JPH02221860A - ２種類の生物親和性パートナーの特異的結合反応によつて試料液を分析検査するための試験キヤリヤー - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、試料中および試験キャリヤーの試薬中にそれ
ぞれ含有された２種類の生物親和性結合パートナ−の特
異的結合反応によって試料液を分析検査するための試験
キャリヤーに関する。該試験キャリヤーは、試験層上に
大体において並列的に配置された数個の試験ゾーンを有
し、これらのゾーンは互いに液体接触していて、液体輸
送区間を形成し、この区間に沿って液体が毛管作用によ
って駆動されて出発ゾーンから目標ゾーンに流れる。こ
の際第一結合パートナ−と第二結合パートナ−を含有す
る試薬系との間に、所望の分析にとって特異的な標識物
を生じる検出反応が進行する。この特異的標識物は検出
ゾーンで検出される。

従来の技術 疾病の診断の際に定性的および定量的分析測定のために
、極最近では所謂キャリヤー結合試験を次第に使用する
よう釦なっている。このような試験の場合には、試薬は
、試料と接触される固体試験キャリヤーの相応の層中に
埋込まれている。試料は大部分が血液または尿のような
体液である。しかしまた先行する試験段階によって得ら
れた敦体も重要である。

試験キャリヤーは多数の異った形態で知られている。本
発明は、通常吸収性ノー材料、すなわち紙、不織布また
は多孔性プラスチック膚材料から成る毛管活性試験ゾー
ンが、液体が基礎層に平行に液体区間に沿って流動する
ように並列的に基礎層上に配置されている構造の試験キ
ャリヤーに関する。従ってこの試験キャリヤーを１縦輸
送装置を有する試験キャリヤー”と称することもできる
。

このような試験キャリヤーの構造は、特に、２種の生物
親和性結合パートナ−の特異的結合反応に基く分析法に
とって有利である。西独国特許第３４４５８１６号およ
び米国特許第４．３６１，５３７号明細書には、例が記
載されている。この意味における特異的結合反応は、特
に抗原またはハプテンと抗体との間の免液的相互作用で
ある。しかしまた、レクチン−糖のような他の特異的生
物親和性相互作用または作用物質−受容体相互作用も使
用することができる。

以下には、−殺性を制限することなく例として免疫学的
相互作用を挙げることにする。

文献、例えば前記引用特許明細書に記載されている極め
て異った試験原理を使用することができる。

免疫的試験操作の第１群は、液体輸送区間の前部ゾーン
の一つが、第一結合パートナ−（目。標分析物Ａｎａｌ
ｙｔ　）を可溶の標識された形で含有することによって
優れている。液体輸送区間のさらなる延長上に配置され
た試験ゾーンはキャリヤーに固定された第二結合パート
ナ−を含有する。試料からの目標分析物と試験からの標
識された目標分析物が第二結合パートナ−の結合位置に
対して競合する。このような試験は従つて競合試験と称
する。

公知の免疫学的試験操作の第２群の場合には、液体輸送
区間の前部ゾーンの一つは、第二結合パートナ−を可溶
な標識された形で含有する。

第一結合パートナ−との特異的結合反応によって可動性
の標識複合体が形成される。

他の試験経過では、キャリヤーに固定された形のもう一
種の結合パートナ−も存在していてよく、同パートナ−
は第一または第二結合パートナ−の、複合体の形成によ
って飽和されなかった結合位置と特異的に結合すること
ができる。

これによって少なくとも６種の結合パートナ−のサンド
インチができる。従ってサンドインチ試験についても論
議する。

所論免疫酵素測定法（ＩＥＭＡ）原理の場合には、複合
化されなかった部分が固定される。複合体のみが可動性
であって、検出されうる。

すべての免疫学的測定法にとって共通な点は、就中、両
結合パートナ−の間の特異的結合反応を包含する検出反
応が、所望の分析にとって特異な標識物を生じることで
ある。これは、競合試験の場合には結合されたまたは遊
離さルた目標分析物である。サンドインチ試験の場合に
はこれは結合されたサンドインチ複合体である。

ｉたｒＥＭＡ試験の場合には可動的に遊離された複合体
である。

種々の公知免疫学的試験原理の詳細な説明は、関連文献
から知ることができるのでここでは省略する。本発明は
、特異的な試験経過に関係なく有利に適用可能であるが
、特にｒＢｋｉＡ原理に従って作業する試験キャリヤー
に向けられている。

また種々の免疫学的測定方法は、使用された標識に関し
ても相違している。本発明は、特に酵素標識を用いる酵
素免疫試験に向けられている。標識酵素は通常標識酵素
の基質の呈色反応によって検出される。同基質は、試該
操作に応じて検出ゾーン中にすでに存在していてもよい
しまたは検出ゾーンに供給されてもよい。本発明は原則
的には、例えば有色物質または放射性元素が標識用に使
用される方式の非酵素的方法にも適用することができる
。

発明の構成 特に、免疫学的試験キャリヤーが従来利用されなかった
比較的高濃度の目標分析物の評価にとって適当な、容易
に操作可能で安価に製造できる試験キャリヤーを使用す
るために１本発明は、第一結合パートナ−に関して特異
的であって、捕捉試薬として作用する第三結合パートナ
−を用意し、同パートナ−が第一結合パートナ−の一部
を結合し、それによって標識物を生ずる検出反応から除
去するような大きさの使用量で、この過程が可能である
ように該第三結合パートナ−を液体輸送区間の一つのゾ
ーンに配置することを提案する。この場せ捕捉試薬を有
するゾーンは出発ゾーンと検出ゾーンとの間に存在する
。

免疫学的測定は極めて高い感度によって優れている。こ
れは低濃度の目標分析物の場合には利点であるが、すで
に従来から、免疫学的測定の利点を高漠度の目標分析物
の場合＋Ｃも使用するという努力はあった。この場合に
は大きな感度が難点であった。もちろん、試料を手動に
よシ適宜希釈することは可能である。しかしこの操作は
、訓練された実験用具によってのみ行なわれうる、時間
のかかる操作段階を要求する。

そのために試験法に対する費用のかかる干渉によって同
試験法の感度を下げる試みが行われた。

例えば試験において目標分析物に対する親和性の減少さ
れた結合パートナ−を使用するか、または標識結合パー
トナ−と標識酵素との間の化学量論を行った。

ところで本発明は、試験キャリヤー上に目標分析物にと
って特異的な捕捉試薬を施すことによって、費用のかか
る前記公知方法と比較して意外に簡素な方法を提案して
いる。これによって、前に接続された別個の希釈段階を
要することなしに、試験キャリヤー上で目標分析物の濃
度の希釈が達成される。本発明による試験キャリヤーは
１０−”ｍｏｌ／ｊ’を越える濃度、特に１０−７ｍｏ
ｌ／７を越える濃度にとって有利である。

本発明による他の提案（上記手段の重要な補足であるが
、独自のＪｉ要性を有する）は、試験キャリヤーの操作
および機能にとって重畳な構造を有する出発ゾーンに関
する。

これに関して本発明は、冒頭記載の揄類の試験キャリヤ
ーの場合に、出発ゾーンを、室温で水に不溶の結合剤を
含有する非膨潤性木織布から製造することを提案する。

この点で本発明はまた、従来公知の技術で行なわれた手
段と根本的に異なる。つまシ、西独国特許第３４４５８
１５号明細書およびヨーロッパ特許第５２３２８号明細
書には、特に、その膨潤性のために極めて高い吸水量を
有する親水性材料から成るスプンジ状デ２スナックｉた
は層が適当であると述べられているからである。

これによって、出発ゾーンが試料液中に浸漬される時十
分に同液を吸収し、試料液中への浸漬後にそれ以上の同
液体がもはや供給されなくても、試験キャリヤーの全液
体輸送区間を試料液で満たすことができる。

意外にも、本発明の範囲では、その自重の割には小さい
液体吸収量を有するが、試験キャリヤー上に十分に完全
に吸収される比較的疎水性の材料を用いると、極めて優
れた結果が得られることが判明した。

前記特性は、量的に液体保留率と表現されうる。この液
体保留率は、本発明の範囲内では、面積２５ｃＩＩＬ２
の試料を、同試料よシも著しく大きくかつ飽和まで十分
に湿潤されるスポンジクロス上に置くととくよって特定
することができる。スポンジから取出した水量を秤量し
て測定する。該湿潤試料を、直径１５８１ｍの円形フィ
ルタ（西独−、Ｄａｓｓｅｌ在５ｃｈｌｑｉｃｈｅｒ　
＆　５ｃｈＵｌ１社製２６６８／８型）上に置き、２分
後に除去する。円形フィルタによって吸収された水量を
また秤量して測定する。保留率は、該試料中に残留する
水量／初めに吸収された水量の割合（１）として特定さ
れる。この意味において、試料液に関して２５チ以下の
液体保留率を有する材料が有利である。

実施例 次に本発明を、図面に略示した実力例によシ詳述する： ８１図を、種々の可能な試験原理および試験キャリヤー
上の捕捉試薬の配置を説明するために用いる。それ故に
同図は構造的詳細な点を無視し、試験ゾーン１１〜１６
がそれらの端面で開法してその上に並列的に配置されて
いる、基礎層２を有する試験キャリヤー１を原理的にの
み示す。試験ゾーンは好ましくはそれぞれ種々の吸収性
材料（紙、不織布、多孔性プラスチック層等）から成シ
、接金縁における液体接触が十分に密接な層の接合によ
って実現される。しかしまた、ｌＩｌが部分的にオーバ
ーラツプする（第２図参照）かまたは同一材料から成る
数個の隣接ゾーンがワンピースとして製造されていても
よい。試験ゾーンは全体として、出発ゾーン１１から目
標ゾーン１６に達する液体輸送区間２０を形成する。

試験キャリヤーを使用する際には先づ、好ましくは同キ
ャリヤーを適宜試料液中に浸漬することによって出発ゾ
ーン１１のみを同液と接触させる。次に出発ゾーンがそ
の含有液体を次第に液体輸送区間に放出する。液体はゾ
ーン１１〜１６で支配する毛管作用に基いて目標ゾーン
１６までクロマトグラフィーを行なう。ここで重要なゾ
ーンの液体輸送特性の詳細については、第２図によシ後
述することにする。

さて第１図の場合には、出発ゾーン１１に試料供給ゾー
ン１２および補助試薬ゾーン１３が接続している。試料
供給ゾーンの機能はさらに火工に＃述する。補助試薬は
、試料の一値を試験条件に合わせるために、緩衝剤を含
有している。同試薬は所望の場合には別の補助試薬、例
えば湿潤剤等を含有していてもよい。一般には、試験条
件に応じて、図示の場合よシも多数のまたは少数のゾー
ンが存在していてもよい。

個々の場合に適用される免疫学的試験原理に応じて、相
応の試薬系成分が試験キャリヤーのゾーン中に含有され
ている。若干の例を次に述べる。

試料中に含有された抗原Ａｇを測定するための競合試験
の場合には、例えばゾーン１４が抗原と標識酵素ＡｇＥ
との複合体を可解性の形で含有することができる。ゾー
ン１５は、キャリヤーに固定さルた形の抗体Ａｋ１（ｆ
）を第二結合パートナ−として含有する。

試料が流通するとＡｇｇが溶解される。ＡｇとＡｇＥと
がＡｋｌ（ｆ）の結合位置をめぐって競合する。さらに
液体が目標ゾーン１６中に流入すると、ゾーン１５にお
いてＡｋｌ（ｆ）への結合によって固定されたｋｇ、Ｅ
と、ゾーン１６中に引続き流入する遊離ＡｇＥとの分離
が行なわれる。ｒ−７１５で結合されたＡｇＥ　ｉｙｋ
は特異的であって、分析に関して特徴的であシ、例えば
別の方法段階で呈色性基質を酵素に供給し、ゾーン１５
での呈色を観察することによってそこで検出することが
できる。この限シにおいて試験経過は慣用的である（例
えば西独国特許第３４４５８１６号明細書参照）。

シー７１３には捕捉試薬としてキャリヤーに固定された
第三結合パートナ−Ａｋ２（ｆ）が存在する。同パート
ナ−は、試料抗原が抗原複合体と一緒にゾーン１４中に
入る前に、同抗原の一部を固定するために役立つ。それ
によって抗原（−船釣に言えば第一結合パートナ−）の
−足部分が、標識物を形成する検出反応から除去される
。

上述のように、抗体Ａｋ１（ｆ）およびＡｋ２（ｆ）は
それぞれ同一抗原と特異的に結合できなければならない
。好ましくは同一抗体を使用してもよいＯ 免疫酵素測定法試験原理（ＩＥＭＡ）に従って動作する
、試料中に含有された抗原Ａｇを測定するための試験キ
ャリヤーの場合には、ゾーン１４に、抗原に特異的に結
合する抗体と標識酵素ＡｋＥ　（第二結合パートナ−）
との可溶性複合体を含有する。ゾーン１５はキャリヤー
に固定された形の抗原（Ａｇ（ｆ）　、別の結合パート
ナ−〕を含有する。試料が流通すると、ＡｋＥが杉解さ
れ、Ａｇと共に複合体Ａｇ−Ａｋｇを形成する。未結合
Ａｋｇはシー／１５でＡｇ（ｆ）に結合され、他方Ａｇ
−ＡｋＥ複合体は遊離している。液体をさらにゾーン１
６中に喘送すると、結合されたＡｋＥと、分析に関して
特徴的な、複合化されそれ故に遊離されているＡｇ−Ａ
ｋＥとが分離される。後者はゾーン１６で検出されうる
が、有利にはゾーン１６には標識酵素の呈色性基質が存
在している。

この試験過程も公知である。

競合的試験の場合には、検出は好ましくはシー７１５で
、つまシ固定された第二結合パートナ−を有するゾーン
で行なわれるけれども、免疫酵素測定法試験の場合には
、固定ゾーン１５に続くシー７１６が検出ゾーンとして
用いられる。

免疫酵素測定法試験は、啄めて高い感戻および′ｒＩＲ
索な操作によって優れている。本発明の範囲内では、意
外にも、この原理に従って動作する試験キャリヤーが、
直接的検出のために比較的多菫に計量された目標分析物
（０，１μｍ、）１／１よシも大きい濃度）に関しても
、操作容易性に関する利点金失うことなく有効に使用さ
れうろことが判明した。

さらに捕捉試薬も施されているが、このものは前記の競
合的試験原理の場合と同様に試験キャリヤーのゾーン１
３、つまシ複合体ゾーンの前に置かれたゾーンの１つの
中に溶けているかまたはキャリヤーに固定された形で含
有されていてもよい。

極めて好ましくは、捕捉試薬が可溶性の形で複合体と一
緒に同一ゾーン（例の場合にはゾーン１４）に存在して
いる、という他の態様もある。この場合には、捕捉試薬
として使用される抗体は、複合体の場合に使用される抗
体と同じ作用特異性を有しなければならない。従って、
同一のモノクロナール抗体、場合によってはまた極めて
狭いエピトープスペクトルを有するボリクロナール抗体
が好適である。

この態様の場合には、酵素標識を有しない捕捉試薬が複
合体と共に目標分析物の特異な結合位置を求めて競合す
る。これによって、大体において百分率の１希釈度”が
得られる。つまシ検出反応の捕捉試薬によって除去され
る目標分析物の分封が、捕捉試薬／複合体の割合に近似
的に相応する。

捕捉試薬を遊離の形で施す手段は、同試薬が複合体と同
じゾーンに配置されている場合に限定されない。それど
ころか本発明は、この手段の十分なる一般性に２いて、
該捕捉試薬が、同試薬にとって適轟な、検出ゾーンの前
に置かれた、液体輸送区間のゾーン中に可解性の形で含
有されている形式の試験キャリヤーも包含する。

捕捉試薬の量は、特定の必要条件に適合している。理論
的には、この量は試料中の目標分析物の被検出最少量（
検出限界）よシも小さくなければならない、という前提
がちる。しかし実際には、種々の要因が問題になる。こ
のような要因には、使用された抗体の親和定数、特異的
な複合体構造および液体が捕捉試薬を含有するゾーンを
通って流れる速度が挙げられる。また、試料抗原の捕捉
試薬への結合がどの程度まで完全であるか、ということ
も重要である。理論的考察によると、この場合測定結果
の著しい狂いを危惧しなければならないような大きい不
正確さが存在することを恐れなければ’ｉｆらないであ
ろう。しかし実際には意外にも、高ｄ度のパラメータの
免投学的測定が良好な精度をもって可能であるように、
捕捉試薬の童を経験的に決めることができることが判っ
た。

捕捉試薬を有する試験ゾーンを形成する吸収性層材料を
、好ましくは、同試薬が分析測定の所望の検出限界にほ
ぼ相応するモルー度で官有されている含浸溶液で含浸す
る。含浸溶液中の捕捉試薬の濃度は少なくとも、所望の
検出限界の半分の大きさでなければならない。濃度は絶
対数で少なくともＩ　Ｑ−８ｍｕｌ／′ｌ、好ましくは
少なくとも１０−フｍｏｌ／ｌである。

試料は、必ずしも出発シー７１１に供給しなくてもよい
。むしろ特別な試料供給ゾーン１２が設けられていても
よい。これは、特に付加的な試料の希釈を達成しよう場
合に有利である。

この場合には、試料を過少量で試料供給ゾーン１２に供
給する。ここで、＠過少量で”とは、供給した容量が試
料供給ゾーンの吸収容量よシも小さいことを意味する。

次に出発ゾーンを溶離剤（有利には水または緩＠溶液）
に接触させる。

これによって希釈が達成されうろことが判明した。希釈
の度合いは、試料供給ゾーンにピペットで供給した容量
および出発シーツの吸収容量によって影響されうる。こ
の操作法の著しい利点は、任慧の時点で試料上供給しか
つ乾燥させうることである。溶離および分析は、爾後の
時点で初めて行なわれる。これによって一連の試験片テ
ストが集積されうる。

試料供給ゾーンの希釈作用にとっては、分析を妨害する
試料の′Ｊ４ｍがクロマトグラフィー用液体の前部で起
らないことが重要でるる。それ故に、試料供給ゾーンに
とって有利には、その特有の性質によシ前記条件を満足
させる材料を選択する。このためには次の作用原理が必
要である： ａ）供給された目標分析物が固相に弱く結合し、溶離剤
によって遅延的に溶離されるように該物質を選択する。

ｂ）試料供給ゾーンの材料が、渦流および／ｉ丸は非層
流によって試料と溶離剤との混合が達成されるような構
造を有している。

第２図は、比較的多量に計量されたパラメーターの測定
を免疫＃素側定法試験原理を用いて極めて容易に可能に
する試験キャリヤーを示す。

該キャリヤーは、比較的多量に利用されうる試湯液、特
に尿の中のこのようなパラメーターを測定するのに好適
である。

基礎層２上には、出発シー／２１、補助試薬ゾーン２３
、複合体ゾーン２４および固定ゾーン２５が大体におい
て並列的に配置されている。

同定ゾーン２５の端部２ｊａと基礎層との間に呈色ゾー
ン２６が存在する。さらに、固定層２５の端部２Ｓ＆は
、硬質プラスチック材料から製造された保持層２８によ
って呈色層２６に対して押圧されている。保持層は溶融
接着剤片２７で基＃Ｊｉｍ２に取付けられている。

図面においては、ゾーンの縁における液体接触を改善す
るために、７４２１〜２５がそれぞれ隣接の層に少し重
なっているのが認められる。

しかし液体輸送は、大体において試験キャリヤーの長手
方向において、従ってゾーンがそれから製造されている
層材料の表面に平行に、液体輸送区間３０に沿って行な
われる。

試験キャリヤーは、使用する場合、出発シー７２１のみ
が湿潤される場合には、試料液中に浸漬する。つまシ出
発ゾーン２１のみが試料液と接触する。したがって出発
ゾーン２１は、同ゾーンが液体を自然にかつ完全に吸収
しかつさらに先へ良好に案内し乃至放出するような性質
でなければならない。ここに存在する種類の試験片にと
っては、試験キャリヤーの実際の動作領域を形成する、
出発ゾーン２１の後に置かれたすべてのゾーンに十分に
かつ再現可能に液体が供給されるのが重要である。これ
は成程、試験キャリヤーを試料を含む容器中に放置し、
その結果大きな液体供給源に恒常的に接触することによ
って達成することはできる。しかしこれは操作を困難に
する。従って、試験片を試料液から再び取出した後、出
発ゾーン２１が数秒内性 に十分な液体量を吸収し、試験要りによシ再び放出する
のが望ましい。

本例の出発ゾーンは、ヨーロッパ特許出願第５２３２８
号による従来の前記提案とは反対に、水不溶性結合剤を
含有する非膨潤性不織布から成る。

非膨潤性繊維材料としては、不織布の含分が少なくとも
５０％でなければならない完全合成繊維が頂めて好まし
い。特にポリアミドおよびポリエステルならびにこれら
の混合物が有利であった。

繊維を固定するための結合剤としては、有利にはポリビ
ニルアルコールを１更用することができる。この結合剤
は、特に、不織布を製造する際大形容器で実際の不織布
とポリビニルアルコール繊維とを混合するようにして使
用する。次にこれらの繊維を、不織布製造時の常法によ
）、乾燥ロール上に引上げる。約９０℃〜１５０℃の乾
燥温度でポリビニルアルコール繊維が溶解し、不織布の
残シの成分上に、この不織布に強度を付与する被覆を形
成する。好ましくは、１．２６〜１．３０　ｇ／ａｎ”
の比重を有する高分子の完全ケン化ポリビニルアルコー
ルを使用する。

極めて好ましいポリエステル繊維は、約１．１７シ♂の
比重、６〜１２鵡の切断長さおよび１．７〜３，３　ｄ
ｔｅｘの繊度を有する。

ポリアミド繊維を使用する場合には、同繊維は好ましく
は約１．１４〜１　、１５１Ｉ／ｃｒｒＬ’の比重、４
〜６ＪＩＪＩＩの切断長さおよび、２　ｄｔｅ＋ｃの１
度を有する。

該不織布は、付加的成分としてリンター（木綿植物の原
綿から得られた繊維であって、化学的に溶解されかつ漂
白される）を含有していてもよい。

他のゾーンは、第１図で免疫酵素測定法試験の場合につ
いて記載したのと同じ試薬を含有する：補助試薬シー７
２３は緩衝剤および場合によ〕他の補助試薬を含有し、
複合体ゾーン２４は目標分析物に特異的に結合すること
のできる（第二）結合パートナ−の酵素複合体を含有し
固定ゾーン２５は固相に結合された目標分析物（つまシ
目標分析物同族体）を含有し、呈色ゾーン２６は標Ｒ＃
素の呈色基質を含有する。

抗原を測定する場合には、複合体ゾーン２４では相応の
抗体の複合体を使用し、固定ゾーン２５では同一の抗原
′または層２４の抗体と結合することのできる抗原を使
用する。抗体を測定しようとする場合には、当業者にと
って周知のように、それぞれ抗原を抗体と交換しなけれ
ばならない。

同様に第１図と一致する場合には、捕捉試薬が施されて
おシ、同試薬は好ましくは溶解しておシ、層２４におけ
る酵素的に複合されたパートナ−と同一である。

試験過程は第１図による試験キャリヤーの免疫＃素側定
法と同様でろって、ここで再び詳述する必要はない。

また第２図による試験キャリヤーの作用にとっては、種
々のゾーンを形成するノー材料の液体輸送特性も極めて
重要である。

最適試験過程にとって、分析にとって特異的な標識物が
呈色シー７２６でその全面に亘って十分に均質であって
、その結果均質な呈色が行なわれることが必要である。

従って、免疫酵素測定法試験の場合には、分析にとって
特徴的な、呈色ゾーン２６におけるＡｇ−ＡｋＥ複合体
の均質な分配を達成することが要求される。

この意味では、本発明の範囲において、複合体ゾーンお
よびその直後に続くゾーンが製造されている材料がそれ
らの吸収性に関して互いに調整されていて、複合体ゾー
ンの材料がその直後に続くゾーンの材料よシも迅速に液
体を輸送するようになっている場合が有利でおることが
判明した。

図示した例の場合には、これは複合体ゾーン２４および
一般の場合には必ずしも固定ゾーンでなくてもよい、そ
の直後に続くシー／２５に関している。２つのゾーンは
同−液体流の中に存在しているので、両ゾーンが充填さ
れると、これらのゾーンは定常状態で単位時間当り同一
液量を輸送しなければならない。それにも拘らず、複合
体ゾーンがその直後に続くゾーンよシも薄く、そのため
によシ小さい流動断面を有しているので、その流速はよ
シ小さい。

この手段は複合体の均質化を要求する。複合体は、複合
体ゾーン２４における溶液条件および液体輸送条件に依
存して、同ゾーンで入って来る液体によって程度の差こ
そあれ鋭い前部濃度の意味で溶解される。これは液体ク
ロマトグラフィーの場合の吸収性ノーの普通の挙動に相
当する。ここで議論された手段の目的は、それから生じ
るｇ１度差を調整することである。先づ複合体ゾーンが
比較的迅速に充ノ坑されるが、複合体はまだ備かしか播
けない。次に、続行する液体輸送は、次に続くゾーンの
液体輸送特性に従って比較的緩慢に行なわ几る。この緩
慢な流動の間に複合体はすでにゾーン２４で比較的均質
に溶解する。さらに緩慢な流動はゾーン２５内の平衡作
用ももたらす。

免疫＃業測定法試験の場合には、前記のように１複合体
ゾーンの後に固定ゾーンが存在し、一般の場合には両ゾ
ーンの間に別のゾーンが存在していてもよい。ところで
本発明の好ましい手段は、固定ゾーンが複合体シー／よ
シも大きい流動断面を有することを意図する。

公知の免疫学的試薬の場合には、主として、固定層よシ
も薄い厚さを有する細孔性プラスナック材料（膜）を使
用する、それというのもこのような材料がキャリヤーに
固定された免疫学的試薬の高い保持密度を許し、液体が
同材料中を緩慢に流れるからである。これによって複合
体層からの未結合複合体の信頼できる固定が達成される
。これは測定樗度にとって極めて重要である。

さて前記の公知法とは異なシ、本発明の範囲では好まし
くは、比較的ルーズなキャリヤー材料、例えば紙、１熾
布または（特に好ましくは）不織布を基材として製造さ
れている固定）ｆＪ　ｋ使用する。この層材料は比較的
厚いので、該固定ゾーンは複合体ゾーンよシも大きい流
動断面を有している。これによってこの場合にも免疫試
薬を極めて多量に保持することができ、該固定層の製造
は膜の場合よシも著しく少ない費用ですむ。複合体およ
び固定層の前記の調整によって同時に、過剰な複合体の
完全な結合にとって有利な、固定層における比較的緩慢
な流動が得ヒ゛れる。

また第２図の試験キャリヤーの場合には、呈色ゾーンが
固定ゾーンの一部と平行に延びかつ固定ゾーンと平面的
に液体接触していることによって、層２６における呈色
の均質性も促進される。同時に呈色ゾーンは、液体が固
定ゾーン２５から極めて遅延的に呈色シー７２６中に入
る、つまシ呈色反応の開始前に固定ゾーン２５が大体に
おいて完全に充填されているようにゾーン２６の基質が
遅延的に溶解する、ように有利に形成されている。この
点に関しては、西独国特許出願第ｐ　３８２６０５６．
５号および同第ｐ　５８２６０５７．３号を参照された
い。

例　　１ 出発シー７１１．２１にとって好適な材料の吸水性およ
び水放出性： ヨーロッパ特許出願第５２３２８号記載の膨潤性スポン
ジ材料を、本発明による次の３種の材料と比較した。

ａ）ポリアミドとポリエステルとから成る混合不織布： 上記材料を大形容器でクラロン（ＫｕｒａｌＯｎ）〔ポ
リビニルアルコール、西独国Ｍ′６ｎｃｈｅｎ−ｇｌａ
ｄｂａｃｈ在Ｒｏｈｔｅｘ−Ｔｅｃｔｉ１社裂〕と一緒
にポリアミド：Ｘｔ？リエステル：クラロンの割合−５
０：２０７、６で混合し、公知法で加工して基本重量１
６０　ｙ／ｍ２および厚さ１．Ｏｎを有する不織布を製
造する。

ｂ）純粋ポリエステル不織布： ポリエステルとクラロンとを１０＝１の割合で大形容器
で混合し、基本型ｉｔ　１６６９７ｍ２および厚さＬＯ
ｙａｘの不織布に加工する。

Ｃ）リンターを含むポリエステル不織布：ポリエステル
、リンターおよびクラロンを５０：２５ニア、５の重量
割合で大形容器中で混合し、基本重量２５０７ｉ／ｍ”
および厚さ１．４ｎを有する不織布に加工する。

これらの不織布の保留性能を次表に示す：吸水量　　水
放出量　保留率 スポンジ材料　５６３２ゴ贋　３８．１５２ｄ鷹　６１
．４チ不織布　１８２５ｒｎｌ／ｍ”　１６３６／ｄ／
Ｊ　１０．４％不織布　１７５１ｉｎｌ／ｍ’　１５６
８ｒｘｌ／ｌｌ　１０．５％不織布　１８６６ゴ鷹１５
４８ゴ贋１７．１チ上表によＡば、従来技術のスポンジ
材料の場合の吸水量が最も高い。水放出量についても同
じことがいえる。しかし試験キャリヤーの動作にとって
極めて重要なのは、保留率、つｉシ特定の限定された実
験条件下でそれぞれの試験ゾーン中に残留する液体のパ
ーセントである。本例からは、本発明による５ｍのすべ
て不織布の場合の保留率が従来技術の出発ゾーン材料の
場合よシも著しく優れていることが判る。

例　　２ 尿中のアルジミンを測定する之めの、特に微量蛋白尿を
検出するための試験キャリヤー：第２図による試験キャ
リヤーを次のように製造する。

出発ゾーン１１コ ポリエステル不織布（西独国Ｈａｔｚｆｓｌｄ在Ｂｔｎ
ｚｅｒ社）。これはクラロン１０％で補強すれた純粋ポ
リエステル不織布である。厚さ１．０〜１．２１１１　
％吸収容ｆｔ　＝　１８０　Ｑ　ｍｔ！／、、２゜緩衝
剤ゾーン２３： 厚さ０．７朋および吸収容量４８　ｏ　ｈｒｔ乃♂を有
する不織布材料５Ｌ４２０７ＫＡｌ：西独国ｇｕｓｋｔ
ｒｃｈｅｎ在Ｋａｌｆｆ社製；ポリエステル９０％、ビ
スコースステーゾルファイバー１０％およびアクリレー
ト少量から成る〕に次の溶液を含浸し、次に含浸材料を
乾燥させる： 燐酸ナトリウム（ｐＨ７，８）　２００　ｍＭウシ血清
アルブミン１チ 複合体グー７２４： ｉｆ　９　ｘ繊ｍ　１００．３ｉｔ部から成り、クラロ
ン１０重量部で補強した、厚さ０．２問および吸収容量
２００ゴ／ｍ２のガラス繊維不織布に次の溶液を含浸し
次に含浸材料を乾燥させる：燐酸ナトリウム（ｐＨ７，
４３７０ｍＭ、トレハロース１チ、 クシ血清アルブミン０．５％。

β−ガラクトシダーゼおよび目標分析物特異性抗体（Ｉ
ｇＧ）から成る複合体６　ｋＵ々、捕捉試薬としての未
標識の目標分析物特異性抗体ＣＸｇ（ｈ）　７０　”Ｌ
９’ｉ　。

固定ゾーン２５： 重量比５０：５０：５のポリエステル、木綿リンターお
よびエタッリン（Ｅｂａｄｕｒｌｎ”）から成シ、厚さ
０．５Ｂおよび吸収容量４５０　ｍＶｍ２を有する混合
不織布に次の溶液を含浸し、次にこの含浸布を５０℃で
３０分乾燥させる：燐酸ナトリウム１０　ｒｎＭ　（Ｄ
　緩衝液（ｐＨ７，５）、濃度２００４’／ｉ燐酸ナト
リウム緩衝液）の架橋ヒト血清アルブミン。

上記架橋ヒト血清アルブミンは次のよりにして製造した
： ヒト血清アルブミン１．５ｇを、燐酸カリウム緩衝液（
２００ｍＭＸｐＨ８，０）３０ｍｊ中に仕込み、スペリ
ン酸ジスクシニジル５０　ｍ９／ＩＬＩジオキサンから
成る溶液、５ｄを２時間以内で加えた。架橋反応経過後
に、５００倍容０燐酸カルシウム緩衝液（２０ｍＭ、　
ｐ）１７．２　）Ｋ：対して透析した。６５００００よ
シも大きい分子量を有する高分子画分をズペローｅ　（
８ｕｐｅｒｏｓｅ）　（５Ｒ（西独側１’ｔ’ｒｅｉｂ
ｕｒｇ在Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）を用いてデル濾過によ
って分離し、サッカロース６ψ〜タンパク質を加えた後
凍結乾燥する。

呈色ゾーン２６： 厚さ０．１　ｘｍのポリカーボネートシート上に次の調
剤で可溶性フィルムを被覆させる：モヴイオール１８／
８８（西独−ＦｒａｎｋｕｒｔＡａ。

在ＨＯｅｈｓｔ社ン４．５．ｐ。

水５０ゴ中に溶かしたオルト−ニトロフェノール−β−
ガラクトシド０．３ｇ。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による試験キャリヤーのゾーン列を説明
するための原理図であり、第２図は本発明による試験キ
ャリヤーのｆ＋視図である。 １１〜１６；２１〜２５・・・試験ゾーン、２・・・基
湾層、１１，２１・・・出発ゾーン、１６．２６・・・
検出ゾーン、２０．３０・・・液体輸送区間第１図 第２図 ｕ ２・・・基礎層 １１〜１６・・試験ゾーン ２１〜２５・・・試験ゾーン １１．２１・・・出発ゾーン １６．２６・・・検出シー７ ２０．３０・・液体輸送区間

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、２種類の生物親和性結合パートナーのうち１種類が
   試料中に含有されていて、他の種類のパートナーが試験
   キャリヤーの試薬系に含有されており； 基礎層（２）上に大体において並置された数個の毛管活
   性試験ゾーン（１１〜１６、２１〜２５）を有し、これ
   らのゾーンが液体接触していて、毛管作用によつて駆動
   された液体が出発ゾーン（１１、２１）から出発してそ
   れに沿つて流れる液体輸送区間（２０、３０）を形成し
   ； 第一結合パートナーと第二結合パートナーを含有する試
   薬系との間で、所望の分析にとつて特異的な標識物を形
   成する反応が進行しかつ 前記特異的標識物が検出ゾーン（１６、２６）で検出さ
   れる 構造の前記２種類の結合パートナーの特異的結合反応に
   よつて試料液を分析検査するための試験キャリヤーにお
   いて、 捕捉試薬として作用する、第一結合パートナーにとつて
   特異的な第三結合パートナーが施されていて、該パート
   ナーが第一結合パートナーの一部を結合し、それによつ
   て特異的標識物を形成する反応から除くような大きさの
   使用量で、この過程が可能であるように液体輸送区間（
   ２０、３０）の一つのゾーンに配置されていることを特
   徴とする、２種類の生物親和性パートナーの特異的結合
   反応によつて試料液を分析検査するための試験キャリヤ
   ー。 ２、２種類の生物親和性結合パートナーのうち１種類が
   試料中に含有されていて、他の種類のパートナーが試験
   キャリヤーの試薬系に含有されており； 基礎層（２）上に大体において並置された数個の毛管活
   性試験ゾーン（１１〜１６、２１〜２５）を有しこれら
   のゾーンが液体接触していて、毛管作用によつて駆動さ
   れた液体が出発ゾーン（１１、２１）から出発してそれ
   に沿つて流れる液体輸送区間（２０、３０）を形成し； 第一結合パートナーと第二結合パートナーを含有する試
   薬系との間で、所望の分析にとつて特異的な標識物を形
   成する反応が進行しかつ 同特異的標識物が検出ゾーン（１６、２６）で検出され
   る 構造の前記２種類の結合パートナーの特異的結合反応に
   よつて試料液を分析検査するための試験キャリヤーにお
   いて、 出発ゾーン（１１、２１）が水不溶性結合剤を含有する
   非膨潤性不織布から成ることを特徴とする、２種類の生
   物親和性パートナーの特異的結合反応によつて試料液を
   分析検査するための試験キャリヤー。