JPH02222691A - 春菊の組織培養による赤色色素の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は春菊の組織培養による色素、特に食品や化粧品
等に用いられるアントシアニン系色素の製造法に関する
ものである。

（従来の技術） 従来、食品添加物や化粧品として多用されてきた合成色
素は人体への安全性の面で問題になることが多く、その
使用範囲が制限されつつあり、天然物から得られる色素
が見なおされている。

（発明が解決しようとする課Ｂ） 植物性色素は天然色素のなかで大き、な比重を占めてい
るが、天然に成育栽培される植物を原料とするため、資
源の枯渇や、土壌、気象条件により生産性や製品の質が
左右されるという欠点がある。

本発明の目的は上記欠点を解決するものであり、組織培
養の手法を用いて春菊を培養することにより、自然条件
に左右されず、人工的に管理された条件で、多量の赤色
天然色素を生産することにある０本発明者らは、通常の
栽培では春菊の植物組織にはほとんど認められないアン
トシアニン系色素が植物片から誘導したカルスを液体培
養することにより、培養細胞内に蓄積されることを見い
だした。この細胞を収集し、培養条件と色素生産量との
関係について寒天培地と液体培地で検討した結果、春菊
の培養細胞を用いて赤色色素を製造する本発明を完成し
た。

（課題を解決するための手段） 本発明は、春菊（ＣｈｒｙｓａｎＬｅｍｕｍ　ｃｏｒｏ
ｎａｒｉｕｍ）の組織片よりカルスを誘導し、そのカル
スを培養することにより、アントシアニン系色素を生産
させ、これを採取することを特徴とする赤色天然色素の
製造方法に関する。

本発明に用いられる春菊は、食用にされる中葉春菊（Ｃ
ｈｒｙｓａｎＬｅｍｕｓ　ｃｏｒｏｎａｒｉｕｍ）であ
る、この植物の切片を滅菌し、組織培養用の寒天培地上
に置床、培養することによりカルスが得られた。このカ
ルスを液体培地に接種し、１から２週間ごとに新鮮な培
地と交換しながら振盪培養すると赤色色素を含有する細
胞が出現する。

液体培養により得られた赤色細胞を集め、２１類のホル
モンを２５通りの濃度で組合せた寒天培地上に置床し、
赤色色素生産量の最も高い細胞塊を選抜した。引きつづ
き同じ培地で１から３週間毎に継代することにより、活
発な増殖を行なう色素産生細胞の密な細胞塊を得ること
が出来る。また、ジャーファーメンタ−を用いて通気攪
拌培養を行なうとより大量の赤色天然色素が生産される
。

ここで使用される培地としては、炭素源、無機イオン、
オーキシン類、サイトカイニン類、必要に応じて他の栄
養成分を含有する培地が用いられる。炭素源としては、
シュークロス、グルコース、フルクトース等が用いられ
る。無機イオンとしては、通常の組織培養に使用される
既知のムラシゲ・スクーグ（表１）、ガンボルグＢ５（
表２）、ホワイト等の培地に含まれる無機イオンをその
まま、または若干変更して用いることが出来る。特に、
ムラシゲ・スクーグをガンボルダＢ５培地が適している
。

オーキシン類としては、インドール酢酸（ＩＡＡ）、ナ
フタレン酸Ｍ（ＮＡＡ）、２．４−ジクロロフェノキシ
酢酸（２，４−Ｄ）等が、サイトカイニン類としては、
カイネチン（Ｋｎ）、ベンジルアミノプリン（ＢＡ）　
、ゼアチン等を用いることが出来る。これらを２．４−
Ｄでは０．０２＃ｇ／ｌないし５ａ＋ｇ／ｌ、好ましく
は、０．０２ｍｇ／ｌから１．ｏｍｇ／ｌ　、ＮＡＡ、
ＩＡＡなどでは０．０２５ｇ／］から１０ａ＋ｇ／Ｉ、
好ましくは、０．０２＋ｍｇ／Ｉから５■ｇ／Ｉの濃度
で添加される。

また、Ｋｎ、ＢＡなどでは０ないし２　ｍｇ／Ｉ、好ま
しくは０ないし０．２＋ｍｇ／ｌ　の濃度で培地で添加
される。なお、上記の培地にさらにチアミン、ミオイノ
シトール、ニコチンアミドを添加すれば、より良好な増
殖が得られる。また、上述の組成の培地には、必要に応
じてカザミノ酸、ココナツツミルク、酵母エキス等を添
加することが出来る。

カルスの誘導と赤色色素生産細胞の選抜増殖に用いられ
る固体培地には、上記の組成の液体培地に１％の寒天が
添加される。

培養は好気的に行なわれ、培養温度として１５〜３７’
Ｃ，好ましくは２０〜２７°Ｃであり、培養ｐＨは４〜
７．５で、５．７付近が望ましい、また、赤色色素の生
産は培養時に光を照射することにより促進され、光照度
としては２００１ｕｘないし１００００１ｕｘで、５０
０〜５０００１ｕｘが望ましい。

このようにして得られた培養細胞は細胞内に赤色色素を
蓄積している。従って、適当な方法、例えば、酸性下で
アルコール類により色素を抽出し、抽出液を蒸発乾固さ
せ粉末状の赤色色素を得る。

上記のようにして得られた赤色色素は、水、メタノール
に可溶、エーテル、ベンゼン、アセトンに不溶で、塩酸
酸性メタノール溶液中における紫外および可視部の吸収
スペクトルから判断して本色素はアントシアニンと同定
される０本券色色素を薄層クロマトグラフィーで分析し
たところ、少なくとも４種類の赤色色素が分離され、主
成分のアグリコンは吸収スペクトル、薄層クロマトグラ
フィー、質量分析によりシアニジンと同定された。

（実施例） 以下、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。

実施例１ 中葉春菊の茎を７０％をエタノールに１０秒間浸漬し、
更に有効塩素濃度３％のアンチホルミン水溶液に２０分
間浸漬した後、滅菌水で十分洗浄することにより滅菌し
た。この茎の一部を第１表に示す組成を有するムラシゲ
、スクーグ培地にＢ　Ａｏ、０２ｍｇ／　ｌ、２　、　
４−　Ｄ　０．２ｍｇ／ｌを加え、寒天で固めた固体培
地に置床し、２４°Ｃで暗所にて静置培養してカルスを
得た。

次に、このカルスの一部を第１表の組成の培地から寒天
を除き、Ｋ　ｎｏ、５ｍｇ／Ｉ　、　２　、　４−０２
．ＯＢ／Ｉを含む液体培地２０ｍｇ／　Ｉを１００ｍ１
容三角フラスコに入れたものに接種して、２４°Ｃで１
６時間明所（３０００Ｉｕｘ）　　８時間暗所のもとで
、８０〜１１００ｒｐにて旋回培養した。１週間毎に同
一の培地で継代培養して、安定した春菊培養細胞を得た
。

実施例２ 実施例１に記載したように液体培地に継代培養した細胞
中に発生した赤色色素細胞を第１表の培地にＢＡＯ１２
ｍｇ／ｌ　、　２　、　４−Ｄ　０．２ａ＋ｇ／ｌと１
％の寒天を加えて固化した培地に置床し、１か月毎に赤
色細胞塊を選抜し増殖させた。

この細胞を第２表に示す組成のガンボルダＢ５培地にナ
フタリン酢酸１．０ｍｇ／Ｉ　を含む液体培地２０ｍｇ
／ｌの入った１０〇−容三角フラスコに入れ、２４°Ｃ
で１６時間明所（３０００１ｕｘ）　８時間暗所のもと
で、２週間９０ｒｐｍ＋にて旋回培養した。

この培養液を濾別し、細胞を分離し、０．１　％塩酸酸
性メタノールによって赤色色素を抽出した。

抽出液をロータリーエバポレーターで約４０’Ｃにて濃
縮し、粉末赤色色素を得た。この沈澱を乾燥ささて湿重
量３６．８ｇの細胞から６９０ｍｇのアントシアニン系
赤色色素の粉末を得た。

（発明の効果） 本発明によれば、春菊の組織培養を用いるので、自然環
境に左右されず、人工培地で大量培養が可能であり、ア
ントシアニン系赤色色素を安定的に生産することが出来
る。

特許出願人　　日本化薬株式会社

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 　春菊（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｃｏｒｏｎａｒｉ
   ｕｍ）の組織片よりカルスを誘導し、そのカルスを培養
   することにより、アントシアニン系色素を生産させ、こ
   れを採取することを特徴とする赤色天然色素の製造方法
   。