JPH02257881A - カプロラクトン加水分解酵素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、カプロラクトンを６−ヒドロキシカプロン酸
に変換するカプロラクトン加水分解酵素（以下、ＣＨと
いう）に関するものである。

（従来の技術） ＣＨはカプロラクトンに作用する加水分解酵素で、カプ
ロラクトンから６−ヒドロキシカプロン酸を生成させる
。

従来、カプロラクトンを６−ヒドロキシカプロン酸に変
換する反応は、ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属に属
する微生物（Ｄ、Ｂ、Ｎｏｒｒｉｓ、　Ｐ、Ｗ、Ｔｒｕ
ｄｇｉｌｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、、　１２，１．３６３−３７０　
（１９７１）　）およびアシネトバクタ−（Ａｃｉｎｅ
ｔｏｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物（Ｎ、Ａ、Ｄｏｎ
ｏｇｈｕｅ、　Ｐ、Ｗ、Ｔｒｕｄｇｉｌｌ、　Ｅｕｒ、
Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、。

６０、１−７　（１９７５）　）によって行われること
は知られていた。

（発明が解決しようとする課題） しかしながら、従来の報告では、無細胞抽出液を用いて
反応を行わせ、生産物の定性的な同定が行われていたに
すぎなかった。したがって、ＣＨの存在の確認は行われ
ておらず、ＣＨを特定できる諸性質も知られていなかっ
た。そのために、ＣＨの工業的利用は不可能であった。

（課題を解決するための手段） 本発明者らは、微生物由来のＣＨについて鋭意研究を重
ねた結果、アースロバフタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ）属に属する微生物に、従来確認されていなかったＣ
Ｈが存在することを見出し、さらに、アースロバフタ−
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物から、
このＣＨを単離精製し、性質を明らかにしてすでに特許
出願した（特願昭６２−２６３９９０号）。

さらに、本発明者らは、該微生物からＣＨの遺伝子を単
離し、その全塩基配列を決定し、また、全アミノ酸配列
を決定した。その後、該遺伝子を発現させ、ＣＨが得ら
れることを確認し、本発明を完成するに至った。

本発明は、カプロラクトンを加水分解して、６−ヒドロ
キシカプロン酸に変換する第１図で表されるアミノ酸配
列を有するＣＨを提供することにある。

本発明のポリペプチドはまた、上記アミノ酸配列のアミ
ノ末端に、シグナルペプチドの部分もしくは全部が結合
した中間体も包含する。自然の変異により、または人工
の変異により、ポリペプチドの主たる活性に変化を与え
ることなく、ポリペプチドをコードするＤＮＡの構造の
一部を変化させることが可能である。本発明のポリペプ
チドは、前記アミノ酸配列を有するポリペプチドの相同
変異体（Ｈｏ＋ｓｏｌｏｇｏｕｓ　ｖａｒｉａｎｔ）に
相当する構造を有するポリペプチドも包含する。

さらに、本発明によれば、上記アミノ酸配列を有するＣ
ＨをコードするＤＮＡが提供される。また、本発明によ
れば、第１図で表される塩基配列および該塩基配列に相
補的な塩基配列からなる群から選ばれる少なくとも一つ
の塩基配列を含有するＤＮＡが提供される。

自然の変異により、または人工的変異により、主たる活
性に変化を与えることなく、ＤＮＡの構造およびそれか
ら演鐸されるポリペプチドの構造の一部を変異せしめる
ことが可能である。したがって、本発明のＤＮＡは、前
述のすべてのポリペプチドの相同変異体に相当する構造
を有するポリペプチドをコードする塩基配列を含有する
ことも可能である。

遺伝暗号の縮重にしたがい、遺伝子から生産されるポリ
ペプチドのアミノ酸配列を変えることな（、その遺伝子
の塩基配列の少なくとも一つの塩基を他の種類の塩基に
置換することができる。したがって、本発明のＤＮＡは
また、遺伝暗号の縮重に基づく置換によって変化された
塩基配列を含有することも可能である。この場合、上記
置換により得られた塩基配列から演鐸されるアミノ酸配
列は、前に定義したアミノ酸配列と一致する。

さらにまた、本発明によれば、前記ＤＮＡと複製可能な
発現ベクターとからなる複製可能な組換ＤＮＡが提供さ
れる。該組換ＤＮＡは、それによって形質転換された微
生物または細胞中で、ポリペプチドを発現することがで
きる。

本発明において用いられた微生物は、本発明者らによっ
て、アースロバフタ−・オキシダンスＡＫ　６５−６　
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｏｘｙｄａｎｓ　　ＡＫ
　６５−６、微工研菌寄第９４３０号）であることが同
定され、該微生物を用いたＣＨを製造する方法とその性
質は判明している（特願昭６２−２６３９９０）が、上
記微生物の菌学的性状は次のとおりである。

（ａ）　　形態学的性状 ■細胞の形および大きさ：短桿菌、０．６　Ｘｏ、８〜
１μ ■細胞の多形性の有無：多形性（分枝等）■運動性の有
無：なし ■胞子の有無：なし ■ダラム染色性：陽性 ■抗酸性：陰性 （ロ）培養性状 ■肉汁寒天平板培養：乳白色、クリーム状、生育良好 ■肉汁寒天斜面培養：乳白色、クリーム状、生育良好 ■肉汁液体培養：白色、ＯＤ、６゜＝ｔ４、生育良好 ■肉汁ゼラチン穿刺培養：液化 ■リドマス・ミルク：アルカリ性、液化（Ｃ）　　生理
学的性質 ■硝酸塩の還元：陰性 ■脱窒反応：陰性 ■ＭＲテスト：陰性 ■ＶＰテスト：陰性 ■インドールの生成：陰性 ■硫化水素の生成：陽性 ■デンプンの加水分解：陽性 ■クエン酸の利用：陽性 ■無機窒素源の利用：陽性 ［相］色素の生成：生成しない ■ウレアーゼ：陰性 ＠カタラーゼ：陽性 ■生育の温度およびｐ　Ｈ：　２０〜３０℃、ｐＨ６，
５〜８．０ ［相］酸素に対する態度：好気性 ＠０−Ｆテスト：陰性 ■糖類から酸およびガスの生成の有無：（１）Ｌ−アラ
ビノース （２）Ｄ−キシロース （３）Ｄ−グルコース　　　　　士 （４）Ｄ−マンノース　　　　　± （５）Ｄ−フラクトース　　　　± （６）Ｄ−ガラクトース （７）麦芽糖 （８）シ＝１糖　　　　　　　　　士 （９）乳　糖 ０ＩＩＤトレハロース ０ＤＤ−ソルビット　　　　　± Ｑ２１Ｄ−マンニット　　　　　± ０３１イノジット （ロ）グリセリン θ０デンプン 本面は土壌より分離され、化学分類、生理試験によりア
ースロバフタ−・オキシダンス（Ａｒｔｈｒ。

ｂａｃｔｅｒ　ｏｘｙｄａｎｓ）と同定されたものであ
る。すなわち、細胞壁ペプチドグリカンのアミノ酸配列
については、内田欣哉ら〔微生物の化学分類実験法、学
会出版センター（１９８２））　、用本勲ら〔放線菌の
同定実験法、日本放線菌研究会！　（１９８５）　）の
方法にしたがって、菌体脂肪酸組成およびイソプレノイ
ドキノンについては、鉛末健一部ら〔放線菌の同定実験
法、日本放線菌研究会！　（１９８５）　）の方法にし
たがって分析し、生理試験については、駒形和実ら〔微
生物の分類と同定（１９８５）　）。シャーリングら（
Ｅ、Ｂ、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ、　Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、。

１６、３１３−３４０　（１９６６）　）　、スタック
ブランドら（Ｅ、５ｔａｃｋｅｂｒａｎｄｔ、　５ｙｓ
ｔ、Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　４＋４７０−
４８６　（１９８３））の方法にしたがって行った。

これらの結果を既存菌株の試験結果および文献記載（Ｋ
、Ｈ，５ｃｈｌｅｉｆｅｒ、　０．Ｋａｎｄｌｅｒ、　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、Ｒｅｖ、、　３４．４０７　（１
９７２）、Ｋ、５ｕｚｕｋｉ＋　Ｋ、Ｋｏｔａａｇａｔ
ａ、　Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、＋
　３３＋　１８８　（１９８３）　、Ｙ、Ｙａｍａｄａ
、　Ｇ、Ｉｎｏｕｅ、　Ｙ、Ｔａｈａｒａ＋　Ｈ，０Ｙ
ａｉｚｕ＋　Ｋ、Ｋｏｎ＋ａｇａｔａ。

Ｊ、Ｇｅｎ、＾ｐｐ１．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．．２２．
２０３−２１４　（１９７６）、ＨｏＤ、Ｃｏ１１ｉｎ
ｓ、　Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、　５２．
４５７−４６０　（１９８２）　）と照合した結果、Ａ
ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｏｘ’ｙｄａｎｓであると同
定され、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｏｘｙｄａｎｓ　
　ＡＫ６５−６と命名された（表１ないし表４）。

次に、ＣＨ遺伝子のクローニングおよび発現方法につい
て説明する。なお、プラスミド、大腸菌、試薬類、酵素
類等は全て、特にことわらない限り市販のものを使用す
る。

（１）アースロバフタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）
属に属する微生物から、常法にしたがって（５０５，Ｉ
ｙｓｏｚｙｍｅ、　ＲＮａｓｅ　Ａ、　ｐｒｏｔｅｉｎ
　Ｋを使用）全ＤＮＡを調製する。

（２）すでに決定している精製されたＣＨのＮ末端アミ
ノ酸配列（特願昭６２−２６３９９０号）から合成プロ
ーブを設計し、該プローブをＤＮＡ合成機を用いて合成
する。

（３）上記（１）で得られる全ＤＮＡを各制限酵素で切
断し、５ｏｕｒｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ　　法にしたがっ
て、上記（２）で得られる合成プローブにハイブリダイ
ズしたところ、各レーンに単一バンドが検出されること
を確認する。

（４）上記（１）で得られるＤＮＡをＰｓｔＩで切断し
、ｐｕｃ　１８ベクターに組み込み、該組換ＤＮＡによ
って形質転換された大腸菌（Ｅ、Ｃｏ１１）について、
上記プローブを用いてコロニーハイブリダイゼーション
を行う。

（５）上記で得られたクローンの断片上でＣＨがコード
されていると思われる領域の塩基配列を解析し、その塩
基配列から決定されるアミノ酸配列が、先に決めたＮ末
端アミノ酸配列と一致することを確認する。

・（６）次に、ＣＨをコードするＤＮＡを発現ベクター
に組み込み、該組換ＤＮＡを宿主中で発現させ、ＣＨの
酵素活性を確認する。

本明細書において、アミノ酸、ペプチドは、ＩＵＰＭＣ
ＩＵＢ生化学命名委員会（ＣＢＮ）で採用された略記法
により表示され、例えば、下記の略号が使用される。な
お、アミノ酸などに関し光学異性体があり得る場合は、
特に明示しなければＬ体を示すものとする。

Ｇｉｎ：グルタミン残基 Ａｓｐ　：アスパラギン酸残基 Ｐｒｏ　ニブロリン残基 Ｔｙｒ　：チロシン残基 Ｖａｌ：バリン残基 Ｌｙｓ　：リジン残基 Ｇｌｕ　：グルタミン酸残基 Ａｌａ：アラニン残基 へＳｎ：アスパラギン残基 Ｌｅｕ　：ロイシン残基 Ｐｈｅ　：フェニルアラニン残基 ＧＩｙ　ニゲリシン残基 Ｈｉｓ　：ヒスチジン残基 Ｓｅｒ　：セリン残基 Ｔｈｒ　：スレオニン残基 １１ｅ：イソロイシン残基 Ｔｒｐ：）リプトファン残基 Ａｒｇ　：アルギニン残基 Ｎｅｔ二メチオニン残基 Ｃｙｓ　ニジスティン残基 また、ポリデオキシリボヌクレオチドおよびオリゴヌク
レオチドは、下記の如き略号で表されるデオキシリボヌ
クレオチドの配列により表記する。

Ａ：２”−デオキシアデニル酸残基 Ｃ：２′−デオキシシチジル酸残基 Ｇ：２”−デオキシグアニル酸残基 Ｔ：チミジル酸残基 特にことわらない限り、デオキシリボヌクレオチド配列
の左端は５゛端である。

（実施例） 以下に実施例をあげて本発明をさらに詳細に説明する。

実施例１ ［ＣＨ遺伝子のクローニング］ アースロバフタ−オキシダンスＡＫ６５−６　（微工研
菌寄第９４３０号）を１００−のシクロヘキサノール５
０μｇ１バクトドリプトン１ｇ、イーストエキス０．５
ｇ、食塩０．５ｇからなる組成の培養液で、３０°Ｃで
１８時間培養し、菌体を得た。

菌体を洗浄後、１６０■のりゾチーム、２ｍｇのプロテ
アーゼにおよび１０％ＳＤＳ溶液を用いて溶菌し、フェ
ノール抽出、フェノール、クロロホルム抽出、イソプロ
パツール抽出を繰り返し、最後にエタノール沈澱を行い
、全ＤＮＡを得た。

特願昭６２−２６３９９０号に記載された１６〜２５番
目のＮ末端アミノ酸配列（Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｔ
ｒｐ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｉ　ｌｅ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｔ
ｈｒ）に基づいて、イノシンを含む下記の配列の合成プ
ローブをＤＮＡ合成機（アプライド・バイオシステム社
製）を用いて合成し、高速液体クロマトグラフィーを用
いて精製した。

（ただし、■はイノシンを表す、） プローブはＴ４−カイネースおよび（ｒ−”ｐ　）　Ａ
ＴＰを用いてＳｔｐでラベル以後の実験に用いた。

上記のようにして得られた全ＤＮＡを４種類の制限酵素
（旧ｎｄｎ１．　ＢｃｏＲｌ、Ｂａａ＋Ｈ１，Ｐｓｔ　
Ｉ　）で切断し、上記のプローブを用いてハイプリダー
ゼ−ジョンを行ったところ、各レーンに単一のバンドが
検出された。全ＤＮＡをＰｓｔ　Ｉで切断し、１％アガ
ロースゲル電気泳動を行い、ゲルから３〜ｄＫｂ付近の
ＤＮＡを回収し、ｐｔＪＧ−１８のＰｓｔ　　Ｉサイト
に組み込み、大腸菌（ＭＢ６５）　　（特開昭６３−７
４４８８号）へ導入した。目的のＤＮＡ断片が組み込ま
れたプラスミドを含む菌体を得るため、上記のプローブ
を用いてコロニーハイブリダイゼーションを行い、約８
０００個のコロニーから１５個の目的のクローンを得た
。このクローンを解析したところ、約３．２ＫｂのＰｓ
ｔ　Ｉ断片を含み、そのうちの旧ｎｄｌＩ［、ＥｃｏＲ
Ｉ断片上がプローブとハイブリダイズする領域が含まれ
ることが判明した。

Ｈｉｎｄｌ［１からＨｉｎｄｌＩ［まで約１．３Ｋｂの
断片について、サンガーらの方法（Ｓａｎｇｅｒ　Ｆ、
ｅｔ、ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。

＾ｃａｄ、ｓｃｉ、ＵｓＡ　７４．５４６３　（１９７
７）　）にしたがってＤＮＡ塩基配列を決定した。この
ようにして得られた塩基配列から翻訳されるアミノ酸配
列中に精製したＣＨのＮ末端アミノ酸配列と完全に一致
する部分が存在していたことにより、この塩基配列は、
ＣＨをコードするＤＮＡであることを確認した。

実施例２ （ＣＨ蛋白の発現〕 大腸菌内でｌ　ａｃＵＶ５をプロモーターとして、ＣＨ
をコードするＤＮＡよりＣＨのアミノ酸配列を有するポ
リペプチドを発現させることを目的に、プラスミドの構
築を行う。

第２図に示すように、プラスミドｐＡｃＨ２０μｇを旧
ｎｄｎＩで消化し、得られる約１，３Ｋｂの旧ｎｄＩ［
［断片を精製する。一方、ファージＭ１３ｍｐ１９の２
本積ＤＮＡＩμｇを旧ｎｄｌｌｌで切断した後、この０
．１Ｍｇに上記の旧ｎｄＩ［Ｉ断片０．１Ｍｇを加え、
Ｔ４ＤＮＡリガーゼで結合させて、ＣＨ遺伝子を組み込
んだファージＭ１３ＣＨを構築する。

次に、Ｂａｍ旧部からＣＨ蛋白質合成開始部位（ＡＴＣ
；）までのアミノ酸非コード領域を削除するために、第
２図に示されるように、この領域の前後を直結した配列
に相補するポリヌクレオチドを、前述と同様の方法によ
って合成し、ＣＨＤと命名した。ＣＨＤ２５ｐｍｏｆｆ
ｉとＭ１３プライマーＭ４　（宝酒造社製）　１０　ｐ
ｍｏｊ！をＴ４ポリヌクレオチドキナーゼでリン酸化し
、メッシング（Ｍｅｓｓｉｎｇ）の方法〔メソッズ　イ
ンエンザイモロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ
、）、韮、　２０−７８．　（１９８３）　）にしたが
って調製したファージＭ１３ＣＨ，の工末鎖ＤＮＡ約０
．　５　ｐｒｔ＋ａｌｔを加え、９５℃で５分間加熱後
、室温になるまで放置した。ついで、これにｄＡＴＰ、
　　ｄＧＴＰ、　　ｄＣ，ＴＰ、　　ｄＴＴＰ　　（各
０．−４ｍＭ）　　、　八ＴＰ（０゜４ｍＭ）　、ＤＮ
Ａポリメラーゼクレノウ（Ｋｌｅｎｏｗ）断片（５単位
）、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ（２単位）を加え、各７ｍＭの
トリス−塩酸（ｐＨ７，５）、ＭｇＣＩｇ　、ＮａＣｌ
および１４ａ＋Ｍのジチオスレイトールの反応液５０ｐ
ｌ中で３７°Ｃ１３０分間反応させた。０．５ＭのＥＤ
ＴＡ５μｌを加えて反応停止後、メッシング（Ｍｅｓｓ
ｉｎｇ）の方法にしたがって大腸菌（ＪＭ１０５）を反
応液でトランスフェクション処理し、ファージ導入菌を
プラークとして検出した。出現したファージ・プラーク
をプラーク・ハイブリダイゼーション法〔ベントン（Ｂ
ｅｎｔｏｎ）ら（１９７７）サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ）、　１９６．１８０−１８２　）によって３２ｐで
ラベルしたＣＨＤとハイブリダイゼーションさせ、陽性
を示したプラークを見出した。陽性プラーク中のファー
ジを再度ＪＭ１０５に感染させて、上記と同様にしてＣ
ＨＤとハイブリダイゼーションを示すプラークを純化し
て分離した後、プラーク中に存在するファージを常法に
よって液体培養し、１本鎖ＤＮＡを分離した。得られた
１本鎖ＤＮＡの塩基配列を解析したところ、予定どおり
ＢａｌｌｌＨｌ部位の次に、ＣＨ蛋蛋白質１成成開始位
（ＡＴＧ）が続いていることが判明したので、このファ
ージをＭ１３ＣＨ１と命名した。

次に、プラスミドＭ１３ＣＨ１２０ｐｇを、Ｒａｍ旧と
旧ｎｄｌＩ［で消化し、得られる約１．ＩＫｂの断片を
精製した後、その０．８μｇにｄＡＴＰＳｄＧＴＰ。

ｄＣＴＰ、　ＴＴＰを終濃度各０．３３ｍＭ、ＤＮＡポ
リメラーゼクレノウ（Ｋｌｅｎｏｗ）断片５単位を加え
、１０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ１，５）、１０＋＋＋Ｍ
　　ＭｇＣｌ２．１＋ｓＭジチオレイトール、５０ｍＭ
　ＮａＣ１の反応液３０μｌ中で３０″Ｃｌ２Ｏ分間反
応させた。これより両端が平滑端にされたＤＮＡ断片を
精製した。

一方、松田らによって構築された１ａｃＵＶ５プロモー
ターをもつ発現用ベクターｐＥＸｏｏ２（特開昭６３−
７４４８８号）をＲａｍ　Ｈｒで消化し、前述の方法と
同様に、その両端を平滑端にした。これを上記の断片と
混合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼで結合反応を行わせた。そ
の反応液を用いて、大腸菌ＭＣｌ０６１〔マルコムら（
Ｍａｌｃｏｍ、　Ｃａ５ａｄａｂａｎ　ｅｔ、ａｌ、）
ジャーナル・オプ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ、
Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、）＋　１３８　、１７９−２０７．
　（１９８０）　）を形質転換し、カナマイシン４０μ
ｇ／ｖｄｌを含むＬ−プロス寒天培地上で生育してくる
コロニーを選択した。得られたコロニーについて、その
プラスミドを解析したところ、１ａｃＵＶ５プロモータ
ー、ＣＨのｃＤＮＡの順に所望のヌクレオチド配列を有
することが確認されたので、このプラスミドをｐＡＥ１
ａｃ３と命名した。

上記で得られたプラスミドｐＡＥ１ａｃ　３を含有する
大腸菌株を、４０　ｕｇ／ｄのカナマイシンを含有する
ＬＢ培地５０ｄ中３７°Ｃで一夜培養し、１２の同上の
培地に移して、さらに２時間培養する。

イソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（シグマ
社）を終濃度１ｍＭになるように添加し、さらに８時間
培養を続けた後、冷却し、遠心分離により菌株を集める
。菌体を冷却遠心して集め、０．０５μ！−リス−塩酸
緩衝液（ｐＨ８，０）５００ｄに懸濁し、次いで、超音
波破砕し、冷却遠心して菌体蛋白溶液を得る。

第２図に示されるように、ＣＨのＤＮＡを持たないプラ
スミドｐＥＸＯＯ２１を含有する大腸菌を同様にして培
養して得た菌体蛋白溶液をコントロールとして、この菌
体がＣＨの酵素活性を有するかどうか検定した。すなわ
ち、２０ｍＭ　　ε−カプロラクトン３０μｌ、０．２
ｍＭブロムチモールブルー（ＢＴＢ）（ｐＨ１０，５）
３０μ！、蒸留水２３８μ１１菌体蛋白溶液２μｌをよ
く混合し、室温で１０分間反応させ、４５０ｎｍの吸収
を測定した。

その結果、コントロールの菌体蛍白溶液には酵素活性が
検出されないが、上記で得られたプラスミドを含有する
大腸菌から調製した菌体蛋白溶液のものからは、強い酵
素活性が検出された。

（発明の効果） 本発明によれば、カプロラクトンから６−ヒドロキシカ
プロン酸を、大量に工業的規模で生産することが可能と
なる。６−ヒドロキシカプロン酸は、高分子ポリ・マー
や可塑剤の原料であるアジピン酸の製造原料となり、非
常に有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、カプロラクトン加水分解酵素のアミノ酸配列
および塩基配列を示し、第２図は、カプロラクトン加水
分解酵素発現用プラスミド構築の概念図を示す。 （ばか１名） 第

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）第１図で表されるアミノ酸配列を有するカプロラ
   クトン加水分解酵素。
2. （２）第１図で表されるアミノ酸配列を有するカプロラ
   クトン加水分解酵素をコードする塩基配列からなるＤＮ
   Ａ。
3. （３）第１図で表される塩基配列および該塩基配列に相
   補的な塩基配列からなる群から選ばれる少なくとも一つ
   の塩基配列からなる請求項２記載のＤＮＡ。