JPH02207756A - 畜産業における飼料要求率を改良するための添加剤としての溶菌酵素生成物およびプロテアーゼの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の利用分野） 本発明は畜産業における飼料要求率（ｆｅｅｄｃｏｎｖ
ｅｒｓ　１ｏｎ）を改良するための添加剤としての溶菌
酵素生成物およびプロテアーゼの使用【こ関するＯ （発明の背景） 飼料要求率を改良するために畜産飼料中に添加剤を使用
することは知られてＩ、Ｓる。これらの生産プロモータ
ーは主に、抗菌活性を有する物質例えばＦ　ｌａｖｏｍ
ｙｃ　ｉｎ■、種々のホスホグリコ脂質抗生物質の混合
物、モエノマイシンの形態をとり、これらの使用につい
ては飼料添加剤として西独特許第１．２０３．１０７号
に記載されてしする。

ｗｏ　８９０４−３２０号には遺伝学的に変性した微生
物と共に動物リゾチームの調製が開示されてし）る。こ
の形のりゾチームは飼料添加剤として使用され、反飼動
物の体重増加を向上させることができる。

ソ連特許第１３９７−０１９号には家畜のための生長因
子としてリゾチームおよびクエン酸または酢酸との混合
物が開示されている。

（発明の要約） 本発明はストレプトミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　ＤＳ
Ｍ３０３０からの溶菌酵素生成物並びに同様の酵素生成
物を産生ずるその突然変異体および変異体を飼料用添加
剤として使用すると予想外の利点があることを見出した
ものである。さらに溶菌酵素生成物とプロテアーゼとの
混合物を飼料中に使用すると家畜の体重増加と飼料要求
率という点で非常によい結果を得ることが出来る。

すなわち本発明は ■　ストレプトミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　　ＤＳＭ
　３０３０、並びにその突然変異体および変異体からの
溶菌酵素生成物の動物飼料用添加剤としての使用、■　
Ｎ−アセチルムラミダーゼ活性を有する溶菌酵素生成物
とプロテアーゼとの混合物の動物飼料への添加剤として
の使用、 ■　前項■または■で特定した生成物を添加剤として含
有する飼料に関するものである。

本発明の内容についてすでに請求項で定義したが、さら
に下記に特に好ましい実施態様に沿って詳述する。

ＤＳＭ　３０３０からのＮ−アセチルムラミダーゼ活性
を有する酵素生成物は純粋な形態で、または他の物質例
えば、発酵残留物または蛋白質と混合して使用すること
が出来る。ストレプトミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　Ｄ
ＳＭ　３０３０からの酵素生成物の単離並びにその定性
については西独公開特許第３．４４０．７３５号に詳細
に述べられている。

ストレプトミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　　ＤＳＭ　３
０３０は例えば栄養培地中で培養される。その培地には
テンサイ糖密か培地ＩＱにつき５〜５０ｇの量で好まし
くは１０〜２０ｇの量で含まれている。培地にカルシウ
ムイオンを溶は易すい非毒性カルシウム塩の形態で加え
るとその収量をさらに増加させることが出来る。カルシ
ウムの濃度は０．０５〜１モル濃度が有利である。

酵素生成物は培地中に分泌される。Ｎ−アセチルムラミ
ダーゼ活性を有する酵素は培地から自体既知の方法、例
えば、沈澱または抽出法により純粋に単離することが出
来る。しかしながら溶菌酵素生成物を単離するために、
発酵上澄液の後処理が絶対必要という訳ではなく、乾燥
させただけの生成物を飼料に直接加えても十分である。

発酵上澄液はスプレー乾燥するのが好ましい。

しかしながらこの方法で調製した溶菌酵素生成物はプロ
テアーゼを付随している。純粋な酵素生成物を得るため
に、イオン交換クロマトグラフィーを使用し弱酸性マク
ロポーラス陽イオン交換体上で精製を実施することが出
来る。相当する方法について、欧州特許出願第２８０．
０３２号に記載されている。

得られる溶菌酵素生成物は安定であり、ｐＨ値３以下か
ら９までの範囲において、溶菌活性という点でも活性で
ある。緩衝混合液中、室温で１６時間インキュベートし
た後、ｐＨ３〜９の範囲における活性の最大値はまだ少
なくとも８０％が保持されている。

溶菌酵素生成物の活性に関し最適な温度は５０〜６０℃
の範囲である。この範囲より上であっても最大活性の少
なくとも９０％に達する。低温から開始すると活性は温
度上昇とともに６０℃まで徐々に増加するが、その値は
最大活性に対して室温で約１０％、３０°Ｃで約３０％
そして４０℃で約６０％であった。より高い温度では急
速な活性の低下があるが、その値は最大活性に対して６
５℃ではまだ約３０％、そして７０℃では約ｌＯ％とな
る。

溶菌酵素生成物をプロテアーゼと混合して使用すること
も可能である。この点で、Ｎ−アセチルムラミダーゼ活
性を有するすべての溶菌酵素生成物を本発明において原
理上使用することが可能である。この形の溶菌酵素生成
物は主として１つまたはそれ以上のＮ−アセチルムラミ
ダーゼ活性を有する酵素から構成されているが、他の物
質例えば発酵残留物を、それら酵素に加えることは完全
に可能である。この酵素生成物は植物または動物組織ま
たは微生物由来の組織から得ることが出来る。特に好ま
しい溶菌酵素生成物はストレプトミセス　ｃｏｅｌｉｃ
ｏｌｏｒ　　ＤＳＭ３０３０から得られたもの、並びに
その突然変異体および変異体から得られたものである。

プロテアーゼは特にトリプシン−またはキモトリプシン
一種酵素である。プロテアーゼ含有酵素混合物を使用す
ると、生成物を有する、飼料要求率においてよい結果が
得られるので有利である。

溶菌酵素生成物対プロテアーゼの比は酵素活性を基準に
して１：１〜１ｏｏｏ：　ｌであるべきであり、１００
：ｌ〜５００：ｌが有利である。

ＤＳＭ　３０３０からの溶菌酵素生成物並びに前記の酵
素混合物は原則としてすべての飼料に加えることが可能
である。適切で好ましい例としては飼料法の規定に従う
完全飼料、補助飼料および無機物飼料のようなものが挙
げられる。

溶菌酵素生成物は０．１〜１００　、０００ｐｐｍ好ま
しくはｌ−ＩＱＯＯｐｐｍの範囲で投与できる。溶菌酵
素生成物の溶菌活性は通常、単位（Ｕ）で示される。

Ｎ−アセチルムラミダーゼ活性は西独特許公開第３．４
４０，７３５号に記載の方法のようにして測定される。

飼料中でのその量は０−１”　１０００／１１９飼料、
好ましくは０．５〜５００／ｍｇの間である。

酵素生成物は単独でまたは混合物として重量に基づき適
切な比でバッチ的に飼料と混合される。ちなみに飼料中
に活性物質を均一に分散させることは重要である。

ＤＳＭ　３０３０からの溶菌酵素生成物または溶菌酵素
生成物とプロテアーゼとの混合物を含有する飼料はすべ
ての家畜の飼料に使用できるが、特に食物生産用に使用
する畜産用家畜、特にブロイラー、七面鳥、ブタおよび
ウシに給餌するために使用出来る。

溶菌酵素生成物またはその混合物を飼料に添加すると飼
料の利用率がかなり向上し、そしてこれと関連して家畜
の生長の向上をもたらす。

これを飼料への添加剤として用いると、抗生物質活性を
有する添加剤と比較して、長期間にわたる使用でも耐性
の発現という危険がないので大きな利点である。

以下実施例によりさらに詳しく説明する。

実施例　ｌ Ｓ、　ｃｏａｌｉｃｏｌｏｒ　ＤＳＭ　３０３０の培養
大豆ミール２％、マンニトール２％およヒ寒天１．５％
を含有するスラント寒天培地（ｐＨ７，５）にストレプ
トミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　ＤＳＭ　３０３０を接
種し、３０℃で１０日間培養した。ＮａＣＱ　Ｏ，９％
および非イオン性界面活性剤０．０１％の滅菌溶液１０
ｍ（１をこのスラント培地に加え、芽胞をすすいで除い
ｔ；。移植片として芽胞懸濁液０．２ｍＱを、３００ｍ
Ω容積の培地フラスコ内の培地１００ｒｎ（ｌの振とう
培地に使用した。

第１表のＮｏ、１〜３に掲げた培地を調製し、接種しそ
して３０°Ｃで１６Ｏｒｐｍの速度で振とうした。

試料を２．４．６日後に取り出し、細胞を遠心分離によ
り除去し、培養上澄液中の溶菌酵素生成物の活性を測定
した（第２表）６ 溶菌酵素生成物が最高の収量で得られたのは栄養液Ｎ０
１３でありこれはグルコース、大豆ミールおよびカゼイ
ンペプトンのほかにテンサイ糖密２％を含有させたもの
である。

第　　１ 表 グルコース マンニトール 大豆ミール カゼインペプトン 精密 ０．５ ０．５ 実施例　２ カルシウム添加による収量増加 ストレプトミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　　ＤＳＭ　３
０３０を実施例１に述べた方法で、グルコース１％、精
密２％、大豆ミール０．５％、カゼインペプトン０．５
％およびＣａＣＯ２・２Ｈ，ＯＯ，５％を含む栄養培地
上で培養した。ＣａＣ（２２を添加すると培養上澄液中
の溶菌酵素生成物の収量がかなり増加する結果が得られ
た。２．４、および６日後に７６８０／ｍα、２．４６
２Ｕ／ｍＱおよび４．７１５Ｕ／ｉＱが得られた。

実施例　３ ａ）溶菌酵素生成物の活性の測定 溶菌酵素生成物を含有する試料０．２ｍ（ｔを０．１Ｍ
酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，０）　１　ｍＱあたり
旧ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅｕｓ　ＡＴＣＣ４６９
８（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）　０．２
１１９の懸濁液２　、８ｍ１２にピペットで入れ、濁度
の減少を４５０ｎｍの吸光度により２５°Ｃで測定した
。分光計のメータースケール単位ｏ、ｏｏｉの吸光度の
１分あたりの減少としてＩＵを定義した。

ｂ）アゾカゼインとのプロテアーゼ活性の測定 出発材料 緩衝液：　０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，
０） アゾカゼイン溶液ニアシカゼイン２５０ｍｇ＋緩衝液１
０ｍＩ２アゾカゼインがそれ以上溶けなくなるまで撹拌
する。遠心分離により未溶解アゾカゼインを除去し、検
定用には上澄液を使用する。

手順：下記を１５ｍＱの遠心分離用ガラス容器にピペッ
トで入れる。

試料；２ｍＱ試料 ブランク；２ｒｎ（ｌ試料に緩衝液０．５ｍ（ｌを加え
た。

湯浴中＋４０°Ｃで５分間予備加熱し、アゾカゼイン溶
液（４０°Ｏ）　０．５ｍＱを加え、混合した。湯浴中
で４０℃で３０分間インキュベートした。７０％強変通
塩素酸０．２ｍＱを加えた（反応停止）。さらに混合し
、室温で５分間静置して、沈澱したカゼインを遠心分離
により除去し、分光計（Ｅ４４゜）により上澄液を測定
した。

０値：サンプルの代わりに緩衝液を検定に使用した。Ｏ
値はｏ、ｏｓｏ〜０．０６０（Ｅ　４４６）であるべき
である。

計算： 実施例　４ 肥育雄牛での６力月試用 肥育雄牛での６力月試用において、各９頭の群にそれぞ
れ１日に１頭あたり、補助飼料１７２９あたり１００ま
たは２００ｐｐｍの酵素生成物（ストレプトミセスｃｏ
ｅｌｉｃｏｌｏｒ　ＤＳＭ　３０３０の細胞を除去した
後の培養上澄液を乾燥させることにより得な）を投与し
た。これはそれぞれ１頭につき１日あたり酵素混合物３
２６ｍ＋９および４５４１１９の平均投与量に相当する
。この生成物による飼料要求率および生育に関する向上
の他には、旭理した家畜には何ら異常は見出し得なかっ
Ｉ；。

実施例　５ ラットへの試用 体重６５〜１８０ｇの範囲にあるラットにラット用標準
飼料（Ａｌｔｒｏｏ＋ｉｎ　Ｎｏ、　３１２１＋　Ａｌ
ｔｒｏｍｉｎＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、　Ｌａｇｅ
／Ｌｉｐｐｅ、　ＦＲＧｅｒｍａｎｙ＞を与えた。この
飼料は生長しているラットの要求に合うように調整した
ものである。各処置に６匹ずつ使用し、′対照群”　（
無添加）、試験群Ｉ（リゾチーム１９Ｕ／＋１１９添加
飼料）および試験群■（リゾチーム３８１Ｊ／１９添加
飼料）に分けた。動物は体謝箱に１匹ずつ収容した。

各動物についての飼料消費を毎日記録し、毎週体重を記
録した。１４日間給餌を行ない、引き続き７日間糞尿を
集め窒素バランスを定量した。

窒素保持量を蛋白質取得量の測定値として飼料からの窒
素消費と糞庄中の窒素排泄物との差から計算した。

結果（第１表）： 試験群ＩおよびＨにおける体重増加は各々４．２および
３．１％の増加であり、飼料消費は平均３．３％だけ減
少した。窒素保持量は各々平均２８．５％、２５．２％
だけ向上した。

実施例　６ 子ブタへの試用 １５〜２５ｋｇの体重の範囲にある子ブタに化合物飼料
を与えた。この飼料は穀類、大豆および魚粉をベースと
し、ビタミン、微量元素および主要元素で補足して要求
に適合させである（第３表）。対照群（ｎ＝１０）およ
び試験群（ｎ−７）にそれぞれ飼料ｌＩＩ＋９あたりリ
ゾチーム活性１０Ｕを添加した、または何も添加してな
い飼料、を与えた・ 飼料消費を食事毎（２回／日）に記録し、体重増加を毎
週記録した。１日あたりの増体量（９／　日）および飼
料要求率（飼料に９１　ｈｇ増体量）を試験終了時点で
計算した。

結果（第２表）： 添加することにより体重増加が平均４．７％向上した。

そして飼料要求率は平均８．５％減少した。

第 表 対照 ６．７Ｘ　１０−″ ４００．７　　　　１．８９ ±７７．３　　　　±０．３０ １００．０　　　１００．０ ４１９．５　　　　１．７３ ±６１．２　　　　±０．２０ １０４．７　　　　９１．５ 第３表 飼料組成物 大麦 小麦 カラス麦 トウモロコシ 亜麻仁かす アルファルファミール 大豆ミールエキス 魚粉 小麦ふすま ビタミン、無機物混合物 圓 ２０．０ １０．０ ６．０ ２５．２ ５．５ ４、Ｏ １８，０ ４，０ ５，０ ２，３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ストレプトミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒＤＳＭ３０
   ３０、並びにその突然変異体および変異体からの溶菌酵
   素生成物の動物飼料への添加剤としての使用。 ２）Ｎ−アセチルムラミダーゼ活性を有する溶菌酵素生
   成物とプロテアーゼとの混合物の動物飼料への添加剤と
   しての使用。 ３）ストレプトミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒＤＳＭ３０
   ３０並びにその突然変異体および変異体からの溶菌酵素
   生成物を使用する請求項２に記載の添加剤としての使用
   。 ４）溶菌酵素生成物を乾燥栄養媒体の形で使用する請求
   項２に記載の添加剤としての使用。 ５）溶菌酵素生成物が飼料中に、飼料１ｍｇあたりＮ−
   アセチルムラミダーゼ活性０．１〜１０００Ｕで含まれ
   る請求項１〜４のいずれか１つに記載の添加剤としての
   使用。 ６）活性が０．５〜５Ｕ／ｍｇである請求項５に記載の
   添加剤としての使用。 ７）溶菌酵素生成物対プロテアーゼの比率が酵素活性を
   基準に１：１〜１０００：１の範囲にある請求項２〜６
   のいずれか１つに記載の添加剤としての使用。 ８）比率が１００：１〜５００：１である請求項７に記
   載の添加剤としての使用。 ９）ストレプトミセスｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒＤＳＭ３０
   ３０からの溶菌酵素生成物を添加剤として含有する飼料
   。 １０）Ｎ−アセチルムラミダーゼ活性を有する溶菌酵素
   生成物とプロテアーゼとを添加剤として含有する飼料。