ／
ｌａｎに対応するＰＳ細胞系活性を示す。これらの物質
は次の一般式をもつ。
Ｏ コンプレタムカフラム（Ｃ，Ｃａｆｆｒｕｍ）　　７７
にｇから得たメチレンクロリド−メタノール抽出液は、
まずＪ、　Ｎａｔ、　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　％　１９Ｂ？
、５０５１１９及びＣａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　１９
Ｂ？、６５１．２３９０に記載のようにして分離する。
コンブレタスタチンＡ−２へ導かれるとして記載されて
いる分画は、次いで、ヘキサン−クロロホルム−アセト
ン（３：２：０．２５）を溶離液として使用するシリカ
ゲルフラ・ノシュクロマト、分配クロマト（セファデッ
クスＬＨ−２０、ヘキサン−トルエン−メタノール＝３
　：　１　：　１）及びゲル透過クロマトの一連を使用
するｐｓ／＜イオアッセイにより分離して、コンブレタ
スタチン０−１を２．３ｘｌ（Ｉ’％の収率で得る。収
量１８０ｍｇ、針状結晶（アセトン−ヘキサン）、５ｐ
ｉｅｏ−１８１℃、Ｒｆ　Ｏ，４４（Ｓｉ０ｇプレート
；ヘキサン−酢酸エチル−１：１）、〔・α）　ｏ−１
００℃（Ｃ−０、０１５、ＣＩＣ１３）、 ＨＲ８１ＭＳ　（＋ｓ／ｚ）３１２．０９９８（Ｍ”　
、１００χ、Ｃ＋５ＨｔｈＯｓとしての計算値：３１２
．０９９Ｂ）、２６７．１１０１５（＋−ＣＯＪｓ２２
χ）、２５３．０８６２（Ｍ”　　−ＣＨ５ＣＯｚ１４
２χ）、２２７．０７１２（Ｐ−ＣＪｓＯ□１．６６χ
）、１３１．０４９６　（１５χ）、１２２．０３６８
（６χ）、１１９．０４９７（１０χ）　、ＵＶ（ＣＩ
Ｃ１３）　、Ａ−ｘ　２２４（Ｅ１５２１５）、２７８
（３０６８）ｎａｐ；　ＩＲ（ＮａＣ１）λ、、、　３
４３９．３４３１．３４２２．３４１５．１７３５．１
５１８．１５０７．１４３８．１３６２．１２８８．１
２１６．１１５９．１１４２　ｃ曽−’、　１３Ｃ−Ｎ
ＭＲ及び’Ｈ−ＮＭＲアサインメントは、次の表１に示
すとおりである。
糞土 １３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ　、　　δ、ＣＤＣ１１
）　：２６．９７（Ｃ−１５）　　、３１．２４（Ｃ−
１６）　　、５２．９９（Ｃ−３）、５５．８４　（Ｃ
−４）、６２．５６　（Ｃ−２）　　、　１１２．２４
（Ｃ−２０）、１１５．３８（Ｃ−１２）、１２２．０
３　　（Ｃ−１３）、１２３．１４（Ｃ−１９）、１２
３．９５（Ｃ−７）　　、１２６．３４　　（Ｃ−１８
）、１２８．８３（Ｃ−６）　　、１３１．９０　（Ｃ
−５）、１３２．４４　　（Ｃ−１４）、１４２．６２
（Ｃ−１１）、１４９．０９（Ｃ−１０）、１５６．０
１　　（Ｃ−８）　　、１７２．５３（Ｃ−１７）ｐｐ
ｍ・ ’Ｈ−ＮＭＲ（４００Ｍ）ｌｚ　、　　δ、ＣＤＣｌ５
）　：２．１３４（ＩＩＩＳｄｄｄ　、　Ｊ＝１７．５
．１２．５．１．５）１ｚ　　。
Ｈ−１６α）　　、２．３９８（ＩＨＳｄｄｄ　、、Ｊ
−１７，５，６，０，１，５０）ｔｚ、　Ｈ−１６β）
　、２．５８３（１）１．　ｄｄＳＪ−１６，８，６，
０Ｈｚ　、　Ｈ−１５α）　　、３．１１２（１）１．
　ｄｄ、　Ｊ−１６，８，１２，５Ｈｚ、　Ｈ−１５β
’）　　、３．４８３（ＩＨ％ｄｄｄ　、　Ｊ＝９．２
．４．５．４．５　ＨｚＳＲ−３）、３．８７１（ＩＨ
，ｄｄ、、Ｊ−１２，０，９，２Ｈ２、１（−２α）　
　、４．２６４（１Ｂ、　ｄｄ、　Ｊ＝１２．０．４．
５Ｈｚ　、　Ｈ−２β）　、４．３５５（ＩＨ，ｄ　、
　Ｊ−４，５Ｈｚ、ト４）、４．９４０　（ｌｔｌ　Ｓ
ｄ　、　Ｊ−１，８Ｈｚ　、　Ｈ−２０）、５．４８６
　　（１８、ｂｒｓ　　、ＯＨ）　　、６．６１７（１
）１．　ｄｄｄ　。
Ｊ＝８．２．１．８．１．５Ｈ２５Ｈ−１３）　　、６
．８３６（ＩＨＳｄ　。
Ｊ＝８．０　Ｈｚ、Ｈ−１２）　　、７．０８１（ＩＨ
，ｄｄ、Ｊ＝８．０　．２、ＯＨｚ　　５）Ｉ−１９）
　　、７．１０４（ＩＨ，、ｄｄＸＪ＝８．０　．２、
ＯＨｚ　、　Ｈ−７）、７．３６２（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ
−８，０、２，０Ｈｚ　。
Ｅｌ−１８）　　、７．５４９（ＩＨＸｄｄ％Ｊ＝８．
０　　、２．０Ｈｚ　　、　Ｈ−６）。
コンブレタスタチンＤ−１のほうのラクトンのマス・ス
ペクトルのデータは、このものが１１個の二重結合をも
ち、分子式はＣ＋ｓ）Ｉ＋ｈＯｓであることを示す、２
個の芳香環のほかには、遊離や共役の二重結合がよいの
で、この分子は２個の付加的な環とラクトン（ＩＲ：　
１７３５ｃｍ−’）を有することがわかる。その一つの
環はエポキシドとして存在し、他方は骨格環系を形成す
る。　’Ｈ，’Ｈ−ＣＯ３Ｙ法を用いて’Ｈ−ＮＭＲス
ペクトルをアサインした。４つの遊離カップリングパタ
ーンが認められた。長いレンジ（５個の結合）のカップ
リングが、Ｈ−１６（αもβも）とト１３の間に認めら
れた。すべてのブリトンが、ＮＯＥ実験（認められたＮ
ＥＯのマグニチュードは１−６％であった）をもとにし
て、アサインされた。プロトン−２Ｏ（６４，９４０）
は、炭素スペクトル（’Ｈ、”Ｃ−Ｃ０５Ｙ）において
６１１２．２４と相関していた。芳香族プロトンのこの
ような例外的遮蔽は、他の芳香環の遮蔽コーンへの入射
に帰せられる。
この予測とコンブレタスタチンＤ−１の構造の証拠は、
Ｘ線結晶構造決定とこのラクトンのドライディング（Ｄ
ｒｅｉｄｉｎｇ）モデルを調べることにより得られた。
２個の芳香環の間の限定された回転は、このモデルで明
瞭であった。　ＮＯＥ実験は、溶液中では大きな環の最
も安定な配座は、また、上に示したような構造（すなわ
ち、ラクトンのカルボニル基の環が外れていること）中
に存在することを示唆している。
コンブレタスタチンＤ−１の絶対配置の決定において、
エポキシド環の絶対配置が、エポキシドの表２に示され
るＣＤスペクトルにおけるコツトン効果曲線のサインを
、（ＩＲ、２Ｒ）−（＋　）−１−フェニルプロピレン
オキシド及び（Ｉｓ　、２Ｓ）−（−）−１−フェニル
プロピレンオキシドのコツトン効果曲線と比較すること
によって、（３Ｒ，４Ｓ）とアサインした。
ＣＤスペクトルのアサインメントを表２に示す。
、表」− ＣＤスペクトル： ＣＩ（ｉｏＨ： ε（ｎ＋＊）　０　（３０Ｂ）、＋１３．４　（２８５
）、０　（２７５）　、＋５．９　　（２６７）　　、
　−３４，２（２４７）、　０　　（２４０）、、　（
１１？　　。
２Ｒ）−（＋）−フェニルプロピレンオキシド、ｔ　（
ｎｍ）　０　（２７Ｂ）、＋０．１５　（２７１）、＋
　０．０７　（２６７）、＋０．１６（２６３）　、＋
０．０９　（２５９）、＋０．１１　（２５７）、０　
（２３５）、　、（Ｉｓ　、　２５）−（−）−１−フ
ェニルプロピレンオキシド、 ｇ　（ｎｍ）　Ｏ（２７Ｂ）、−０，１５（２７１）、
−０，０７（２６７）、−０，１６（２６３）　、−０
，０９（２５９）　、−０，１Ｈ２５７）、０　（２３
５）　。
本発明の一実施態様において、コンプレタムカフラム（
Ｃ，Ｃａｆｆｒｕａ＋）の乾燥した幹７７Ｋｇを小さく
砕き、室温で１１日間メチレンクロリド−メタノール（
１：１）３２０リツトルで抽出する０次いで、メチレン
クロリド相を水（約２５％容量）を加えることにより分
離する。この抽出を、メチレンクロリド−メタノール（
１；　１）を更に３２０リツトル使用して室温で１１日
間行い、前と同様に、水を加えてメチレンクロリド相を
分離する。
このようにして得た２つのメチレンクロリド相を合併し
、濃縮して１．４２にｇの粗抽出物を得る。
このもののｌ　ＯＯｓｇ／Ｋｇ投与によるＰＳ　（Ｐ２
Ｈ４）のイン・ビボでの延命率は２７％で、ＰＳ　ＥＤ
ｓ。は５．１ルｇｏｍｌであった。
メチレンクロリド分画液を、ヘキサン１８リツトルとメ
タノール−水（９：１）１８リツトルで５回分画し、ヘ
キサン相を分離した後に、メタノール−水を３：２の濃
度に調節し、メチレンクロリド１８リツトルで抽出する
。溶媒からのメチレンクロリド分画は、２５〜３０■ｇ
／Ｋｇの投与で、インビボＰＳ　（Ｐ２Ｈ４）で３８〜
４１％の延命率を示し、主な細胞生成を阻害する。（Ｈ
Ｄ％。　０．２１ルｇ／［０゜ メチレンクロリド画分を、次いでメタノール（７Ｘ　５
００ｍ１）に溶かし、セファデックスＬＨ−２０（７−
Ｘ２．５Ｋｇ）のカラムで立体排除クロマトグラフィー
で分離する。
ｐｓ活性（１２，５ｍｇ／Ｋｇで延命率４１％、ＥＤ、
。羽０．１８ｇｇ／ｙａｌ）のフラクションＡを、セフ
ァデックスＬＨ−２０（２，５にｇ）上の分配クロマト
グラフィーによりヘキサン−トルエン−メタノール（３
：ｌ：１）溶液に分離させて、活性分画（０，５４ｇ、
ＰＳ　Ｅ口ｓｏ　１．９ルｇ／［０を得る。これをシリ
カゲルフラッシュカラムで再クロマト処理し、ヘキチン
ークロロホルムーアセトン（１２；８：１）で溶離して
コンブレタスタチン０−１を得る。
フラクションＡを、さらにセファデックスＬ）Ｉ−２の
カラム上で分離して、第２の活性画分＜１．９７ｇ　、
　ＰＳ　ＢＤＩ。１．８　ｘ　１０−”μｇ／ｒｓｊ）
を得る。これヲ、ヘキサン−トルエン−メタノ２ル（３
：　１　：１）に再溶解し、溶液を口過し、０液をセフ
ァデックスＬＨ−２０カラム上でヘキサン−トルエン−
メタノール溶媒系を用いてクロマト処理し、得られた活
性成分（１，３５ｇ　１ＰＳ　ｆｉＤｓ。２．４　ｘ　
１０−”　ｐｇ／＋ｊりをヘキサン−酢酸エチル（１：
　１）に溶かし、シリカゲルのカラム（６０ｘ　２．５
ｃ１１）でクロマトにかける。
４：１−１：１のヘキサン−酢酸エチルを用いての勾配
溶出により、３：ｌのところで、次のＰＳ活性物質（０
，７ｇ、　ＥＤｓ。１．Ｏｘ　１０−”、ｌＪｇ　／＋
／りを得る。これをヘキサン−酢酸エチルの９＝１→４
：ｌの勾配を用いて、シリカゲルの長いカラム（１００
ｘ　１．２−ｇ）上で、アセトン中で再クロマト処理す
ると、４；１の分画中にコンブレタスタチンＤ−２の純
粋菌（５，８ｍｇ、乾燥植物からの収率は？、５　ｘｌ
Ｏ−’％、ＰＳ　ＩＥＤｓｏ　５．２７１ｇ　／ｓ＋ｊ
り（アセトン−ヘキサンから結晶したもののｍｐは１４
８〜１５１℃）を得る。この物質のＩＲ及びＮＭＲデー
タを実施例４に示す。
細胞の生長阻害又は抗新生物側として用いる天然のコン
プレタスクチン活性成分は、当業者に良く知られており
、ここには詳述する必要のないところの確立された方法
と医薬材料を用いて、容易に適当な単位投与形態とする
ことができる。
幾つかの典型的な単位投与形態の製法を以下に説明する
が、これは本発明を限定するものではない。
コンブレタスタチンＤ−１、Ｄ−２、その合成による同
効物及びその薬理的に活性で生理的に許容しうる誘導率
は、新生物病と関連する細胞の生育阻害により治療不能
な該疾患にかかっているヒトや動物の治療に有用である
。
そのような疾患の典型的なものは、急性骨髄法白血病、
急性リンパ球白血病、慢性メラノーマ、肺の腺癌、胸部
癌、大腸癌、卵巣癌、ぼうこう癌などである。
投与用量は、次のような要素によって決まる。
すなわち、新生物病の特定とそれに関連する特異体質細
胞生成：年齢、健康状態及び体重の如き患者のタイプ；
現在受けている治療があればその種類；及び治療の穎度
と比率。
例えば、患者の体重にｇ当たりの活性成分のＢ数で表し
た用量は、静脈注射においては、０．１から約２抛ｇ／
Ｋｇ　、筋肉内注射では１から約５０ａ＋ｇ／Ｋｇ、経
口投与では５から約１００　ｍｇ／にｇ、経鼻吸入では
５から約１００ｍｇ／にｇ、そしてエアロゾルの場合は
５から約１００ｍｇ／Ｋｇである。
濃度で表すと、局所への用途、例えば経皮、経鼻、経咽
頭、経気管支、経膣、経直腸又は眼部からの投与では、
本発明の組成物中の活性成分は、約０．０１から約５０
−／−％、好ましくは、約１から約２０−／−％であり
、腸管外用途においては、約０．０５％から約５０ｗ／
−％であり、又は好ましくは、約５−７ｗ％から約２０
ｗ／ｗ％である。
本発明の組成物は、好ましくは、単位用量形態例えば、
活性成分の適量を含む錠剤、カプセル、ビル、粉末、顆
粒、座剤、無菌の腸管外用溶液又は懸濁液、経口の溶液
又は懸濁液の形でヒトや動物に投与する。
経口投与のためには、固形又は液状の単位用量形態が製
造される。
粉末剤は、活性成分を適当な細かいサイズに粉砕し希釈
剤と混合することにより極めて容易に得られる。希釈剤
は、例えば乳糖やデンプンのような可食性の炭水化物で
あって良い。好ましくは、蔗糖のような甘味剤が、賦香
油と同様に用いられる。
カプセル剤は、上述のような粉末をゼラチン製のカプセ
ルに充填して製造する。好ましくは、充填の操作を助け
るために、充填に先立って、タルク、ステアリン酸マグ
ネシウム、ステアリン酸カルシウム等のような滑剤を粉
末に加える。
ゼラチンの軟カプセル剤は、活性成分のスラリーを、植
物油、軽質の液状ペトロラクタムその他の不活性油やト
リグリセリドと共に機械的カプセル化で製造する。
錠剤は、粉末混合物を準備し、顆粒化又はスラッグ化し
、滑剤を加え、圧縮して製造する。粉末混合物は、活性
成分を混合し、希釈剤や基剤、例えばデンプン、乳糖、
カオリン、リン酸カルシウムなどと共に、適宜細粒化し
て製造する。粉末混合物は、結合剤、例えばコーンシロ
ップ、ゼラチン液、メチルセルロース液やゴムのり゛で
湿らせ、次いで網目を強制通過させて顆粒とすることが
できる。顆粒化する代わりに、粉末混合物を、例えば錠
剤機の中を通し、得られた不完全な形の錠剤を小片（ス
ラグ）に粉砕してスラグ化することができる。
スラグには、ステアリン酸、ステアリン塩、タルクや鉱
物油を添加して、錠剤成形用の型に付着するのを防ぐた
め潤滑化することができる。潤滑化された混合物を圧縮
して錠剤とする。
好ましくは、錠剤は、シェラツクの封止コーティングや
腸溶コーティング、糖やメチルセルロースのコーティン
グ及びカルナウバろうのポリッシュ・コーティングから
成る保護コーティングを施すことができる。
シロップ、エリキシル、懸濁液のような経口投与のため
の液状の単位用量形態（その−匙分が、一定量の活性成
分を含むようにしたもの）とすることもできる。水容性
の形態は、糖と香料と保存剤と一緒に水性ベヒクル中に
溶解してシロップとすることによって製造する。エリキ
シルは、水性アルコールのベヒクルを適当な甘味料と香
料と共に用いて製造する。
懸濁剤は、アラビアゴムやトラガカントやメチルセルロ
ースのような懸濁用剤を用い、適当なベヒクルと共に不
溶性の形でつくることができる。
腸管外投与のために、活性成分と無菌のベヒクル（水が
好ましい）を用いて、液状の単位用量形態を製造する。
活性成分は、その形態や濃度に応じて、ベヒクル中に懸
濁させるか、又は溶解させる。溶液を作るには、水溶性
の活性成分を、注射用の水に溶かし、適当なバイアル又
はアンプルに封入する前に無菌口過する。好ましくは、
ベヒクル中に佐剤、例えば局所麻酔剤、保存剤や緩衝剤
を溶解させる。腸管外用懸濁剤は、活性成分を、ベヒク
ル中に溶解させずに、懸濁させ、そして滅菌工程は、口
過によって完結しない点を除けば、実質的に上記と同様
にして製造される。腸管外用懸濁剤に関して、活性成分
は、無菌ベヒクルに懸濁する前に、好ましくは、エチレ
ンオキシドと接触させて滅菌する。好ましくは、界面活
性剤又は湿潤剤を組成物に含有させ、活性成分の分布を
均一にする。
経口及び腸管外投与のほかに、直腸や膣からのルートも
使用できる。活性成分は、座剤という手段で投与できる
。融点が、はぼ体温であるか、又は容易に溶けるベヒク
ルが用いられる。例えば、カカオ脂や種々のポリエチレ
ングリコール類（カーボワックス）が、高い効果をもつ
座剤用のベヒクルとして使用できる。
鼻内滴下のためには、活性成分と適当な医薬用ベヒクル
（好ましくは、パイロジエンを含まない水）を用いて、
液状の単位用量形態を製造する。
もし投与法として吸入が選択されたときは、乾燥粉末が
処方し得る。
エアロゾルとしての用途のためには、活性成分を気体の
又は液化した噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタ
ン、二酸化炭素、窒素、プロパンなと）及び、必要又は
所望に応じて、通常の佐剤（例えば、共溶媒や湿潤剤）
と共に、加圧エアロゾル容器中に封入して製造する。
本願明細書において使用する「単位用量形態」という用
語は、ヒトや動物の単位用量として適当な物理的に個々
の単位を意味し、ここに各々の単位は、必要な医薬用希
釈剤、担体又はベヒクルと一緒になって所望の治療効果
を生ずるように計算された量の活性成分を含有するもの
である。
本発明の新規な単位用量形態の明細は、次の条件により
指示され直接に依存する。すなわち、（ａ）活性成分の
特性及び特定の所望の治療効果、及び （ｂ）この明細書に開示しであるように、ヒトにおける
治療用途のための活性成分を配合する技術に本質的な限
界。
これらは、本発明の特徴である。本発明における適当な
単位用量形態の例としては、錠剤、カプセル剤、トロー
チ、坐剤、粉末剤、カシ二側、茶さじ用剤、大さじ用剤
、滴剤、アンプル剤、バイアル剤、以上何れかの複合形
態、その他ここに述べられたような他の形態がある。
細胞の生長阻害剤として用いられる活性成分は、それ自
体容易に入手でき、そして既に確立され、ここには再掲
する必要のない方法で製造できるような医薬用材料を用
いることによって、容易に単位用量形態として作ること
ができる。
本発明の理解を更に助けるために、但し本発明を限定す
る意味ではなく、本発明を一層明瞭に開示するための実
施例を以下に掲げる。
叉旌更−上（植物分類学） アフリカ産樹木のコンプレタムカフラム（Ｃ。
Ｃａｆｆｒｕ＋ｗ）の幹を、ジテン　デイ−、ダウラス
、マシュー　エ　サフネス及びジェームズ　ニー、デュ
ーク博士に率いられたナショナル・キャンサー・インス
ティテエート及び合衆国農務省の研究プログラムの一部
として採取し同定した。この研究で使用した幹の部分（
８８１７３７３）は１９７９年に得られたものである。
大崖班−１（抽出と溶媒分配） Ｃ，Ｃａｆｆｒｕ−の乾燥した幹（７７Ｋｇ）を粉砕し
、に１のメチレンクロリド−メタノール３２０リットル
を用い室温で１１日間抽出する。２５容量％の水を加え
てメチレンクロリド相を分離し、そして上述のようにし
て、１：１のメチレンクロリドーメ、タノール３２０リ
ットルを用いて植物の抽出を繰り返す。メチレンクロリ
ド相を合併し、濃縮して１．４２Ｋｇの粗エキスを得る
。このものは、ＰＳ　ＥＤｓｏ　５．１　ｐｇ　／ｆｆ
１ｌ　”？：：あり、１００１ｍｇ／Ｋｇ投与でインビ
ボでＰＳ　（Ｐ３ＢＢ）の２７％延命率を示す。
メチレンクロリド分画溶液をヘキサン１８リツトルとメ
タノール−水（１１）１８リツトルの間で５回分配する
。ヘキサン相を分離してから、メタノール−水を３：２
の濃度に調節し、メチレンクロリド１８リツトルで５回
抽出する。ヘキサン抽出物（６０２，３ｇ）は、インビ
ボでＰｓ不活性であり、細胞系にはＥＤＳ。２．４μｇ
／ｍｌで限界的に活性である。インビボでｐｓ活性（２
５−５０ｔｍｇ７Ｋｇで延命率３８〜４１％）で、主要
な細胞生成阻害（ＥＤｓｏ　　Ｏ，２１１μｇ　／１ａ
ｉｌ＞を示す部分ハ、２９　ｈＸ　分配におけるメチレ
ンクロリド分画（８２７，９ｇ）中に濃縮されている。
Ｕ−コンブレタスタチンロ−１の単離 溶媒分配におけるメチレンクロリド分画をメタノール（
５００ａｌｘ５）　に溶解し、サラニセファデックスＬ
ｌ（−２０（２，５にｇｘ２）のカラムを用いての立体
排除クロマトグラフィーで分離する。
ｐｓ活性（１２，５ｍｇ／Ｘｇで４１％の延命率）及び
ＥＤｓ。
０．１８ｇｇｌ量ｉのフラクションＡＣ２８，６ｇ）を
、セファデックスＬＨ−２０（２，５にｇ）を用いた分
配クロマトグラフィーによりヘキサン−トルエン−メタ
ノール（：１１：ｌ）溶液中へ分離すると、０．５４ｇ
（７）活性７　ラクシａ　７　（ＰＳ　ＥＤｓ。１．９
μｇ−／［０を得る。これを０．０４−０．６３μのシ
リカゲルのフランシェカラム（３，Ｏｘ　２０．Ｏｃｍ
）上で再クロマト処理する。カラムをパンクし、ヘキサ
ン−クロロホルム−アセトン（３：１０．２５＞で溶出
すると２．３ｘｌＯ−’％収率で、コンブレタスタチン
Ｄ−１１８０ｍｇを得る。アセトン−ヘキサンで再結晶
すると、ｍｐ１８０　１８１℃の針状晶となる。
スＪ１阻−」エ　コンブレタスタチンＤ−２の単離ヘキ
サン−トルエン−メタノール（３：　１　ｊ　１）を用
いての分配クロマトグラフィーによりセファデックスＬ
Ｈ−２０（２，５Ｋｇ）のカラムで、２８．６　ｇのフ
ラクションＡをさらに分離し、１．９７ｇの活性フラク
ション（ＰＳ　ＥＤｓｏ　１．８　ｘ　１０−”ｐｇ　
／ｍｌ）を得る。これを２０ｍｊ！のヘキサン−トルエ
ン−メタノール（３：　１　：　１）に再溶解し、口過
する。
０液を、同じ溶媒系を用い、２００ｇのセファデックス
ＬＨ−２０カラム上でクロマト処理し、得られ、た１、
３５ｇの活性フラクション（ＰＳ　ＥＤｓ。２，４ｘ１
０−１μｇ／ｍｊｌを５　ｍｌのヘキサン−酢酸エチル
（１：１）に？理解し、６０ｇのシリカゲルのカラム（
６０ｘ２．５ｃｍ＋）上でクロマト処理する。
４；ｌ→１：１のヘキサン−酢酸エチルの勾配溶出を行
って、３：１のフラクション中に、次のＰｓ活性（ｆ！
Ｄｓｏ１．Ｏｘ　１０−”ｐｇ　／ｍｌ）成分０．７ｇ
を得る。９：１→４：１の勾配ヘキサン−酢酸エチルを
用いてのシリカゲル４５ｇの長いカラム（１００ｘ　１
．２ｍｇ）上でアセトンＺ　Ｉｌｌ中で再クロマト処理
して、４：ｌのフラクション中にコンブレタスタチ・ン
Ｄ−２（５，８ｍｇ；乾燥植物からの収率は７．５ｘｌ
Ｏ−”％、　ＰＳ　ＥＤｓｏ　５．２　ｆｉｇ　／ｒａ
ｌ＞の絶品を得る。アセトン−ヘキサンから再結晶する
とｍｐ１４８　　１５１℃、　　ＩＲ（ＮａＣ１）　　
Ｖ、、１１３４３６．３４２９．１７２８．１５１９．
１５０３．１４４０．１２１５．１１８６゜１１５９．
１１１０　ｃ＋ｓ　−’ ’Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨ２）ＣＤＣ１３：２．２８９
（２）！、　ｄ　’　、Ｊ−５，０、１，７）１ｚ　、
　）Ｉ−１６＞、２．８７１（２Ｈ，ｔ　、　Ｊ−５，
０Ｈｚ、　Ｈ−１５）、４．６４０（２Ｂ、　ｄ　、　
Ｊ＝６．８　ＨｚＳＨ−２）、５．０６６（ＩＨＳｄ　
、　Ｊ＝１．８　Ｈｚ、　）Ｉ−２０）、５．４６７（
ＩＨ，ｓ　、　ＯＨ）　　、６．０６４（ＩＨ，ａｔ、
　Ｊ−１０，６，６，８Ｈｚ、ト３）、６．６３４（Ｉ
Ｈ，ｄｄｄ　、　Ｊ−８，０、１，８，１，７Ｈｚ、　
Ｈ−１３）、６．８４６（ＬＨ，ｄ　、　Ｊ−８，０Ｈ
ｚ、　Ｈ−１２）、７．０８９（２１１、ｄ　、　Ｊ＝
８．４　Ｈｚ、　Ｈ−７，１９）、７．１１２（ＩＥＩ
、　ｄ　、　Ｊ＝１０．６　）１ｚ　、、Ｈ−４）、７
．３２９（２Ｂ％ｄ　、、Ｊ−８，４Ｈｚ、　Ｈ−６，
１Ｂ）：”Ｃ−ＮＭＲ（１００Ｍ）ｌｚ）ＣＤＣｈ：２
６．８９（Ｃ−１５）　、３２．４２（Ｃ−１６）　、
５９．０６（Ｃ−２）、１１２．５８（Ｃ−２０）、１
１５．３９（Ｃ−１２）、１２１．８９（Ｃ−１３）、
１２３．８９（Ｃ−７，１９）　　、１２５．６８（Ｃ
−１８）、１２９．０９（Ｃ−６）　　、１３１．１４
．１３２．０１（Ｃ−５，１４）　　、１３５．４５（
Ｃ−４）　　、１３７．７４（Ｃ−３）　　、１４２．
４Ｂ、１４９．３２（Ｃ−１０，１１）　　、１５５．
６（Ｃ−８）、１７３．３０　（Ｃ−１７）、及びＨＲ
ＥＩＭＳ（＊／ｚ）２９６．１０５２　（Ｍ”　、１０
０χ、Ｃ＋ａｌｌ＋ａＯ＊としての計算値２９６．１０
４９）　１２３７．０９１６（２０χ、ＣｔＪｔｔＯ□
としての計算値２３７．０９１６　１’！”　−Ｃ１ｈ
ＣＯり；１３８．０３２１　（４６χ、ＣＪ、Ｏｊとし
ての計算値１３８．０３１７）　；１３５．０４５０（
５０χ、Ｃ５ｆｂ（ｈとしての計算値１３５．０４４６
）。
ス１１ｔ−１ コンブレタスタチンＤ−１を、標準的な国立がん研究所
のネズミＰ３８８リンパ球白血病（ＰＳ系）に対するプ
ロトコールに従って、テストしたところ、ＢＤ％。−３
，３μｇ／ｗｆのＰＳ細胞系活性を示した。
ス１−鍔−」− コンブレタスタチンＤ−２を、標準的な国立がん研究所
のネズミＰ３８８リンパ球白血病（ＰＳ系）に対するプ
ロトコールに従って、テストしたところ、Ｉ！Ｄｓ＊　
−５，２μｇ／ｌｅｌのｐｓ細胞系活性を示した。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、次の一般式で表される細胞生長阻害性の大環状ラク
    トン ▲数式、化学式、表等があります▼ である。 ２、次の構造式をもち、コンプレタスチンＤ−１と呼ば
    れる第１項の大環状ラクトン ▲数式、化学式、表等があります▼ ３、次の構造式をもち、コンプレタスチンＤ−２と呼ば
    れる第１項の大環状ラクトン ▲数式、化学式、表等があります▼ ４、無制限な細胞生長により特徴づけられる新生物病に
    かかっている宿主に対し、次の一般式の大環状ラクトン
    の治療有効量を必須の活性細胞生長阻害剤とし、それと
    薬理学的に許容される担体とを含有する医薬組成物を投
    与することから成る該宿主の治療方法 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただし、Ｘ−Ｘは−ＣＨ＝ＣＨ−又は▲数式、化学式、
    表等があります▼である。 ５、該大環状ラクトンがコンプレスタチンＤ−１でＸ−
    Ｘが▲数式、化学式、表等があります▼である第４項の
    方法。 ６、該大環状ラクトンがコンプレスタチンＤ−１でＸ−
    Ｘが−ＣＨ−ＣＨ−である第４項の方法。 ７、次の一般式の細胞生長阻害性の大環状ラクトンの医
    薬的有効量と、薬理学的に許容される担体とから成る医
    薬製剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただし、Ｘ−Ｘは−ＣＨ−ＣＨ−又は▲数式、化学式、
    表等があります▼である。 ８、該大環状ラクトンがコンプレスタチンＤ−１でＸ−
    Ｘが▲数式、化学式、表等があります▼である第７項の
    方法。 ９、該大環状ラクトンがコンプレスタチンＤ−２でＸ−
    Ｘが−ＣＨ＝ＣＨ−である第７項の方法。
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