JPH02229200A - 抗アレルギー作用を有するペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、免疫グロブリンＥ中の部分アミノ酸配列を有
するアレルギー疾患の治療剤として有効な新規ペブチド
及びそのアミノ酸残基の部分的変換体並びにその塩に関
する。

従来の技術及び発明が解決しようとする課題生体は、非
自己を認識し、排除することによって、自身を防御して
いる。即ち、異物の一部を抗原として認識し、抗原に対
する抗体を産生ずる。

産生された抗体は、新たに侵入してくる抗原と反応し、
抗原・抗体複合体を形成し、異物は排除される。このよ
うな抗原抗体反応が逆に生体に対して不都合な反応とな
って、自己の組織に傷害を弓き起こす場合を、一般にア
レルギーと称している。

アレルギー反応は、その機構に基づいてＧｅｌｌとＣｏ
ｏｍｂｓによって４つの型（Ｉ〜■）に分類されている
。Ｉ型から■型までは抗原と液性抗体との反応に基づい
ており、短時間で起こるので即時型アレルギーといい、
■型は細胞性免疫によるもので比較的ゆっくりした反応
であり、遅延型アレルギーと呼ばれている。このうち、
■型アレルギーは、アレルギーの代表的なもので′あり
、この型に属する疾患として、気管支喘息、アレルギー
性鼻炎、食物アレルギー（暮麻疹、腸管アレルギー等）
等が挙げられる。これらのアレルギー性疾患は、近年、
その患者数が急増し、社会的な問題にもなっている。

Ｉ型アレルギー反応は、アレルギーの原因物質となる抗
原（アレルゲン）に対する免疫グロブリンＥ　（　Ｉｍ
ＩＩｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｅ，以下、ＩｇＥと記す
。）抗体と組織中の肥満細胞及び血中の好塩基球膜表面
上に存在するＩｇＥレセプタ−（または、Ｆｃεレセプ
ターと称す。）とが結合することが基本となる。

即ち、アレルゲンが生体に侵入すると、それに対するＩ
ｇＥ抗体が、Ｂ細胞から産生されるようになる。一方、
肥満細胞や好塩基球膜表面上には、数十万個のＩｇＥレ
セプターが存在しており，ＩｇＥ抗体は、このＩｇＥレ
セプターに極めて高い親和性を持って結合する。細胞膜
表面上に結合したＩｇＨに再侵入してくる多価のアレル
ゲンが結合し、これを介していくつかのＩｇＥ分子が架
橋化される。これが引き金となって、レセプター分子間
になんらかの相互作用が生じ、細胞膜内の酵素系の活性
化が起こる。その結果、肥満細胞や好塩基球中に存在す
る顆粒の脱顆粒現象が起こり、それに伴って、顆粒内に
存在するヒスタミ’、ＳＲＳ一八、セロトニン等の化学
伝達物質が細胞がら放出され、血管透過性の冗進、平滑
筋の収縮、分詔機能の冗進などをきたし、種々のアレル
ギー性疾患が惹起されると考えられている。

アレルギー疾患の治療薬としては、抗ヒスタミン剤等の
化学伝達物質に対する拮抗剤、クロモグリク酸ナトリウ
ム等の化学伝達物質遊離抑制剤、ステロイド剤等が一般
的に用いられている。しかし、これらは夏型アレルギー
の根本となるＩｇＥＰｃεレセブタ一間の結合自体を阻
害するものてはなく、また、使用には副作用や投与法等
で制限がある。

■型アレルギーの発症機構を考えると．ＩｇＥが肥満細
胞及び好塩基球の膜表面上のＦｃεレセプターに結合し
なければ、アレルゲンの侵入によっても■型アレルギー
が惹起されないと考えられる。故に、ＩｇＥのＦｃεレ
セプターへの結合を阻止できれば、結果的に、脱顆粒化
には至らず、アレルギー疾患を治療することが可能とな
る。

ＩｇＥ分子自身は、ＩｇＥレセプターに結合するのであ
るから、ＩｇＥ分子の何処かにレセプター結合部位が存
在するはずである。従って、ＩｇＥ中のレセプター結合
部位を含む物質が得られれば、ＩｇＥと競合して、Ｆｃ
εレセプターと結合し、抗原抗体反応を遮断することに
よって抗アレルギー作用を示すという、これまでにない
タイプのアレルギー性疾患治療剤が可能となる。

このような考えに基づく取り組みとしては、（１）　Ｓ
ｔａｎｗｏｒｔｈが報告したＩｇＥの部分加水分解によ
って得られるＦｃεフラグメント（Ｃε２−Ｃε４ドメ
インを含むペプチドフラグメント）によるブラウスニツ
ツーキュストネル反応の抑ｉｄｌ　［　Ｓｔａｎｗｏｒ
ｔｈＤ．Ｒ．　　Ｎａｔｕｒｅ，　　２３３，　３１０
　（１９７１）］　、　Ｌ５！）Ｃｅ２からＣｅ４．ド
メインをコードするｃ　ＤＮＡを大腸菌に挿入し、発現
させたＣε２−Ｃε４ドメインによるヒト好塩基球への
結合能及びその抗アレルギー活性に関ずる報告［Ｌｉｕ
　Ｆ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａ
ｃａｄ．Ｓｃ＋．ＵＳＡ，　　８１．　　５３６９　　
（１９８４）；　　　Ｋｅｎｔｅｎ　　Ｊ．　　ｅｔ’
ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ　．　　八ｃａｄ．　　Ｓ
ｃｉ．　　ＵＳＡ，　　８１．　　２９５５　　（１９
８４）；Ｇｅｈａ．Ｒ．Ｓ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔ
ｕｒｅ，　３１５，　５７７　（１９８５）；Ｃｏｌｅ
ｍａｎ　Ｊ．Ｗ．　ｅｔ　ａｔ．　　Ｅｕｒ．Ｊ．ｌ＋
＋ｍｕｎｏｌ．，　１５．　９１３６（＋９８５＞］等
が挙げられる。しかし、ＩｇＥ中の抗アレルギー作用を
有する部位、即ち、ＩｇＥレセプター結合部位の領域を
特定するには至っていない。

また、Ｄｏｒｒ　＋ｎｇｔＯｎとＢｅｎｎ　ｉｃｈは、
円偏向二色性スペクトルを用いたＩｇＥの熱による２次
構造変化の観察に基づいて、レセプター結合部位がＣε
３一Ｃ＋．４ドメインに存在することを示唆している［
Ｄｏｒｒ＋ｎｇｔｏｎ　Ｋ．Ｊ．　ａｎｄ　１３ｅｎｎ
ｉｃｈ　ｌ｛．｝ｌ．，　Ｉｍｍｕｎｏｏｇｉｃａｌ　
Ｒｅｖ．，　４］，　３　（＋９７８）］　．特公昭６
０−　２３１８号公報にはＡｓｐ−　Ｐｒｏ−　Ａｒｇ
，Ｓｅｒ−＾Ｓｐ−　Ｐｒｏ−　Ａｒｇ，　　＾ｓｐ−
Ｓｅｒ−＾ｓｐ−　Ｐｒｏ−　Ａｒｇまたは＾１ａ−＾
Ｓｐ−　Ｓｅｒ−　Ａｓｐ−　Ｐｒｏ−　Ａｒｇのアミ
ノ酸配列を有するペプチドが記載されている。しかし、
これらのペプチドはヒトＩｇＥのＦｃ部分の部分アミノ
酸配列とは異なる。また、これらのペプチドに対応する
ヒトＩｇＥのＦｃ部分の部分アミノ酸配列を育するペプ
チドは、抗アレルギー作用を存さないと報告されている
［Ｂｅｎｎｉｃｈ，　Ｈ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａ
ｒｃｈ．＾ｌｌｅｒｇｙ　Ａｐｐｌ．　ｌｍｍｕｎｏｌ
．　５３，　４５９−４６８（１９７７＞１。

特表昭６２−　５０００２５号公報は、Ｃε３−Ｃε４
ドメインに存在するペプチドフラグメントについて開示
している。しかしながら、本発明のペプチドは特表昭６
２−　５０００２５号公報に間示されているペプチドと
は明らかに異なる。

特開昭８３−　２２５３９７号公報は、Ｃε３−Ｃε４
ドメインに存在するペプチドフラグメントについて開示
し、ラットを用いて該ペプチドフラグメントの抗アレル
ギー作用を試験している。しかしながら、本発明のペプ
チドは特開昭８３−　２２５３９７号公報に開示されて
いるベブチドとも異なっている。

課題を解決するための手段 本発明者等は、ヒトＩｇＥ（ＤＦｃ部分の特定の部分ア
ミノ酸配列を有するペプチドが、ＩｇＥレセプター拮抗
作用に基づく抗アレルギー作用を有することを見出し、
本発明を完成した。

本発明は、下記式［Ｉ］で示されるアミノ酸配列を有す
るペプチドにおいて、第１〜１０番目のアミノ酸配列を
有するペプチド、第２〜１２番目のアミノ酸配列におい
て少なくとも第２〜９番目のアミノ酸配列を有するペプ
チドまたは第３〜９番目のアミノ酸配列を宵するペプチ
ド 式　［Ｉコ ｐｒｏ−Ｔｈｒ ｌ２ （式中、　ＸはＬｅｕまたはＩｃｅを意味する。）或い
は下記式［ＩＩ］で示されるアミノ酸配列を有するペプ
チド 式［ＩＩ］ Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ或いは下記式［ＩＩ１］で示されるアミノ
酸配列を有するペプチド 式［ＩＩ１］ Ａｒｇ−Ｔｈｒ 及びそれらのアミノ酸残基の部分的変換体及びそれらの
塩に関する。

なお、式［Ｉ］，式［ＩＩ］或いは式［Ｉ［１］　　で
示されるアミノ酸配列を有するペプチドは、各々ヒトＩ
ｇＥのＦｃ部分のアミノ酸配列の第３４４〜３５５番目
，第４７９〜４９６番目，第４５６〜４６１番目の二量
体［Ｄｏｒｒｉｎｇｔｏｎ，　Ｋ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｉ
ｍｍｕｍｏｌ．　Ｒｅｖ．　４１．　３　〜２５（１９
７８）］に相当するか、或いはそのアミノ酸配列中のＬ
ｅｕをＩｌｅに代替したアミノ酸配列を有するペプヂド
である。

本発明のペプチドはペプチド合成に通常用いられる液相
法または固相法で製造される。即ち、ペプチド結合の任
意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に相当
する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の７ラ
グメントに相当する反応性アミ７基を有する原料をＤＣ
Ｃ　（　Ｎ，Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド）
法、活性エステル法等を用いて縮合させ、生成する縮合
物が保護基を有する場合、その保護基を除去させること
によって製造し得る。

この反応工程において反応に関与すべきでない官能基は
、保護基により保護される。アミ７基の保護基としては
、例えば、ペンジルオキシ力ルボニル、ｔ−プチルオキ
シカルボ二ル、ｐ−ビフェニルイソメチルオキシカルボ
ニル、９−フルオレニルメヂルオキシカルボニル等が挙
げられる。カルボキシル基の保護基としては、例えば、
アルキルエステル、ベンジルエステル等を形成し得る基
が挙げられる。同相法の場合は、Ｃ末端のカルボキシル
基はクロルメチル樹脂、オキシメヂル樹脂、ｐ−アルコ
キシベンジルアルコール樹脂等の担休に結合している。

Ｉｌｌ反応は、ジシクロへキシルカルボジイミド等の縮
合剤の存在下か、或いは、Ｎ一保護アミノ酸活性エステ
ルまたはペプチド活性エステルを用いて実施する。

縮合反応終了後、保護基は除去されるが、固相法ノ場合
は、さらに、ペプチドのＣ末端と樹脂との結合を切断す
る。

さらに、本発明のペプチドは通常の方法に従い精製され
る。例えばイオン交換クロマトグラフィ、逆相液体クロ
マトグラフィー、アフィニティーク口マトグラフイー等
が挙げられる。

本発明のペプチドは、常法に従って各種の無機酸または
存機酸と処理することにより、塩類に導くことができる
。これらの塩類としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ
化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩および酢酸
塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、
フマル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、
ｐ一トルエ／スルホン酸塩等の脊機酸塩が挙げられる。

さらに、アルカリ金属及びアルカリ土類金属の水酸化物
、或いは、有機塩基と処理することによっても、塩類に
導くことができる。例えば、カリウム塩、ナトリウム塩
、カルシウム塩、Ｌｙｓ塩等が挙げられる。

イ乍　　　用 本発明のペプチドまたはその塩はアレルギー疾患の治療
剤として存用である。

以下に、本発明のペプチドのＩｇＥレセプター拮抗作用
について試験例を挙げて説明する。

［　ＩｇＥレセプター拮抗作用］ ヒト白血球の患者血清での受動感作は、プルザンスキー
らの方法［　Ｊ．Ｊ．Ｐｒｕｚａｎｓｋｙ　ｅｔ　ａｌ
．，　ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ　１３１．　１９４９〜１９５３．　１９８３］を
改変して行った。

健常人献血者から採血した末梢血液５０１に、採血直後
に０．ＩＭ　ＥＤＴＡ　４　１を加えた。この血液に６
％デキストラン−３％グルコース生理食塩水溶液１２．
５ｍｌを加えて混和した後、室温で６０分間静置した。

分取した土層を１２００ｒｐＩ１で１０分間遠心分離し
て得た沈渣（白血球）をＴｒｉｓ　−　ＥＤＴＡ緩衝液
で１回洗浄した後、乳酸緩衝液（ｐ｝１３．９）を加え
て０″Ｃで５分間インキユベートした後洗浄し、’　Ｅ
ＤＴ八およびヘバリンを加えたＴｒ　ｉＳ−Ａ緩衝液で
１〜２×１０７ｃｅｌｌｓ／　１濃度の細胞浮遊液を調
整した。この細胞浮遊液０．７１に試験化合物０．１１
を添加して３７℃で３０分間インキユベートした後，気
管支喘息患者血清０．２１を加えてさらに１２０分間イ
ンキユベードした。インキュベート後、遠心分離してそ
の沈渣をＴｒ　ｉｓ−＾緩衝液で２回洗浄した。洗浄後
、ＴｒＩｓ−八ＣＭ緩衝液で細胞浮遊液を調整（２〜８
Ｘ　１０６ｃｅｌｌｓ／　ｍｌ）Ｌ、この細胞浮遊液０
．７１にアレルゲンとしてのダニ抽出液またはベヒクル
０．０７１を添加して３７゜Ｃで４５分間インキユベー
トした。水冷して反応を止めた後、遠心分離して、その
上清および沈渣中（細胞中）のヒスタミン含仔量をテク
ニコン社のオートアナライザーを用いてシラガニアンの
蛍光法［　Ｒ．Ｐ．Ｓ＋ｒａｇａｎ＋ａｎ，＾ｎａ＋ｙ
ｔ＋ｃａ＋Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　５７，　３８３
−３９４．　１９７４］で測定した。試験化合物のヒス
タミン遊離抑制率は、ベヒクル対照群（試験化合物無添
加でアレルゲン添加群）との比較により算出した。

結果は、試験化合物のヒスタミン遊離抑制率として、表
１に示す。

表　　　　１ 試験化合物１〜９は各々実施例１〜９のペプチドを意味
する。

参考化合物１０．　１１は参考例のペプチドを意味する
。

上記試験結果からも明らかなように、本発明のペプチド
またはその塩は、優れたＩｇＥレセプター拮抗作用を示
し、抗アレルギー剤として気管支喘息、アレルギー性鼻
炎、蔚麻疹、アトピー性皮膚炎、湿疹、アレルギー性眼
炎のようなアレルギー疾患の予防並びに治療に使用する
ことができる。

本発明のペプチドまたはその塩の投与経路としては、経
口投与、非経口投与、直腸内投与あるいは局所投与のい
ずれでもよいが、局所投与が好ましい。本発明のペプチ
ドまたはその塩の投与量は、化合物の種類、投与方法、
患者の症状・年令等により異なるが、通常１回０．０１
〜１００ｍｇ　、好ましくは０．１〜１　０　ｍｇ　を
１日当り１〜３回である。本発明のペプチドまたはその
塩は通常、製剤用担体と混合して調製した製剤の形で投
与される。製剤用担体としては、製剤分野において常用
され、かつ本発明のペプチドまたはその塩と反応しない
物質が用いられる。具体的には、例えば、乳糖、ブドウ
糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、
デンプン、白糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、
合成ケイ酸アルミニウム、結晶セルロース、カルボキシ
メチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロビルデン
プン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン
交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム
、ヒドロキシプ口ピルセルロース、低置換度ヒドロキシ
プ口ピルセルロース、ヒドロキシプ口ビルメヂルセルロ
ース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、
軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、クルク、
トラガント、ベントナイト、ビーガム、カルボキシビニ
ルボリマー、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、
ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリ
ンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソ
ルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動バラフィ
ン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン界面活
性剤、プロピレングリコール、水等が挙げられる。剤型
としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ
剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤
、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法
に従って調製される。なお、液体製剤にあっては、用時
、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸濁する形であって
もよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティング
してもよい。注射剤の場合には、本発明のペプチドまた
はその埠を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて
生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、
また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。

これらの製剤は、本発明のペプヂドまたはその塩を０．
２％以上、好ましくは０．５〜７０％の割合で含有する
ことができる。これらの製剤はまた、治療上価値ある他
の成分を含存していてもよい。

（以下余白） 実施例 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。

なお、本発明細書中で用いた略号は、次の意味を有する
。

ＡｌａまたはＡ　アラニン ＡｒｇまたはＲ　アルギニン ＡｓｎまたはＮ　アスパラギン ＡｓｐまたはＤ　アスパラギン酸 ＣｙｓまたはＣ　システイン ＧｌｎまたはＱ　グルタミン ＧｌｕまたはＥ　グルタミン酸 ｃｒｙまたはＧ　グリシン ＨｉｓまたはＵ　ヒスチジン １ｅまたはｌ　イソロイシン しｅｕまたはＬ　ロイシン Ｌ　ｙ　ｓまたはＫ　リジン ＮｅｔまたはＮ丁　　メチオニン ＰｈｅまたはＦ　フエニルアラニン ＰｒｏまたはＰ　ブロリン ＳｅｒまたはＳ　セリン ＴｈｒまたはＴ　スレオニン ＴｒｐまたはＷ　トリブトファン ＴｙｒまたはＹ　チロシン ＶａｌまたはＶ　バリン Ｆｍｏｃ　　　　　　９−フルオレニルメチルオキシカ
ルボニル基 Ｂｕｔｊ−ブチル基 Ｍｔｒ　　　　　　４−メトキシー２，３．６トリメチ
ルベンゼンスル ホニル基 Ｒｏｅ　　　　　　ｔ−プチルオキシ力ルボニル基 ＤＯＤ　　　　　　ジメトキシジチル基ＤＭＦ　　　　
　　ジメチルホルムアミド｝ｌｏｆｔ　　　　　　１−
ヒドロキシベンゾトリアゾール なお、アミノ酸はすべてＬ型を用いた。

実施例Ｉ Ｌｅｕ−Ｈ　ｉｓ−Ａｓｎ−Ｇｌ　ｕ−Ｖａ　ｌ−Ｇｌ
ｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａ　ｌ　ａ−ＡｒｇＨｉ
ｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒ，
ｇの合成Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）樹脂（　Ｆｍｏｃ
−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）が０．３９ミリモル／８樹脂の割合
で導入されているρ−アルコキシベンジルアルコール樹
脂）　６５０　ｍｇを振とうてきるように装置したＭｅ
ｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法用反応装置にとり、ジメチル
ホルムアミド（２０　ｍｌ）に！Ｑ濁し３０分間振とう
し、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）樹脂を＃澗させた。

これを、以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ中、１分間振どう後、濾過し
たく２回）。

ｂ）　２０　Ｚ　と”：　’）ジンーＤＭＦ溶液２０１
中、３分間振とう後、濾過した。

ｃ）　２０　ＮピペリジンーＤＭＦ溶液２０１中でｌＯ
分間振どう後、濾過して、Ｆｍｏｃ基を脱離した。

ｄ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ　で２回洗浄。

ｅ）イソブロバノール２０ｎ１　で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法｛κａｉｓｅｒ　Ｅ．　ｅｔ　
ａｌ．，　Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．　．　　３４，
　５９５（１９７０）｝により．　Ｆｍｏｃ基が完全己
こ除去した二とを確認し、もし、不完全ならば上記の除
去サイクルを繰り返した。また、完全に除去されている
ならば、以下に示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたｔｌ−Ａｒｇ
（Ｍｔｒ）樹脂をＤＭＦ　２０　ｍｌで２回振どうする
ことによって膨潤させた。

ｇ）　Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ　（２５６　ｍｇ，　０．７６
ミリモル　）、ＨＯＢｔ　（１２３ｍｇ，　０．９１ミ
リモノレ）のＤＭＦ溶冫α（２０　ｍｌ）を加え、１分
間振とうした。

ｈ）　Ｉ　’　ジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メ
チレン溶液０．８４　ｍｌを添加し、７０分間振とうし
た。

）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ　　で２回洗浄。

ｊ）イソブロバノール２０ｍ１で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法ミこよって縮合が完了している
か否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縄合サイ
クルを繰り返した。また、完全に縮合が完了しているな
らば、再び、Ｆｗｏｃ基除去サイクルに供した後、８）
ステップをＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｍｂｈ）で行う縮合サイ
クルに付した。以後、同様に、Ｆｍｏｃ基除去サイクル
とＦｍｏｃアミ、ノ酸縮合サイクルを繰り返してＦｍｏ
ｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕ’）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕ　Ｌ）
、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｆ
ｍｏｃ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｌａ＋Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ　’）、Ｆｍｏｃ−Ｐ
ｒｏ％Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕｓ　Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ（Ｍｂｈ
）、ＦｌｌＩｏｃ−Ｖａｌ、Ｆ．ｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｕ’）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｍｂｈ）、Ｆｍｏｃ−｝１
　ｉｓ（Ｆｍｏｃ）、Ｂｏｃ−ＬｅｕをＩＩＩ！次縮合
した。こうして得られたＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ａｓ
ｎ（Ｍｂｈ）−Ｇｌｕ（ＯＢｕ’）−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　
Ｉ　ｎ（Ｍｂｈ）−　Ｌｅｕ−Ｐｒｏ”Ａｓｐ（ＯＢｕ
　Ｌ）−Ａｌａ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）　−　Ｈｓ−Ｓｅｒ
（　Ｂｕ　ｔ）−Ｔｈｒ（Ｂｕ　′−）−Ｔｈｒ（Ｂｕ
　’）−Ｇｌ　ｎ（Ｍｂｈ）　−　Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｍ
ｔｒ）樹脂を樹脂からの脱離工程に供した。

即ち、塩化メチレン２０１で２回洗浄し、塩化メチレン
（１０　ｍｌ）一アニソール（２．ＯＱ概１）一チオフ
ェノール（０．６６　ｍｌ）渭合溶液に懸濁、続いて、
トリフルオロ酢ＫｊＪ　（２０　　１）一塊化メチレン
（２．３２　ｍｌ）を加え１時間振とうした。樹脂を濾
過し、得られた濾液にエーテルを加え、濾過することに
よって、白色沈殿（　６００　ｍｇ　）を得た。これに
、トリプルオロ酢１２（１３．５　ｍｌ）一チオアニソ
ール（１．５　ｍｌ）一子オフェノール（０．６０　ｍ
ｌ）混合溶液を添加、５時間攪拌した。この反応溶液に
、エーテルを加え、濾過することによって白色沈殿（４
６０ｍｇ）を得た。

これを逆相液体クロマトグラフィーに供し、求めるＬｅ
ｕ４ｉｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−
Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｈ　ｉｓ−Ｓｅｒ−
Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒ３画分を分取し
、得られた溶出画分を濃縮乾固した。ついで、蒸留水を
加え数回濃縮乾固を繰り返した後、少量の蒸留水とこと
かし、凍結乾燥する。こうして精製ざれたＬｅｕ−｝１
　ｉｓ−Ａｓｎ−Ｇ　ｌｕ−Ｖａｌ　−Ｇｌ　ｎ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−１１ｉｓ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒ３　＋５８
　ｍｇを得た。

精製物の一部をとり、気相プロテインシークエンサーで
アミノ酸配列を調べたところ、Ｌｅｕ，Ｈｉｓ．Ａｓｎ
．．Ｇ　ｌｕ．Ｖａ　ｌ　＋ＧＩｎ．Ｌｅｕ．Ｐｒｏ，
Ａｓｐ，Ａｌａ．Ａｒ３，１１　ｉｓ，Ｓｅｒ．Ｔｈｒ
，Ｔｈｒ，ＧｌｎＳＰｒｏ，Ａｒｇの順となり求めるベ
ブチド配列と一致した。また、ＦＡＢ質量分析器による
分子員測定を行ってもｍ／ｚ　２１００．０３　（Ｍｌ
’）となり理論値に一致した。ざらに、６Ｎ−ＨＣＩ水
溶淑て加水分解し、アミノ酸分析に供したところＡｓｐ
　２．０２，　Ｔｈｒ１．９０，　Ｓｅｒ　Ｏ．９３．
　Ｇレ２．９７．　Ｐｒｏ　２．００，　Ａｌａ　Ｏ．
９８Ｖａｔ　　１．０２，　Ｌｅｕ　２．０３，　Ｈｉ
ｓ　２．０３，　Ａｒｇ　２．０５の比となりこれもま
た理論値と一致した。従って、求めるベブチドが合成さ
れていることが！認さ０た。

また、クロマトグラフィ−と逆相液体クロマトグラフィ
ーで純度よく合成されていることも確認された。

実施例２ Ｐｒｏ−　Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−　Ｐｈｅ−　ｉ　
Ｉｅ−Ａｒ４−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒの合成 Ｆｍｏｃづｈｒ（Ｂｕ’）樹脂（Ｆｍｏｃ−Ｔｈ．ｒ（
Ｂｕ’）が０．６９ミリモル／名樹脂の割合で導入され
ている１）一アルコキシノ＼ンシルアルコール樹脂）　
４３５　ｍｇを振とうできるように装置したＭｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄの固相法用反応装置：ことり、ジメチルホル
ムアミド（２０　ｍｌ）にＭ５し３０分間振とうし、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕ’）樹脂を膨潤させた。

こＺＬを、以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ｉａ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ中、１分間振どう後、濾過
した（２回）。

ｂ）　２０　ｍビベリジン一〇ＭＦ溶ｉｆｆ　２０　ｍ
ｌ中、３分間振どう後、濾過した。

ｃ）　２０　！ピペリジ？一〇ＭＦ溶液２０ｍｌ中で１
０分間振どう後、濾過して、Ｆｍｏｃ基を脱離した。

ｄ）卸Ｆ２０１　で２回洗浄。

ｅ）イソプロパノール２０ｍ１　で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法により、ＦｍＯＣ基が完全に除
去したことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去サ
イクルを繰り返した。また、完全に除去されているなら
ば、以下に示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたＨ−Ｔｈｒ（
Ｂｕ’）樹脂な［ｌＭＦ　２０　ｍｌ　て２回振どうす
ることｔこよって膨澗させた。

ｇ）　Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ　（３０４　ｍｇ，　０．９　
ミリモル　）、ＨＯＢｔ（１４６　ｍｇ，　１．０８ミ
リモル）のＤＭＦ溶＋５．　（２０　ｍｌ）を加え、１
分間振とうした。

ｈ）　Ｉ　Ｍジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メチ
レン溶Ｍ　Ｏ．９９　ｍｌを添加し、７０分間振とうし
た。

）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ　て２回冫先浄。

ｊ）イソブロバノール２Ｏ　ｎ＋Ｉで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。また、完全に縮合が完了しているなら
ば、再び、ＦＩＩｌｏｃ基除去サイクルζこ供した後、
８）ステップをＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ＢｕＬ）テ行う縮合
サイクルに付した。以後、同様に、Ｆｍｏｃ基除去サイ
クルとＦｍｏｃアミノ酸縮合サイクルを繰り返してＦｍ
ｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）
、Ｆｍｏｃ−ｌ１ｅ＋Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ＋Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｅｕ，　Ｆｎ＋ｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ’）、Ｆｍｏｃ−
Ｐｈｅ，　Ｂｏｃ−Ｐｒｏを順次縄合した。こうして得
られたＢｏｃ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ（ＯＢｕ　ｔ）
−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−　１　１ｅ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｌ
ｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ’）−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ（
Ｂｕｔ）樹脂を樹脂からの脱離工程ここ供した。

即ち、塩化メチレン２０ｍ１で２回洗浄し、塩化メチレ
ン（ｔｏ゛ｍ＋）一アニソール（２．００　ｍｌ）一チ
オフェノール（０．６６　＋ｌ＋）混合溶液に懸濁、続
いて、トリフルオロ酢酸（２０　ｍｌ）一塩化メチレン
（２．３２　ｍｌ）を加え１時間振とうした。樹脂を濾
過し、得られる濾液にエーテルを加え、濾過することに
よって、白色沈殿（　７３７　ｍｇ　）を得た。これζ
こ、トリフルオ口酢！（１３．５　ｍｌ）一チオアニソ
ール（１．５　ｍｌ）一チオフェノール（０．６０　ｍ
ｌ）混合溶｝αを添加、５時間撹拌した。この反応溶液
に、エーテルを加え、濾過することによって白色沈殿（
６８０　ｍｇ　）を得た。

得られた白色粉末を逆相液体クロマトグラフィーに供し
、求めるＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−　
ｌ　１ｅ−Ａｒ３−Ｌ｝’ｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ
画分を分取し、得られる溶出画分を濃縮乾固する。つい
て、蒸留水を加え数回ｍ縮乾固を繰り返した後、少量の
蒸留水にとかし、凍結乾燥する。こうして精製されたＰ
ｒｏ−Ｐｈｅ−ＡＳｐ−Ｌビｕ−１”ｂｅ−ｌｌｅ−八
ｒ３−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｔ＋ｒ　＋１３　’
ｍｇを得た。

精製物の一部をとり、気相プロテインシークエンサーで
アミノ酸配列を調べたところＰｒｏ、Ｐｈｅ，ＡＳＩ）
、Ｌｅｕ＋Ｐｈｅ，　ｌ　ｌｅ．．Ａｒｇ＋Ｌｙｓ＋ｓ
ｅｒ＋Ｐｒｏ，ＴｈｒＯ順となり求めるベブチド配列と
一致した。また　、ＦＡＢ質量分析器（こよる分子量測
定を行っても　ｍ／ｚ　１３２０．９３（Ｍｌ”）とな
り理Ｓ高値に一致した。さらに、６Ｎ−｝１ｃ水溶ｉ々
で４８時間加水分解し、アミノ酸分析に供したところＡ
ｓｐ　Ｏ．９９．　Ｔｈｒ　Ｏ．９５，　Ｓｅｒ　Ｏ．
８８．　Ｐｒｏ　！．８９，　　ｌｌｅ　　Ｏ．９７，
　　Ｌｅｕ　　１．００，　　Ｐｈｅ　　１．９２，　
　Ｌｙｓ　　Ｏ．９９．Ａｒｇ　Ｏ．９７の比となりこ
れもまた理論値と一致した。

従フて、求めるベブチドが合成されていることが確認さ
れた。

また、薄層クロマトグラフィーと逆相液体クロマトグラ
フィーで純度よく合成されていることが確認された。

実施例３ Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−１ｌｅ−Ａ
ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏの合成 Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏｍ脂（　Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏが０．３３
ミリモル／ｇ樹脂の割合で導入されているｐ−アルコキ
シベンジルアルコール樹脂）　９０９　ｍｇを振とうで
きるようにＨ置したＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法用反
応装置にとり、ジメチルホルムアミド（２０　ｍｌ）に
懸濁し３０分間振とうし、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ樹脂をＩａ
５潤させた。

これを、以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ中、１分間振どう後、濾過し
た（２回）。

ｂ）　２０χビベリジン一〇ＭＦ溶液２０　ｍｌ中、３
分間振どう後、濾過した。

ｃ）　２０　％ビペリジンーＤＭＦ溶液２０ｍ１中でｌ
Ｏ分間振どう後、濾過して、Ｆ耐ＯＣ基を脱離した。

ｄ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ　で２回洗浄。

ｅ）イソブロパノール２０　ｍｌで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法により、Ｆｍｏｃ基が完全に除
去したことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去サ
イクルを繰り返した。また、完全に除去されているなら
ば、以下に示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたＨ−Ｐｒｏ樹
脂なＤＭＦ　２０　ｍｌ　　で２回振どうすることによ
って膨潤させた。

ｇ）　Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ’）　（３６０　ｍｇ，
　０．９　ミリモル）、｝１０Ｂｔ　（１４６　ｍｇ．
　１．０８　　ミリモル）のＤＭＦ溶液（２０　ｍｌ）
を加え、１分間振とうした。

ｈ）ＩＭジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メチレン
溶ｈｌ　０．９９　＋ＩＩｆを添加し、７０分間振とう
した。

）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ　で２回洗浄。

Ｊ）イソブロバノール２０ｍ１で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。また、完全に縮合が完了しているなら
ば、再び、ＦｍｏＣ基除去サイクルに供した後（但し、
ｂ）およびＣ）ステップは、０．５％ビペリジンを用い
て行なった）、ｇ）ステップをＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏ
Ｃ）で行う縮合サイクルに付した。以後、Ｆｍｏｃ基除
去サイクルとＦｍｏｃアミノ酸縮合サイクルを繰り返し
てＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）、Ｆｍｏｃ−１１ｅ，　
Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，　ＦｍＯｃ−Ｌｅｕ，　Ｆｍｏｃ−
Ａｓｐ（ＯＢｕ’）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−．　Ｂｏｃ−
Ｐｒｏを順次縮合した。こうして得られたＲｏｅ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ（ＯＢｕ　’）　−　Ｌｅｕ　−　
Ｐｈｅ−　ｌ　１ｅ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）　−　Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｐｒｏ樹脂を樹脂からの
脱離工程に供した。

即ち、塩化メチレン２０１で２回洗浄し、塩化メチレン
（１０　ｍｌ）一アニソール（２．００　ｍｌ）一チオ
フェノール（０．６６　ｍｌ）混合溶液に懸濁、続いて
、トリフルオロ酢酸（２０　ｍｌ）一塩化メチレン（２
．３２　ｍｌ）を加え　１時間振とうした。樹脂を濾過
し、得られる濾液にエーテルを加え、濾過することによ
って、白色沈殿（２８６　ｍｇ）を得た。これに、トリ
フルオ口酢酸（１３．５　ｍｌ）一チオアニソール（１
．５　ｍｌ）一チオフェノール（０．６０　ｍｌ）混合
溶液を添加、５時間攪拌した。この反応溶液に、エーテ
ルを加え、濾過することによって白色沈殿（２６０　ｍ
３）を得た。

得られた白色粉末を逆相液体クロマトグラフィーに供し
、求めるＰ’ｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−
　Ｉ　Ｉｅ−Ａｒ８−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ画分を分
取し、得られる溶出画分を濃縮乾固する。ついで、蒸留
水を加え数回濃縮乾固を繰り返した後、少量の蒸留水に
とかし、凍結乾燥する。こうして精製さ・れたＰｒｏ−
Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−１１ｅ−Ａｒｇ−Ｌ
ｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ　５２　ｍｇを得た。精製物の一
部をとり、気相プロテインシークエンサーでアミノ酸配
列を調べたところＰｒｏ、Ｐｈｅ％Ａｓｐ％Ｌｅｕ，Ｐ
ｈｅ，ｅ，Ａｒｇ、Ｌｙｓ．Ｓｅｒ．Ｐｒｏの順となり
求めるベブチド配列と一致した。また　．ＦＡＢ質呈分
析器による分子Ｊｌ　ｊＵＩＩ定を行っても　ｍ／ｚ　
１２１９．７４　（Ｍ｝ｌ”）となり理論値に一致した
。さらに、６Ｎ−ＨＣＩ水溶液で４８時間加水分解し、
アミノ酸分析に供したところＡｓｐ１．００，　Ｓｅｒ
　Ｏ．９＋，　Ｉ’ｒｏ　＋．８７，　ｌｉｅ　Ｏ．９
６，　Ｌｅｕ　１．００，Ｐｈｅ　１．９２，　Ｌｙｓ
　Ｏ．９７，　Ａｒｇ　Ｏ．９６の比となりこれもまた
理論値と一致した。従って、求めるペブチドが合成され
ていることが確認された。

また、薄層クロマトグラフィーと逆相液体クロマトグラ
フィーで純度よく合成されていることが確認ざれた。

実施例４ Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ＝Ｐｈｅ−　Ｉ　Ｉｅ
−Ａｒ３−Ｌｙｓ−Ｓｅｒの合成Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂ
ｕｔ）樹脂（Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ’）が０．４０　
ミリモル／８樹脂の割合で導入されているｐ−７ルコキ
シベンジルアルコール樹脂）　７５０　ｍｇを振とうで
きるように装置したＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法用反
応装置にとり、ジメチルホルムアミド（２０　ｍｌ）に
懸濁し３０分間振とうし、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ’）
樹脂を膨潤させた。

これを、以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ中、１分間振どう後、濾過し
た（２回）． ｂ）　２０　Ｘヒヘ’７ジン−ＤＭＦ溶ｆｆ２０ｉｌ中
、３分間振どう後、濾過した。

ｃ）　２０　％ビベリジンーＤＭＦ溶液２０　ｍｌ中で
１０分間振どう後、濾過して、Ｆｍｏｃ基を脱離した。

ｄ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回洗浄。

ｅ）イソブロバノール２０１で・２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法により、Ｆｍｏｃ基が完全に除
去したことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去サ
イクルを繰り返した。また、完全に除去されているなら
ば、以下に示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたＨ−Ｓｅｒ（
Ｂｕｔ）樹脂ＤＭＦ　２（ｌ　ｍｌで２回振どうするこ
とによって膨潤させた。

ｇ）　Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｒｏｅ）　（４２２　ｍｇ，
　０．９　ミリモル）、ＨＯＢｔ　（１４６　ｍｇ，　
１．９８　　ミリモル）のＤＭＦ溶液（２０　ｍｌ）を
加え、１分間振とうした。

ｈ）　Ｉ　Ｍ　ジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メ
チレン溶ｊｌ　Ｏ．９９　ｍｌを添加し、７０分間振と
うした。

）　ＤＭＦ　２０．ｍｌで２回洗浄。

？）イソブロバノール２０　ｍｌで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によフて縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。また、完全に縮合が完了しているなら
ば、再び、Ｆｍｏｃ基除去サイクルに供した後、８）ス
テップをＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）　Ｔ：行う縮合サ
イクルに付した。以後、同様に、Ｆｍｏｃ基除去サイク
ルとＦｍｏｃアミノ酸縮合サイクルを繰り返してＦｍｏ
ｃ−１１ｅ＋Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ．　Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ，
　Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕＬ）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ．
　［ｌｇ（−ｐｒ■を順次縮合した。こうして得られた
Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ（ＯＢｕ’）−Ｌｅｕ
−Ｐｈｅ−　１　ｌｅ−Ａｒ３（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｒ
ｏｅ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ’）樹脂を樹脂からの脱離工程に
供した。

即ち、塩化メチレン２０耐１で２回洗浄し、塩化メチレ
ン（１０　ｍｌ）一アニソール（２．００　ｍｌ）一チ
オフェノール（０．６６　ｍｌ）混合溶液に懸濁、続い
て、トリフルオロ酢酸（２０　ｍｌ）一塩化メチレン（
２．３２　ｍｌ）を加え１時間振とうした。樹脂を濾過
し、得られるｍ液にエーテルを加え、濾過することによ
って、白色沈殿（４００　ｍｇ　）を得た。これに、ト
リフルオ口酢Ｍ（１３．５　ｍｌ）一チオアニソール（
１．５　ｍｌ）一チオフェノール（０．６０　ｍｌ）混
合溶液を添加、５時間攪拌した。この反応溶液に、エー
テルを加え、濾過することによって白色沈殿，（４１０
　ｍｇ）を得た。

得られた白色粉末を逆相液体クロマトグラフィに供し、
求めるＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−　ｌ
　１ｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ画分を分取し、得られ
る溶出画分を濃縮乾固する。ついで、蒸留水を加え数回
濃縮乾固を繰り返した後、少量の蒸留水にとかし、凍結
乾燥する。こうして精製されたＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ
−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−　ｌ　１ｅ−へｒｇ−Ｌｙｓ−Ｓｅ
ｒ　１６８　ｍｇを得た。精製物の一部をとり、気相プ
ロテインシークエンサーでアミノ酸配列を調べたところ
Ｐｒｏ＋Ｐｈｅ，Ａｓｐ、ＬｅｕＳＰｌ＋ｅ，　ｌ　ｌ
ｅ，Ａｒｇ．しｙｓ．　Ｓｅ　ｒの順となり求めるペブ
チド配列と一致した。また　、ＦＡＢ質量分析器による
分子量測定を行っても　ｍ／ｚ　１１２２．６６　（Ｍ
ｌ｛”）となり理論値に一致した。さらここ、６Ｎ−Ｍ
ＣＩ水，容凍て加水分解し、アミノ酸分析に供したとこ
ろＡｓｐ　１．０＋，　Ｓｅｒ　Ｏ．９３，　ＰｒｏＯ
．９８．　ｌｉｅ　Ｏ．９４．　Ｌｅｕ　Ｏ．９９，　
Ｐｈｅ　１．９５，　Ｌｙｓ　Ｏ．９９，　Ａｒｇ０．
９７の比となりこれもまた理論値と一致Ｂｒ ヨ６ した。従って、求めるペブチドが合成されていることが
確認された。

また、薄層クロ，マトグラフィーと逆相液体クロマトグ
ラフィーで純度よく合成されていることが確認された。

実施例５ Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−．Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−　ｌ　１
ｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓの合成Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）
樹脂（Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）が０．５２　　ミリ
モル／８樹脂の割合で導入されているｐ−アルコキシベ
ンジルアルコール樹，ｉ）　５７７　ｍｇを振とうでき
るように装置したＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法用反応
装置にとり、ジメチルホルムアミド（２０　ｍｌ）に懸
濁し３０分間振とうし、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）樹
脂を膨潤させた。

これを、以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付し，た。

ａ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ中、１分間振どう後、濾過し
た（２回）。

ｂ）　２０　Ｋビペリジン−［ＩＭＦ溶液２０ｍｌ中、
３分間振どう後、濾過し・た。

Ｃ）　２０　：ビペリジンー開Ｆ溶濠２０　ｍｌ中で１
０分間振とう後、濾逼して、Ｆｍｏｃ基を脱離した。

ｄ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回洗浄。

ｅ）イソブロバノール２０　ｍｌで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法により．　Ｆｍｏｃ基が完全に
除去したことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去
サイクルを繰り返した。また、完全に除去されているな
らば、以下ζこ示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたｌ｛−Ｌｙｓ
（８ｏｃ）樹脂をＤＭＦ　２０　ｍｌ　で２回振どうす
ることによって膨潤させた。

ｇ）　Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）　（５４８　ｍｇ，
　０．９　ミリモル）、｝ｌｏｆｔ　（１４６　ｍｇ，
　１．０８　　ミＩ）　モ，Ｌ）　（ＤＤＭＦｌｊｉＺ
（２０　ｍｌ）を加え、１分間振とうした。

ｈ）　ｌ　Ｍジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メチ
レン．１Ｊ渣０．９９　ｍｌを添加し、７０分開振とぅ
した。

）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回洗浄。

Ｊ）イソブロバノール２０　ｍｌで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。また、完全に縮合が完了しているなら
ば、再び、Ｆｍｏｃ基除去サイクルに供した後、８）ス
テップをＦｍｏｃ−　１　１ｅで行う縮合サイクルに付
した。以後、同様に、Ｆｍｏｃ基除去サイクルとＦｍｏ
ｃアミノ酸縮合サイクルを繰り返してＦｍｏｃ−Ｐｈｅ
，　Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ，　Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ
）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ＋Ｂｏｃ−ＰｒｏをＩｌｉｉ次縮
合した。こうして得られたＢｏｃ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−　
Ａｓｐ（ＯＢｕ　’）　−　Ｌｅｕ　−　Ｐｈｅ−　ｌ
　ｌ　ｅ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）　−　Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）樹
脂を樹脂からの脱離工程に供した。

即ち、塩化メチレン２０　ｍｌで２回洗浄し、塩化メチ
レン（ｔｏ　ｍｌ）一アニソール（２．００　ｌｉｌ）
一チオフェノール（０．６６　ｍｌ）混合溶液に！Ｑ濁
、続いて、トリフルオロ酢酸（２０　ｍｌ）一塊化メチ
レン（２．３２　ｍｌ）を加え１時間振とうした。樹脂
を濾過し、得られる濾液にエーテルを加え、濾過するこ
とによって、白色沈殿（３２０　ｍｇ　）を得た。これ
に、トリフルオ口酢酸（１３．５　ｍｌ）一チオアニソ
ール（１．５　ｍｌ）一チオフェノール（０．６０　ｍ
ｌ）混合溶液を添加、５時間攪拌した。この反応溶液に
、エーテルを加え、濾過することによって白色沈殿（２
８０　ｍ３）を得た。

得られた白色粉末を逆相液体クロマトグラフイーに供し
、求めるＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌ
ｌｅ−＾ｒｇ−ＬｙＳ画分を分取し、得られる溶出画分
を濃縮乾固する。ついで、蒸留水を加え数回濃縮乾固を
繰り返した後、少量の蒸留水にとかし、凍結乾燥する。

こうして精製されたＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−
Ｐｈｅ−　１　ｌｅ−Ａｒ３−Ｌｙｓ　１０２　ｍｇを
得た。精製物の一部をとり、気相プロテインシークエン
サーでアミノ酸配列を調べたところＰｒｏ、Ｐｈｅ，Ａ
ｓｐ．Ｌｅｕ，Ｐｈｅ，　ｌ　ｌｅ，Ａｒｇ、Ｌｙｓの
順となり求めるベプチト配列と一致した。また　、ＦＡ
Ｂ貿！分析器による分子量ｆｆｌｌ定を行っても　ｍ／
ｚ１０３５．５９　（Ｍｌ”）となり理論値に一致した
。さらに、６Ｎ−ＨＣＩ水溶液で加水分解し、アミノ酸
分析に供したところＡｓｐ　１．００．　Ｐｒｏ　Ｏ．
９２，　ｌｉｅ　０．９Ｊ　Ｌｅｕ　＋．００．　Ｐｈ
ｅ　１．９＋，　Ｌｙｓ　Ｏ．９７，　Ａｒｇ　Ｏ．９
６の比となりこれもまた理論値と一致した。従って、求
めるペプチドが合成されていることが確認された。

純度は、３Ｎクロマトグラフイーと逆相液体クロマトグ
ラフイーで純度よく合成されていることが確認された。

（以　下　余　白） 実施例６ Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−　ｌ　Ｉｅ−Ｐｈｅ−　１　
１ｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒの合成Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（Ｂｕ’）樹脂（Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ’）が０．４
０　ミリモル／８樹脂の割合で導入されているρ−アル
コキシベンジルアルコール樹脂）　７５０　ｍｇを振と
うできるように装置したＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法
用反応装置にとり、ジメチルホルムアミド（２０　ｍｌ
＞に懸濁し３０分間振とうし、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ
’）樹脂を１１潤させた。

これを、以下のＦ＋ｎｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ中、１分間振どう後、濾過し
た（２回）。

ｂ）　２０　！ビベリジン−ＤＭＦ溶液２０１中、３分
間振どう後、濾過した。

Ｃ）　２０　ｘヒヘリジンーＤＭＦ溶液２０１中テ１０
分間振どう後、濾過して、ＦＩＩＩｏＣ基を脱離した。

ｄ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回洗浄。

ｅ）イソブロバノール２０１で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法により、Ｆｍｏｃ基が完全に除
去したことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去サ
イクルを繰り返した。また、完全に除去されているなら
ば、以下に示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたＨ−Ｓｅｒ（
Ｂｕ　’）樹脂ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回振どうするこ
とによフて膨潤させた。

ｇ）　Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　（４２２　ｌｌｇ
，　０．９　ミリモル）、ＨＯＢｔ　（１４６　ｍｇ．
　１．０８　ミリモル）のＤＭＦ溶液（２０　ｍｌ）を
加え、ｉ分間振とうした。

ｈ）　ｌ　Ｍジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メチ
レン溶液０．９９　ｍｌを添加し、７０分間振とうした
。

ｉ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回洗浄。

ｊ）イソブロパノール２０１で２回洗浄。

ここで−．　Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了してい
るか否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サ
イクルを繰り返した。また、完全に縮合が完了している
ならば、再び、Ｆｍｏｃ基除去サイクルに供した後、ｇ
〉ステップをＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）で行う縮合サ
イクルに付した。以後、同様に、Ｆｍｏｃ基除去サイク
ルとＦｍｏｃアミノ酸縮合サイクルを繰り返して４う Ｆｍｏｃ−１１ｅ，Ｆｍｏｃ４ｈｅ，Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ
＋　Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ’）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
，　Ｂｏｃ−Ｐｒｏを順次縮合した。こうして得られた
Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ（ＯＢｕ’）−ｌ１ｅ
−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｂｏａ
）−Ｓｅｒ（Ｂｕ’）樹脂を樹脂からの脱離工程に供し
た。

即ち、塩化メチレン２０ｍｌで２回洗浄し、塩化メチレ
ン（１０　ｍｌ）一アニソール（２．００　ｍｌ）一チ
オフェノール（０．６６　ｍｌ）混合溶液に懸濁、続い
て、トリフルオロ酢酸（２０　ｍｌ）一塩化メチレン（
２．３２　ｍｌ）を加え１時間振とうした。樹脂を濾過
し、得られる濾液にエーテルを加え、濾過することによ
って、白色沈殿（３５０　ｍｇ）を得た。これに、トリ
フルオ口酢酸（１３．５　ｍｌ）一チオアニソール（１
．５　ｍｌ）一チオフェノール（０．６０　ｍｌ）混合
溶液を添加、５時間攪拌した。この反応溶液に、エーテ
ルを加え、濾過することによって白色沈殿（３２２　ｍ
ｇ）を得た。

得られた白色粉末を逆相液体クロマトグラフィに供し、
求めるＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｐｈｅ−ｌｌ
ｅ−Ａｒｚ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ画分を分取し、得られる溶
出画分を濃縮乾固する。ついで、蒸留水を加え数回濃縮
乾固を繰十＋ り返した後、少量の蒸留水にとかし、凍結乾燥する。こ
うして精製されたＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−　Ｉ　１ｅ
−Ｐｈｅ一ｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ　７１　ｒａｇ
を得た。精製物の一部をとり、気相プロテインシークエ
ンサーでアミノ酸配列を調べたところＰｒｏ，　Ｐｈｅ
ＳＡｓｐ，　ｌ　ｌ　ｅ，　Ｐｈｅ，　ｌ　ｌｅ，Ａｒ
ｇ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒｏ順となり求めるペブチド配列と一
致した。また、ＦＡＢ質量分析器による分子量測定を行
ってもｍ／ｚ　１１２２．６０　（ＭＨ”）となり理論
値に一致した。

さらに、ＯＮ−ＨＣＩ水溶液で加水分解し、アミノ酸分
析に供したところＡｓｐ　１．０２，　Ｓｅｒ　Ｏ．９
６，　Ｐｒｏ　０．９Ｂ，目ｅ　１．９２，　Ｐｈｅ　
１．９３，　Ｌｙｓ　１．００，　Ａｒｇ　Ｏ．’９７
の比となりこれもまた理論値と一致した．従フて、求め
るペブチドが合成されていることが確認された。

また、薄層クロマトグラフィーと逆相液体クロマトグラ
フィーで純度よく合成されていることが確認された。

（以　下　念　白） 実施例７ Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−　ｌ　１ｅ−Ａｒｇ
−Ｌｙｓの合成Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏａ）樹脂（　Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｒｏｅ）が０．６７　ミリモル／ｇ樹
脂の割合で導入されてぃるｐ−アルコキシベンジルアル
コール樹脂）　３４３　ｍｇを振とうできるように装置
したＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法用反応装置にとり、
ジメチルホルムアミド（２０　ｍｌ）に懸濁し３０分間
振とうし、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）樹脂を膨潤させ
た。

これを、以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　ＤＭＦ　２０　１中、１分間振どう後、濾過した
（２回）。

ｂ）　２０　％ビベリジン−ＤＭＦ溶液２０　ｍｌ中、
３分間振どう後、濾過した。

ｃ）２０χヒヘリジ”，ｔ−ＤＭＦ溶液２０　ｍｌ中Ｔ
ＩＯ分間振とう後、濾過して、Ｆｍｏｃ基を脱離した。

ｄ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回洗浄。

ｅ）イソブロパノール２０１で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法により、Ｆｍｏｃ基が完全に除
去したことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去４
テ サイクルを繰り返した。また、完全に除去されているな
らば、以下に示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたＨ−Ｌｙｓ（
Ｒｏｅ）樹脂なＤＭＦ　２０　ｍｌ　で２回振どうする
ことによってＩ１潤させた。

ｇ）　Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ＞　（４２０　Ｂ，　
０．７　ミリモル）、ｆｌｏａｔ　（１１２　１１ｇ，
　Ｏ。８３　ミリモル）のＤＭＦ溶液（２０　ｍｌ）を
加え、１分間振とうした。

ｈ）ＩＭジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メチレン
溶液０．７６　ｍｌを添加し、７０分間振とうした。

ｉ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回洗浄。

ｊ）イソブロパノール２０石１で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。また、完全に縮合が完了しているなら
ば、再び、Ｆｍｏｃ基除去サイクルに供した後、ｇ）ス
テップをＦｍｏｃ−ｌ　ｌｅで行う縮合サイクルに付し
た。以後、同様に、Ｆｍｏｃ基除去サイクルとＦｍｏｃ
アミノ酸縮合サイクルを繰り返してＦｍｏｃ４ワ Ｐｈｅ．．Ｆｍｏｃ−ＬｅｕＳＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢ
ｕ’）、Ｂｏｃ−Ｐｈｅを順次縮合した。こうして得ら
れたＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ（ＯＢｕ　ｔ）−Ｌｅｕ−
Ｐｈｅ−ｌ１ｅ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）｛ｙｓ（Ｂｏｃ）樹
脂を樹脂からの脱離工程に供した。

即ち、塩化メチレン２０１で２回洗浄し、塩化メチレン
（１０　ｍｌ）一アニソール（２．００　ｍｌ）一チオ
フェノール（０．６６　ｍｌ）混合溶液に懸濁、続いて
、トリフルオロ酢酸（２０　ｍｌ）一塩化メチレン（２
．３２　ｍｌ）を加え１時間振とうした。樹脂を濾過し
、得られる濾液にエーテルを加え、濾過することによっ
て、白色沈殿（４２０　ｍｇ＞を得た。これに、トリフ
ルオ口酢酸（１３．５　ｍｌ）一チオアニソール（１．
５　ｍｌ）一チオフェノール（０．６０　ｍｌ）混合溶
液を添加、５時間攪拌した。この反応溶液に、エーテル
を加え、濾過することによって白色沈殿（３３，Ｏ　ｍ
ｇ＞を得た。

得られた白色粉末を逆相液体クロマトグラフィーに供し
、求めるＰｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−　ｌ　１ｅ
−ＡｒＨ−Ｌｙｓ画分を分取し、得られる溶出画分を濃
縮乾固する。

ついで、蒸留水を加え数回濃縮乾固を繰り返した後、少
量の蒸留水にとかし、凍結乾燥する。こう４？ して精製されたＰｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｉ
ｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　５Ｂｍｇを得た。精！！物の一部
をとり、気相プロテインシークエンサーでアミノ酸配列
を調べたところＰｈｅ，ＡｓｐＳＬｅｕ，Ｐｈｅ，ｌｉ
ｅＳＡｒ８、Ｌｙｓの順となり求めるベブチド配列と一
致した。また、ＦＤ質量分析器による分子量測定を行っ
ても　Ｉｌ１／２　９３Ｂ　（ＭＨ”）となり理論値に
一致した。さらに、６Ｎ−｝１ｃＩ水溶液で加水分解し
、アミノ酸分析に供したところＡｓｐ　１．００，ｌｅ
　　Ｏ．９２，　　Ｌｅｕ　　１．００，　　Ｐｈｅ　
　１．９２，　　Ｌｙｓ　　Ｏ．９８，　　Ａｒｇ０．
９５の比となりこれもまた理論値と一致した。従って、
求めるペブチドが合成されていることが確認された。

純度は、薄層クロマトグラフィーと逆相液体クロマトグ
ラフィーで純度よく合成されていることが確認された。

（以　下　＜７　白） 実施例８ Ｓｅｔ−Ｐｒｏ−ｔ’ｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−ｆ’ｈｅ
−口ｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒの合成 Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ″′）樹脂（Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（Ｂｕ’）が０．４０　　ミリモル／ｇ樹脂の割合で導
入されているｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂）
　４５０　ｍｇを振とうできるように装置したＭｅｒｒ
ｉｆｉｅｌｄの固相法用反応装置にとり、ジメチルホル
ムアミド（２０　ｍｌ）に懸濁し３０分間振とうし、Ｆ
ｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）樹脂を膨潤させた。

これを、以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ中、１分間振どう後、濾過し
た（２回）。

ｂ）　２０　Ｘビベリジン一〇ＭＦ溶液２０ｍＩ中、３
分間振とう後、濾通した。

ｃ）　２０　％ピベリジン一〇ＭＦ溶ｆｆ２０ｍｌ中で
１０分間振どう後、濾過して、Ｆｍｏｃ基を脱離した。

ｄ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回洗浄。

ｅ）イソブロバノール２０ｍｌで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法により、Ｆｍｏｃ基が完全に除
去したことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去サ
イクルを繰り返した。また、完全に除去されているなら
ば、以下に示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆ…ＯＣ基除去サイクルで得られたＨ−Ｓｅｒ（
Ｂｕｔ）樹脂ＤＭＦ　２０　ｍｌで２回振どうすること
によって膨潤させた。

ｇ）　Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　（２５２　ｍｇ，
　０．５　ミリモル）、１｛Ｏａｔ　（５５　１１ｇ＋
　０．４１　ミリモル）の［ｌＭＦ溶液（２０　ｍｌ＞
を加え、１分間振とうした。

ｈ）　ｌ　Ｍジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メチ
レン溶液０．５１を添加し、７０分間振とうした。

）　ＤＭＦ　２０　ｍｌで２′回洗浄。

ｊ）イソブロバノール２０１で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。また、完全に縮合が完了しているなら
ば、再び、Ｆｍｏｃ基除去サイクルに供した後、ｇ）ス
テップをＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）で行う縮合サイク
ルに付した。以後、同様に、Ｆｍｏｃ基除去サイクルと
Ｆｍｏｃアミノ酸縮合サイクルを繰り返してＦｍｏｃ−
ｌ１ｅ，　Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ＋Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ，　Ｆ
ｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ’）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，　Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｒｂ，　Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒを順次縮合した。

こうして得られたＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｐｒｏ
−Ｐｈｅ−Ａｓｐ（０８ｕ’）−Ｌ．ｅｕ−Ｐｈｅ−１
１ｅ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（
ＢｕＬ）樹脂をＦｍｏｃ基除去サイクルに付して、Ｈ−
Ｓｅｒ（Ｂｕ’）−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ（ＯＢｕ　
ｔ）−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−　１　１　ｅ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ
）　−　Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ　ｔ）樹脂を
得、次いで、樹脂からの脱離工程に供した。

即ち、塩化メチレン２０　ｍｌで２回洗浄し、塩化メチ
レン（１０　ｍｌ）一アニソール（２．００　ｍｌ）一
チオフェノール（０．６６　ｍｌ）混合溶液に懸濁、続
いて、トリフルオロ酢酸（２０　ｍｌ）一塩化メチレン
（２．３２　ｍｌ）を加え１時間振とうした。樹脂を濾
過し、得られる濾液を減圧濃縮した。残査にトリフルオ
ロ酢酸（１３．５　ｍｌ）一チオアニソール（１．５　
ｍｌ）一チオフェノール（０．６０　ｍｌ）混合溶液を
添加、５時間攪拌した。この反応溶液に、エーテルを加
え、濾過することによフて白色沈殿（１８３　ｍｇ）を
得た。得られた白色粉末な逆相液体クロマトグラフイー
に供し、求めるＳｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｈｅ−　ｌ　１ｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ画分
を分取し、得られる溶出画分を濃縮乾固する。ついで、
蒸留水を加え数回濃縮乾固を繰り返した後、少量の蒸留
水にとかし、凍結乾燥する。

こうして精製されたＳｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−
Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−６−Ａｒｇ−１ｙＳ−Ｓｅｒ　１１８
　Ｂを得た。精製物の一部をとり、気相プロテインシー
クエンサーでアミノ酸配列を調べたところＳｅｒ，　Ｐ
ｒｏ，　ＰｈｅＳＡｓｐＳＬｅｕ．．Ｐｈｅ，　ｌ　ｌ
　ｅ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒの順となり求めるベブチ
ド配列と一致した。また　、ＦＡＢ質量分析器による分
子量測定を行ってもｍ／ｚ　１２１０　（Ｍ｝ｌ”）と
なり理論値に一致した。さらに、６Ｎ−ＨＣＩ水溶液で
加水分解し、アミノ酸分析に供したところＡｓｐ　Ｏ．
９７，　Ｓｅｒ　１．７Ｂ，　Ｐｒｏ　Ｏ．９４，　Ｉ
ｌｅ　Ｏ．９５，　Ｌｅｕ　１．０３，　Ｐｈｅ　１．
８７，　Ｌｙｓ　１．０２，　Ａｒｃ　Ｏ．９９の比と
なりこれもまた理論値と一致した。従フて、求めるベブ
チドが合成されていることが確認された。

また、薄層クロマトグラフィーと逆相液体クロマトグラ
フィーで純度よく合成されていることが確認された。

実施例９ Ｓｅｒ−Ａ　ｒｇ−Ａｓｐ−　ｔ．ｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｈ
ｒ−　Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ　−Ｔ
ｈｒの合成 Ｆｌ１ｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕ　’）樹脂（　Ｆｍｏｃ−Ｔ
ｈｒ（Ｂｕ’）が０．６９ミリモル／８樹脂の割合で導
入されているｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂）
　４３５　ｍｇを振とうできるように装置したＭｅｒｒ
Ｎｉｅｌｄの固相法用反応装置にとり、ジメチルホルム
アミド（２０　ｌｉｔ）に懸濁し３０分間振とうし、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕ’）樹脂を膨潤させた。

これを、以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ中、１分間振どう後、濾過し
た（２回）。

ｂ）　２０　＄ピベリジンーＤＭＦ溶液２０ｍｌ中、３
分間振どう後、濾通した。

ｃ）　２０　！ビペリジンーＤＭＦ溶渣２０１中で１０
分間振どう後、濾過して、Ｆｍｏｃ基を脱離した。

ｄ）　ＤＭＦ　２０　ｉｆ　で２回洗浄。

ｅ）イソブロパノール２０ｍ１　で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法により、Ｆｍｏｃ基が完全に除
去したことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去サ
イクルを繰り返した。また、完全に除去されているなら
ば、以下に示す合成サイクルに供した。

ｆ）　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたｌ｛−Ｔｈｒ
（Ｂｕ’）樹脂をＤＭＦ　２０　ｍｌ　で２回振とうす
ることミこよって膨澗させた。

３）　Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）　（　５４８　ｍｇ
，　０．９　ミリモル）、ＨＯＢｔ　（１４６　ｍｇ，
　１．０８　ミリモル）のＤＭＦ溶液（２０　ｍｌ）を
加え、１分間振とうした。

ｈ）　ｌ　Ｍジシクロへキシル力ルポジイミド塩化メチ
レン溶液０．９９　ｍｌを添加し、７０分間振とうした
。

）　ＤＭＦ　２０　ｍｌ　　で、２回洗浄。

Ｊ）イソブロバノール２０１で２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。また、完全に縮合が完了しているなら
ば、再び、Ｆｍｏｃ基除去サイクルに供した後、ｇ）ス
テップをＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）で行う縮合サイク
ルに付した。以後、同様に、Ｆｍｏｃ基除去サイクルと
Ｆｎ＋ｏｃアミノ酸縮合サイクルを繰り返してＦｍｏｃ
−Ａｓｐ（ＯＢｕ’）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ’）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕ
ｔ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ　’）、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）、
を順次縮合した。こうして得られたＦｍｏｃ−Ｓｅｔ（
Ｂｕ’）−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ａｓｐ（ＯＢｕ　Ｑ　−
　Ｌｙｓ（　ＢｏＣ）　−　Ａｒｇ（ＭＬ　ｒ）−Ｔｈ
ｒ（　Ｂｕ　’）　−　Ｓｅ　ｒ（　Ｂｕ　’）−Ａ　
ｒｇ（Ｍｔｒ）−Ａｓｐ（ＯＢｕ　’）−　Ｌｙｓ（　
Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｔｈｒ（Ｂｕ’）樹脂な
ＦｍｏＣ基除去サイクルに付して、Ｈ−Ｓｅｒ（８ｕｔ
）−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ａｓｐ（ＯＢｕ’）−Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（Ｍｔ　ｒ）　４ｈｒ（Ｂｕ　ｔ）−
Ｓｅｒ（Ｂｕ　ｔ）−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ａｓｐ（ＯＢ
ｕ　’）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｔｈ
ｒ（Ｂｕｔ）一樹脂を得、ついで、樹脂からの脱離工程
に供した。

即ち、塩化メチレン２０…１で２回洗浄し、塩化メチレ
ン（１０　ｍｌ）一アニソール（２．００　ｍｌ）一チ
オフェノール（０．６６　ｍｌ）混合溶液に懸濁、続い
て、トリフルオロ酢酸（２０　ｍｌ）一塊化メチレン（
２．３２　ｍｌ）を加え１時間振とうした。樹脂を濾過
し、得られる濾液にエーテルを加え、濾過することによ
って、白色沈殿（４００　ｍｇ）を得た。これに、トリ
フルオ口酢酸（１３．５　ｍｌ）一チオアニソール（１
．５　ｍｌ）一チオフエノール（０．６０　ｍｌ）混合
溶液を添加、５時間攪拌した。この反応溶液に、エーテ
ルを加え、濾過することによって′白色沈殿（３８２　
ｍｇ）を得た。

得られた白色粉末を逆相液体クロマトグラフィーに供し
、求めるＳｅｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔ
ｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｈ
ｒ画分を分取し、得られる溶出画分を濃縮乾固する。つ
いで、蒸留水を加え数回濃縮乾固を繰り返した後、少量
の蒸留水にとかし、凍結乾燥する。こうして精製された
Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｓ
ｅｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ　３８
　Ｂを得た。精製物の一部をとり、気相プロテインシー
クエンサーでアミノ酸配列を調べたところＳｅｒ，Ａ「
８，＾ＳｐＩ　Ｌｙｓ，　Ａｒｇ，Ｔｈｒ，　Ｓｅｒ，
　Ａｒｇ＋　ＡＳ９＋　’ｙＳ＋Ａｒｇ，　Ｔｈｒｏ順
となり求めるペブテド配列と一致した。また、ＦＡＢ質
量分析器による分子量測定を行っても　ｍ／ｚ　１５０
５．３２　（ＭＨ”）となり理論値ここ一致した。さら
に、６Ｎ−ＨＣＩ水溶液で加水分解し、アミノ酸分析に
供したところＳｅｒ　１．８８，　Ａｒｇ　３．９４．
　Ａｓｐ２．００，　Ｌｙｓ　２．０２，　Ｔｈｒ　１
．９４の比となりこれもまた理論値と一致した。従フて
、求めるベブチドが合成されていることが確認された。

また、ＮＭクロマトグラフィーと逆相液体クロマトグラ
フィーで純度よく合成されていることが確認された。

（以　下　会　白） 参考例 対応する出発物質を用いて、実施例１〜９と同様にして
、下記化合物を得た。

参考化合物ｌＯ Ｐｒｏ−Ｓｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｈａ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ参考
化合物ｌＩ Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｓ
ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−ＧｌｎＰｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ
−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−
Ｐｈｅ特許出願人　大日本製薬株式会社 味の素株式会社 代 理 人 坪　　井　　有　　四 郎

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記式［ I ］で示されるアミノ酸配列を有する
   ペプチドにおいて、第１〜１０番目のアミノ酸配列を有
   するペプチド、第２〜１２番目のアミノ酸配列において
   少なくとも第２〜９番目のアミノ酸配列を有するペプチ
   ドまたは第３〜９番目のアミノ酸配列を有するペプチド 式［ I ］ 【遺伝子配列があります】 （式中、ｘはＬｅｕまたはＩｌｅを意味する。）或いは
   下記式［II］で示されるアミノ酸配列を有するペプチド 式［II］ 【遺伝子配列があります】 或いは下記式［III］で示されるアミノ酸配列を有する
   ペプチド 式［III］ 【遺伝子配列があります】 或いはそれらのアミノ酸残基の部分的変換体。
2. （２）請求項１記載の式［ I ］で示されるアミノ酸配
   列を有するペプチドにおいて、第１〜１０番目のアミノ
   酸配列を有するペプチド、第２〜１２番目のアミノ酸配
   列において少なくとも第２〜９番目のアミノ酸配列を有
   するペプチドまたは第３〜９番目のアミノ酸配列を有す
   る請求項１記載のペプチド。
3. （３）請求項１記載の式［II］で示されるアミノ酸配列
   を有する請求項１記載のペプチド。
4. （４）請求項１記載の式［III］で示されるアミノ酸配
   列を有する請求項１記載のペプチド。
5. （５）請求項１記載のペプチドの塩。
6. （６）請求項１記載のペプチドまたはその塩を有効成分
   とする抗アレルギー剤。
7. （７）免疫グロブリンＥレセプター拮抗作用に基づくこ
   とを特徴とする請求項６記載の抗アレルギー剤。